CN105462931A - 一种猪肠道上皮细胞系及其应用 - Google Patents
一种猪肠道上皮细胞系及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105462931A CN105462931A CN201510941318.4A CN201510941318A CN105462931A CN 105462931 A CN105462931 A CN 105462931A CN 201510941318 A CN201510941318 A CN 201510941318A CN 105462931 A CN105462931 A CN 105462931A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pedv
- cell line
- intestinal epithelial
- porcine intestinal
- epithelial cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0679—Cells of the gastro-intestinal tract
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/25—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from renal cells, from cells of the urinary tract
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20051—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种猪肠道上皮细胞系及其应用,属于生物技术领域。本发明的猪上皮细胞系,其保藏号为:CGMCC?NO.11496。本发明构建的能稳定传代的猪肠道上皮细胞系对PEDV高度敏感、PEDV感染的毒价可以达到104.9TCID50/mL以上,在流行毒株培养方面优于Vero细胞。能用于PEDV的分离和培养,也能用于PEDV细胞受体和致病机制的研究。PEDV易感的猪肠道上皮细胞系的建立,避免了原代猪肠道上皮细胞制备繁琐、稳定性差、难于培养的一系列缺点,为PEDV的培养提供了一个备选细胞系,为PEDV的深入研究提供了靶细胞,对PEDV疫苗生产具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种猪肠道上皮细胞系及其应用,属于生物技术领域。
背景技术
猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、腹泻和食欲下降为基本特征,各种年龄的猪均易感。猪流行性腹泻病毒(PEDV)为冠状病毒科冠状病毒属的成员。病毒形态略呈球形,有囊膜,囊膜上有花瓣状纤突,呈皇冠状。PEDV核酸为线性单股正链RNA,长为27000~33000个核苷酸(nt)。该病毒不能凝集人、兔、猪、鼠、犬、马、羊、牛的红细胞。对外界抵抗力弱,对乙醚、氯仿敏感,一般消毒药物都可将其杀灭。病毒在60℃30min,可失去感染力,但在50℃条件下相对稳定。病毒在4℃,pH5.0~9.0或在37℃,pH6.5~7.5时稳定。
2010年以来,全国大部分地区的猪场开始大规模爆发PED,这次爆发中初生仔猪死亡率达90%,全国仔猪死亡估计有上千万头。给我国养猪业造成巨大的经济损失们,已经引起政府和社会的高度关注。当前PEDV的研究主要在猴源的Vero细胞上开展,利用非猪源细胞进行研究,得到的研究结果不能够真实的反映自然宿主细胞的感染状况。猪肠道上皮细胞为PEDV的靶细胞,国内外尚无猪肠道上皮细胞系细胞,因此每次实验均需从肠道重新分离培养,制备过程繁琐,代价高,且不能保证不同批次之间的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术中的空白,建立一种稳定传代的猪肠道上皮细胞系(Porcinesmallintestinalepithelialcellline,PIEC)及其应用。
技术方案
一种猪肠道上皮细胞系,其保藏号为:CGMCCNO.11496。该猪肠道上皮细胞系能用于PEDV的分离和培养。PEDV感染的毒价可以达到104.9TCID50/mL以上。
本发明的猪上皮细胞系是通过下述方式获得的:
在人源293细胞中扩增全长的Tert分子cDNA。将扩增产物连入PLV-puro慢病毒表达载体,构建重组表达载体P-TERT。将构建好的重组表达载体P-TERT与包装辅助质粒pSPAX2和pMG2G共转染人源293细胞,获得重组慢病毒。将该重组慢病毒侵染原代猪上皮细胞,通过嘌呤霉素加压筛选,从而获得了一株可稳定传代的猪肠道上皮细胞系。
通过PEDV流行毒株MY1401感染实验,证实本发明的猪肠道上皮细胞系对PEDV高度敏感、PEDV感染的毒价可以达到104.9TCID50/mL以上,在流行毒株培养方面优于Vero细胞。所以,本发明的猪肠道上皮细胞系能够用于PEDV的分离和培养,也可以用于PEDV细胞受体和致病机制的研究。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
本发明构建的能稳定传代的猪肠道上皮细胞系可以用于PEDV的分离和培养,也可以用于PEDV细胞受体和致病机制的研究。PEDV易感的猪肠道上皮细胞系的建立,避免了原代猪肠道上皮细胞制备繁琐、稳定性差、难于培养的一系列缺点,为PEDV的培养提供了一个备选细胞系,为PEDV的深入研究提供了靶细胞,对PEDV疫苗生产具有重要意义。
