CN105456189A - 一种丁酸氯维地平乳剂注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种丁酸氯维地平乳剂注射剂，包含丁酸氯维地平﹑注射用油﹑乳化剂﹑助乳剂、等渗调节剂﹑稳定剂、pH调节剂和注射用水，所述注射用油为橄榄油。该注射剂稳定性良好，无致敏性﹑无溶血性﹑无刺激性。本发明还提供了适合工业化生产上述丁酸氯维地平乳剂注射剂的方法。

Description

一种丁酸氯维地平乳剂注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种丁酸氯维地平乳剂注射剂及其制备方法。

背景技术

丁酸氯维地平(Clevidipine)属于二氢吡啶衍生物，是一种超短效的静脉注射用钙通道阻断剂，是英国AstraZeneca公司研制的新型静脉注射用二氢吡啶类钙通道拮抗剂，后许可给Medicines公司，并于2008年8月1日经美国FDA批准在美国上市。丁酸氯维地平具有高度的血管及心肌选择性，在体内迅速代谢为非活性物质。其起效快，作用消除也快，可递增剂量精确地控制血压。与目前许多静脉注射经肾和(或)肝代谢的抗高血压药不同，其在血液和组织中代谢，因而不在体内蓄积。丁酸氯维地平是一种创新的注射型抗高血压药物，是10年来美国FDA批准的首个新型静脉注射用抗高血压药，用于治疗口服降压药不适用或无法获得满意疗效的高血压患者的治疗，其代表了目前治疗药品的一项新进展，为临床提供了一种快速、精确控制血压的新武器。根据急救室、手术室和监护室所得数据，丁酸氯维地平向医生提供了降血压重要的新观点。

因此亟需一种丁酸氯维地平乳剂注射剂，以解决目前的临床需求。本发明的目的是提供一种丁酸氯维地平乳剂注射剂及制备方法。

发明内容

一方面，本发明提供一种丁酸氯维地平乳剂注射剂，包含丁酸氯维地平﹑注射用油﹑乳化剂﹑助乳剂、等渗调节剂﹑稳定剂、pH调节剂和注射用水。其中丁酸氯维地平重容百分比为0.001～1.0％(w/v)，优选为0.02～0.1％(w/v)，更优选为0.03-0.08％(w/v)，最优选为0.05-0.06％(w/v)；注射用油重容百分比为1.0～50.0％(w/v)，优选为15.0～25.0％(w/v)，更优选为18.0-23.0％(w/v)，最优选为20.0-21.0％(w/v)；乳化剂重容百分比为0.1～10％(w/v)，优选为1.0～1.5％(w/v)，更优选为1.1-1.4％(w/v)；最优选为1.2-1.3％(w/v)；助乳剂重容百分比为0.001～2.0％(w/v)，优选为0.01～0.05％(w/v)，更优选为0.015-0.04％(w/v)，最优选为0.02-0.03％(w/v)；等渗调节剂重容百分比为0.1～10.0％(w/v)，优选为1.0-5.0％(w/v)，更优选为2.0～2.5％(w/v)，最优选为2.2-2.3％(w/v)；稳定剂重容百分比为0.001～5.0％(w/v)，优选为0.005～2.0％(w/v)，更优选为0.0075％～0.2％(w/v)，最优选为0.01-0.015％(w/v)；注射用水为余量；其中所述注射用油为橄榄油。

