CN105384836A - 一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法 - Google Patents

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Abstract

<b>一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，采用有机酸体系对食药用真菌类植物进行处理，然后采用水提醇沉工艺，浸提过程辅助以超声波，最后获得β-葡聚糖。本发明的一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率，工艺过程中具有节水、节能、高效的优点。</b>

Description

一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法
技术领域
本发明涉及β-葡聚糖领域，特别是涉及一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法。
背景技术
β-葡聚糖被称为“21世纪最新生物科技成果”。近年来，多糖的多种生物活性的发现引发了科研工作者的普遍关注，特别是随着生物高分子研究新技术、新方法在多糖研究上的应用，使国内外对生物活性多糖的研究迅速发展。国内外学者的研究表明葡聚糖具有独特的生理活性和药用价值。药用、食用菌β-葡聚糖作为多糖研究领域中的一个重要分支，正因其独特的生物活性而引起越来越多的关注。自1958年BmndeⅢ报道了酵母细胞壁多糖具有抗肿瘤作用以来，人们对药用、食用菌多糖的化学结构及生物活性进行了深入细致的研究并己取得了丰硕的成果。近20年来，已有大量关于食用菌β-葡聚糖生物活性的研究报道，主要集中在抗肿瘤、免疫调节、抗病毒及抗氧化等方面。因此，β-葡聚糖的研究具有重要的意义，β-葡聚糖因其特有的生理功能性，已受到广大科研工作者的关注与研究，现已成功的应用于制药业和保健品业。
葡聚糖分为2大类：1类是β-l，3-糖苷键连接为主，并兼有少量β-1，4或其它糖苷键，香菇多糖、茯苓多糖、云芝多糖等都属于这种连接。如香菇多糖的主链是由β-1，3糖苷键连接的葡聚糖，主链上约有23%葡萄糖残基通过C-6分支点连有侧链。侧链有3种：一是单一的非还原端葡萄糖残基；另一种是β-1，6糖苷键连接的低聚葡萄糖，如杏鲍菇多糖；再一种是β-1，3糖苷键连接的低聚葡萄糖。另一类是β-1，6葡聚糖，如灰树花β-组分是以β-1，6连接为主，在3位上有支链，支链的连接方式为β-1，3连接，它们长短程度不均一组分。有些β-葡聚糖的生物学功能需要形成蛋白复合物才能发挥提高免疫力和抗肿瘤的功效，如姬松茸子实体中含有一类抗肿瘤的碱溶性的活性多糖体，该类多糖体是一种由直链的β-1，6葡聚糖和蛋白组成。把这种葡聚糖-蛋白复合物用甲醛降解并分离出纯多糖，发现抗肿瘤活性大为下降，可见有些多糖的蛋白部分对高的生物活性是必需的。
β-葡聚糖的提取、分离、纯化，目前尚无公认、有效、统一的方法，现常用工艺主要有水提法、酸提法、碱提法以及辅酶法。这些方法无论在β-葡聚糖提取率、能耗与物耗，还是在β-葡聚糖活性控制等方面存在较显著不足，并且所得的β-葡聚糖的产品科技含量较低，具体体现在一下几方面：β-葡聚糖纯度低、水溶性差、组分不均一等，制约了其高附加值应用。
现有方法主要有以下问题：水浸提法通常耗时长，能耗高，β-葡聚糖的提取率低。酸碱提取所使用的无机强酸、强碱用量及处理时间均不好控制。强酸强碱极易破坏β-葡聚糖的生物活性，并且在反应结束后含有强酸强碱废液，在大规模生产时容易造成严重的环境污染。辅酶法技术在生产过程中应用到的酶制剂，一般价格昂贵且容易失活、使用寿命短等缺点，若将其应用于工业化生产，尚需进一步的深入研究。常用的传统提取技术通常通过大剂量溶剂长时间浸渍，使食药用真菌植物细胞壁充分膨胀，从而提高浸出速率及浸出量，因此传统方式需要溶剂量较大时间较长，并且提取率不高。假如在食药用真菌β-葡聚糖的提取过程中辅以超声波，并且使用酸度适中的有机酸体系，就有可能通过控制工艺条件，利用超声波的空化作用促进β-葡聚糖的浸出提取。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率，同时还能实现工艺过程中节水、节能的目标。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，包括以下步骤：
1.将经粉碎预处理后的原料，放入加有有机酸的提取容器中，充分搅拌使其均匀润湿；
2.向润湿的原料中加入石油醚，待5-10min后，加热物料，加热温度为90-120℃，保温10-20min；
3.采用与有机溶剂洗涤除去少量残余的酸液，完成原料的有机酸处理以及脱脂；
4.经有机酸处理以及脱脂后的原料加入4-16倍体积水进行分散、调节pH值至4.5，在一定温度下辅助以超声波进行提取，反复提取两次，收集两次滤液，并将两次滤液抽滤、合并；
5.取滤液静置一小时后进行离心处理，上清液调pH值至7.0后加入水溶液体积的3-6倍的乙醇，使溶于水但不溶于乙醇的β-葡聚糖沉淀出来，收集沉淀物即粗β-葡聚糖；
6.沉淀物即粗β-葡聚糖用95%乙醇进行两次脱水后进行离心处理，再经沉淀、干燥，得到β-葡聚糖。
本发明的有益效果：本发明的一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率，工艺过程中具有节水、节能、高效的优点。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
