CN103330211B - 一种具有免疫调节功能的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品领域,公开了一种具有免疫调节功能的组合物。本发明所述具有免疫调节功能的组合物,由人参和蛹虫草菌液体摇瓶种子为原料制成,其中,按g/mL计,所述人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子的质量体积比为(100~120):(100~180),可以制成具有免疫调节功能的保健食品。本发明所述具有免疫调节功能的组合物采用双向固体发酵,将人参经过蛹虫草菌生物转化得到,可显著提高细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性,从而提高免疫调节功能。由本发明所述组合物制备的具有免疫调节功能的保健食品具有生产工艺简单,产品质量稳定,功能因子清晰,保健功效突出,服用剂量小,使用安全,无毒副作用等优点,适宜广大免疫力低下人群食用。
Description
技术领域
本发明涉及食品领域,具体的说是涉及一种具有免疫调节功能的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等),处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为,免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。人体内执行这一功能的是免疫系统。各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用,在此情况下,极易招致细菌、病毒、真菌等感染,因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病,加重了机体的消耗,所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现,生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复,而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良,还易诱发重大疾病。
人体的免疫力大多取决于遗传基因,但是环境的影响也有很大的作用,如饮食、睡眠、运动、压力等。其中饮食具有决定性的影响力,因为有些食物的成分能够协助刺激免疫系统,增强免疫能力。如果缺乏这些重要营养素成分,会严重影响身体的免疫系统机能。因此多食用具有提高免疫力的食品可有效提高免疫力。
人参为“药中之王”、“国之瑰宝”,是典型的药食两用品种,具有大补元气,复脉固脱,补脾益肺,生津,安神的功效。现代研究表明人参中的人参皂苷和人参多糖是调节免疫功能的活性成分,能显著增强人体免疫力,对恶性肿瘤有一定的疗效,可延长病人生存时间,提高机体细胞免疫功能。
蛹虫草为子囊菌亚门,麦角菌目,麦角菌科、虫草属的模式种。学名为Cordycepsmilitaris,又名北冬虫夏草、北蛹虫草、虫草等。既能补肺阴,又能补肾阳。现代药理研究表明虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促进淋巴细胞转化,提高血清IgG的抗体含量和机体的免疫功能,增强机体自身抗癌抑癌的能力。此外,蛹虫草还含有丰富的硒(Se),这种微量元素已被大家公认是人体必需的微量元素,是谷胱甘肽过氧化酶的活性中心,以硒半胱氨酸的形式连接在酶蛋白的肽链上,保护细胞膜的稳定性的正常的通透性,并刺激免疫球蛋白和抗体的产生,增强机体免疫和抗氧化能力。
然而市场上现有人参或蛹虫草为主要原料的食品与药品只是经过简单的加工粉碎,口感不好,同时免疫调节效果较低。
发明内容
有鉴于此,本发明目的是提供一种具有免疫调节功能的组合物,适用于免疫力低下人群。
为实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:
一种具有免疫力调节功能的组合物,由人参和蛹虫草菌液体摇瓶种子为原料制成,其中,按g/mL计,所述人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子的质量体积比为(100~120):(100~180)。
通过大量的配伍筛选研究发现按g/mL计,人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子按(100~120):(100~180)的质量体积比组合,可显著提高细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性,从而提高免疫调节功能。
其中,本发明所述蛹虫草菌液体摇瓶种子的制备方法为取灭菌的摇瓶种子培养液,接种L10蛹虫草菌斜面菌种,28±1℃,150r/min~200r/min振荡培养4天~6天即得。。
进一步的,本发明所述摇瓶种子培养液配方优选为葡萄糖2wt%、蛋白胨1wt%、酵母粉1wt%、KH2PO40.3wt%、MgSO40.3wt%、维生素B10.01wt%,余量为水。
作为优选,所述灭菌为121℃,灭菌20-30min。