在本发明的一个实施方案中，所述乳化剂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂。

在本发明的一个实施方案中，所述助乳剂为油酸或油酸钠中的一种或多种。

在本发明的一个实施方案中，所述等渗调节剂为注射用甘油。

在本发明的一个实施方案中，所述稳定剂为枸橼酸、枸橼酸钠盐、乙二胺四乙酸、或乙二胺四乙酸钠盐中的一种或多种。

另一方面，本发明提供一种制备所述丁酸氯维地平乳剂注射剂的方法，包括以下步骤：

(1)预热注射用油，加入丁酸氯维地平、乳化剂、助乳剂，以2000～12000rpm的转速搅拌形成均一的油相；

(2)将等渗调节剂和稳定剂加入预热的注射用水中，以300～3000rpm的转速搅拌形成均一的水相，调节pH值至9.1～9.6；

(3)在以2000～12000rpm的转速搅拌的条件下，将油相缓慢加入水相中，形成初乳；

(4)在40～140Mpa的压力下对初乳进行高压均质乳化，至平均粒径为200～350nm，90％粒径累积值为300～500nm；

(5)过滤，充氮，灌装；

(6)旋转水浴灭菌。

所述丁酸氯维地平乳剂注射剂的旋转水浴灭菌方法，其特征在于灭菌过程中温度维持在121～127℃，时间维持在3～12min，转速在3～15rpm。

附图说明

图1是本发明实施例1制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的粒径分布图。

具体实施方式

以下通过具体实施例详述本发明，但本发明并不仅限于下述的实施例。

实施例1

将210g注射用橄榄油(购自德国LipoidGmbH，产品质量符合欧洲药典7.0版(EP7.0))预热至80℃，加入13g蛋黄卵磷脂和0.2g油酸，以2500rpm的速度搅拌形成均一的油相后缓慢加入0.5g丁酸氯维地平原料药，以3000rpm的速度搅拌使其均匀溶解于油相；将22.5g注射用甘油、0.15g乙二胺四乙酸二钠加入适量的预热至80℃的注射用水中，以1000rpm的速度搅拌形成均一的水相，用氢氧化钠溶液将pH调至9.2；以5000rpm的速度搅拌的条件下，将油相缓慢滴入水相中，用注射用水将体系定容至1000ml，搅拌20min，均匀分散后形成乳白色的初乳；转入高压均质机内，30℃下，均质压力80Mpa的条件下进行高压均质6次，实时监测每次均质后的粒径。测定方法为取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。至平均粒径约300nm，90％粒径累积值约400nm；依次用孔径为3.0μm、1.0μm的滤膜进行过滤，充氮气，分装于100ml输液瓶中，加塞；用容积为100L的XASM型旋转灭菌柜(山东新华医疗器械有限公司)在121℃下以5rpm的转速进行旋转水浴灭菌8分钟。

实施例2

将205g注射用橄榄油(购自德国LipoidGmbH，产品质量符合欧洲药典7.0版(EP7.0))预热至75℃，加入12g蛋黄卵磷脂和0.3g油酸，搅拌形成均一的油相后缓慢加入0.55g丁酸氯维地平原料药，以3000rpm的速度搅拌使其均匀溶解于油相；将23g注射用甘油、0.05g枸橼钠、0.1g乙二胺四乙酸加入适量的预热至75℃的注射用水中，以1000rpm的速度搅拌形成均一的水相，用氢氧化钠溶液将pH调至9.2；以1000rpm的速度搅拌的条件下，将油相缓慢滴入水相中，用注射用水将体系定容至1000ml，搅拌15min，均匀分散后形成乳白色的初乳；转入高压均质机内，25℃下，均质压力80Mpa的条件下进行高压均质7次。实时监测每次均质后的粒径。测定方法为取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。至平均粒径约280nm，90％粒径累积值约380nm；依次用孔径为3.0μm、1.0μm的滤膜进行过滤，充氮气，分装于100ml输液瓶中，加塞；用容积为100L的XASM型旋转灭菌柜(山东新华医疗器械有限公司)在121℃下以8rpm的转速进行旋转水浴灭菌10分钟。

实施例3

将200g注射用橄榄油(购自德国LipoidGmbH，产品质量符合欧洲药典7.0版(EP7.0)预热至70℃，加入12.5g蛋黄卵磷脂和0.25g油酸，搅拌形成均一的油相后缓慢加入0.6g丁酸氯维地平原料药，以3000rpm的速度搅拌使其均匀溶解于油相；将22g注射用甘油、0.1g乙二胺四乙酸加入适量的预热至70℃注射用水中，以1000rpm的速度搅拌形成均一的水相，用氢氧化钠溶液将pH调至9.4；以1000rpm的速度搅拌的条件下，将油相缓慢滴入水相中，用注射用水将体系定容至1000ml，搅拌15min，均匀分散后形成乳白色的初乳；转入高压均质机内，30℃下，均质压力80Mpa的条件下进行高压均质5次。实时监测每次均质后的粒径。测定方法为取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。至平均粒径约300nm，90％粒径累积值约400nm；依次用孔径为3.0μm、1.0μm滤膜进行过滤，充氮气，分装于50ml输液瓶中，加塞；用容积为100L的XASM型旋转灭菌柜(山东新华医疗器械有限公司)在121℃下以10rpm的转速进行旋转水浴灭菌10分钟。

