CN105343003A - 用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂及其制备方法。该鼻用粉雾剂由符合鼻腔给药的姜黄素微粉组成，所述微粉的粒径大于1μm，而不超过150μm，优选为6-100μm；其制备方法包括：将姜黄素原料经气流粉碎形成符合鼻腔给药的姜黄素微粉。本发明通过将姜黄素制成符合鼻用粉雾剂要求的微粉，与口服制剂相比，在用于治疗阿尔兹海默病的同时，明显提高了其生物利用度，因该粉雾剂不含任何辅料，减少了引起的过敏反应以及给药患者带来的痛苦，同时还减少了给药剂量。

Description

用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂及其制备方法

技术领域

本发明是一种鼻用粉雾剂，具体来讲是一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，还涉及该粉雾剂的制备方法。

背景技术

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。

姜黄是常见的一种中药，具有破血行气、通经止痛等功能。姜黄的化学成分主要由姜黄素类和挥发油类组成。其中姜黄素类的主要有姜黄素(curcumin)、去甲氧基姜黄素(demethoxycurcumin)及去二甲氧基姜黄素(bisdemethyoxycurcumin)。姜黄素具有多种药理作用，如抗氧化、清除自由基、抗炎、降血脂、抗动脉粥样硬化及抑制肿瘤生长等，并且姜黄素能够有效的保护心血管，对阿尔兹海默病有一定的疗效，但因其溶解度极低，口服首过消除严重，生物利用度低。

目前，国内上市的姜黄素制剂主要有片剂和胶囊剂。片剂及胶囊剂通过口服给药后其绝对生物利用度均小于10％。目前还有将姜黄素制成凝胶剂(山东大学，201210149414.1)通过鼻腔给药的研究，该吸入给药方式具有起效快，使用方便，提高肺部沉积率等优点，但是该制剂添加了大量的辅料，并且制作方式繁琐，不适合临床推广。

发明目的

鉴于现有技术的不足，本发明的主要目的在于提供一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，其由符合鼻腔给药的姜黄素微粉组成，所述微粉的粒径大于1μm，但不超过150μm。

优选的，所述微粉的粒径主要分布于6-100μm的范围内。

本发明还提供了一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂的制备方法，包括：将姜黄素原料经0.5-1Mpa的气流粉碎形成符合鼻腔给药的姜黄素微粉。

优选的，微粉的粒径主要分布于6-100μm的范围内。

前述气流粉碎的操作可利用气流粉碎机等设备实现。

与现有技术相比，本发明至少具有如下优点：通过将姜黄素通过气流粉碎的方式制备成符合鼻用粉雾剂要求的微粉，与口服制剂相比，在用于治疗阿尔兹海默病的同时，明显提高了其生物利用度。特别是由于该微粉为不含任何辅料的干粉，还能够降低由于辅料原因导致鼻黏膜刺激的可能性，同时还减少了给药剂量，延长了药物在鼻腔或嗅球的滞留时间，增加了药物进入脑组织的含量，这对于脑部疾病具有特殊的意义。

附图说明

图1是本发明一实施例中气流粉碎后姜黄素的粒径图；

图2是口服与鼻腔给药下血药浓度曲线；

图3是脑脊液浓度；

图4-图15为姜黄素鼻腔给药5min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、360min、420min的脑组织分布情况。

具体实施方式

本发明的一个方面提供了一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，其由符合鼻腔给药的姜黄素微粉组成。

其中，本发明的粉雾剂为鼻用制剂，其粒径大于1μm，但不超过200μm，尤其优选在6-100μm，进一步优选大于6μm，而不超过100μm，其能在具有治疗意义的鼻腔鼻甲骨区沉积，并具有良好流动性，且易于为鼻粘膜等吸收。而若粉末粒径过小(低于6μm)，则可能会进入肺部，若过大(大于100μm)，则又较难稳定吸附在鼻粘膜等组织上。

本发明的另一个方面还提供了一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂的制备方法，包括：将姜黄素原料经气流粉碎形成符合鼻腔给药的姜黄素微粉。

为使所获姜黄素微粉的粒径能尽可能的分布于前述优选粒径范围内，可将前述气流粉碎的压力控制于0.5-1Mpa左右。

本发明的鼻用粉雾剂的有效剂量为90-270mg/天。

以下结合附图及一实施例对本发明的技术方案作更为具体的说明。

本实施例系将姜黄素原料与粉碎压力为0.8Mpa气流粉碎机接触粉碎，参阅图2可以看到，所获姜黄素微粉的粒径大部分在6-150μm，适于应用为鼻用粉雾剂(如下简称“干粉”)。