实施例1
原料预处理：取1.5kg干燥、除杂的猴头菇置于粉碎机中粉碎，待粉碎均匀将原料置于中草药提取器中，加入10L乙醇，加热回流提取30min，重复上述过程一次，过滤合并两次滤液并加压蒸馏回收乙醇，加入2L草酸溶液及石油醚，充分搅拌使其混合均匀，并将物料加热至100℃，保温20min后进行减压蒸馏，直至容器中无液体，再向容器中加入6L乙醇，充分过滤、搅拌，得到酸处理猴头菇；
提取：取上一步制得的酸处理猴头菇，加入1L蒸馏水调节pH值至4.5后在超声波辅助下浸提1h，以5000r/min离心30min，取上清液调节pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min离心20min，沉淀物用95%乙醇脱水，进行两次，随后以4500r/min离心10min，得到沉淀物备用；
干燥：将提取后的沉淀物在60-70℃下进行干燥，得到β-葡聚糖；
灭菌：将得到的β-葡聚糖进行巴氏杀菌。
实施例2
原料预处理：取1.5kg干燥、除杂的猴头菇置于粉碎机中粉碎，待粉碎均匀将原料置于中草药提取器中，加入15L乙醇，加热回流提取20min，重复上述过程一次，过滤合并两次滤液并加压蒸馏回收乙醇，加入2L草酸溶液及石油醚，充分搅拌使其混合均匀，并将物料加热至100℃，保温20min后进行减压蒸馏，直至容器中无液体，再向容器中加入5L乙醇，充分过滤、搅拌，得到酸处理猴头菇；
提取：取上一步制得的酸处理猴头菇，加入2L蒸馏水调节pH值至4.5后在超声波辅助下浸提1h，以5000r/min离心30min，取上清液调节pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min离心30min，沉淀物用95%乙醇脱水，进行两次，随后以4500r/min离心10min，得到沉淀物备用；
干燥：将提取后的沉淀物在60-70℃下进行干燥，得到β-葡聚糖；
灭菌：将得到的β-葡聚糖进行巴氏杀菌。
实施例3
原料预处理：取1.5kg干燥、除杂的猴头菇置于粉碎机中粉碎，待粉碎均匀将原料置于中草药提取器中，加入20L乙醇，加热回流提取30min，重复上述过程一次，过滤合并两次滤液并加压蒸馏回收乙醇，加入1.5L草酸溶液及石油醚，充分搅拌使其混合均匀，并将物料加热至100℃，保温20min后进行减压蒸馏，直至容器中无液体，再向容器中加入5L乙醇，充分过滤、搅拌，得到酸处理猴头菇；
提取：取上一步制得的酸处理猴头菇，加入2L蒸馏水调节pH值至4.5后在超声波辅助下浸提1h，以5000r/min离心30min，取上清液调节pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min离心20min，沉淀物用95%乙醇脱水，进行两次，随后以4500r/min离心10min，得到沉淀物备用；
干燥：将提取后的沉淀物在60-70℃下进行干燥，得到β-葡聚糖；
灭菌：将得到的β-葡聚糖进行巴氏杀菌。
实施例4
原料预处理：取1.5kg干燥、除杂的猴头菇置于粉碎机中粉碎，待粉碎均匀将原料置于中草药提取器中，加入25L乙醇，加热回流提取20min，重复上述过程一次，过滤合并两次滤液并加压蒸馏回收乙醇，加入1.5L草酸溶液及石油醚，充分搅拌使其混合均匀，并将物料加热至100℃，保温20min后进行减压蒸馏，直至容器中无液体，再向容器中加入5L乙醇，充分过滤、搅拌，得到酸处理猴头菇；
提取：取上一步制得的酸处理猴头菇，加入1.5L蒸馏水调节pH值至4.5后在超声波辅助下浸提1h，以5000r/min离心30min，取上清液调节pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min离心20min，沉淀物用95%乙醇脱水，进行两次，随后以4500r/min离心10min，得到沉淀物备用；
干燥：将提取后的沉淀物在60-70℃下进行干燥，得到β-葡聚糖；
灭菌：将得到的β-葡聚糖进行巴氏杀菌。
本发明实施例得到的β-葡聚糖纯度高、水溶性好，并且通过此方法β-葡聚糖得率可达91.83%。
上述实施例仅为本发明的较佳实施例，只对本发明作示例性说明，而非限定本发明。本专业技术人员凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (1)

1.一种提高食药用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，其特征在于：包括以下步骤：
将经粉碎预处理后的原料，放入加有有机酸的提取容器中，充分搅拌使其均匀润湿；
向润湿的原料中加入石油醚，待5-10min后，加热物料，加热温度为90-120℃，保温10-20min；
采用与有机溶剂洗涤除去少量残余的酸液，完成原料的有机酸处理以及脱脂；
经有机酸处理以及脱脂后的原料加入4-16倍体积水进行分散、调节pH值至4.5，在一定温度下辅助以超声波进行提取，反复提取两次，收集两次滤液，并将两次滤液抽滤、合并；
取滤液静置一小时后进行离心处理，上清液调pH值至7.0后加入水溶液体积的3-6倍的乙醇，使溶于水但不溶于乙醇的β-葡聚糖沉淀出来，收集沉淀物即粗β-葡聚糖；
沉淀物即粗β-葡聚糖用95%乙醇进行两次脱水后进行离心处理，再经沉淀、干燥，得到β-葡聚糖。
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