CN105535962A - 一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，本发明通过实验手段明确了白油中导致生物残留问题的最主要成分是C24以上的烃类化合物，进一步发现从白油中剔除此类成分不会影响其作为疫苗佐剂的性能，同时有助于提升吸收效率。基于以上积极的发现，本发明获得了更易吸收、残留量更低的油乳灭活疫苗专用白油。在此基础上，考察了利用本发明白油与现有技术白油所制备的疫苗注射后吸收情况和药物残留情况。实验结果表明，相对于现有技术产品，本发明提供的专用白油不仅能够满足灭活疫苗佐剂使用要求，同时吸收更快、残留量少，不吸收情况发生率极低。

Description

一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油
技术领域
本发明涉及疫苗佐剂技术领域，具体涉及一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油。
背景技术
白油又名液体石蜡，是以石油为原料精制所得的矿物油，属液态烃类混合物。白油无色无味，化学稳定性及光安定性好，由于白油来源广泛、价格适宜，因此被广泛应用于动物油乳剂疫苗的生产。作为油乳剂疫苗的主要成份，白油可增强灭活疫苗的免疫原性，诱导机体产生有效的免疫应答。目前，我国重大禽病防控的疫苗多为油乳剂灭活疫苗，所采用的佐剂多为白油，而白油在肉鸡体内完全代谢需要较长时间。在家禽饲养过程中，为了降低禽病爆发的风险，疫苗使用较为频繁，由此所导致的畜禽体内白油残留问题日趋严重。
此外，由于矿物油不能被机体代谢，因此会产生一系列副作用，导致注射部位肉芽肿现象，出现炎症，疫苗被包裹起来形成游离的肿块，不仅起不到免疫的预期效果，反而还会引起肉鸡出现精神不振，采食下降等免疫应激症状，还易引起其他疾病。为了克服这一问题，一方面应当注重疫苗的合理使用(2009年欧盟食品安全局发表了关于白油添加剂的科学使用意见，即每天食物中白油总量不得超过12mg/kg·bw；FAO及WHO食品添加剂联合委员会也声明，高粘度的白油在食品中的添加不得超过20mg/kg)，但更为重要的是应当针对佐剂成分加以改进，以缓解其体内代谢缓慢的问题。
发明内容
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，以解决现有技术中用于疫苗佐剂的白油在生物体内残留时间较长、残留量较大。
本发明要解决的另一技术问题是现有技术中用于疫苗佐剂的白油不易被动物吸收。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，所述白油中不含有碳原子数大于24的烃类化合物。
作为优选，所述白油由碳原子数为15～24的烃类化合物组成。
进一步优选的，所述烃类化合物是烷烃。
进一步优选的，所述白油中链烷烃含量为67～70％(w/w)。
在此基础上可以分别执行以下优选：所述白油中正构烷烃含量为10～25％(w/w)；所述白油的倾点为-3～12℃；所述白油在40℃时的运动粘度为3.5～8mm2/s。
作为优选，所述烃类化合物不是芳烃。
在以上技术方案中，用于白油制备的原料均属于常规有机化合物，可以利用有机化学领域的一般技术方法获得。所述白油亦可依照本领域中通用的白油制备方法制备。本发明通过实验手段明确了白油中导致生物残留问题的最主要成分是C24以上的烃类化合物，进一步发现从白油中剔除此类成分不会影响其作为疫苗佐剂的性能，同时有助于提升吸收效率。基于以上积极的发现，本发明获得了更易吸收、残留量更低的油乳灭活疫苗专用白油。
在此基础上，以《中华人民共和国兽药典》(2010版)和《中华人民共和国兽用生物制品规程》(2000年版)为标准考察了本发明白油与现有技术产品的性能特点：利用不同白油产品进行呼肠孤灭活疫苗的制备、检验、免疫试验，分别对免疫鸡进行采血、分离血清，检测抗体效价，同时剖检注射部位，观察吸收情况和药物残留情况。实验结果表明，相对于现有技术产品，本发明提供的专用白油不仅能够满足灭活疫苗佐剂使用要求，同时吸收更快、残留量少，不吸收情况发生率极低。
附图说明
图1是本发明实施例1中以不同白油佐剂所制备的灭活疫苗胸肌注射肉鸡后，其体内抗体消长曲线。
图2是本发明实施例1中以不同白油佐剂所制备的灭活疫苗颈部皮下注射肉鸡后，其体内抗体消长曲线。
图3是本发明实施例1中以不同白油佐剂所制备的灭活疫苗胸肌注射蛋鸡后，其体内抗体消长曲线。
图4是本发明实施例1中以不同白油佐剂所制备的灭活疫苗颈部皮下注射蛋鸡后，其体内抗体消长曲线。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。
除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1
选择的佐剂专用白油ZY-WI技术指标如下：
(a)芳烃含量为零(质谱法)；
(b)碳分布C15-24；
(c)正构烷烃含量10％；
(d)C24以上组分含量为0；
(e)倾点12℃；
(f)40℃运动粘度4.0mm2/s；
(g)无色无味液体。
4种白油(ZY-WI，JK-WM，JK-WD，GC-W；其中JK-WM和JK-WD属于市售进口白油产品，GC-W属于市售国产白油产品)佐剂呼肠孤灭活疫苗检验结果外观均为乳白色，剂型油包水，稳定性合格，其他检验项目：无菌、安全、甲醛含量、硫汞含量均合格。
4种白油佐剂呼肠孤灭活疫苗免疫效果实验。每个白油样品呼肠孤灭活疫苗分别以0.5mL/只剂量，经胸部肌肉、颈部皮下注射途径分别接种15日龄白羽肉鸡15只和30日龄蛋鸡20只，分别于接种免疫后14、28、42、56d进行随机抽样5只，无菌采血分离血清检测血清矿体(HI)效价和疫苗注射部位药物残留情况检查。胸肌免疫吸收剖检结果见表1。
表1不同来源白油佐剂呼肠孤灭活疫苗胸肌免疫吸收剖检结果
注：“-”吸收完全无残留物痕迹；“+”药物残留物为少量的针尖大小的乳白色细小颗粒；“++”药物残留物为小米粒大小的乳白色颗粒，且有绿豆粒大小的黄色液体包裹1-2个；“+++”药物残留为如大米粒样的白色干酪样颗粒、胸肌残留面积1/4左右、有条索状的黄色液体包裹2-3个、有出血性炎症。
根据胸肌注射药物残留剖检情况，综合分析结果是：肉鸡对实验白油ZY-WI吸收情况明显优于其他三种对照白油，其白油佐剂吸收较好的顺序是：ZY-WI>JK-WM>JK-WD>GC-W。蛋鸡对实验白油ZY-WI的吸收情况也比其他三类白油好，残留量少。
不同白油佐剂呼肠孤灭活疫苗颈部皮下免疫吸收剖检结果见表2
表2不同来源白油佐剂呼肠孤灭活疫苗颈部皮下免疫吸收剖检结果
注：“-”表示吸收完全、无残留物；“+”药物残留物为少量的针尖大小的乳白色颗粒；“++”颈部注射部位有柔软的黏连肿块、面积0.5cm2左右；“+++”颈部注射部位有硬结的黏连肿块、面积1cm2左右，有轻微出血性炎症。
根据颈部注射药物残留剖检情况，综合分析结果是：肉雏鸡和蛋鸡对试验白油(ZY-WI)佐剂疫苗吸收情况比其他三种白油佐剂都好，颈部注射比胸肌注射吸收快，炎症反应轻，其白油佐剂吸收较好的顺序是：
ZY-WI>JK-WD>JK-WM>GC-W
肉鸡胸肌和颈部皮下注射不同来源白油佐剂灭活疫苗的不同免疫日龄血清抗体水平如图1、2所示；蛋鸡胸肌、颈部皮下注射不同来源白油佐剂灭活疫苗的不同免疫日龄血清抗体水平如图3、4所示。
实施例2
选择的佐剂专用白油ZY-WII技术指标如下：
(a)芳烃含量为零(质谱法)；
(b)碳分布C15-24；
(c)正构烷烃含量21％；
(d)C24以上组分含量为0；
(e)倾点-3℃；
(f)40℃下的运动粘度4.5mm2/s；
(g)无色无味液体。
乳化后得到W/O乳液，与禽流感抗原混后制备得到禽流感病毒油乳灭活疫苗，注射后15日内，未有大的黄块，未见吸收不好的症状。
实施例3
选择的佐剂专用白油技术指标如下：
(a)芳烃含量为零(质谱法)；
(b)碳分布C15-24；
(c)正构烷烃含量12％；
(d)C24以上组分含量为0；
(e)倾点-15℃；
(f)40℃下的运动粘度6.6mm2/s；
(g)无色无味液体。
乳化后得到W/O乳液，与禽流感抗原混后制备得到禽流感病毒油乳灭活疫苗，注射后15日内，未有大的黄块，未见吸收不好的症状。
实施例4
选择的佐剂专用白油技术指标如下：
(a)芳烃含量为零(质谱法)；
(b)碳分布C15-24；
(c)正构烷烃含量25％；
(d)C24以上组分含量为0；
(e)倾点5℃；
(f)40℃下的运动粘度3.5mm2/s；
(g)无色无味液体。
乳化后得到W/O乳液，与禽流感抗原混后制备得到禽流感病毒油乳灭活疫苗，注射后15日内，未有大的黄块，未见吸收不好的症状。
实施例5
选择的佐剂专用白油技术指标如下：
(a)芳烃含量为零(质谱法)；
(b)碳分布C15-24；
(c)正构烷烃含量11％；
(d)C24以上组分含量为0；
(e)倾点-12℃；
(f)40℃下的运动粘度4.2mm2/s；
(g)无色无味液体。
乳化后得到W/O乳液，与禽流感抗原混后制备得到禽流感病毒油乳灭活疫苗，注射后15日内，未有大的黄块，未见吸收不好的症状。
实施例6
一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，所述白油由碳原子数为15～24的烷烃化合物组成；该白油中链烷烃含量为67％(w/w)。
实施例7
一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，所述白油由碳原子数为15～24的烷烃化合物组成；该白油中链烷烃含量为70％(w/w)。
实施例8
一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，所述白油中不含有碳原子数大于24的烃类化合物。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述白油中不含有碳原子数大于24的烃类化合物。
2.根据权利要求1所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述白油由碳原子数为15～24的烃类化合物组成。
3.根据权利要求2所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述烃类化合物是烷烃。
4.根据权利要求3所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述白油中链烷烃含量为67～70％(w/w)。
5.根据权利要求4所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述白油中正构烷烃含量为10～25％(w/w)。
6.根据权利要求4所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述白油的倾点为-3～12℃。
7.根据权利要求4所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于所述白油在40℃时的运动粘度为3.5～8mm2/s。
8.根据权利要求2所述的具有易吸收低残留功效的灭活疫苗佐剂专用白油，其特征在于烃类化合物不是芳烃。
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