CN105524878A - 一种人脐带间质干细胞分离并诱导为软骨细胞的培养方法 - Google Patents

一种人脐带间质干细胞分离并诱导为软骨细胞的培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及间质干细胞技术领域，具体地，为一种脐带分离培养间质干细胞并诱导为软骨细胞的培养方法。本发明采用MesenGro培养液培养对间质干细胞进行原代培养及传代培养，并采用脐带间质干细胞和软骨细胞共培养分化成软骨细胞。

Description

一种人脐带间质干细胞分离并诱导为软骨细胞的培养方法
技术领域
本发明涉及间充质肝细胞技术领域，具体地，为一种人脐带分离培养间质干细胞并诱导为软骨细胞的培养方法。
背景技术
关节软骨损伤在临床上较为常见，由于关节软骨无血液供应和神经支配，自身修复能力很差，关节软骨一旦损伤即很难修复，如不及时治疗，继而会发生不可逆的病理变化，造成关节的退行性改变(关节炎)，严重影响患者的生活质量，临床症状主要表现为关节活动后肿胀、疼痛，上下楼、下蹲困难。
间质干细胞是一种具有多向分化潜能的细胞，间质干细胞存在于人体多种组织中，尤其是脐带、胎盘、骨髓、脂肪组织，这种干细胞在不同的诱导条件下可分化成许多不同的组织，如骨组织、软骨组织、脂肪组织、内皮组织、肌肉组织、神经组织、上皮组织等，2002年Wakitani等首次报道间质干细胞可定向到软骨细胞用于治疗软骨损伤。
发明内容
本发明采用人脐带间质干细胞(hUC-MSCs)其目的在于提供一种生长速度快、方法简单，费用低，生物安全性高的软骨细胞培养方法。本发明是采用如下方案实现的：
一种人脐带间质干细胞的分离培养方法，包括以下步骤，
(1)原代培养：取预处理过的人脐带沃顿胶组织，进行原代培养，原代培养采用MesenGro培养液培养，MesenGro培养液包括MesenGro培养基、胎牛血清、青霉素和/或链霉素双抗、阿卡米星、成纤维细胞生长因子，带细胞游出后，用胰蛋白酶消化离心，得到原代人脐带间质干细胞；
(2)传代培养：对得到的原代细胞置于新的MesenGro培养液进行传代培养，待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化离心，得到第二代细胞；并使用同样方法得到重复进行第二代到第三代传代人脐带间质干细胞的培养。
优选地，步骤(1)中，所采用的胎牛血清的浓度为5％～20％，青霉素/链霉素双抗的浓度为80～120U/mL，阿卡米星的浓度为5～10mg/L，成纤维细胞生长因子的浓度为8～13μg/L。
优选地，步骤(1)中，培养温度为37℃，环境空气为5％CO2。
优选地，步骤(2)中，培养温度为37℃，环境空气为5％CO2。
一种人脐带间质干细胞分化诱导为软骨细胞的培养方法，取上述第三代传代脐带间质干细胞，与人关节软骨细胞(hACs)共培养，诱导分化为软骨细胞。
优选地，所述人关节软骨细胞(hACs)的获取方法为，取膝关节非负重区软骨，使用Ⅱ型胶原酶消化后过滤，弃上清液，收集软骨细胞，接种于培养瓶内，使用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养。待细胞达到80％～90％融合时，消化传代成第1代细胞，然后再对第一代细胞置37℃、5％CO2的培养箱中继续培养，获得第2代人关节软骨细胞(hACs)。
优选地，软骨细胞的培养方法为，将第三代传代人脐带间质干细胞与第二代人关节软骨细胞(hACs)，按1：1的比例接种于DMEM/F12培养液中，进行共培养。
脐带间质干细胞和软骨细胞共培养，两种细胞相互促进增殖和分化，可减少软骨细胞增殖传代次数并节省软骨细胞数量，方法简单，费用低，生物安全性高，对建立种子细胞源是一种实用的策略，也为优化和扩大软骨组织工程的种子细胞源提供了实验依据。
附图说明
图1A实施例1利用流式细胞仪对第三代传代人脐带间质干细胞表面抗原CD34和CD45的检测结果
图1B实施例1利用流式细胞仪对第三代传代人脐带间质干细胞表面抗原CD105和CD73的检测结果
图2A实施例2利用流式细胞仪对第三代传代人脐带间质干细胞表面抗原CD34和CD45的检测结果
图2B实施例2利用流式细胞仪对第三代传代人脐带间质干细胞表面抗原CD105和CD73的检测结果
图3A实施例1利用RT-qPCR技术对SOX9基因的转录情况表征
图3B实施例1利用RT-qPCR技术对I型胶原基因的转录情况表征
图3C实施例1利用RT-qPCR技术对Ⅱ型胶原基因的转录情况表征
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1、
实验用新生儿脐带(n＝7)，取自深圳市第二人民医院妇产科，产妇体健，足月剖宫产，产妇及其家属均签署知情同意书，实验方案经医院医学伦理会批准。
本实施例所采用的药品及来源如表1。
表1本实施例中所采用药品及来源