本发明还提供了具有免疫调节功能的组合物的制备方法。本发明采用双向固体发酵,将人参经过蛹虫草菌生物转化得到所述具有免疫力调节功能的组合物。具体为称取人参,粉碎成细粉,加0.5倍~1.5倍重量的水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,无菌条件下,接入蛹虫草液体摇瓶种子,25~29℃培养10天~20天,取出,低温干燥,超微粉碎,即得。
其中,按g/mL计,所述人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子的质量体积比优选为(100~120):(100~180)。
本发明还提供了所述制备方法制备的具有免疫调节功能的组合物。
在一个具体实施方案中,本发明通过检测脏器/体质量比值、脾淋巴细胞增殖能力、溶血空斑数、半数溶血值、鸡红细胞吞噬率、吞噬指数和NK细胞活性七个指标。结果显示经口连续30d给予雄性小鼠相同剂量的人参、蛹虫草菌、人参蛹虫草菌相加组及本发明所述具有免疫调节功能的组合物,对小鼠的胸腺/体质量比和脾脏/体质量比无明显影响。其中本发明所述具有免疫调节功能的组合物能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、增强NK细胞活性,且各项结果均好于人参蛹虫草菌相加组。表明本发明所述具有免疫调节功能的组合物对小鼠的细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性有促进作用。
本发明所述组合物还可以制备成具有免疫调节功能的保健食品。因此,本发明同时还提供了所述组合物在制备具有免疫调节功能的保健食品中的应用。
本发明所述保健食品包含所述具有免疫调节功能的组合物。保健食品是指适宜特定人群食用,具有调节机体功能,不以治疗疾病为目的,并且对人体不产生任何急性、亚急性或慢性危害的食品。本发明所述保健食品可以为普通食品形态,也可为药品形态如硬胶囊、软胶囊、片剂、口服液、酒剂、颗粒剂、粉剂、袋茶等。
优选的,本发明所述保健食品为软胶囊、片剂、颗粒剂或口服液。
本发明所述具有免疫调节功能的组合物,由人参和蛹虫草菌液体摇瓶种子为原料制成,其中,按g/mL计,所述人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子的质量体积比为(100~120):(100~180)。本发明所述具有免疫调节功能的组合物采用双向固体发酵,将人参经过蛹虫草菌生物转化得到,可显著提高细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性,从而提高免疫调节功能。本发明所述具有免疫调节功能的组合物改善了人参和蛹虫草的口味,也解决了人参和蛹虫草直接服用存在口感不好的问题。同时,本发明所述具有免疫调节功能的组合物具有比人参、蛹虫草菌有更强的免疫调节功能。由本发明所述组合物制备的具有免疫调节功能的保健食品具有生产工艺简单,产品质量稳定,功能因子清晰,保健功效突出,服用剂量小,使用安全,无毒副作用等优点,适宜广大免疫力低下人群食用。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种具有免疫调节功能的组合物及其制备方法与应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明,下面结合实施例对本发明进行详细说明。其中,本发明所述蛹虫草为L10蛹虫草菌斜面菌种(此菌种为长春中医药大学药用真菌教研室购买的,经鉴定为L10蛹虫草菌菌种)。
实施例1:本发明具有免疫调节功能的组合物
人参100g,
蛹虫草菌液体摇瓶种子100mL;
蛹虫草菌液体摇瓶种子的制备方法如下:
取100mL培养液置250mL三角瓶,0.1Mpa,121℃灭菌30min,选择蛹虫草斜面菌种的菌块(5mm×5mm)4块,接入到三角瓶中,150r/min振荡培养5d,培养温度28℃,至培养液浑浊粘稠呈黄色时,即可取出待用。
其中,摇瓶种子培养液配方:葡萄糖2%,蛋白胨1%,酵母粉1%,KH2PO40.3%,MgSO40.3%,维生素B10.01%
称取人参100g粉碎成细粉,加1倍水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,放至室温,无菌条件下,接入100mL蛹虫草菌液体摇瓶种子,温度26℃培养16d,取出,低温干燥,超微粉碎,即得。
实施例2:本发明具有免疫调节功能的组合物
人参110g,
蛹虫草菌液体摇瓶种子175mL;
蛹虫草菌液体摇瓶种子的制备方法如下:
取175mL培养液置250mL三角瓶,0.1Mpa,121℃灭菌30min,选择蛹虫草斜面菌种的菌块(5mm×5mm)7块,接入到三角瓶中,150r/min振荡培养5d,培养温度28℃,至培养液浑浊粘稠呈黄色时,即可取出待用。
其中,摇瓶种子培养液配方:葡萄糖2%,蛋白胨1%,酵母粉1%,KH2PO40.3%,MgSO40.3%,维生素B10.01%
称取人参110g粉碎成细粉,加1.5倍水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,放至室温,无菌条件下,接入175mL蛹虫草菌液体摇瓶种子,温度28℃培养16d,取出,低温干燥,超微粉碎,即得。
实施例3:本发明具有免疫调节功能的组合物
人参120g,
