CN104208682B

CN104208682B - 一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物、混合冻干粉及制备方法

Info

Publication number: CN104208682B
Application number: CN201310463401.6A
Authority: CN
Inventors: 徐进; 郭俊清; 陈建晖
Original assignee: Zhengzhou Houyi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Henan Hou Yi Industry Group Co., Ltd.
Priority date: 2013-09-30
Filing date: 2013-09-30
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2033-09-30
Also published as: CN104208682A

Abstract

本发明公开了一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物、混合冻干粉及制备方法，该组合物包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94～97份，抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1～2份。采用本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物制成的混合冻干粉，将抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子进行复配，并辅以多种辅料，各组分相互配合，协调作用，可以显著提高其综合防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果，具有常温下保存时间长、抗体效价高、生物活性良好的优点，是一种具有广泛应用前景的强效生物制剂。

Description

一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物、混合冻干粉及制备方法

技术领域

本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物，同时还涉及一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉及该混合冻干粉的制备方法。

背景技术

鸡新城疫（Newcastle Disease，ID）又名亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，由副粘病毒引起的高度接触性、急性、败血性传染病。发生该病的主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血，死亡率高，对养鸡业危害严重。1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，世界各国均有流行记载。

鸡传染性法氏囊病（IBD）又称甘波罗病，是由呼肠弧病毒引起的一种急性、高度传染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高，且可引起鸡体免疫抑制，目前仍然是养鸡业的主要传染病之一。

目前防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的方法较多，主要是使用西药、接种免疫、中草药等进行防治。其中，西药使用的泛滥给猪肉类食品带来了极大的安全隐患，药物残留已经成为影响猪肉产品安全的主要因素之一。接种免疫早期效果较好，但是需要多次接种，操作麻烦，成本较高，容易造成应激反应；而且疫苗对于保藏条件要求较高，需要在2-8℃条件下冷藏，室温条件下一段时间则失去效果。中草药饲料添加剂也是目前的研究方向之一，但是由于中草药的种类较多，相同的中药材对不同的禽畜疾病的作用差异很大，且中草药对疾病的免疫效果极其有限，因此应用也具有一定的局限性。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物，解决现有技术同时防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病存在的操作不便、药剂不易保存、效果较差的问题。

本发明的第二个目的是提供一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉。

本发明的第三个目的是提供一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94～97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1～2份。

一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94～97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1～2份、防腐剂0.01～0.02份、灭活剂0.2～0.3份、硒0.05～0.1份、维生素C0.5～1份、聚乙烯吡咯烷酮1～2份、甘氨酸0.5～1份。

所述灭活剂为甲醛。

所述防腐剂为硫柳汞。

一种上述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，包括下列步骤：

a.采用鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株制备二联疫苗，免疫健康鸡群获得高免蛋，将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液；

b.将含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再冻干即得。

优选的，抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，包括下列步骤：

1）取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株进行增殖，将其灭活制备成二联疫苗，每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1：256时，收集高免蛋，将收集的高免蛋进行清理、消毒，晾干备用；

2）将步骤1）所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌，得到卵黄抗体溶液，在卵黄抗体溶液中加入酸化水溶液，混匀、静置沉淀，取上清液备用；

3）在步骤2）所得上清液中加入钠盐使钠盐体积占总体积的0.8%，离心分离，得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液；

4）取步骤3）所得的含有94～97重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液，加入1～2重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子，过滤，留滤液备用；

5）将步骤4）所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份，加入防腐剂0.01～0.02重量份、灭活剂0.2～0.3重量份、硒0.05～0.1重量份、维生素C0.5～1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1～2重量份、甘氨酸0.5～1重量份进行混合，先-20℃预冷，再在-80℃条件下冻干，即得。

步骤2）中所述酸化水溶液的pH为4.9～5.2；酸化水溶液的加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍。所述酸化水溶液为盐酸化水溶液。

步骤3）中所述钠盐为NaCl与NaSO₄的质量比为4:1的混合物。

步骤3）中所述离心分离的转速为15000rpm，时间为20min。

步骤4）中所述过滤是先用0.45μm的滤膜进行过滤，截留分子量大于200KD的大分子，再将滤液用0.22μm的滤膜过滤。

卵黄抗体是一种免疫球蛋白，由于机体受到外界抗原的刺激而产生的一种应激产物，可以和相应抗原结合，消除病因。本发明将鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的二联疫苗免疫接种健康的鸡群，可以使获得的鸡蛋蛋黄中产生有效的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体，同时减少了毒株返祖的可能性。

