CN105267260A - 类囊体的大规模制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从光合成生物，诸如绿色植物叶原料中生产类囊体的大的工业规模方法，所述类囊体用做食品中的成份、食品添加剂、食品添加物或用于在人类和动物中预防超重、促进饱满感、减少食物摄取、减轻体重、降低血胰岛素浓度、降低血脂和体脂肪百分比的目的的药物。

Description

类囊体的大规模制备方法

本申请是申请日为2009年6月24日、申请号为200980127457.6、发明名称为“类囊体的大规模制备方法”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及从光合成生物，诸如绿色植物叶原料(leafmaterial)中生产类囊体的大的工业规模方法，所述类囊体用做食品中的成分、食品添加剂(additionstofood)、食品添加物，或用于在人类和动物中预防超重、促进饱满感(promotingsatiety)、减少食物摄取、减轻体重、降低血胰岛素浓度、降低血脂和体脂肪百分比的目的的药物。

背景技术

超重和肥胖已经成为世界范围的问题。作为代谢综合症的一部分，肥胖可以导致多种疾病，诸如糖尿病、动脉硬化和高血压。肥胖和超重是能量摄入和能量消耗之间不平衡的结果，通常是由缺乏食欲控制造成的。单独的高脂饮食或其与蔗糖和其它甜味碳水化合物的共同摄取是引起肥胖的最重要的因素之一，因为这些饮食容易促进暴食。在本发明中，我们还发现如在此描述的类囊体的制备在人类中有相似的效果。对于人类的应用，需要大规模的制备。

迄今为止，类囊体的小规模实验室制备与在光合作用研究中使用的方式基本相同，后者使用含有可保持类囊体功能完整性，即在生物电子传递中有活性的组合物和保存的氧化还原系统的培养基。

然而，要能以大规模生产类囊体将面临大量问题，包括维持蛋白质的完整性，即它们不应该降解。此外，叶细胞中不需要的组分需要被有效除去，从而从最终产品中清除或基本除去不需要的组分。

发明内容

本发明涉及适合含有类囊体的膜级分(fraction)制备的工业生产的大规模方法。给予人类和动物类囊体需要该方法。在本发明中描述了类囊体对人类在促进饱满感和预防超重方面的多种影响。当按比例放大方法(其中该方法涉及植物原料)时，存在若干问题。对于植物原料而言，植物细胞由于覆盖所述细胞的坚硬细胞壁而难以破坏。并且已经生长于室外旷野中的植物原料已经暴露于不同种类的微生物以及不同的气候条件(这些是无法控制的)。此外，不需要的化合物，诸如，例如重金属被植物的根摄取，可能影响方法和最终产品。当植物原料在温室中于受控条件下生长时问题永远不会出现。在收获植物原料时，非常重要的是，植物内部的所有过程均停止以及微生物不知何故被灭活。如果植物中的代谢不停止，将出现植物原料的降解，从而使类囊体的分离方法无法实现。本发明的目的是快速有效的分离类囊体以及维持类囊体的结构，其中蛋白质是完整的，并且用类囊体作为食品中的成分、食品添加剂、食品添加物、或在人类和动物中促进饱满感、延缓脂肪消化、降低血胰岛素、减少诸如甘油三酯的血脂肪酸和体脂肪的药物。

在第一个方面，本发明涉及一种用于生产至少一种类囊体膜级分的大规模方法，包括下述步骤：收集超过500kg的量的至少含有类囊体的植物或藻类，用溶液将所述植物或藻类均质化为匀浆液(homogenate)，从匀浆液中除去植物残渣，在级分中收集类囊体，浓缩级分并且将浓缩的级分干燥成粉末或颗粒。可选地，可以和类囊体一起获得/纯化核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶。

在第二个方面，本发明涉及一种用于生产膜级分的大规模方法，包括下述步骤：收集超过500kg的量的含有类囊体的植物或藻类，用含有例如EDTA的溶液将所述植物或藻类均质化为匀浆液，从匀浆液中除去植物残渣，在级分中收集类囊体，浓缩级分，用乙醇洗涤级分，可选地将浓缩的级分干燥成粉末或颗粒。

在第三个方面，本发明涉及一种可用如上所述和在详细说明中所述的方法获得的产品。

在第四个方面，本发明涉及所述的产品在治疗中的应用。

在第五个方面，本发明的涉及所述产品在制备用于在人类和动物中治疗超重、促进饱满感、减少食物摄取、减轻体重、降低血胰岛素浓度、减少诸如甘油三酯的血脂肪酸、和降低体脂肪百分比或减少炎症的药物中的应用。

附图说明

图1.类囊体的沉淀作为pH的函数。使浓度相同但pH不同的类囊体悬浮液于容器中静置一小时。液体的高度为20cm。纵坐标显示有多少类囊体保留在上清液中(如680nm(其中类囊体具有最大吸光度的波长)处的吸光度所测量)。这证明沉淀在pH4-5的范围内是有效的。通过向pH为7的悬浮液中加入HCl调节pH。

图2.将绿叶加工成类囊体。第I部分.1.植物原料的洗涤、冷冻和保存；2.混合、均质化和螯合步骤；3.植物残渣的稀释和分离。

1；1.1.洗涤、1.2.冷冻、1.3切割器、1.4包装保存、1.5保存

2；2.1混合、2.2均质化、2.3螯合剂

3；3.1稀释、3.2用倾析器分离

图3.将绿叶加工成类囊体。第II部分.4.A.通过分离器分离类囊体；B.通过pH沉淀分离类囊体；5.A+B.用乙醇处理；6.干燥。

4A；4.1.分离器、4.2沉淀、4.3过滤。

4B；4.1.pH沉淀、4.2.1.冷冻、4.2.2.倾析器、4.3过滤。

5A、B；5.1.乙醇处理。

6.干燥程序。

图4.给予含有或不含有类囊体的饮食后人类胰岛素和葡萄糖水平。如图所示，类囊体使胰岛素分泌显著减少(左)，和葡萄糖水平没有变化(右)。

图5.用高脂饮食(对照)或富含类囊体(类囊体)的高脂饮食喂养100天的小鼠中类囊体对食物摄取(A)、体重(B)和体脂肪(C)的影响。在类囊体处理的小鼠中食物摄取(A)、体重(B)和体脂肪(C)显著减少。

发明详述

定义

在本申请和发明的上下文中使用下述定义：

术语“类囊体或类囊体膜”意旨任何光合成生物，诸如植物中的光合作用膜。

术语“叶”意旨任何源于植物的绿叶(greenleaves)。

术语“均质化”意旨任何类型的混合、研磨、切割，其减小原料(诸如叶)的尺寸以及将光合成原料分裂、破裂、溶解成更小部分，甚至将原料(诸如植物原料)的细胞破坏。

术语“切割器”意旨可以将新鲜的或冷冻的光合成原料切割(研磨)成更小碎片的装置。

术语“粉碎机”意旨可以将原料细胞，诸如叶细胞破裂或溶解的装置。

术语“浆液”意旨将光合成原料粉碎并将其与溶剂介质混合后的产物。

术语“倾析器”意旨可以在连续方法中从破裂光合成原料后获得的含有类囊体的悬浮液中除去大的残渣，诸如细胞壁、细胞壁碎片、未破碎的细胞、淀粉粒的装置。

术语“分离器”意旨在连续方法中可以通过离心从其周围液体中大规模分离并收集类囊体的装置。

术语“螯合剂”意旨可以通过与重金属结合将其从类囊体中除去的试剂。

术语“试剂”意为包含上述术语螯合剂。“试剂”还可以指蛋白酶抑制剂。

术语“大规模”意旨比实验室规模大得多的规模，例如使用100kg、500kg、1000kg或更多光合成原料作为制备类囊体的起始原料。光合成原料可以是植物原料。

大规模方法

本发明涉及从任何光合成生物，诸如叶原料中释放类囊体的大规模方法。该叶原料可以从任何绿叶来源获得，诸如菠菜、三叶草、油菜、甜菜、羽衣甘蓝(kale)、昆诺阿藜(quinoa)、草、耶路撒冷洋蓟(Jerusalemartichoke)、蒲公英、藜属(Chenopodium)、滨藜属(Atriplex)。原料可以从生长于自由地带或温室中的农作物获得。

该方法包括多个如下所述的步骤(图2、图3)。并非所有步骤都是必须的，可以依据起始原料，诸如使用何种植物、分离的类囊体的用途以及植物已经生长的地点来纳入所述步骤。

叶原料的收获/收集以及快速冷冻

叶原料可以以新鲜原料的形式被处理，或通过使叶内部存在的蛋白质降解最小化以及抑制微生物诸如细菌和霉菌生长的方法迅速冷冻。可以在通有由常规冷冻单元(unit)产生的冷空气(-40℃)的冷冻通道内或通过使用液氮(-196℃)进行冷冻步骤。

作为下一个步骤，可以使用切割器，诸如常规混合器将叶原料均质化为更小的碎片(图2)。实例是诸如锤磨机的研磨机。在保存之前将叶原料进行分份以减小冷冻原料的体积。更进一步通过使用第一冷冻步骤使在冷冻过程中形成的冰晶刺穿叶细胞，这可以简化处理步骤。然后可以将叶原料以冷冻稳定的形式保存以供进一步使用或立即处理。

粉碎匀浆液/浆液并用螯合剂处理

在均质化方法中，用液体，诸如水例如饮用水混合叶原料，诸如将1份叶原料与1-5份水混合为浆液/匀浆液。其它实例包括1份叶原料和1、2、3、4或5份水。然后将浆液/匀浆液转移至粉碎机，诸如泵入式研磨机中，进行诸如机械挤压、诸如超声的处理，从而将植物细胞破碎、溶解或破坏。还可以将叶和叶细胞暴露于添加的酶浸渍物(enzymemacerases)，诸如单独的纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶或其组合来溶解或弱化细胞壁，以利于粉碎方法。

粉碎步骤将类囊体释放入浆液/匀浆液的溶液中。然后可以用0.5-50mM，诸如0.5-40mM、0.5-30mM、0.1-20mM、0.5-10mM或8-12mM的金属螯合剂，诸如EDTA、EGTA、DTPA、柠檬酸和NTA处理浆液/匀浆液。该螯合剂除去或减少结合至类囊体的重金属。

加入金属螯合剂抑制类囊体膜的聚集。这有利于方法中随后的步骤，特别是分离器的使用，并最终导致获得更纯的产品。加入金属螯合剂还抑制金属-依赖型脂肪加氧酶，其保护产物免受不需要的脂肪酸降解和氧化。此外，加入金属螯合剂抑制金属-依赖型蛋白酶，其保护产品免受不需要的蛋白降解。

本发明还包括能达到上述某些或全部益处的其它螯合剂、试剂或试剂的组合。例如，可以包括蛋白酶抑制剂、螯合剂或其组合。

可选地，可以在大规模方法的随后步骤中，将诸如钙和/或镁离子的二价离子加回至产物。

表1.EDTA对类囊体中重金属含量的影响(微克/克干重)。

在粉碎叶细胞的过程中向提取介质中加入浓度为10mM的EDTA。

用原子吸收光谱测定重金属。在微波炉中将0.5克干类囊体溶解在硝酸和去离子水(7-3mL)中。用ICPMS(来自PerkinElmer的modelElan6000)和ICPAES(来自Perkin-Elmer的modelOPTIMA3000DV)进行分析。

ThylEDTA＝用EDTA处理的类囊体；对照＝未用EDTA处理的类囊体。

下述步骤是分离类囊体膜的不同步骤，其可以单独或组合使用。

稀释浆液/匀浆液并除去植物残渣

在上述定义的步骤之后，浆液/匀浆液中含有植物残渣和细胞质。细胞质含有不同的细胞器。进一步用诸如饮用水的含水溶液稀释浆液。例如，可以将浆液稀释至植物原料和水(诸如饮用水)的比例为1:5、1:6、1:7、1:9或1:10甚至更高的最终比例以完成洗涤步骤。通过例如倾析器或过滤从浆液中除去植物残渣。倾析器从溶液中分离细胞部分。

类囊体的分离、浓缩和洗涤

只要结果是浓缩或分离类囊体，可以用多种方式进行分离步骤，诸如使用分离器或pH-沉淀。

在一种实施方式中(图3.4A)，使用具有适当高的G-数的分离器从浆液中分离类囊体膜。分离到的类囊体级分的体积将被减少约5、10、15、20或甚至更多倍。为了能够甚至进一步浓缩类囊体级分，可能将pH降低至4-5之间，优选约4.7(图1)。在该pH，类囊体形成厚的流动液相，其易于通过过滤、沉降或离心收集。由于可溶性蛋白质已经被除去，因此通过该实施方式可能产生具有高纯度的类囊体级分。

在另一种实施方式中(图3的4B)，可能在例如使用倾析器除去植物残渣后通过pH-沉淀分离类囊体。可以如上所述通过将pH降至4-5之间，优选约4.7进行这一步骤(图1)，然后不使用分离器从浆液中分离出类囊体级分。

在第三种实施方式中，可以在使用分离器步骤后立即通过过滤浓缩类囊体，其中使用例如具有5μm孔径的筛网，其能够收集类囊体膜。通过这一步骤，可能得到具有过滤后约25％干重的蛋白质级分。

如果需要，可以通过冻融步骤进一步浓缩类囊体，借此从剩余的类囊体中分离液体。

取决于分离类囊体膜的植物原料或产物将来的用途可能需要额外的洗涤类囊体级分的步骤。该洗涤步骤可以包括在饮用水中稀释类囊体膜。

5.类囊体膜的额外处理

可以用任何有机溶剂处理类囊体以防止微生物生长，诸如用20％-30％的乙醇处理，诸如至少22％的乙醇，例如22％-25％的乙醇，例如22％的乙醇。使用低百分比以防止微生物生长，使用高百分比用于类囊体的去脂作用以得到纯的蛋白质级分(图3)。其它处理可以加入增味组分，或芳香剂或其它适宜的试剂，通过诸如除去脂类(lipids)浓缩产物。

6.干燥类囊体膜

可以包括额外的干燥类囊体膜的步骤作为分离类囊体膜的步骤。只要类囊体膜保持其结构，可以使用不同的干燥方式。干燥的例子包括喷雾干燥、空气干燥、冷冻干燥、二氧化碳干燥以及真空干燥。

用上述方法/过程获得的分离的类囊体级分可用作添加剂，并且可以与其它组分，诸如脂肪、黄油、人造黄油、油、奶油、牛奶、乳酪、干酪、面粉、果汁、软饮料、茶或任何其它合适的产品混合。产品的其它例子包括冰淇淋、酸乳酪、蛋糕、面包、谷类、生面团和调味品。类囊体膜可以在小药囊中出售，以便于使用前加入任何产品中。其它产品的例子在PCT/SE2006/00676中提及。

本发明的组合物可以用作食物添加剂，并且可以与其它组分，诸如脂肪、黄油、人造黄油、油、奶油、牛奶、乳酪、干酪、面粉、果汁、软饮料、茶混合，可以在加入食物产品之前混合或在加入食物产品的过程中混合。所述食物添加剂或含有所述组合物的食物组合物可以是固体、半固体或液体形式。更进一步的，其可以冷冻干燥、喷雾干燥或低压冻干。本发明的食物添加剂可以用于任何类型的食物产品，也可以单独使用。食物产品的例子是脂肪、黄油、人造黄油、油、奶油、牛奶、乳酪、干酪、面粉、果汁、软饮料、茶。其它例子是酸乳酪、冰淇淋、蛋糕、面包和调味品。

本发明的组合物还可以用作药物组合物，并且本发明还涉及可以通过上述方法或产生同样产物的方法获得的产物的应用，所述产物用于制备在人类和动物中治疗超重、促进饱满感、减少食物摄取、减轻体重、降低血胰岛素浓度和降低体脂肪百分比的药物。

药物组合物含有本发明的组合物和药学上可接受的缓冲剂、赋形剂、载体或稀释剂。待治疗的疾病的例子为作为疾病或病症的代谢综合症，诸如高血压、动脉硬化、痛风、I型和II型糖尿病、癌症和血脂障碍。“药学上可接受的”指不降低活性成分，即抗微生物肽的生物活性的有效性的无毒物质。该药学上可接受的缓冲剂、载体或赋形剂是本领域熟知的(见Remington'sPharmaceuticalSciences,18thedition,A.RGennaro,Ed.,MackPublishingCompany(1990)以及handbookofPharmaceuticalExcipients,3rdedition,A.Kibbe,Ed.,PharmaceuticalPress(2000))。

术语“缓冲液”意旨含有酸-碱混合物用于稳定pH的含水溶液。缓冲液的实例为Trizma、Bicine、Tricine、MOPS、MOPSO、MOBS、Tris、Hepes、HEPBS、MES、磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、羟乙酸盐、乳酸盐、硼酸盐、ACES、ADA、酒石酸盐、AMP、AMPD、AMPSO、BES、CABS、卡可基酸盐、CHES、DIPSO、EPPS、乙醇胺、甘氨酸、HEPPSO、咪唑、咪唑乳酸、PIPES、SSC、SSPE、POPSO、TAPS、TABS、TAPSO和TES。

术语“稀释剂”意旨用于稀释药物制剂中肽的含水或非水溶液。稀释剂可以是一种或多种盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇或油(诸如红花油、玉米油、花生油、棉花籽油或麻油)。

术语“佐剂”意旨任何加入制剂中以增加肽的生物学效应的化合物。佐剂可以是一种或多种具有不同阴离子的锌、铜或银盐，所述阴离子例如但不限于氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、硫氰酸盐、亚硫酸盐、氢氧化物、磷酸盐、碳酸盐、乳酸盐、羟乙酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐、酒石酸盐、以及不同酰基组成的醋酸盐。赋形剂可以是一种或多种碳水化合物、聚合物、脂类和矿物质。碳水化合物的例子包括乳糖、蔗糖、甘露醇和环糊精，将其加入组合物中，例如便于冷冻干燥。聚合物的例子为淀粉、纤维素醚、纤维素羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基羟乙基纤维素、藻酸盐、鹿角菜胶、透明质酸及其衍生物、聚丙烯酸、多磺酸盐(polysulphonate)、聚乙二醇/聚氧化乙烯、聚氧化乙烯/聚氧化丙烯共聚物、不同水解程度的聚乙烯醇/聚乙烯乙酸酯、和聚乙烯吡咯烷酮，它们均为不同分子量，加入组合物中例如用于控制粘度、实现生物粘附、防止脂类的化学和蛋白水解降解。脂类的例子为不同酰基链长和饱和度的脂肪酸、磷脂、单、二和三甘油酯、神经酰胺，鞘脂和糖脂；卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化卵磷脂和大豆卵磷脂，其加入组合物的原因与聚合物相同。矿物质的例子为滑石、氧化镁、氧化锌和氧化钛，其加入组合物以获得诸如减少脂类蓄积或更好的色素性质的益处。

本发明的组合物还可以是聚合物凝胶的形式，其中所述聚合物诸如淀粉、纤维素醚、纤维素羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基羟乙基纤维素、藻酸盐、鹿角菜胶、透明质酸及其衍生物、聚丙烯酸、多磺酸盐、聚乙二醇/聚氧化乙烯、聚氧化乙烯/聚氧化丙烯共聚物、不同水解程度的聚乙烯醇/聚乙烯乙酸酯、和聚乙烯吡咯烷酮，其用于含肽溶液的增稠。

药物组合物可以经历常规的药学操作，诸如灭菌和/或可以含有常规佐剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂、填充剂等等，例如在本文中别处所公开的。

合适的制剂形式为，例如颗粒剂、粉剂、片剂、包衣片剂、(微)囊、糖浆剂、乳剂、微乳剂，其被定义为由水、油、表面活性剂和液体结晶相组成的光学各向同性的热力学稳定的体系，所述体系被定义为特征在于长程有序但短程无序(例子包括水或油连续的层状、六角形和立方体相(cubicphase))，或它们的分散对应物、凝胶、软膏剂、分散剂、悬浮剂、乳膏剂、气雾剂、滴剂或安瓿形式的可注射溶液，以及具有延长活性化合物释放的制剂，在所述制剂中赋形剂、稀释剂、佐剂或载体如上所述按常规使用。

以药学有效剂量将药物组合物给予患者。“药学有效剂量”指足以产生与给药治疗的病症有关的预期效果的剂量。确切剂量取决于化合物的活性、给药方式、病症的性质和严重程度、患者的年龄和体重，可能需要不同的剂量。可以通过单个剂量单位或其它若干更小的剂量单位的形式的单次给药给予所述剂量，或还可以通过特定间隔多次给予亚分份剂量给予所述剂量。

本发明涉及人类以及其它哺乳动物，诸如马、狗、猫、母牛、猪、骆驼、以及其它。因此所述方法适于人类治疗也适于兽医应用。可以用已经完善的标志来鉴别适于该治疗的对象。下面是作为本发明实施例的叶绿体膜(类囊体)分离及其在抑制胰脂肪酶活性和减少食物摄取方面应用的描述，所述叶绿体膜是从菠菜中分离的。下述实施例意为解释而非以任何方式、形状、形式明确或隐含的限制本发明。

具体实施方式

实施例1

从菠菜中生产类囊体

从菠菜中生产30kg干燥的类囊体膜需要约1000kg的起始原料。

无水量(drycontent)的菠菜:8-9％

从菠菜鲜重中获得约0.01％-0.03％(w/w)的干燥类囊体膜级分。

1.使用螺旋压榨机和混合器将1000kg冷冻的菠菜与饮用水按1:1混合。干物质的量约为85kg。

2.加入EDTA至浓度为10mM。

3.将匀浆液/浆液稀释至菠菜与饮用水的终比例为1:10，体积为10m³。使浆液通过倾析器，从而从液体中除去细胞残渣。

4.用alfalaval分离器分离类囊体级分。获得约600升的干物质约5％的浓稠液体。

5.冷冻24小时、融化、通过5μm滤器过滤后，将类囊体级分浓缩5倍以成为干物质含量约为25％的糊。从1000kg菠菜中获得120kg糊。

6.用冷冻干燥器将糊干燥，得到约30kg干燥的类囊体膜。

实施例2

产品对胰岛素的效果

胰岛素具有重要的合成代谢作用，引起暴食和肥胖。因此在多种饮食疗法中实现降低胰岛素水平是重要的。为研究类囊体是否影响胰岛素分泌，在摄入对照饮食和含有类囊体饮食的过程中测定胰岛素分泌。在人类中进行该研究。11位健康者禁食过夜，然后给予对照饮食或富含类囊体的饮食，各饮食之间间隔一周确保清除效果。对照饮食包含面包、番茄、含有菜籽油的青酱和添有罗勒(basil)的腰果，而类囊体饮食(4种不同的实验饮食)含有同样的组分，添加不同剂量的类囊体粉(50克、25克、10克或5克)。在0、30分钟、1小时、2小时、4小时和6小时的各时间点取血样。测定葡萄糖和胰岛素水平。类囊体对血浆葡萄糖水平无影响，但所有剂量都显著降低胰岛素分泌。胰岛素分泌的显著降低表明类囊体粉增加了胰岛素的敏感性。该效应对于建立能量平衡极其重要。类囊体对胰岛素分泌的作用经50g类囊体证实(图4)。

实施例3

产品对体脂肪的影响

为研究类囊体对体脂肪的影响，喂给小鼠高脂饮食或富含类囊体的高脂饮食共100天。从Taconic(TaconicEurope,LilleSkensved,Denmark)获得30只雌性apoE-缺陷小鼠并分为两组(每组n＝15)；一组接受含有0.15％(按能量计)胆固醇和43％(按能量计)饱和脂肪的高脂饮食(对照组；R638,Lactamin,Kimsta,Sweden)，另一组接受富含类囊体的高脂饮食(R638)，使用剂量为6mg叶绿素/g的饮食。对照饮食和富含类囊体的饮食是等热量的，且在常量营养物之间具有相同的热量组成。于具有12h光照/黑暗循环(上午6点开灯)的温控环境(21℃)下，每笼饲养3只小鼠。小鼠在所有时间都自由进食各自的饮食并饮用自来水。每隔一天测量一次食物摄取量，每周测量两次体重。研究持续100天。最后，禁食四小时后收集血液，并用Sigma(Sigmadiagnostics,Steinheim,Gernany)的GPO-Trinder试剂盒测定血清中甘油三酯含量。结果见下表。如表所示，与对照动物相比，接受类囊体的动物中甘油三酯含量显著减少。然后处死动物，用双能X-射线分析法(DEXA)分析体脂肪：如图5所示，与对照动物相比，接受类囊体的动物中食物摄取、体重和体脂肪显著减少(图5)。

甘油三酯(mmol/L)

CD＝标准偏差。

Claims (15)

1.一种用于生产至少一种类囊体膜级分的大规模方法，包括下述步骤：

a)收集超过500kg的量的至少含有类囊体的植物或藻类

b)用溶液将所述植物或藻类均质化为匀浆液

c)从b)的匀浆液中除去植物残渣

d)在级分中收集类囊体

e)浓缩d)的级分并且

f)将浓缩e)的级分干燥成粉末或颗粒。

2.根据权利要求1的方法，其中所述均质化步骤b)通过使用至少一个混合步骤、研磨步骤或粉碎步骤完成。

3.根据权利要求1至2的方法，其中在所述b)中的溶液含有选自由EDTA、EGTA、DTPA、柠檬酸盐和NTA组成的组的试剂。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述步骤d)包括使用分离器。

5.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述步骤d)包括使用pH约为4-5的沉淀步骤。

6.根据权利要求1到5中任一项的方法，其中所述e)的浓缩步骤通过离心或过滤进行。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其中在所述步骤d)和步骤e)之间使用冷冻步骤，从而机械地和/或酶促地粉碎叶。

8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中所述方法包括至少一个洗涤步骤。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述洗涤步骤在步骤e)之后进行。

10.根据权利要求8至9中任一项的方法，其中所述洗涤步骤包括用乙醇洗涤。

11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述光合成生物是选自由藻类、菠菜、三叶草、油菜、甜菜、羽衣甘蓝、昆诺阿藜、草或耶路撒冷洋蓟、蒲公英、藜属、滨藜属组成的组的植物。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述类囊体膜级分加入到食品、食品添加物或药物产品中的额外步骤。

13.一种可用根据权利要求1至12中任一项的方法获得的产品。

14.根据权利要求13的产品在治疗中的应用。

15.根据权利要求13所述的产品在制备用于在人类和动物中治疗超重、促进饱满感、减少食物摄取、减轻体重、降低血胰岛素浓度、降低血脂或甘油三酯水平、或降低体脂肪百分比或减少炎症的药物中的应用。