蛹虫草菌液体摇瓶种子150mL;
蛹虫草菌液体摇瓶种子的制备方法如下:
取150mL培养液置250mL三角瓶,0.1Mpa,121℃灭菌30min,选择蛹虫草斜面菌种的菌块(5mm×5mm)6块,接入到三角瓶中,150r/min振荡培养5d,培养温度28℃,至培养液浑浊粘稠呈黄色时,即可取出待用。
其中,摇瓶种子培养液配方:葡萄糖2%,蛋白胨1%,酵母粉1%,KH2PO40.3%,MgSO40.3%,维生素B10.01%
称取人参120g粉碎成细粉,加1.2倍水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,放至室温,无菌条件下,接入150mL蛹虫草菌液体摇瓶种子,温度28℃培养18d,取出,低温干燥,超微粉碎,即得。
实施例4:本发明具有免疫调节功能的组合物
人参120g,
蛹虫草菌液体摇瓶种子175mL;
蛹虫草菌液体摇瓶种子的制备方法如下:
取175mL培养液置250mL三角瓶,0.1Mpa,121℃灭菌30min,选择蛹虫草斜面菌种的菌块(5mm×5mm)7块,接入到三角瓶中,150r/min振荡培养5d,培养温度28℃,至培养液浑浊粘稠呈黄色时,即可取出待用。
其中,摇瓶种子培养液配方:葡萄糖2%,蛋白胨1%,酵母粉1%,KH2PO40.3%,MgSO40.3%,维生素B10.01%
称取人参120g粉碎成细粉,加1.5倍水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,放至室温,无菌条件下,接入175mL蛹虫草菌液体摇瓶种子,温度26℃培养15d,取出,低温干燥,超微粉碎,即得。
实施例5:免疫调节功能性实验
实验材料
1、实验动物
清洁级ICR雄性小鼠,体重18~22g,由长春高新医学动物实验研究中心提供。
2、实验药品
2.1本发明所述具有免疫调节功能的组合物(实施例1制得):
取5g实施例1制备的具有免疫调节功能的组合物粉溶于100mL无菌水,小鼠灌胃400μL/20g体重,即为1g/kg;
2.2本发明所述具有免疫调节功能的组合物(实施例2制得):
取5g实施例2制备的具有免疫调节功能的组合物粉溶于100mL无菌水,小鼠灌胃400μL/20g体重,即为1g/kg;
2.3本发明所述具有免疫调节功能的组合物(实施例3制得):
取5g实施例3制备的具有免疫调节功能的组合物粉溶于100mL无菌水,小鼠灌胃400μL/20g体重,即为1g/kg;
2.4本发明所述具有免疫调节功能的组合物(实施例4制得):
取5g实施例4制备的具有免疫调节功能的组合物粉溶于100mL无菌水,小鼠灌胃400μL/20g体重,即为1g/kg;
2.5人参组
取5g人参细粉溶于100mL无菌水,即为0.05g/mL,小鼠灌胃400μL/20g体重,上下午各灌胃一次即为2g/kg;
2.6蛹虫草组
取5g蛹虫草细粉溶于100mL无菌水,即为0.05g/mL,小鼠灌胃400μL/20g体重,上下午各灌胃一次即为2g/kg;
2.7人参蛹虫草菌相加组
取2.5g蛹虫草细粉和2.5g人参细粉混合后溶于100mL无菌水,即为0.05g/mL,小鼠灌胃400μL/20g体重,上下午各灌胃一次即为2g/kg。
2.8蛹虫草斜面菌种长春中医药大学药物真菌研究所提供
2.9小牛血清上海生物化学公司进口分装,批号20070601
2.10刀豆蛋白A(ConA)、琼脂糖和MTT美国sigma公司提供
2.11YAC一1细胞(用于测定NK细胞活性)吉林省疾病预防控制中心提供。
3、实验仪器
(1)ADVIA1200全自动生化仪美国生产
(2)高压灭菌器山东新华医疗器械股份有限公司生产
(3)二氧化碳培养箱美国生产
(4)离心机北京医用离心机厂生产
(5)显微镜日本OLYMPUS生产
(6)Multiskan酶标仪芬兰生产
(7)TD25一WS48孔多管架自动平衡离心机长沙湘仪离心机仪器有限公司
(8)UV一754型紫外可见分光光度计上海第三分析仪器厂
(9)BS224S电子天平北京赛多利斯仪器
实验方法与结果
1、试验方法
将小鼠随机分为7组:人参组、蛹虫草菌组、人参蛹虫草菌相加组、本发明所述具有免疫调节功能的组合物组(分为实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组)和溶剂对照组(蒸馏水)。各组连续经口灌胃给予相同剂量的上述样品,30d后分为3个亚组,分别参照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)。检测以下指标:脏器/体质量比值;脾淋巴细胞增殖能力(ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验,MTT法);溶血空斑数(抗体生成细胞检测,Jeme改良载法),半数溶血值(HC50,血清凝血素测定);鸡红细胞吞噬率与吞噬指数(小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验,滴片法)和NK细胞活性。
2、结果
对小鼠脏器/体质量比值的影响见表1、对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响见表2、对小鼠抗体生成细胞数的影响表3、对小鼠半数溶血值HC50的影响见表4、对非特异性免疫功能的影响见表5.
