CN105524068B - 氮杂双环衍生物、其制法与医药上的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及氮杂双环衍生物、其制法与医药上的用途。具体地，本发明公开了式(I)化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化合物或前药，及其制备方法，及其在EGFR抑制剂方面的应用，式中各基团的定义详见说明书。

Description

氮杂双环衍生物、其制法与医药上的用途
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种氮杂双环衍生物及其制备方法和作为EGFR酪氨酸激酶抑制剂的应用，以及由其制备的药物组合物和药用组合物。
背景技术
肺癌是全球发病率最高的癌症。在中国，肺癌发病率位居所有癌症中第一位，也是中国发病率和死亡率最高的癌症。
在中国肺癌病人中，30％病人具有EGFR突变，其中L858R和外显子19缺失突变占90％以上，这类病人对EGFR抑制剂更为敏感。现有已上市第一代EGFR抑制剂，例如厄洛替尼、吉非替尼对这类病人治疗效果良好，能够使其中60％以上病人肿瘤缩小，明显延长病人无进展生存期。但绝大多数病人在6-12个月获得耐药，第一代EGFR抑制剂不再起效，而这类病人目前处于无药可用状态。临床发现对第一代EGFR抑制剂产生耐药的病人中有50％检测到EGFR T790M突变。在T790M突变细胞系H1975中，第一代EGFR抑制剂吉非替尼和厄洛替尼均大于3uM，基本没有活性。
目前第二代不可逆pan-EGFR抑制剂阿法替尼已经获批上市，该药对EGFR突变肺癌病人疗效显著好于第一代EGFR抑制剂。但第二代抑制剂同时也具有很强的野生型EGFR抑制活性，对野生型EGFR的抑制活性显著高于耐药T790M突变，病人皮疹等毒副作用严重且对耐药病人疗效较差，仅有小部分第一代EGFR抑制剂耐药的病人对这类药物产生应答。
为了提高对EGFR T790M耐药突变抑制活性的同时降低对野生型EGFR的抑制活性，开发活性更高、选择性更好、毒性更低的第三代EGFR突变体选择性抑制剂具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一类新型氮杂双环衍生物，其对细胞毒性低且对EGFR突变体具有高选择抑制性。
本发明第一方面提供了一种式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或其前药：
式中，
Z1、Z2各自独立地为N或CR0；其中，R0选自下组：氢、卤素、C1-10烷基(优选C1-6烷基，更优选C1-3烷基)、卤代的C1-10烷基(优选卤代的C1-6烷基，更优选卤代的C1-3烷基)；
R1、R2各自独立地为氢、卤素、C1-10烷基(优选C1-6烷基，更优选C1-3烷基)、卤代的C1-10烷基(优选C1-6烷基，更优选C1-3烷基)、C1-10烷氧基(优选C1-6烷氧基，更优选C1-3烷氧基)、C3-8环烷氧基(优选为C3-6环烷氧基)；
R3为氢、卤素、C2-10烯基(优选C2-6烯基)、C1-10烷基(优选C1-6烷基，更优选C1-3烷基)、卤代的C1-10烷基(优选卤代的C1-6烷基，更优选卤代的C1-3烷基)、C1-10烷氧基(优选C1-6烷氧基，更优选C1-3烷氧基)、C3-8环烷氧基(优选为C3-6环烷氧基)、取代或未取代的C3-10环烷基(优选C3-6环烷基)、取代或未取代的C3-10杂环基、取代或未取代的C6-10芳环，取代或未取代的C4-10环烯基；
R4选自下组：
R5为氢、羟基、CN、NO2、卤素、C1-10烷基(优选C1-6烷基，更优选C1-3烷基)、卤代的C1-10烷基(优选卤代的C1-6烷基，更优选卤代的C1-3烷基)、C1-10烷氧基(优选C1-6烷氧基，更优选C1-3烷氧基)、C3-10环烷基(优选C3-6环烷基)、C3-8环烷氧基(优选为C3-6环烷氧基)、-CON(C1-10烷基)2(优选为-CON(C1-6烷基)2，更优选为-CON(C1-3烷基)2)、-NC(O)C1-10烷基(优选为-NC(O)C1-6烷基，更优选为-NC(O)C1-3烷基)、-C(O)OC1-10烷基(优选为-C(O)OC1-6烷基，更优选为-C(O)OC1-3烷基)、-OC(O)C1-10烷基(优选为-OC(O)C1-6烷基，更优选为-OC(O)C1-3烷基)、-COC1-10烷基(优选为-COC1-6烷基，更优选为-COC1-3烷基)、-CO-苯基、-SO2C1-10烷基(优选为-SO2C1-6烷基，更优选为-SO2C1-3烷基)、-SO2-苯基、-S(O)C1-10烷基(优选为-S(O)C1-6烷基，更优选为-S(O)C1-3烷基)、-S(O)-苯基、-N(C1-10烷基)2(优选为-N(C1-6烷基)2，更优选为-N(C1-3烷基)2)；其中，所述的苯基为未取代的或被1-3个选自下组的取代基所取代：卤素、C1-10烷基；
R6、R7各自独立地为氢、C1-10烷基(优选C1-6烷基，更优选C1-3烷基、最优选为甲基)、取代或未取代的C6-10芳基；
其中，所述的“取代”是指环原子上的1至6个氢原子被选自下组的取代基所取代：羟基、CN、NO2、卤素、C1-10烷基、卤代的C1-10烷基、-CON(C1-10烷基)2、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-COC1-10烷基、-CO-苯基、-SO2C1-10烷基、-SO2-苯基、-S(O)C1-10烷基、-S(O)-苯基、-N(C1-10烷基)2；其中，所述的苯基为未取代的或被1-3个选自下组的取代基所取代：卤素、C1-10烷基。
在另一优选例中，所述式(I)化合物为式(I-a)所示的化合物：
式中，R0、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7定义如前。
在另一优选例中，所述式(I)化合物为式(I-b)所示的化合物：
式中，R0、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7定义如前。
在另一优选例中，式(I-a)化合物和/或式(I-b)化合物中，R5为氢、羟基、CN、NO2、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、-CON(CH3)2、-NC(O)CH3、-C(O)OCH3、-OC(O)CH3、-CO-苯基、-COCH3、-SO2-苯基、-SO2CH3、-N(CH3)2。
在另一优选例中，式(I-a)化合物和/或式(I-b)化合物中，R6和R7为氢。
在另一优选例中，式(I-a)化合物和/或式(I-b)化合物中，R1和R2为氢。
在另一优选例中，式(I-a)化合物和/或式(I-b)化合物中，R3为：
(i)取代或未取代的含1、2或3个氮原子的9至10元双环杂芳环；
(ii)取代或未取代的含1到2个氮原子的5至6元单环杂芳环；
(iii)取代或未取代的含1或2个选自氮、氧或硫的杂原子的4至7元饱和单杂环基；
(iv)取代或未取代的6元部分不饱和单环基团；
(v)取代或未取代的C6-10芳环；
(vi)C1-3烷基；或
(vii)C3-10环烷基。
在另一优选例中，所述的“取代”是指环原子上的1至3个氢原子被选自下组的取代基所取代：羟基、NO2、卤素、C1-3烷基、卤代的C1-3烷基、-SO2C1-3烷基、-COC1-3烷基。
在另一优选例中，所述的“取代”是指环原子上的1至3个氢原子被选自下组的取代基所取代：羟基、NO2、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、-COCH3、-SO2CH3。
在另一优选例中，在式(I)化合物中，R0为氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基。
在另一优选例中，在式(I)化合物中，R1、R2各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基。
在另一优选例中，R4选自下组：
在另一优选例中，R3为甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、取代或未取代的C3-10杂环基、取代或未取代的苯基或取代或未取代的C4-8环烯基。
在另一优选例中，所述C3-10杂环基为吡唑基、吗啉基、杂氮C3-7环烷基、吡咯并吡啶基、吡啶并吡咯基、吡咯基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基或吡啶基。
在另一优选例中，所述C4-10环烯基为环戊烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、环己烯基、或环庚烯基。
在另一优选例中，所述取代或未取代的C3-10杂环基选自下组：
其中，Z11为CR15或N；Z21为CR26或N；Z31为CR37或N、Z41为CR44或N；n1为1、2或3；n2为1或2；
R12、R13、R14、R15、R22、R23、R24、R25、R26、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R42、R43、R44、R51、R52、R53、R54、R61各自独立地为氢、羟基、CN、NO2、卤素、卤代的C1-10烷基、C1-10烷基、-CON(C1-10烷基)2、-N(C1-10烷基)2、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-COC1-10烷基、-CO-苯基、-SO2C1-10烷基、-SO2-苯基、-S(O)C1-10烷基、-S(O)-苯基；所述的烷基、苯基为未取代的或被1-3个选自下组的取代基所取代：氟、氯、甲基；
R11、R21、R41各自独立地为氢、卤代的C1-10烷基、C1-10烷基、-COC1-10烷基、-CO-苯基、-SO2C1-10烷基、-SO2-苯基；其中，所述的苯基为未取代的或被1-3个选自下组的取代基所取代：氟、氯、甲基。
在另一优选例中，Z11为N；R12、R13、R14各自独立地为氢、卤素、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基；R11为氢、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基、-COC1-3烷基、-SO2C1-3烷基。
在另一优选例中，Z11为N；R12、R13、R14各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基；R11为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、-COCH3、-SO2CH3。
在另一优选例中，Z21为CR26；R22、R23、R24、R25、R26各自独立地为氢、卤素、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基；R21为氢、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基、-COC1-3烷基、-SO2C1-3烷基。
在另一优选例中，Z21为CR26；R22、R23、R24、R25、R26各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基；R21为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、-COCH3、-SO2CH3。
在另一优选例中，Z31为N；R31、R32、R33、R34、R35、R36各自独立地为氢、卤素、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基。
在另一优选例中，Z31为N；R31、R32、R33、R34、R35、R36各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基。
在另一优选例中，Z41为N或CR44；R42、R43、R44各自独立地为氢、卤素、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基；R41为氢、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基、-COC1-3烷基、-SO2C1-3烷基。
在另一优选例中，Z41为N或CR44；R42、R43、R44各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基；R41为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、-COCH3、-SO2CH3。
在另一优选例中，R51、R52、R53、R54各自独立地为氢、卤素、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基。
在另一优选例中，R51、R52、R53、R54各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基。
在另一优选例中，n1为2；n2为2；R61为氢、卤素、卤代的C1-3烷基、C1-3烷基、-COC1-3烷基、-SO2C1-3烷基。
在另一优选例中，n1为2；n2为2；R61为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、-COCH3、-SO2CH3。
在另一优选例中，所述式(I)化合物为式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、或式(IX)所示的化合物：
式中，R11、R12、R13、R14、R0、R1、R2、R4、Z11定义如前；
式中，R21、R22、R23、R24、R25、R0、R1、R2、R4、Z21定义如前；
式中，R31、R32、R33、R34、R35、R36、R0、R1、R2、R4、Z31定义如前；
式中，R0、R1、R2、R4、R41、R42、R43、Z41定义如前；
式中，R51、R52、R53、R54、R0、R1、R2、R4定义如前；
式中，R0、R1、R2、R4、R61、n1、n2定义如前；
式中，R0、R1、R2、R4、R41、R42、R43、Z41定义如前；
式中，R51、R52、R53、R54、R0、R1、R2、R4如前述定义。
在另一优选例中，所述式(I)化合物选自下组：
本发明第二方面提供了一种药物组合物，所述组合物包括本发明第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或其前药；以及药学可接受的载体。
本发明第三方面提供了本发明第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或其前药在(i)制备调控EGFR酪氨酸激酶活性的药物或者(ii)制备预防和/或治疗EGFR相关疾病的药物中的应用。
在另一优选例中，所述调控为上调或下调。
在另一优选例中，所述的EGFR相关疾病选自：癌症、糖尿病、免疫系统疾病、神经退行性疾病、心血管疾病或使用EGFR调节剂治疗期间具有获得性耐药性的疾病。
在另一优选例中，所述癌症为非小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、肾癌、胰腺癌、子宫颈癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、卵巢癌、胃癌、脑恶性肿瘤包括成胶质细胞瘤等，或它们的任何组合。
在另一优选例中，所述非小细胞肺癌是由EGFR突变引起的，包括敏感型突变(如L858R突变或外显子19缺失)和耐药性突变(如EGFR T790M突变)。
在本发明中，EGFR调节剂是指靶向EGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼，厄洛替尼，埃克替尼，拉帕替尼、阿法替尼等。
在另一优选例中，所述获得性耐药性的疾病是由EGFR外显子20编码的T790突变所引起的疾病、或者包含EGFR外显子20编码的T790突变所引起的疾病。
在另一优选例中，所述的EGFR外显子20编码的T790为T790M。
本发明第四方面提供了一种药用组合物，所述药用组合物包括：本发明第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其溶剂化物、或其前药；以及其它药物，所述其它药物为选自下组药物中的一种或多种：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼、XL647、NVP-AEE-788、ARRY-334543、EKB-569、BIBW2992、HKI272、BMS-690514、CI-1033、凡德他尼、PF00299804、WZ4002、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、帕尼突单抗、马妥珠单抗、尼妥珠单抗、扎鲁木单抗、帕妥珠单抗、MDX-214、CDX-110、IMC-11F8、Zemab、Her2疫苗PX1041、HSP90抑制剂、CNF2024、坦螺旋霉素、阿螺旋霉素、IPI-504、SNX-5422、NVP-AUY922。
除本发明的化合物或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或前药以外，上述药用组合物中的其它药物均为本领域技术人员熟知的抗肿瘤药物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现了一类EGFR突变选择性抑制剂，其在较低浓度(如纳摩尔浓度)下即可抑制EGFR耐药性突变酶(如T790M/L858R双突变酶)及其细胞株(如H1975)的增殖，而对野生型EGFR酶及其细胞株(如A431)的抑制则相对较弱。因此，此类结构适用于目前EGFR-TKI治疗中产生继发性耐药的病例；同时其突变选择性大大减小了因抑制野生型EGFR而产生的毒副作用，此外，该类化合物在正常细胞系(如NIH-3T3细胞)中具有较低的细胞毒性，从而大大降低了非特异性毒副作用，是第二代EGFR-TKI的理想替代物。在此基础上，完成了本发明。
术语定义
如本文所用，“C3-10杂环基”是指具有3至10个碳原子的杂环基，构成环的原子除碳外，还至少含有一个杂原子，选自N、S、O。包括：含1到2个氮原子的5至6元单环杂芳环、含1、2或3个氮原子的9至10元双环杂芳环、含1或2个选自氮、氧或硫的杂原子的4至7元饱和单杂环基。具体例子包括：吡唑基、吗啉基、杂氮C3-7环烷基、吡咯并吡啶基、吡啶并吡咯基、吡咯基、吡唑并吡啶基、吲唑基、吲哚基、喹啉基、吡啶基、咪唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、异吲哚基、异喹啉基、苯并咪唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基、哌啶环、四氢吡咯环、氮杂环丁烷、氮杂环庚烷等。
如本文所用，“C1-10烷基”是指具有1至10个碳原子的直链或支链的饱和脂族烃基。例如甲基、乙基、丙基、异丙基等。
如本文所用，“卤代的C1-10烷基”是指C1-10烷基被1、2或3个卤素原子(优选氟原子)取代，例如一氯乙基、二氯甲基、1，2－二氯乙基、一溴乙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基等。
如本文所用，“C3-10环烷基”指具有3-10个碳原子的环烷基。环烷基实例有环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
如本文所用，“C3-8环烷氧基”指C3-8环烷基-O-。例如环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
如本文所用，“C1-10烷氧基”指C1-10烷基-O-。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
如本文所用，“C2-10烯基”指具有2-10个(较佳地2-6个)碳原子的直链或支链的具有碳碳双键(C＝C)的不饱和脂族烃基。例如乙烯基、丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、戊烯基、己烯基等。
如本文所用，“杂氮C3-7环烷基”指具有3-7个碳原子的环烷基，且构成环的原子除碳外，还至少含有一个N原子。例如哌啶环、四氢吡咯环、氮杂环丁烷、氮杂环庚烷等。
如本文所用，“C6-10芳基”与“C6-10芳环”可互换使用，是指具有6-10个碳原子的芳香烃基，例如苯基、萘基等。
如本文所用，“卤素”指氟、氯、溴或碘。
如本文所用，“C4-10环烯基”是指含4-10个环原子的部分不饱和的全碳单环，优选C4-8环烯基。例如包括(但不限于)：环戊烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、环己烯基、环庚烯基等。
如本文所用，“杂芳环”与“杂芳基”可互换使用，是指具有5到10个环原子，优选5、6、9或10个环原子；环阵列中共享6、10或14个π电子；且除碳原子外还具有1到5个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫。
如本文所用，“部分不饱和”是指含有一个或多个不饱和键，但不具有完全共轭的π电子系统。
如本文所用，“含1到2个氮原子的5至6元单环杂芳环”是指含1到2个氮原子的且具有5至6个环原子的单环杂芳基，例如包括(但不限于)：咪唑基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基等。
如本文所用，“含1、2或3个氮原子的9至10元双环杂芳环”是指含1、2或3个氮原子的且具有9至10个环原子的双环杂芳基，例如包括(但不限于)：吲哚基、异吲哚基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并咪唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、酞嗪基。
如本文所用，在本发明中，所述5至6元单环杂芳环或9至10元双环杂芳环优选自下组：
如本文所用，“含1或2个选自氮、氧或硫的杂原子的4至7元饱和单杂环基”是指含4至7个环原子且1或2个碳原子被氮、氧或硫原子所置换的饱和单环基团。单杂环基的实例包括(但不限于)：吗啉基、哌啶基、四氢吡咯基、氮杂环丁烷、氮杂环庚烷。
如本文所用，“6元部分不饱和单环基团”是指含6个环原子的部分不饱和的全碳单环基团。例如包括(但不限于)：1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、环己烯基等。
药物组合物
术语“本发明的活性物质”或“本发明的活性化合物”是指本发明式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或其前药，其具有显著的EGFR抑制活性，其不仅对EGFR T790M耐药突变具有较高的抑制活性，而且对野生型EGFR的抑制活性显著降低，具有较高的选择抑制性，同时还具有低细胞毒性。此外与其它已知的EGFR突变体抑制剂相比，本发明的化合物还显示出有利的物理性质，毒性特征和/或代谢特征。
如本文所用，所述“药学上可接受的盐”包括药学可接受的酸加成盐和药学可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其他副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和水杨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
“药学可接受的碱加成盐”，包括但不限于无机碱的盐如钠盐，钾盐，钙盐和镁盐等。包括但不限于有机碱的盐，比如铵盐，三乙胺盐，赖氨酸盐，精氨酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
如本文所用，式(I)化合物可以存在于一种或多种晶型，本发明的活性化合物包括各种晶型及其混合物。
本发明中提及的“溶剂化物”是指本发明的化合物与溶剂形成的配合物。它们或者在溶剂中反应或者从溶剂中沉淀析出或者结晶出来。例如，一个与水形成的配合物称为“水合物”。式(I)化合物的溶剂化物属于本发明范围之内。
本发明式(I)所示的化合物可以含有一个或多个手性中心，并以不同的光学活性形式存在。当化合物含有一个手性中心时，化合物包含对映异构体。本发明包括这两种异构体和异构体的混合物，如外消旋混合物。对映异构体可以通过本专业已知的方法拆分，例如结晶以及手性色谱等方法。当式(I)化合物含有多于一个手性中心时，可以存在非对映异构体。本发明包括拆分过的光学纯的特定异构体以及非对映异构体的混合物。非对映异构体可由本专业已知方法拆分，比如结晶以及制备色谱。
本发明包括上述化合物的前药。前药包括已知的氨基保护基和羧基保护基，在生理条件下被水解或经由酶反应释放得到母体化合物。具体的前药制备方法可参照(Saulnier，M.G.；Frennesson，D.B.；Deshpande，M.S.；Hansel，S.B and Vysa，D.M.Bioorg.Med.Chem Lett.1994，4，1985-1990；和Greenwald，R.B.；Choe，Y.H.；Conover，C.D.；Shum，K.；Wu，D.；Royzen，M.J.Med.Chem.2000，43，475.)。
通常，本发明化合物或其药学可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或前药可以与一种或多种药用载体形成适合的剂型施用。这些剂型适用于口服、直肠给药、局部给药、口内给药以及其他非胃肠道施用(例如，皮下、肌肉、静脉等)。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是固体粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与活性化合物或其他辅料兼容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖等。用于液体制剂的载体包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。
本发明的组合物以符合医学实践规范的方式配制，定量和给药。给予化合物的“治疗有效量”由要治疗的具体病症、治疗的个体、病症的起因、药物的靶点以及给药方式等因素决定。
“治疗有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
本发明的所述药物组合物或所述药用组合物中含有的本发明化合物或其药学上可接受的盐、或其溶剂化物、或其立体异构体、或其前药的治疗有效量优选为0.1mg-5g/kg(体重)。
本发明的式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、或溶剂化物、或其立体异构体、或前药在某些疾病中可以与其它药物联合应用，以达到预期的治疗效果。一个联合应用的例子是用来治疗晚期NSCLC。例如，将治疗有效量的本发明式(I)所示化合物与mTOR抑制剂联用(例如雷帕霉素)；或与Met抑制剂(包括Met抗体MetMAb和Met小分子抑制剂PF02341066)联用；或与IGF1R抑制剂联用(例如OSI-906)；或与热休克蛋白抑制剂联用等。
制备方法
下面更具体地描述本发明式(I)结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。
例如，本发明的式(I-a)和式(I-b)化合物的制备方法可包括(但不限于)如下流程。
方案1
方案1中，L1和-O-L2为离去基团，包括(但不限于)三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等。其它各取代基和基团如说明书中所定义。
式(I-a-1)化合物可依次通过氧化反应、偶联反应、还原反应、取代反应、偶联反应生成式(I-a)化合物。
步骤2中，式(I-a-2)化合物可与各类带有R3基团的硼酸或硼酯类化合物进行偶联反应(如Suzuki偶联等)生成式(I-a-3)化合物；根据不同的底物，可选择合适的条件和方法很方便地进行合成。例如在一定温度下，使用合适的催化剂(或含合适的配体)或碱及适当的溶剂进行。该方法是本领域技术人员所使用的常规方法。
步骤4中，式(I-a-4)化合物可通过与合适的试剂形成如磺酸酯基、乙酰氧基等离去基团；
步骤5中，式(I-a-5)化合物可通过取代反应或偶联反应与式(I-a-6)化合物反应生成式(I-a)化合物，例如在一定温度下，使用合适的催化剂(或含合适的配体)或碱及适当的溶剂进行。如使用酸催化，催化剂可以是但不限于TFA或对甲苯磺酸。使用Buchwald-Hartwig胺化法，所用的钯催化剂可以是但不限于Pd2(dba)3，所用的配体可以是但不限于XantPhos(4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽)，所用的碱可以是但不限于碳酸铯。
方案1中的上述各类反应均为本领域技术人员熟知的反应。
式(I-a-1)和式(I-a-6)化合物可采用本领域熟知的方法进行制备。式(I-a-1)化合物可通过如下示例性方法进行制备：
上述各式中，各取代基和基团如说明书中所定义，以式(I-a-11)化合物(市售可得)为起始原料，依次经过胺取代反应、苯甲酰基异硫氰酸酯化反应、关环反应、甲基化反应、氯代反应和取代反应生成式(I-a-1)化合物。上述各反应试剂和反应条件均可参照已知方法。
式(I-a-6)化合物可通过如下示例性方法进行制备：
以化合物4-氟-2-R5-5-硝基苯胺为起始原料，依次经过氨基上保护基反应、胺取代反应、硝基还原反应、酰化反应和氨基脱保护反应来制备式(I-a-6)化合物。上述各步反应均为本领域常规反应。化合物4-氟-2-R5-5-硝基苯胺可市购得到，或通过本领域技术人员已知的方法制备(式(I-a-6)化合物的合成方法可参见WO2013014448A1)。
式(I-a-61)化合物中的PG为氨基保护基。氨基保护基包括但不限于：叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。上保护和脱保护的方法可参考本领域熟知的常规方法。
方案2
方案2中，各取代基和基团如说明书中所定义。
式(I-b-1)化合物可依次与各类带有R3基团的硼酸或硼酯类化合物和式(I-a-6)化合物进行取代反应或偶联反应生成式(I-b)化合物，反应所用试剂和条件均为本领域所已知的。
式(I-b-1)化合物可采用本领域熟知的方法进行制备。如通过如下示例性方法进行制备：
其中各取代基和基团如说明书中所定义。式(I-b-11)化合物与式(I-b-12)化合物关环反应后与合适的试剂形成如溴、碘、磺酸酯基、乙酰氧基等离去基团，生成式(I-b-1)化合物。该合成方法为已知的方法。
本发明公开的式(I-a)化合物或式(I-b)化合物以及化合物的制备方法、药物组成和治疗方案，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品、方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
与现有技术相比，本发明的主要优点在于：
(1)本发明化合物对EGFR T790M突变型(特别是EGFR T790M/L858R双突变型)酶或其细胞具有高抑制活性，且对EGFR野生型(EGFR WT)酶或其细胞具有低抑制活性，因此具有高选择抑制性。
(2)本发明化合物对EGFR双突变型酶和细胞表现高选择抑制性的同时，还具有低非特异性细胞毒性。
(3)与其他已知的EGFR突变抑制剂相比，本发明化合物还显示出有利的物理性质(例如，较高的水溶性)，有利的毒性特征(例如较低的hERG阻断倾向)，有利的代谢特征(例如，较好的药代动力学特征，如生物利用度)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
除非另行定义，本文所用的术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或同等的方法及材料皆可应用于本发明中。
试剂与仪器
1HNMR：Bruker AVANCE-400核磁仪，内标为四甲基硅烷(TMS)。
LC-MS：Agilent1200HPLC System/6140MS液质联用质谱仪(生产商：安捷伦)，柱子WatersX-Bridge，150×4.6mm，3.5μm。
制备高效液相色谱(pre-HPLC)：Waters PHW007，柱子XBridge C18，4.6*150mm，3.5um。
采用ISCO Combiflash-Rf75或Rf200型自动过柱仪，Agela4g、12g、20g、40g、80g、120g一次性硅胶柱。
已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可以购自ABCRGmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)和达瑞化学品等公司。
若无特殊说明，实施例中的反应均在氮气氛或氩气氛下进行。
若无特殊说明，实施例中的溶液为水溶液。
DMF：二甲基甲酰胺，DMSO：二甲基亚砜，THF：四氢呋喃，DIEA：N,N-二异丙基乙胺，EA：乙酸乙酯，PE：石油醚，BINAP：(2R,3S)-2,2'-双二苯膦基-1,1'-联萘。NBS：N-溴代丁二酰亚胺、NCS：N-氯代丁二酰亚胺、Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯、Pd(dppf)Cl2：[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯。
如本文所用，室温是指约20-30℃。
化合物1-a的制备
步骤a:在4L烧瓶中，25.0g原料1-a-1(0.19mol)溶解在1L四氢呋喃中，氮气保护下室温搅拌20分钟，将1M的叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(500.0ml，0.50mol)加入到此溶液中，搅拌1小时。然后把0.15M的氯胺乙醚溶液(2.1L，0.31mol)在10℃下20分钟内加入到该反应液中，同时通入氮气，2小时后，把饱和硫代硫酸钠水溶液(500ml)逐滴加入该反应液，继续搅拌一小时。分离有机相，分别用水、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂后，将滤液在减压下浓缩，得到油状化合物1-a-2。MS m/z(ESI):141.2[M+H]+。
步骤b:把粗品化合物1-a-2溶解在500ml的四氢呋喃的溶液中，然后室温下滴加苯甲酰基异硫氰酸酯的四氢呋喃溶液，然后反应过夜。反应完成后，减压浓缩。往粗品中加入200ml乙醚并搅拌30分钟，过滤，用正己烷/乙醚(9:1)洗涤得到灰白色固体化合物1-a-3(38.2g,65％)。MS m/z(ESI):304.0[M+H]+。
步骤c:在500ml烧瓶中加入化合物1-a-3(38.20g,126mmol)和氢氧化钠溶液(2M，252ml，504mmol)，加热85℃反应90分钟，然后冷却到室温，加入100ml乙醇，冰浴下滴加乙酸(29ml，510mmol)，继续搅拌30分钟。把固体过滤并用冰的乙醇洗涤浓缩得到白色固体。在加入200ml乙醚搅拌30分钟，过滤并用乙醚洗涤得到白色固体化合物1-a-4(17.5g，83％)。MSm/z(ESI):168.1[M+H]+。
