CN105324368B - 适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种式(I)所表示的化合物。(式(I)中，R1表示CH3、F、(CH2)n‑F、NH‑(CH2)n‑F、O‑(CH2)n‑F或者S‑(CH2)n‑F，n表示1～3的整数。)

Description

适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物
技术领域
本发明涉及一种适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物。
背景技术
阿尔兹海默型痴呆症是以认知功能降低、人格变化为主要的症状的痴呆症的一种。阿尔兹海默型痴呆症通常作为阿尔兹海默病而广为人知。
认为阿尔兹海默病的患者是由于乙酰胆碱功能性的神经体系的突触前末梢变性，从而神经传递无法充分起作用，从而引发痴呆。
在突触前末梢存在储存由于神经刺激而释放的乙酰胆碱的囊泡。用于将乙酰胆碱收入该囊泡中的囊泡转运体(囊泡乙酰胆碱转运体)存在于囊泡的膜上。认为该囊泡乙酰胆碱转运体与阿尔兹海默病有关。如果能够评价囊泡乙酰胆碱转运体，则也可以诊断阿尔兹海默病，并可以解释清楚阿尔兹海默病的机制以及开发医药品。
作为能够评价上述囊泡乙酰胆碱转运体的化合物，例如可以列举专利文献1中记载的2-(4-苯基哌啶基)环己醇(vesamicol)哌嗪衍生物。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第01/07427号
发明内容
发明所要解决的技术问题
然而，上述2-(4-苯基哌啶基)环己醇哌嗪衍生物是以能够作为单光子体层摄影术(SPECT法)的标记化合物利用的方式进行设计的。上述2-(4-苯基哌啶基)环己醇哌嗪衍生物不适合正电子发射断层显像法(PET法)。
本发明是鉴于上述情况完成的发明，其目的在于提供一种能够用作PET法的标记化合物的适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物。
解决技术问题的手段
本发明提供式(I)所表示的化合物。
(式(I)中，R1表示CH3、F、(CH2)n-F、NH-(CH2)n-F、O-(CH2)n-F或者S-(CH2)n-F，n表示1～3的整数。)
式(I)所表示的化合物是适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物。
在式(I)中，R1也可以是11CH3、18F、(CH2)n-18F、N-(CH2)n-18F、O-(CH2)n-18F或者S-(CH2)n-18F。n表示1～3的整数。由此，上述化合物能够放出正电子。由上述化合物放出的正电子立刻与电子结合放出γ射线(湮没辐射)。通过用PET法中所用的装置测定该γ射线，可以定量且经时地将上述化合物的体内分布图像化。即，也能够用作PET法的标记化合物。
上述化合物也可以以式(II)～(V)的任一种表示。式(II)～(V)中，CH3也可以是11CH3。通过使用这些化合物，从而可以有效地进行PET法的计量。
本发明提供式(VI)或式(VII)所表示的化合物。
(式(VI)中，R2表示包含B或Sn的有机基团、OH或SH。式(VII)中，Rp表示氨基的保护基团。)
通过使用式(VI)或式(VII)所表示的化合物，从而能够有效地合成式(I)所表示的化合物。
另外，本发明提供一种包含式(I)所表示的化合物的囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂。上述化合物也可以是式(IV)和(V)所表示的化合物。通过上述囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂，可以有效地检测生物体中的囊泡乙酰胆碱转运体存在的部位。
本发明提供一种包含式(I)所表示的化合物的阿尔兹海默病的诊断药。上述化合物也可以是式(IV)和(V)所表示的化合物。通过上述阿尔兹海默病的诊断药，有效地检测生物体中的囊泡乙酰胆碱转运体存在的部位，从而能够诊断阿尔兹海默病。
本发明提供一种囊泡乙酰胆碱转运体的检测方法，其中，包括将有效量的式(I)所表示的化合物对对象进行给药的工序。另外，本发明提供一种阿尔兹海默病的诊断方法，其中，包括将有效量的式(I)所表示的化合物对对象进行给药的工序。