表1对脏器/体质量比值和细胞免疫功能的影响
*与溶剂对照组比较P<0.05
表2对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响
组别 | N | 脾淋巴细胞增殖能力 |
溶剂对照组 | 12 | 0.155±0.035 |
人参组 | 12 | 0.142±0.063 |
蛹虫草菌组 | 12 | 0.147±0.052 |
人参蛹虫草菌相加组 | 12 | 0.157±0.084 |
实施例1组 | 12 | 0.233±0.069* |
实施例2组 | 12 | 0.235±0.059* |
实施例3组 | 12 | 0.239±0.063* |
实施例4组 | 12 | 0.231±0.064* |
*与溶剂对照组比较P<0.05
表3对小鼠抗体生成细胞数的影响
组别 | N | 溶血空斑数 |
溶剂对照组 | 12 | 246.4±71.9 |
人参组 | 12 | 263.8±67.4 |
蛹虫草菌组 | 12 | 260.3±57.4 |
人参蛹虫草菌相加组 | 12 | 253.7±58.9 |
实施例1组 | 12 | 249.3±79.5* |
实施例2组 | 12 | 251.8±72.6* |
实施例3组 | 12 | 250.6±76.3* |
实施例4组 | 12 | 252.6±74.5* |
*与溶剂对照组比较P<0.05
表4受试物对小鼠半数溶血值HC50的影响
组别 | N | HC50 |
溶剂对照组 | 12 | 190±42.2 |
人参组 | 12 | 206±51.5 |
蛹虫草菌组 | 12 | 203±47.6 |
人参蛹虫草菌相加组 | 12 | 174±54.3 |
实施例1组 | 12 | 180±63.5* |
实施例2组 | 12 | 181±63.8* |
实施例3组 | 12 | 179±64.2* |
实施例4组 | 12 | 182±63.5* |
*与溶剂对照组比较P<0.05
表5对非特异性免疫功能的影响
*与溶剂对照组比较P<0.05
由表1-5结果可见,经口连续30d给予雄性小鼠相同剂量的人参、蛹虫草菌、人参蛹虫草菌相加组及本发明实施例1、实施例2、实施例3和实施例4制得的具有免疫调节功能的组合物对小鼠的胸腺/体质量比和脾脏/体质量比无明显影响。本发明实施例1、实施例2、实施例3和实施例4制得的具有免疫调节功能的组合物均能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力,增强NK细胞活性,表明本发明所述具有免疫调节功能的组合物对小鼠的细胞免疫、体液免疫和NK细胞活性有促进作用,且各项结果均好于人参蛹虫草菌相加组。
实施例6:本发明具有免疫调节功能的组合物的软胶囊
取实施例1制备的具有免疫调节功能的组合物与常规辅料混合,按照本领域制备软胶囊的常规技术制备得到具有免疫调节功能的组合物的软胶囊。
实施例7:本发明具有免疫调节功能的组合物的片剂
取实施例1制备的具有免疫调节功能的组合物与常规辅料混合,按照本领域制备片剂的常规技术制备得到具有免疫调节功能的组合物的片剂。
实施例8:本发明具有免疫调节功能的组合物的颗粒剂
取实施例1制备的具有免疫调节功能的组合物与常规辅料混合,按照本领域制备颗粒剂的常规技术制备得到具有免疫调节功能的组合物的颗粒剂。
实施例9:本发明具有免疫调节功能的组合物的口服液
取实施例1制备的具有免疫调节功能的组合物与常规辅料混合,按照本领域制备口服液的常规技术制备得到具有免疫调节功能的组合物的口服液。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明及其核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (5)
1.一种具有免疫调节功能的组合物,其特征在于,由人参和蛹虫草菌液体摇瓶种子为原料制成,其中,按g/mL计,所述人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子的质量体积比为(100~120):(100~180);
所述组合物的制备方法为称取人参,粉碎成细粉,加0.5倍~1.5倍重量的水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,无菌条件下,接入蛹虫草液体摇瓶种子,25~29℃培养10天~20天,取出,低温干燥,超微粉碎。
2.一种具有免疫调节功能的组合物的制备方法,称取人参,粉碎成细粉,加0.5倍~1.5倍重量的水润湿,装入三角瓶中,121℃灭菌,无菌条件下,接入蛹虫草液体摇瓶种子,25~29℃培养10天~20天,取出,低温干燥,超微粉碎,即得;按g/mL计,所述人参与蛹虫草菌液体摇瓶种子的质量体积比为(100~120):(100~180)。
3.权利要求1所述组合物在制备具有免疫调节的保健食品中的应用。
4.一种具有免疫调节功能的保健食品,其特征在于,包含权利要求1所述具有免疫调节功能的组合物。
5.根据权利要求4所述保健食品,其特征在于,所述保健食品为软胶囊、片剂、颗粒剂或口服液。
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