CN104208682B - 一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物、混合冻干粉及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物、混合冻干粉及制备方法,该组合物包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94~97份,抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1~2份。采用本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物制成的混合冻干粉,将抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子进行复配,并辅以多种辅料,各组分相互配合,协调作用,可以显著提高其综合防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果,具有常温下保存时间长、抗体效价高、生物活性良好的优点,是一种具有广泛应用前景的强效生物制剂。
Description
技术领域
本发明属于兽药技术领域,具体涉及一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物,同时还涉及一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉及该混合冻干粉的制备方法。
背景技术
鸡新城疫(Newcastle Disease,ID)又名亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,由副粘病毒引起的高度接触性、急性、败血性传染病。发生该病的主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血,死亡率高,对养鸡业危害严重。1926年首先发现于印度尼西亚,不久又在英国新城发现,世界各国均有流行记载。
鸡传染性法氏囊病(IBD)又称甘波罗病,是由呼肠弧病毒引起的一种急性、高度传染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高,且可引起鸡体免疫抑制,目前仍然是养鸡业的主要传染病之一。
目前防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的方法较多,主要是使用西药、接种免疫、中草药等进行防治。其中,西药使用的泛滥给猪肉类食品带来了极大的安全隐患,药物残留已经成为影响猪肉产品安全的主要因素之一。接种免疫早期效果较好,但是需要多次接种,操作麻烦,成本较高,容易造成应激反应;而且疫苗对于保藏条件要求较高,需要在2-8℃条件下冷藏,室温条件下一段时间则失去效果。中草药饲料添加剂也是目前的研究方向之一,但是由于中草药的种类较多,相同的中药材对不同的禽畜疾病的作用差异很大,且中草药对疾病的免疫效果极其有限,因此应用也具有一定的局限性。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物,解决现有技术同时防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病存在的操作不便、药剂不易保存、效果较差的问题。
本发明的第二个目的是提供一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉。
本发明的第三个目的是提供一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法。
为了实现以上目的,本发明所采用的技术方案是:一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94~97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1~2份。
一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94~97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1~2份、防腐剂0.01~0.02份、灭活剂0.2~0.3份、硒0.05~0.1份、维生素C0.5~1份、聚乙烯吡咯烷酮1~2份、甘氨酸0.5~1份。
所述灭活剂为甲醛。
所述防腐剂为硫柳汞。
一种上述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,包括下列步骤:
a.采用鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株制备二联疫苗,免疫健康鸡群获得高免蛋,将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
b.将含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合,再冻干即得。
优选的,抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,包括下列步骤:
1)取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株进行增殖,将其灭活制备成二联疫苗,每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫,一共免疫三次,第二次免疫后开始检测抗体效价,当抗体效价达到1:256时,收集高免蛋,将收集的高免蛋进行清理、消毒,晾干备用;
2)将步骤1)所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄,加入等体积的无菌水,充分搅拌,得到卵黄抗体溶液,在卵黄抗体溶液中加入酸化水溶液,混匀、静置沉淀,取上清液备用;
3)在步骤2)所得上清液中加入钠盐使钠盐体积占总体积的0.8%,离心分离,得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
4)取步骤3)所得的含有94~97重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液,加入1~2重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子,过滤,留滤液备用;
5)将步骤4)所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份,加入防腐剂0.01~0.02重量份、灭活剂0.2~0.3重量份、硒0.05~0.1重量份、维生素C0.5~1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1~2重量份、甘氨酸0.5~1重量份进行混合,先-20℃预冷,再在-80℃条件下冻干,即得。
步骤2)中所述酸化水溶液的pH为4.9~5.2;酸化水溶液的加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍。所述酸化水溶液为盐酸化水溶液。
步骤3)中所述钠盐为NaCl与NaSO4的质量比为4:1的混合物。
步骤3)中所述离心分离的转速为15000rpm,时间为20min。
步骤4)中所述过滤是先用0.45μm的滤膜进行过滤,截留分子量大于200KD的大分子,再将滤液用0.22μm的滤膜过滤。
卵黄抗体是一种免疫球蛋白,由于机体受到外界抗原的刺激而产生的一种应激产物,可以和相应抗原结合,消除病因。本发明将鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的二联疫苗免疫接种健康的鸡群,可以使获得的鸡蛋蛋黄中产生有效的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体,同时减少了毒株返祖的可能性。
转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息,能够将特异性免疫信息呈递给受体淋巴细胞,使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞,从而激发受体细胞介导的免疫反应。
本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物中,抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体是一种免疫球蛋白,对鸡新城疫、鸡传染性法式囊病有很好的防治效果;抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子本身是一种特异抗病毒因子,将两者结合使用,可极大地提高综合预防和治疗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果。