本发明提供用于检测囊泡乙酰胆碱转运体的式(I)所表示的化合物。另外，本发明提供用于诊断阿尔兹海默病的式(I)所表示的化合物。
本发明提供式(I)所表示的化合物在用于制造囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂或阿尔兹海默病的诊断药中的用途。
发明的效果
根据本发明，能够提供也可以作为PET法的标记化合物利用的适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物。
附图说明
图1是表示对于存在于狝猴的脑内的囊泡乙酰胆碱转运体的[11C]HAPT的结合能的图表。
图2是表示狝猴的脑内中的[11C]HAPT的动脉血浆活性以及代谢活性的图表。
图3是表示[11C]HAPT相对于狝猴的大脑的各部位局部存在的图表。
图4是表示给药(R,R)[11C]HAPT-B时的狝猴大脑中的MRI图像和PET图像的图。
图5是表示狝猴大脑的各部位中，与2-(4-苯基哌啶基)环己醇(vesamicol)竞争时的[11C]HAPT的结合能的图表。
具体实施方式
以下针对本发明的优选的实施方式进行详细地说明。但是，本发明并不限定于以下的实施方式。
本实施方式所涉及的适于囊泡乙酰胆碱转运体的检测的化合物是式(I)所表示的化合物(以下有时称为“化合物(I)”)。
R1为CH3、F、(CH2)n-F、N-(CH2)n-F、O-(CH2)n-F或者S-(CH2)n-F，n表示1～3的整数。R1也可以是11CH3、18F、(CH2)n-18F、N-(CH2)n-18F、O-(CH2)n-18F或者S-(CH2)n-18F(n表示1～3的整数)。通过使R1为包含11CH3或18F的有机基团，化合物(I)能够放出正电子。在R1为11CH3的情况下，由于半衰期短至20分钟，因此，也能够进行1天内多次的计量。在R1为18F、(CH2)n-18F、N-(CH2)n-18F、O-(CH2)n-18F或者S-(CH2)n-18F的情况下，由于半衰期为110分钟，比11CH3长，因此，能够延长1次的计量时间。
作为化合物(I)，也可以是式(II)～(V)所表示的化合物。以下，有时分别将式(II)～(V)所表示的化合物称为(S,S)HAPT-A、(R,R)HAPT-A、(S,S)HAPT-B、(R,R)HAPT-B。另外，有时将这些总称简单称为HAPT。在式(II)～(V)所表示的化合物中，CH3也可以为11CH3。
式(VI)所表示的化合物(以下有时称为“化合物(VI)”)是上述化合物(I)的前体。特别地，优选用于R1为CH3的化合物(I)的合成。
R2为包含B或Sn的有机基团、OH或者SH。作为包含B或Sn的有机基团，例如可以列举-B(OH)2、-Sn(Bu)3以及下述结构式所表示的有机基团。从通常毒性低、难以对环境带来负荷的观点以及通过与碱的组合从而反应性变高的观点出发，优选使用包含B的有机基团。
作为化合物(VI)，也可以是式(VIII)～(XI)所表示的化合物。
R2为包含B的有机基团的化合物(VI)能够由公知的化合物合成。例如，能够经由后述的实施例中记载的合成路线(C)～(F)进行合成。
R2为包含Sn的有机基团的化合物(VI)能够由公知的化合物合成。例如，能够经由反应式(G)进行合成。
由化合物(VI)生成化合物(I)的方法只要是公知的方法都能够不特别限制地使用。例如，R1为11CH3的化合物(I)可以经由反应式(A)进行合成。
在反应式(A)中，[11C]CH3I可以通过公知的方法合成。例如，可以经由反应式(B)进行合成。
R1为O-(CH2)n-18F的化合物(I)，例如，在n为2的情况下，可以通过反应式(H)进行合成。
对于R1为(CH2)n-F的化合物(I)，例如，在n为3的情况下，可以通过反应式(I)进行合成。在下述反应式(I)中，乙酰基的脱保护可以通过公知的方法进行，例如可以列举通过酸催化剂进行脱保护的方法。
式(VII)所表示的化合物(以下有时称为“化合物(VII)”)是上述化合物(I)的前体。
Rp只要是氨基的保护基团就不特别地限制，例如可以列举乙酰基、叔丁氧基羰基(Boc基)以及9-芴基甲氧基羰基(Fmoc基)。
化合物(VII)能够通过例如后述的实施例中记载的合成路线(E)进行合成。
