CN105524963A - 西兰花多肽提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

西兰花多肽提取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种西兰花多肽提取物及其制备方法和应用，该制备方法包括：取西兰花茎叶，先采用复合酶酶解，然后采用碱提，再分离、沉淀、洗涤、干燥得到西兰花蛋白粉；加入水，在温度45～60℃、pH8.5～10条件下，再加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行进一步酶解，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物；用滤膜超滤后进行葡聚糖凝胶柱分离，以磷酸盐水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗脱液，过滤，蒸干，经收集干燥，得到西兰花多肽提取物。本发明通过特定制备方法得到的西兰花多肽提取物，具有显著的增强免疫力作用，可用于制备增强免疫力保健食品和增强免疫力药物。

Description

西兰花多肽提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及西兰花多肽提取物领域，具体涉及一种西兰花多肽提取物及其制备方法和在制备增强免疫力保健食品和药物中的应用。
背景技术
西兰花(BrassicaoleraceaL.var.botrytisL)又名青花菜，为十字花科芸薹属一二年生植物，被誉为“蔬菜皇冠”，内含丰富的生物活性物质，其中包括萝卜硫素、多糖等抗肿瘤活性物质和多酚、黄酮等多种抗氧化活性物质，且蛋白和氨基酸含量也较高，具有非常高的食用和药用保健价值。
国外已有研究证明萝卜硫素具有提高免疫力的功能。美国《营养学》杂志也刊登了西兰花能有效预防前列腺癌的研究成果。ShapiroTA等人通过临床实验比较西兰花芽提取物中的葡糖异硫氰酸盐、萝卜硫苷以及莱菔硫烷异硫氰酸盐的安全性、耐受性及在体内的代谢，但人们现在对于萝卜硫素等异硫氰酸酯的报道主要是分析检测、抗癌机理研究等方面。有关西兰花抗癌作用的报道还有黄酮这一活性成分，周向军等报道从Broccolini(西兰花与中国芥兰的杂交品种)叶中提取的黄酮可抑制人类肿瘤细胞株SW480、HepG2、Hela和A459等的增殖，并能诱导SW480细胞株的凋亡，因此西兰花黄酮很可能也具有体外抗肿瘤活性。
许多多肽因为具有强化人体免疫的功能而成为疗效显著的临床药物，如胰岛素、生长激素、释放抑制素Somatostatin、脑活素多肽疫苗等，起到了过去的药品对付现代病毒所取不到的功能。荣建华研究了大豆多肽对小鼠免疫功能的影响，其结果表明大豆多肽能显著增加小鼠免疫器官的重量，增强机体非特异性免疫功能，还有些证据表明大豆多肽可以防治肿瘤，对肿瘤的生长有一定的抑制作用。
增强免疫力已成为当今人们日益重视的一个保健问题，但有关将西兰花多肽分离增强免疫力方面的研究还很少有文献报道。随着现代社会的发展变革、人类疾病谱的改变和老龄化社会的到来，亚健康人群约占成年人的75％-80％，要求医疗模式由单纯的传统疾病治疗向预防、保健、康复与治疗相结合的现代医疗模式转变，从生病治病为主向治“未病”为主转变。利用西兰花增强免疫力的多肽开发新型免疫康复药物、保健食品、化妆品和食品添加剂类产品服务于人类健康事业具有十分巨大的发展潜力。
为了测试和评估本发明西兰花多肽提取物的增强免疫力方面的应用潜力，已使用本专业技术人员所熟悉的方法测试西兰花多肽提取物的生物活性。这些已知的测试方法包括小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验等。结果表明本发明提取的西兰花多肽提取物活性组分具有较好的增强免疫力作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种西兰花多肽提取物及其制备方法和在制备增强免疫力保健食品和药物中的应用，通过特定制备方法得到的西兰花多肽提取物，具有较好的增强免疫力作用。
为了实现以上目的，本发明的第一个方面涉及西兰花多肽提取物及其制备方法，它是通过以下方法制备得到：
一种西兰花多肽提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取西兰花茎叶，先采用复合酶酶解(即进行酶解预处理)，然后采用碱提，再分离、沉淀、洗涤、干燥得到西兰花蛋白粉；
(2)取步骤(1)制备得到的西兰花蛋白粉，加入水，在温度45～60℃、pH8.5～10条件下，再加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行进一步酶解，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物；
(3)取步骤(2)制备得到的西兰花多肽酶解物，用滤膜超滤后进行葡聚糖凝胶柱分离，以磷酸盐水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗脱液，过滤，蒸干，经收集干燥，得到西兰花多肽提取物。
以下作为本发明的优选技术方案：
步骤(1)中，所述的复合酶由质量比0.5～1.5:1的果胶酶与纤维素酶复配而成。进一步优选，所述的复合酶由质量比1:1的果胶酶与纤维素酶复配而成。