步骤d:在1L烧瓶中加入化合物1-a-4(17.5g，105mmol)和500ml四氢呋喃，然后加入8.4ml碘甲烷(135mmol)，45℃下搅拌1个小时。浓缩反应液得到白色的固体，往白色的固体中加入500ml水和500ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌过滤，滤饼用水洗涤得到白色固体化合物1-a-5(17.7g，93％)。MS m/z(ESI):182.1[M+H]+。
步骤e:在500ml烧瓶中加入化合物1-a-5(17.6g，97.1mmol)和110ml三氯氧磷，100℃下反应4小时。反应完成后，把三氯氧磷减压蒸掉，加入冰水搅拌5分钟，冰的氨水(25ml)慢慢滴加入该体系中，搅拌20分钟过滤，滤饼用大量水洗涤得到黄色的固体。把得到粗品黄色固体溶解在1L二氯甲烷中，分别用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥浓缩得到黄色固体化合物1-a-6(17.4g，90％)。MS m/z(ESI):199.7[M+H]+。
步骤f:在1L烧瓶中加入化合物1-a-6(10g，50.1mmol)、500ml四氢呋喃和250ml甲醇，冰浴下慢慢加入N-溴代丁二酰亚胺(8.91g，50.1mmol)，室温下反应完成后浓缩得到黄色固体。用500ml二氯甲烷溶解该固体，分别用水、饱和食盐水洗涤，干燥浓缩得到约14g粗品黄色固体化合物1-a-7。
步骤g:在55℃条件下，把约14g粗品化合物1-a-7溶解在150ml异丙醇中，3.98g硼氰化钠(50mmol)慢慢分批加入到该体系中，然后加热到60℃反应3个小时，检测反应完成后冷却到室温，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，滤液浓缩得到粘稠的液体。把该粗品溶解在300ml二氯甲烷中，12.5g的2,3二氯-5,6-二氰对苯醌(55.1mmol)慢慢分批加入该反应液中。室温搅拌2个小时，反应完成后过滤，滤液浓缩得到粗品，然后柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝40:1-20:1)得到黄色固体化合物1-a(9.8g，774％)。MS m/z(ESI):244.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.956(s,1H),7.095(s,2H),2.578(s,3H)。
化合物2-a的制备
步骤a:将反应底物2-a-1(10.6g,58mmol)放置于500mL的反应瓶中，加入四氢呋喃/水(100mL/60mL)混合溶液使底物溶解。在室温条件下，向搅拌的反应瓶中依次加入氯化铵(15.5g,292mmol)和还原铁粉(26g,467mmol)，随后将反应体系加热至65℃并持续搅拌3小时。通过TLC检测反应进度，待底物完全反应后，过滤除去多余的铁粉，滤饼用乙酸乙酯淋洗三次。滤液用乙酸乙酯/水体系萃取三次，分离出有机层，经水洗，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到化合物2-a-2(8.0g)，直接用于下一步反应。产率：93％；纯度：90％；MS m/z(ESI):142.0[M+H]+。
步骤b:将化合物2-a-2(8.0g,43mmol)放置于500mL的反应瓶中，在搅拌下加入浓硫酸(100mL)使底物溶解。在零下20℃条件下，向搅拌的反应瓶中缓慢滴加浓硝酸(6.15mL,48mmol)，并保持该温度搅拌5分钟。通过TLC检测反应进度，待底物完全反应后，倒入冰水中。保持零下20℃冰浴，向反应体系中缓慢加入氢氧化钠/水溶液(150mL/300mL)，调节pH值至8-9。中和完成后的反应液用乙酸乙酯/水体系萃取三次，分离出有机层，经水洗，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到化合物4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺2-a-3(8.7g)，直接用于下一步反应。产率：80％；纯度：100％；MS m/z(ESI)：187.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.04(d,J＝13.4Hz,1H),5.25(brs,2H),3.90(s,3H)。
步骤c:将化合物2-a-3(11.16g,60mmol)溶解在二氯甲烷(150mL)中，加入三乙胺(12.24g,120mmol),二碳酸二叔丁酯(15.60g,72mmol),4-二甲氨基吡啶(0.74g,6mmol)。混合物在室温搅拌18小时后过滤,滤液旋干。残留物用柱层析(PE:EA＝4:1)纯化后得桔黄色固体2-a-4(12.56g,产率:73％)。MS m/z(ESI):285[M+H]+。纯度＝97％(UV254).
步骤d:将化合物2-a-4(11.46g,40mmol)溶解在DMA(60mL)中,加入N,N,N'-三甲基乙二胺(4.90g,48mmol)，N,N-二异丙基乙胺(7.74g,60mmol)。混合物在氮气保护下，加热到90℃并搅拌6小时。冷却至室温后，倒入冰水中，用乙酸乙酯(400mL)萃取。分出有机相，用食盐水(300mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干，得桔黄色固体2-a-5(12.51g,产率:85％)。MS m/z(ESI):369[M+H]+，纯度＝98％(UV214)。
步骤e:将化合物2-a-5(12g,32.6mmol)溶解在甲醇(200mL)中,加入Pd/C(1.0g)。混合物在室温下用氢气球加氢氢化1小时后，过滤。滤液旋干，得黑色固体2-a-6(10.70g,产率:97％)。MS m/z(ESI):339[M+H]+，纯度＝97％(UV254)。
步骤f:将化合物2-a-6(10.1g,30mmol)和三乙胺(6.12g,60mmol)溶解在二氯甲烷(200mL)中，冷却至0℃。加入丙烯酰氯(3.24g,36mmol)。混合物在氮气保护下，室温搅拌3小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)，食盐水(200mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干，得棕色固体2-a-7(9.64g,产率:82％)。MS m/z(ESI):393[M+H]+，纯度＝88％(UV254)。
步骤g:将化合物2-a-7(9.41g,24mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，冷却到0℃,加入三氟乙酸(20mL)。混合物在氮气保护下，室温搅拌18小时。反应混合物旋干。残留物溶解在二氯甲烷(300mL)中，用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)，食盐水(200mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干，残留物用柱层析(DCM:MeOH＝10:1)纯化后得桔黄色油状物2-a(3.26g,产率:46.5％)。MS m/z(ESI):293[M+H]+，纯度＝99％(UV214).1H NMR(400MHz,)δ:10.07(s,1H),7.98(s,1H),7.26(s,1H),6.40(dd,J＝16.8,1.6Hz,1H),6.29-6.32(m,1H),5.66(dd,J＝10.0,1.6Hz,1H),3.81(s,3H),3.76(s,2H),2.85(t,J＝5.6Hz,2H),2.65(s,3H),2.25(s,8H)。
化合物3-a的制备
步骤a:将化合物2-a-4(14.0g,50mmol)溶解在DMA(70mL)中,加入4-二甲氨基哌啶(7.56g,60mmol)，N,N-二异丙基乙胺(12.9g,100mmol)。混合物在氮气保护下，加热到90℃并搅拌6小时。冷却至室温后，倒入冰水中，用乙酸乙酯(400mL)萃取。分出有机相，用食盐水(300mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干，得桔黄色固体3-a-2(19.1g,产率:81％)。MS m/z(ESI):395[M+H]+，纯度＝99％(UV214)。
步骤b:将化合物3-a-2(15.76g,40mmol)溶解在甲醇(150mL)中,加入Pd/C(2.0g)。混合物在室温下用氢气球加氢氢化1小时后，过滤。滤液旋干，得黑色固体3-a-3(13.41g,产率:92％)。MS m/z(ESI):365[M+H]+，纯度＝93％(UV214)。
步骤c:将化合物3-a-3(11g,30mmol)和三乙胺(6.2g,60mmol)溶解在二氯甲烷(150mL)中，冷却至0℃。加入丙烯酰氯(3.24g,36mmol)。混合物在氮气保护下，室温搅拌3小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)，食盐水(200mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干，得棕色固体3-a-4(9.61g,产率:77％)。MS m/z(ESI):393[M+H]+，纯度＝91％(UV254)。
步骤d:将化合物3-a-4(6.27g,15mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，冷却到0℃,加入三氟乙酸(30mL)。混合物在氮气保护下，室温搅拌24小时。反应混合物旋干。残留物溶解在二氯甲烷(300mL)中，用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)，食盐水(200mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤。滤液旋干，残留物用柱层析(DCM:MeOH＝20:1)纯化后得桔黄色固3-a(3.4g,产率:71％)。MS m/z(ESI):319[M+H]+，纯度＝96％(UV214).1H NMR(400MHz,)δ:8.50(s,1H),7.93(s,1H),6.61(s,1H),6.32-6.35(m,2H),5.73(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),3.80(s,5H),3.01-3.05(m,3H),2.71-2.77(m,8H),2.14-2.17(m,2H),1.90-1.99(m,2H)。
实施例1：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-1)的制备
步骤1：化合物1-a(6.0g，24.6mmol)，1-甲基-4(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(10.2g，49.0mmol)，四三苯基磷钯(2.84g，2.46mmol)，碳酸钾(10.2g，73.8mmol)，二氧六环60ml，水20ml的混合物，氩气保护，100℃搅拌4小时。反应结束，冷却至室温，加入二氯甲烷和水，分离有机相，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～0:100]纯化得到黄色固体化合物1-b(5.7g)，直接用于下一步反应。产率：94.5％；纯度：98.76％(UV254)。MS m/z(ESI):246.0[M+H]+。
步骤2：化合物1-b(5.64g，22.7mmol)溶解于500ml二氯甲烷中，冷却至0℃，缓慢的加入m-CPBA(间氯过氧化苯甲酸)(15.68g，90.9mmol)，加毕，室温搅拌3小时。反应结束，加入饱和硫代硫酸钠溶液200ml搅拌0.5小时，分离有机相，饱和碳酸氢钠洗，分离有机相，饱和食盐水洗，分离有机相，减压浓缩得到固体化合物1-c(3.0g)，直接用于下一步反应。产率：47.0％；纯度：63.7％(UV254)。MS m/z(ESI):278.1[M+H]+。
步骤3：向氢氧化钠(2.8g，70mmol)的35ml水溶液中加入化合物1-c(3g，6.9mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至室温，二氯甲烷萃取，分离收集水相，水相用乙酸调节pH为5，二氯甲烷萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到红棕色固体化合物1-d(1.2g)，直接用于下一步反应。产率：80.8％；纯度：71％(UV254)。MS m/z(ESI):216.1[M+H]+。
步骤4：化合物1-d(1.2g，3.96mmol)溶于10ml二甲基甲酰胺，然后加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(2.1g，5.88mmol)，N,N-二异丙基乙胺(1.5g，11.61mmol)，室温搅拌3小时。反应结束，加入50ml二氯甲烷，水洗有机相两次，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～80:20]纯化得到半固体化合物1-e(160mg)，直接用于下一步反应。产率：11.6％；纯度：68％(UV254)。MS m/z(ESI):348.0[M+H]+。
步骤5：向化合物1-e(30mg，0.086mmol)，化合物2-a(25mg，0.086mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10mg，0.0172mmol)，碳酸铯(56mg，0.172mmol)的4ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(8mg，0.0086mmol)，氩气保护，160℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品107mg，经制备液相分离纯化得化合物J-1(10.16mg)，产率：23.8％；纯度：97.83％(UV254)。MS m/z(ESI):490.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.22(s,1H),8.83(s,1H),8.76(s,1H),8.38(s,1H),8.01(s,1H),7.88(s,1H),7.06-7.05(d,J＝4.7Hz,2H),6.89-6.88(d,J＝4.7Hz,1H),6.45-6.38(dd,J1＝10.2Hz,J2＝16.9Hz,1H),6.21-6.17(dd,J1＝1.8Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.76-5.73(dd,J1＝1.8Hz,J2＝10.1Hz,1H),3.82(s,3H),3.75(s,3H),2.90-2.88(t,J＝4.7Hz,2H),2.73(s,3H),2.33(s,2H),2.22(s,6H)。
实施例2：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[1,2-f]的[11,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-2)的制备
步骤：向4ml二氧六环溶液中加入化合物1-e(50mg，0.098mmol)，化合物3-a(32mg，0.1mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(9mg，0.0098mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(9mg，0.016mmol)，碳酸铯(64mg，0.196mmol)，氩气保护，120℃微波搅拌10分钟。反应结束，冷却至室温，硅藻土过滤，二氯甲烷洗滤饼，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-2(5.67mg)，产率：11.2％；纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):516.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),8.84(s,1H),8.48(s,1H),8.34(s,1H),8.04(s,1H),7.88(s,1H),7.07(d,J＝4.7Hz,1H),6.90(s,1H),6.89(s,1H),6.72(dd,J＝16.8,10.5Hz,1H),6.19(d,J＝15.2Hz,1H),5.74(d,J＝11.7Hz,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.07(d,J＝10.4Hz,2H),2.76–2.65(m,2H),2.27(s,7H),1.86(d,J＝12.0Hz,2H),1.73(m,2H)。
实施例3：N-(2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-4-甲氧基-5-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-3)的制备
步骤1：化合物2-a-3(25g，134.3mmol)溶于200ml二氯甲烷溶液中，冷却至5℃，加入4-二甲氨基吡啶(3.3g，27mmol)，缓慢加入二碳酸二叔丁酯(33g，151.2mmol)，室温搅拌过夜。反应结束，硅藻土过滤，二氯甲烷洗滤饼，滤液减压浓缩得到棕色结晶固体38g，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝90:10～80:20]纯化得到淡黄色结晶固体化合物3-b(13.6g)，直接用于下一步反应。产率：35.4％；纯度：92.41％(UV254)。MS m/z(ESI):231.0[M-55]+。
步骤2：化合物2-(二甲基氨基)乙醇(2.26g，25.34mmol)溶于55ml四氢呋喃，冷却至0℃，缓慢加入钠氢(1.093g，27.325mmol)，氩气保护，室温搅拌3小时，缓慢加入化合物3-b(5.4g，17.49mmol)的31ml四氢呋喃溶液，室温搅拌过夜。反应结束，反应液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[DCM:MeOH＝100:0～90:10]纯化得到黄色固体化合物3-c(6.66g)，直接用于下一步反应。产率：99.34％；纯度：91.01％(UV254)。MS m/z(ESI):356.1[M+H]+。
步骤3：化合物3-c(6.66g，17.06mmol)溶于150ml甲醇，加入钯炭(600mg),氢气的条件下室温搅拌5小时。反应结束，过滤，甲醇洗，滤液减压浓缩得到暗棕色油状化合物3-d(6.06g)，直接用于下一步反应。产率：109.19％；纯度：66.01％(UV254)。MS m/z(ESI):326.1[M+H]+。
步骤4：化合物3-d(6.06g，12.29mmol)溶于50ml二氯甲烷，冷却至0℃，加入N,N-二异丙基乙胺(3.18g，24.61mmol)搅拌5分钟，逐滴加入丙烯酰氯(1.45g，16.02mmol)的10ml二氯甲烷溶液，缓慢升至室温搅拌2小时。反应结束，加入25ml饱和碳酸氢钠溶液，搅拌10分钟，水洗，饱和食盐水洗，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[DCM:(10％NH3.H2O)MeOH＝100:0～80:20]纯化得到浅棕色固体化合物3-e(2.29g)，直接用于下一步反应。产率：49.1％；纯度：97.24％(UV254)。MS m/z(ESI):380.2[M+H]+。
步骤5：化合物3-e(2.29g，5.87mmol)溶于50ml二氯甲烷，冷却至0℃，缓慢加入三氟乙酸(13.39g，117.44mmol)，室温搅拌过夜。反应结束，反应液减压浓缩，加入二氯甲烷溶解，盐酸(1N)萃取，水相用碳酸钠溶液调pH为9，二氯甲烷/甲醇萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品，经Combi-flash柱层析[DCM:(10％NH3.H2O)MeOH＝100:0～80:20]纯化得到暗棕色油状化合物3-f(1.1g)，直接用于下一步反应。产率：67.07％；纯度：99.38％(UV254)。MS m/z(ESI):280.1[M+H]+。
步骤6：向4ml二氧六环溶液中加入化合物1-e(50mg，0.098mmol)，化合物3-f(28mg，0.1mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(9mg，0.0098mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(9mg，0.016mmol)，碳酸铯(64mg，0.196mmol)，氩气保护，120℃微波搅拌10分钟。反应结束，冷却至室温，硅藻土过滤，二氯甲烷洗滤饼，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-3(7.71mg)，产率：16.5％；纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):477.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.81(s,1H),8.82(s,1H),8.50(s,1H),8.30(s,1H),8.00(s,1H),7.89(s,1H),7.04(d,J＝4.7Hz,1H),6.97(s,1H),6.87(d,J＝4.7Hz,1H),6.56–6.41(m,1H),6.18(d,J＝15.1Hz,1H),5.73(d,J＝12.2Hz,1H),4.20(t,J＝5.7Hz,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),2.60(t,J＝5.6Hz,2H),2.27(s,6H)。
实施例4：N-(4-甲氧基-5-(7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)-2-(4-甲基-1-基)苯基)丙烯酰胺(J-4)的制备
步骤1：化合物3-b(2.1g，7.336mmol)，1-甲基哌嗪(0.88g，8.80mmol)，碳酸钾(2.0g，14.672mmol)，二甲基甲酰胺20ml的混合物，100℃搅拌1小时。反应结束，冷却至室温，加水100ml，乙酸乙酯萃取(20ml×2)，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品4-b(2.5g)，直接用于下一步反应。产率：93％；纯度：66％(UV254)。MS m/z(ESI):367.2[M+H]+。
步骤2：化合物4-b(2.5g，6.823mmol)溶于25ml甲醇，加入钯炭(0.25g),氢气的条件下室温搅拌16小时。反应结束，过滤，滤液减压浓缩得到粗品化合物4-c(2.4g)，直接用于下一步反应。产率：100％；纯度：49％(UV254)。MS m/z(ESI):337.2[M+H]+。
步骤3：化合物4-c(2.4g，7.13mmol)溶于25ml二氯甲烷，5℃加入N,N-二异丙基乙胺(1.38g，10.7mmol)，5℃逐滴加入丙烯酰氯(0.968g，10.7mmol)，室温搅拌6小时。反应结束，加入水，乙酸乙酯萃取，分离合并有机相，减压浓缩得粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到化合物4-d(0.9g)，直接用于下一步反应。产率：32％；纯度：77％(UV254)。MS m/z(ESI):391.3[M+H]+。
步骤4：化合物4-d(0.7g，1.793mmol)溶于9ml二氯甲烷，5℃加入三氟乙酸3ml，室温搅拌6小时。反应结束，反应液减压浓缩，碳酸钠溶液调pH为9-10，乙酸乙酯萃取，分离合并有机相，减压浓缩得粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到化合物4-e(0.36g)，直接用于下一步反应。产率：69％；纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):291[M+H]+。
步骤5：向4ml二氧六环溶液中加入化合物1-e(53mg，0.1mmol)，化合物4-e(44mg，0.1mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(10mg，0.011mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(9mg，0.016mmol)，碳酸铯(68mg，0.21mmol)，氩气保护，120℃微波搅拌10分钟。反应结束，冷却至室温，硅藻土过滤，二氯甲烷洗滤饼，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-4(5.89mg)，产率：11.6％；纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):488.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.09(s,1H),8.83(s,1H),8.44(s,1H),8.32(s,1H),8.03(s,1H),7.88(s,1H),7.06(d,J＝4.7Hz,1H),6.92(s,1H),6.89(d,J＝4.7Hz,1H),6.70–6.60(m,1H),6.18(d,J＝15.3Hz,1H),5.73(d,J＝11.7Hz,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),2.88(t,J＝4.7Hz,4H),2.55(s,4H),2.26(s,3H)。
实施例5：N-(5(7-环己烯基-吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(J-5)的制备
步骤1：化合物1-a(2.3g，9.4mmol)溶解于200ml二氯甲烷中，冷却至0℃，缓慢的加入m-CPBA(间氯过氧化苯甲酸)(6.5g，37.7mmol)，加毕，室温搅拌2小时。反应结束，加入饱和硫代硫酸钠溶液200ml搅拌1小时，分离有机相，饱和碳酸氢钠洗，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体化合物5-b(733mg)，直接用于下一步反应。产率：28.2％；纯度：84.2％(UV254)。MS m/z(ESI):275.8[M+H]+。
步骤2：向二氧六环12ml/水4ml的混合溶液中加入化合物5-b(650mg，1.98mmol)，2-环己烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环(825mg，3.96mmol)，四三苯基磷钯(145mg，0.198mmol)，碳酸钠(630mg，5.94mmol)，氩气保护，120℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，加入50ml二氯甲烷，硅藻土过滤，滤液用水/二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～0:100]纯化得到橙色固体化合物5-c(251mg)，直接用于下一步反应。产率：45.7％；纯度：81.54％(UV254)。MS m/z(ESI):278.1[M+H]+。
步骤3：向氢氧化钠(300mg，7.5mmol)的4ml水溶液中加入化合物5-c(249mg，0.73mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至0℃，缓慢加入乙酸调pH为5，有固体析出，二氯甲烷萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物5-d(240mg)，直接用于下一步反应。产率：152.87％；纯度：84.55％(UV254)。MS m/z(ESI):216.2[M+H]+。
步骤4：化合物5-d(240mg，0.94mmol)溶于10ml二甲基甲酰胺，冷却至0℃，加入N,N-二异丙基乙胺(183mg，1.42mmol)，搅拌10分钟，加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(370mg，1mmol)，室温搅拌3小时。反应结束，反应液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～80:20]纯化得到黄色固体化合物5-e(43mg)，直接用于下一步反应。产率：13.2％；纯度：53％(UV254)。MS m/z(ESI):348.1[M+H]+。
步骤5：向3ml二氧六环溶液中加入化合物5-e(23mg，0.066mmol)，化合物2-a(20mg，0.068mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(6mg，0.0066mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6mg，0.01mmol)，碳酸铯(43mg，0.132mmol)，氩气保护，140℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，硅藻土过滤，二氯甲烷洗滤饼，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-5(3.46mg)，产率：9.79％；纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):490.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.16(s,1H),8.85(s,1H),8.66(s,1H),8.25(s,1H),7.74(s,1H),7.03(s,1H),6.99(s,1H),6.82(d,J＝4.7Hz,1H),6.76(d,J＝4.7Hz,1H),6.42(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.21(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),5.74(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H),3.84(s,3H),2.90(t,J＝5.7Hz,2H),2.69(s,3H),2.42(s,2H),2.35(t,J＝5.8Hz,2H),2.24(s,6H),2.08(s,2H),1.70–1.60(m,2H),1.59–1.48(m,2H)。
实施例6：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-(吡啶-3-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-6)的制备
步骤1：向化合物5-b(552mg，2.0mmol)，吡啶-3-基硼酸(246mg，2.0mmol)，碳酸钠(424mg，4.0mmol)的二氧六环20ml/水5ml的混合溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(72mg，0.1mmol)，氩气保护，130℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，二氯甲烷/水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到黄色固体化合物6-b(160mg)，直接用于下一步反应。产率：29.1％；纯度：60％(UV254)。MS m/z(ESI):275.1[M+H]+。
步骤2：向氢氧化钠溶液(2ml，11.67mmol)中加入化合物6-b(160mg，0.583mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至0℃，缓慢加入乙酸调pH为4-5，二氯甲烷萃取，分离合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物6-c(130mg)，直接用于下一步反应。产率：100％；纯度：52％(UV254)。MS m/z(ESI):213.1[M+H]+。
步骤3：向化合物6-c(130mg，0.61mmol)，N,N-二异丙基乙胺(158mg，1.22mmol)的5ml二甲基甲酰胺溶液中，0℃加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(297mg，0.79mmol)，室温搅拌1小时。反应结束，二氯甲烷萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～40:60]纯化得到黄色固体化合物6-d(30mg)，直接用于下一步反应。产率：15％；纯度：89％(UV254)。MS m/z(ESI):345[M+H]+。
步骤4：向4ml二氧六环溶液中加入化合物6-d(30mg，0.087mmol)，化合物2-a(25mg，0.085mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(8mg，0.0087mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10mg，0.017mmol)，碳酸铯(57mg，0.174mmol)，氩气保护，170℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得淡黄色固体化合物J-6(7.84mg)，纯度：95.46％(UV254)。MS m/z(ESI):487.3[M+H]+。
实施例7：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-7)的制备
步骤1：化合物1-a(250mg，1mmol)，1-甲基-5(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H--吡咯并[2,3-b〕吡啶(387mg，1.5mmol)，[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(36g，0.05mmol)，碳酸钾(317mg，3mmol)加入到二氧六环50ml/水5ml溶液中，氩气保护，80℃搅拌16小时。反应结束，冷却至室温，过滤，乙酸乙酯/水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到黄棕色固体化合物7-b(232mg)，直接用于下一步反应。产率：78.5％；纯度：94.46％(UV254)。MS m/z(ESI):296[M+H]+。
步骤2：化合物7-b(180mg，0.61mmol)溶解于10ml二氯甲烷中，冷却至0℃，缓慢的加入m-CPBA(间氯过氧化苯甲酸)(421mg，2.4mmol)，加毕，室温搅拌过夜。反应结束，加入饱和碳酸钠溶液，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物7-c(80mg)，直接用于下一步反应。产率：37.2％；纯度：47％(UV254)。MS m/z(ESI):328[M+H]+。
步骤3：化合物7-c(75mg，0.23mmol)饱和氢氧化钠溶液(0.65ml)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至室温，乙酸调节pH为4-5，二氯甲烷萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物7-d(50mg)，直接用于下一步反应。产率：82％；纯度：62％(UV254)。MS m/z(ESI):266[M+H]+。
步骤4：向化合物7-d(80mg，0.3mmol)，N,N-二异丙基乙胺(116mg，0.9mmol)的5ml二甲基甲酰胺溶液中0℃加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(118mg，0.33mmol)，室温搅拌2小时。反应结束，加入二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[DCM:MeOH＝90:10～80:20]纯化得到黄色固体化合物7-e(25mg)，直接用于下一步反应。产率：33％；纯度：94％(UV254)。MS m/z(ESI):398[M+H]+。
步骤5：向化合物7-e(20mg，0.05mmol)，化合物2-a(15mg，0.05mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(6mg，0.01mmol)，碳酸铯(33mg，0.1mmol)的3ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(5mg，0.005mmol)，160℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-7(2.01mg)，纯度：96.92％(UV254)。MS m/z(ESI):540[M+H]+。
实施例8：N-(5(7-环丙基吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(J-8)的制备
步骤1：向化合物5-b(276mg，1.0mmol)，环丙基硼酸(258mg，3.0mmol)，碳酸钠(318mg，3.0mmol)的二氧六环15ml/水5ml的混合溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(37mg，0.05mmol)，氩气保护，110℃微波搅拌5小时。反应结束，冷却至室温，二氯甲烷/水萃取，饱和食盐水洗，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝50:50～30:70]纯化得到黄色固体化合物8-b(90mg)，直接用于下一步反应。产率：38％；纯度：79％(UV254)。MS m/z(ESI):238.1[M+H]+。
步骤2：向氢氧化钠溶液(6N，1.1ml，6.7mmol)中加入化合物8-b(160mg，0.67mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却室温，缓慢加入乙酸调pH为4-5，二氯甲烷和水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物8-c(117mg)，直接用于下一步反应。产率：100％；纯度：67％(UV254)。MS m/z(ESI):176[M+H]+。
步骤3：向化合物8-c(117mg，0.67mmol)，N,N-二异丙基乙胺(173mg，1.34mmol)的10ml二甲基甲酰胺溶液中，0℃加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(479mg，1.34mmol)，室温搅拌2小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～70:30]纯化得到黄色固体化合物8-d(180mg)，直接用于下一步反应。产率：87.4％；纯度：85％(UV254)。MS m/z(ESI):308.0[M+H]+。
步骤4：向化合物8-d(90mg，0.29mmol)，化合物2-a(85mg，0.29mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(34mg，0.058mmol)，碳酸铯(190mg，0.58mmol)的10ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(27mg，0.029mmol)，160℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得淡黄色固体化合物J-8(18.89mg)，纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):450.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.08(s,1H),9.48(s,1H),8.76(s,1H),8.26(s,1H),7.51(s,1H),7.00(s,1H),6.76-6.75(d,J＝4.6Hz,1H),6.40-6.39(d,J＝4.6Hz,2H),6.18-6.13(dd,J1＝1.7Hz,J2＝16.8Hz,1H),5.72-5.69(t,J＝9.9Hz,1H),3.89(s,3H),2.89-2.86(t,J＝4.5Hz,3H),2.68(s,3H),2.32(s,2H),2.21(s,6H),1.08-1.06(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.3Hz,2H),0.80(s,2H)。
实施例9：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-甲基吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-9)的制备
步骤1：向化合物5-b(828mg，3.0mmol)，甲基硼酸(539mg，9.0mmol)，碳酸钠(795mg，7.5mmol)的二氧六环30ml/水10ml的混合溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(110mg，0.15mmol)，110℃微波搅拌6小时。反应结束，冷却至室温，二氯甲烷/水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝80:20～60:40]纯化得到棕色固体化合物9-b(242mg)，直接用于下一步反应。产率：38.2％；纯度：65％(UV254)。MS m/z(ESI):212.1[M+H]+。
步骤2：向氢氧化钠溶液(6N，2ml，11.4mmol)中加入化合物9-b(242mg，1.14mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却室温，缓慢加入乙酸调pH为3-4，二氯甲烷和水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物9-c(137mg)，直接用于下一步反应。产率：80.6％；纯度：89％(UV254)。MS m/z(ESI):150.1[M+H]+。
步骤3：向化合物9-c(137mg，0.92mmol)，N,N-二异丙基乙胺(357mg，2.76mmol)的10ml二甲基甲酰胺溶液中，0℃分批加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(656mg，1.84mmol)，室温搅拌2小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～80:20]纯化得到黄色油状化合物9-d(180mg)，直接用于下一步反应。产率：70％；纯度：73％(UV254)。MS m/z(ESI):280.0[M+H]+。
步骤4：向化合物9-d(90mg，0.32mmol)，化合物2-a(93mg，0.32mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(37mg，0.064mmol)，碳酸铯(209mg，0.64mmol)的8ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(29mg，0.032mmol)，氩气保护，170℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-9(33mg)，产率24.4％，纯度：96.82％(UV254)。MS m/z(ESI):424.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.07(s,1H),9.38(s,1H),8.80(s,1H),7.53(s,1H),7.01(s,1H),6.80-6.79(d,J＝4.4Hz,1H),6.62-6.61(d,J＝4.4Hz,1H),6.42-6.36dd,J1＝10.0Hz,J2＝16.9Hz,1H),6.25-6.20(dd,J1＝2.1Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.75-5.72(dd,J1＝1.8Hz,J2＝10.1Hz,1H),3.88(s,3H),2.87-2.86(d,J＝5.3Hz,2H),2.68(s,3H),2.57s,3H),2.30(s,2H),2.21(s,6H)。
实施例10：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-(喹啉-3-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-10)的制备
步骤1：向化合物5-b(828mg，3.0mmol)，喹啉-3-基硼酸(571mg，3.3mmol)，碳酸钠(795mg，7.5mmol)的二氧六环30ml/水10ml的混合溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(110mg，0.15mmol)，100℃微波搅拌过夜。反应结束，冷却至室温，二氯甲烷/水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～20:80]纯化得到黄色固体化合物10-b(226mg)，直接用于下一步反应。产率：23％；纯度：49％(UV254)。MS m/z(ESI):325.1[M+H]+。
步骤2：向氢氧化钠溶液(3N，2.3ml，7mmol)中加入化合物10-b(226mg，0.7mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却室温，调pH为4-5，二氯甲烷和水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到棕色固体化合物10-c(180mg)，直接用于下一步反应。产率：98％；纯度：87％(UV254)。MS m/z(ESI):263.1[M+H]+。
步骤3：向化合物10-c(180mg，0.69mmol)，N,N-二异丙基乙胺(267mg，2.07mmol)的10ml二甲基甲酰胺溶液中，0℃分批加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(493mg，1.38mmol)，室温搅拌2小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～80:20]纯化得到黄色固体化合物10-d(120mg)，直接用于下一步反应。产率：44.3％；纯度：90％(UV254)。MS m/z(ESI):395.1[M+H]+。
步骤4：向化合物10-d(60mg，0.15mmol)，化合物2-a(44mg，0.15mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(18mg，0.03mmol)，碳酸铯(98mg，0.3mmol)的8ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)，170℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-10(18mg)，产率22.5％，纯度：97.08％(UV254)。MS m/z(ESI):537.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.15(s,1H),9.48(d,J＝2.2Hz,1H),9.23(d,J＝1.9Hz,1H),9.03(s,1H),8.64(s,1H),8.36(s,1H),7.96-7.94(d,J＝8.3Hz,1H),7.71-7.66(m,2H),7.55-7.50(m,2H),7.12(s,1H),7.02-7.01(d,J＝4.8Hz,1H),6.30-6.26(dd,J1＝10.7Hz,J2＝17.0Hz,1H),5.95-5.90(dd,J1＝5.8Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.58-5.55(dd,J1＝1.7Hz,J2＝10.1Hz,1H),3.80(s,3H),2.96-2.93(d,J＝9.5Hz,2H),2.78(s,3H),2.37(s,2H),2.24(s,6H)。
实施例11：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-苯基吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-11)的制备
步骤1：向化合物1-a(500mg，2.05mmol)的乙腈15ml/水3ml溶液中加入苯硼酸(250mg，2.05mmol)，[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(150mg，0.2mmol)，碳酸钠(435mg，4.10mmol)，100℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～80:20]纯化得到黄色固体化合物11-b(210mg)，直接用于下一步反应。产率：42％；纯度：76％(UV254)。MS m/z(ESI):242.1[M+H]+。
步骤2：化合物11-b(200mg，0.83mmol)的100ml二氯甲烷中，冷却至0℃，缓慢的加入m-CPBA(间氯过氧化苯甲酸)(428mg，2.49mmol)，加毕，室温搅拌3小时。反应结束，加入饱和硫代硫酸钠溶液，分离有机相，饱和碳酸钠洗，分离有机相，减压浓缩得到黄色固体化合物11-c(180mg)，直接用于下一步反应。纯度：54％(UV254)。MS m/z(ESI):274.1[M+H]+。
步骤3：向氢氧化钠(396mg，10mmol)的10ml水溶液中加入化合物11-c(180mg，0.66mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至室温，加乙酸中和，乙酸乙酯/水萃取，分离收集有机相，减压浓缩得到黄色粉末状化合物11-d(100mg)，直接用于下一步反应。纯度：66％(UV254)。MS m/z(ESI):212.1[M+H]+。
步骤4：向化合物11-d(100mg，0.47mmol)的5ml二甲基甲酰胺溶液中0℃加入N,N-二异丙基乙胺(183mg，1.42mmol)，室温搅拌5分钟，加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(169mg，0.47mmol)，室温搅拌3小时。反应结束，乙酸乙酯/水萃取，分离收集有机相，水洗，饱和食盐水洗，分离有机相，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝90:10]纯化得到黄色半固体化合物11-e(55mg)，直接用于下一步反应。纯度：90％(UV254)。MS m/z(ESI):344.0[M+H]+。
步骤5：向化合物11-e(10mg，0.029mmol)，化合物2-a(9mg，0.029mmol)的2ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(3mg，0.003mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(4mg，0.006mmol)，碳酸铯(19mg，0.058mmol)，160℃微波搅拌10分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-11(2.08mg)，纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):486.1[M+H]+。
实施例12：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(7-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-12)的制备
步骤1：向化合物5-b(250mg，0.9mmol)的乙腈16ml溶液中加入1-甲基-1H-吡咯-3-基硼酸(188mg，0.9mmol)，[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(67mg，0.09mmol)，碳酸钠(192mg，1.81mmol)，水2ml，130℃微波搅拌30分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色粉末状化合物12-b(80mg)，直接用于下一步反应。产率：32％。MS m/z(ESI):277.1[M+H]+。
步骤2：向氢氧化钠(174mg，4.34mmol)的3ml水溶液中加入化合物12-b(80mg，0.29mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却室温，缓慢加入乙酸调pH为4，乙酸乙酯萃取，分离合并有机相，减压浓缩得到黄色油状化合物12-c(80mg)，直接用于下一步反应。MS m/z(ESI):215.1[M+H]+。
步骤3：向化合物12-c(80mg，0.37mmol)的4ml二甲基甲酰胺溶液中0℃加入N,N-二异丙基乙胺(145mg，1.12mmol)，N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(134mg，0.37mmol)，室温搅拌3小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色油状化合物12-d(40mg)，直接用于下一步反应。MS m/z(ESI):347.1[M+H]+。
步骤4：向化合物12-d(30mg，0.09mmol)的2ml二氧六环溶液中加入化合物2-a(25mg，0.09mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(8mg，0.009mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(10mg，0.018mmol)，碳酸铯(58mg，0.18mmol)，160℃微波搅拌10分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色粉末状化合物J-12(1.83mg)。MS m/z(ESI):489.2[M+H]+。
实施例13：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(7-(喹啉-3-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-13)的制备
步骤：向化合物10-d(60mg，0.15mmol)，化合物3-a(48mg，0.15mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(18mg，0.03mmol)，碳酸铯(98mg，0.3mmol)的8ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)，170℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-13(16mg)，产率19％，纯度：97.38％(UV254)。MS m/z(ESI):563.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.47(s,1H),9.23-9.22(d,J＝2.0Hz,1H),9.02(s,2H),8.37(s,1H),8.30(s,1H),7.98-7.96(d,J＝8.4Hz,1H),7.74-7.66(m,2H),7.55-7.54(d,J＝5.0Hz,2H),7.01-7.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.96(s,1H),6.61-6.54(dd,J1＝10.2Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.98-5.94(dd,J1＝1.7Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.58-5.55(d,J＝11.7Hz,1H),3.78(s,3H),3.13-3.11(d,J＝11.2Hz,2H),2.77-2.71(t,J＝11.2Hz,1H),2.25(s,7H),1.90-1.87(d,J＝10.6Hz,2H),1.76-1.74(d,J＝9.8Hz,2H)。
实施例14：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(7-甲基吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-14)的制备
步骤：向化合物9-d(90mg，0.32mmol)，化合物3-a(102mg，0.32mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(37mg，0.064mmol)，碳酸铯(209mg，0.64mmol)的8ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(29mg，0.032mmol)，氩气保护，170℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-14(31mg)，产率21.5％，纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):450.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.10(s,1H),8.95(s,1H),8.79(s,1H),7.52(s,1H),6.86(s,1H),6.79-6.78(d,J＝4.5Hz,1H),6.68-6.61(dd,J1＝10.1Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.61-6.60(d,J＝4.5Hz,1H),6.24-6.19(dd,J1＝1.8Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.74-5.71(dd,J1＝1.6Hz,J2＝10.2Hz,1H),3.88(s,3H),3.01-2.99(d,J＝11.6Hz,2H),2.69-2.64(m,2H),2.52(s,3H),2.22(s,6H),2.18(m,1H),1.85-1.82(d,J＝10.9Hz,2H),1.71-1.66(t,J＝11.2Hz,2H)。
实施例15：N-(5(7-环丙基吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)-2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(J-15)的制备
步骤：向化合物8-d(90mg，0.29mmol)，化合物3-a(93mg，0.29mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(34mg，0.058mmol)，碳酸铯(190mg，0.58mmol)的10ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(27mg，0.029mmol)，170℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色固体化合物J-15(14.6mg)，产率10.6％，纯度：100％(UV254)。MS m/z(ESI):476.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.18(s,1H),8.95(s,1H),8.75(s,1H),7.49(s,1H),6.84(s,1H),6.75-6.74(d,J＝4.6Hz,1H),6.68-6.61(dd,J1＝10.1Hz,J2＝16.7Hz,1H),6.40-6.39(d,J＝4.6Hz,1H),6.18-6.13(dd,J1＝2.0Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.71-5.68(dd,J1＝1.8Hz,J2＝10.1Hz,1H),3.89(s,3H),3.02-3.00(d,J＝11.5Hz,2H),2.74(s,1H),2.68-2.63(t,J＝10.1Hz,2H),2.21(s,6H),1.95(m,1H),1.84-1.81(d,J＝10.6Hz,2H),1.71-1.63(dd,J1＝11.5Hz,J2＝20.3Hz,2H),1.05-1.02(m,2H),0.80-0.78(m,2H)。
实施例16：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(3(1-甲基-1H-吡咯-3-基)咪唑并[1,2-α]吡嗪-6-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-16)的制备
步骤1：化合物5-a(2.6g，20mmol)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(12.0g，60.89mmol)溶于30ml异丙醇溶液中，然后加入溴化氢溶液(10.5g，62.22mmol)，80℃搅拌过夜。反应结束，冷却至室温，碳酸氢钠调pH为8，二氯甲烷萃取，分离合并有机相，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[DCM:MeOH＝90:10～70:30]纯化得到棕色固体化合物16-b(2.3g)，直接用于下一步反应。产率：49.75％，纯度96.63。MS m/z(ESI):154.0[M+H]+。
步骤2：向化合物16-b(1.2g，7.8mmol)的40ml乙腈溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(1.46g，8.2mmol)，室温搅拌2小时。反应结束，加入乙酸乙酯和水萃取，分离合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝100:0～70:30]纯化得到化合物16-c(850mg)，直接用于下一步反应。产率：47.2％，纯度100％。MS m/z(ESI):231.9[M+H]+。
步骤3：向化合物16-c(174mg，0.75mmol)，1-甲基-1H-吡咯-3-基硼酸(147mg，0.71mmol)，碳酸钠(238mg，2.25mmol)的乙腈15ml/水3ml溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(27mg，0.0375mmol)，氩气保护，70℃搅拌4小时。反应结束，冷却至室温，乙酸乙酯和水萃取，分离合并有机相，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝60:40～40:60]纯化得到化合物16-d(81mg)，直接用于下一步反应。产率：46.5％，纯度100％。MS m/z(ESI):233[M+H]+。
步骤4：向化合物16-d(69mg，0.3mmol)，化合物2-a(88mg，0.3mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(35mg，0.06mmol)，碳酸铯(196mg，0.6mmol)的10ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(27mg，0.03mmol)，氩气保护，170℃微波搅拌25分钟。反应结束，冷却至室温，减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-16(34.7mg)，产率23.3％，纯度100％。MS m/z(ESI):489[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.20(s,1H),8.81(d,J＝1.3Hz,1H),8.52(s,1H),8.12(s,1H),7.81(s,1H),7.52(s,1H),7.39(s,1H),7.00(s,1H),6.90-6.89(t,J＝2.3Hz,1H),6.50-6.49(t,J＝2.2Hz,1H),6.39-6.32(dd,J1＝9.9Hz,J2＝16.8Hz,1H),6.23-6.19(dd,J1＝1.9Hz,J2＝16.8Hz,1H),5.75-5.72(dd,J1＝1.9Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.84(s,3H),3.69(s,3H),2.86-2.83(t,J＝5.3Hz,2H),2.68(s,3H),2.27-2.24(t,J＝5.6Hz,2H),2.19(s,6H)。
实施例17：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(3(吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-17)的制备
步骤1：向化合物16-c(174mg，0.75mmol)，吡啶-3-基硼酸(87mg，0.71mmol)，碳酸钠(238mg，2.25mmol)的乙腈8ml/水2ml溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(27mg，0.0375mmol)，氩气保护，70℃搅拌4小时。反应结束，冷却至室温，乙酸乙酯和水萃取，分离合并有机相，饱和食盐水洗，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝50:50～20:80]纯化得到化合物17-b(87mg)，直接用于下一步反应。产率：50.6％，纯度93％。MS m/z(ESI):231[M+H]+。
步骤2：向化合物17-b(75mg，0.325mmol)，化合物2-a(95mg，0.325mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(38mg，0.065mmol)，碳酸铯(212mg，0.65mmol)的10ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(30mg，0.0325mmol)，氩气保护，170℃微波搅拌25分钟。反应结束，冷却至室温，减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-17(49.2mg)，产率31％，纯度100％。MS m/z(ESI):487[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.12(s,1H),8.95(d,J＝1.3Hz,1H),8.94(d,J＝1.7Hz,1H),8.64(t,J＝1.5Hz,1H),8.52(s,1H),8.27-8.26(d,J＝1.2Hz,1H),8.22-8.19(m,1H),8.07(s,1H),7.79(s,1H),7.58-7.55(m,1H),6.97(s,1H),6.34-6.32(d,J＝10.0Hz,1H),6.23-6.22(d,J＝2.0Hz,1H),5.74-5.71(dd,J1＝2.0Hz,J2＝10.0Hz,1H),3.83(s,3H),2.86-2.83(t,J＝5.1Hz,2H),2.67(s,3H),2.28(s,2H),2.20(s,6H)。
实施例18：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(3(-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-α]吡嗪-6-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-18)的制备
步骤1：向化合物16-c(465mg，2mmol)，1-甲基-4(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(395mg，1.9mmol)，碳酸钠(636mg，6mmol)的乙腈40ml/水8ml溶液中加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(73mg，0.1mmol)，氩气保护，70℃搅拌4小时。反应结束，冷却至室温，乙酸乙酯和水萃取，分离合并有机相，饱和食盐水洗，分离有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE:EA＝50:50～0:100]纯化得到化合物18-b(281mg)，直接用于下一步反应。产率：61％，纯度97％。MS m/z(ESI):234[M+H]+。