化合物(I)在对生物体给药的情况下，有特异地结合于囊泡乙酰胆碱转运体的倾向。因此，例如，如果使荧光色素等与化合物(I)结合或对化合物(I)进行正电子标记，则可以用作囊泡乙酰胆碱转运体的标记化合物。特别是在化合物(I)中作为R1包含11CH3或者18F的情况下，化合物(I)能够放出正电子。由上述化合物(I)放出的正电子立刻与电子结合放出γ射线。通过用PET法中所用的装置测定该γ射线，从而可以定量地并且经时地将化合物(I)的体内分布图像化。因此，通过使用化合物(I)，可以检测被试验者的生物体内的囊泡乙酰胆碱转运体存在的部位，并经时地将其变化可视化。
化合物(I)作为囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂有用。本实施方式所涉及的囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂包含化合物(I)，如果对生物体进行给药，则通过用PET法计量由生物体中的化合物(I)放出的γ射线，可以有效地检测囊泡乙酰胆碱转运体存在的部位。
化合物(I)作为阿尔兹海默病的诊断药也有用。根据上述阿尔兹海默病的诊断药，通过有效地检测生物体中的囊泡乙酰胆碱转运体存在的部位，从而能够诊断阿尔兹海默病。
本实施方式所涉及的囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂以及阿尔兹海默病的诊断药中，化合物(I)也可以是式(IV)和(V)所表示的化合物，即(S,S)HAPT-B以及(R,R)HAPT-B。(S,S)HAPT-B以及(R,R)HAPT-B其化学结构相互类似，然而，仅(R,R)HAPT-B与囊泡乙酰胆碱转运体特异地结合。因此，通过将(S,S)HAPT-B作为阴性对照，将(R,R)HAPT-B用作囊泡乙酰胆碱转运体标记化合物，从而能够更正确地检测囊泡乙酰胆碱转运体和诊断阿尔兹海默病。即，通过将(S,S)HAPT-B的结合视作非特异的结合，将从(R,R)HAPT-B的结合中减去(S,S)HAPT-B的结合所得到的值作为对囊泡乙酰胆碱转运体的特异性结合，从而能够更正确地检测囊泡乙酰胆碱转运体和诊断阿尔兹海默病。
本实施方式所涉及的囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂以及阿尔兹海默病的诊断药可以通过例如将化合物(I)溶解于任意的缓冲液中来制造。在该情况下，上述检测试剂以及诊断药可以作为溶液提供，除了上述缓冲成分以外，也可以含有表面活性剂、防腐剂、稳定化剂等其它成分。给药方法通常为静脉内给药。
作为本实施方式所涉及的囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂以及阿尔兹海默病的诊断药的对象，例如可以列举人、猴子、小鼠和大鼠，但不限定于这些。另外，在使用本实施方式所涉及的化合物(I)进行PET测定时，其测定方法不特别地限制，可以根据公知的方法实施。
实施例
以下针对本发明列举实施例进行更详细地说明。但是，本发明并不限定于这些实施例。
制造例1化合物6(N-(2-(哌嗪-1-基)苯基)乙酰胺)的合成
按照反应式(C)的合成路线，合成化合物6。以下详细地显示制造例1-1～1-4。
(制造例1-1)化合物12(叔丁基-4-(2-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
在反应用烧瓶中加入2-氯硝基苯(168g，1.07mol)、Boc-哌嗪(199g，1.07mol)和DMSO(1460ml)，进一步加入碳酸钾(295g，2.13mol)。
将得到的反应混合物在80℃下反应60小时之后，注入6L冰水中，用乙酸乙酯进行提取。将得到的有机层水洗，用无水硫酸镁干燥之后，在减压下进行浓缩。
通过用柱色谱法(固定相：硅胶，移动相：己烷/乙酸乙酯＝10/1)对浓缩残渣进行精制，从而得到化合物12(294g，收率89.5％)。
(制造例1-2)化合物13(叔丁基-4-(2-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
在反应用烧瓶中加入化合物12(299g，974mmol)和乙醇，添加5％钯碳(30g)。一边将氢气吹入得到的反应混合物中，一边使之反应2.5小时。
将反应混合物过滤之后，减压下进行浓缩，得到化合物13(256g，收率94.8％)
(制造例1-3)化合物14(叔丁基-4-(2-乙酰胺苯基)哌嗪-1-羧酸盐)的合成
在反应用烧瓶中加入化合物13(256g，923mol)、二氯甲烷1500ml和二异丙基乙基胺(179g，1.39mol)，冷却至0℃。在得到的反应混合物中在10℃以下添加乙酰氯(87g，1.11mol)。其后，在5～10℃下使反应混合物反应1小时。
将反应混合物注入饱和碳酸氢钠水中，用二氯甲烷进行提取。将有机层合并进行水洗，用无水硫酸钠干燥之后，减压下进行浓缩。
用乙酸乙酯/正己烷的混合溶剂将浓缩残渣清洗，得到化合物14(275g，收率95.2％)。
(制造例1-4)化合物6(N-(2-(哌嗪-1-基)苯基)乙酰胺)的合成
在反应用烧瓶中加入化合物14(150g，479mmol)和二氯甲烷(1500ml)，用2小时添加三氟乙酸(600ml，8.06mol)。
在常温下使得到的反应混合物反应1小时之后，注入饱和碳酸氢钠水中，用氯仿/甲醇的混合溶液进行提取。将有机层合并并水洗，用无水硫酸钠干燥之后，用柱色谱法(NH硅胶，移动相：氯仿/甲醇＝10/1)进行精制，由此得到化合物6(103g，收率100％)。以下示出得到的化合物6的1H-NMR测定结果。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ8.53(1H,br s),8.35(1H,d),7.17-7.02(3H,m),3.01-3.03(4H,m),2.85-2.82(4H,m),2.2(3H,s)
制造例2化合物24(2,2,2-三氟-N-(1a,2,7,7a-四氢萘并[2,3-b]环氧乙烯-3-基)乙酰胺)的合成
按照反应式(D)的合成路线合成了化合物24。以下详细地表示制造例2-1～2-3。
(制造例2-1)化合物22(5,8-二氢萘-1-胺)的合成
在-63℃～-46℃下向320ml二乙基醚中吹入氨气直至整体的容量成为640ml。在-57℃～-48℃下依次在上述的含有氨的二乙基醚中添加1-氨基萘(85.0g，594mmol)、2-甲基2-丙醇(53ml)和钠(31.6g，1.37mol)。在-49℃～-44℃下进一步将2-甲基-2-丙醇(53ml)加入得到的反应混合物中，在-52℃～-44℃下使之反应1小时之后，慢慢升温至25℃。在冰冷下依次将乙醇(106ml)和饱和氯化铵水溶液(425ml)滴加到上述反应混合物中。
用乙酸乙酯提取反应混合物，进行水洗，用无水硫酸钠干燥。
将得到的提取溶液在减压下进行浓缩，得到化合物22(85.1g，收率98.7％)。
(制造例2-2)化合物23(N-(5,8-二氢萘-1-基)-2,2,2-三氟乙酰胺)的合成
在反应用烧瓶中加入化合物22(85.1g，586mmol)和甲苯(296ml)，冰冷下滴加三氟乙酸酐(125g，593mmol)。
在减压下将得到的反应混合物浓缩，得到化合物23(142g，收率100％)。
(制造例2-3)化合物24(2,2,2-三氟-N-(1a,2,7,7a-四氢萘并[2,3-b]环氧乙烯-3-基)乙酰胺)的合成
在反应用烧瓶中加入化合物23(142g，586mmol)和二乙基醚(426ml)，冰冷下添加间氯过氧苯甲酸(108g，432mmol)。
在22℃～25℃下使得到的反应混合物反应4小时。其后，从反应混合物中滤出不溶物之后，减压下浓缩。
用二氯甲烷将浓缩残渣再结晶，得到化合物24(85.1g，收率56％)。以下示出得到的化合物24的1H-NMR测定结果。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.94(1H,br s),7.23-7.06(3H,m),3.46(2H,m),3.23(2H,m),3.14-2.87(2H,m)
制造例3化合物7-B(N-(2-(4-(5-氨基-3-羟基-1,2,3,4-四氢萘-2-基)哌嗪-1-基)苯基)乙酰胺)的合成
按照反应式(E)的合成路线合成化合物7-B。
在反应用烧瓶中加入化合物6(55g，251mmol)、化合物24(71g，276mmol)和乙醇1150ml，在78℃～79℃下使之反应16小时。在减压下将得到的反应混合物浓缩，使之溶解于甲醇(275ml)中。
在上述反应混合物中加入2N-氢氧化钠水溶液1200ml并搅拌18小时之后，用二氯甲烷进行提取。将得到的有机层用无水硫酸钠进行干燥之后，在减压下浓缩。
用柱色谱法(固定相：NH硅胶，移动相：正庚烷/乙酸乙酯＝1/2)将浓缩残渣进行精制之后，用乙醇再结晶，从而得到了化合物7-B(29.6g，收率30.0％)。在以下示出得到的化合物7-B的1H-NMR测定结果。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ8.45(1H,br s),8.36(1H,d),7.20-6.98(4H,m),6.59-6.55(2H,m),4.21(1H,s),3.95(1H,m),3.64(2H,s),3.16(1H,m),3.00-2.71(11H,m),2.24(1H,m),2.24(3H,m)
制造例4化合物(S,S)-10-B((2S,3S)-3-(4-(2-氨基苯基)哌嗪-1-基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1,2,3,4-四氢萘-2-醇)的合成
按照反应式(F)的合成路线合成了化合物(S,S)-10-B。以下，在制造例4-1～4-3中示出详细内容。
(制造例4-1)化合物(S,S)-8-B N-(2-(4-((2S,3S)-3-羟基-5-碘-1,2,3,4-四氢萘-2-基)哌嗪-1-基)苯基)乙酰胺的合成
在反应用烧瓶中加入化合物7-B(23.4g，61.5mmol)、乙酸312ml和硫酸156ml，冰冷下滴加亚硝酸钠(4.86g，70.4mmol)的水溶液(312ml)。
在-1℃～1℃下将得到的反应混合物搅拌30分钟之后，在上述反应混合物中滴加碘化钾(12.6g，76.2mmol)和碘(9.28g，36.6mmol)的水溶液(156ml)。
在0℃～3℃下使上述反应混合物反应3.5小时之后，用氢氧化钠水溶液中和。
用氯仿/甲醇的混合溶液提取上述反应混合物。用无水硫酸钠将得到的有机层干燥之后，在减压下浓缩。
用柱色谱法(固定相：NH硅胶，移动相：正庚烷/乙酸乙酯＝1/2)将浓缩残渣精制之后，用甲醇将得到的固体洗净，得到化合物8-B(2.84g，收率9.4％)作为消旋体。对消旋体的8-B用半分取用手性柱(CHIRALPAK IA，移动相：氯仿/正己烷＝1/1，流速：10mL/min)进行光学拆分(optical resolution)并回收保留时间长的组分，由此得到化合物(S,S)-8-B(1.18g，收率3.9％)。另外，通过回收保留时间短的组分，得到了化合物(R,R)-8-B。
(制造例4-2)化合物(S,S)-9-B(2S,3S)-3-(4-(2-氨基苯基)哌嗪-1-基)-8-碘-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的合成
将化合物(S,S)-8-B(200mg，0.407mmol)溶解于6N的盐酸(6mL)中，加热回流2小时。反应结束之后，在冰浴下将反应液冷却至0℃，使用2N的氢氧化钠水溶液进行中和。用二氯甲烷提取反应液之后，用无水硫酸钠将得到的有机层干燥，在减压下进行浓缩。用柱色谱法(固定相：硅胶，移动相：正庚烷/乙酸乙酯＝4/1～3/2)将浓缩残渣精制，定量地得到化合物(S,S)-9-B。
(制造例4-3)化合物(S,S)-10-B(2S,3S)-3-(4-(2-氨基苯基)哌嗪-1-基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的合成
在氩气氛下将化合物(S,S)-9-B(170mg，0.378mmol)、双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)(96mg，0.378mmol)、(dppf)PdCl2·二氯甲烷1/1络合物(77mg，0.0945mmol)以及乙酸钾(148mg，1.51mmol)溶解于无水二甲基亚砜(10mL)，在80℃下加热搅拌2小时。将反应液冷却至室温之后，倒入水(10mL)中，用乙酸乙酯提取。用饱和食盐水将有机层洗净之后，用硫酸钠干燥，减压下进行浓缩。将浓缩残渣用柱色谱法(固定相：NH硅胶，移动相：正庚烷/乙酸乙酯＝7/3)精制之后，用冷却的乙酸乙酯和正庚烷将得到的固体充分地洗净，得到化合物(S,S)-10-B(86mg，收率50％)。以下示出得到的化合物(S,S)-10-B的1H-NMR测定结果。另外，化合物(R,R)-10-B通过与上述制造例4-2以及4-3同样的方法由化合物(R,R)-8-B得到。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(1H,dd,J＝1.6,7.6Hz),7.11-7.18(2H,s),7.04(1H,d,J＝8.0Hz),6.95(1H,dt,J＝1.6,8.0Hz),6.74-6.78(2H,m),4.24(1H,&shy；br s),3.98(2H,br s),3.85-3.91(1H,m),2.70-3.01(12H,m),1.34,1.33(12H,s)
制造例5化合物(R,R)[11C]HAPT-B((2R,3R)-3-(4-(2-氨基苯基)哌嗪-1-基)-8-[11C]甲基-1,2,3,4-四氢萘-2-醇)的合成以及制剂化
按照反应式(A1)的合成路线合成(R,R)[11C]HAPT-B。
通过14N(p,α)11C反应的氮气的质子辐射，得到了作为正电子发射核素的用11C标识的[11C]二氧化碳。将其通过氢化铝锂进行还原反应之后，通过氢碘酸处理、加热蒸馏得到了[11C]CH3I。
将4.6mg三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3)和6.2mg三邻甲苯基膦(P(o-Tol)3)溶解于0.3mL DMF中，慢慢加热，得到了溶液的颜色由黑色变为浅黄色的溶液。在得到的溶液中加入[11C]CH3I。
将1.4mgK2CO3和2.0mg化合物(R,R)-10-B溶解于0.3mL DMF中。将得到的溶液加入之前的添加有[11C]CH3I的溶液中。
上述反应混合物的甲基化反应在70℃下进行了5分钟。将得到的反应液用直径13mm、孔径0.7μm的玻璃过滤器过滤，将滤液导入HPLC中进行分离。将(R,R)[11C]HAPT-B的组分导入蒸发器中，其后，将分离溶剂减压加热蒸馏。在残渣中加入生理盐水，制成含有(R,R)[11C]HAPT-B的制剂。
制造例6化合物10-Sn(2R,3R)-3-(4-(2-氨基苯基)哌嗪-1-基)-8-(三丁基甲锡烷基)-1,2,3,4-四氢萘-2-醇的合成
按照下述反应式(G1)的合成路线合成化合物10-Sn。
在反应用烧瓶中加入化合物9-B(265mg，0.59mmol)和甲苯(15mL)，一边使氩气鼓泡一边脱气30分钟。
在氩气气氛下添加双(三正丁基锡)635μL(1.27mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(Pd(PPh3)4)41.1mg(0.036mmol)，在回流温度下使之反应。
在从回流开始第19小时、第24小时、第38小时追加四(三苯基膦)钯(0)15mg(0.013mmol)和甲苯(5mL)。在从回流开始第22小时追加双(三正丁基锡)158μL(0.32mmol)。合计回流了46小时。
将反应液冷却至室温，减压浓缩之后，通过硅胶柱色谱法(硅胶，移动相：正己烷→二氯甲烷→二氯甲烷/甲醇＝100/1)进行精制，得到了化合物10-Sn(309mg，收率85.5％)。
[α]22＝-22.0(c＝0.138,CHCl3)
合成反应液的分离精制以及检测
合成反应液在下述HPLC的条件下分离。
柱：Megapak SIL C18-10(日本分光)(7.6×250mm)
溶剂乙腈/30mM乙酸铵/乙酸＝450/550/2
流速：6ml/min
检测波长：254nm
得到的化合物使用下述的HPLC体系检测。
柱：Finepak SIL C18S(日本分光)(4.6×150mm)
溶剂：乙腈/30mM乙酸铵/乙酸＝500/500/2
流速：2ml/min
检测波长：254nm
柱：CHIROBIOTIC V(ASTEC)(4.6×250mm)
溶剂：甲醇/乙酸/三乙基胺＝1000/0.3/0.1
流速：1ml/min
检测波长：254nm
(S,S)[11C]HAPT-A、(R,R)[11C]HAPT-A以及(S,S)[11C]HAPT-B也用与制造例5同样的合成路线制造。另外，HAPT的绝对构型通过X射线分析确定。
PET测定
将体重5kg左右的狝猴在无麻醉下固定于PET装置(浜松光子学公司制造，商品名，SHR7700)，进行了用于吸收校正的透射测量之后，将[11C]HAPT从静脉给药，进行180分钟的动态测量。
根据由同一个体得到的利用核磁共振断层图像装置(以下为MRI)的断层图像，确定兴趣区(ROI)，求得各ROI中的标记化合物([11C]HAPT)的经时变化。将结果示于图1中。确认了(S,S)[11C]HAPT-A、(R,R)[11C]HAPT-A以及(R,R)[11C]HAPT-B与囊泡乙酰胆碱转运体特异地结合，相对于此，(S,S)[11C]HAPT-B没有与囊泡乙酰胆碱转运体结合，仅为非特异性结合。由该结果启示了，(S,S)[11C]HAPT-B能够用作阴性对照，其它三个[11C]HAPT能够用作囊泡乙酰胆碱转运体的标记化合物。特别地，(R,R)[11C]HAPT-B从测定开始在约15分钟的时刻达到平衡状态，启示了其也能够用于竞争实验。
接着，研究了[11C]HAPT的动脉血浆活性以及代谢活性。具体来说，通过以下的方法进行。将结果示于图2中。
PET测量
确保了头静脉或隐静脉作为被试验动物的静脉内给药的路径，确保了大腿动脉或胫后动脉作为动脉血采血用的路径。
从留置于被试验动物的留置针中将全部量的[11C]HAPT用约30秒向静脉内给药。在与开始给药同时，开始Emission测量(10秒6帧、30秒6帧、1分钟12帧、3分钟25帧、5分钟6帧，共计121分钟、55帧)进行监测。另外，通过测量给药前的放射能与给药后残留于注射器的放射能来计测实际给药的[11C]HAPT的放射能量。此时，基于给药的时刻，进行上述放射能量的半衰期校正。
[11C]HAPT的代谢分析
向由[11C]HAPT给药16、40、64秒后以及6、10、20、30、45、60、75、90分钟后的动脉血采血得到的血浆100μL中加入乙醇100μL，进行搅拌。用离心分离机以12000rpm对血浆与乙醇的混合液进行离心分离5分钟，得到上清液。将得到的上清液在薄层色谱法的基础上用二氯甲烷/二乙基醚/三乙基胺＝100/40/1作为溶剂展开。其后，使将上清液展开后的薄层板印相于成像板上。通过荧光图像分析仪测量成像板上的放射能分布，从而求得代谢物和未代谢物的比例。
由该结果启示了不存在来自[11C]HAPT且回到大脑内的脂溶性的代谢产物，并且可知[11C]HAPT适合作为标记化合物。
研究了各[11C]HAPT相对于狝猴的大脑的各部位的局部存在。将使用了(S,S)HAPT-A以及(R,R)HAPT-A的情况下的结果示于图3(A)中，将使用了(S,S)HAPT-B以及(R,R)HAPT-B的情况下的结果示于图3(B)中。调查了大脑、脑桥、海马体、延髓缝、扁桃体、颞叶皮层(TempCtx)、下丘脑、丘脑、枕叶皮层(OccCtx)、壳核、尾状核、额叶皮层(FrntCtx)和扣带回，结果明确了(S,S)HAPT-A、(R,R)HAPT-A以及(R,R)HAPT-B局部存在于壳核中(图3)。另一方面，启示了(S,S)HAPT-B在任一部位都显示非特异性结合。
使用囊泡转运体阻碍剂(vesamicol)进行阻碍实验。具体来说，通过以下的顺序进行。将结果示于图4和5中。
PET测量
确保了头静脉或隐静脉作为被试验动物的静脉内给药的路径，确保了大腿动脉或胫后动脉作为动脉血采血用的路径。
在将[11C]HAPT给药的30分钟前以1mg/kg的给药量将L-(-)vesamicol进行了静脉内给药。
测量给药前的[11C]HAPT的放射能量。从留置于被试验动物的留置针中将全部量的[11C]HAPT用约30秒向静脉内给药。与开始给药同时开始Emission测量(10秒6帧、30秒6帧、1分钟12帧、3分钟25帧、5分钟6帧，共计121分钟，55帧)并进行监测。
在将vesamicol给药的情况下(图4(C)、图5(B))，与没有给药vesamicol的对照实验(图4(B)、图5(A))相比，可知(R,R)[11C]HAPT-B对囊泡乙酰胆碱转运体的结合减少。由该结果启示了(R,R)[11C]HAPT-B适于竞争实验。

Claims (6)

1.一种以式(II)～(V)中的任一种表示的化合物，其中，
2.如权利要求1所述的化合物，其中，
CH3为11CH3。
3.一种囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂，其中，
含有权利要求1或2所述的化合物。
4.一种阿尔兹海默病的诊断药，其中，
含有权利要求1或2所述的化合物。
5.如权利要求3所述的囊泡乙酰胆碱转运体检测试剂，其中，
所述化合物为式(IV)和(V)所表示的化合物，
6.如权利要求4所述的阿尔兹海默病的诊断药，其中，
所述化合物为式(IV)和(V)所表示的化合物，
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