附图说明
图1为PEDV病毒感染PIEC细胞系后免疫荧光图,一抗:PEDVS蛋白单抗;二抗:FITC标记兔抗鼠抗体;
图2为PEDV滴度测定免疫荧光图,其中A、B、C、D,分别是PEDVMY01病毒液10、100、1000和10000倍稀释后,感染PIEC细胞系的免疫荧光图;一抗:PEDVS蛋白单抗;二抗:FITC标记兔抗鼠。
保藏信息
保藏时间:2015年11月11日;
保藏单位名称:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;
保藏编号:CGMCCNO.11496;
保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所;
分类命名:仔猪肠道上皮细胞。
具体实施方式
准备培养基:
(1)细胞培养基
10%(体积百分数)新生牛血清的DMEM:取500ml液体DMEM培养基,按照10%的体积加入新生牛血清,充分混匀后备用;
(2)选择性培养基
嘌呤霉素含量为含800ng/mL的细胞培养基:向细胞培养基添加嘌呤霉素而成;其中,每mL细胞培养基添加800ng嘌呤霉素;
(3)病毒培养用培养基
2%(体积百分数)新生牛血清的DMEM:取500ml液体DMEM培养基,按照2%的体积加入新生牛血清,充分混匀后备用。
实施例1
人TERTcDNA全长的克隆
提取293细胞总RNA,利用TERT特异性引物进行RT-PCR扩增。扩增产物的序列如SEQIDNO.1所示,全长为3363bp;经对比,与GenBank中的序列(ID:BC172541.1)同源性为100%。
所述TERT特异性引物:
F:aagtctagaatgccgcgcgctccccgctgc;(如SEQIDNO.2所示)
R:tcagaattcttagtccaggatggtcttgaagtc;(如SEQIDNO.3所示)。
实施例2
重组表达载体P-TERT的构建及重组慢病毒的包装
根据PLV-puro(慢病毒表达载体)载体的多克隆酶切位点序列,选用XbaI和EcoRI将PLV-puro载体线性化,将实施例1的扩增产物插入PLV-puro载体,获得重组表达载体;将该重组表达载体命名为P-TERT(重组慢病毒表达载体)。将构建好的重组表达载体P-TERT与包装辅助质粒pSPAX2和pMG2G(购自Addgene,并由本实验室保存)共转染293细胞。于转染后24和48小时收取含有重组慢病毒的细胞培养上清,-80℃保存(所述含有重组慢病毒的细胞培养上清是指,被重组表达载体P-TERT成功转染的293细胞培养上清)。转染后24小时或48小时所收取的样品,无任何差异。
实施例3
原代猪肠道上皮细胞的制备
按照肠绒毛消化法制备原代猪肠道上皮细胞。具体步骤简述如下:取1日龄未哺乳的仔猪肠道,经反复冲洗后纵向剪开,是腔面朝上,用玻璃片轻轻挂下肠粘膜;收取刮取液,用0.1%的胶原酶II37℃消化15min,期间不时反复吹吸;终止消化后过200目细胞筛网,收集滤液中的细胞,置于37℃、5%(体积分数,下同)CO2培养箱培养或冻存。
实施例4
稳定传代猪肠道上皮细胞系的建立
将实施例2得到的含有重组慢病毒的细胞培养上清在助转剂polybrene(5μg/ml)帮助下侵染原代猪肠道上皮细胞;侵染后48小时,用选择性培养基加压筛选转染的细胞,每24小时更换一次。经过14天左右的筛选,未被嘌呤霉素杀死的细胞,获得具有嘌呤霉素抗性的肠道细胞。然后利用有限稀释法进一步对具有嘌呤霉素抗性的肠道细胞进行亚克隆(本发明的亚克隆操作及试剂是细胞培养方面的常规操作及常规试剂),即可得到稳定传代的猪肠道上皮细胞系。
实施例5
猪肠道稳定传代上皮细胞系的体外传代培养
待稳定传代的猪肠道上皮细胞长满培养器皿底部后,使用PBS磷酸盐缓冲液洗涤细胞2次,而后加入适量0.25%的胰蛋白酶消化,待细胞变圆回缩时,加入细胞培养基终止消化,反复吹打使细胞悬浮并解离,然后转移至新的培养器皿中,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
实施例6
PEDV分离及传代实验
将可稳定传代的猪肠道上皮细胞系(以下简称“细胞”)接种至六孔板中,待细胞生长至80-90%融合时,接种PEDV阳性病料,37℃感作2h后,弃感作液(感作液是指含有病料的培养基,其成分属于公知),然后加入病毒培养基并置于培养箱中培养,至细胞出现明显病变(约36h)后,反复冻融2次收取病毒液。
将收取的病毒液按照MOI=0.01接种80-90%融合度的猪肠道上皮细胞,感作2h后,更换为病毒培养基并培养36h,而后反复冻融两次收取病毒液。检测病毒含量(检测细胞培养基中病毒粒子的数量,由此判定病毒增殖情况),病毒液按照10倍进行连续稀释后接种猪肠道上皮细胞,接种后24h使用质量含量为4%多聚甲醛溶液固定,利用PEDVS蛋白特异性单抗检测细胞中病毒含量(如图2所示),并按照Reed&Muench法计算病毒含量。当PEDV病毒传至第10代时,病毒滴度达到104.9TCID50/mL以上,解决了PEDV流行毒株难以分离的难题。
<110>山东省农业科学院畜牧兽医研究所
<120>一种猪肠道上皮细胞系及其应用
<160>3
<210>1
<211>3363
<212>DNA
<213>人工合成
<400>1
atgccgcgcgctccccgctgccgagccgtgcgctccctgctgcgcagccactaccgcgag60
gtgctgccgctggccacgttcgtgcggcgcctggggccccagggctggcggctggtgcag120