1.从人脐带中分离和培养间质干细胞，其具体分离、培养方法如下：
(1)脐带的预处理
无菌条件下，取脐带5～8cm，剔除血管和外膜后，使用PBS洗净，取脐带的胶冻状组织，即沃顿胶(Wharton，sjelly，WJ)剪碎成1.0～2.0mm3大小的组织块。
(2)细胞分离及原代细胞培养
将预处理过的沃顿胶组织块，按一定比例均匀放置于含MesenGro培养液的培养皿中，放置于培养箱内培养，培养箱内温度为37℃，培养箱内CO2含量为5％。
其中，MesenGro培养液的组分及配比为：MesenGro培养基，胎牛血清的浓度为10％，青霉素/链霉素双抗的使用浓度为100U/mL，阿卡米星的使用浓度为7.5mg/L，成纤维细胞生长因子的使用浓度10μg/L。
10天以后，细胞从组织块中爬出，用胰蛋白酶消化离心，获得原代细胞。
(3)细胞传代培养
将获得的原代细胞，置入含有新的MesenGro培养液的T25培养瓶进行传代培育，其培养温度为37℃，环境空气为5％CO2。待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化离心，得到第二代细胞。使用同样方法重复进行第二代到第三代传代细胞的培养。对细胞进行传代培养，每传代一次，细胞按指数式增长。
(4)传代细胞的检测
以上步骤(3)获得的人脐带间质干细胞已培养至第三代，用流式细胞仪检测其表面抗原(CD105-PE、CD73-FITC、CD34-PE、CD45-FITC，Bioscience，12-1057-42，14-0731-82，RS-90512,11-0451-82)
图1A中，CD34和CD45为造血干细胞的表面标记性蛋白，脐带间质干细胞不予表达，图中四个象限中，左下为双阴性，流式筛选结果中，细胞有99.3％居于左下象限，表明得到的脐带间充质干细胞为CD34及CD45双阴性，无混杂造血干细胞。
图1B中，CD105和CD73为间质干细胞为间充质干细胞表明标记性蛋白，图中四个象限中，右上为双阳性，流式筛选结果中，细胞有99.1％居于右上象限，表明得到的脐带间充质干细胞为CD105及CD73双阳性，为间充质干细胞。
2.人脐带间质干细胞与人关节软骨细胞共培养定向诱导分化软骨细胞
培养人软骨细胞，人关节软骨均由深圳市第二人民医院运动医学科提供，自愿者及其家属均签署知情同意书，实验方案经医院医学伦理会批准。具体过程为：
无菌条件下，取自愿者(rt＝12)膝关节非负重区软骨，Ⅱ型胶原酶消化后过滤，离心，弃上清液，收集软骨细胞，接种于新的培养瓶，使用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养。待细胞达到80％～90％时融合时，消化传代成第一代细胞，置37℃、5％CO2培养箱继续培养。
取对数增殖期的第三代hUC—MSCs和第二代hACs，接种于放有DMEM/F12培养液的六孔板直接共培养体系中，按1：1的比例进行共培养，21天后通过实时逆转录PCR技术(RT-qPCR)对I型胶原、Ⅱ型胶原及SOX9(SRY-relatedhighmobilitygroup-boxgene9)等基因的转录情况进行表征，以鉴定定向诱导的程度。
如图3A、图3B、图3C，其中I型胶原为软骨细胞非大话标记基因，从图中可以看出I型胶原的表达量很小，而可以表达软骨细胞外基质的Ⅱ型胶原以及向软骨细胞分化中的中药转录因子SOX9的转录水平显著增加，表明软骨定向分化的趋势。
实施例2、
在其他试验中表明，从人脐带中分离和培养间质干细胞，在实施例1的基础上，对MesenGro培养液的组分含量进行微调，如配比为：MesenGro培养基，胎牛血清的浓度为5％～20％，青霉素/链霉素双抗的使用浓度为80～120U/mL，阿卡米星的使用浓度为5～10mg/L，成纤维细胞生长因子的使用浓度8～13μg/L，原代培养时间适当增长，用时约10～14天，并用上述MesenGro培养液进行传代培养，对培养至第三代的人脐带间质干细胞进行检测，检测结果都可获得间质干细胞。
图2A和图2B所示为，在MesenGro培养基中加入浓度为8％的胎牛血清、浓度为120的青霉素/链霉素双抗、浓度为10mg/L阿卡米星、浓度为13μg/L成纤维细胞生长因子配制成的的MesenGro培养液而培养的人脐带间质干细胞。
在图2A中，CD34和CD45为造血干细胞的表面标记性蛋白，脐带间质干细胞不予表达，图中四个象限中，左下为双阴性，流式筛选结果中，细胞有95.9％居于左下象限，表明得到的脐带间充质干细胞为CD34及CD45双阴性，无混杂造血干细胞。
图2B中，CD105和CD73为间质干细胞为间充质干细胞表明标记性蛋白，图中四个象限中，右上为双阳性，流式筛选结果中，细胞有96.4％居于右上象限，表明得到的脐带间充质干细胞为CD105及CD73双阳性，为间充质干细胞。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。

Claims (7)