本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,将抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子进行复配,并辅以防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酸制备混合冻干粉,各组分相互配合,协调作用,可以显著提高其综合防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果,具有针对性强、常温下保存时间长、抗体效价高、生物活性良好的优点,是一种具有广泛应用前景的强效生物制剂;经动物试验证明,本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,对鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的综合防治效果要明显优于抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体,抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子中任意一种单独使用的情况。
本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,使用时,可作为饲料添加剂按质量分数2%~3%混入饲料中;发病时采用肌注方式给药,每100ml注射液中含有混合冻干粉1g,注射液的使用量为每次0.1~0.2ml/kg体重;首次用药加倍,治疗效果更好。
本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,将抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子和多种辅料进行复配,并通过调整辅料的成分、控制其用量,进一步延长了卵黄抗体的保存时间,保证了卵黄抗体在常温下较长时间内的活性,降低了冻干粉制剂的保存和运输成本,使用方便,具有广泛的应用前景;制备方法工艺简单,操作方便,极大的降低了生产成本,适合大规模工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
本发明的具体实施方式中,所用鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒为国家标准毒株。
本发明的具体实施方式中,所用抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子,是由以下方法制备的:
1)用鸡新城疫(lasota)、鸡传染性法式囊病(B87)病毒抗原对猪脾脏和/或胸腺进行免疫后,去其表面筋、脂肪,再用灭菌后的生理盐水冲洗;
2)将冲洗后的猪脾脏和/或胸腺破碎后,加入2倍体积的预冷后的PBS缓冲液,用组织匀浆仪将其匀质,得匀浆液;
3)将匀浆液用超声破碎仪处理5~10min后,调节pH为5.5,在5000~6000rpm转速下离心30min,收集上清液;
4)将步骤3)所得上清液用微滤膜过滤,截留分子量为7000道尔顿以上的物质,将所得滤液用除菌滤膜过滤,即得抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子原液,在4℃条件下保存备用。
实施例1
本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子2份。
本实施例的使用上述组合物制成的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子2份、硫柳汞0.02份、甲醛0.2份、硒0.05份、维生素C1份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0.5份。
本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,包括下列步骤:
1)取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准毒株进行增殖,将其灭活制备成二联疫苗,每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫,一共免疫三次,第一次免疫健康鸡群接种灭活疫苗1.5ml,第二次、第三次免疫接种加量1倍,第二次免疫后开始检测抗体效价,当抗体效价达到1:256时,收集高免蛋,将收集的高免蛋进行清理、消毒,晾干备用;
2)将步骤1)所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄,加入等体积的无菌水,充分搅拌,得到卵黄抗体溶液,在卵黄抗体溶液中加入pH为5.0的酸化水溶液,酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍,混匀、静置沉淀,取上清液备用;
3)在步骤2)所得上清液中加入由NaCl与NaSO4按质量比为4:1的比例混合形成的混合钠盐,使混合钠盐体积占总体积的0.8%,以15000rpm的转速离心20min,得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
4)取步骤3)所得的含有94重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液,加入2重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子,用0.45μm的滤膜进行过滤,截流分子量大于200KD的大分子物质,再将滤液经0.22μm滤膜过滤,留滤液备用;
5)将步骤4)所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份,加入硫柳汞0.02重量份、甲醛0.2重量份、硒0.05重量份、维生素C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮2重量份、甘氨酸0.5重量份进行混合,先-20℃预冷,再在-80℃条件下冻干,即得。
实施例2
本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体95份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1.5份。
本实施例的使用上述组合物制成的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体95份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1.5份、硫柳汞0.01份、甲醛0.3份、硒0.1份、维生素C0.5份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸1份。
本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,包括下列步骤:
1)取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准毒株进行增殖,将其灭活制备成二联疫苗,每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫,一共免疫三次,第一次免疫健康鸡群接种灭活疫苗1.5ml,第二次、第三次免疫接种加量1倍,第二次免疫后开始检测抗体效价,当抗体效价达到1:256时,收集高免蛋,将收集的高免蛋进行清理、消毒,晾干备用;
2)将步骤1)所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄,加入等体积的无菌水,充分搅拌,得到卵黄抗体溶液,在卵黄抗体溶液中加入pH为5.0的酸化水溶液,酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍,混匀、静置沉淀,取上清液备用;
3)在步骤2)所得上清液中加入由NaCl与NaSO4按质量比为4:1的比例混合形成的混合钠盐,使混合钠盐体积占总体积的0.8%,以15000rpm的转速离心20min,得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
4)取步骤3)所得的含有95重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液,加入1.5重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子,用0.45μm的滤膜进行过滤,截流分子量大于200KD的大分子物质,再将滤液经0.22μm滤膜过滤,留滤液备用;
5)将步骤4)所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份,加入硫柳汞0.01重量份、甲醛0.3重量份、硒0.1重量份、维生素C0.5重量份、聚乙烯吡咯烷酮1.5重量份、甘氨酸1重量份进行混合,先-20℃预冷,再在-80℃条件下冻干,即得。
实施例3
本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1份。
本实施例的使用上述组合物制成的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C1份、聚乙烯吡咯烷酮1份、甘氨酸0.5份。
本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,包括下列步骤:
