CN105267979B - 聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法 - Google Patents
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Abstract
聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，首先将棉酚或者其衍生物溶解在有机溶剂中，然后将溶解有棉酚或其衍生物的有机溶剂滴加到弱碱性缓冲溶液中，再向其中加入多巴胺，室温下反应4‑72小时；利用弱碱性缓冲液对包载棉酚及其衍生物的聚多巴胺纳米载体进行透析，除去未包裹的药物；本发明制备方法简捷，药物包裹率和载药量水平较高，特别是不需使用表面活性剂，因此是一种简便易行的多巴胺包载棉酚及其衍生物的新工艺。
Description
技术领域
本发明涉及一种载药纳米载体的制备方法，特别涉及聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，是一种多巴胺聚合过程中包裹棉酚及其衍生物而生成载药纳米载体的方法。
背景技术
棉酚是一种天然黄色多酚类化合物，存在于棉葵科植物的根，茎和种子等组织中。由于其分子结构特点，棉酚具有左旋和右旋两种旋光异构体，具有一定的抗菌，抗病毒，抗肿瘤，抗炎症和抗疟疾等作用。在抗肿瘤方面，棉酚表现出对多种肿瘤细胞存活、生长、增殖以及转移的抑制作用，包括人类前列腺癌PC-3细胞系，人类前列腺癌DU-45细胞系，头颈部鳞片状细胞系，膀胱癌细胞系，多发性骨髓瘤细胞系，白血病细胞系，肝癌细胞系和胃癌细胞系等。很多研究者对其抗肿瘤机理作了进一步的研究。
研究表明：1.棉酚可以与肿瘤细胞中过度表达的抗凋亡蛋白Bcl-2家族蛋白结合，有效抑制其活性，从而促进细胞凋亡；2.棉酚可以活化caspase-3和caspase-9诱导细胞凋亡；3.棉酚还可以通过线粒体相关途径诱导细胞凋亡，其中在棉酚处理后的肿瘤细胞中，细胞色素c和凋亡诱导因子从线粒体释放到细胞质中；4.棉酚对端粒酶的活性具有一定的抑制作用，这是由于棉酚能够靶向逆转录酶的非核苷抑制剂结合口袋。5.棉酚对细胞周期也有一定的影响，棉酚可以抑制细胞周期调节蛋白的活性使其细胞周期停留在G0/G1期，并且能够调节细胞信号通路中的一些酶和影响因子的活性阻断信号通路。6.棉酚处理后的肿瘤细胞出现了DNA双链的断裂现象。此外，棉酚能够与其他肿瘤治疗手段协同作用，表现出比单一治疗手段更有效的治疗效果，对一些抗药性细胞系有很好的治疗效果。
但是，棉酚的水溶性较差，并且具有一定的肠胃毒性，限制了其在生物体内的应用。有研究发现左旋棉酚的效果要远远优于外消旋棉酚和右旋棉酚。为了克服棉酚的上述缺点并且提高其抗肿瘤效果，很多的研究者合成了一系列的棉酚衍生物，例如，醋酸棉酚，阿朴棉酚，甲基棉酚，阿朴棉酚酮ApoG2，棉酚酮，棉酚席夫碱，单醛棉酚，乙酰棉酚，单醚棉酚等。左旋棉酚已经进入了美国食品药品监督管路局(FDA)三期临床实验阶段，有望发展成为未来治疗肿瘤的药物之一。
目前，有关棉酚的专利主要集中在棉酚的提取，分离及其衍生物的制备等领域。棉酚的载药体系的发明报道十分有限。其中柯一保等人制备了水溶性棉酚制剂，包括口服液、针剂、散剂、片剂和胶囊等制剂(申请号：95111745.9)；厉保秋制备了“治疗肿瘤的棉酚静脉注射脂肪乳剂”和“用于治疗肿瘤的左旋棉酚或其醋酸盐的环糊精包合物”(申请号：201010164008.3与201110051335.2)；詹勇华等人开发了一锅法制备了棉酚纳米粒和多功能介孔硅纳米粒负载棉酚衍生物的制剂(申请号：201310162469.0与201310016135.2)。李科等人发明了“自组装法制备棉酚及其衍生物普郎尼克纳米粒子的方法”(申请号：201410668713.5)。上述方法大多利用表面活性剂对疏水性的棉酚及其衍生物进行包裹，包裹率较低，不能长时间稳定存在，引入大量的表面活性剂不利于在生物体内使用。
多巴胺是一种3,4-二羟基-L-苯丙氨酸的类似物，后者在贻贝类生物的粘附蛋白中含量比较丰富。有研究者发现在弱碱性缓冲液中，多巴胺可以在多种模板表面聚合。进一步研究发现，多巴胺在弱碱性缓冲液中可以自发形成纳米载体。在对其聚合机理的研究中，发现除了共价交联外，聚合的多巴胺分子之间还存在芳环之间的π-π堆叠作用。棉酚本身是一种多酚类化合物，分子结构中含有邻苯二酚结构，可以通过类似的π-π堆叠作用在多巴胺聚合的过程中包裹在聚多巴胺纳米载体中。目前，基于聚多巴胺的发明主要集中在材料本身表面改性，增加其生物相容性并进一步进行表面修饰，例如，对疏水材料进行亲水性改性并且能够在表面通过席夫碱反应进行靶向分子的修饰。朱春玲等人发明“叶酸修饰的中空硫化铜/聚多巴胺复合物的制备及其应用”，利用多巴胺在三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中的聚合性对中空硫化铜纳米载体进行表面修饰，并且利用聚多巴胺表面的儿茶酚功能基团将具有靶向功能的叶酸分子固定在中空硫化铜/聚多巴胺复合纳米粒子表面(申请号：201410209869.7)；石巍等人利用多巴胺聚合性将水溶性的药物包裹在多壁碳纳米管内部，开发了一种基于多壁碳纳米管的药剂及其制备方法(申请号：201410168591.3)；宋春莉等人发明了“一种制备可降解载药涂层支架的方法”，利用多巴胺聚合包被钢片(申请号：201410355973.7)；白迪发明了“聚多巴胺表面改性聚醚砜纳米纤维复合隔膜、制备方法及应用”，改性后的聚醚砜纳米纤维提高了锂离子电池的性能(申请号：201410756470.0)。目前，聚多巴胺相关发明主要集中在已有材料表面改性和亲水性药物的包裹，还没有关于多巴胺聚合纳米载体包裹疏水性药物的有关发明报道。
发明内容
为了克服已有棉酚载体包裹率低，表面活性剂用量大的问题，本发明的目的在于提供聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，利用能够与水混溶的有机溶剂(甲醇，乙醇，异丙醇，丙酮，二甲基亚砜等)将棉酚溶解在弱碱性缓冲溶液中；再利用多巴胺能够在弱碱性缓冲液中聚合的特性，通过芳环之间的π-π堆叠作用将棉酚包裹在聚多巴胺纳米载体中；最后将得到的产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与前面相同的弱碱性缓冲液中透析24-48小时除去未包裹的棉酚分子；该方法操作简便，粒径均匀，包裹率高，生物相容性较好，特别是不使用表面活性剂，能够避免表面活性剂带来细胞毒性，可以避免大量表面活性剂带来的体内毒性；本发明适用于包裹棉酚及其多种衍生物，能够避免棉酚自身的生物毒性，拓展了棉酚及其衍生物的应用前景。
为了达到上述目的，本发明的技术方案为：
聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，包括以下步骤：
步骤一：0.3-6.0mg棉酚或者棉酚衍生物溶解在0.5-2.0mL有机溶剂中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为3-30分钟，制成混合液；
所述棉酚及其衍生物包括：醋酸棉酚，阿朴棉酚，左旋棉酚，阿朴棉酚酮ApoG2，棉酚酮，甲基棉酚，棉酚席夫碱，单醛棉酚，乙酰棉酚或单醚棉酚。
所述的有机溶剂包括：甲醇，乙醇，异丙醇，丙酮或二甲基亚砜；或者上述两种溶剂以1:1—1:5体积比混合而成；
步骤二：将混合液以每分钟4-60滴的速度边搅拌边滴加到10-100mL的弱碱性缓冲液中，搅拌速度为200-1000转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌5-30分钟；
所述的弱碱性缓冲液包括：三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液，1mg/mL氢氧化钠溶液，2％氨水溶液，磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液，巴比妥钠-盐酸缓冲液，硼酸-硼砂缓冲液，甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，硼砂-氢氧化钠缓冲液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，pH值8-10；
步骤三：将3.0-30mg多巴胺加入到步骤二产物中，室温下持续搅拌4-72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析24-48小时，除去未包裹的药物，得到棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体。
本发明首先利用具有一定极性能与水混溶的有机溶剂将棉酚溶解后分散在弱碱性缓冲液中，利用小分子多巴胺能够在弱碱性自发聚合的性质，再聚合过程中将棉酚及其衍生物包裹在聚多巴胺纳米载体中。其包裹机理是，多巴胺自身聚合过程中是通过共价交联和芳环之间的π-π堆叠作用形成纳米载体，棉酚本身具有邻苯二酚和萘环结构的分子，能够在多巴胺聚合的过程中通过芳环之间的π-π堆叠作用包裹在聚多巴胺纳米载体中。
本发明将疏水性的棉酚及其衍生物包裹在亲水性的聚多巴胺纳米载体中，改善了棉酚及其衍生物的水溶性，使其能够在水相中稳定分散。包裹后的棉酚及其衍生物具有良好的生物相容性，避免了棉酚及其衍生物本身的肠胃毒性等缺点，拓宽了其应用范围。聚多巴胺纳米载体的包裹避免了表面活性剂的大量使用，更有利于在生物体内的应用。此外，聚多巴胺能够在体内降解，降解周期为8周，可以用于长期缓释载体使用。本发明操作简单使用，制备的纳米载体尺度在100nm以下，包裹率较高，并且能够长期稳定保存。
附图说明
图1为制备棉酚及其衍生物聚多巴胺载药纳米载体的制备流程。
图2为实施例一、实施例二、实施例三、实施例四、实施例五和实施例六中纳米载体马尔文粒度仪测量的粒径结果。
图3为透射电镜照片，其中图3a为实施例一、图3b为实施例二、3c为实施例三中所得纳米载体的透射电镜照片(标尺＝100nm)。
具体实施方式
下面结合具体实施方案对本发明进行阐述：
实施例一：
参照图1，本实施例包括以下步骤：
步骤一：0.3mg醋酸棉酚溶解在0.5mL甲醇中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为3分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟4滴的速度边搅拌边滴加到10mL的pH值为9的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为200转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌5分钟；
步骤三：将3.0mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌4小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中透析24小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量，参照图2中a为马尔文粒度仪的测量结果，其粒径为18.8nm，包裹率为94.3％。
图3中a为透射电镜照片，显示本实施例所得产物的形貌。
实施例二
本实施例包括以下步骤：
步骤一：0.6mg醋酸棉酚溶解在0.5mL乙醇中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为30分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟8滴的速度边搅拌边滴加到20mL的pH值为10的1mg/mL的氢氧化钠稀溶液中，搅拌速度为300转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌10分钟；
步骤三：将6.0mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌8小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析24小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。参照图2中b为马尔文粒度仪的测量结果，其粒径为25.3nm，包裹率为89.6％。
图3中b为透射电镜照片，显示本实施例所得产物的形貌。
实施例三
本实施例包括以下步骤：
步骤一：1.0mg阿朴棉酚溶解在1.0mL乙醇中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为5分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟20滴的速度边搅拌边滴加到25mL的pH值为8.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液中，搅拌速度为400转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌10分钟；
步骤三：将10mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌15小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量，参照图2中c，为马尔文粒度仪的测量结果其粒径为28.4nm，包裹率为92.6％。图3中c为透射电镜照片，显示本实施例所得产物的形貌。
实施例四
本实施例包括以下步骤：
步骤一：1.5mg阿朴棉酚酮ApoG2溶解在1.5mL异丙醇中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为15分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟15滴的速度边搅拌边滴加到30mL pH值为9的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，搅拌速度为500转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌15分钟；
步骤三：将15mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌24小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析36小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量，参照图2中d为马尔文粒度仪的测量结果，其粒径为29.6nm；包裹率为90.8％。
实施例五：
本实施例包括以下步骤：
步骤一：3.0mg左旋棉酚溶解在1.0mL丙酮中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为20分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟40滴的速度边搅拌边滴加到50mL的pH值为8的磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液中，搅拌速度为600转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌20分钟；
步骤三：将20mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌20小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。参照图2中e为马尔文粒度仪的测量结果，其粒径为42.3nm；包裹率为88.6％。
实施例六
本实施例包括以下步骤：
步骤一：5.0mg棉酚酮溶解在2.0mL二甲基亚砜中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为30分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到80mL的pH值为9.5的巴比妥钠-盐酸缓冲液中，搅拌速度为700转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为99.2nm，包裹率为91.8％。参照图2中f为马尔文粒度仪的测量结果。
实施例七
本实施例包括以下步骤：
步骤一：6.0mg甲基棉酚溶解在2.0mL甲醇与乙醇混合溶剂(v/v＝1:1)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为15分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到100mL的pH值为8.5的硼酸-硼砂缓冲液中，搅拌速度为800转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌20分钟；
步骤三：将25mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为73.1nm，包裹率为89.1％。
实施例八
本实施例包括以下步骤：
步骤一：4.0mg棉酚席夫碱溶解在1.5mL甲醇与异丙醇混合溶剂(v/v＝1:2)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为20分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟30滴的速度边搅拌边滴加到80mL的pH值为10的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中，搅拌速度为900转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌10分钟；
步骤三：将15mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析36小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为65.4nm，包裹率为91.2％。
实施例九
本实施例包括以下步骤：
步骤一：4.5mg单醛棉酚溶解在1.5mL甲醇与丙酮的混合溶剂中(v/v＝1:2.5)，在100kHz超声下进行分散，分散时间为20分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟30滴的速度边搅拌边滴加到100mL的pH值为8.5的硼砂-氢氧化钠缓冲液中，搅拌速度为900转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析36小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为84.9nm，包裹率为90.4％。
实施例十
本实施例包括以下步骤：
步骤一：6.0mg乙酰棉酚溶解在2.0mL甲醇与二甲基亚砜的混合溶剂(v/v＝1:3)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为10分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到50mL的pH值为8的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，搅拌速度为1000转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将25mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为74.6nm，包裹率为91.6％。
实施例十一
本实施例包括以下步骤：
步骤一：6.0mg单醚棉酚溶解在2.0mL乙醇与异丙醇的混合溶剂(v/v＝1:3.5)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为15分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到75mL的pH值为10的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为800转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将25mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为63.5nm，包裹率为88.5％。
实施例十二
本实施例包括以下步骤：
步骤一：6.0mg阿朴棉酚溶解在1.5mL乙醇与二甲基亚砜的混合溶剂(v/v＝1:4)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为15分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟45滴的速度边搅拌边滴加到80mL的pH值为8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为600转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌20分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌60小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析36小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为86.5nm，包裹率为90.8％。
实施例十三
本实施例包括以下步骤：
步骤一：6.0mg左旋棉酚溶解在1.0mL异丙醇与丙酮的混合溶剂(v/v＝1:5)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为20分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到75mL的pH值为9的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为700转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为79.4nm，包裹率为91.1％。
实施例十四
本实施例包括以下步骤：
步骤一：5.0mg单醚棉酚溶解在2.0mL乙醇与丙酮的混合溶剂(v/v＝1:1)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为15分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟45滴的速度边搅拌边滴加到50mL的pH值为10的2％氨水溶液中，搅拌速度为900转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌15分钟；
步骤三：将15mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析24小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为45.9nm，包裹率为89.8％。
实施例十五
本实施例包括以下步骤：
步骤一：5.0mg单醚棉酚溶解在2.0mL异丙醇与二甲基亚砜的混合溶剂(v/v＝1:1)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为10分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到100mL的pH值为8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为750转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将20mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析36小时，除去未包裹的药物。
本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为79.4nm，包裹率为90.8％。
实施例十六：
本实施例包括以下步骤：
步骤一：3.0mg单醚棉酚溶解在1.5mL丙酮与二甲基亚砜的混合溶剂(v/v＝1:2.5)中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为30分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟40滴的速度边搅拌边滴加到100mL的pH值为8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为1000转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌15分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。本实施例中所得的纳米载体的粒径通过马尔文粒度仪测量。其粒径为65.8nm，包裹率为92.4％。
Claims (6)
1.聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：0.3-6.0mg棉酚或者棉酚衍生物溶解在0.5-2.0mL有机溶剂中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为3-30分钟，制成混合液；
所述棉酚及其衍生物包括：醋酸棉酚，阿朴棉酚，左旋棉酚，阿朴棉酚酮ApoG2，棉酚酮，甲基棉酚，棉酚席夫碱，单醛棉酚，乙酰棉酚或单醚棉酚；
所述的有机溶剂包括：甲醇，乙醇，异丙醇，丙酮或二甲基亚砜；或者上述两种溶剂以1:1—1:5的体积比混合；
步骤二：将混合液以每分钟4-60滴的速度边搅拌边滴加到10-100mL的弱碱性缓冲液中，搅拌速度为200-1000转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌5-30分钟；
所述的弱碱性缓冲液包括：三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液，2％氨水溶液，磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液，磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液，巴比妥钠-盐酸缓冲液，硼酸-硼砂缓冲液，甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，硼砂-氢氧化钠缓冲液，碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，pH值8-10；
步骤三：将3.0-30mg多巴胺加入到步骤二产物中，室温下持续搅拌4-72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析24-48小时，除去未包裹的药物，得到棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体。
2.根据权利要求1所述的聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：0.3mg醋酸棉酚溶解在0.5mL甲醇中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为10分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟4滴的速度边搅拌边滴加到10mL的pH值为9的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为200转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌5分钟；
步骤三：将3.0mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌4小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中透析24小时，除去未包裹的药物。
3.根据权利要求1所述的聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：1.0mg阿朴棉酚溶解在1.0mL乙醇中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为5分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟20滴的速度边搅拌边滴加到25mL的pH值为8的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液中，搅拌速度为400转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌10分钟；
步骤三：将10mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌15小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
4.根据权利要求1所述的聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：5.0mg棉酚酮溶解在2.0mL二甲基亚砜中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为30分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到80mL的pH值为9的巴比妥钠-盐酸缓冲液中，搅拌速度为700转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
5.根据权利要求1所述的聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：6.0mg乙酰棉酚溶解在v/v＝1:1的2.0mL甲醇与二甲基亚砜的混合溶剂中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为10分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟60滴的速度边搅拌边滴加到50mL的pH值为10的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，搅拌速度为1000转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌30分钟；
步骤三：将25mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌72小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
6.根据权利要求1所述的聚合法制备棉酚及其衍生物聚多巴胺纳米载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：3.0mg单醚棉酚溶解在v/v＝1:5的1.5mL丙酮与二甲基亚砜的混合溶剂中，在100kHz超声下进行分散，分散时间为20分钟，制成混合液；
步骤二：将混合液以每分钟40滴的速度边搅拌边滴加到100mL的pH值为8.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，搅拌速度为900转/分钟，滴加完毕后，保持速度持续搅拌15分钟；
步骤三：将30mg多巴胺加入到上述体系中，室温下持续搅拌48小时；
步骤四：将所得产物装入截留分子量为1000道尔顿的透析袋中，在与步骤二相同的弱碱性缓冲液中透析48小时，除去未包裹的药物。
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