CN105473137A - 用于预防或治疗绝经期症状的、包含作为活性成分的含有香豆雌酚的大豆提取物的组合物 - Google Patents
用于预防或治疗绝经期症状的、包含作为活性成分的含有香豆雌酚的大豆提取物的组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种特别用于预防绝经期疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的含有香豆雌酚的大豆提取物，更具体地，本发明涉及一种特别用于预防绝经期疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于预防更年期疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的含有香豆雌酚的豆提取物。更具体地，本发明涉及一种用于预防更年期疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
背景技术
更年期症状是指由雄性或雌性荷尔蒙分泌的减少引起的症状。尤其，对于女性来说，更年期疾病会因为卵巢生成的雌激素的减少而在绝经前后出现并长达约2-10年，会引发如高烧、出汗、失眠、抑郁症、尿失禁、疼痛、骨质疏松症、心肌梗塞、中风和高血压等症状。
骨质疏松症，是在更年期症状中最为典型的疾病，是指因破骨细胞的活性比成骨细胞的活性增加而总骨量减少的症状。骨质疏松症的发病会降低皮质骨的宽度，扩大骨髓腔并降低骨密度，使骨骼具有更多孔。骨骼的物理强度会随着骨质疏松症的发展而降低，导致背部疼痛和关节疼痛，从而甚至轻微冲击也能轻易骨折。
为了预防和治疗更年期症状，已研发出激素替代疗法、非类固醇类药物、用于治疗骨质疏松症的药物疗法等。目前，最有效的方法是激素替代疗法。然而，已知长期的激素给药会引起如癌症风险的增加、头痛、体重增加等副作用。因此，人们迫切需要研发一种源自天然物质的、更安全且更有效的治疗剂。
发明内容
技术问题
本发明在于提供一种对更年期症状或疾病有效的、包含天然提取物的组合物。
技术方案
一方面，本发明提供一种用于预防或治疗更年期疾病的药物组合物，该药物组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
另一方面，本发明提供一种用于预防或改善更年期疾病的保健食品组合物，该保健食品组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
又一方面，本发明提供一种用于预防或改善更年期皮肤症状的化妆品组合物，该化妆品组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
有益效果
本发明的包含作为活性成分的含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物可以有助于预防、治疗和改善更年期疾病或更年期症状。具体地，本发明的组合物可以缓解更年期期间的体重增加，可以使骨密度恢复到与更年期前的骨密度具有相似水平，且可以缓解更年期期间的皮肤厚度和皮肤弹性的降低。此外，由于本发明的组合物还可以缓解更年期期间的经皮水分流失，可以激活雌激素，且可以降低用于降解胶原蛋白的MMP1的量并同时增加前胶原的量，从而使本发明的组合物可以有效地用于更年期疾病或更年期症状。此外，本发明的包含作为活性成分的天然产物的组合物即使长期使用也没有耐受性，且几乎没有副作用。
附图说明
图1展示了通过卵巢切除诱导更年期的小鼠模型在14周内的体重变化的测量结果(x轴：周，y轴：克(g))。
图2展示了通过卵巢切除诱导更年期的小鼠模型中的30周龄无毛小鼠的皮肤厚度的测量结果(y轴：克(g))。
图3展示了通过卵巢切除诱导更年期的小鼠模型中的无毛小鼠的皮肤弹性和粘度的测量结果(y轴：单位)。
图4展示了通过卵巢切除诱导更年期的小鼠模型中的无毛小鼠的经皮水分流失的测量结果。
图5展示了测试组中的雌激素受体的活化程度的比较结果。
图6展示了测试组中的MMP1表达的抑制程度的比较结果。
图7展示了测试组中合成前胶原的比较结果。
具体实施方式
一方面，本发明涉及一种用于预防或治疗更年期疾病的药物组合物，该药物组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
另一方面，本发明涉及一种用于预防或改善更年期疾病的保健食品组合物，该保健食品组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
