CN105396140B - 抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统及其构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统。所述抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统包括紫杉醇/阴离子环糊精‑DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物，由紫杉醇、阴离子环糊精、DNA和甘露糖修饰三甲基壳聚糖组成，所述抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统通过所述甘露糖配体靶向树突状细胞。本发明还公开了一种抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的构建方法。本发明提供一种既能增加荷瘤机体抗肿瘤免疫应答，且能抑制或逆转肿瘤免疫逃逸的综合免疫给药系统，且其制备方法简捷，靶向效率高。

Description

抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统及其构建方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及药物递送系统，具体涉及一种抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统及其构建方法。

背景技术

肿瘤免疫治疗是继手术治疗、药物治疗、放射治疗之后的一种新的肿瘤治疗手段，在预防肿瘤复发、转移、治疗肿瘤病灶等方面具有其独特的优势。世界上首个肿瘤治疗性疫苗，即表皮生长因子(EGF)肿瘤治疗性疫苗，已于2008年6月上市。该疫苗可以有效延长晚期肺癌患者的生存期，副反应很轻，且在停药后自动消失，也未发生自身免疫反应症状。可见，肿瘤治疗性疫苗在抗肿瘤治疗具有明显的优势。现有抗肿瘤免疫治疗的研究主要集中在提高机体抗肿瘤免疫应答或者阻止肿瘤免疫逃逸，而肿瘤免疫响应是一个相当复杂机制，单纯一方面的考虑是难以达到抗肿瘤治疗的目的。

未成熟树突状细胞(Dendritic cells，DC)具有抗原递呈作用，它通过对肿瘤抗原或相关质粒DNA内吞，加工处理，形成成熟树突状细胞。有研究表明，抗肿瘤疫苗的免疫效应在体内中不甚理想的主要原因是质粒DNA或多肽在进入细胞核内前就被大量的降解，且肿瘤患者的DC对抗原捕获和DNA的摄取能力较低，这也是为何现有许多抗肿瘤DNA或多肽疫苗无法真正进入临床的主要原因之一。随着纳米技术的不断发展，已有微球、脂质体、纳米粒、囊泡等纳米给药载体包裹DNA、多肽疫苗进行免疫研究的报道，纳米给药系统能增加DC对DNA或多肽的摄取率，且纳米给药载体本身可以作为佐剂诱导增加T细胞反应而增强免疫效应。

DC细胞膜表面分布三种受体：Fc受体、DEC-205受体、甘露糖受体(MMR)，且DC细胞膜的表面带负电荷，表面带正电荷的纳 米给药载体可增加DC对DNA的摄取率和保护作用。通过药剂学及化学合成手段，纳米载体材料上引入甘露糖配体，通过甘露糖受体的介导，将DNA疫苗或多肽疫苗纳米粒直接靶向于DC，增加了DC对DNA疫苗或多肽的细胞摄取。

在肿瘤微环境中存在有许多抑制性的免疫细胞，其中调节性T细胞(RegμLatory TLymphoeyte,Treg)在肿瘤微环境中的比例高，是肿瘤微环境参与构建免疫抑制性重要因素。研究表明阻断Treg增殖、或消除肿瘤部位的Treg能增强抗肿瘤免疫效果。现有研究表明，化学治疗和免疫治疗的结合可以弥补各自治疗过程中的不足，同时可以增加抗肿瘤效果。已报道少量的紫杉醇能消除Treg从而逆转肿瘤免疫逃逸，并促进DC成熟。

综上所述，研制理想的新型给药系统以提高树突状细胞对DNA疫苗或抗原的摄取率，防止DNA或多肽在进入细胞核内前被大量的降解，增加DNA疫苗或多肽进入树突状细胞的量，是目前疫苗研究中迫切需要攻克的课题之一。因此，为达到理想的抗肿瘤免疫治疗效果，有必要提供一种既能增加荷瘤机体抗肿瘤免疫应答，且能抑制或逆转肿瘤免疫逃逸的综合免疫给药系统。

