CN105454049A - 一种猕猴桃增殖培养基及其制备方法和应用 - Google Patents

一种猕猴桃增殖培养基及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种猕猴桃增殖培养基及其制备方法和应用，所述增殖培养基主要由改良WPM培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、蔗糖和琼脂所制成；所述改良WPM培养基主要由大量元素、微量元素、铁盐和有机物所制成。相对于现有技术，本发明所得猕猴桃增殖培养基，能够克服猕猴桃节间距离较短，繁殖系数较低的问题，显著提高猕猴桃增殖系数及萌芽质量，同时能够有效降低褐化率和污染率，从而满足继代增殖的需要，促进快繁体系的建立。

Description

一种猕猴桃增殖培养基及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种猕猴桃增殖培养基及其制备方法和应用，属于植物无性繁殖材料技术领域。
背景技术
猕猴桃属猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)多年生藤本植物,是20世纪最早经人工驯化栽培的四大野生果树之一，其果实具有丰富的营养价值和良好的药用价值,尤含大量Vc,享有“Vc之王”美称。红阳猕猴桃属于中华系列猕猴桃，是猕猴桃家族中罕见的红心猕猴桃，是在四川称猴桃原产地苍溪发现的自然变异品种，营养价值极高，且果肉细嫩，口感香甜，早果性、丰产性和抗逆性强，深受市场欢迎，具有极高的推广前景。
红阳猕猴桃是雌雄异株，采用种子繁殖，周期长，且不易获得大批雌株群体。目前红阳猕猴桃的常规育苗方法包括嫁接法和扦插法。但嫁接苗童期生长缓慢，育苗周期达两年以上；扦插苗成活率和繁殖效率低。仅通过传统方式获得种苗已经不能满足日益扩大的市场需求。因而采用组织培养技术繁殖猕猴桃成为重要的良种繁育途径。以往对红阳猕猴桃的研究中，普遍以MS为基本培养基，得出丛生芽诱导率最高只有27.27％，褐化率高，而且猕猴桃组培苗节间距离较短，极大地影响了猕猴桃快繁速度，制约了红阳猕猴桃的规模化生产。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种降血糖燕麦膳食纤维及其制备方法。
技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种猕猴桃增殖培养基，其主要由改良WPM培养基、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、赤霉素(GA)、蔗糖、蔗糖和琼脂所制成；所述改良WPM培养基主要由大量元素、微量元素、铁盐和有机物所制成。
作为优选，所述6-苄氨基腺嘌呤的浓度为1-2mg/L；所述萘乙酸的浓度为0.1-0.2mg/L；所述赤霉素的浓度为0.2-0.5mg/L；所述蔗糖的浓度为30g/L；所述琼脂的浓度为8g/L。
作为另一种优选，所述培养基的pH为5.6，所述猕猴桃为红阳猕猴桃。
作为另一种优选，所述大量元素由硝酸铵、硝酸钾、二水氯化钙、四水硝酸钙、硫酸镁、硫酸钾和磷酸二氢钾所提供；所述微量元素由硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、钼酸钠和硼酸所提供；所述铁盐由乙二胺四乙酸二钠和硫酸亚铁所提供；所述有机物为烟酸、盐酸硫胺素、盐酸毗哆醇、肌醇和甘氨酸。
作为另一种优选，所述每一升改良WPM培养基中包括如下：
412.5mg硝酸铵、400mg硝酸钾、96mg二水氯化钙、278mg四水硝酸钙、370mg硫酸镁、900mg硫酸钾和340mg磷酸二氢钾，提供大量元素；
22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.025mg硫酸铜、0.25mg钼酸钠和6.2mg硼酸，提供微量元素；
37.3mg乙二胺四乙酸二钠和27.8mg硫酸亚铁，提供铁盐：；
0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸毗哆醇、l00mg肌醇和2mg甘氨酸，提供有机物；
本发明还提供了所述猕猴桃增殖培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制改良WPM培养基：
①50倍大量元素母液的配制：取硝酸铵、硝酸钾、硫酸镁和硫酸钾，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅰ；取二水氯化钙和四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅱ；取磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅲ；
使用时按用量分别取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ；
②200倍的微量元素母液的配制：取硫酸锰，硫酸锌，硫酸铜，钼酸钠和硼酸，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅳ，使用时按用量取母液Ⅳ；
③100倍的EDTA-铁盐母液的配制：取乙二胺四乙酸二钠，加蒸馏水溶解，然后加入硫酸亚铁，加热溶解，定容，配成母液Ⅴ，使用时按用量取母液Ⅴ；
④100倍的有机成分母液的配制：取烟酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，肌醇和甘氨酸，用蒸馏水溶解定容，配成母液Ⅵ，使用时按用量取母液Ⅵ；
按照用量取各种母液混合，得未定容的改良WPM培养基；
(2)激素母液的配制：称取萘乙酸，先用体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容，配成的萘乙酸母液，使用时按用量取萘乙酸母液；称取赤霉素，先用体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容，配成赤霉素母液，使用时按用量取赤霉素母液；称取6-苄氨基腺嘌呤，先用NaOH溶解，然后加水定容，配成6-苄氨基腺嘌呤母液，使用时按用量取6-苄氨基腺嘌呤母液；
(3)取步骤(1)所得未定容的改良WPM培养基，再加入琼脂，蔗糖，6-苄氨基腺嘌呤母液，萘乙酸母液，加热溶解后定容至，调pH值至5.6，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，采用过滤灭菌法按照用量添加步骤(2)中配制的赤霉素母液，分装，即得。
作为优选，所述猕猴桃增殖培养基的制备方法包括以下步骤
(1)配制改良WPM培养基：
①50倍大量元素母液的配制：分别称取20.625g硝酸铵、20g硝酸钾、18.5g硫酸镁、45g硫酸钾，然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取4.8g二水氯化钙、13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取17g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
②200倍的微量元素母液的配制：称取4.46g硫酸锰，1.72g硫酸锌，0.005g硫酸铜，0.05g钼酸钠，1.24g硼酸，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取5ml母液Ⅳ；
③100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取3.73g乙二胺四乙酸二钠，加200ml蒸馏水进行溶解，再称取2.78g硫酸亚铁加入溶解，溶解时需要用电热炉加热，当溶液呈浅棕色透明液体时，停止加热，加蒸馏水定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
④100倍的有机成分母液的配制：称取0.05g烟酸，0.05g盐酸硫胺素，0.05g盐酸吡哆醇，10g肌醇，0.2g甘氨酸，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
按上述每升用量取各种母液混合，得未定容的改良WPM培养基；
(2)激素母液的配制：称取50mgNAA，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取0.2-0.4mLNAA母液；
称取50mg赤霉素GA3，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的GA3母液，使用时配制每升增殖培养基取0.4-1mL赤霉素GA3母液；
称取50mg6-BA，先用5ml0.1mol·L-1NaOH溶解，然后加水定容至100mL，配成0.5mg·mL-1的6-BA母液，使用时配制每升增殖培养基取2-4mL6-BA母液；
(3)取步骤(1)所得未定容的改良WPM培养基，再加入琼脂8g，蔗糖30g，6-BA母液2-4mL，NAA母液0.2-0.4mL，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L-1盐酸或氢氧化钠调pH值至5.6，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤(2)中配制的GA3母液，每升增殖培养基加0.4-1mL，然后在接种台上分装培养基。
本发明最后提供了所述猕猴桃增殖培养基的应用，即利用所述培养基培养猕猴桃的方法，包括以下步骤：将猕猴桃无菌苗接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度3000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为16小时。
有益效果：相对于现有技术，本发明所得猕猴桃增殖培养基，能够克服猕猴桃节间距离较短，繁殖系数较低的问题，显著提高猕猴桃增殖系数及萌芽质量，同时能够有效降低褐化率和污染率，从而满足继代增殖的需要，促进快繁体系的建立。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
实施例1
增殖培养基配方：改良WPM培养基+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.6；
每升改良WPM培养基中含：
大量元素：412.5硝酸铵、400mg硝酸钾、96mg二水氯化钙、278mg四水硝酸钙、370mg硫酸镁、900mg硫酸钾、340mg磷酸二氢钾；
微量元素：22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.025mg硫酸铜、0.25mg钼酸钠、6.2mg硼酸；
铁盐：37.3mg乙二胺四乙酸二钠、27.8mg硫酸亚铁；
有机物：0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸毗哆醇、l00mg肌醇、2mg甘氨酸；
增殖培养基的制备：
(1)配制改良WPM培养基：
①50倍大量元素母液的配制：分别称取20.625g硝酸铵、20g硝酸钾、18.5g硫酸镁、45g硫酸钾，然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取4.8g二水氯化钙、13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取17g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
②200倍的微量元素母液的配制：称取4.46g硫酸锰，1.72g硫酸锌，0.005g硫酸铜，0.05g钼酸钠，1.24g硼酸，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取5ml母液Ⅳ；
③100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取3.73g乙二胺四乙酸二钠，加200ml蒸馏水进行溶解，再称取2.78g硫酸亚铁加入溶解，溶解时需要用电热炉加热，当溶液呈浅棕色透明液体时，停止加热，加蒸馏水定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
④100倍的有机成分母液的配制：称取0.05g烟酸，0.05g盐酸硫胺素，0.05g盐酸吡哆醇，10g肌醇，0.2g甘氨酸，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：
称取50mg6-BA，先用5ml0.1mol·L-1NaOH溶解，然后加水定容至100mL，配成0.5mg·mL-1的6-BA母液，使用时配制每升增殖培养基取2mL6-BA母液；
称取50mgNAA，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取0.2mLNAA母液；
称取50mgGA3，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的GA3母液，使用时配制每升增殖培养基取0.4mLGA3母液；
(3)按上述步骤(1)中①-④中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂8g，蔗糖30g，6-BA母液2mL，NAA母液0.2mL，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L-1盐酸或氢氧化钠调pH值至5.6，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤(2)中配制的GA3母液，每升增殖培养基加0.4mL，然后在接种台上分装培养基。
将红阳猕猴桃无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度3000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为16小时。
30天后，考察红阳猕猴桃生长状况，计算其增殖倍数、褐化率和污染率。
实施例2
增殖培养基配方：改良WPM培养基+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.6；
每升改良WPM培养基中含：
大量元素：412.5硝酸铵、400mg硝酸钾、96mg二水氯化钙、278mg四水硝酸钙、370mg硫酸镁、900mg硫酸钾、340mg磷酸二氢钾；
微量元素：22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.025mg硫酸铜、0.25mg钼酸钠、6.2mg硼酸；
铁盐：37.3mg乙二胺四乙酸二钠、27.8mg硫酸亚铁；
有机物：0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸毗哆醇、l00mg肌醇、2mg甘氨酸；
增殖培养基的制备：
(1)配制改良WPM培养基：
①50倍大量元素母液的配制：分别称取20.625g硝酸铵、20g硝酸钾、18.5g硫酸镁、45g硫酸钾，然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取4.8g二水氯化钙、13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取17g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
②200倍的微量元素母液的配制：称取4.46g硫酸锰，1.72g硫酸锌，0.005g硫酸铜，0.05g钼酸钠，1.24g硼酸，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取5ml母液Ⅳ；
③100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取3.73g乙二胺四乙酸二钠，加200ml蒸馏水进行溶解，再称取2.78g硫酸亚铁加入溶解，溶解时需要用电热炉加热，当溶液呈浅棕色透明液体时，停止加热，加蒸馏水定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
④100倍的有机成分母液的配制：称取0.05g烟酸，0.05g盐酸硫胺素，0.05g盐酸吡哆醇，10g肌醇，0.2g甘氨酸，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：