进一步的，在本实施例中，还进行了如下实验，以确定该鼻用粉雾剂的生物利用度及其在脑各部和血液中的含量等。

1仪器与材料

Waterse2695高效液相色谱仪；梅特勒MS105十万分之一电子天平；TG16-WS高速离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)；SIG560E涡旋混合器；CentriVap型离心浓缩仪。

姜黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:201004)；分析纯姜黄素(上海瑞永生物科技有限公司)；肝素钠(Solarbio，批号：425C026)；色谱甲醇(江苏汉邦科技有限公司，批号：150415)；乙酸乙酯(南京化学试剂有限公司，批号：14120212696)；其余试剂均为分析纯。

实验动物为健康♂性SD大鼠，体重250±20g(南京江宁汤山青龙山实验动物中心)，于室温分笼饲养。

2方法

2.1色谱条件

色谱柱HanbonC18(4.6*250mm，5μm)；流动相甲醇：5％冰醋酸水溶液(70：30)；检测波长425nm；流速1mL/min；进样量10μL；柱温30℃。

2.2对照品溶液

准确称取干燥后的姜黄素对照品2mg，置于25mL量瓶中甲醇定容，作为贮备液。

2.3姜黄素混悬液制备

称取羧甲基纤维素钠0.1g，均匀撒在20mL蒸馏水上，待其完全溶胀，溶解，称取经气流粉碎后姜黄素原料药500mg，加入到羧甲基纤维素钠溶液中，搅拌均匀待用。混悬液需现制现用。

2.4鼻腔用姜黄素粉末

分析纯姜黄素经0.8Mpa气流粉碎处理，使之达到鼻腔给药粒径要求，如图1所示，微粉的粒径大于1μm，但不超过150μm。

2.5给药方案

2.5.1老鼠分组将35只大鼠随机分成3组，灌胃组15只，鼻腔组15只，空白组5只，大鼠净化喂养7d，给药前禁食12h，全程不禁水。

2.5.2灌胃给药取大鼠，抽取一定量的姜黄素混悬液，将灌胃针从大鼠口角斜插入，抵住舌面沿上腭将灌胃针插入食管，推注药液，给药完毕后轻轻拉出灌胃器。灌胃组以200mg/kg的剂量给以姜黄素原料药混悬液。

2.5.3鼻腔给药取麻醉大鼠，将鼻腔给药器中装入气流粉碎后的姜黄素原料药，从大鼠鼻孔插入，快速推动注射器，将姜黄素原料喷射进大鼠鼻腔。鼻腔组以12mg/kg的剂量给以气流粉碎的姜黄素原料药。

2.5.4CSF采集方法采用小脑延髓池穿刺术采集大鼠CSF。将麻醉后的大鼠头颈部毛发剃除，找到枕骨大孔，用注射器刺入小脑延髓池，抽取CSF约100μL，备用。

2.5.5脑组织样品的采集方法在相应时间点处死大鼠，与大鼠头颈处剪断脊椎，沿着颅骨内壁中线剪开，打开颅骨，使嗅球以后(包括嗅球)区域尽量暴露，取出大脑，于生理盐水中荡洗，去除血污，用滤纸吸干，置于试管中待测。

2.5.6时间点灌胃组与鼻腔组分别于5min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、360min、420min从大鼠眼眶静脉丛取血0.5mL。每组15只大鼠，其中3只为连续取血，其余12只在各个时间点取血的同时还进行取脑脊液(CSF)和脑组织。

2.6样品处理方案

2.6.1血浆样品处理方案

眼眶取血后，血样置于涂有肝素钠的EP管中，12000rpm离心10min，取血浆于-80℃冰箱保存待测。精密量取大鼠血浆0.1mL，加入0.4mL提取介质(乙酸乙酯-甲醇，9：1)，涡旋3min，4000rpm离心10min，将上层乙酸乙酯溶液移至离心管中。剩余溶液进行二次提取，再向其中加入提取介质0.4mL，继续涡旋3min，4000rpm离心10min，同样转移乙酸乙酯层溶液至同一离心管中。将样品置与35℃离心浓缩仪中吹干，100μL流动相复溶后，4℃下10000rpm离心10min后，取上清液进样。

2.6.2脑组织样品处理方案

完整取出大鼠脑部，用生理盐水冲洗后，把大脑分为十个部分：嗅球、梨状叶、皮层、纹状体、海马、丘脑、中脑、小脑、脑桥和延脑。精密称量各部分质量，按质量的15倍体积加入生理盐水，然后进行匀浆1min。精密量取脑组织匀浆液0.1mL，方法同2.6.1。

2.6.3脑脊液样品处理方案

精密量取脑脊液0.1mL，方法同2.6.1。

3.结果

3.1数据处理

3.1.1血浆药代动力学参数

使用DAS药代计算程序处理，自选参数如表1所示。

表1房室模型、权重系数选择

房室模型	权重系数	AIC(口服/鼻腔)
			1	1	-52.827/-5.24
1	1/c	-37.958/-0.369
			1	1/c2	-23.205/3.707
2	1	-48.698/-1.24
			2	1/c	-33.956/3.631
2	1/c2	-19.206/7.691

由表1可得，口服给药途径在二室模型，权重系数为1/c²时，拟合度最好，鼻腔给药途径，在一室模型，权重系数为1/c时，拟合度最好，所以拟合的姜黄素原料药口服在大鼠体内过程符合二室模型，姜黄素原料药鼻腔给药符合一室模型，有关药动学参数见表2。

表2药代动力学参数

根据HPLC测定结果，绘制图2。

由图2可知，经鼻腔给药途径的姜黄素药时曲线出现双峰现象，由表2可知经鼻腔给药的姜黄素C_MAX和AUC明显高于姜黄素原料药，鼻腔给药C_MAX为口服给药的246.44％，说明鼻腔给药途径能明显促进姜黄素的吸收，提高其生物利用度，提高姜黄素的血药浓度。二者T_MAX无明显变化，说明相对于口服途径，鼻腔给药途径并不能加速或减缓T_max的到来，但鼻腔给药途径下T_1/2延长，说明鼻腔给药能够延长姜黄素体内吸收时间，减缓姜黄素的体内消除，使得姜黄素在体内作用时间延长，且维持较高的血药浓度。

根据HPLC结果画出CSF浓度图，见图3

由图3可知，鼻腔给药的姜黄素是直接通过嗅球直接入脑，然后才进入血液进行代谢，原因是在5min的时间点上，鼻腔与口服两种途径下脑脊液中姜黄素浓度几乎没有差别。若鼻腔给药不是直接入脑，而是经鼻粘膜吸收入血，则无需经过胃肠道吸收，应该是5min时间点上，鼻腔血药浓度比口服较高，但实验测出两者几乎无差别，所以鼻腔给药是直接入脑。

3.2.2相对生物利用度计算

$F\%=\frac{{\mathrm{AUC}}_{i.n.}}{{\mathrm{AUC}}_{i.g.}}\×\frac{{\mathrm{Dose}}_{i.g.}}{{\mathrm{Dose}}_{i.n.}}\×100\%$

$F\%=\frac{147.079}{114.504}\×\frac{200}{12}\×100\%$

F％＝2141％

经鼻腔给药的姜黄素的相对口服的生物利用度为2141％，由此可见鼻腔给药不仅能够明显提高姜黄素的生物利用度，而且能够大量减少姜黄素的给药剂量。

3.2.2脑组织分布

口服给药途径下，姜黄素在脑组织内分布浓度均在检测限之下。鼻腔给药途径下，在各个时间点(5min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、360min、420min)各个脑组织分区(嗅球、梨状叶、皮层、纹状体、海马、丘脑、中脑、小脑、脑桥和延脑)根据HPLC结果作图如下，见图4-图15。

由图4-图15中可以得出，鼻腔给药后，姜黄素于大鼠脑内分布有明显组织差异，而且浓度明显大于口服给药方式。5-15min中，嗅球、梨状叶中分布浓度较高，15-90min中，大脑皮层、纹状体、海马和丘脑中分布浓度较高，90-420min中，中脑、小脑、脑桥、脑延中分布浓度较高，且除了5min的时间点外，大脑皮层、纹状体、海马、丘脑、中脑和小脑都能维持相对较高且稳定的浓度，说明姜黄素经鼻腔给药后，具有良好的脑靶向作用，有益于脑部疾病的治疗。在5min时间点上，姜黄素浓度最高出现在嗅球和梨状叶，并且脑组织内姜黄素浓度明显高于血浆中的浓度，说明姜黄素是经嗅球入脑，药物经鼻给药可避开BBB，直接经转运入脑。

此外，因该鼻用粉雾剂不含任何辅料，与别的鼻用剂型相比，减少了引起过敏反应的可能性，减少了给药剂量。

但需指出的是，以上仅是本发明的具体应用范例，对本发明的保护范围不构成任何限制。凡采用等同变换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。

Claims (4)

1.一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，其特征在于，它由符合鼻腔给药的姜黄素微粉组成，所述微粉的粒径大于1μm，但不超过150μm。

2.根据权利要求1所述的用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂，其特征在于，所述微粉的粒径主要分布于6-100μm的范围内。

3.一种用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂的制备方法，其特征在于，包括：将姜黄素原料药经0.5-1Mpa的气流粉碎形成符合鼻腔给药的姜黄素微粉，所述微粉的粒径大于1μm，但不超过150μm。

4.根据权利要求3所述用于治疗阿尔兹海默病的鼻用粉雾剂的制备方法，其特征在于，所述微粉的粒径主要分布于6-100μm的范围内。