发明内容

为了解决上述现有抗肿瘤DNA或多肽疫苗在体内效应不佳的技术问题，本发明提供一种既能增加荷瘤机体抗肿瘤免疫应答，且能抑制或逆转肿瘤免疫逃逸的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统及其构建方法，并具有制备方法简捷，靶向效率高的优点。

本发明提供一种抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统，其特征在于，包括紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物，由紫杉醇、阴离子环糊精、DNA和甘露糖修饰三甲基壳聚糖组成，其中，

所述紫杉醇与所述阴离子环糊精以摩尔比1:1比例包合而成紫杉醇/阴离子环糊精包合物；

所述DNA与所述甘露糖修饰三甲基壳聚糖通过正负电荷吸附形成DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物；

所述DNA与所述甘露糖修饰三甲基壳聚糖质量比为1:10～40；

所述紫杉醇与所述DNA质量比为1:0.25～4。

在本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的一种较佳实施例中，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物的纳米粒粒径为70nm～200nm，电位值为0～+45mV。

在本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的一种较佳实施例中，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物的纳米粒粒径的平均值为148.7±5.9nm，电位值的平均值为+22.72±1.75mV。

在本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的一种较佳实施例中，所述DNA为pEGFP-Trp2-GM-CSF-Fc质粒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的一种较佳实施例中，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物是所述紫杉醇/阴离子环糊精包合物与所述DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物通过形成离子交联结合而成。

在本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的一种较佳实施例中，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物的靶向基团为树突状细胞细胞膜表面的甘露糖受体。

本发明提供一种抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的构建方法，包括以下步骤：

步骤一、将紫杉醇按至少1:1摩尔比，加入到0.25～0.75mg·mL^-1阴离子环糊精中，常温下进行超声包合，再离心处理，最后经微孔滤膜过滤，得到紫杉醇/阴离子环糊精包合物；

步骤二、将DNA按1:10～40质量比，加入到0.05～0.25mg·mL^-1甘露糖修饰三甲基壳聚糖中，进行漩涡电荷吸附，得到DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物；

步骤三、将步骤一制备的紫杉醇/阴离子环糊精包合物加入到步骤二制备的DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物中，再次进行漩涡交联混合，得到紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物。

相较于现有技术，本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统及其构建方法具有以下有益效果：

一、通过制备紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物，开发了一个综合免疫给药系统，既能增加荷瘤机体抗肿瘤免疫应答，且能抑制或逆转肿瘤免疫逃逸。

二、通过在给药系统中引入紫杉醇，使得纳米给药载体本身可以作为佐剂诱导调节T细胞数目随着PTX的加入而降低，从而抑制或逆转肿瘤免疫逃逸。

三、通过在给药系统中引入阴离子环糊精，使得紫杉醇可以通过包合于阴离子环糊精成为阴离子交联剂。

四、通过在给药系统中引入三甲基壳聚糖，使得整个给药载体带正电，有利于与带负电的DNA结合。

五、通过在给药系统中引入甘露糖配体，使得紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物能通过树突状细胞膜表面分布甘露糖受体的介导，将纳米粒直接靶向于未成熟的树突状细胞，增加了未成熟的树突状细胞对DNA疫苗或多肽的细胞摄取。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：

图1为pEGFP-N2质粒载体构建图；

图2是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三 甲基壳聚糖纳米复合物纳米粒粒径分布柱状图；

图3是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物纳米粒Zeta电压分布曲线图；

图4是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物电镜图；

图5是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物对树突细胞表型的影响散点图，其中(a)为加入带PE标记的鼠抗CD11c表达量散点图，(b)为加入带FITC标记的鼠抗CD80散点图，(c)为加入带PE-Cy5标记的鼠抗CD86散点图；

图6是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物对树突细胞的细胞因子分泌的影响的柱状图，其中(a)为IL-4含量柱状图，(b)为IL-10含量柱状图，(c)为IL-12p70含量柱状图；