1.一种人脐带间质干细胞的分离培养方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)原代培养：取预处理过的人脐带沃顿胶组织，进行原代培养，原代培养采用MesenGro培养液培养，MesenGro培养液包括MesenGro培养基、胎牛血清、青霉素和/或链霉素双抗、阿卡米星、成纤维细胞生长因子，带细胞游出后，用胰蛋白酶消化离心，得到原代人脐带间质干细胞；
(2)传代培养：将使用胰蛋白酶消化得到的原代细胞置于新的MesenGro培养液进行传代培养，待细胞长至80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化离心，得到第二代细胞；并使用同样方法重复进行第二代到第三代传代人脐带间质干细胞的培养。
2.根据权利要求1所述的脐带间质干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤(1)中，所采用的胎牛血清的浓度为5％～20％，青霉素/链霉素双抗的浓度为80～120U/mL，阿卡米星的浓度为5～10mg/L，成纤维细胞生长因子的浓度为8～13μg/L。
3.根据权利要求2所述的一种脐带间质干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤(1)中，培养温度为37℃，环境空气为5％CO2。
4.根据权利要求1所述的一种脐带间质干细胞的分离培养方法，其特征在于：步骤(2)中，培养温度为37℃，环境空气为5％CO2。
5.一种人脐带间质干细胞分化诱导为软骨细胞的培养方法，其特征在于：取权利要求1～4任一所述的第三代传代脐带间质干细胞，与人关节软骨细胞共培养，诱导分化为软骨细胞。
6.根据权利要求5所述的一种脐带间质干细胞分化诱导为软骨细胞的培养方法，其特征在于：所述人关节软骨细胞的获取方法为，取膝关节非负重区软骨，使用II型胶原酶消化后过滤，弃上清液，收集软骨细胞，接种于培养瓶内，使用含10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养。待细胞达到80％～90％融合时，消化传代成第一代细胞，然后再对第一代细胞置37℃、5％CO2的培养箱中继续培养，获得第二代人关节软骨细胞。
7.根据权利要求6所述的一种脐带间质干细胞分化诱导为软骨细胞的培养方法，其特征在于：软骨细胞的培养方法为，将第三代脐带间质干细胞与第二代人关节软骨细胞，按1∶1的比例接种于DMEM/F12培养液中，进行共培养。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105602891A (zh) * 2016-03-22 2016-05-25 深圳市第二人民医院 一种透明软骨细胞及制备方法
CN106581066A (zh) * 2016-11-08 2017-04-26 华南生物医药研究院 组织工程骨的用途
CN109112102A (zh) * 2018-09-03 2019-01-01 丰泽康生物医药（深圳）有限公司 一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法
CN111514374A (zh) * 2020-04-24 2020-08-11 南京鼓楼医院 一种基于共培养系统构建的组织工程软骨促进软骨修复的方法
CN111826343A (zh) * 2020-07-23 2020-10-27 北京中卫医正科技有限公司 一种增强诱导软骨分化的细胞培养液、方法及应用
CN112522187A (zh) * 2020-12-24 2021-03-19 清远市人民医院 一种人软骨细胞培养基及其应用
CN113699100A (zh) * 2021-08-27 2021-11-26 王伟 一种模拟体内微环境的干细胞和关节软骨细胞共培养体系的构建方法
CN113755433A (zh) * 2021-08-09 2021-12-07 合肥滴碧云生物科技有限公司 一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102168065A (zh) * 2011-02-17 2011-08-31 暨南大学 一种体外诱导人脐带间充质干细胞成为肝细胞的方法与应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102168065A (zh) * 2011-02-17 2011-08-31 暨南大学 一种体外诱导人脐带间充质干细胞成为肝细胞的方法与应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
罗二梅 等: "共培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)和兔关节软骨细胞诱导hUC-MSCs分化成软骨细胞", 《基础医学与临床》 *
黄宏宇 等: "人脐血间充质干细胞培养方法的比较", 《中国组织工程研究》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105602891A (zh) * 2016-03-22 2016-05-25 深圳市第二人民医院 一种透明软骨细胞及制备方法
CN106581066A (zh) * 2016-11-08 2017-04-26 华南生物医药研究院 组织工程骨的用途
CN109112102A (zh) * 2018-09-03 2019-01-01 丰泽康生物医药（深圳）有限公司 一种提高外周血多潜能细胞向软骨细胞分化的培养方法
CN111514374A (zh) * 2020-04-24 2020-08-11 南京鼓楼医院 一种基于共培养系统构建的组织工程软骨促进软骨修复的方法
CN111826343A (zh) * 2020-07-23 2020-10-27 北京中卫医正科技有限公司 一种增强诱导软骨分化的细胞培养液、方法及应用
CN112522187A (zh) * 2020-12-24 2021-03-19 清远市人民医院 一种人软骨细胞培养基及其应用
CN113755433A (zh) * 2021-08-09 2021-12-07 合肥滴碧云生物科技有限公司 一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法
CN113699100A (zh) * 2021-08-27 2021-11-26 王伟 一种模拟体内微环境的干细胞和关节软骨细胞共培养体系的构建方法

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