比较例1

将210g注射用大豆油(购自铁岭北亚药用油有限公司，产品质量符合中国药典2010版二部)预热至80℃，加入12.5g蛋黄卵磷脂和0.25g油酸，搅拌形成均一的油相后缓慢加入0.6g丁酸氯维地平原料药，以3000rpm的速度搅拌使其均匀溶解于油相；将22.5g注射用甘油、0.05g乙二胺四乙酸二钠加入适量的预热至80℃的注射用水中，以1000rpm的速度搅拌形成均一的水相，用氢氧化钠溶液将pH调至9.2；以1000rpm的速度搅拌的条件下，将油相缓慢滴入水相中，用注射用水将体系定容至1000ml，搅拌20min，均匀分散后形成乳白色的初乳；转入高压均质机内，30℃下，均质压力80Mpa的条件下进行高压均质6次。实时监测每次均质后的粒径。测定方法为取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。至平均粒径约300nm，90％粒径累积值约400nm；依次用孔径为3.0μm、1.0μm滤膜进行过滤，充氮气，分装于100ml输液瓶中，加塞；用容积为100L的XASM型旋转灭菌柜(山东新华医疗器械有限公司)在121℃下以5rpm的转速进行旋转水浴灭菌8分钟。

比较例2

将200g注射用大豆油(购自铁岭北亚药用油有限公司，产品质量符合中国药典2010版二部)预热至70℃，加入13g蛋黄卵磷脂和0.2g油酸，搅拌形成均一的油相后缓慢加入0.6g丁酸氯维地平原料药，以3000rpm的速度搅拌使其均匀溶解于油相；将22g注射用甘油加入适量的预热至70℃的注射用水中，以1000rpm的速度搅拌形成均一的水相，用氢氧化钠溶液将pH调至9.4；以1000rpm的速度搅拌的条件下，将油相缓慢滴入水相中，用注射用水将体系定容至1000ml，搅拌15min，均匀分散后形成乳白色的初乳；转入高压均质机内，30℃下，均质压力80Mpa的条件下进行高压均质5次。实时监测每次均质后的粒径。测定方法为取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。至平均粒径约300nm，90％粒径累积值约400nm；依次用孔径为3.0μm、1.0μm滤膜进行过滤，充氮气，分装于50ml输液瓶中，加塞；用容积为100L的XASM型旋转灭菌柜(山东新华医疗器械有限公司)在121℃下以5rpm的转速进行旋转水浴灭菌10分钟。

以下试验例为对上述实施例和比较例制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂进行的理化性质检测及微生物试验。

试验例1：实施例及比较例制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的各项主要指标测定

对上述实施例和比较例制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂进行检验分析，包括：性状、pH值、平均粒径、90％粒径、过氧化值、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、细菌内毒素、无菌状况、有关物质和含量。

检测方法参照乳剂同类产品质量标准如前列地尔注射液国家标准WS1-(X-041)-2002Z-2008拟定，具体方法描述如下：

1.性状的测定：目测法。

2.pH值的测定：中国药典2010年版二部附录VIH方法；

3.平均粒径、90％粒径的测定：

平均粒径是指粒径分布曲线中累积分布为50％时的最大粒径值。90％累积粒径是指粒径分布曲线中累积分布为90％时的最大粒径值。

使用“动态激光散射粒径测定法”测定平均粒径和90％粒径。粒径测定法是以动态激光光散射计根据动态光散射原理测定乳液中粒径的一种方法。

采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。本测定装置是用光电倍增管测出多普勒振动光，用小孔干涉后产生光子脉冲，根据光子脉冲出现的间隔计算标准脉冲(Hz)。所得标准脉冲数用累积法和直方附图法进行数据分析，求得乳液中粒子的粒径和粒径分布。

取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。取供试液约1ml沿样品管壁小心加入样品管中，保证无气泡，将样品管放入样品池中，放置数分钟，使供试液温度达到所设定的温度值后，在温度为25℃，散射角为90°的条件下进行测定，求得平均粒径和90％累积粒径值。从小粒子开始，累积含全部粒子50％的分布区域的最大粒径为平均粒径。从小粒子开始，累积含全部粒子90％的分布区域的最大粒径为90％累积粒径。本发明的实施例1制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的粒径分布如图1所示。

4.过氧化值：使用滴定法测定过氧化值。取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)混合液30ml，置250ml碘瓶中，通氮气10分钟，密闭瓶塞，精密量取丁酸氯维地平乳剂注射剂5.0ml，迅速加入碘瓶中，轻轻振摇，精密加饱和碘化钾溶液0.5ml，密闭瓶塞，准确振摇1分钟，加新沸过的冷水30ml与淀粉指示液2ml，立即用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫蓝色消失，并用空白试验校正。

5.甲氧基苯胺值：参照中国药典2010年版二部附录IVA；

6.溶血磷脂：溶血磷脂是卵磷脂的水解产物，对人体具有溶血性而引起过敏反应。使用高效液相法测定溶血磷脂的含量，检测器为蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)；

精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(配制后2小时内进样)；精密称取溶血磷脂酰胆碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml中含0.06mg的溶液，精密量取5ml，置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算。

7.细菌内毒素：取丁酸氯维地平乳剂注射剂，参照中国药典2010年版，细菌内毒素符合规定是指依法符合中国药典2010年版二部附录XIE每1mg丁酸氯维地平中含内毒素量应小于9EU的规定。

8.无菌检查：取丁酸氯维地平乳剂注射剂，除了以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，冲洗液为0.1％的蛋白胨水溶液，冲洗量为300ml(即100ml×3桶)之外，其余均按照中国药典2010年版二部无菌检查法(附录ⅪH)中的薄膜过滤法进行。在33℃下培养细菌、在25℃下培养真菌。目测培养基上是否有菌落，有菌落则无菌检查不合格，反之则符合无菌的规定。

9.有关物质是杂质的一类，特指主药丁酸氯维地平降解产生的杂质，包括氧化产物、水解产物等。使用高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定有关物质的含量，步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH至3.0)(40：20:40)为流动相；流速1.3ml/min；柱温30℃；检测波长为240nm。理论板数以丁酸氯维地平峰计算应不低于2000。

(2)内标溶液的制备：取非洛地平，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg非洛地平的溶液。

(3)对照品溶液的制备：取丁酸氯维地平对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置50ml量瓶中，再精密加入内标溶液1ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

(4)供试品溶液的制备：精密量取本品1ml(约相当于丁酸氯维地平0.5mg)，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

(5)测定：精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算有关物质的含量。

10.主药丁酸氯维地平的含量：方法同有关物质的测定方法。其中丁酸氯维地平的含量是以标示量为基值(即100％)测定的。

表1：实施例及比较例制剂的各项主要指标测定结果

试验例2：稳定性试验

在温度为40℃的条件下，将比较实施例1-3和比较例1-2制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂放置在药物稳定试验箱(重庆市永生实验仪器厂生产，型号SHH-220SD-2)中10天，然后对所述丁酸氯维地平乳剂注射剂的参数进行检验分析，包括：性状、pH值、平均粒径、90％粒径、过氧化值、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、有关物质、细菌内毒素、无菌状况和含量。

表2：实施例和比较例制剂40℃影响因素试验10天后各项主要指标测定结果

由表1和表2可知：本发明制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂，与按上市品处方及工艺制备的比较例1和2比较，由于橄榄油替代了大豆油，以及稳定剂的加入，制剂的产品质量及热稳定性明显得到改善，产品的过氧化值、甲氧基苯胺值和有关物质等指标显著降低。

试验例3：本发明实施例1-3制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的豚鼠全身过敏性试验

试验方法：将24只豚鼠随机分为四组：丁酸氯维地平注射液低剂量组，丁酸氯维地平注射液高剂量组，阳性对照组，阴性对照组，6只/每组；进入试验的第1、3和5天，对豚鼠分别腹腔注射给予相应的制剂：丁酸氯维地平低剂量组——致敏剂量1.25mg/kg，0.2ml/只；丁酸氯维地平高剂量组——致敏剂量2.5mg/kg，0.2ml/只；阴性对照——0.9％氯化钠注射液，0.2ml/只；阳性对照——10％蛋清，0.2ml/只。每次给药后观察动物的行为及状态。在末次致敏给药后的第10天，各试验组分别耳静脉注射给予致敏给药的5倍相应药物剂量激发。给药后立即观察动物的状态及行为，根据表3和表4的分级表对动物的表现给予评判。

分级表(见表1和表2)：

表3过敏反应症状

0正常	7呼吸急促	14步态不稳
			1躁动	8排尿	15跳跃
2竖毛	9排粪	16喘息
			3颤抖	10流泪	17痉挛
4搔鼻	11呼吸困难	18旋转
			5喷嚏	12哮呜音	19潮式呼吸
6咳嗽	13紫癜	20死亡

表4全身致敏性评价标准

得分
			0	－	过敏反应阴性
1-4	+	过敏反应弱阳性
			5-10	++	过敏反应阳性
11-19	+++	过敏反应强阳性
			20	++++	过敏反应极强阳性

表5实施例1的丁酸氯维地平乳剂注射剂的豚鼠全身过敏性试验结果

表6实施例2的丁酸氯维地平乳剂注射剂的豚鼠全身过敏性试验结果

表7实施例3的丁酸氯维地平乳剂注射剂的豚鼠全身过敏性试验结果

试验结果：本发明制备的制剂在激发给药后，阳性对照组动物表现强烈的过敏症状，并致死亡。阴性对照组和受试组未见过敏反应发生，因此，在本次试验条件下本发明实施例1-3制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂无致敏作用。

试验例4：本发明实施例1-3制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的溶血性试验

1.实验方法

(1)2％红细胞混悬液的制备：由健康白兔从颈动脉采集全血，放入烧杯中，用消毒棉签搅动血液，除去纤维蛋白，取去纤维蛋白的红细胞，加10倍氯化钠注射液，混匀后离心2500rpm，10min，弃上清液，如此反复离心洗涤至上清液不显红色为止,将所得红血球用0.9％氯化钠注射液配成2％红细胞混悬液。

(2)取实施例1的丁酸氯维地平注射液按临床用药剂量浓度进行溶血实验。阴性对照组用0.9％氯化钠注射液，阳性对照取蒸馏水。各管终体积为5ml，依据表8进行实验操作：

表8.溶血性实验所用试剂

(3)涡旋1min混匀，于37℃水浴箱中孵育3小时。在15～180min时观察。

2.实验结果评价

观察不同时间点各试管中有无溶血发生。结果的判断：

(1)全溶血：溶液澄明红色，试管底部无细胞残留。

(2)部分溶血：溶液澄明红色或棕色，试管底部有少量细胞残留。

(3)无溶血：红细胞全部下沉，上层为淡淡的无色澄明液体。

(4)凝集：不溶血，溶液中有红细胞凝集的红色絮状沉淀,振摇后不能分散。

3.实验结果：

(1)15min：1-5、6号阴性对照管有少量红细胞下沉，液面稍有分层，7号阳性对照管为红色半澄清溶液。

(2)60min：1-5号管有红细胞下沉，液面有分层，上层液面为乳白色；6号阴性对照管有红细胞下沉，液面有分层；7号阳性对照管为红色澄清溶液。

(3)120min：6号阴性对照试管溶液上端1.0cm微黄色澄清液，以下为混浊红色液体。7号阳性对照管为红色澄清液体。1-5号管有红细胞下沉，液面有分层，上层液面为乳白色。

(4)180min：2500rpm，5min离心后观察，1-5号管的上层为乳白色乳液，最底层为红色红细胞沉淀；6号阴性对照试管溶液上层微黄色澄清液，最底层为红色红细胞沉淀；7号阳性对照管为红色澄清液体。

4.实验结论：

未发现实施例1制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂对红细胞有凝集作用和溶血现象。实施例2和实施例3的丁酸氯维地平注射液的溶血性试验结果与实施例1的结果相似而未显示。

试验例5：本发明实施例1-3制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的血管刺激性试验

试验方法：共用3只家兔。每只家兔右耳静脉推注丁酸氯维地平注乳剂注射剂，用药浓度为临床用药浓度0.5mg/ml，给药剂量为5mg/kg；每只家兔的左耳静脉推注0.9％氯化钠注射液作为阴性对照，用药体积与相应右耳注射的丁酸氯维地平注乳剂注射剂的体积相同。每日一次，连续给药3天。观察给药前后和末次给药72小时兔耳的外观变化。观察注射局部部位是否有肿胀，瘀血，血管收缩等刺激症状。末次给药后72小时，将动物处死，从兔耳缘静脉部至耳根部剪下兔耳缘静脉，4％中性福尔马林固定，常规脱水、透明、浸蜡包埋后切片，HE染色，做病理组织切片检查。

试验结果：注射后第2-4天目测观察家兔耳缘静脉，右耳注射部位血管呈紫红色，血管外围不肿涨；形态学检查未见血管内有瘀血和炎性细胞浸润。结果表明，连续三天注射与人临床等浓度药物，试验样品不对家兔耳缘静脉有刺激性。实施例2和实施例3的丁酸氯维地平注射液的血管刺激性试验结果与实施例1的结果相似而未显示。

试验例6：本发明实施例1-3和比较例1-2制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂的微生物培养试验

室温条件下，分别取1瓶本发明实施例1-3和比较例1和2的制剂，模拟临床用药方式(温度25℃±2℃，相对湿度60％±10％的环境条件下)开封，分别于24小时、36小时、48小时后取样进行微生物(细菌和真菌)培养试验。

参照中国药典2010版二部的要求，上述的细菌和真菌的检查方法均进行了系统的方法学验证，验证了6种常见菌株，其中4种细菌(金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭菌[CMCC(B)64941])和2种真菌(白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003])，以确保检查结果的可靠性。

在微生物培养试验中，细菌和真菌的测定方法均参照中国药典2010年版二部无菌检查法(附录ⅪH)中的薄膜过滤法进行：按照检查法进行取样、制样、接种、培养基培养，分别于指定时间点后观察培养结果，同时进行阴性对照和阳性对照：无菌注射用水作阴性对照，细菌金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，真菌白色念珠菌[CMCC(F)98001]试剂作阳性对照。肉眼观察样品接种的培养基和阴性对照接种的培养基一样均无菌落产生，而阳性对照有菌落长出，则可判定检查结果为阴性。细菌和真菌的检查方法只是培养温度不同(细菌均为33℃培养，真菌均为25℃培养)，取样、制样等步骤一致。试验结果如表9所示。

表9：实施例和比较例的丁酸氯维地平乳剂注射剂微生物培养试验结果

微生物培养试验表明，实施例1-3的丁酸氯维地平乳剂注射剂在48小时后，仍保持无菌状态。而比较例1和比较例2分别从48小时和36小时出现染菌状态。乳剂等富含营养物质的注射剂在长时间使用过程中的安全性尚存有争议，本品已上市产品说明书要求，24小时后必须抛弃未使用完全的药物。本研究微生物培养结果表明，本发明制备的乳剂注射剂室温下48h内无细菌、真菌生长，可安全有效使用，避免不必要的浪费。

本发明还制得以大豆磷脂作为乳化剂的丁酸氯维地平乳剂注射剂以及以枸橼酸或枸橼酸钠盐作为稳定剂的丁酸氯维地平乳剂注射剂，均获得了较好的效果。

同时，采用合适的旋转灭菌工艺也对产品灭菌过程中的稳定性有帮助，进一步提高产品的安全性和有效性。

本发明制备的丁酸氯维地平乳剂注射剂，外观不透明，呈白色乳状，pH值为6.5-7.5，平均粒径200～350nm，90％粒径累积值为300～500nm。对比试验表明，与已上市丁酸氯维地平制剂比较，本发明制备的乳剂注射剂质量更高，稳定性更好；安全性试验结果表明，本发明制备的乳剂注射剂无致敏性﹑无溶血性﹑无刺激性，且在使用过程中无菌﹑内毒素检查合格，符合临床用药安全性的要求。

Claims (10)

1.一种丁酸氯维地平乳剂注射剂，包含丁酸氯维地平﹑注射用油﹑乳化剂﹑助乳剂、等渗调节剂﹑稳定剂、pH调节剂和注射用水，其中丁酸氯维地平重容百分比为0.001～1.0％(w/v)，注射用油重容百分比为1.0～50.0％(w/v)，乳化剂重容百分比为0.1～10％(w/v)，助乳剂重容百分比为0.001～2.0％(w/v)，等渗调节剂重容百分比为0.1～10.0％(w/v)，稳定剂重容百分比为0.001～5.0％(w/v)，注射用水为余量，其中所述注射用油为橄榄油。

2.权利要求1的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其中丁酸氯维地平重容百分比为0.02～0.1％(w/v)，注射用油重容百分比为15.0～25.0％(w/v)，乳化剂重容百分比为1.0～1.5％(w/v)，助乳剂重容百分比为0.01～0.05％(w/v)，等渗调节剂重容百分比为1.0～5.0％(w/v)，稳定剂重容百分比为0.005～2.0％(w/v)，注射用水为余量。

3.权利要求1的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其中所述丁酸氯维地平重容百分比为0.03-0.08％(w/v)，注射用油重容百分比为18.0-23.0％(w/v),乳化剂重容百分比为1.1-1.4％(w/v)，助乳剂重容百分比为0.015-0.04％(w/v),等渗调节剂重容百分比为2.0-2.5％(w/v)，稳定剂重容百分比为0.0075-0.2％(w/v)，注射用水为余量。

4.权利要求1的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其中所述丁酸氯维地平重容百分比为0.05-0.06％(w/v),注射用油重容百分比为20.0-21.0％(w/v)，乳化剂重容百分比为1.2-1.3％(w/v)，助乳剂重容百分比为0.02-0.03％(w/v)，等渗调节剂重容百分比为2.2-2.3％(w/v)，稳定剂重容百分比为0.01-0.015％(w/v)，注射用水为余量。

5.权利要求1-4任一项的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其中所述乳化剂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂。

6.权利要求1-4任一项的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其特征在于，所述助乳剂为油酸或油酸钠。

7.权利要求1-4任一项的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其特征在于，所述等渗调节剂为注射用甘油。

8.权利要求1-4任一项的丁酸氯维地平乳剂注射剂，其特征在于，所述稳定剂为枸橼酸、枸橼酸钠盐、乙二胺四乙酸、或乙二胺四乙酸钠盐中的一种或多种。

9.一种制备权利要求1-8任一项的丁酸氯维地平乳剂注射剂的方法，包括以下步骤：

(1)预热注射用油，加入丁酸氯维地平、乳化剂、助乳剂，以2000～12000rpm的转速搅拌形成均一的油相；

(2)将等渗调节剂和稳定剂加入预热的注射用水中，以300～3000rpm的转速搅拌形成均一的水相，调节pH值至9.1～9.6；

(3)在以2000～12000rpm的转速搅拌的条件下，将油相缓慢加入水相中，形成初乳；

(4)在40～140Mpa的压力下对初乳进行高压均质乳化，至平均粒径为200～350nm，90％粒径累积值为300～500nm；

(5)过滤，充氮，灌装；

(6)旋转水浴灭菌。

10.权利要求9的制备丁酸氯维地平乳剂注射剂的方法，旋转水浴灭菌过程中温度为121～127℃，时间为3～12min，转速为3～15rpm。