CN105535998A - 龙虎人丹的中暑模型的构建方法 - Google Patents

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Abstract

龙虎人丹的中暑模型的构建方法，包括以下步骤：(1)动物的准备：清洁级的大鼠；(2)中暑模型的建立；(3)给药与样品采集；(4)样品测定和(5)药代动力学分析与统计分析，通过每测定批次的随行标准曲线来计算相应批次中有效成分的血浆药物浓度，所得浓度-时间数据。本发明采用建立的龙虎人丹中8种非挥发性成分LC-MS/MS及4种挥发性成分HS-SPDE-GC-MS/MS生物样品分析方法，研究了龙虎人丹在正常及中暑大鼠体内的药动学研究规律。本发明的结果可为理解龙虎人丹的抗中暑的药效物质的提供帮助。

Description

龙虎人丹的中暑模型的构建方法
技术领域
本发明涉及龙虎人丹的中暑模型的构建方法，具体涉及龙虎人丹在中暑模型及正常大鼠体内药代动力学研究。
背景技术
中暑(heatstroke,HS)是高温引起的人体体温调节功能失调，体内热量过度积蓄，从而引发神经器官受损。传统中药，特别是中药复方治疗中暑具有悠久历史，在中暑及并发症的防治方面具有独特的思维和实践优势。
实验研究表明：龙虎人丹能降低实验性中暑大鼠体温，减轻实验性中暑大鼠血液浓缩程度，并有调节实验性中暑大鼠电解质紊乱现象及降低动物死亡率的作用趋势，具有一定的抗中暑作用。关于龙虎人丹在中暑模型动物下的药代动力学方面的研究还没有相关报道，其吸收进入体内的成分不清楚，不利于确定其产生药效的物质基础。
发明内容
本发明的目的在于，提供龙虎人丹的中暑模型的构建方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。
本研究中采用中暑模型大鼠进行龙虎人丹的药动学研究，为龙虎人丹的药效物质的确定提供帮助；并同时设正常对照组，观察病理状态龙虎人丹的药动学规律的变化。
本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：
龙虎人丹的中暑模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)动物的准备：清洁级的大鼠；
步骤(1)中，所述大鼠选用Wistar大鼠230±20g，饲养室温度为23±2℃,湿度为60±5％，12h明暗循环，动物适应环境3天后，于实验前禁食12h，自由饮水。
步骤(2)中暑模型的建立：
大鼠在清洁级动物房内常温环境下适应性喂养3d后，在人工气候培养箱内进行热暴露。箱内相对湿度55～75％，箱内温度调节为39℃，大鼠热暴露1h；
常温对照组除温度外，其余环境条件与应激组相同，非热暴露条件下，大鼠在22～25℃室温条件下饲养，普食，自由饮水，用电子肛温计测量大鼠肛温，以肛温超过40℃±1℃作为中暑造模成功大鼠；
步骤(3)给药与样品采集：
取中暑模型大鼠18只，雄性体重230±20g，随机分组为中暑高、中、低三个剂量组，每组6只；并设正常高剂量对照组6只，雄性，禁食12h；
步骤(3)中，低剂量组灌胃给药龙虎人丹0.115g/kg；中剂量组灌胃给药龙虎人丹0.23g/kg；高剂量组灌胃给药龙虎人丹0.92g/kg。
步骤(3)中，大鼠灌胃给药后4小时提供食物，整个过程禁食不禁水，于给药前和给药后5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h，12h，24h，48h眼底静脉丛取血，4℃6，000×g离心10min得到血浆后，分取上层血浆100μl，置于-80℃冰箱中保存，待测。
步骤(4)样品测定：
血浆按上述建立的LC-MS/MS及HS-SPDE-GC-MS/MS方法进行测定，同时进行质量控制，每个分析批生物样品测定时建立随行标准曲线，并进行三浓度双样本质控样品分析，质控样品CV<15％作为当日数据是否接受的标准；
步骤(5)药代动力学分析与统计分析：
通过每测定批次的随行标准曲线来计算相应批次中有效成分的血浆药物浓度，所得浓度-时间数据。
步骤(5)中，所述数据使用WinNonlin软件(Build6.1.0.173，PharsightCorporation，MO，USA)，采用非房室模型计算Cmax、Tmax、AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、CL/F、Vd/F、MRT0-t药代动力学参数。
本发明的有益效果：
本发明采用建立的龙虎人丹中8种非挥发性成分液相色谱-质谱分析LC-MS/MS及4种挥发性成分气象色谱-质谱分析HS-SPDE-GC-MS/MS生物样品分析方法，研究了龙虎人丹在正常及中暑大鼠体内的药动学研究规律。
本发明的结果可为理解龙虎人丹的抗中暑的药效物质的提供帮助。
附图说明
图1正常大鼠口服高剂量(0.92g/kg)(●)、中暑大鼠口服高剂量(■)、中剂量(▲)和低剂量(×)(0.92,0.23,0.115g/kg)龙虎人丹后儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、胡椒碱和甘草次酸的血药浓度-时间曲线图。
图2正常大鼠口服高剂量(0.92g/kg)(●)、中暑大鼠口服高剂量(■)、中剂量(▲)、低剂量(×)(0.92,0.23,0.115g/kg)龙虎人丹后的血药浓度-时间曲线图