又一方面，本发明涉及一种用于预防或改善更年期皮肤症状的化妆品组合物，该化妆品组合物包含作为活性成分的发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
在本发明中，所述“豆”可以为可发芽并包含或合成香豆雌酚的豆科属中的任何植物。具体地，所述豆可以为用于制作豆酱或豆腐的豆、豆芽用豆、煮饭用豆、或毛豆(greenbean)。用于豆酱或豆腐的豆品种包括大豊、湖酱、壮元、大潢、sodam、松鹤、大元、眞品、蛋白、豆油、新八达、太光、万里、长寿、无限、白云、saeal、黄金和长叶等。豆芽用豆的品种包括shinhwa豆、sowon豆、安平、西南、多彩、小绿、小湖、疏明、多元、丰产豆芽、益山豆芽、小白豆芽、光安、短叶和银河等。用于煮饭用的豆品种包括靑磁、黑靑、褐味、鲜黑、黑豆,一品黑豆等。此外，毛豆的品种包括daol、新绿、saeul、geomjeongeul、夕凉毛豆和华严毛豆等。
更具体地，在本发明中，所述“豆”可以为选自“霜太”黑豆(GlycinemaxMERR，黑豆的一个品种)、“鼠目太”黑豆(RhynchosiaNolubilis，黑豆的一个品种)、黑大豆(Glycinemax(L.)Merr.)、青豆(GlycinemaxMERR)、黄豆(GlycinemaxMERR)、蚕豆(Viciafaba)、菜豆(Phaseolusvulgaris)、黑白斑豆(PhaseolusvulgarisL.)、小红豆(Vignaangularis)、小黑豆(PhaseolusangularisW.F.WIGHT.)、豆芽用豆(Glycinemax(L.)Merr.)和大豆(Glycinemax)中的一种或多种豆。
在本发明中，所述“发芽并发酵的豆”是指经过同时进行发芽和发酵或按顺序进行发芽和发酵的豆
根据本发明的一方面，只要所述发芽和发酵可以持续发生，所述发芽和发酵中的一种或多种过程的条件就不受特别限制。例如，所述发芽或发酵的条件可如下。
例如，所述发芽可通过将所述豆的至少一部分与氧气或空气接触来进行。
所述发芽可以在反应器内进行，该反应器包含占所述反应器体积的20-80vol％的培养基，具体为40-60vol％的培养基，更具体为45-55vol％的培养基。
只要所述发芽和/或发酵可以圆满地实现，在所述发芽中使用的培养基就不受特别限制。具体地，可以使用液体营养培养基，更具体为马铃薯葡萄糖肉汤(PDB)。根据本发明的另一方面，所述培养基可以包含占所述培养基总重量的0.001-10wt％、具体为0.1-5wt％、更具体为0.5-2wt％的糖。
根据本发明的一方面，所述发芽可通过将占所述反应器体积的1-50vol％、具体为5-20vol％、更具体为6-12vol％的所述豆接种于所述反应器中来进行。
根据本发明的一方面，所述发芽可通过提供最大量的氧气或空气来进行。例如，当所述发芽在5000mL反应器内进行时，可以2,500vvm/m速率提供氧气或空气。而且，当所述发芽在3L反应器内进行时，可以15,000vvm/m速率提供氧气或空气。可通过提供充分的氧气或空气，来令人满意地进行所述发芽。
根据本发明的一方面，所述发芽可以在20-35℃，具体在20-30℃的温度下进行。根据本发明的另一方面，所述发芽可以在遮光条件下进行。根据本发明的另一方面，所述发芽可以进行2-10天。例如，待所述发芽进行2天之后，发芽和发酵可同时或隔一段时间进行6-8天。
所述发酵可通过将所述豆的至少一部分与微生物接触来进行。
具体地，所述发酵可以通过将微生物接种于所述豆1-10次、具体为1-5次、更具体为1-3次来进行。通过该过程，所述微生物可与所述豆更好地相接触。根据本发明的一方面，所述微生物可以为本领域熟知的可发酵豆的任何微生物，并不受限制。具体地，所述微生物可以为真菌、酵母或乳酸菌。更具体地，所述真菌可以为曲霉属、青霉属或红曲霉属的微生物，且所述微生物可以为选自黑曲霉、酱油曲霉、米曲霉和婴儿双歧杆菌中的一种或多种。
只要所述微生物可与所述豆接触，所述发酵可通过任何方法不受限制地进行。例如，可通过将所述微生物孢子的悬浮液涂在所述豆的子叶表面上或将所述微生物的粉末加入到包含所述豆的培养基内，而使所述微生物与所述豆相接触。
在所述发酵过程中，可将占所述培养基的0.05-2wt％、具体为0.75-2wt％、更具体为1.0-2.0wt％的所述微生物与所述豆进行接触。
当制备所述“发芽并发酵的豆”时，通过在所述豆与所述微生物相接触时使所述豆与氧气或空气进行接触，来同时进行所述发芽和发酵。具体地，当所述豆浸在包含所述微生物的培养基内时，所述豆可以与所述氧气或空气进行接触。