cgcggggacccggcggctttccgcgcgctggtggcccagtgcctggtgtgcgtgccctgg180
gacgcacggccgccccccgccgccccctccttccgccaggtgtcctgcctgaaggagctg240
gtggcccgagtgctgcagaggctgtgcgagcgcggcgcgaagaacgtgctggccttcggc300
ttcgcgctgctggacggggcccgcgggggcccccccgaggccttcaccaccagcgtgcgc360
agctacctgcccaacacggtgaccgacgcactgcgggggagcggggcgtgggggctgctg420
ctgcgccgcgtgggcgacgacgtgctggttcacctgctggcacgctgcgcgctctttgtg480
ctggtggctcccagctgcgcctaccaggtgtgcgggccgccgctgtaccagctcggcgct540
gccactcaggcccggcccccgccacacgctagtggaccccgaaggcgtctgggatgcgaa600
cgggcctggaaccatagcgtcagggaggccggggtccccctgggcctgccagccccgggt660
gcgaggaggcgcgggggcagtgccagccgaagtctgccgttgcccaagaggcccaggcgt720
ggcgctgcccctgagccggagcggacgcccgttgggcaggggtcctgggcccacccgggc780
aggacgcgtggaccgagtgaccgtggtttctgtgtggtgtcacctgccagacccgccgaa840
gaagccacctctttggagggtgcgctctctggcacgcgccactcccacccatccgtgggc900
cgccagcaccacgcgggccccccatccacatcgcggccaccacgtccctgggacacgcct960
tgtcccccggtgtacgccgagaccaagcacttcctctactcctcaggcgacaaggagcag1020
ctgcggccctccttcctactcagctctctgaggcccagcctgactggcgctcggaggctc1080
gtggagaccatctttctgggttccaggccctggatgccagggactccccgcaggttgccc1140
cgcctgccccagcgctactggcaaatgcggcccctgtttctggagctgcttgggaaccac1200
gcgcagtgcccctacggggtgctcctcaagacgcactgcccgctgcgagctgcggtcacc1260
ccagcagccggtgtctgtgcccgggagaagccccagggctctgtggcggcccccgaggag1320
gaggacacagacccccgtcgcctggtgcagctgctccgccagcacagcagcccctggcag1380
gtgtacggcttcgtgcgggcctgcctgcgccggctggtgcccccaggcctctggggctcc1440
aggcacaacgaacgccgcttcctcaggaacaccaagaagttcatctccctggggaagcat1500
gccaagctctcgctgcaggagctgacgtggaagatgagcgtgcgggactgcgcttggctg1560
cgcaggagcccaggggttggctgtgttccggccgcagagcaccgtctgcgtgaggagatc1620
ctggccaagttcctgcactggctgatgagtgtgtacgtcgtcgagctgctcaggtctttc1680
ttttatgtcacggagaccacgtttcaaaagaacaggctctttttctaccggaagagtgtc1740
tggagcaagttgcaaagcattggaatcagacagcacttgaagagggtgcagctgcgggag1800
ctgtcggaagcagaggtcaggcagcatcgggaagccaggcccgccctgctgacgtccaga1860
ctccgcttcatccccaagcctgacgggctgcggccgattgtgaacatggactacgtcgtg1920
ggagccagaacgttccgcagagaaaagagggccgagcgtctcacctcgagggtgaaggca1980
ctgttcagcgtgctcaactacgagcgggcgcggcgccccggcctcctgggcgcctctgtg2040
ctgggcctggacgatatccacagggcctggcgcaccttcgtgctgcgtgtgcgggcccag2100
gacccgccgcctgagctgtactttgtcaaggacaggctcacggaggtcatcgccagcatc2160
atcaaaccccagaacacgtactgcgtgcgtcggtatgccgtggtccagaaggccgcccat2220
gggcacgtccgcaaggccttcaagagccacgtctctaccttgacagacctccagccgtac2280
atgcgacagttcgtggctcacctgcaggagaccagcccgctgagggatgccgtcgtcatc2340
gagcagagctcctccctgaatgaggccagcagtggcctcttcgacgtcttcctacgcttc2400
