CN105388221A - 一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种甲磺酸帕珠沙星的质量检测方法，其特征在于该方法提供了采用高效液相色谱仪检测甲磺酸帕珠沙星右旋异构体、有关物质、含量的方法。本发明检测方法操作简便，测定结果准确可靠；专属性强，可用于注射用甲磺酸帕珠沙星的质量控制。

Description

一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及注射用甲磺酸帕珠沙星中右旋异构体、有关物质和含量测定方法。

背景技术

甲磺酸帕珠沙星属喹诺酮类抗菌药，具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点。

分子式为C16H15FN2O4CH4O3S，化学名为(-)-(3S)-10(1-氨基-环丙基)9-氟-2，3-二氢-3-甲基-7-氧-7H-吡啶并[1，2，3-de]-[1，4]苯并恶嗪-6-羧酸甲磺酸盐，其化学结构式如下：

本发明所解决的技术问题是提供一种注射用甲磺酸帕珠沙星中的右旋异构体、有关物质和含量测定方法，本发明检测方法具有方法灵敏，可靠，重复性好，结果准确的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用高效液相色谱法分离测定注射用甲磺酸帕珠沙星右旋异构体、有关物质和含量测定的方法，可用于注射用甲磺酸帕珠沙星的制备过程和最终产品的质量控制。

甲磺酸帕珠沙星分子中含有一个手性中心，具有一对异构体，其中治疗作用的为其左旋异构体，右旋异构体无治疗作用，要控制甲磺酸帕珠沙星的右旋异构体。

本发明所解决的技术问题是提供一种操作简便的分析、分离甲磺酸帕珠沙星及其对映异构体杂质的检测方法。

注射用甲磺酸帕珠沙星中右旋异构体的检查方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检查。

进一步地，选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。

进一步地，以手性溶液［取L-苯丙氨酸1.65g,硝酸铜1.0g,加水800ml，加临时新配的0.2mol/L枸橼酸缓冲液（用氢氧化钠试液调节pH值至3.0）10ml，超声溶解，加水至1000ml，摇匀，即得）-甲醇-乙腈（80:15:5）为流动相。

本发明所述甲磺酸帕珠沙星中右旋异构体的分析、分离方法，可按照以下方法实现：

a)供试品溶液的配制：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含帕珠沙星0.3mg的溶液，作为供试品溶液；

b）预试溶液的配制：量取该溶液1ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为预试溶液。

测定方法：设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为330nm，量取预试溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的15～30%；再取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，主峰后相对保留时间为1.1的峰为右旋异构体峰。

本发明所述甲磺酸帕珠沙星有关物质检测方法为：

a)供试品溶液的配制：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含帕珠沙星0.15mg的溶液，作为供试品溶液；

b）对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照溶液；

c)将供试品溶液和对照溶液采用高效液相色谱仪进行分析：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153）用三乙胺调节pH值至4.6］（45:55）为流动相，流速为1ml/min，检测波长为240nm，理论板数按帕珠沙星计算应不低于2000；

测定方法：分别量取供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪；

本发明所述甲磺酸帕珠沙星含量检测方法为：

a)供试品溶液的配制：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含帕珠沙星30μg的溶液，作为供试品溶液；

b）对照品溶液的配制：取经105℃干燥至恒重的甲磺酸帕珠沙星对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；

c)将供试品溶液和预试溶液采用高效液相色谱仪进行分析：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153）用三乙胺调节pH值至4.6］（45:55）为流动相，流速为1ml/min，检测波长为240nm，理论板数按帕珠沙星计算应不低于2000；

测定法：分别量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，乘以系数0.7681即得。

本发明所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星右旋异构体检测中供试品溶液和预试溶液的配制时用水稀释并定容。

本发明所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星右旋异构体检测中手性溶液配制方法为：取L-苯丙氨酸1.65g,铜盐1.0g,加水800ml，加枸橼酸缓冲液10ml，超声溶解，加水至1000ml，摇匀，即得。

本发明所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星有关物质检测中供试品溶液和对照溶液的配制用流动相稀释并定容的。

本发明所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星含量检测中供试品溶液和对照溶液的配制用流动相稀释并定容的。

本发明所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于，手性溶液制备所用铜盐为氯化铜、硫酸铜、硝酸铜中的一种或者多种。

本发明所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于，手性溶液制备过程中所述枸橼酸缓冲液pH值为2.8-3.2。

本发明提供一种用高效液相色谱测定注射用甲磺酸帕珠沙星有关物质的方法，注射用甲磺酸帕珠沙星的主要中间体杂质有4个，其在注射用甲磺酸帕珠沙星的原料甲磺酸帕珠沙星的合成过程中生成，对于最终产品的质量生产过程的质量控制是非常重要的。