所述的复合酶酶解，包括：在复合酶中加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比1～5g：100mL，之后将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解。进一步优选，复合酶的质量与酶解液的体积之比2.5g：100mL。
所述的酶解的条件为：酶解温度50℃～70℃，酶解时间2h～4h。进一步优选，酶解温度60℃，酶解时间3h。
所述的碱提的条件为：pH7.5-9.0，碱提时间1-2h。
所述的分离、沉淀、洗涤包括：在4000～6000r/min下离心10～20min，调节上清液pH于等电点pI沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀，并调节pH至6.5～7.5，进一步优选，在5000r/min下离心15min，调节上清液pH于等电点pI沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀三次，并调节pH＝7.0。
步骤(2)中，所述的西兰花蛋白粉的质量与水的体积之比为0.5g～2g：20mL，进一步优选，所述的西兰花蛋白粉的质量与水的体积之比为1g：20mL。
所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为0.5～2:1，进一步优选，所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1:1。
所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的总添加量为西兰花蛋白粉质量的1.0％～5.0％。
所述的进一步酶解的酶解时间为2～4h。
步骤(3)中，所述的滤膜采用德国赛多利斯生产的型号为Vivaflow50的超滤膜。
所述的磷酸盐水溶液的pH为2～6。所述的洗脱的条件为：以上样量100mg计，流速10～20mL/h，进一步优选，以上样量100mg计，流速15mL/h。
本发明第二个方面涉及对所述西兰花多肽提取物用于制备增强免疫力作用保健品和药物的用途，可用于制备增强免疫力保健食品和药物。
为了检测本发明所得的增强免疫力作用的性能，将本发明所得的增强免疫力西兰花组分配置成100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg药液，用于小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验等。结果表明西兰花多肽提取物具有显著的增强免疫力作用，可用于制备增强免疫力功能的保健食品或抗肿瘤等疾病的辅助药物。
本发明的第三个方面涉及提供西兰花多肽提取物与药学上可接受的辅料组成的药物组合物。
西兰花多肽提取物可单独或几种部位组合，进一步与辅料组合，剂型包括：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂等。
本发明所述的载体和赋形剂包括药剂学常规应用的载体和赋形剂，例如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。
下面的实施例和药理活性实验是对本发明的进一步详细说明，以下所列举的实施例不以任何方式构成限制。
西兰花多肽提取物经过反复多次的增强免疫力作用验证，确认西兰花多肽提取物具有明显的增强免疫力作用，如小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验等，表明西兰花多肽提取物具有良好的增强免疫力作用，具有开发的潜力。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明采用酶解加碱法提取西兰花蛋白后，再采用酶法制备西兰花多肽粗提物，并对西兰花多肽提取物的提取工艺进行了优化，在提取前和提取后分别采用酶法和层析法对西兰花多肽及其活性组分进行了处理和精制，进一步提高西兰花多肽提取物的得率，其工艺简单、得率高；设备简单，适合工业化生产。
附图说明
图1为实施例1中SephadexG-25分离小肽效果图。
具体实施方式
实施例1西兰花多肽提取物的制备
(1)取西兰花茎叶，先进行酶解预处理，用果胶酶(诺维信(中国)生物技术有限公司)与纤维素酶(诺维信(中国)生物技术有限公司)按质量比1:1复配，形成复合酶，然后加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比2.5g：100mL，即酶添加总量2.5％(w/v)，将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解，酶解温度60℃，酶解时间3h，然后调pH8-8.5碱提，碱提时间1.5h，再经5000r/min下离心15min，调节上清液pH于等电点pI沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀三次，并调节pH＝7.0，干燥得西兰花蛋白粉。
(2)取上述步骤(1)制备得到的西兰花蛋白粉，按料液比1︰20加入蒸馏水，即西兰花蛋白粉的质量与蒸馏水的体积之比为1g：20mL，在温度50～55℃、pH9～9.5条件下，按质量百分比3.0％的添加量于西兰花蛋白粉中加入质量比1:1复配的Aclase碱性蛋白酶(诺维信(中国)生物技术有限公司，Alcalase2.4L)和风味蛋白酶(Flavorzyme,食品级Novo.公司)，即Aclase蛋白酶和风味蛋白酶的添加量为西兰花蛋白粉质量的3.0％，酶解时间为3h，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物。
(3)取上述步骤(2)制备得到的西兰花多肽酶解物，用Vivaflow50超滤膜(德国赛多利斯Vivaflow50超滤膜)超滤后进行葡聚糖凝胶柱(SephadexG-25)分离，以磷酸盐水溶液(缓冲液，pH为4)作为洗脱液洗脱，流速15mL/h，上样量100mg，在此条件下SephadexG-25分离小肽效果最好，并重复收集三个西兰花小肽分离组分I、II和III，收集洗脱液，过滤，蒸干，经多次收集干燥，即为西兰花多肽提取物，备用。
实施例2西兰花多肽提取物的制备
(1)取西兰花茎叶，先进行酶解预处理，用果胶酶(诺维信(中国)生物技术有限公司)与纤维素酶(诺维信(中国)生物技术有限公司)按质量比0.5:1复配，形成复合酶，然后加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比1g：100mL，即酶添加总量1％(w/v)，将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解，酶解温度50℃，酶解时间4h，然后调pH9.0碱提，碱提时间1h，再经4000r/min下离心10min，调节上清液pH于等电点pI沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀三次，并调节pH＝7.0，干燥得西兰花蛋白粉。
(2)取上述步骤(1)制备得到的西兰花蛋白粉，按料液比0.5︰20加入蒸馏水，即西兰花蛋白粉的质量与蒸馏水的体积之比为0.5g：20mL，在温度45℃、pH10条件下，按质量百分比1.0％的添加量于西兰花蛋白粉中加入质量比0.5:1复配的Aclase碱性蛋白酶(诺维信(中国)生物技术有限公司，Alcalase2.4L)和风味蛋白酶(Flavorzyme,食品级Novo.公司)，即Aclase碱性蛋白酶和风味蛋白酶的添加量为西兰花蛋白粉质量的1.0％，酶解时间为4h，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物，备用。
(3)取上述步骤(2)制备得到的西兰花多肽酶解物，用Vivaflow50超滤膜(德国赛多利斯Vivaflow50超滤膜)超滤后进行葡聚糖凝胶柱(SephadexG-25)分离，以磷酸盐水溶液(缓冲液，pH为3)作为洗脱液洗脱，流速10mL/h，上样量100mg，在此条件下SephadexG-25分离小肽效果最好，并重复收集三个西兰花小肽分离组分I、II和III，收集洗脱液，过滤，蒸干，经多次收集干燥，即为西兰花多肽提取物。
实施例3西兰花多肽提取物的制备
(1)取西兰花茎叶，先进行酶解预处理，用果胶酶(诺维信(中国)生物技术有限公司)与纤维素酶(诺维信(中国)生物技术有限公司)按质量比1.5:1复配，形成复合酶，然后加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比5g：100mL，即酶添加总量5％(w/v)，将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解，酶解温度70℃，酶解时间2h，然后调pH7.5碱提，碱提时间2h，再经6000r/min下离心20min，调节上清液pH于等电点pI沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀三次，并调节pH＝7.0，干燥得西兰花蛋白粉。
(2)取上述步骤(1)制备得到的西兰花蛋白粉，按料液比2︰20加入蒸馏水，即西兰花蛋白粉的质量与蒸馏水的体积之比为2g：20mL，在温度60℃、pH8.5条件下，按质量百分比5.0％的添加量于西兰花蛋白粉中加入质量比2:1复配的Aclase碱性蛋白酶(诺维信(中国)生物技术有限公司，Alcalase2.4L)和风味蛋白酶(Flavorzyme,食品级Novo.公司)，即Aclase碱性蛋白酶和风味蛋白酶的添加量为西兰花蛋白粉质量的5.0％，酶解时间为2h，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物，备用。
(3)取上述步骤(2)制备得到的西兰花多肽酶解物，用Vivaflow50超滤膜(德国赛多利斯Vivaflow50超滤膜)超滤后进行葡聚糖凝胶柱(SephadexG-25)分离，以磷酸盐水溶液(缓冲液，pH为5)作为洗脱液洗脱，流速20mL/h，上样量100mg，在此条件下SephadexG-25分离小肽效果最好，并重复收集三个西兰花小肽分离组分I、II和III，收集洗脱液，过滤，蒸干，经多次收集干燥，即为西兰花多肽提取物，备用。
实施例4西兰花多肽提取物对实验小鼠增强免疫力的作用
1、实验材料
1.1原料与实验试剂
西兰花茎叶由浙江省台州天莱生物技术有限公司提供。采用实施例1制备的西兰花多肽提取物进行实验。
RPMI1640、FBS、Hank’s液、ConA、MTT、异丙醇、HCl、DNFB、丙酮、麻油、生理盐水、印度墨汁、Na2CO3。
1.2实验动物
实验选用清洁级健康ICR小鼠，体重18-22g，单一雄性，浙江省医学科学院实验动物中心提供，实验动物生产证许可证号SCXK(浙)2014-0001；饲养于浙江省医学科学院实验动物中心SPF级动物房，实验条件保持温度为25℃，相对湿度为40％-70％，光照-黑暗循环为12h︰12h，自由饮水摄食。
1.3动物分组与给药剂量
实验动物根据体重随机分为I、II、III三个大组，每大组40只小鼠。其中I组小鼠进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化；II组小鼠进行耳廓肿胀试验；III组小鼠进行小鼠碳廓清实验。每大组40只小鼠分成空白对照组(蒸馏水，10ml/kg·bw)、西兰花多肽提取物组(100mg/kg·bw，50mg/kg·bw和25mg/kg·bw)3个剂量组，每组10只。各组小鼠每天灌胃1次，灌胃量0.1ml/10g·bw，空白对照组给予同等体积蒸馏水，连续灌胃30d后测定各项增强免疫力功能指标。动物实验于每天10:00-14:00安静环境中进行。
2、实验方法
2.1脏/体比值测定实验
实验结束后，处死小鼠，取出胸腺和脾脏，称重后计算脏/体比值。
脏器体重比值(％)＝脏器重(g)/终体重*100％
2.2细胞免疫功能测定
2.2.1ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验－MTT法
各剂量组动物连续灌胃一个月，末次灌胃1h后，颈椎脱臼处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾脏，制成单个细胞悬液，经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1mLRPMI1640完全培养液中，用培养液调整细胞浓度为3×106个/mL，将细胞悬液分别加入24孔板的2孔中，每孔1mL，实验孔加75μLConA液(终浓度7.5μL/mL)，另一孔作为对照，置37℃，5％CO2培养箱中培养72h。培养结束前4h,每孔吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入酸性异丙醇(96ml异丙醇+4ml1MHCl)，吹打混匀，570nm波长下用酶标仪测定光吸收度。用加ConA孔的OD值减去不加ConA孔的OD值表示淋巴细胞的增殖能力。
2.2.2二硝基苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型变态反应(DTH)－耳肿胀法
各剂量组动物连续灌胃一个月后，实验结束前5天，将小鼠腹部皮肤脱毛，范围约3cm*3cm，用10mg/mlDNFB溶液50μL均匀涂抹致敏。5天后用10mg/mlDNFB溶液10μL均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击，24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm耳片，称重，左右耳重量之差表示DTH的程度。
耳重差(mg)＝右耳重(mg)-左耳重(mg)
2.3单核-巨噬细胞功能测定－小鼠碳廓清实验
小鼠连续灌胃给药30天，于末次灌胃给药1h后，各组小鼠按0.1ml/10g体重尾静脉注射经生理盐水稀释20倍并经过滤的墨汁，2min(t1)和10min(t2)时分别从眼底静脉丛定量取血20μL，并立即将其加到2mL经离心的重量百分含量0.1％Na2CO3水溶液中，振摇均匀后取150μL加到96孔酶标板，600nm处测定吸光度值OD1(2min吸光度值)与OD2(10min吸光度值)，以0.1％Na2CO3溶液作为空白对照调零；取血后，将小鼠处死，迅速解剖取肝脏和脾脏，用履职吸干脏器表面血污，分别称重，按照下式计算碳粒廓清指数K和吞噬指数a。
K＝(lgOD1-lgOD2)/(t1-t2)；a＝K1/3*体重/(肝重+脾重)
综合上述各项指标评述本发明中西兰花多肽提取物的提高免疫力功能。
3、实验结果
3.1西兰花多肽提取物对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
表2西兰花多肽提取物对小鼠免疫器官脏/体比值的影响(x±s)
注：多组间差异比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照组比较。
由表2可知，西兰花多肽提取物mg/kg能显著增加小鼠脾重，脾系数与空白对照组相比，具有显著性差异(P＜0.05)，而高(100mg/kg)、低(25mg/kg)两个剂量组对小鼠脾系数无统计学意义(P＞0.05)。三个剂量对小鼠胸腺系数没有明显影响，与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
3.2西兰花多肽提取物对细胞免疫的影响
表3受试物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化及迟发性变态反应(DTH)实验结果(n＝10)
注：多组间差异比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照组比较。