atgtgccaccacgccgtgcgcatcaggggcaagtcctacgtccagtgccaggggatcccg2460
cagggctccatcctctccacgctgctctgcagcctgtgctacggcgacatggagaacaag2520
ctgtttgcggggattcggcgggacgggctgctcctgcgtttggtggatgatttcttgttg2580
gtgacacctcacctcacccacgcgaaaaccttcctcaggaccctggtccgaggtgtccct2640
gagtatggctgcgtggtgaacttgcggaagacagtggtgaacttccctgtagaagacgag2700
gccctgggtggcacggcttttgttcagatgccggcccacggcctattcccctggtgcggc2760
ctgctgctggatacccggaccctggaggtgcagagcgactactccagctatgcccggacc2820
tccatcagagccagtctcaccttcaaccgcggcttcaaggctgggaggaacatgcgtcgc2880
aaactctttggggtcttgcggctgaagtgtcacagcctgtttctggatttgcaggtgaac2940
agcctccagacggtgtgcaccaacatctacaagatcctcctgctgcaggcgtacaggttt3000
cacgcatgtgtgctgcagctcccatttcatcagcaagtttggaagaaccccacatttttc3060
ctgcgcgtcatctctgacacggcctccctctgctactccatcctgaaagccaagaacgca3120
gggatgtcgctgggggccaagggcgccgccggccctctgccctccgaggccgtgcagtgg3180
ctgtgccaccaagcattcctgctcaagctgactcgacaccgtgtcacctacgtgccactc3240
ctggggtcactcaggacagcccagacgcagctgagtcggaagctcccggggacgacgctg3300
actgccctggaggccgcagccaacccggcactgccctcagacttcaagaccatcctggac3360
taa3363
<210>2
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
aagtctagaatgccgcgcgctccccgctgc30
<210>3
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
tcagaattcttagtccaggatggtcttgaagtc33
Claims (3)
1.一种猪肠道上皮细胞系,其保藏号为:CGMCCNO.11496。
2.根据权利要求1所述的猪上皮细胞系,PEDV感染的毒价能达到104.9TCID50/mL以上。
3.一种权利要求1或2所述的猪上皮细胞系用于PEDV的分离和培养。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510941318.4A CN105462931B (zh) | 2015-12-16 | 2015-12-16 | 一种猪肠道上皮细胞系及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510941318.4A CN105462931B (zh) | 2015-12-16 | 2015-12-16 | 一种猪肠道上皮细胞系及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105462931A true CN105462931A (zh) | 2016-04-06 |
CN105462931B CN105462931B (zh) | 2018-10-12 |
Family
ID=55601092
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510941318.4A Expired - Fee Related CN105462931B (zh) | 2015-12-16 | 2015-12-16 | 一种猪肠道上皮细胞系及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105462931B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110540954A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-12-06 | 华中农业大学 | 对三种猪肠道冠状病毒易感的猪回肠上皮细胞株 |
CN111454876A (zh) * | 2019-01-18 | 2020-07-28 | 安徽农业大学 | 一种猪流行性腹泻病毒感染猪小肠黏膜上皮细胞系的方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101955907A (zh) * | 2010-07-19 | 2011-01-26 | 西北农林科技大学 | 猪小肠上皮细胞系及其建立方法 |
-
2015