图7是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物刺激后的树突细胞产生调节T细胞的数量柱状图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：制备紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物。其具体步骤如下：

1.1 紫杉醇/阴离子环糊精包合物(以下称为PTX/SBE包合物)的制备，紫杉醇(Paclitaxel，以下称为PTX)按1:1摩尔比加入到0.25mg·mL^-1阴离子环糊精(Sulfobutylether-β-Cyclodextrin)，以下称 为SBE)中，在25℃温度下及1000w的功率下进行超声处理4h，再经10000g转速离心10min最后经0.45μm微孔滤膜过滤，得到PTX/SBE包合物。

1.2 构建pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc质粒。

(1)分别根据GenBank的Trp2、GM-CSF、Fc的功能编码区序列进行引物设计,人外周白细胞或淋巴细胞总RNA提取及cDNA合成，以反转录出的各自第一条cDNA为模板，用PCR扩增Trp2、GM-CSF、Fc目的基因片段，切胶回收；

(2)请参阅图1，为pEGFP-N2质粒载体构建图。目的基因片段(Trp2、GM-CSF、Fc)分别与T载体(pGEM-T Vector)连接，转化并酶切鉴定筛选；构建的三种目的基因质粒及pEGFP-N2质粒的扩增、抽提，并分别进行双酶切，使得在GM-CSF两端引入Sal I、BamH I酶切位点，在Trp2两端引入Bgl II、Sal I酶切位点，在Fc两端引入EcoR I、BamH I酶切位点，在EGFP两端引入BamH I、Bgl II酶切位点；

(3)目的片段(Trp2、GM-CSF、Fc、EGFP)与用T4DNA连接酶pUCM-T Vector载体连接；

(4)将连接产物转化化学感受态细胞中，在合适温度下的培养基中培养扩增；经过筛选和质粒抽提试剂盒抽提获得DNA质粒疫苗pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc(为方便描述，在下文中称为DNA)。

1.3 将10μg步骤1.2中构建DNA加入到2mL 0.1mg·mL^-1甘露糖修饰三甲基壳聚糖(Mannose modified N-trimethy chitosan，以下称为Man-TMC)中，进行漩涡交联2min，得到DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物(以下称为DNA/Man-TMC)。

1.4 将PTX/SBE包合物100μL加入到上述DNA/Man-TMC纳米复合物中，再次进行漩涡混合2min，得到紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物(以下称为PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物)。

实施例2：对PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物的结构表征。

2.1 选取适量的PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物，加入超纯水稀释，使用激光粒度仪测定所述PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物的粒径和Zeta电位值，每个实验重复测定三次，取平均值进行统计分析。请一并参阅图2、图3和表1，图2是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物纳米粒粒径柱状图；图3是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物纳米粒Zeta电压曲线分布图。由图2和表1可观察到所述PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物纳米粒的粒径在70～200nm之间，平均值为148.7±5.9nm；由图3和表1可观察到所述PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物纳米粒的电位值在0～+45mV之间，平均值为+22.72±1.75mV。

表1 PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物粒径及Zeta电位平均值

2.2 采用JEM-2010HR型透射电子显微镜观察PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物的粒子形态。将纳米复合物混悬液滴至有碳膜的铜网上，静置2min，用滤纸吸干，再滴加2％的磷钨酸负染2min，自然晾干，于透射电子显微镜下观察PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物的形态，并拍摄体系中粒子的形态。请参阅图4，是本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物电镜图。从图4可知，所述PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物纳米粒呈圆球状，颗粒均匀且分散性好。

实施例3：测定PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物对树突状细胞(Dendriticcells，以下称为DC)的作用。