当制备所述“发芽并发酵的豆”时，发芽和发酵可通过如进行发芽之后再进行发酵，或进行发酵之后再进行发芽来连续地进行。具体地，待发芽进行2天后，发芽和发酵可同时或按顺序进行6-8天。
当制备所述发芽并发酵的豆时，通过用无菌水、乙醇和次氯酸钠中的一种或多种，具体地用无菌水来清洗所述豆，可对所述豆进行灭菌。
通过上述过程获得的包含香豆雌酚的豆可用水或乙醇在室温或高温下进行提取。所得提取物可被完全地浓缩，再分散于水中，然后用等量的、选自己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、丁醇、乙醇、甲醇和水中的一种或多种溶剂进行分馏，从而获得包含香豆雌酚的豆提取物。然而，所述提取方法不限于此，可使用任何提取方法来获得包含香豆雌酚的最终提取物。
在本发明中，所述“香豆雌酚”可具有化学式1的结构。
【化学式1】
在根据本发明一方面的药物组合物或保健食品组合物中，所述更年期疾病可包括与更年期相关的肌肉疾病、骨疾病、心脏疾病、皮肤疾病或肥胖。
所述肌肉疾病可以为与所述更年期相关的类风湿性关节炎或退化性关节炎；所述骨疾病可以为与所述更年期相关的骨质疏松症、腰酸背痛、佝偻病、软骨病或骨Paget’s病；所述心脏疾病可以为与所述更年期相关的心绞痛或动脉硬化；或所述皮肤疾病可以为皮肤发红或皮肤干燥。
在根据本发明一方面的化妆品组合物中，更年期皮肤症状可具体包括皮肤发红、肥胖、皮肤厚度变化、皮肤弹性下降或皮肤干燥。然而，不限于此，那些与所述更年期相关的皮肤状态的变化均包括在内。
本发明一个示例性实施例的药物组合物可包含如防腐剂、稳定剂、保湿剂、乳化促进剂、用于控制渗透压的盐和/或缓冲液等的药物辅料、以及其他有助于治疗的物质，且所述药物组合物可根据常用方法制备成各种用于口服或胃肠外给药的剂型。
用于口服给药的剂型包括，如片剂、丸剂、硬或软胶囊、液体、悬浮液、乳剂、糖浆、粉末、粉剂、细粒剂、颗粒剂、微丸等，且除了所述活性成分外，这些剂型可包含表面活性剂、稀释剂(例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和甘氨酸)或润滑剂(例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁盐或钙盐、和聚乙二醇)。所述片剂可包含如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮的粘合剂，且如有需要可包含药物添加剂，例如，如淀粉、琼脂、或藻酸或其钠盐的崩解剂，吸收剂，着色剂，调味剂，甜味剂等。所述片剂可通过一般的混合、制粒或包衣方法来制备。
用于肠胃外给药的剂型可以为，如注射剂、药用滴、软膏、洗剂、凝胶、霜剂、喷雾剂、悬浮液、乳剂、栓剂、贴剂等，但不限于此。
本发明的一个示例性实施例的药物组合物可通过口服给药或肠胃外给药，如直肠给药、局部给药、经皮给药、静脉给药、肌内给药、腹膜内给药、皮下给药等。例如，本发明的一个示例性实施例的药物组合物可向头皮进行局部给药。
所述活性成分的药学上可接受的剂量或给药剂量可根据待治疗的受试者的年龄、性别和体重、待治疗的特定疾病或病理状况、所述疾病或病理状况的严重程度、给药途径和诊断者的判断而有所区别。基于这些因素的所述给药剂量的确定是在本领域的技术人员的能力范围内。通常的给药剂量可以为0.01-1000mg/kg/天，具体为1-40mg/kg/天。然而，本发明的范围不会以任意方式受限于所述给药剂量。
本发明的另一个示例性实施例的保健食品组合物可被加工成发酵乳、奶酪、酸奶、果汁、益生菌、健康补助剂等，且所述保健食品组合物可用作各种其他食品添加剂。
所述组合物可在不对主要效果产生不良影响的范围内包含能向主要效果给予协同效果的其他成分。例如，所述组合物可进一步包含用于改善物理特性的添加剂，如香料、颜料、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、矿物质、乳化剂、合成聚合物等。此外，所述组合物可进一步包含辅助成分，如水溶性维生素、脂溶性维生素、多肽、多糖、海藻提取物等。根据特定剂型或使用目的，本领域的技术人员可容易地选取这些成分，且可在不对本发明的目的和效果产生不良影响的范围内选择所述添加量。
本发明的组合物可制备成各种剂型，包括溶液、乳剂、粘稠的混合物、片剂、粉末等，且所述组合物可通过包括单纯的饮用、注射、喷洒、挤压等在内的各种方法来进行给药。