步骤2：向化合物18-b(93mg，0.4mmol)，化合物2-a(117mg，0.4mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(46mg，0.08mmol)，碳酸铯(261mg，0.8mmol)的12ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(37mg，0.04mmol)，氩气保护，160℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-18(37.95mg)，产率19.4％，纯度100％。MS m/z(ESI):490[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.23(s,1H),8.87-8.86(d,J＝1.3Hz,1H),8.53(s,1H),8.37(s,1H),8.11(d,J＝1.3Hz,1H),7.96(d,J＝0.5Hz,1H),7.91(s,1H),7.53(s,1H),7.00(s,1H),6.39-6.33(dd,J1＝10.0Hz,J2＝16.9Hz,1H),6.25-6.20(dd,J1＝2.1Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.76-5.73(dd,J1＝2.0Hz,J2＝9.9Hz,1H),3.93(s,3H),3.85(s,3H),2.86-2.83(t,J＝5.3Hz,2H),2.68(s,3H),2.27-2.24(t,J＝9.7Hz,2H),2.19(s,6H)。
实施例19：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(3(1-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-α]吡嗪6-氨基)苯基)丙烯酰胺(J-19)的制备
步骤：向化合物18-b(117mg，0.5mmol)，化合物3-a(159mg，0.5mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(58mg，0.1mmol)，碳酸铯(326mg，1.0mmol)的12ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(46mg，0.05mmol)，氩气保护，160℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-19(32.9mg)，产率12.8％，纯度100％。MS m/z(ESI):516[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.01(s,1H),8.85(d,J＝0.7Hz,1H),8.35(s,1H),8.25(s,1H),8.07(s,1H),7.95(s,1H),7.90(s,1H),7.54(s,1H),6.84(s,1H),6.69-6.63(dd,J1＝10.2Hz,J2＝17.0Hz,1H),6.23-6.19(dd,J1＝1.7Hz,J2＝16.9Hz,1H),5.74-5.71(t,J＝10.2Hz,1H),3.93(s,3H),3.84(s,3H),3.01-2.98(d,J＝11.4Hz,2H),2.68-2.63(t,J＝10.3Hz,2H),2.24(s,7H),1.85-1.82(d,J＝10.7Hz,2H),1.72-1.64(m,2H)。
实施例20：N-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-(5-甲基-7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[1，2-F][1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-20)的制备
步骤1：向化合物6-a(4.5g，26.79mmol)的180ml的四氢呋喃的溶液中，0℃下滴加苯甲酰基异硫氰酸酯(4.5g，27.61mmol)，室温搅拌4小时。反应完成后，减压浓缩。往粗品中加入乙醚并搅拌，过滤得到白色粉末状化合物20-b(7.65g)。直接用于下一步反应，产率97％，纯度96％。MS m/z(ESI):332.1[M+H]+。
步骤2：向氢氧化钠(48mg，1.2mmol)的1ml水溶液中加入化合物20-b(100mg,0.3mmol)，加热85℃搅拌2小时。反应结束，冷却到室温，加入(41.5mg,0.9mmol)乙醇，冰浴下滴加乙酸(72mg，1.2mmol)搅拌。减压浓缩得到白色化合物20-c(54mg)。直接用于下一步反应，纯度91％。MS m/z(ESI):182.1[M+H]+。
步骤3：向化合物20-c(1.0g，22.10mmol)的110ml四氢呋喃中加入碘甲烷(4.5g，28.85mmol)，45℃下搅拌2个小时。反应结束，冷却至室温，减压浓缩反应液得到白色的固体，往白色的固体中加入100ml水和100ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌过滤得到白色粉末状化合物20-d(3.96g)。直接用于下一步反应，纯度92％。MS m/z(ESI):196.1[M+H]+。
步骤4：向23ml三氯氧磷中加入化合物20-d(3.96g，20.31mmol)和，120℃搅拌1小时。反应结束，冷却至室温，把三氯氧磷减压蒸掉，加入冰水，氨水(5.5ml)搅拌20分钟，过滤，滤饼溶解在二氯甲烷中，分别用水、饱和食盐水洗涤，分离有机相，减压浓缩得到黄色固体化合物20-e(4.2g)。直接用于下一步反应，纯度70％。MS m/z(ESI):214.1[M+H]+。
步骤5：向化合物20-e(4.2g，19.72mmol)的200ml四氢呋喃和100ml甲醇溶液中，0℃慢慢加入N-溴代丁二酰亚胺(3.49g，19.72mmol)，室温下搅拌3小时。反应完成后浓缩。用二氯甲烷溶解，分别用水、饱和食盐水洗涤，分离有机相，干燥浓缩得到粗品黄色固体化合物20-f(6g)。直接用于下一步反应，纯度81％。MS m/z(ESI):291.9[M+H]+。
步骤6：向化合物20-f(3.36g，11.51mmol)的40ml异丙醇中加入硼氰化钠(874mg，23.01mmol)，然后加热到60℃搅拌5个小时。反应结束，冷却到0℃加入水，然后用乙酸乙酯和水萃取，分别用水和饱和食盐水洗涤有机相，分离有机相，减压浓缩得到黄色固体化合物20-g(2.86g)。直接用于下一步反应，纯度81％。MS m/z(ESI):260.0[M+H]+。
步骤7：向化合物20-g(2.86g，110mmol)的80ml二氯甲烷中加入2，3二氯-5，6-二氰对苯醌(2.75g，121mmol)，室温搅拌1小时。反应结束，过滤，滤液浓缩得到粗品，然后柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯：5％)得到黄色固体化合物20-h(1.92g)。直接用于下一步反应，纯度98％。MS m/z(ESI):260.0[M+H]+。
步骤8：向化合物20-h(250mg，0.97mmol)的8ml甲醇溶液中加入钨酸钠(3.6mg，9.68mmol)，过氧化氢(1.1g，0.01mmol)，65℃搅拌3小时。反应结束，减压浓缩，水洗得到黄色固体化合物20-i(660mg)，直接用于下一步反应。产率：79％。MS m/z(ESI):290.0[M+H]+。
步骤9：向化合物20-i(220mg，0.76mmol)的15ml乙腈溶液中加入1-甲基-4(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(158mg，0.76mmol)，[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(56mg，0.08mmol)，碳酸钠(161mg，1.52mmol)，水1ml，120℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，，滤液减压浓缩，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色固体化合物20-j(200mg)，直接用于下一步反应。产率：90％。MS m/z(ESI):292.1[M+H]+。
步骤10：向化合物20-j(180mg，0.62mmol)的8ml水溶液中加入氢氧化钠(371mg，9.27mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至室温，乙酸调节pH为4，乙酸乙酯萃取，分离收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到红色固体化合物20-k(140mg)，直接用于下一步反应。产率：100％。MS m/z(ESI):230.1[M+H]+。
步骤11：化合物20-k(90mg，0.39mmol)溶于3ml二甲基甲酰胺，然后加入N,N-二异丙基乙胺(153mg，1.18mmol)，N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(140mg，0.39mmol)，室温搅拌2小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色固体化合物20-l(120mg)，直接用于下一步反应。产率：90％。MS m/z(ESI):362.1[M+H]+。
步骤12：向化合物20-l(50mg，0.14mmol)的8ml二氧六环溶液中加入化合物2-a(41mg，0.14mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(13mg，0.014mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(17mg，0.027mmol)，碳酸铯(91mg，0.28mmol)，160℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-20(2.84mg)，产率：4％。MS m/z(ESI):504.3[M+H]+。
实施例21：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(5-甲基-7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[1,2-F][1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-21)的制备
步骤：向化合物20-l(50mg，0.14mmol)的8ml二氧六环溶液中加入化合物3-a(44mg，0.14mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(13mg，0.014mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(17mg，0.027mmol)，碳酸铯(91mg，0.28mmol)，160℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得黄色油状化合物J-21(2.76mg)，产率：4％。MS m/z(ESI):530.2[M+H]+。
实施例22：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(5-甲基-7-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶5基)吡咯并[1,2-f]的[1,2,4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-22)的制备
步骤1：向化合物20-i(100mg，0.34mmol)的2ml乙腈溶液中加入1-甲基-5(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H--吡咯并[2,3-b〕吡啶(89mg，0.34mmol)，[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(22mg，0.03mmol)，碳酸钠(73mg，0.69mmol)，水2滴，120℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色固体化合物22-b(100mg)，直接用于下一步反应。产率：85％。MS m/z(ESI):342.1[M+H]+。
步骤2：向化合物22-b(100mg，0.29mmol)的5ml水溶液中加入氢氧化钠(234mg，5.86mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至室温，乙酸调节pH为4，乙酸乙酯萃取，分离收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物22-c(100mg)，直接用于下一步反应。产率：100％。MS m/z(ESI):280.1[M+H]+。
步骤3：化合物22-c(100mg，0.36mmol)溶于10ml二甲基甲酰胺，0℃加入N,N-二异丙基乙胺(139mg，1.08mmol)，搅拌10分钟，加入N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(141mg，0.39mmol)，室温搅拌12小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析[PE/EA:50％]纯化得到黄色固体化合物22-d(250mg)，直接用于下一步反应。纯度：65％。MS m/z(ESI):412.1[M+H]+。
步骤4：向化合物22-d(240mg，0.58mmol)，化合物3-a(123mg，0.58mmol)的16ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(36mg，0.06mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(45mg，0.12mmol)，碳酸铯(254mg，1.17mmol)，160℃微波搅拌20分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-22(24mg)，纯度：6.09％(UV254)。MS m/z(ESI):580.3[M+H]+。
实施例23：N-(2-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(5-甲基-7-(吡啶-3-基)吡咯并[1,2-f]的[1,2，4]三嗪-2-基氨基)苯基)丙烯酰胺(J-23)的制备
步骤1：向化合物20-i(100mg，0.34mmol)的2ml乙腈溶液中加入吡啶-3-基硼酸(71mg，0.34mmol)，[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(22mg，0.034mmol)，碳酸钠(73mg，0.69mmol)，水2滴，120℃微波搅拌15分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色固体化合物23-b(100mg)，直接用于下一步反应。产率：84％。MS m/z(ESI):389.1[M+H]+。
步骤2：向化合物23-b(100mg，0.35mmol)的5ml水溶液中加入氢氧化钠(278mg，6.94mmol)，100℃搅拌2小时。反应结束，冷却至室温，乙酸调节pH为4，乙酸乙酯萃取，分离收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物23-c(95mg)，直接用于下一步反应。产率：100％。MS m/z(ESI):227.1[M+H]+。
步骤3：化合物23-c(75mg，0.33mmol)溶于3ml二甲基甲酰胺，0℃加入N,N-二异丙基乙胺(128mg，0.99mmol),N-苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)(130mg，0.36mmol)，室温搅拌1小时。反应结束，减压浓缩得到粗品，经Combi-flash柱层析纯化得到黄色固体化合物23-d(50mg)，直接用于下一步反应。纯度：42％。MS m/z(ESI):359.0[M+H]+。
步骤4：向化合物23-d(37mg，0.1mmol)，化合物3-a(33mg，0.1mmol)的6ml二氧六环溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(10mg，0.01mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(12mg，0.02mmol)，碳酸铯(70mg，0.21mmol)，160℃微波搅拌100分钟。反应结束，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，经制备液相分离纯化得化合物J-23(16mg)，纯度：18％(UV254)。MS m/z(ESI):527.3[M+H]+。
测试例1：对野生型EGFR和突变型EGFR激酶的活性抑制测试
以下z’-lyte测试方法中所用试剂均购自Invitrogen。
利用z’-lyte方法测定对T790M/L858R双突变型EGFR激酶(Invitrogen，PV4879)、野生型EGFR激酶(Invitrogen，PV3872)的抑制活性。
10μL T790M/L858R激酶反应体系中各组分的工作浓度为：25μM ATP，0.1ng/μLT790M/L858R激酶，2μM Tyr04底物(Invitrogen，PV3193)。加入本发明上述实施例制备的化合物(即待测物)后DMSO的浓度为2vol％。
10μL野生型EGFR(EGFR WT)激酶反应体系中各组分的工作浓度为：10μM ATP，0.8ng/μL野生型EGFR激酶，2μM Tyr04底物(Invitrogen，PV3193)。加入待测物后DMSO的浓度为2vol％。
室温溶解10mM的药物储存液，经8vol％DMSO溶液梯度稀释至终浓度4-0.002μM。每孔中加入2.5μL的待测物溶液以及5μL经反应缓冲液稀释的T790M/L858R激酶(或野生型EGFR激酶)与Tyr04底物的混合物，再加入2.5μL的ATP启动反应。其中C1孔用反应缓冲液代替ATP，C2孔不加入任何药物，C3孔按说明书描述加入磷酸化的底物。在25度摇床避光反应60分钟后。加入5μL Development Reagent B(Invitrogen，用TR-FRET稀释缓冲液进行稀释)，于室温摇床反应60分钟。在VictorX5荧光酶标仪(PerkinElmer)上读板，测定激发波长为405nm、发射波长为450nm和520nm的光吸收(例如，C3520nm表示C3孔在520nm的读值)。
抑制率计算方法(参照Invitrogen，PV3193的说明书)如下：
1、ER＝Coumarin Emission(450nm)/Fluorescein Emission(520nm)
2、磷酸化率＝(1-((ER×C3520nm-C3450nm)/((C1450nm-C3450nm)+ER×(C3520nm-C1520nm))))×100％
3、抑制率(IR)＝(1-(测试化合物的磷酸化率)/(C2的磷酸化率))×100％
用XLFIT5.0软件(英国IDBS公司)拟合计算半数抑制浓度IC50。
表1 酶抑制活性与选择抑制活性
由表1可知，与阳性对照物BIBW2992(阿法替尼)和AZD-9291(制备方法参见WO2013014448A1，结构如下)相比，本发明的实施例化合物对EGFR突变型酶(T790M/L858R)表现出较强的抑制活性，而对EGFR野生型酶抑制活性较弱，因此本发明的化合物对EGFR突变型酶具有较好的选择抑制活性。
测试例2：EGFR T790M抑制剂对A431(EGFR野生型)及H1975(EGFR T790M突变)细胞EGFR磷酸化水平的抑制(ELISA法测定)
以下方法中的试剂、溶液的配置方法以及细胞处理和裂解液制备步骤、ELISA检测步骤均按照R&D DYC3570，R&D DYC1095E以及R&D DYC1095BE的说明书进行操作。
一、试剂和溶液
细胞裂解缓冲液：1％(W/V)NP-40，20mM Tris(pH8.0)，137mM NaCl，10％(V/V)甘油glycerol，1mM NaVO3，2mM EDTA。
细胞裂解液：细胞裂解缓冲液+10μg/mL抑肽酶(Aprotinin)(Sigma)，10ug/mL亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)(Sigma)，现配现用。
1xPBS缓冲液：NaCl:0.137M，KCl:0.0027M，Na2PO4-12H2O:0.01M，KH2PO4:0.0015M，pH7.4。
洗涤缓冲液：含有0.05％(V/V)Tween-20的PBS缓冲液。
检测抗体稀释液：20mM Tris，137mM NaCl，0.05％(V/V)Tween-20，0.1％(W/V)BSA，pH7.2-7.4。
封闭液：含有1％(W/V)BSA的PBS缓冲液。
ELISA试剂盒：R&D DYC3570，R&D DYC1095E和R&D DYC1095BE。
二、H1975细胞
2.1：H1975细胞处理和裂解液制备
(1)将H1975细胞(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)以1×104/孔的密度种到96孔板中，每孔90微升含10％(V/V)FBS的1640培养基，37℃、5％(V/V)CO2培养过夜。
(2)将待测化合物按照MTT实验中药物稀释方法稀释，将10μL稀释后的化合物或稀释后的DMSO加入到细胞培板的对应孔中，DMSO终浓度为0.5％(V/V)，37℃、5％(V/V)CO2培养1小时。以纯DMSO处理的细胞培养体系作为细胞对照。
(3)吸掉培养基后加入100μL细胞裂解液，封板模封置于-80℃冰箱中过夜。以细胞裂解缓冲液作为空白对照。
2.2：ELISA检测步骤
按照R&D DYC1095E或R&D DYC1095BE给定说明书进行操作。
(1)R&D捕获抗体((DYC1095BE或DYC1095E))用PBS1:180稀释，稀释好的抗体100μL/孔加入ELISA反应板(Corning costar42592)，25℃摇床包被过夜；
(2)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(3)加入300μL封闭液，25℃摇床孵育2小时；
(4)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(5)加入40μL细胞裂解缓冲液和60μL细胞裂解液，25℃摇床孵育2小时；
(6)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(7)检测抗体用检测抗体稀释液以试剂盒说明规定比例稀释，每孔加入100μL，25℃摇床避光孵育1小时；
(8)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(9)将TMB底物(R&D DY999)中的A试剂和B试剂以1:1进行混合，每孔100μL，25℃摇床避光孵育20分钟；
(10)2N H2SO4每孔加入50μL；
(11)用酶标仪读板(Thermo Multiskan K3)分别测定细胞对照、空白对照以及药物处理情况下的OD450值和OD570值，并用相同孔的OD450值减去相应OD570值分别得到OD细胞、OD空白和OD药物处理。
2.3数据分析
抑制率(％)＝100％×(OD细胞-OD药物处理)/(OD细胞-OD空白)
2.4将计算得到的抑制率用XLFIT5.0软件计算出IC50值，参见表2。
三、A431细胞
3.1A431细胞的处理和测试步骤
(1)将A431细胞(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)以1×104/孔的密度种到96孔板中，每孔90微升含有10％FBS的DMEM培养基37℃、5％CO2培养过夜。
(2)将A431细胞培养基更换为90微升无血清DMEM培养基，继续培养过夜。
(3)将待测化合物按照MTT实验中药物稀释方法稀释，将10μL稀释后的化合物或稀释后的DMSO加入到细胞培板的对应孔中，DMSO终浓度为0.5％，37℃、5％CO2培养1小时。然后在除细胞对照孔外的每孔中加入10微升2μg/L的EGF，在细胞孔加入10微升无血清DMEM培养45分钟；以不加入EGF与药物处理的细胞作为细胞对照，以不加入药物的只加入EGF处理的细胞作为EGF对照。
(4)吸掉培养基后加入100μL细胞裂解液，封板模封置于-80℃冰箱中过夜。
3.2ELISA检测步骤
参照R&D DYC3570E说明书进行操作。
(1)R&D捕获抗体(DYC3570E)用PBS1:180稀释，稀释好的抗体100μL/孔加入ELISA反应板(Corning costar42592)，25℃摇床包被过夜；
(2)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(3)加入200μL封闭液，25℃摇床孵育2小时；
(4)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(5)加入40μL细胞裂解缓冲液和60μL细胞裂解液，25℃摇床孵育2小时；
(6)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(7)检测抗体用检测抗体稀释液以试剂盒说明规定比例稀释，每孔加入100μL，25℃摇床避光孵育1小时；
(8)360μL洗涤缓冲液洗3次；
(9)将TMB底物(R&D DY999)中的A试剂和B试剂以1:1进行混合，每孔100μL，25℃摇床避光孵育20分钟；
(10)2N H2SO4每孔加入50μL；
(11)用酶标仪读板(Thermo Multiskan K3)分别测定细胞对照、空白对照以及药物处理情况下的OD450值和OD570值，并用相同孔的OD450值减去相应OD570值分别得到ODEGF、OD药物、OD细胞。
3.3数据分析
抑制率(％)＝100％×(ODEGF-OD药物)/(ODEGF-OD细胞)
3.4将计算得到的抑制率用XLFIT5.0软件计算出IC50值，参见表2。
表2 细胞活性ELISA法测定结果
由表2可知，与阳性对照物BIBW2992相比，本发明实施例的化合物对EGFR突变型细胞具有较好的选择抑制活性。
测试例3：MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)方法检测细胞抑制活性
MTT测试方法步骤采用本领域技术人员熟知的方法进行，方法中所用试剂均可市购得到。
首先，移除培养基并加入1mL0.25％的胰酶/EDTA(Gibco，25200-056)。洗一次后，再加入1.5mL胰酶/EDTA消化贴壁细胞，至细胞分离，然后加入3.5mL培养基终止消化。将消化完的细胞悬浮液移至15mL离心管，1300rpm离心3分钟后弃上清，并用新鲜的培养基重悬细胞。然后细胞计数，并稀释细胞至以下浓度：H1975细胞每毫升2.78万，A431细胞和NIH3T3细胞(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)每毫升3.33万。将细胞种入96孔板(BD3072)，每孔90μL，培养过夜。
A431细胞培养基为：10％FBS(Gibco，10099-141)DMEM(Hyclone SH30243.01B)；
NIH3T3细胞培养基为：10％FBS(Gibco，10099-141)DMEM(Hyclone SH30243.01B)；
H1975细胞培养基为：10％FBS(Gibco，10099-141)RPMI-1640(HycloneSH30809.01B)；
取20μL10mM待测化合物，按照如下浓度梯度(2000，666.67，222.22，74.07，24.69，8.23，2.74，0.91μM)稀释200X药品，再加入无血清培养基(终浓度为：100，33.33，11.11，3.704，1.235，0.412，0.137，0.046μM)，并每孔加入10ul药品到细胞培养板内其中DMSO终浓度为0.5％。
加药后将细胞放入培养箱，培养72小时后，每孔加入10μL的5mg/ml的MTT(Sigma，M5655)溶液，然后将96孔板放入37℃5％CO2培养箱孵育4小时。
再在2000rpm，5min的条件下离心平板，移除上清后，每孔加入150μL DMSO，并在摇床中震荡平板至所有结晶紫溶解。最后使用酶标仪测定492nm光吸收，使用XLFIT5.0软件(英国IDBS公司)计算IC50。
表3 化合物对细胞生长的抑制活性和选择性
由表3可知，与阳性对照物BIBW2992相比，本发明实施例化合物对EGFR突变型细胞(H1975细胞)表现出较强的抑制活性，而对EGFR野生型细胞(A431细胞)表现出较弱抑制活性，因此本发明的化合物对EGFR突变型细胞具有较好的选择抑制活性。
表4 化合物对NIH3T3细胞的毒性测试结果
化合物编号 NIH3T3细胞MTT测试(IC50/uM)
J-1 4.834
J-2 5.457
J-3 3.905
J-4 3.646
J-5 2.818
J-6 8.205
J-7 3.375
J-9 >10
J-10 3.271
J-11 5.567
J-12 4.734
J-13 2.966
J-14 7.774
J-16 >10
J-17 >10
J-18 >10
J-19 >10
BIBW2992 2.750
由表4可知，与阳性对照物BIBW2992相比，本发明实施例化合物对NIH3T3细胞具有较高的IC50值，因此显示出较小的毒性。
从体外激酶活性抑制、细胞内EGFR磷酸化水平抑制、细胞生长抑制实验显示，在纳摩尔浓度下，本发明实施例化合物对突变型EGFR酶活性、EGFR磷酸化水平、细胞增殖表现出较强的抑制活性，而对野生型EGFR酶活性、EGFR磷酸化水平、细胞增殖表现出较弱抑制活性，因此本发明化合物对EGFR突变株细胞具有较好的选择抑制活性。
而且，细胞毒性实验中对NIH-3T3细胞有极弱的抑制作用，故表现出较低的细胞毒性。
因此，此类化合物对T790M突变的EGFR有较好的选择抑制活性且细胞毒性低，是第二代EGFR-TKI的理想替代物。同时本发明的化合物表现出良好的生物利用度。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (8)

1.一种式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、或其立体异构体：
式中，
Z1、Z2各自独立地为N或CR0；其中，R0为氢、C1-10烷基；
R1、R2各自独立地为氢；
R3为甲基、环丙基、取代或未取代的C3-10杂环基、苯基，环己烯基；所述取代或未取代的C3-10杂环基选自下组：
其中，Z11为CR15或N；Z21为CR26或N；Z31为CR37或N；Z41为CR44或N；n1为2；n2为2；
R11、R21、R41、R12、R13、R14、R15、R22、R23、R24、R25、R26、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R37、R42、R43、R44、R51、R52、R53、R54各自独立地为氢、或C1-10烷基；R61为氢、氟、氯、甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、-COCH3、-SO2CH3；
R4选自下组：
R5为甲氧基；
R6、R7各自独立地为氢。
2.如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其特征在于，所述式(I)化合物为式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)、或式(IX)所示的化合物：
式中，R11、R12、R13、R14、Z11如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R21、R22、R23、R24、R25、Z21如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R31、R32、R33、R34、R35、R36、Z31如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R41、R42、R43、Z41如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R51、R52、R53、R54如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R61、n1、n2如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R41、R42、R43、Z41如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义；
式中，R51、R52、R53、R54如权利要求1所定义；R0、R1、R2、R4如权利要求1所定义。
3.如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体，其特征在于，所述式(I)化合物选自下组：
4.一种药物组合物，所述组合物包括权利要求1至3中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；以及药学可接受的载体。
5.如权利要求1至3中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体在(i)制备调控EGFR酪氨酸激酶活性的药物或者(ii)制备预防和/或治疗EGFR相关疾病的药物中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的EGFR相关疾病选自：癌症、糖尿病、免疫系统疾病、神经退行性疾病、心血管疾病或使用EGFR调节剂治疗期间具有获得性耐药性的疾病。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述获得性耐药性的疾病是由EGFR外显子20编码的T790突变所引起的疾病、或者包含EGFR外显子20编码的T790突变所引起的疾病。
8.一种药用组合物，所述药用组合物包括：权利要求1-3中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体；以及其它药物，所述其它药物为选自下组药物中的一种或多种：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼、XL647、NVP-AEE-788、ARRY-334543、EKB-569、BIBW2992、HKI272、BMS-690514、CI-1033、凡德他尼、PF00299804、WZ4002、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、帕尼突单抗、马妥珠单抗、尼妥珠单抗、扎鲁木单抗、帕妥珠单抗、MDX-214、CDX-110、IMC-11F8、Zemab、Her2疫苗PX1041、HSP90抑制剂、CNF2024、坦螺旋霉素、阿螺旋霉素、IPI-504、SNX-5422、NVP-AUY922。
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