3.1 考察纳米复合物对树突细胞表型的影响。

收集培养第7天的DC未成熟的树突状细胞，用PBS洗1次后，接种于6孔细胞培养板(1×10⁶/孔)，分别加SBE-DNA/Man-TMC、 PTX/SBE-DNA/Man-TMC、PTX/SBE-DNA/TMC，总体系中含量DNA 1.135μg·mL^-1，以脂多糖(Lipopolysaccharides，以下称为LPS)刺激的细胞为对照(670ng·mL^-1)。在37℃温度下，共同孵育48h，PBS洗2遍，分别加入PE标记的抗鼠CD11c，FITC标记的抗鼠CD80，PE-Cy5标记的抗鼠CD86各2μL，然后均在4℃温度下孵育1h，并在相同操作下，分别用各鼠抗的同型对照抗体进行各对照细胞样本的标记，以消除由于鼠抗非特异性与细胞结合而产生的背景染色；然后用流式细胞仪分析树突状细胞表型，结果以总荧光强度表示(总荧光强度＝10000×平均荧光强度×阳性率)。

请一并参阅图5，为本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物对树突细胞表型的影响散点图，其中(a)为加入带PE标记的鼠抗CD11c表达量散点图，(b)为加入带FITC标记的鼠抗CD80散点图，(c)为加入带PE-Cy5标记的鼠抗CD86散点图。当DC表面高表达主要组织相容性复合体(Major histocompatibilitycomplex，以下称为MHC)、CD80、CD83、CD86等时，可认为DC细胞进入成熟状态。由图5可知，与对照组相比，处理组CD11c，作为DC的表面标记分子，其表达差异无显著性，而共刺激分子CD80和CD86的表达均显著增高证明PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物能显著诱导DC表型成熟。

3.2 考察纳米复合物对树突细胞的细胞因子分泌的影响。

处理方法参考实施例3方法3.1，在孵育48h后，收集培养上清，2500rpm×20min离心，分装于EP管中，采用ELISA方法按照试剂盒说明书操作测试各样品中IL-4、IL-10、IL-12p70含量，在酶标仪上测定OD450值，结果以pg·mL^-1表示。其中，IL-4、IL-10是DC分泌的促进Th2体液免疫的细胞因子，其中IL-10能部分预测免疫耐受，IL-12p70是促进细胞免疫反应及CTL反应的细胞因子。

请参阅图6，为本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物对树突细胞的细胞因子分泌的影响的柱状图，其中(a)为IL-4含量柱状图，(b)为IL-10含量柱状图， (c)为IL-12p70含量柱状图。由图6可知，相比于IL-12p70，DC上清的IL-4，IL-10的水平明显低。处理组对IL-4的分泌均无显著性影响，对IL-10和IL-12p70有明显促进作用，但是PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物刺激的IL-10水平相比于其它实验组其上调水平比较低，但是IL-12p70却大幅度的增加。并且由于PTX的加入，PTX/SBE-DNA/Man-TMC组比SBE-DNA/Man-TMC组，具有更高的IL-12p70水平和更低的IL-10水平，证明PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物能调控细胞因子的分泌，并能增强免疫应答。

3.3研究PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物刺激后的DC对调节T细胞(以下称为Treg细胞)的影响。

Treg细胞是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，与自身免疫性疾病的发生关系密切，其异常表达可导致自身免疫性疾病。由实施例3中3.3Elisa结果分析可知，DC经不同DNA制剂刺激后，IL-10水平有上升趋势，在此进一步研究是否IL-10相关的Treg细胞也会上调。

收集培养第7天DC，用PBS洗1次后，接种于6孔细胞培养板(1×10⁶/孔)，分别加入含DNA浓度为1.135μg·mL^-1SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物、PTX/SBE-DNA/TMC纳米复合物及浓度分别为1.135，0.5675，0.28375μg·mL^-1的PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物，同时以脂多糖(LPS)刺激的细胞为对照(670ng·mL^-1)。在共同孵育48h后，按DC:Treg细胞比例为1:5比例加入小鼠脾脏源T细胞，继续培养72h，收集细胞，按Mouse regμlatory T cellstaining kit试剂盒说明书操作(购自美国加尼福尼亚eBioscience公司)，流式细胞术分析CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺细胞(Treg细胞)占CD4⁺CD25⁺T细胞的比例。