本法采用普通的色谱柱(C18色谱柱)准确的实现了注射用甲磺酸帕珠沙星有关物质的测定，从而实现了注射用甲磺酸帕珠沙星中间体杂质的控制，保证了注射用甲磺酸帕珠沙星及其制剂的质量可控，具有现实意义。

附图说明：

图1为本发明实施例1消旋对照品溶液的高效液相色谱图；

图2为本发明实施例1左旋对照品溶液的高效液相色谱图；

图3为本发明实施例3空白辅料的高效液相色谱图；

图4为本发明实施例2预试溶液的高效液相色谱图；

图5为本发明实施例2供试品溶液的高效液相色谱图；

图6为本发明实施例4甲磺酸帕珠沙星及其中间体杂质的液相色谱图；

图7为本发明实施例5注射用甲磺酸帕珠沙星原料的高效液相色谱图；

图8为本发明实施例6注射用甲磺酸帕珠沙星的高效液相色谱图(辅料空白)；

图9为本发明实施例6注射用甲磺酸帕珠沙星原料的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面实施例只为进一步说明本发明，不以任何形式限制本发明。

实施例1

仪器与条件：美国安捷伦1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1315D紫外可见光多波长二极管阵列检测器，G1329B自动进样器、G1316A柱温箱及安捷伦化学工作站，色谱柱：C18250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：330nm，流动相：手性溶液［取L-苯丙氨酸1.65g,硝酸铜1.0g,加水800ml，加临时新配的0.2mol/L枸橼酸缓冲液（用氢氧化钠试液调节pH值至3.0）10ml，超声溶解，加水至1000ml，摇匀，即得）-甲醇-乙腈（80:15:5）。

实验步骤：取甲磺酸帕珠沙星消旋对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含帕珠沙星0.3mg的溶液，作为对照品溶液。

取对照品溶液，按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图1。

说明：图1中保留时间为10.073分钟的色谱峰为注射用甲磺酸帕珠沙星的色谱峰，主峰后保留时间为11.303分钟(相对保留时间为1.1)的峰为右旋异构体。

在上述条件下注射用甲磺酸帕珠沙星与右旋异构体的色谱峰分离度7.05，可以满足中国药典的要求。

实施例2

仪器与条件：美国安捷伦1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1315D紫外可见光多波长二极管阵列检测器，G1329B自动进样器、G1316A柱温箱及安捷伦化学工作站，色谱柱：C18250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：330nm，流动相：手性溶液［取L-苯丙氨酸1.65g,硝酸铜1.0g,加水800ml，加临时新配的0.2mol/L枸橼酸缓冲液（用氢氧化钠试液调节pH值至3.0）10ml，超声溶解，加水至1000ml，摇匀，即得）-甲醇-乙腈（80:15:5）

实验步骤：

取注射用甲磺酸帕珠沙星适量（相当于帕珠沙星30mg），置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

量取该溶液1ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为预试溶液。

量取预试溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的15～30%。

取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图3。

说明：图3中保留时间为5.028分钟的色谱峰为注射用甲磺酸帕珠沙星的色谱峰，其主峰后无杂质峰，结果表明注射用甲磺酸帕珠沙星的右旋异构体未检出，符合质量标准要求，本法可以用于注射用甲磺酸帕珠沙星的质量监测。

实施例3

仪器与条件：美国安捷伦1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1315D紫外可见光多波长二极管阵列检测器，G1329B自动进样器、G1316A柱温箱及安捷伦化学工作站，色谱柱：C18250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：330nm，流动相：手性溶液［取L-苯丙氨酸1.65g,硝酸铜1.0g,加水800ml，加临时新配的0.2mol/L枸橼酸缓冲液（用氢氧化钠试液调节pH值至3.0）10ml，超声溶解，加水至1000ml，摇匀，即得）-甲醇-乙腈（80:15:5）

实验步骤：

取注射用甲磺酸帕珠沙星辅料适量，加水溶解作为供试品溶液。

取供试品溶液，照上述的条件进行高效液相分析，结果见图4。

图4证明，辅料空白不干扰测定，本法可以用于注射用甲磺酸帕珠沙星制剂的质量监测。

实施例4

仪器与条件：美国安捷伦1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1315D紫外可见光多波长二极管阵列检测器，G1329B自动进样器、G1316A柱温箱及安捷伦化学工作站，色谱柱：C18250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：240nm，流动相：［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153），用三乙胺调pH为4.6］乙腈55∶45)

实验步骤：取帕珠沙星原料及其中间体杂质各约20mg，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试品溶液，按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图6。