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1
1.材料与方法
1.1.动物
清洁级Wistar大鼠(230±20g)由上海中医药大学实验动物中心提供。饲养室温度为23±2℃,湿度为60±5％，12h明暗循环，动物适应环境3天后，于实验前禁食12h，自由饮水。
1.2.中暑模型的建立
大鼠在清洁级动物房内常温环境下适应性喂养3d后，在人工气候培养箱内进行热暴露。箱内相对湿度55～75％，箱内温度调节为39℃，大鼠热暴露1h。常温对照组除温度外，其余环境条件与应激组相同，非热暴露条件下，大鼠在22～25℃室温条件下饲养，普食，自由饮水。用电子肛温计测量大鼠肛温，以肛温超过40℃±1℃作为中暑造模成功大鼠。
1.3.给药与样品采集
取中暑模型大鼠18只，雄性(体重230±20g)，随机分组为中暑高、中、低三个剂量组，每组6只；并设正常高剂量对照组6只，雄性，禁食12h。低剂量组灌胃给药龙虎人丹0.115g/kg；中剂量组灌胃给药龙虎人丹0.23g/kg；高剂量组灌胃给药龙虎人丹0.92g/kg。灌胃给药后4小时提供食物，整个过程禁食不禁水。于给药前和给药后5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h，12h，24h，48h眼底静脉丛取血，4℃6，000×g离心10min得到血浆后，分取上层血浆100μl，置于-80℃冰箱中保存，待测。
1.4.样品测定
血浆按上述建立的LC-MS/MS及HS-SPDE-GC-MS/MS方法进行测定。同时进行质量控制，每个分析批生物样品测定时建立随行标准曲线，并进行三浓度双样本质控样品分析，质控样品CV<15％作为当日数据是否接受的标准。
1.5.药代动力学分析与统计分析
通过每测定批次的随行标准曲线来计算相应批次中有效成分的血浆药物浓度，所得浓度-时间数据使用WinNonlin软件(Build6.1.0.173，PharsightCorporation，MO，USA)，采用非房室模型计算Cmax、Tmax、AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、CL/F、Vd/F、MRT0-t等药代动力学参数。
2.结果
2.1LC-MS/MS部分
中暑模型大鼠和正常大鼠灌服龙虎人丹后血浆浓度-时间曲线见图1，各成分的药动学参数见表1-表8。HS(L)、HS(M)、HS(H)分别为中暑低剂量组，中暑中剂量组和中暑高剂量组。
结果表明，儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、胡椒碱和甘草次酸等成分吸收进入血中，其中甘草次酸浓度最高。甘草次酸和胡椒碱在模型3个剂量组和正常组、甘草素和异甘草素在模型高及中剂量组和正常组、而儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷仅在模型高剂量组和正常组可以绘制出C-T曲线。
儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷和胡椒碱吸收快，在1h内达峰，消除快，t1/22h左右；甘草素、异甘草素吸收也快，在10min左右达峰，但在2h左右出现第2峰，具有双峰现象，消除略慢，t1/22.6-6h左右；甘草次酸达峰较迟，可能与其需肠菌转化而来有关，消除在所有成分中最慢，t1/26h左右。
本实验结果也表明，龙虎人丹中的异甘草苷和胡椒碱在中暑大鼠体内的暴露量增加，t1/2延长。
图1正常大鼠口服高剂量(0.92g/kg)(●)、中暑大鼠口服高剂量(■)、中剂量(▲)和低剂量(×)(0.92,0.23,0.115g/kg)龙虎人丹后儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、胡椒碱和甘草次酸的血药浓度-时间曲线图。
表1正常大鼠和中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(19.65mg/kg)后儿茶素的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表2正常大鼠和中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(7.30mg/kg)后表儿茶素的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表3正常大鼠和中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(2.07mg/kg)后甘草苷的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表4正常大鼠和中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.59mg/kg)后异甘草苷的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
*P<0.05vsControlgroup
表5正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.23mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.23mg/kg和0.06mg/kg)后甘草素的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表6正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.07mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.07mg/kg和0.02mg/kg)后异甘草素的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表7正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.61mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(0.61、0.15和0.08mg/kg)后胡椒碱的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
(n＝6.Mean±SD)
*P<0.05，**P<0.01vsControlgroup
表8正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(20.99mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(20.99、5.29和2.62mg/kg)后甘草素的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
2.2GC-MS/MS部分
中暑模型大鼠和正常大鼠灌服龙虎人丹后血浆浓度-时间曲线见图2，各成分的药动学参数见表9-表12。HS(L)、HS(M)、HS(H)分别为中暑低剂量组，中暑中剂量组和中暑高剂量组。
结果表明，在中暑模型3个剂量组和正常组大鼠，薄荷脑、异龙脑、龙脑等挥发性成分吸收进入血中，后两者可以产生及代谢物樟脑。在正常大鼠和中暑大鼠体内，薄荷脑、异龙脑、龙脑吸收快，达峰时间短，异龙脑及龙脑能迅速代谢成樟脑，樟脑在4个成分中浓度最高。薄荷脑、异龙脑、龙脑等成分半衰期较长，t1/212-16h左右。
图2正常大鼠口服高剂量(0.92g/kg)(●)、中暑大鼠口服高剂量(■)、中剂量(▲)、低剂量(×)(0.92,0.23,0.115g/kg)龙虎人丹后的血药浓度-时间曲线图。
表9正常大鼠和中暑大鼠单次灌胃给药龙虎人丹后樟脑的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
-:无法计算
表10正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(20.89mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(20.89、5.22和2.61mg/kg)后薄荷脑的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表11正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(5.25mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(5.25、1.31和0.66mg/kg)后异龙脑的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
表12正常大鼠单次灌胃龙虎人丹(8.94mg/kg)及中暑大鼠单次灌胃龙虎人丹(8.94、2.23和1.12mg/kg)后龙脑的药动学参数(n＝6.Mean±SD)
3.讨论
本研究采用建立的龙虎人丹中8种非挥发性成分LC-MS/MS及4种挥发性成分HS-SPDE-GC-MS/MS生物样品分析方法，研究了龙虎人丹在正常及中暑大鼠体内的药动学研究规律。
在中暑模型大鼠体内儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、胡椒碱和甘草次酸等非挥发性成分和薄荷脑、异龙脑、龙脑及代谢物樟脑等挥发性成分吸收进入血中。儿茶素、表儿茶素、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、胡椒碱、薄荷脑、异龙脑、龙脑吸收快，有利于迅速发挥药效，甘草次酸和薄荷脑、异龙脑、龙脑等成分半衰期较长，有利于疗效的维持。结果提示这些成分将会在体内作用于多个靶点，共同产生综合的抗中暑效应。
本实验结果表明，在正常大鼠、中暑大鼠体内，甘草次酸在血浆中浓度最高，而甘草次酸在龙虎人丹中含量极少，但甘草酸进入体内后,在肠道微生物水解酶的作用下大量生成甘草次酸，使得甘草次酸的体内暴露水平在8种非挥发性成分中最高。甘草素及异甘草素产生双峰现象，可能均与肝肠循环有关。
在中暑状态下，龙虎人丹中的异甘草苷和胡椒碱在体内的暴露量增加,消除减慢，提示在中暑患者体内，异甘草苷和胡椒碱的药代动力学发生了变化。
本研究结果可为理解龙虎人丹的抗中暑的药效物质的提供帮助。
以上对本发明的具体实施方式进行了说明，但本发明并不以此为限，只要不脱离本发明的宗旨，本发明还可以有各种变化。

Claims (5)

1.龙虎人丹的中暑模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)动物的准备：清洁级的大鼠；
步骤(2)中暑模型的建立：
大鼠在清洁级动物房内常温环境下适应性喂养3d后，在人工气候培养箱内进行热暴露，箱内相对湿度55～75％，箱内温度调节为39℃，大鼠热暴露1h；
常温对照组除温度外，其余环境条件与应激组相同，非热暴露条件下，大鼠在22～25℃室温条件下饲养，普食，自由饮水，用电子肛温计测量大鼠肛温，以肛温超过40℃±1℃作为中暑造模成功大鼠；
步骤(3)给药与样品采集：
取中暑模型大鼠18只，雄性体重230±20g，随机分组为中暑高、中、低三个剂量组，每组6只；并设正常高剂量对照组6只，雄性，禁食12h；
步骤(4)样品测定：
血浆按上述建立的LC-MS/MS及HS-SPDE-GC-MS/MS方法进行测定，同时进行质量控制，每个分析批生物样品测定时建立随行标准曲线，并进行三浓度双样本质控样品分析，质控样品CV<15％作为当日数据是否接受的标准；
步骤(5)药代动力学分析与统计分析：
通过每测定批次的随行标准曲线来计算相应批次中有效成分的血浆药物浓度，所得浓度-时间数据。
2.根据权利要求1所述的龙虎人丹的中暑模型的构建方法，其特征在于：步骤(1)中，所述大鼠选用Wistar大鼠230±20g，饲养室温度为23±2℃,湿度为60±5％，12h明暗循环，动物适应环境3天后，于实验前禁食12h，自由饮水。
3.根据权利要求1所述的龙虎人丹的中暑模型的构建方法，其特征在于：步骤(3)中，低剂量组灌胃给药龙虎人丹0.115g/kg；中剂量组灌胃给药龙虎人丹0.23g/kg；高剂量组灌胃给药龙虎人丹0.92g/kg。
4.根据权利要求3所述的龙虎人丹的中暑模型的构建方法，其特征在于：步骤(3)中，大鼠灌胃给药后4小时提供食物，整个过程禁食不禁水，于给药前和给药后5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h，12h，24h，48h眼底静脉丛取血，4℃6，000×g离心10min得到血浆后，分取上层血浆100μl，置于-80℃冰箱中保存，待测。
5.根据权利要求1所述的龙虎人丹的中暑模型的构建方法，其特征在于：步骤(5)中，所述数据使用WinNonlin软件Build6.1.0.173，PharsightCorporation，MO，USA，采用非房室模型计算Cmax、Tmax、AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、CL/F、Vd/F、MRT0-t药代动力学参数。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109596817A (zh) * 2018-12-07 2019-04-09 上海浩港生物技术有限公司 一种lbp的质谱试剂盒lbp含量检测系统及方法
CN111972353A (zh) * 2019-05-22 2020-11-24 天士力医药集团股份有限公司 一种复方丹参滴丸多组分在大鼠体内群体药代动力学模型的构建方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105004799A (zh) * 2014-04-23 2015-10-28 上海中华药业有限公司 一种龙虎人丹植物药血浆中的8种不挥发性成分的含量检测方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105004799A (zh) * 2014-04-23 2015-10-28 上海中华药业有限公司 一种龙虎人丹植物药血浆中的8种不挥发性成分的含量检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙虹 等.: "感冒一小时胶囊中黄芩苷在正常与发热大鼠体内动力学特点的比较", 《中药药理与临床》 *
巩仔鹏 等.: "疾病状态下的中药药代动力学研究进展", 《中国中药杂志》 *
李显华 等.: "龙虎人丹抗晕动、抗中暑、镇呕作用研究", 《中药药理与临床》 *
毕京峰 等.: "中药复方新药研发中的药代动力学研究方法学", 《中国临床药理学杂志》 *
耿焱 等.: "清醒与麻醉状态经典热射病大鼠模型比较", 《解放军医学杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109596817A (zh) * 2018-12-07 2019-04-09 上海浩港生物技术有限公司 一种lbp的质谱试剂盒lbp含量检测系统及方法
CN111972353A (zh) * 2019-05-22 2020-11-24 天士力医药集团股份有限公司 一种复方丹参滴丸多组分在大鼠体内群体药代动力学模型的构建方法

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