请参阅图7，为本发明提供的紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物刺激后的树突细胞对调节T细胞的影响。由图7可知，相对于对照组，各处理组均有上升趋势(p<0.01)， 但PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物刺激组的Treg细胞数目在一定范围内能随着DNA浓度降低而下降，并且，当DNA浓度为0.5675μg·mL^-1和0.28375μg·mL^-1时，其与对照组并无显著性差异(p>0.5)。此外，随着PTX的加入，PTX/SBE-DNA/Man-TMC组比SBE-DNA/Man-TMC组，具有更低的Treg细胞水平，且能抑制免疫逃逸。

本发明提供的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统及其构建方法具有以下有益效果：

一、通过制备PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物，开发了一个综合免疫给药系统，既能增加荷瘤机体抗肿瘤免疫应答，且能抑制或逆转肿瘤免疫逃逸。

二、通过在给药系统中引入PTX，使得纳米给药载体本身可以作为佐剂诱导调节T细胞数目随着PTX的加入而降低，从而抑制或逆转肿瘤免疫逃逸。

三、通过在给药系统中引入SBE，使得PTX可以通过包合于SBE成为阴离子交联剂。

四、通过在给药系统中引入TMC，使得整个给药载体带正电，有利于与带负电的DNA结合。

五、通过在给药系统中引入甘露糖配体，使得PTX/SBE-DNA/Man-TMC纳米复合物能通过树突状细胞膜表面分布甘露糖受体的介导，将纳米粒直接靶向于未成熟的DC，增加了未成熟的DC对DNA疫苗或多肽的细胞摄取。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (6)

1.一种抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统，其特征在于，包括紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物，由紫杉醇、阴离子环糊精、DNA质粒疫苗pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc和甘露糖修饰三甲基壳聚糖组成，其中，

所述紫杉醇与所述阴离子环糊精以摩尔比1:1比例包合而成紫杉醇/阴离子环糊精包合物；

所述DNA质粒疫苗pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc与所述甘露糖修饰三甲基壳聚糖通过正负电荷吸附形成DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物；

所述DNA质粒疫苗pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc与所述甘露糖修饰三甲基壳聚糖质量比为1:10～40；

所述紫杉醇与所述DNA质粒疫苗pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc质量比为1:0.25～4。

2.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统，其特征在于，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物的纳米粒粒径为70nm～200nm，电位值为0～+45mV。

3.根据权利要求2所述的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统，其特征在于，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物的纳米粒粒径的平均值为148.7±5.9nm，电位值的平均值为+22.72±1.75mV。

4.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统，其特征在于，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物是所述紫杉醇/阴离子环糊精包合物与所述DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物通过形成离子交联结合而成。

5.根据权利要求1所述的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统，其特征在于，所述紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物的靶向基团为树突状细胞细胞膜表面的甘露糖受体。

6.一种如权利要求1所述的抗肿瘤免疫治疗纳米给药系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将紫杉醇按至少1:1摩尔比，加入到0.25～0.75mg·mL^-1阴离子环糊精中，常温下进行超声包合，再离心处理，最后经微孔滤膜过滤，得到紫杉醇/阴离子环糊精包合物；

步骤二、将DNA质粒疫苗pEGFP-N2-Trp2-GM-CSF-Fc按1:10～40质量比，加入到0.05～0.25mg·mL^-1甘露糖修饰三甲基壳聚糖中，进行漩涡电荷吸附，得到DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物；

步骤三、将步骤一制备的紫杉醇/阴离子环糊精包合物加入到步骤二制备的DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物中，再次进行漩涡交联混合，得到紫杉醇/阴离子环糊精-DNA/甘露糖修饰三甲基壳聚糖纳米复合物。