- 2015-12-16 CN CN201510941318.4A patent/CN105462931B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101955907A (zh) * | 2010-07-19 | 2011-01-26 | 西北农林科技大学 | 猪小肠上皮细胞系及其建立方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
SHANSHAN ZHAO等: "Transmissible gastroenteritis virus and porcine epidemic diarrhoea virus infection induces dramatic changes in the tight junctions and microfilaments of polarized IPEC-J2 cells", 《VIRUS RESEARCH》 * |
宋子仪等: "一种高效细胞永生化载体的构建及其功能分析", 《农业生物技术学报》 * |
邢钊等: "《动物微生物及免疫技术》", 31 August 2006, 河南科学技术出版社 * |
高君恺等: "猪流行性腹泻病毒的研究进展", 《南京农业大学学报》 * |
黄文芳: "用胎猪小肠组织块绒毛上皮细胞培养猪流行性腹泻病毒的研究", 《家畜传染病》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111454876A (zh) * | 2019-01-18 | 2020-07-28 | 安徽农业大学 | 一种猪流行性腹泻病毒感染猪小肠黏膜上皮细胞系的方法 |
CN110540954A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-12-06 | 华中农业大学 | 对三种猪肠道冠状病毒易感的猪回肠上皮细胞株 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105462931B (zh) | 2018-10-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102604889B (zh) | 适应无血清培养的hek293细胞系及其应用 | |
CN103751774B (zh) | 稳定表达猪瘟病毒e2蛋白的重组细胞系及其在制备猪瘟亚单位疫苗和诊断试剂中的应用 | |
CN101979519A (zh) | 一种制备伪狂犬病疫苗的方法 | |
CN108220227A (zh) | 一种通过全悬浮传代细胞系悬浮培养新城疫病毒的方法 | |
Liu et al. | Seroprevalence and molecular characteristics of hepatitis E virus in household-raised pig population in the Philippines | |
CN105462936A (zh) | 一种流猪行性腹泻病毒my01株及其应用 | |
CN103436499A (zh) | 一种猪圆环病毒样颗粒及其疫苗和制备方法 | |
CN104330561A (zh) | 一种利用间接免疫荧光法检测牛病毒性腹泻病毒的方法 | |
CN102488893B (zh) | 一种用细胞系生产鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的方法及其制品 | |
CN104561092B (zh) | 表达猪瘟病毒e2蛋白重组prrs病毒基因工程疫苗的构建方法和应用 | |
CN101376878B (zh) | 猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株及由其制备的灭活疫苗 | |
CN106011084A (zh) | 猪流行性腹泻病毒地方变异株及其应用 | |
CN105462931A (zh) | 一种猪肠道上皮细胞系及其应用 | |
CN106399365A (zh) | 一种表达载体及表达猪氨肽酶N的Vero细胞系 | |
CN103923885B (zh) | 鸡传染性法氏囊病毒Vero细胞适应株及其应用 | |
CN102805862B (zh) | 一种vero细胞培养新布尼亚病毒纯化灭活疫苗的制备方法 | |
CN102965345B (zh) | 猪细小病毒、疫苗组合物及其应用 | |
CN103160475B (zh) | 一种肠道病毒71型病毒株及其用途、疫苗和制备方法 | |
CN102465117A (zh) | 一种人猴嵌合免疫缺陷病毒株及其应用 | |
CN103160474B (zh) | 肠道病毒71型病毒株、疫苗、动物模型建立方法 | |
CN103777009B (zh) | 一种使用辣根过氧化物酶标抗体检测猪瘟弱毒病毒滴度的方法 | |
CN102805863B (zh) | 一种人二倍体细胞培养新布尼亚病毒纯化灭活疫苗的制备方法 | |
CN106085947B (zh) | Mdck克隆细胞株及其应用 | |
CN104694458A (zh) | Mdck克隆细胞株及其应用 | |
AU2020103723A4 (en) | A Porcine Intestinal Epithelial Cell Line and Its Application |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20181012 Termination date: 20211216 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |