CN107029236B - 一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法 - Google Patents

一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107029236B
CN107029236B CN201710254801.4A CN201710254801A CN107029236B CN 107029236 B CN107029236 B CN 107029236B CN 201710254801 A CN201710254801 A CN 201710254801A CN 107029236 B CN107029236 B CN 107029236B
Authority
CN
China
Prior art keywords
indocyanine green
vaccine
self
preparation
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710254801.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107029236A (zh
Inventor
马桂蕾
刘兰霞
曹凤强
闫梦梦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Original Assignee
Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC filed Critical Institute of Biomedical Engineering of CAMS and PUMC
Priority to CN201710254801.4A priority Critical patent/CN107029236B/zh
Publication of CN107029236A publication Critical patent/CN107029236A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107029236B publication Critical patent/CN107029236B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005Vertebrate antigens
    • A61K39/0011Cancer antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0042Photocleavage of drugs in vivo, e.g. cleavage of photolabile linkers in vivo by UV radiation for releasing the pharmacologically-active agent from the administered agent; photothrombosis or photoocclusion

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法,制备方法为:(1)将抗原蛋白水溶液与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯二甲基亚砜溶液等体积混合,在20~30℃下反应18~48小时,使吲哚菁绿通过酰胺键连接在所述抗原蛋白上;(2)将步骤(1)制备的产物加入到水中,制成溶液,孵育;调节温度至4~10℃,离心,收集纳米粒,冷冻干燥后得到吲哚菁绿自组装纳米疫苗。本发明的疫苗,合成工艺简单方便,在应用时,吲哚菁绿不易聚集、稳定性良好;所述吲哚菁绿自组装纳米疫苗联合近红外激光照射,可以实现吲哚菁绿和多肽抗原的共递送,可以激活抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞反应,增强抗肿瘤免疫应答。

Description

一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法
技术领域
本发明涉及一种纳米疫苗的制备方法,尤其涉及一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
背景技术
随着社会老龄化和人们生活方式的改变,恶性肿瘤已成为人类的“第一杀手”。大量的临床研究结果证实,旨在直接破坏和清除肿瘤细胞的肿瘤常规治疗手段,如手术切除、化疗及放疗等手段,不可能彻底地清除体内所有肿瘤细胞,往往由于残存微小肿瘤转移灶的存在,引起肿瘤复发而导致治疗失败。和上述肿瘤常规治疗手段不同,肿瘤免疫疗法针对的靶标不是肿瘤细胞和肿瘤组织,其目的旨在激活机体免疫系统,是希望依靠自身免疫机能杀灭肿瘤细胞的抗肿瘤疗法。诱发机体内在的抗肿瘤免疫反应,在肿瘤治疗效应中起着关键作用,尤其对防止残存肿瘤细胞的复发具有非常重要的意义。
随着肿瘤免疫疗法的深入研究,肿瘤疫苗的发展备受关注。现代生物技术开发的新型多肽疫苗,多数不能激发细胞免疫效应,成为绝大多数新型多肽疫苗研发中的瓶颈问题。利用光敏剂的光化学内化作用,可以调控外源性多肽抗原在抗原提呈细胞内的呈递途径,进而激活抗原特异性的细胞免疫反应,提高免疫抗肿瘤疗效。光敏剂是光化学内化作用的核心物质,但现有的光敏剂常存在水溶性差,易聚集等缺点,限制其在临床上的广泛应用。另外,目前研究中多采用将光敏剂和多肽抗原通过简单物理混合的方式给药,由于光敏剂和多肽抗原的理化性能差异,通常会导致无法获得理想的治疗效果。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
本发明的第二个目的是提供一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗的制备方法。
本发明的技术方案概述如下:
一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗的制备方法,包括以下步骤:
(1)将抗原蛋白水溶液与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯二甲基亚砜溶液等体积混合,所述抗原蛋白与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1:1~50,在20~30℃下反应18~48小时,使吲哚菁绿通过酰胺键连接在所述抗原蛋白上;
(2)将步骤(1)制备的产物加入到水中,制成质量百分比浓度为0.001%~1%的溶液,在20~30℃下孵育18~48小时;调节温度至4~10℃,以15000~30000rpm转速离心20~40min,收集纳米粒,冷冻干燥后得到吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
上述方法制备的吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
本发明的优点:
本发明的疫苗,合成工艺简单方便,在应用时,吲哚菁绿不易聚集、稳定性良好;所述吲哚菁绿自组装纳米疫苗联合近红外激光照射,可以实现吲哚菁绿和多肽抗原的共递送,可以激活抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞反应,增强抗肿瘤免疫应答,解决了传统多肽疫苗不能激活细胞免疫反应的技术问题。
附图说明
图1为本发明吲哚菁绿自组装纳米疫苗的原子力显微镜图。
图2为本发明吲哚菁绿自组装纳米疫苗对荷EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞模型小鼠的抑瘤效果曲线图。
图3为荷EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞模型小鼠接种本发明吲哚菁绿自组装纳米疫苗后,小鼠脾脏内CD8+INF-γ+T细胞的比例分析。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
本发明各实施例所用抗原蛋白为模拟蛋白卵清蛋白(Ovalbumin,OVA),是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明,凡是具有抗肿瘤的抗原蛋白,都可以用于本发明。
实施例1
一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗的制备方法,包括以下步骤:
(1)将模拟蛋白模型抗原OVA水溶液与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯二甲基亚砜溶液等体积混合,所述模拟蛋白OVA与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1:25,在25℃下反应32小时,使吲哚菁绿通过酰胺键连接在模拟蛋白OVA上;
(2)将步骤(1)制备的产物加入到水中,制成质量百分比浓度为0.01%的溶液,在25℃下孵育32小时;调节温度至7℃,以22500rpm转速离心30min,收集纳米粒,冷冻干燥后得到吲哚菁绿自组装纳米疫苗,见图1,图2和图3。
图1为本实施例获得的吲哚菁绿自组装纳米疫苗的原子力显微镜图。由图1可以看出该吲哚菁绿自组装纳米颗粒的粒径在80nm左右,粒径分布均匀。
图2是本实施例获得的吲哚菁绿自组装纳米疫苗对荷EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞模型小鼠的抑瘤效果曲线图。
本实验中涉及到的EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞购买于美国细胞培养收藏中心(American Type Cell Culture,ATCC),在该肿瘤模型小鼠中,OVA可以作为肿瘤抗原产生抗肿瘤免疫效应。图中显示了生理盐水组,游离抗原蛋白组,吲哚菁绿自组装纳米疫苗组。实验表明在相同抗原剂量下,吲哚菁绿自组装纳米疫苗组同游离抗原蛋白组相比较具有明显的抑瘤效果。
图3是荷EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞实体瘤模型小鼠接种本实施例的吲哚菁绿自组装纳米疫苗后,小鼠脾脏内CD8+INF-γ+T细胞的比例分析,其中显示了生理盐水组,游离抗原蛋白组,吲哚菁绿自组装纳米疫苗组。流式细胞术结果显示,在相同抗原剂量下同游离抗原蛋白组相比较,吲哚菁绿自组装纳米疫苗组显著促进了疫苗接种小鼠淋巴结中CD8+T细胞的增殖活化。
实施例2
一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗的制备方法,包括以下步骤:
(1)将模拟蛋白OVA水溶液与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯二甲基亚砜溶液等体积混合,所述模拟蛋白OVA与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1:1,在30℃下反应18小时,使吲哚菁绿通过酰胺键连接在模拟蛋白OVA上;
(2)将步骤(1)制备的产物加入到水中,制成质量百分比浓度为0.001%的溶液,在30℃下孵育18小时;调节温度至10℃,以30000rpm转速离心20min,收集纳米粒,冷冻干燥后得到吲哚菁绿自组装纳米疫苗,
粒径在50nm左右,粒径分布均匀。
实验证明,本实施例吲哚菁绿自组装纳米疫苗对荷EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞模型小鼠的抑瘤效果与实施例1相似。
实施例3
一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗的制备方法,包括以下步骤:
(1)将模拟蛋白OVA水溶液与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯二甲基亚砜溶液等体积混合,
所述模拟蛋白OVA与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1:50,在20℃下反应48小时,使吲哚菁绿通过酰胺键连接在模拟蛋白OVA上;
(2)将步骤(1)制备的产物加入到水中,制成质量百分比浓度为1%的溶液,在20℃下孵育48小时;调节温度至4℃,以15000rpm转速离心40min,收集纳米粒,冷冻干燥后得到吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
粒径在120nm左右,粒径分布均匀。
实验证明,本实施例吲哚菁绿自组装纳米疫苗对荷EG.7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞模型小鼠的抑瘤效果与实施例1相似。

Claims (2)

1.一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)将抗原蛋白水溶液与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯二甲基亚砜溶液等体积混合,所述抗原蛋白与吲哚菁绿琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1:1~50,在20~30℃下反应18~48小时,使吲哚菁绿通过酰胺键连接在所述抗原蛋白上;
(2)将步骤(1)制备的产物加入到水中,制成质量百分比浓度为0.001%~1%的溶液,在20~30℃下孵育18~48小时;调节温度至4~10℃,以15000~30000rpm转速离心20~40min,收集纳米粒,冷冻干燥后得到吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
2.权利要求1的方法制备的吲哚菁绿自组装纳米疫苗。
CN201710254801.4A 2017-04-18 2017-04-18 一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法 Active CN107029236B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710254801.4A CN107029236B (zh) 2017-04-18 2017-04-18 一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710254801.4A CN107029236B (zh) 2017-04-18 2017-04-18 一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107029236A CN107029236A (zh) 2017-08-11
CN107029236B true CN107029236B (zh) 2020-04-10

Family

ID=59535912

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710254801.4A Active CN107029236B (zh) 2017-04-18 2017-04-18 一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107029236B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110115761B (zh) * 2019-05-09 2023-06-16 英诺激光科技股份有限公司 一种利用激光和载体技术制备疫苗的方法
CN110179973B (zh) * 2019-06-11 2023-06-23 扬州大学 一种光热响应的杂化纳米疫苗及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1376073A (zh) * 1999-03-15 2002-10-23 福多库尔联合股份有限公司 通过光化学内化作用在抗原呈递细胞表面上表达抗原的方法
CN1553958A (zh) * 2000-11-29 2004-12-08 PCI���\�����Ϲɷ����޹�˾ 将分子输递进胞质溶胶的光化学内化法
WO2014139597A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Pci Biotech As Method
CN105873585A (zh) * 2013-08-28 2016-08-17 Pci生物技术公司 用于疫苗接种或免疫的化合物和方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1376073A (zh) * 1999-03-15 2002-10-23 福多库尔联合股份有限公司 通过光化学内化作用在抗原呈递细胞表面上表达抗原的方法
CN1553958A (zh) * 2000-11-29 2004-12-08 PCI���\�����Ϲɷ����޹�˾ 将分子输递进胞质溶胶的光化学内化法
WO2014139597A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Pci Biotech As Method
CN105873585A (zh) * 2013-08-28 2016-08-17 Pci生物技术公司 用于疫苗接种或免疫的化合物和方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Cytosolic Delivery of Liposomal Vaccines by Means of the Concomitant Photosensitization of Phagosomes;Asdis Hjalmsdottir, et al;《Molecular Pharmaceutics》;20151224;第13卷(第2期);320-329 *
In vivo Molecular Imaging of Cancer with a Quenching Near-Infrared Fluorescent Probe Using Conjugates of Monoclonal Antibodies and Indocyanine Green;Mikako Ogawa, et al;《cancer research》;20090127;第69卷(第4期);1268-1272 *
Intradermal photosensitisation facilitates stimulation of MHC class-I restricted CD8 T-cell responses of co-administered antigen;Monika Hakerud, et al;《Journal of Controlled Release》;20131123;第174卷;143-150 *
Photosensitisation facilitates cross-priming of adjuvant-free protein vaccines and stimulation of tumour-suppressing CD8 T cells;Monika Hakerud, et al;《Journal of Controlled Release》;20141204;第198卷;10-17 *
Simultaneous in vivo tracking of dendritic cells and priming of an antigen-specific immune response;Young-Woock Noh, et al.;《Biomaterials》;20110526;第32卷(第26期);6254-6263 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107029236A (zh) 2017-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110124018A (zh) 一种模拟坏死肿瘤细胞的磷酸钙-脂质纳米疫苗及其应用
CN109568570B (zh) 一种抗肿瘤疫苗复合物及制备方法、注射剂及应用
Sun et al. An enzyme-responsive and transformable PD-L1 blocking peptide-photosensitizer conjugate enables efficient photothermal immunotherapy for breast cancer
Sun et al. Aluminum nanoparticles enhance anticancer immune response induced by tumor cell vaccine
Pan et al. Spleen-selective co-delivery of mRNA and TLR4 agonist-loaded LNPs for synergistic immunostimulation and Th1 immune responses
CN107488235B (zh) 一种新的增强型抗原联合多肽诱导肝癌特异性ctl细胞的制备及应用
Yang et al. Doxorubicin/CpG self-assembled nanoparticles prodrug and dendritic cells co-laden hydrogel for cancer chemo-assisted immunotherapy
CN111888375B (zh) 聚乳酸-羟基乙酸碳酸钙微粒及其制备方法与应用
Yang et al. Effective photothermal therapy mediated by indocyanine green nanoparticle tip-loaded microneedles to enhance checkpoint inhibitor immunotherapy for melanoma treatment
CN107029236B (zh) 一种吲哚菁绿自组装纳米疫苗及制备方法
Jing et al. A Potent Micron Neoantigen Tumor Vaccine GP‐Neoantigen Induces Robust Antitumor Activity in Multiple Tumor Models
CN107137718A (zh) 一种肽修饰的多壁碳纳米管载体及其制备方法和应用
Dong et al. Engineered living bacteriophage-enabled self-adjuvanting hydrogel for remodeling tumor microenvironment and cancer therapy
CN111358942A (zh) 一种疫苗及其制备方法
He et al. Trp2 peptide-assembled nanoparticles with intrinsically self-chelating 64Cu properties for PET imaging tracking and dendritic cell-based immunotherapy against melanoma
Huang et al. Cascade Carrier‐Free Nanoparticles Forming In Situ Nanovaccines for Synergistic Photothermal‐Immunotherapy of Cancer
CN113528436B (zh) 基于淋巴细胞的同源靶向性人工抗原呈递细胞及其构建和应用
Nie et al. A single-shot prophylactic tumor vaccine enabled by an injectable biomembrane hydrogel
Zhang et al. Complete remission of tumors in mice with neoantigen-painted exosomes and anti-PD-1 therapy
Liu et al. Injectable Nano-in-Gel Vaccine for Spatial and Temporal Control of Vaccine Kinetics and Breast Cancer Postsurgical Therapy
CN104906567A (zh) 一种配体介导的靶向树突状细胞的Texosomes仿生体作为肿瘤疫苗的应用
WO2022061791A1 (zh) 肿瘤特异性 t 细胞的检测方法
CN115919798A (zh) 基于肿瘤细胞外颗粒的肿瘤疫苗及其制备方法和应用
CN110339352A (zh) 共组装表位疫苗及其应用
CN115737830A (zh) 一种时空差异化诱导肿瘤免疫原性死亡和增强抗原提呈的水凝胶疫苗及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant