CN105342996B - 一种脾多肽注射液的制备方法 - Google Patents
一种脾多肽注射液的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105342996B CN105342996B CN201510824919.7A CN201510824919A CN105342996B CN 105342996 B CN105342996 B CN 105342996B CN 201510824919 A CN201510824919 A CN 201510824919A CN 105342996 B CN105342996 B CN 105342996B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- spleen
- clear liquid
- preparation
- extraction
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种脾多肽注射液的制备方法，属于生物制剂领域，具体地说，涉及一种由除人以外的哺乳动物的脾脏中提取的脾多肽提取物制备脾多肽注射液的方法。本发明的方法包括匀浆、超声提取、调节pH值、反复冻融、离心、乙醇沉淀、调节pH值、加热、冷却、过滤、冷冻、融化等步骤。与现有技术相比，本发明采用超声提取，并结合乙醇沉淀的方法大大提高了脾多肽的提取率，从而得到的脾多肽提取物中多肽的含量高，其临床疗效好。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体地说，涉及一种脾多肽注射液的制备方法。
背景技术
众所周知，哺乳动物体内有不少人体所需的各种营养成分及活性成分，进而有不少针对从哺乳动物的心脏、肝脏及肌肉组织中提取活性多肽的报道。
而脾脏是哺乳动物的外周免疫器官，也是动物体内代谢最为旺盛的器官之一，由于其中含有丰富的细胞基本营养成分及细胞因子，特别是促进细胞代谢的活性成分如多肽类物质和核酸以及免疫调节因子——寡核苷肽等，因而受到研究者的广泛关注。国外对脾提取物的研究工作较早，目前已有用于化妆品的商品，如crydermine及增强免疫功能的保健品，如spleen P.M.G、IM-Encap、Gold-speen 500等。
《肉类工艺》2002年2期的“猪脾多肽的制备工艺研究”公开了猪脾脏的制备工艺，工艺流程为脾脏——去脂肪——匀浆——脱脂——酶解——终止反应——过滤——吸附脱色——凝胶层析——真空干燥——成品。具体工艺为：取一定量的新鲜猪脾脏，取掉大块的外表脂肪、表皮及皮下筋膜，加1：1的10℃蒸馏水，用组织捣碎机匀浆，按4:1的比例加正己烷或乙醚在常温下密闭抽提2h脱脂，分离得到脱脂的脾脏匀浆；将400ml脾匀浆液，置于恒温水浴锅中，调节温度至(50±2)℃，以Ca(OH)2乳液调节溶液至酶最适pH值，加入30g酶，反应一段时间后，以1:1HCl调pH至中性，同时升温至80℃保持15min，使酶钝化中止反应，纱布过滤，滤液加5％的活性炭吸附脱色，抽滤，过G-15葡聚糖凝胶柱，收集范围的溶液，50℃真空浓缩干燥，得脾脏多肽成品。该工艺采用的是酶解法，通过酶解脾脏中蛋白质来获得多肽，所得多肽成分组成易变动且并非原来天然存在的多肽。
CN1634987A公开了一种从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾多肽提取物，将哺乳动物组织经去脂肪、匀浆、调酸、冻融破碎、调节pH值沉淀、加热、离心过滤、超滤等步骤制得脾多肽提取物；该药为免疫调节药，能够提高和改善机体免疫功能，可用于原发性和继发性细胞免疫缺陷病(如湿疹、血小板减少、多次感染综合症等)、呼吸道及肺部感染、习惯性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、复发性口疮等疾病治疗，可在治疗放化疗引起的白细胞减少症、白血病、再生性障碍贫血、淋巴瘤及其他恶性肿瘤、改善肿瘤患者恶变质、改善术后或重症患者身体虚弱时辅助使用。
然而，采用现有技术的方法提取率低，使得脾多肽提取物中多肽的含量低，从而影响其制剂的疗效。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种脾多肽注射液的制备方法，该方法脾多肽提取率高，得到的提取物中多肽的含量高，疗效好。
为实现本发明的目的，本发明采用如下方案：
一种脾多肽注射液的制备方法，该方法包括如下步骤：
1)取新鲜健康干净的除人以外的哺乳动物的脾脏，加水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液；
3)提取液调节pH值至3.8～4.2，反复冻融2～3次；最后一次融化后的提取液离心，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在75～85％，0～10℃静置12～24小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至6.5～7.0，加热，冷却至常温后离心，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III冷冻，冻实后融化，过滤，清液超滤1～2次，所得超滤液即为脾多肽提取物；
7)上述脾多肽提取物过滤至配置罐中，补加注射用水定容，并调节pH值至6.5～7.0，经终端过滤后灌装，灭菌，包装，即得所述的脾多肽注射液。
CN1634987A公开了一种从除人以外的哺乳动物脾脏组织中提取制备的脾多肽提取物及制备方法，然而该方法的提取率低，使得脾多肽提取物中多肽的含量低，从而影响其制剂的疗效。
本发明对脾多肽的提取方法进行了改进，试验表明，采用本发明方法脾多肽的提取率高，得到的脾多肽提取物中多肽的含量高，其临床疗效好。
其中，步骤1)中，加水的量为脾脏重量的6～10倍，优选8倍。
即加水的质量与脾脏重量的比为6:1～10:1，优选8:1。
液料比即所加的水的质量与脾脏重量的比。液料比不同对提取率有一定的影响。本发明在提取温度为55℃、超声功率为70W、提取时间为12min时，考察了不同液料比对提取率的影响，如图1所示。由图1可知，开始随着液料比增大，脾多肽提取率增加，当液料比为6:1～10:1时，脾多肽提取率大于50％；而当液料比大于8：1以后，则出现降低的趋势。因此，本发明中选择液料比为6:1～10:1，优选8:1。
步骤2)中，所述的超声提取为在温度50～60℃、超声功率60～80W的条件下超声提取8～16min；优选所述的超声提取为在温度55℃、超声功率70W的条件下超声提取12min。
提取温度、超声功率和提取时间对提取率有着较大的影响
本发明在液料比为8:1、超声功率为70W、提取时间为12min时，考察了不同提取温度对提取率的影响，如图2所示。由图2可知，在一定范围内脾多肽的提取率随温度升高而增加，当提取温度为50～60℃时，脾多肽提取率大于50％；当提取温度为55℃时提取率达到最大，此后，温度上升提取率反而呈下降趋势。因此，本发明中选择提取温度为50～60℃，优选55℃。
同时，本发明在液料比为8:1、提取温度为55℃、提取时间为12min时，考察了不同超声功率对提取率的影响，如图3所示。由图3可知，随超声功率的增加，脾多肽提取率随之提高，当提取功率为60～80W时，脾多肽提取率大于50％；当提取功率为70W时提取率达到最大，此后，超声功率增加提取率反而呈下降趋势。因此，本发明中选择提取功率为60～80W，优选70W。
本发明还在液料比为8:1、超声功率为70W、提取温度为55℃时，考察了不同提取时间对提取率的影响，如图4所示。由图4可知，随着提取时间的延长，脾多肽提取率随之提高，当提取时间为8～16min时，脾多肽提取率大于50％；当提取时间为12min时提取率达到最大，超过12min后，提取率呈减少趋势。因此，本发明中选择提取时间为8～16min，优选12min。
步骤3)中，所述的冻融为在-18～-22℃下冷冻，在15～22℃下融化。
步骤3)和步骤5)中所述离心的条件为3500～4000转/分，离心时间15～20分钟。
优选的，步骤5)中，所述的加热为在75～80℃下加热15～20分钟。
优选的，步骤6)中，所述的冷冻为在-18～-22℃下冷冻，所述的融化为在10～15℃下融化。
优选的，步骤6)中，所述的超滤用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤。
本发明所述的哺乳动物可为猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等。从猪、狗、牛、羊、鹿、马或兔等新鲜健康脾脏组织中均可提取本发明所述的活性多肽。
从生产成本、生产工艺、产品质量稳定性、临床疗效等因素考虑，上述哺乳动物脾脏组织优选牛脾脏组织作为脾多肽提取物的生产原料。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
采用本发明的方法脾多肽的提取率高，得到的脾多肽提取物中多肽的含量高，其临床疗效好。
附图说明
图1为液料比对提取率的影响示意图；
图2为提取温度对提取率的影响示意图；
图3为超声功率对提取率的影响示意图；
图4为提取时间对提取率的影响示意图。
具体实施方式
以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。
实施例1
1)取新鲜健康的牛脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加8倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度55℃、超声功率70W的条件下超声提取12min；
3)提取液调节pH值至4.0，在-20℃下冷冻，在18℃下融化，反复冻融2次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在80％，5℃静置18小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至6.8，在78℃下加热18分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III在-20℃下冷冻，冻实后在12℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为12mg/ml；
7)取1000ml上述脾多肽提取物，过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至6.8，经终端过滤后灌装，制成2ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽6mg/ml。
实施例2
1)取新鲜健康的猪脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加6倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度50℃、超声功率60W的条件下超声提取8min；
3)提取液调节pH值至3.8，在-18℃下冷冻，在15℃下融化，反复冻融2次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3500转/分，离心时间15分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在75％，0℃静置12小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至6.5，在75℃下加热15分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3500转/分，离心时间15分钟，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III在-18℃下冷冻，冻实后在10℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤1次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为11.8mg/ml；
7)取1000ml上述脾多肽提取物，过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至6.5，经终端过滤后灌装，制成5ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽5.9mg/ml。
实施例3
1)取新鲜健康的羊脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加10倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度60℃、超声功率80W的条件下超声提取16min；
3)提取液调节pH值至4.2，在-22℃下冷冻，在22℃下融化，反复冻融3次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为4000转/分，离心时间20分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在85％，10℃静置24小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至7.0，在80℃下加热20分钟，冷却至常温后离心，离心条件为4000转/分，离心时间20分钟，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III在-22℃下冷冻，冻实后在15℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为11.6mg/ml；
7)取1000ml上述脾多肽提取物,过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至7.0，经终端过滤后灌装，制成10ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽5.8mg/ml。
实施例4
1)取新鲜健康的猪脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加7倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度58℃、超声功率65W的条件下超声提取10min；
3)提取液调节pH值至4.0，在-20℃下冷冻，在18℃下融化，反复冻融2次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在80％，5℃静置20小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至6.8，在78℃下加热18分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III在-20℃下冷冻，冻实后在12℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为11.8mg/ml；
7)取1000ml上述脾多肽提取物，过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至6.8，经终端过滤后灌装，制成5ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽5.9mg/ml。
实施例5
1)取新鲜健康的马脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加9倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度52℃、超声功率65W的条件下超声提取10min；
3)提取液调节pH值至3.9，在-19℃下冷冻，在20℃下融化，反复冻融3次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3750转/分，离心时间16分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在80％，6℃静置18小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至7.0，在76℃下加热17分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3750转/分，离心时间17分钟，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III在-21℃下冷冻，冻实后在13℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为12mg/ml；
7)取1000ml上述脾多肽提取物，过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至7.0，经终端过滤后灌装，制成5ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽6mg/ml。
实施例6
1)取新鲜健康的狗脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加9倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度57℃、超声功率63W的条件下超声提取11min；
3)提取液调节pH值至3.8，在-21℃下冷冻，在21℃下融化，反复冻融2次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3600转/分，离心时间19分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在77％，9℃静置19小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至6.9，在77℃下加热19分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3600转/分，离心时间19分钟，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III在-19℃下冷冻，冻实后在11℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为11.8mg/ml；
7)取1000ml上述脾多肽提取物，过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至6.5～7.0，经终端过滤后灌装，制成5ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽5.9mg/ml。
对比例1、按照CN200410088895.5的方法制备脾多肽注射液
步骤1)：
A)取新鲜健康小牛脾脏10kg，除去筋膜及脂肪组织等杂质，用注射用水洗涤，加10L注射用水，匀浆，调节pH值3.8，-20℃冷冻，冻实后取出在15℃水浴中熔化，重复冻融2次；
B)最后一次融化后的匀浆液离心，离心条件为4000转/分，离心时间为15分钟，上清液经纸浆过滤，滤液调pH值6.5后，加热80℃，加热时间为15分钟，冷却至35℃后离心，离心条件为4000转/分，离心时间为20分钟，经纸浆过滤，得清液；
C)-20℃冷冻，冻实后取出在12℃水浴中融化，纸浆过滤后，清液用截留分子量为6000的超滤膜(美国millipore公司，标准超滤系统)超滤一次，超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为8mg/ml。
步骤2)：
将上述脾多肽提取物1000ml，加注射用水至2L，无菌过滤后灌装，制成2ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌15分钟，包装入库，每ml含有多肽4mg。
对比例2、不采用超声提取的方法制备脾多肽注射液
1)取新鲜健康的除人以外的哺乳动物的脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加8倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)匀浆液调节pH值至4.0，在-20℃下冷冻，在18℃下融化，反复冻融2次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液I；
3)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在80％，5℃静置18小时，滤取上清液，得清液II；
4)清液II调节pH值至6.8，在78℃下加热18分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液III；
5)清液III在-20℃下冷冻，冻实后在12℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为8.2mg/ml；
6)取1000ml上述脾多肽提取物,过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至6.8，经终端过滤后灌装，制成2ml/支的小容量注射剂，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽4.1mg。
对比例3、不添加乙醇的方法制备脾多肽注射液
1)取新鲜健康的除人以外的哺乳动物的脾脏10kg，剔除杂质及脂肪组织，得到干净的脾脏，加8倍脾脏重量的水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液，其中，所述的超声提取为在温度55℃、超声功率70W的条件下超声提取12min；
3)提取液调节pH值至4.0，在-20℃下冷冻，在18℃下融化，反复冻融2次；最后一次融化后的提取液离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液I；
4)清液I调节pH值至6.8，在78℃下加热18分钟，冷却至常温后离心，离心条件为3800转/分，离心时间18分钟，取上清液过滤，得清液II；
5)清液II在-20℃下冷冻，冻实后在12℃下融化，过滤，清液用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤2次，所得超滤液即为脾多肽提取物，分子量小于6000，多肽含量为8.4mg/ml；
6)取1000ml上述脾多肽提取物,过滤至配置罐中，补加注射用水定容至2L，并调节pH值至6.8，经终端过滤后灌装，100℃灭菌30分钟，包装入库，即得所述的脾多肽注射液，每ml含有多肽4.2mg。
试验例1
本试验例考察了超声提取工艺中不同因素对提取率的影响。
1、液料比对提取率的影响
液料比即所加的水的质量与脾脏重量的比。液料比不同对提取率有一定的影响。本试验在提取温度为55℃、超声功率为70W、提取时间为12min，其他操作步骤同实施例1的步骤1)-步骤6)时，考察了不同液料比对提取率的影响，如图1所示。由图1可知，开始随着液料比增大，脾多肽提取率增加，当液料比为6:1～10:1时，脾多肽提取率大于50％；而当液料比大于8：1以后，则出现降低的趋势。因此，本发明中选择液料比为6:1～10:1，优选8:1。
2、提取温度对提取率的影响
本试验在液料比为8:1、超声功率为70W、提取时间为12min，其他操作步骤同实施例1的步骤1)-步骤6)时，考察了不同提取温度对提取率的影响，如图2所示。由图2可知，在一定范围内脾多肽的提取率随温度升高而增加，当提取温度为50～60℃时，脾多肽提取率大于50％；当提取温度为55℃时提取率达到最大，此后，温度上升提取率反而呈下降趋势。因此，本发明中选择提取温度为50～60℃，优选55℃。
3、超声功率对提取率的影响
本试验在液料比为8:1、提取温度为55℃、提取时间为12min，其他操作步骤同实施例1的步骤1)-步骤6)时，考察了不同超声功率对提取率的影响，如图3所示。由图3可知，随超声功率的增加，脾多肽提取率随之提高，当提取功率为60～80W时，脾多肽提取率大于50％；当提取功率为70W时提取率达到最大，此后，超声功率增加提取率反而呈下降趋势。因此，本发明中选择提取功率为60～80W，优选70W。
4、提取时间对提取率的影响
本试验在液料比为8:1、超声功率为70W、提取温度为55℃，其他操作步骤同实施例1的步骤1)-步骤6)时，考察了不同提取时间对提取率的影响，如图4所示。由图4可知，随着提取时间的延长，脾多肽提取率随之提高，当提取时间为8～16min时，脾多肽提取率大于50％；当提取时间为12min时提取率达到最大，超过12min后，提取率呈减少趋势。因此，本发明中选择提取时间为8～16min，优选12min。
试验例2
本试验例测定了不同方法制得的脾多肽注射液中多肽的含量，结果如表1所示。
表1、不同方法制得的脾多肽注射液中多肽的含量
| 实施例1 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | |
| 多肽含量 | 6mg/ml | 4mg/ml | 4.1mg/ml | 4.2mg/ml |
试验例3、游离氨基酸含量的测定
按GB标准测定本发明实施例1、对比例1、对比例2和对比例3得到的脾多肽提取物中主要游离aa含量(％)，结果见表2所示。
表2、脾多肽的主要游离aa含量(％)
| ASP | GLU | GLY | ALA | VAL | ILE | LEU | pHE | |
| 实施例1 | 5.13 | 13.36 | 5.21 | 9.23 | 10.23 | 5.39 | 10.36 | 4.58 |
| 实施例2 | 5.07 | 13.30 | 5.14 | 9.12 | 10.13 | 5.21 | 10.20 | 4.48 |
| 实施例3 | 5.05 | 13.29 | 5.12 | 9.13 | 10.11 | 5.23 | 10.23 | 4.47 |
| 实施例4 | 5.06 | 13.28 | 5.13 | 9.11 | 10.12 | 5.22 | 10.21 | 4.45 |
| 实施例5 | 5.08 | 13.27 | 5.11 | 9.14 | 10.13 | 5.21 | 10.22 | 4.46 |
| 实施例6 | 5.07 | 13.29 | 5.10 | 9.12 | 10.12 | 5.22 | 10.21 | 4.45 |
| 对比例1 | 2.81 | 6.79 | 2.68 | 3.61 | 4.12 | 2.71 | 5.71 | 1.68 |
| 对比例2 | 2.91 | 2.83 | 2.72 | 3.64 | 4.19 | 2.78 | 5.78 | 1.73 |
| 对比例3 | 3.05 | 2.97 | 2.89 | 3.97 | 4.26 | 2.88 | 5.89 | 1.85 |
从上述试验结果可以看出，采用本发明的方法制得的脾多肽提取物中主要游离氨基酸的含量明显高于采用对比例的方法制得的脾多肽提取物。
试验例4、临床试验
1、临床背景
慢性乙型肝炎患者80例，分为治疗组和对照组，各男20例、女20例，年龄均为25-45岁，两组病程均为1-2年，平均1.5年，所有患者均符合病毒性肝炎标准。
2、治疗方法
治疗组应用本发明实施例1的注射液和常规保肝药物治疗，一次肌肉注射本发明注射液5ml，每周三次，一个月为一疗程，对照组服用对比例1的注射液和常规保肝药物治疗。用药前后检查肝功能及乙肝病毒五项指标。
3、疗效判定
治愈：HBsAg.HBeAg转阴，肝功能恢复正常；基本治愈：HBeAg转阳，肝功能恢复正常；好转：以上三项有一项转为正常；无效：治疗前后各项指标无变化。
4、治疗结果：
见表3所示：
表3、临床试验结果
| 组别 | 总例数 | 治愈(例) | 好转(例) | 总有效率(％) |
| 治疗组 | 40 | 25 | 12 | 92.5 |
| 对照组 | 40 | 20 | 13 | 82.5 |
从上述试验结果可以看出，与对照组的脾多肽注射液相比，使用本发明的脾多肽注射液疗效更加显著。
对本发明其它实施例的脾多肽注射液也进行了上述试验，其获得的结果相似。
Claims (9)
1.一种脾多肽注射液的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
1)取新鲜健康干净的除人以外的哺乳动物的脾脏，加水匀浆，得匀浆液；
2)将匀浆液进行超声提取，得提取液；所述的超声提取为在温度50～60℃、超声功率60～80W的条件下超声提取8～16min；
3)提取液调节pH值至3.8～4.2，反复冻融2～3次；最后一次融化后的提取液离心，取上清液过滤，得清液I；
4)向清液I中加入95％乙醇，搅拌，使清液I中乙醇含量在75～85％，0～10℃静置12～24小时，滤取上清液，得清液II；
5)清液II调节pH值至6.5～7.0，加热，冷却至常温后离心，取上清液过滤，得清液III；
6)清液III冷冻，冻实后融化，过滤，清液超滤1～2次，所得超滤液即为脾多肽提取物；
7)上述脾多肽提取物过滤至配置罐中，补加注射用水定容，并调节pH值至6.5～7.0，经终端过滤后灌装，灭菌，包装，即得所述的脾多肽注射液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，加水的量为脾脏重量的6～10倍。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，加水的量为脾脏重量的8倍。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的超声提取为在温度55℃、超声功率70W的条件下超声提取12min。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述的冻融为在-18～-22℃下冷冻，在15～22℃下融化。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤3)和步骤5)中所述离心的条件为3500～4000转/分，离心时间15～20分钟。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤5)中，所述的加热为在75～80℃下加热15～20分钟。
8.根据权利要求6或7任意一项所述的制备方法，其特征在于，步骤6)中，所述的冷冻为在-18～-22℃下冷冻，所述的融化为在10～15℃下融化。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤6)中，所述的超滤用截留分子量6000道尔顿以下的超滤膜超滤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510824919.7A CN105342996B (zh) | 2015-11-24 | 2015-11-24 | 一种脾多肽注射液的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510824919.7A CN105342996B (zh) | 2015-11-24 | 2015-11-24 | 一种脾多肽注射液的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105342996A CN105342996A (zh) | 2016-02-24 |
| CN105342996B true CN105342996B (zh) | 2017-03-08 |
Family
ID=55319162
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510824919.7A Active CN105342996B (zh) | 2015-11-24 | 2015-11-24 | 一种脾多肽注射液的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105342996B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105613936A (zh) * | 2016-03-24 | 2016-06-01 | 刘冬明 | 一种脾多肽的制备方法 |
| CN106166291B (zh) * | 2016-08-05 | 2020-06-30 | 融致丰生制药有限公司 | 脾多肽提高klrk1或lck治疗免疫抑制的医药用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1634987A (zh) * | 2004-03-10 | 2005-07-06 | 菲尔斯·杜克制药（通化）有限公司 | 一种脾多肽提取物、其制备方法及其用途 |
| CN104398535A (zh) * | 2014-12-09 | 2015-03-11 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种抗小反刍兽疫病毒转移因子的制备方法 |
-
2015
- 2015-11-24 CN CN201510824919.7A patent/CN105342996B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1634987A (zh) * | 2004-03-10 | 2005-07-06 | 菲尔斯·杜克制药（通化）有限公司 | 一种脾多肽提取物、其制备方法及其用途 |
| CN104398535A (zh) * | 2014-12-09 | 2015-03-11 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种抗小反刍兽疫病毒转移因子的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 响应面法优化猪脾免疫活性多肽提取工艺研究;张凯等;《食品与药品》;20121130;第14卷(第11期);410-414 * |
| 猪脾脏多肽的酶法制备及其生物活性研究;刘庆涛等;《食品与药品》;20100531;第12卷(第05期);161-164 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105342996A (zh) | 2016-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105533380B (zh) | 一种解酒固体饮料及其制备方法 | |
| CN109966319B (zh) | 一种康复新液的原料及其制备方法和应用 | |
| TWI782283B (zh) | 一種核桃低聚肽粉的用途 | |
| CN107857806B (zh) | 一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法 | |
| CN106913854A (zh) | 虫草多糖蛋白肽复合物及其应用 | |
| CN102851344B (zh) | 一种螺旋藻抗肿瘤多肽的制备方法 | |
| CN102652829A (zh) | 一种人参肽的提取方法 | |
| CN103923201B (zh) | 一种海马活性糖蛋白的制备方法 | |
| CN103275181B (zh) | 一种金枪鱼碎肉多肽类血管生成抑制因子及其制备方法和用途 | |
| CN115772550A (zh) | 一种具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法 | |
| CN101721458B (zh) | 一种人胎盘组织液的制备方法 | |
| CN105342996B (zh) | 一种脾多肽注射液的制备方法 | |
| CN112870236A (zh) | 一种黄蜀葵花黄酮类有效部位及其制备方法与应用 | |
| CN109223603B (zh) | 治疗脱发组合物的制备方法 | |
| CN112725399B (zh) | 一种香菇寡肽的制备方法及用途 | |
| CN106755246A (zh) | 胸腺肽的提取方法 | |
| CN1634987A (zh) | 一种脾多肽提取物、其制备方法及其用途 | |
| CN100457119C (zh) | 注射用人参多糖冻干粉针及其制备工艺 | |
| CN110229857B (zh) | 燕窝肽及其解聚耦合酶解的制备方法 | |
| KR101407611B1 (ko) | 산약을 포함하는 안면신경마비 치료용 약제의 제조방법과 그 추출물 | |
| CN103110152A (zh) | 保健饮料的制备方法 | |
| CN108546620A (zh) | 一种鹿参小分子肽滋养酒及其制备方法 | |
| CN103054911A (zh) | 一种鳄鱼抗肿瘤制剂及其生产方法 | |
| CN103351990A (zh) | 一种牦牛骨白刺复合胶原肽酒 | |
| CN103041366B (zh) | 一种骨肽组合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Guo Zhihua Inventor after: Li Taijuan Inventor after: Sun Guangyu Inventor after: Chen Hong Inventor before: Wang Jing |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20161010 Address after: 135000 Jianguo Road, Jilin, Meihekou, No. 4455 Applicant after: Jilin Feng Sheng Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: 518031 Guangdong Province, Futian District Huaqiang North Huaqiang Building Shennan street Shenzhen city A block 1501-1503-72 Applicant before: SHENZHEN AIMIN MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 135000 Jianguo Road, Jilin, Meihekou, No. 4455 Patentee after: Rongzhi Fengsheng Pharmaceutical Co., Ltd Address before: 135000 Jianguo Road, Jilin, Meihekou, No. 4455 Patentee before: Jilin Feng Sheng Pharmaceutical Co., Ltd. |