由表3可看出，西兰花多肽提取物高剂量组(100mg/kg)对小鼠的淋巴细胞转化能力与小鼠的左右耳片重量差异均显著高于空白对照组(P＜0.05)，中、低剂量组与空白组比较不具有显著性差异。表明西兰花多肽提取物具有促进小鼠淋巴细胞增殖、转化能力的作用，能显著增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应的作用。
3.3西兰花多肽提取物对单核-巨噬细胞免疫的影响
表4西兰花多肽提取物对小鼠碳粒廓清能力的影响
注：多组间差异比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照组比较。
由表4结果显示，与正常对照组相比较，西兰花多肽提取物对正常小鼠碳粒廓清功能有非常明显的促进作用，高、中剂量能显著(P＜0.05)增加小鼠非特异免疫功能。
综上所述，本发明制备得到的西兰花多肽提取物在小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验中，结果与空白对照组相比具有极其显著差异，说明西兰花多肽活性成分具有显著的增强免疫力的作用。
实施例5西兰花增强免疫力压片糖果的制备
西兰花增强免疫力压片糖果采用以下质量百分含量的原料：15％西兰花多肽提取物、15％西兰花萝卜硫素提取物、5％西洋参、50％预胶化淀粉、10％羟丙甲纤维素、5％磷酸氢钙的原料，并通过现有工艺加工制成。采用实施例4的模型进行测试，表明西兰花增强免疫力压片糖果具有显著的增强免疫力作用。
实施例6西兰花增强免疫力保健食品的制备
西兰花增强免疫力保健食品，为颗粒配方，由以下质量百分含量的原料组成：15％西兰花多肽提取物、15％西兰花萝卜硫素提取物、5％西洋参和65％糖醇类辅料，制成3g/包。采用实施例4的模型进行测试，表明西兰花增强免疫力保健食品具有显著的增强免疫力作用。

Claims (10)

1.一种西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取西兰花茎叶，先采用复合酶酶解，然后采用碱提，再分离、沉淀、洗涤、干燥得到西兰花蛋白粉；
(2)取步骤(1)制备得到的西兰花蛋白粉，加入水，在温度45～60℃、pH8.5～10条件下，再加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行进一步酶解，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物；
(3)取步骤(2)制备得到的西兰花多肽酶解物，用滤膜超滤后进行葡聚糖凝胶柱分离，以磷酸盐水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗脱液，过滤，蒸干，经收集干燥，得到西兰花多肽提取物。
2.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的复合酶由质量比0.5～1.5:1的果胶酶与纤维素酶复配而成。
3.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的复合酶酶解，包括：在复合酶中加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比1～5g：100mL，之后将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解；
所述的酶解的条件为：酶解温度50℃～70℃，酶解时间2h～4h。
4.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的碱提的条件为：pH7.5-9.0，碱提时间1-2h。
5.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的分离、沉淀、洗涤包括：在4000～6000r/min下离心10～20min，调节上清液pH于等电点沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀，并调节pH至6.5～7.5。
6.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的西兰花蛋白粉的质量与水的体积之比为0.5g～2g：20mL。
7.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为0.5～2:1；
所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的总添加量为西兰花蛋白粉质量的1.0％～5.0％；
所述的进一步酶解的酶解时间为2～4h。
8.根据权利要求1所述的西兰花多肽提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的磷酸盐水溶液的pH为2～6。
9.根据权利要求1～8任一项所述的制备方法制备的西兰花多肽提取物。
10.根据权利要求9所述的西兰花多肽提取物在制备增强免疫力保健食品和增强免疫力药物中的应用。
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