WO2023149794A1 - Способ получения активного комплекса из личинок lymantria dispar - Google Patents

Способ получения активного комплекса из личинок lymantria dispar Download PDF

Info

Publication number
WO2023149794A1
WO2023149794A1 PCT/MD2023/000001 MD2023000001W WO2023149794A1 WO 2023149794 A1 WO2023149794 A1 WO 2023149794A1 MD 2023000001 W MD2023000001 W MD 2023000001W WO 2023149794 A1 WO2023149794 A1 WO 2023149794A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
larvae
active complex
active compound
active
lymantria dispar
Prior art date
Application number
PCT/MD2023/000001
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Чеслав ЧУХРИЙ
Original Assignee
Чеслав ЧУХРИЙ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Чеслав ЧУХРИЙ filed Critical Чеслав ЧУХРИЙ
Publication of WO2023149794A1 publication Critical patent/WO2023149794A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • A01K67/04—Silkworms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/90—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for insects, e.g. bees or silkworms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/63—Arthropods
    • A61K35/64—Insects, e.g. bees, wasps or fleas
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • the invention relates to the field of pharmaceuticals, and in particular to methods for producing drugs with anti-inflammatory action, intended for the treatment of benign prostatic hyperplasia, associated or not associated with chronic prostatitis.
  • a known method of obtaining an active complex from the biomass of the larvae of the insect Teyaebno top/og in vaseline oil contains 45-80% entomological extract and 55-20% vaseline oil.
  • This active complex is characterized by high specific antioxidant activity and is effective in prostate diseases.
  • the activity of the active complex in the process of 50% inhibition of lipoprotein peroxidation (CI 50%) is manifested at a concentration of 16 mg/ml; and in the process of 50% inhibition of the nitric oxide radical - at a concentration of 20 mg/ml).
  • the process of obtaining the active complex in this case includes several stages, the first of which is the production of Tenebrio molitor larvae.
  • insects are grown in a nursery on a standardized artificial environment in compliance with certain stages.
  • the second stage consists of collecting and processing the larvae.
  • the resulting larvae are washed 4 times, using 4 volumes of distilled water for each wash.
  • Disinfection of larvae is carried out using UV rays.
  • the larvae are frozen at -18°C.
  • the next stage is the gradual thawing of the larvae at a temperature of 20-22°C.
  • the biomass is homogenized and crushed in a homogenizer with stainless steel knives at a speed of 5000 rpm to obtain particles with a size of 9-12 microns.
  • the next step is the fractional extraction (water soluble fraction and fat soluble fraction) of the bioactive components from the larval biomass.
  • water-soluble components are extracted from the entomological biomass, after which the resulting extract is separated from the rest of the biomass by vacuum filtration.
  • the aqueous extract is concentrated by evaporation in vacuo. Extraction of the fat-soluble fraction is carried out with 70% ethanol. After that, the obtained extract is separated by filtration, after which the extract is concentrated by vacuum evaporation at 40°C. Both extracts are combined and the entire extract is lyophilized.
  • the total extract is prepared in the form of an active entomological complex in vaseline oil, the following composition: total entomological lyophilized extract - 45...80%; vaseline oil - 55 ... 20%.
  • the drug is produced in the form of suppositories containing 250 mt of the active entomological complex and 1750 mg [1]
  • composition of the preparation is as follows: proteins - 265.0,..292.0 mg/g; lipids ⁇ 140.0 mg/g, cholesterol - 0.1 mg/g; triglycerides - 90.0 mg/g, amylase - 5.1 IU/r, lipase. - 100.0 IU / g, antioxidants - 16.86 mg / g, essential and semi-essential amino acids - 379.7 mg / g.
  • the drug has an inhibitory effect on lipid peroxidation, p]
  • the patent does not describe the procedure for growing insects in order to obtain larval biomass, the active substance is extracted with saline, which does not allow all bioactive components to be isolated.
  • Another way to obtain an entomological preparation from the biomass of the first instar larvae of Lymantria. ispar is the water-ethanol extraction of the bioactive components of the biomass.
  • Limantry larvae are grown in a farm environment on a medium consisting of wheat flour, sorghum, dry plant matter, milk powder, dry yeast, glycerin and honey.
  • the biomass of Lymantria di spar larvae of the first age is washed 4 times, each time with a volume of water 4 times the volume of the larvae.
  • the larvae are frozen-thawed.
  • the biomass is mixed at a speed of 5000 rpm and crushed to obtain particles of 9-12 microns in size.
  • the resulting mass is additionally subjected to extraction for 60 minutes with a 20% aqueous-alcoholic solution.
  • the extraction is carried out at a constant temperature (18-20°C) and constant stirring on an orbital shaker with a rotation speed of 280 rpm (alternatively 240-320 rpm).