在本发明一方面的组合物中，所述豆可以为经过同时或按顺序发芽和发酵的发芽并发酵的豆。在本发明一方面的组合物中，所述豆可以为先进行发芽再进行发酵的豆。
在本发明一方面的组合物中，可如下进行所述发芽：在包含占反应器总体积的20-80vol％的培养基的反应器内，使占所述反应器总体积的1-50vol％的所述豆进行发芽。
在本发明一方面的组合物中，所述发芽可在20-35℃的暗处进行2-10天。
在本发明一方面的组合物中，所述发酵可通过使所述发芽的豆与微生物相接触来进行。
在本发明一方面的组合物中，所述微生物可以为选自真菌、酵母和乳酸菌中的一种或多种微生物。
在本发明一方面的组合物中，所述微生物可以为选自黑曲霉、酱油曲霉、米曲霉和婴儿双歧杆菌中的一种或多种微生物。
在本发明一方面的组合物中，所述组合物可以包含占所述组合物总重量的0.0001-10wt％的所述发芽并发酵的豆提取物，该提取物含有香豆雌酚。当所述提取物的含量少于0.0001wt％时，对所述更年期症状或疾病的效果甚微。而且，当所述提取物的含量超过10wt％，所述组合物的其他成分的含量将受到影响。为此，所述组合物可包含占所述组合物总重量的0.001-9.5wt％、0.01-9wt％或0.1-8.5wt％的香豆雌酚。
实施例
以下，将通过实施例描述本发明。然而，以下实施例仅用作说明为目的而使用，且本发明的范围不限于所述实施例，这对本领域的技术人员来说是显而易见的。
【实施例1】含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆及其提取物的制备
在接种微生物之前，先用高压灭菌器在121℃下对所有实验设备进行灭菌。
豆使用丰产豆芽用豆(sowon豆，Glycinemax(L.)Merrill)。用灭菌水、乙醇和次氯酸钠对所述豆的籽清洗两次进行灭菌。然后，制备占反应器体积的20-80vol％的量的培养基，该培养基包含1％蔗糖、1％葡萄糖和1％SRT中的一种或多种。例如，当使用10吨的反应器时，所述培养基的量为8吨。接种所述豆的籽，密度为占所述反应器体积的3-12vol％。例如，当使用10吨的反应器时，所用的籽的量为1.2吨。在25℃、遮光且以15,000vvm/m速率提供空气的条件下，在包含有所述培养基和所述豆的籽的反应器内使所述豆的籽进行发芽。
第二天，当所述豆开始发芽时，向所述培养基加入占所述培养基总重量的0-1.25wt％的米曲霉(Mediogen公司，1×109CFU/g)并进行发酵至第8天。
因此，通过加入80℃或以上的热水，对所得的发芽并发酵的豆进行提取，然后干燥。在所得的发芽并发酵的豆提取物中，香豆雌酚的浓度约为0.1％。
【测试实施例1】发芽并发酵的豆提取物对更年期体重增加的改善
将体重为26-27g的雌性无毛小鼠用作实验动物。在23±1℃、40-60％湿度和每隔12小时明暗循环的条件下，饲养所述实验动物。无限制地提供基础饲料和饮用水。在采血前一天，只提供饮用水。
卵巢切除术是将15周龄无毛小鼠麻醉并用70％乙醇消毒后在无菌条件下进行。顺着靠一侧背部下面的脊椎线切开皮肤组织约2-3cm，切开有卵巢的部位的肌肉和腹膜约1.5cm，使卵巢暴露出来。待移除卵巢后，用丝线缝合所述腹膜、肌肉和皮肤。通过相同方法，另一侧的卵巢也进行移除。作为对照组，进行假手术，即切开肌肉和腹膜但并不移除卵巢、并缝合。待所述外科手术后，允许所述小鼠恢复一周。
将所述实验动物分成对照组(假手术组)和卵巢切除组。所述卵巢切除组进一步被分成发芽并发酵的豆提取物500mg/kg给药组和香豆雌酚0.5mg/kg给药组，每组各有10只小鼠。确定用于所述香豆雌酚给药组的给药剂量，以使所述发芽并发酵的豆中的香豆雌酚的量与所述香豆雌酚0.5mg/kg给药组中的香豆雌酚的量相同(所述发芽并发酵的豆提取物中的香豆雌酚的含量＝0.1％；500mg/kgx0.1％＝0.5mg/kg)。对于每个测试组，向经过卵巢切除术后1周的14周至16周龄小鼠提供用上述给药剂量制成的饲料14周，直至它们长成30周龄。
通常，通过卵巢切除来诱导的更年期小鼠模型与正常组相比体重有增加。该现象也能在处于更年期的女性中找到。在相关领域中显而易见的是，能够改善卵巢切除模型中的体重增加，就可以对与更年期相关的肥胖起到显著作用。
当提供上述饲料时，每周测量一次所述实验动物的体重，总共测14周(图1)，与正常组相比，所述卵巢切除组的体重增加了20％。然而，所述香豆雌酚给药组的体重增加显著少于所述卵巢切除组。此外，如图1所示，所述发芽并发酵的豆提取物给药组展示出的体重增加少于相同含量香豆雌酚给药组(亦即，所述发芽并发酵的豆提取物比香豆雌酚展示出更好的改善体重增加的效果)。这表明，通过除香豆雌酚之外的各种成分的组合，所述发芽并发酵的豆提取物展现出协同效果。
【测试实施例2】发芽并发酵的豆提取物对骨密度的改善
通常，在所述更年期中骨密度会下降，从而甚至轻微冲击也容易发生骨折。因此，如果由于骨密度的上升而使折断强度有增加的话，就可以判断所述更年期症状得到了改善。图1中展示了通过双能X射线吸收测量仪测量与测试实施例1中的测试组相同的测试组(30周龄)的结果。
【表1】
| 骨密度(g/cm2) | |
| 对照组 | 0.1975 |
| 卵巢切除组 | 0.1821 |
| 卵巢切除+香豆雌酚给药组 | 0.1902 |
| 卵巢切除+发芽并发酵的豆提取物给药组 | 0.1959 |
从表1中可知，所述卵巢切除组的骨密度与所述对照组相比降低了约8％，而被所述发芽并发酵的豆恢复至与所述对照组的骨密度相似的水平。所述发芽并发酵的豆提取物给药组的结果与相同含量香豆雌酚给药组的结果相比更优异，这表明在所述发芽并发酵的豆提取物中各种成分的组合提供了协同效果。
【测试实施例3】发芽并发酵的豆提取物对与更年期相关的皮肤状态的改善
【测试实施例3-1】与更年期相关的皮肤厚度降低的改善
通过使用游标卡尺(HEPT，Cjina)，测量与测试实施例1中的测试组相同的测试组(30周龄)的皮肤厚度。从图2可知，所述卵巢切除组与没有经过卵巢切除的对照组相比皮肤厚度降低了约10％，且所述发芽并发酵的豆给药组展示出与所述对照组近似的皮肤厚度。相同含量香豆雌酚给药组的结果与所述卵巢切除组的结果相同。由此可确定，所述发芽并发酵的豆提取物的摄取提供优异地改善与所述更年期相关的皮肤厚度降低的效果。
【测试实施例3-2】与更年期相关的皮肤弹性降低的改善
通过使用皮肤弹性测量仪(Courage+KhazakaElectronicGmbH，Cologne，德国)，测量与测试实施例1中的测试组相同的测试组(30周龄)的皮肤弹性。从图3可知，所述卵巢切除组在所有测定项目中与所述对照组相比展示出显著更低的值，且所述发芽并发酵的豆提取物的摄取使皮肤弹力恢复到与未经过卵巢切除的所述对照组的皮肤弹性极相近的水平。具体地，所述效果与相同含量香豆雌酚给药组的效果相比更优异。由此可确定，所述发芽并发酵的豆提取物的摄取提供优异地改善与所述更年期相关的皮肤弹性降低的效果。
【测试实施例3-3】与更年期相关的经皮水分流失的改善
通过使用经皮水分流失测量仪(Courage+KhazakaElectronicGmbH,Cologne,德国)，测量与测试实施例1中的测试组相同的测试组(30周龄)的经皮水分流失。从图4可知，所述卵巢切除组与所述对照组相比经皮水分流失增加了约30％，且所述发芽并发酵的豆提取物的给药使经皮水分流失显著下降至低于与未经过卵巢切除的所述对照组的经皮水分流失的水平。具体地，所述效果与相同含量香豆雌酚给药组的效果相比更优异。由此可确定，所述发芽并发酵的豆提取物的摄取提供优异地改善与所述更年期相关的经皮水分流失的效果。
【测试实施例4】发芽并发酵的豆提取物对雌激素受体的活化
通过利用雌激素受体来研究所述发芽并发酵的豆提取物的雌激素活性(受体检测)。用100ppm发芽并发酵的豆提取物(含有0.1％香豆雌酚)或0.1ppm香豆雌酚处理人ER受体检测试剂盒(IndigoBioscience)24小时。用0.1ppm的17-雌二醇处理阳性对照组。雌二醇起到所述雌激素受体的配体的作用，尤其作用于ERα(雌激素受体α)和ERβ(雌激素受体β)。使用与所述提取物相同体积的蒸馏水处理阴性对照组(图5中的(-))。
待处理结束后，通过利用Tecan公司的无限M200pro多片读卡器+注射系统，测量荧光素酶活性。其结果在图5中展示。
根据结果(图5)可确定，所述发芽并发酵的豆提取物给药组与作为所述雌激素受体的配体的雌二醇相比展示出更好的与所述雌激素受体结合的效果。由此可预期，所述发芽并发酵的豆提取物可生成与雌激素相同的信号，且对更年期疾病或更年期症状提供显著效果。所述雌激素受体的活化效果比相同含量香豆雌酚给药组更优异。由此认为，所述发芽并发酵的豆提取物中的各种成分的组合提供协同效果。
【测试实施例5】发芽并发酵的豆提取物对胶原蛋白降解的抑制
【测试实施例5-1】IL-6、iNOS和MMP1基因的表达水平的比较
已知，在所述更年期内炎症反应通常会增加。激活的炎症反应会增加用于降解胶原蛋白的MMP1(基质金属蛋白酶1)表达，从而诱导胶原蛋白降解而使皮肤弹性下降。因此，通过抑制炎症反应，有可能通过抑制胶原蛋白的降解来维持皮肤弹性。为了研究香豆雌酚和含有相同量的香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物对炎症反应的抑制效果，通过用100ppm发芽并发酵的豆提取物(含有0.1％香豆雌酚)或0.1ppm香豆雌酚进行预处理3小时而后用LPS(脂多糖，10g/mL)处理12小时，来在人真皮成纤维细胞内诱导炎症反应。用与所述提取物相同体积的蒸馏水处理阴性对照组(图6中的(-))。通过用Invitrogen公司TRIzol试剂提取RNA后，利用Fermentas公司逆转录试剂盒合成cDNA。然后，通过Q-PCR对炎性细胞因子(IL-6)、氧化应激诱导蛋白(iNOS)和胶原酶(MMP1)基因的表达进行定量。
如结果(图6)所示，发现由于所述发芽并发酵的豆提取物的给药，与炎症反应有关的炎性细胞因子(IL-6)和氧化应激诱导蛋白(iNOS)的水平和与皮肤弹性有直接关联的MMP1的表达有显著下降。该结果比相同含量香豆雌酚给药组的效果更优异。由此确定，所述发芽并发酵的豆提取物中的各种成分的组合提供协同效果。
【测试实施例5-1】前胶原的增加
待从测试实施例5-1的每个测试组中收集细胞培养基后，通过利用Millipore公司的前胶原ELISA试剂盒，测量分泌到所述培养基内的前胶原的量。
由结果(图7)可确定，通过用所述发芽并发酵的豆提取物的处理，前胶原的合成和分泌有显著增加。该结果比相同含量香豆雌酚给药组的效果更优异。由此确定，所述发芽并发酵的豆提取物中的各种成分的组合提供协同效果。
【测试实施例6】发芽并发酵的豆提取物对光老化的改善
已知，在更年期内的皮肤会因为皮肤厚度的降低而对如紫外线的皮肤刺激较弱。制备3D人工皮肤，且待用紫外线照射后，检测所述发芽并发酵的豆提取物对皮肤的效果。
在胶原溶液中，通过混合2.64x105成纤维细胞来制备基质。在上面接种5x106角质形成细胞，通过处理1.2mM钙来诱导向人工皮肤的分化。待2周后，在所述细胞上照射20mJ紫外线并用0.1ppm香豆雌酚或100ppm发芽并发酵的豆提取物处理后，收集所述培养基，通过与测试实施例5相同的方法，测量MMP-1和前胶原的表达水平。在表2中展示了相对于非紫外线照射组被设为100时的结果。
【表2】
| MMP-1 | 前胶原 | |
| 非紫外线照射组 | 100.0％ | 100.0％ |
| 紫外线照射组 | 142.4％ | 68.7％ |
| 紫外线照射+香豆雌酚 | 122.8％ | 82.4％ |
| 紫外线照射+发芽并发酵的豆提取物 | 108.3％ | 95.7％ |
从表2中可知，所述发芽并发酵的豆提取物有效地改善了由紫外线照射引起的MMP-1表达的增加及前胶原表达的下降。与所述发芽并发酵的豆提取物相比，相同含量香豆雌酚给药组的效果甚微。亦即，所述发芽并发酵的豆提取物的结果比相同含量香豆雌酚给药组更佳。由此确定，所述发芽并发酵的豆提取物中的各种成分的组合提供协同效果。
下面，将描述本发明的组合物的制备和剂型实施例。然而，所述药物组合物、化妆品组合物或保健食品组合物可以存在各种形式，且以下实施例不受任何限制并仅作为说明为目的而使用。
【制备实施例1】软胶囊的制备
根据常用方法，混合80mg含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、2mg棕榈油、8mg氢化植物油、4mg黄蜡和9mg卵磷脂，来制备软胶囊填充溶液。在每个胶囊中填充400mg所述溶液来制备软胶囊。另外，用明胶66重量份、甘油24重量份和山梨糖醇溶液10重量份来制备软胶囊糖衣片。然后，在所述软胶囊片中填充所述填充溶液，来制备包含400mg本发明的组合物的软胶囊。
【制备实施例2】片剂的制备
混合80mg含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖，并用流化床干燥器进行制粒。待加入6mg糖后，根据常用方法，将504mg所得组合物制成片剂。
【制备实施例3】饮剂的制备
混合80mg含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g低聚糖糖浆。待加入300mL纯净水后，将200ml所得混合物装瓶。然后，在130℃下灭菌4-5秒来制备饮剂。
【制备实施例4】颗粒剂的制备
混合80mg含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉，用流化床干燥器制粒，并装袋。
【剂型实施例1】柔肤水(润肤化妆水)
【表3】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物 | 0.0025 |