说明：图6中保留时间为3.601分钟的色谱峰为注射用甲磺酸帕珠沙星的色谱峰，其余的色谱峰为注射用甲磺酸帕珠沙星中间体杂质的色谱峰。

在上述条件下注射用甲磺酸帕珠沙星及其中间体杂质的色谱峰分离度良好，可以满足中国药典的要求。

实施例5

仪器与条件：美国安捷伦1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1315D紫外可见光多波长二极管阵列检测器，G1329B自动进样器、G1316A柱温箱及安捷伦化学工作站，色谱柱：C18250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：240nm，流动相：［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153），用三乙胺调pH为4.6］乙腈55∶45)

实验步骤：取帕珠沙星原料约2mg，置于10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图7。

说明：图7中保留时间为3.629分钟的色谱峰为甲磺酸帕珠沙星的色谱峰，其有关物质小于1.0％，结果表明注射用甲磺酸帕珠沙星原料的有关物质达到原料药要求，本法可以用于注射用甲磺酸帕珠沙星的质量监测。

实施例6

仪器与条件：美国安捷伦1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1315D紫外可见光多波长二极管阵列检测器，G1329B自动进样器、G1316A柱温箱及安捷伦化学工作站，色谱柱：C18250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：240nm，流动相：［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153），用三乙胺调pH为4.6］乙腈55∶45)。

实验步骤：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，置于200ml量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试品溶液，照上述的条件进行高效液相分析，并同法进行辅料空白试验，结果见图8，图9。

图8证明，辅料空白不干扰测定，图9中保留时间为3.627分钟的色谱峰为注射用甲磺酸帕珠沙星的色谱峰，其有关物质小于1.0％，结果表明注射用甲磺酸帕珠沙星制剂的有关物质达到制剂的要求，本法可以用于注射用甲磺酸帕珠沙星制剂的质量监测。

Claims (7)

1.一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，该方法采用高效液相色谱仪检测，其特征在于，

1）该甲磺酸帕珠沙星右旋异构体检测方法为：

a)供试品溶液的配制：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中含帕珠沙星0.3-0.5mg的溶液，作为供试品溶液；

b）预试溶液的配制：量取步骤a）供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为预试溶液；

c)将供试品溶液和预试溶液采用高效液相色谱仪检测：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以手性溶液-甲醇-乙腈（80:15:5）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为330nm，理论板数按帕珠沙星峰计算应不低于2000；

测定方法：量取预试溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的15～30%；再取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，主峰后相对保留时间为1.1的峰为右旋异构体峰，以峰面积计算，甲磺酸帕珠沙星含右旋异构体不得过主峰面积的0.5%；

2）该甲磺酸帕珠沙星有关物质检测方法为：

a)供试品溶液的配制：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含帕珠沙星0.15mg的溶液，作为供试品溶液；

b）对照溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照溶液；

c)将供试品溶液和对照溶液采用高效液相色谱仪进行分析：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153）用三乙胺调节pH值至4.6］（45:55）为流动相，流速为1ml/min，检测波长为240nm，理论板数按帕珠沙星计算应不低于2000；

测定方法：分别量取供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪；

3）该甲磺酸帕珠沙星含量检测方法为：

a)供试品溶液的配制：取注射用甲磺酸帕珠沙星适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含帕珠沙星30μg的溶液，作为供试品溶液；

b）对照品溶液的配制：取经105℃干燥至恒重的甲磺酸帕珠沙星对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；

c)将供试品溶液和预试溶液采用高效液相色谱仪进行分析：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-［10%甲磺酸溶液-1mol/L磷酸氢二钾溶液-水（10:7:153）用三乙胺调节pH值至4.6］（45:55）为流动相，流速为1ml/min，检测波长为240nm，理论板数按帕珠沙星计算应不低于2000；

测定法：分别量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，乘以系数0.7681即得。

2.根据权利要求1所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星右旋异构体检测中供试品溶液和预试溶液的配制时用水稀释并定容。

3.根据权利要求1所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星右旋异构体检测中手性溶液配制方法为：取L-苯丙氨酸1.65g,铜盐1.0g,加水800ml，加枸橼酸缓冲液10ml，超声溶解，加水至1000ml，摇匀，即得。

4.根据权利要求1所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星有关物质检测中供试品溶液和对照溶液的配制用流动相稀释并定容的。

5.根据权利要求1所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于该甲磺酸帕珠沙星含量检测中供试品溶液和对照溶液的配制用流动相稀释并定容的。

6.根据权利要求3所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于，手性溶液制备所用铜盐为氯化铜、硫酸铜、硝酸铜中的一种或者多种。

7.根据权利要求3所述一种甲磺酸帕珠沙星质量检测方法，其特征在于，手性溶液制备过程中所述枸橼酸缓冲液pH值为2.8-3.2。