CN105412197B - 蒙药瞿麦中总生物碱超声提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种最优的蒙药瞿麦中总生物碱超声提取方法，最佳提取工艺条件为超声温度53℃、料液比31(g/mL)、超声时间41min、超声功率140W。根据该提取工艺条件进行蒙药瞿麦中总生物碱超声提取，总生物碱提取率可以到达到3.085mg/g。本发明方法提取的总生物碱含量高，节省了大量的时间和溶剂，为开发新药、合理利用资源提供了新途径、新方法。
Description
技术领域
本发明属于化学成分提取领域，特别地，涉及总生物碱提取领域。
背景技术
生物碱是生物体内的碱性含氮有机化合物，广泛分布于动、植物中，大多数为较复杂环状结构的生物碱，对动、植物的生命至关重要。大量的药理和临床研究表明，生物碱具有广泛的药理及生物活性，如抗菌、消炎、镇痛等，且作为药物不良反应极少，在食品、卫生、医药等方面有着巨大的应用潜力，近年来已成为研究热点。
蒙药瞿麦为石竹科植物瞿麦Dianthus superbus L.的带花地上部分，表面呈淡绿色或黄绿色，光滑无毛，无节间，断面中空。分布于内蒙古、山东、江苏、浙江、江西、河南、贵州、新疆等地。有利尿通淋、破血通经等功效，蒙医用于治疗热淋、血淋、石淋等病症，多配方用，味苦。
对于蒙药瞿麦中总生物碱的提取方法，根据传统的正交设计方法是一种用线性数学模型进行设计的设计方法，可以找出多个因素水平的最佳组合，但只能分析离散型数据，具有精度不高、预测性不佳等缺点。并不能获得最佳的蒙药瞿麦中总生物碱提取方法。同时，目前尚无对蒙药瞿麦中总生物碱提取工艺进行研究的相关报导
发明内容
本发明的目的是为了提供一种最优的蒙药瞿麦中总生物碱超声提取方法：
提取条件为超声温度53℃、料液比31(g/mL)、超声时间41mi n、超声功率140W。
根据该提取工艺条件进行蒙药瞿麦中总生物碱超声提取，总生物碱提取率可以到达到3.085mg/g。
本发明通过单因素考察与响应面优化相结合对蒙药瞿麦中总生物碱提取工艺进行优化，提取的总生物碱含量高，节省了大量的时间和溶剂，为开发新药、合理利用资源提供了新途径、新方法。
附图概要说明
图1超声温度和料液比及其交互作用对总生物碱提取率影响的三维曲面和等高线图
图2超声温度和超声时间及其交互作用对总生物碱提取率影响的三维曲面和等高线图
图3超声温度和超声功率及其交互作用对总生物碱提取率影响的三维曲面和等高线图
图4料液比和超声时间及其交互作用对总生物碱提取率影响的三维曲面和等高线图
图5料液比和超声功率及其交互作用对总生物碱提取率影响的三维曲面和等高线图
图6超声时间和超声功率及其交互作用对总生物碱提取率影响的三维曲面和等高线图
具体实施方式
实施例1
提取工艺参数优化过程
1准备
1.1材料与试剂
瞿麦[内蒙古天立药业，经内蒙古医科大学药学院药用植物学教研室乔俊缠教授鉴定为石竹科植物瞿麦Dianthus superbus L.的带花地上部分]。盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110713-201212，供含量测定使用)、盐酸、95％乙醇、三氯甲烷、石油醚、柠檬酸、柠檬酸钠、溴甲酚绿、邻苯二甲酸氢钾，其他试剂均为国产分析纯。
1.2仪器
TU-1901型双光束紫外分光光度计(北京普析通用有限责任公司)；HHS-4S型电子恒温不锈钢水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂)；DHG-9030A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；SHB-B95T型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；LX-07A多功能粉碎机(上海江信科技有限公司)；KH5200DE型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；AB135-S分析天平(Made in Switzerland)；BSA124S型电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；B-220型恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)；RE52CS型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
2实验方法
2.1缓冲溶液与显色剂的制备
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液：取40mL 0.1mol/L的柠檬酸溶液和85mL 0.1mol/L的柠檬酸钠溶液置于250mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，得pH＝5.4的缓冲溶液。
溴甲酚绿指示液：称取溴甲酚绿0.125g，用25mL 0.1mol/L NaOH溶液溶解后，加邻苯二甲酸氢钾2.55g，用水溶解，转移至250mL容量瓶中，用蒸馏水定容即得。
2.2对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱3.00mg，用1％酸乙醇溶解后定容至10mL容量瓶中，摇匀，得浓度为0.327mg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
精密称取瞿麦粉末1.0g，按1:10的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2.0h，取药渣，加入一定比例1％酸乙醇，静置30min，在一定超声温度及超声功率下超声提取一定时间后，抽滤，滤液浓缩至25mL。
2.4测定波长的确定
精密量取对照品溶液0.4mL，加1％酸乙醇至1mL，置分液漏斗中，加入pH＝5.4缓冲溶液5mL，溴甲酚绿指示液2mL，振摇1min，加10mL三氯甲烷，振摇1min，静置30min。另取供试品溶液1mL，同法操作。在200～800nm进行波长扫描，吸收光谱显示对照品和供试品溶液均在419nm处有最大吸收，故选择419nm作为测定波长。
2.5标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置分液漏斗中，加1％酸乙醇至1mL，加pH＝5.4缓冲溶液5mL，溴甲酚绿指示液2mL，振摇1min，加10mL三氯甲烷，振摇1min，静置30min。以相应的试剂为空白，在419nm波长处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，溶液浓度(C)为横坐标，得回归方程为A＝0.0535C-0.0325(r＝0.9999,n＝5)，线性范围为3.27～26.16μg/mL。
表1 盐酸小檗碱标准曲线实验数据
3实验设计
3.1单因素实验
按供试品溶液的制备方法，选取不同超声温度、料液比、超声时间、超声功率进行单因素实验，得出总生物碱提取率与各因素的关系。
3.1.1超声温度对蒙药瞿麦总生物碱提取率的影响
精密称取蒙药瞿麦粉末1.0g，按料液比1:30(g/mL)，超声时间30min，超声功率200W，超声温度分别为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃进行提取，按“2.4”项下的方法处理后测定吸光度。结果见图3，当温度在40℃、50℃、60℃时总生物碱的提取率较高，故选择40℃、50℃、60℃作为响应面法的考察范围。
表2 超声温度对蒙药瞿麦总生物碱提取率的实验结果
3.1.2料液比对蒙药瞿麦总生物碱提取率的影响
精密称取蒙药瞿麦粉末1.0g，按超声温度50℃，超声时间30min，超声功率200W，料液比分别为1:20、1:25、1:30、1:35、1:40(g/mL)进行提取，按“2.4”项下的方法处理后测定吸光度。结果见图4，当料液比为1:25、1:30、1:35时提取率较高，故选择1:25、1:30、1:35(g/mL)作为响应面法的考察范围。
表3 料液比对蒙药瞿麦总生物碱提取率的实验结果
3.1.3超声时间对蒙药瞿麦总生物碱提取率的影响
称取蒙药瞿麦粉末1.0g，按超声温度50℃，料液比1:30(g/mL)，超声功率200W，超声时间分别为20min、30min、40min、50min、60min进行提取，按“2.4”项下的方法处理后测定吸光度。结果见图5，当时间为30min、40min、50min时提取率较高，故选择30min、40min、50min作为响应面法的考察范围。
表4 超声时间对蒙药瞿麦中总生物碱提取率的实验结果
3.1.4超声功率对蒙药瞿麦总生物碱提取率的影响
称取蒙药瞿麦粉末1.0g，按超声温度50℃，料液比1:30(g/mL)，超声时间30min，超声功率分别为120W、140W、160W、180W、200W进行提取，按“2.4”项下的方法处理后测定吸光度。结果见图6，当功率在180W、200W时提取率突增，可能有杂质出现，故选择120W、140W、160W作为响应面法的考察范围。
表5 超声功率对蒙药瞿麦中总生物碱提取率的实验结果
3.2蒙药瞿麦总生物碱提取工艺条件响应面分析试验结果
3.2.1总生物碱提取试验方案和因素水平：采用Design-Expert 8.0统计分析软件中Box-Behnken实验设计原理，综合单因素实验所得结果，选取超声温度、料液比、超声时间、超声功率四个因素，设计四因素三水平的响应面分析实验，因素与水平见表6。
表6 试验因素水平表
3.2.2对蒙药瞿麦中总生物碱提取工艺进行响应面分析，具体试验方案见下表，表中分为24次析因实验和5次中心实验，其中中心实验用以估计实验误差。
表7 响应面分析的实验数据
表8 响应面分析方案及结果
表9 回归模型各项的回归分析
注：P值小于0.05，表示对应因素对响应值的影响显著
以总生物碱的提取率(Y)为考察响应指标，建立其与超声温度、料液比、超声时间、超声功率四因素的回归模型，得到二次回归方程为：
Y＝3.04+0.039X1+0.21X2+6.167×10-3X3+9.583×10-3X4+0.075X1X2+0.073X1X3+0.072X1X4-2.500×10-4X2X3+0.17X2X4-0.010X3X4-0.13X1 2-0.47X2 2-0.19X3 2-0.38X4 2(R2＝0.9980)
3.2.3方程的显著性检验
由表8方差分析结果看出，总模型显著(p<0.0001)，表明不同因素间的差异高度显著；失拟项不显著(p>0.05)，表明模型选择合适。由p值可以看出各因素对总生物碱提取率影响顺序：X2>X1>X4>X3，即料液比>超声温度>超声功率>超声时间，其中X3 2、X4 2对总生物碱提取率的有显著影响。相关系数R2＝0.9980，表示模型拟合程度良好；修正相关系数平方表明实验误差小，可用该模型进行实验预测。因此可以用此模型对瞿麦中总生物碱提取率进行分析与预测[7]。
3.2.4响应面及等高线分析
图1～图6是根据上述模拟的多元回归方程和回归方差的分析，得到各因素对瞿麦中总生物碱提取率影响的响应面及等高线图，此反映了任意两因素及其交互作用对总生物碱提取率的影响，等高线的形状越趋向椭圆，表示交互作用越强；趋向于正圆，则表示交互作用越弱。
由图1～图6可以看出，超声温度、料液比、超声时间与超声功率对蒙药瞿麦中总生物碱提取率均有影响，料液比的影响比较明显，特别是料液比与超声功率的交互作用影响较大，在响应曲面图中表现为曲面坡度大，变化明显。
3.2.5瞿麦中总生物碱提取工艺条件优化
利用Design-Expert 8.0统计分析软件对边界值和求得的极值进行分析后，得到最优的提取条件为超声温度52.81℃、料液比1:31.34(g/mL)、超声时间40.65min、超声功率141.98W，理论预测值Y(总生物碱提取率)＝3.07411mg/g。按照修正条件得到超声温度53℃，料液比31(g/mL)，超声时间41min，超声功率140W，进行验证实验。
4总生物碱含量测定(工艺验证试验)
按“3.2.5”项下的方法提取蒙药瞿麦中的总生物碱，按“2.4”项下的方法显色，在419nm处测定吸光度，由回归方程计算瞿麦中总生物碱的含量为3.085mg/g，RSD为0.18％，结果见表11，表明该工艺稳定可行。
表10 总生物碱含量测量数据
表11 总生物碱含量测定结果
5方法学考察
5.1精密度考察
精密量取同一供试品溶液5份，每份1.0mL，按“2.4”项下的方法处理后测定吸光度。以相应试剂为空白，于419nm处测定吸光度，通过回归方程计算瞿麦中总生物碱含量。RSD为1.2％，表明精密度良好。
表12 精密度实验结果
5.2稳定性考察
精密量取同一供试品溶液，按“2.4”项下的方法处理后测定吸光度。在419nm处，每隔10min测定吸光度1次，测定60min，结果显示，供试品溶液在60min内稳定性良好，RSD为0.26％。
表13 稳定性实验结果
5.3重复性实验
称取瞿麦粉末1.0g，5份，按供试液溶液的制备和显色方法，在419nm处测定吸光度，通过回归方程计算瞿麦中总生物碱含量，RSD为0.18％，结果表明该方法重复性良好。
表14 重复性的实验数据
表15 重复性的实验结果
5.4加样回收率实验
称取瞿麦粉末1.0g，9份，分别加入相当于供试品中总生物碱含量80％、100％、120％的盐酸小檗碱对照品，按供试液溶液的制备和显色方法，在419nm处测定吸光度，计算加样回收率，结果见表17。
表16 加样回收实验数据
表17 加样回收实验结果
6结论
传统的正交设计方法是一种用线性数学模型进行设计的设计方法，可以找出多个因素水平的最佳组合，但只能分析离散型数据，具有精度不高、预测性不佳等缺点。响应面分析方法是研究几种因素间交互作用的回归分析方法，得到的回归方程精度高，是比较理想的方法。
目前尚无对蒙药瞿麦中总生物碱提取工艺进行研究的相关报导，本发明通过单因素考察与响应面优化相结合对蒙药瞿麦中总生物碱提取工艺进行优化，优化工艺条件为：超声温度53℃，料液比1:31g/mL，超声时间41min，超声功率140W。得到蒙药瞿麦中总生物碱含量为3.085mg/g，验证值和预测值吻合较好，说明模型预测可靠，可用于蒙药瞿麦中总生物碱超声提取工艺的优化。本方法提取的总生物碱含量高，节省了大量的时间和溶剂。
Claims (1)
1.一种蒙药瞿麦中总生物碱超声提取方法，其特征在于， 精密称取瞿麦粉末，按1:10的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2.0h，取药渣，加入一定比例1%酸乙醇，静置30min，提取条件为超声温度53℃、料液比1:31g/mL，超声时间41min，超声功率140W，抽滤，滤液浓缩。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103169750A (zh) * | 2013-03-14 | 2013-06-26 | 内蒙古医科大学 | 从瞿麦中提取黄酮的超声提取方法 |
| CN103520252A (zh) * | 2013-10-18 | 2014-01-22 | 内蒙古医科大学 | 酶辅助超声法提取蒙药瞿麦总皂苷的方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103169750A (zh) * | 2013-03-14 | 2013-06-26 | 内蒙古医科大学 | 从瞿麦中提取黄酮的超声提取方法 |
| CN103520252A (zh) * | 2013-10-18 | 2014-01-22 | 内蒙古医科大学 | 酶辅助超声法提取蒙药瞿麦总皂苷的方法 |
| CN104997825A (zh) * | 2015-06-17 | 2015-10-28 | 内蒙古医科大学 | 从漏芦花中提取总生物碱的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 中蒙药生物碱的提取方法与工艺研究;李云超等;《北方药学》;20131231;第10卷(第12期);50-52 |
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