称取50mg6-BA，先用5ml0.1mol·L-1NaOH溶解，然后加水定容至100mL，配成0.5mg·mL-1的6-BA母液，使用时配制每升增殖培养基取3mL6-BA母液；
称取50mgNAA，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取0.2mLNAA母液；
称取50mgGA3，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的GA3母液，使用时配制每升增殖培养基取0.8mLGA3母液；
(3)按上述步骤(1)中①-④中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂8g，蔗糖30g，6-BA母液3mL，NAA母液0.2mL，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L-1盐酸或氢氧化钠调pH值至5.6，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤(2)中配制的GA3母液，每升增殖培养基加0.8mL，然后在接种台上分装培养基。
将红阳猕猴桃无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度3000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为16小时。
30天后，考察红阳猕猴桃生长状况，计算其增殖倍数、褐化率和污染率。
实施例3
增殖培养基配方：改良WPM培养基+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+GA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.6；
每升改良WPM培养基中含：
大量元素：412.5硝酸铵、400mg硝酸钾、96mg二水氯化钙、278mg四水硝酸钙、370mg硫酸镁、900mg硫酸钾、340mg磷酸二氢钾；
微量元素：22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.025mg硫酸铜、0.25mg钼酸钠、6.2mg硼酸；
铁盐：37.3mg乙二胺四乙酸二钠、27.8mg硫酸亚铁；
有机物：0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸毗哆醇、l00mg肌醇、2mg甘氨酸；
增殖培养基的制备：
(1)配制改良WPM培养基：
①50倍大量元素母液的配制：分别称取20.625g硝酸铵、20g硝酸钾、18.5g硫酸镁、45g硫酸钾，然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取4.8g二水氯化钙、13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取17g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
②200倍的微量元素母液的配制：称取4.46g硫酸锰，1.72g硫酸锌，0.005g硫酸铜，0.05g钼酸钠，1.24g硼酸，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取5ml母液Ⅳ；
③100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取3.73g乙二胺四乙酸二钠，加200ml蒸馏水进行溶解，再称取2.78g硫酸亚铁加入溶解，溶解时需要用电热炉加热，当溶液呈浅棕色透明液体时，停止加热，加蒸馏水定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
④100倍的有机成分母液的配制：称取0.05g烟酸，0.05g盐酸硫胺素，0.05g盐酸吡哆醇，10g肌醇，0.2g甘氨酸，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：
称取50mg6-BA，先用5ml0.1mol·L-1NaOH溶解，然后加水定容至100mL，配成0.5mg·mL-1的6-BA母液，使用时配制每升增殖培养基取4mL6-BA母液；
称取50mgNAA，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取0.4mLNAA母液；
称取50mgGA3，先用5ml体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL-1的GA3母液，使用时配制每升增殖培养基取1mLGA3母液；
(3)按上述步骤(1)中①-④中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂8g，蔗糖30g，6-BA母液4mL，NAA母液0.4mL，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L-1盐酸或氢氧化钠调pH值至5.6，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤(2)中配制的GA3母液，每升增殖培养基加1mL，然后在接种台上分装培养基。
将红阳猕猴桃无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度3000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为16小时。
30天后，考察红阳猕猴桃生长状况，计算其增殖倍数、褐化率和污染率。
实验例本发明增殖培养基对红阳猕猴桃的培养效果考察
对照组按照本发明实施例2增殖培养基的配方和制备方法，不同之处在于用市售WPM培养基(南京森贝伽生物科技有限公司生产)替换所述改良WPM培养基，其他配方、制备方法及使用其培养红阳猕猴桃的方法均相同。
培养30天后，红阳猕猴桃生长状况、增殖倍速、褐化率和污染率考察结果见表1。
表1红阳猕猴桃各生长指标考察结果
由上表1结果可得，相比较对照组，使用本发明所得增殖培养基培养红阳猕猴桃，其增殖倍数显著提高，褐化率均为零，无褐化现象发生，同时污染率低，均小于2％。
此外，相比较对照组，使用本发明所得增殖培养基培养红阳猕猴桃，其组培苗生长健壮，节间距离均显著增加。

Claims (7)

1.一种猕猴桃增殖培养基，其特征在于，其主要由改良WPM培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、蔗糖和琼脂所制成；所述改良WPM培养基主要由大量元素、微量元素、铁盐和有机物所制成。
2.根据权利要求1所述猕猴桃增殖培养基，其特征在于，所述6-苄氨基腺嘌呤的浓度为1-2mg/L；所述萘乙酸的浓度为0.1-0.2mg/L；所述赤霉素的浓度为0.2-0.5mg/L；所述蔗糖的浓度为30g/L；所述琼脂的浓度为8g/L。
3.根据权利要求1所述猕猴桃增殖培养基，其特征在于，所述培养基的pH为5.6，所述猕猴桃为红阳猕猴桃。
4.根据权利要求1所述猕猴桃增殖培养基，其特征在于，所述大量元素由硝酸铵、硝酸钾、二水氯化钙、四水硝酸钙、硫酸镁、硫酸钾和磷酸二氢钾所提供；所述微量元素由硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、钼酸钠和硼酸所提供；所述铁盐由乙二胺四乙酸二钠和硫酸亚铁所提供；所述有机物为烟酸、盐酸硫胺素、盐酸毗哆醇、肌醇和甘氨酸。
5.根据权利要求1所述猕猴桃增殖培养基，其特征在于，所述每一升改良WPM培养基中包括如下：
412.5mg硝酸铵、400mg硝酸钾、96mg二水氯化钙、278mg四水硝酸钙、370mg硫酸镁、900mg硫酸钾和340mg磷酸二氢钾，提供大量元素；
22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.025mg硫酸铜、0.25mg钼酸钠和6.2mg硼酸，提供微量元素；
37.3mg乙二胺四乙酸二钠和27.8mg硫酸亚铁，提供铁盐：；
0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸毗哆醇、l00mg肌醇和2mg甘氨酸，提供有机物。
6.权利要求1-5任一项所述猕猴桃增殖培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制改良WPM培养基：
①50倍大量元素母液的配制：取硝酸铵、硝酸钾、硫酸镁和硫酸钾，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅰ；取二水氯化钙和四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅱ；取磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅲ；
使用时按用量分别取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ；
②200倍的微量元素母液的配制：取硫酸锰，硫酸锌，硫酸铜，钼酸钠和硼酸，用蒸馏水溶解定容配成母液Ⅳ，使用时按用量取母液Ⅳ；
③100倍的EDTA-铁盐母液的配制：取乙二胺四乙酸二钠，加蒸馏水溶解，然后加入硫酸亚铁，加热溶解，定容，配成母液Ⅴ，使用时按用量取母液Ⅴ；
④100倍的有机成分母液的配制：取烟酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，肌醇和甘氨酸，用蒸馏水溶解定容，配成母液Ⅵ，使用时按用量取母液Ⅵ；
按照用量取各种母液混合，得未定容的改良WPM培养基；
(2)激素母液的配制：称取萘乙酸，先用体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容，配成的萘乙酸母液，使用时按用量取萘乙酸母液；称取赤霉素，先用体积浓度95％的酒精溶解，然后加水定容，配成赤霉素母液，使用时按用量取赤霉素母液；称取6-苄氨基腺嘌呤，先用NaOH溶解，然后加水定容，配成6-苄氨基腺嘌呤母液，使用时按用量取6-苄氨基腺嘌呤母液；
(3)取步骤(1)所得未定容的改良WPM培养基，再加入琼脂，蔗糖，6-苄氨基腺嘌呤母液，萘乙酸母液，加热溶解后定容至，调pH值至5.6，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，采用过滤灭菌法按照用量添加步骤(2)中配制的赤霉素母液，分装，即得。
7.权利要求1-6任一项所述猕猴桃增殖培养基的应用，其特征在于，利用所述培养基培养猕猴桃的方法，包括以下步骤：将猕猴桃无菌苗接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度3000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为16小时。
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