| 甘油 | 3.0 |
| 丁二醇 | 2.0 |
| 丙二醇 | 2.0 |
| 聚羧乙烯 | 0.1 |
| PEG-12壬基苯基醚 | 0.2 |
| 聚山梨酯80 | 0.4 |
| 乙醇 | 10.0 |
| 三乙醇胺 | 0.1 |
| 防腐剂、色素和香料 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
【剂型实施例2】滋养化妆水(牛奶乳液)
【表4】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物 | 0.0025 |
| 甘油 | 3.0 |
| 丁二醇 | 3.0 |
| 丙二醇 | 3.0 |
| 聚羧乙烯 | 0.1 |
| 蜂蜡 | 4.0 |
| 聚山梨酯60 | 1.5 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 5.0 |
| 角鲨烷 | 5.0 |
| 山梨醇倍半 | 1.5 |
| 液体石蜡 | 0.5 |
| 鲸蜡硬脂醇 | 1.0 |
| 三乙醇胺 | 0.2 |
| 防腐剂、色素和香料 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
【剂型实施例3】滋养霜
【表5】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物 | 0.0025 |
| 甘油 | 3.0 |
| 丁二醇 | 3.0 |
| 液体石蜡 | 7.0 |
| β-葡聚糖 | 7.0 |
| 卡波姆 | 0.1 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 3.0 |
| 角鲨烷 | 5.0 |
| 鲸蜡硬脂基葡糖苷 | 1.5 |
| 脱水山梨醇硬脂酸酯 | 0.4 |
| 聚山梨酯60 | 1.2 |
| 三乙醇胺 | 0.1 |
| 防腐剂、色素和香料 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
【剂型实施例4】按摩霜
【表6】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物 | 0.0025 |
| 甘油 | 8.0 |
| 丁二醇 | 4.0 |
| 液体石蜡 | 45.0 |
| β-葡聚糖 | 7.0 |
| 卡波姆 | 0.1 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 3.0 |
| 蜂蜡 | 4.0 |
| 鲸蜡硬脂基葡糖苷 | 1.5 |
| 山梨醇倍半 | 0.9 |
| 矿脂 | 3.0 |
| 石蜡 | 1.5 |
| 防腐剂、色素和香料 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
【剂型实施例5】面膜
【表7】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物 | 0.0025 |
| 甘油 | 4.0 |
| 聚乙烯醇 | 15.0 |
| 玻尿酸提取物 | 5.0 |
| β-葡聚糖 | 7.0 |
| 尿囊素 | 0.1 |
| 壬基苯基醚 | 0.4 |
| 聚山梨酯60 | 1.2 |
| 乙醇防腐剂 | 6.0适量 |
| 防腐剂、色素和香料 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
【剂型实施例6】软膏
【表8】
| 成分 | 含量(wt％) |
| 含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物 | 0.0025 |
| 甘油 | 8.0 |
| 丁二醇 | 4.0 |
| 液体石蜡 | 15.0 |
| β-葡聚糖 | 7.0 |
| 卡波姆 | 0.1 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 3.0 |
| 角鲨烷 | 1.0 |
| 鲸蜡硬脂基葡糖苷 | 1.5 |
| 脱水山梨醇硬脂酸酯 | 0.4 |
| 鲸蜡硬脂醇 | 1.0 |
| 蜂蜡 | 4.0 |
| 防腐剂、色素和香料 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
虽然已展示并描述所述示例性实施例，但本领域的技术人员应当理解的是，对上述内容在形式及细节上的各种变更不会脱离所附权利要求书中限定的本发明的精神和范围。
工业应用性
本发明涉及一种用于预防更年期疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的含有香豆雌酚的豆提取物。尤其，本发明涉及一种用于预防更年期疾病的组合物，该组合物包含作为活性成分的含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物。本发明的包含作为活性成分的含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物的组合物可有助于预防、治疗和改善更年期疾病或更年期症状。具体地，本发明的组合物可缓解更年期内的体重增加，可以使骨密度恢复至与更年期之前的骨密度相似的水平，且可以缓解更年期内的皮肤厚度和皮肤弹性的降低。此外，由于本发明的组合物还可以缓解更年期内的经皮水分流失，可以活化雌激素，且可以降低用于降解胶原的MMP1的量并同时增加前胶原的量，从而本发明的组合物可以有效地用于更年期疾病或更年期症状。此外，本发明的组合物包含作为活性成分的天然产物，即使长期使用也没有耐受性，且几乎没有副作用。
Claims (14)
1.一种用于预防或治疗更年期疾病的药物组合物，其包含作为活性成分的、含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物。
2.一种用于预防或治疗更年期疾病的保健食品组合物，其包含作为活性成分的、含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物。
3.一种用于预防或治疗更年期疾病的化妆品组合物，其包含作为活性成分的、含有香豆雌酚的发芽并发酵的豆提取物。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述发芽并发酵的豆为经过同时或按顺序发芽和发酵的豆。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述豆是先发芽而后进行发酵的。
6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述发芽按照如下条件来进行：在包含占反应器总体积的20-80vol％的培养基的反应器内，使1-50vol％的所述豆进行发芽。
7.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，在20-35℃的暗处，所述发芽进行2-10天。
8.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述发酵是通过使所述发芽的豆与微生物相接触来进行。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述微生物为选自真菌、酵母和乳酸菌中的一种或多种微生物。
10.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述微生物为选自黑曲霉、酱油曲霉、米曲霉和婴儿双歧杆菌中的一种或多种微生物。
11.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述更年期疾为与所述更年期相关的肌肉疾病、骨疾病、心脏疾病、皮肤疾病或肥胖。
12.根据权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述肌肉疾病为与所述更年期相关的类风湿性关节炎或退化性关节炎；所述骨疾病为与所述更年期相关的骨质疏松症、腰酸背痛、佝偻病、软骨病或骨Paget’s病；所述心脏疾病为与所述更年期相关的心绞痛或动脉硬化；或所述皮肤疾病为皮肤发红或皮肤干燥。
13.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述更年期皮肤症状为皮肤发红、皮肤厚度降低、皮肤弹性降低、紫外线诱导的皮肤刺激或皮肤干燥。
14.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含占所述组合物总重量的0.0001-10wt％的所述发芽并发酵的豆提取物，且该豆提取物含有香豆雌酚。
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