1)取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准毒株进行增殖,将其灭活制备成二联疫苗,每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫,一共免疫三次,第一次免疫健康鸡群接种灭活疫苗1.5ml,第二次、第三次免疫接种加量1倍,第二次免疫后开始检测抗体效价,当抗体效价达到1:256时,收集高免蛋,将收集的高免蛋进行清理、消毒,晾干备用;
2)将步骤1)所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄,加入等体积的无菌水,充分搅拌,得到卵黄抗体溶液,在卵黄抗体溶液中加入pH为5.0的酸化水溶液,酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍,混匀、静置沉淀,取上清液备用;
3)在步骤2)所得上清液中加入由NaCl与NaSO4按质量比为4:1的比例混合形成的混合钠盐,使混合钠盐体积占总体积的0.8%,以15000rpm的转速离心20min,得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
4)取步骤3)所得的含有97重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液,加入1重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子,用0.45μm的滤膜进行过滤,截流分子量大于200KD的大分子物质,再将滤液经0.22μm滤膜过滤,留滤液备用;
5)将步骤4)所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份,加入硫柳汞0.01重量份、甲醛0.25重量份、硒0.08重量份、维生素C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1重量份、甘氨酸0.5重量份进行混合,先-20℃预冷,再在-80℃条件下冻干,即得。
实验例1
本实验例对实施例1~3所得混合冻干粉进行性能检测,结果如表1、2所示。
常温效价检测实验方法:将实施例1~3所得混合冻干粉制剂保存在37℃培养箱中,保存24个月,分别在1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后,用琼脂扩散(AGP)法,测定每个时间点所取样品的卵黄抗体效价变化。
表1实施例1~3所得混合冻干粉常温效价检测实验结果
表2实施例1~3所得混合冻干粉常温放置性能检测结果
实验例2
本实验例对实施例1~3的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果进行临床实验。
实验方法:选取1月龄鸡700只,其中100只作为攻毒组隔离饲养,100只作为空白组隔离饲养,200只作为对照组分为2组,每组100只,隔离饲养,分别用对比例1、2的制剂治疗,另外300只作为试验组分为3组,每组100只,分别用实施例1、2、3的制剂治疗。饲养方式为自由采食普通饲料,自由饮水,24h后,取试验组、对照组和攻毒组的猪肌注接种稀释后的鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒液,接种量为2ml/只;感染后开始针对性治疗,肌肉注射,注射液给药量为0.2ml/kg体重;记录120h后的死亡情况,结果如表3所示。
表3实施例1~3所得混合冻干粉对鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的防治效果
对比例1的药剂由以下重量份数的组分组成:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体97份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。
对比例2的药剂由以下重量份数的组分组成:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子2份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。
从表3中可以看出,实施例1~3所得混合冻干粉可以同时有效防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病,且混合冻干粉效果要明显优于抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子中任意一种单独使用的情况。
Claims (9)
1.一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,其特征在于:包括以下重量份数的组分:抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94~97份,抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1~2份,防腐剂0.01~0.02份,灭活剂0.2~0.3份,硒0.05~0.1份,维生素C 0.5~1份,聚乙烯吡咯烷酮1~2份,甘氨酸0.5~1份。
2.根据权利要求1所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,其特征在于:所述灭活剂为甲醛。
3.根据权利要求1所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉,其特征在于:所述防腐剂为硫柳汞。
4.一种如权利要求1所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,其特征在于:包括下列步骤:
a. 采用鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株制备二联疫苗,免疫健康鸡群获得高免蛋,将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
b. 将含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合,再冻干即得。
5.根据权利要求4所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,其特征在于:包括下列步骤:
1)取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株进行增殖,将其灭活制备成二联疫苗,每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫,一共免疫三次,第二次免疫后开始检测抗体效价,当抗体效价达到1:256时,收集高免蛋,将收集的高免蛋进行清理、消毒,晾干备用;
2)将步骤1)所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄,加入等体积的无菌水,充分搅拌,得到卵黄抗体溶液,在卵黄抗体溶液中加入酸化水溶液,混匀、静置沉淀,取上清液备用;
3)在步骤2)所得上清液中加入钠盐使钠盐体积占总体积的0.8%,离心分离,得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液;
4)取步骤3)所得的含有94~97重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液,加入1~2重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子,过滤,留滤液备用;
5)将步骤4)所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份,加入防腐剂0.01~0.02重量份、灭活剂0.2~0.3重量份、硒0.05~0.1重量份、维生素C 0.5~1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1~2重量份、甘氨酸0.5~1重量份进行混合,先-20℃预冷,再在-80℃条件下冻干,即得。
6.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,其特征在于:步骤2)中所述酸化水溶液的pH为4.9~5.2;酸化水溶液的加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍。
7.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,其特征在于:步骤3)中所述钠盐为NaCl与Na2SO4的质量比为4:1的混合物。
8.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,其特征在于:步骤3)中所述离心分离的转速为15000rpm,时间为20min。
9.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法,其特征在于:步骤4)中所述过滤是先用0.45μm的滤膜进行过滤,截留分子量大于200KD的大分子,再将滤液用0.22μm的滤膜过滤。
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