转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息，能够将特异性免疫信息呈递给受体淋巴细胞，使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞，从而激发受体细胞介导的免疫反应。

本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物中，抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体是一种免疫球蛋白，对鸡新城疫、鸡传染性法式囊病有很好的防治效果；抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子本身是一种特异抗病毒因子，将两者结合使用，可极大地提高综合预防和治疗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果。

本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，将抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子进行复配，并辅以防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酸制备混合冻干粉，各组分相互配合，协调作用，可以显著提高其综合防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果，具有针对性强、常温下保存时间长、抗体效价高、生物活性良好的优点，是一种具有广泛应用前景的强效生物制剂；经动物试验证明，本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，对鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的综合防治效果要明显优于抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体，抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子中任意一种单独使用的情况。

本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，使用时，可作为饲料添加剂按质量分数2%～3%混入饲料中；发病时采用肌注方式给药，每100ml注射液中含有混合冻干粉1g，注射液的使用量为每次0.1～0.2ml/kg体重；首次用药加倍，治疗效果更好。

本发明的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，将抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子和多种辅料进行复配，并通过调整辅料的成分、控制其用量，进一步延长了卵黄抗体的保存时间，保证了卵黄抗体在常温下较长时间内的活性，降低了冻干粉制剂的保存和运输成本，使用方便，具有广泛的应用前景；制备方法工艺简单，操作方便，极大的降低了生产成本，适合大规模工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。

本发明的具体实施方式中，所用鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒为国家标准毒株。

本发明的具体实施方式中，所用抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子，是由以下方法制备的：

1）用鸡新城疫（lasota）、鸡传染性法式囊病（B87）病毒抗原对猪脾脏和/或胸腺进行免疫后，去其表面筋、脂肪，再用灭菌后的生理盐水冲洗；

2）将冲洗后的猪脾脏和/或胸腺破碎后，加入2倍体积的预冷后的PBS缓冲液，用组织匀浆仪将其匀质，得匀浆液；

3）将匀浆液用超声破碎仪处理5～10min后，调节pH为5.5，在5000～6000rpm转速下离心30min，收集上清液；

4）将步骤3）所得上清液用微滤膜过滤，截留分子量为7000道尔顿以上的物质，将所得滤液用除菌滤膜过滤，即得抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子原液，在4℃条件下保存备用。

实施例1

本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子2份。

本实施例的使用上述组合物制成的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子2份、硫柳汞0.02份、甲醛0.2份、硒0.05份、维生素C1份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0.5份。

本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，包括下列步骤：

1）取鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准毒株进行增殖，将其灭活制备成二联疫苗，每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康鸡群接种灭活疫苗1.5ml，第二次、第三次免疫接种加量1倍，第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1：256时，收集高免蛋，将收集的高免蛋进行清理、消毒，晾干备用；

2）将步骤1）所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌，得到卵黄抗体溶液，在卵黄抗体溶液中加入pH为5.0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍，混匀、静置沉淀，取上清液备用；

3）在步骤2）所得上清液中加入由NaCl与NaSO₄按质量比为4:1的比例混合形成的混合钠盐，使混合钠盐体积占总体积的0.8%，以15000rpm的转速离心20min，得含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液；

4）取步骤3）所得的含有94重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液，加入2重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子，用0.45μm的滤膜进行过滤，截流分子量大于200KD的大分子物质，再将滤液经0.22μm滤膜过滤，留滤液备用；

5）将步骤4）所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份，加入硫柳汞0.02重量份、甲醛0.2重量份、硒0.05重量份、维生素C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮2重量份、甘氨酸0.5重量份进行混合，先-20℃预冷，再在-80℃条件下冻干，即得。

实施例2

本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体95份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1.5份。

本实施例的使用上述组合物制成的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体95份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1.5份、硫柳汞0.01份、甲醛0.3份、硒0.1份、维生素C0.5份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸1份。

4）取步骤3）所得的含有95重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液，加入1.5重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子，用0.45μm的滤膜进行过滤，截流分子量大于200KD的大分子物质，再将滤液经0.22μm滤膜过滤，留滤液备用；

5）将步骤4）所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份，加入硫柳汞0.01重量份、甲醛0.3重量份、硒0.1重量份、维生素C0.5重量份、聚乙烯吡咯烷酮1.5重量份、甘氨酸1重量份进行混合，先-20℃预冷，再在-80℃条件下冻干，即得。

实施例3

本实施例的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的组合物，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1份。

本实施例的使用上述组合物制成的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体97份、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C1份、聚乙烯吡咯烷酮1份、甘氨酸0.5份。

4）取步骤3）所得的含有97重量份的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液，加入1重量份抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子，用0.45μm的滤膜进行过滤，截流分子量大于200KD的大分子物质，再将滤液经0.22μm滤膜过滤，留滤液备用；

5）将步骤4）所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份，加入硫柳汞0.01重量份、甲醛0.25重量份、硒0.08重量份、维生素C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1重量份、甘氨酸0.5重量份进行混合，先-20℃预冷，再在-80℃条件下冻干，即得。

实验例1

本实验例对实施例1～3所得混合冻干粉进行性能检测，结果如表1、2所示。

常温效价检测实验方法：将实施例1～3所得混合冻干粉制剂保存在37℃培养箱中，保存24个月，分别在1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用琼脂扩散（AGP）法，测定每个时间点所取样品的卵黄抗体效价变化。

表1实施例1～3所得混合冻干粉常温效价检测实验结果

表2实施例1～3所得混合冻干粉常温放置性能检测结果

实验例2

本实验例对实施例1～3的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的效果进行临床实验。

实验方法：选取1月龄鸡700只，其中100只作为攻毒组隔离饲养，100只作为空白组隔离饲养，200只作为对照组分为2组，每组100只，隔离饲养，分别用对比例1、2的制剂治疗，另外300只作为试验组分为3组，每组100只，分别用实施例1、2、3的制剂治疗。饲养方式为自由采食普通饲料，自由饮水，24h后，取试验组、对照组和攻毒组的猪肌注接种稀释后的鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒液，接种量为2ml/只；感染后开始针对性治疗，肌肉注射，注射液给药量为0.2ml/kg体重；记录120h后的死亡情况，结果如表3所示。

表3实施例1～3所得混合冻干粉对鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的防治效果

对比例1的药剂由以下重量份数的组分组成：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体97份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。

对比例2的药剂由以下重量份数的组分组成：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子2份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。

从表3中可以看出，实施例1～3所得混合冻干粉可以同时有效防治鸡新城疫、鸡传染性法式囊病，且混合冻干粉效果要明显优于抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体、抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子中任意一种单独使用的情况。

Claims

1.一种抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，其特征在于：包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体94～97份，抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子1～2份，防腐剂0.01～0.02份，灭活剂0.2～0.3份，硒0.05～0.1份，维生素C 0.5～1份，聚乙烯吡咯烷酮1～2份，甘氨酸0.5～1份。

2.根据权利要求1所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，其特征在于：所述灭活剂为甲醛。

3.根据权利要求1所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉，其特征在于：所述防腐剂为硫柳汞。

4.一种如权利要求1所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

a. 采用鸡新城疫、鸡传染性法式囊病病毒标准株制备二联疫苗，免疫健康鸡群获得高免蛋，将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液；

b. 将含有抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联卵黄抗体的上清液与抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病二联转移因子、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再冻干即得。

5.根据权利要求4所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

5）将步骤4）所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份，加入防腐剂0.01～0.02重量份、灭活剂0.2～0.3重量份、硒0.05～0.1重量份、维生素C 0.5～1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1～2重量份、甘氨酸0.5～1重量份进行混合，先-20℃预冷，再在-80℃条件下冻干，即得。

6.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述酸化水溶液的pH为4.9～5.2；酸化水溶液的加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍。

7.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤3）中所述钠盐为NaCl与Na₂SO₄的质量比为4:1的混合物。

8.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤3）中所述离心分离的转速为15000rpm，时间为20min。

9.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、鸡传染性法式囊病的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤4）中所述过滤是先用0.45μm的滤膜进行过滤，截留分子量大于200KD的大分子，再将滤液用0.22μm的滤膜过滤。