  • the biomass is separated from the extract by vacuum filtration followed by lyophilization of the extract [3].
  • a pharmaceutical product is obtained in the form of rectal suppositories, which contains 60% of a lyophilized extract.
  • the disadvantage of this method is that it makes it possible to obtain a preparation consisting only of biomass components that can be extracted with a 20% water-ethanol solution, in which a significant part of the fat-soluble components is absent.
  • Another disadvantage of this process is that the biomass of larvae of the first age is used as a raw material for extraction, which is characterized by a small mass due to its small size, which implies an increase in the cost of technology; a single water-ethanol extraction is carried out for 60 minutes, due to which part of the active components of the biomass remains unused.
  • the process includes the following stages of work: collection of pupae and larvae of the last age of Lymantria dispar starting from June and eggs - in August-September from the trunks of affected oaks and poplars, or growing larvae and pupae in special laboratory conditions, washing of biological material and its resuspension in saline; filtration and extraction of biological material; optional - freezing of the material until further use; grinding the material to obtain particles with a size of 9-12 microns: filtering through a Bakker plate filter having 200 holes per cm 2 ; vacuum spraying of the obtained extract at a temperature of 130-140°C at the inlet and 85-9O°C at the outlet or its lyophilization for 24-30 hours - in this way, a deactive substance is obtained to obtain a dosage form; execution of a pharmaceutical composition consisting of 1% biologically active substance in the form of an extract of Lymantria dispar, 82% cocoa butter, 10% distilled water, 2.68% helix, 2% laurate, 1.3%
  • the disadvantage of this method is that three phases of insect development are used as biological raw materials - eggs, larvae of the last instars and pupae.
  • the biochemical composition of larvae, pupae, and eggs varies significantly.
  • the biological activity of these types of biomass also differs significantly.
  • the antiradical activity of the larval extract is 5-7 times higher compared to the activity of eggs and pupae. [3].
  • the biological activity of larvae decreases with age, for example, the antiradical activity of larvae of the last instar is at least 30% lower compared to the activity of larvae of the first instar.
  • the closest solution is to use larvae of the last age, which are characterized by the lowest antioxidant activity [3].
  • the source chosen as the closest solution, does not indicate the proportions for obtaining a mixture of larvae and pupae. Based on their different activity, in the case of using different proportions of larvae and pupae, products with different biological activity will be obtained. Also, the selected source does not describe the process of growth of larvae and pupae in laboratory conditions, which may be a factor in varying the amount and biological properties of the obtained biological material. Thus, it becomes impossible to control the composition of the active substance.
  • the closest solution to the stated problem is a method for obtaining an active complex from Lymantria dispar larvae of 3-4th age, including growing Lymantria ispar insects in a laboratory on a standardized medium, freezing non-larvae at -18°C. washing of larvae, primary grinding of larvae - obtaining the active complex, lyophilization of the active complex, grinding of the active complex at an extremely low temperature ( ⁇ 55°C), homogenization of the active complex (combining fractions), packaging complex, storage of the active complex in a freezer ( ⁇ 18°C).
  • the use of this technique ensures the preparation of a drug with an anti-inflammatory effect, which ensures a decrease in the release of interleukin 8 by 42% from the value of this indicator without the drug. [5].
  • the problem that the present invention solves is to develop a method for obtaining a new active entomological preparation that ensures the quality and effectiveness of the product, consistently implementing all technological steps, the main of which is the cultivation of insects and obtaining an active preparation that has a powerful anti-inflammatory and antioxidant effect, effective in the treatment prostate diseases.
  • the essence of the invention lies in the fact that a method is proposed for obtaining an active complex from larvae of Lymaniria dispar of the 4th age, including: growing Lymaniria dispar insects in a nursery on a standardized medium of the following composition (per kg of medium):
  • Zinc acetate dihydrate ( p (CH3COg) 2 ' 2H> O) 0.03-0.05 g
  • Purified water up to 1000g; freezing of larvae at -18°C; washing the larvae; primary grinding of larvae - obtaining the active complex Adenoprosin Plus; lyophilization of the active complex; grinding of the active complex at extremely low temperature (-55 C ); homogenization of the active complex (combining fractions); packaging of the active complex; storage of the active complex in a freezer (-18°C).
  • the technical result of the invention compared with the nearest solution, is that. that in the process of obtaining the active complex, a nutrient medium for the growth of larvae is used, which contains zinc acetate at a concentration of 30-50 mg. /kg, which allows to produce more biomass with higher biological activity. Also, the biomass of larvae grown on the new medium accumulates a significantly higher amount of zinc compared to those grown on the medium prepared according to the recipe from the nearest solution. Also, the resulting biomass has a higher content of irotenogenic amino acids, including essential ones.
  • the technical result of the invention is due to the beneficial effect of a zinc-containing diet, which is a recognized stimulator of many metabolic processes in living cells.
  • Cultivation of Lymantria dispar insects involves the following steps:
  • insects Provide conditions for the implementation of the life cycle of insects.
  • the cultivation of insects was carried out in rooms with an area of 15-20 m. "The walls are covered with a special resin that can be disinfected with disinfectant solutions. There are shelves around the perimeter of the room on which the darkened boxes of Rubbermaid are placed. The temperature in the nursery is maintained at 27 ° C, and the humidity is 75% Insects are reared under photoperiodic conditions.
  • the larvae are grown until the majority of the larvae reach the 4th instar (21-23 days from the moment of hatching), with their successive transfer to a fresh nutrient medium.
  • the larvae Before use, the larvae are washed twice with four volumes of 0.9% saline and two more times with four volumes of purified water. This procedure removes hairs from the outer shells of the larvae.
  • the biomass is subjected to grinding in a grinder with stainless steel knives so that the size of the resulting particles does not exceed 2 mm.
  • the resulting active complex is then subjected to a lyophilization process.
  • the last stage consists in grinding the lyophilized active complex in a cryogenic mill at an extremely low temperature, which ensures the production of dispersed particles up to 200 microns in size.
  • the active complex obtained by the method described above is sealed in aluminum bags and stored until use (dr 24 months) in a freezer (I - -18 ⁇ 3 b C).
  • the results obtained in the framework of the proposed method were compared with the results obtained by the closest solution. In the latter case (the closest solution), the larvae were grown in laboratory conditions on the claimed medium (paragraph 2 of the example), larvae of the 4th age were collected.
  • the table shows that the proposed process is more efficient in terms of biomass accumulation per gram of feed used.
  • the amount of biomass obtained per unit of feed used is 26.8% higher than in the case of the closest solution.
  • the quality of the biomass obtained by the proposed method exceeds that obtained by the closest solution: the zinc content increases by 3.5 times, the amount of protein amino acids increases by 52.6%, including essential ones - by 59.4%. .
  • the biological activity of the biomass obtained by the proposed method is higher.
  • the reduction in the amount of IL-8 released compared to the control is 27.6% more effective than the closest solution.
  • the antioxidant activity of the active complex obtained by the proposed method is 17.4% higher compared to the activity of the complex obtained from the closest solution.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Feed For Specific Animals (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, связанной с хроническим простатитом. Способ получения активного комплекса из личинок Lymantria dispar включает выращивание насекомых в контролируемых условиях на стандартизированной среде следующего состава: пшеничная мука, кукурузная мука, сухая растительная масса, сухое обезжиренное молоко, пчелиный мед, глицерин, пинобанксин, пиноцембрин, ацетат цинка двуводный, очищенная вода. Замораживают личинки при -18°С, промывают личинки. Проводят первичное измельчение личинок - получение активного комплекса, лиофилизацию активного комплекса, измельчение активного комплекса при экстремально низкой температуре (-55°С), гомогенизацию активного комплекса, упаковку активного комплекса, хранение активного комплекса в условиях морозильной камеры (-18°С). Изобретение обеспечивает повышение выхода целевого продукта и его биологической активности.

Description

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ИЗ ЛИЧИНОК LYMANTRIA DISPAR
Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к способам получения препаратов с противовоспалительным действием, предназначенных для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, связанно или не связанной с хроническим простатитом .
Известен способ получения активного комплекса из биомассы личинок насекомого ТеяеЬпо тоП/ог в вазелиновом масле. Активный энтомологический комплекс, полученный по этому способу, содержит 45-80% энтомологического экстракта и 55-20% вазелинового масла. Этот активный комплекс характеризуется высокой специфической антиоксидантной активностью и эффективен при заболеваниях предстательной железы. Активность активного комплекса в процессе 50% ингибирования перекисного окисления липопротеинов (ДИ 50%) проявляется, при концентрации 16 мг/мл; а в процессе 50% ингибирования радикала оксида азота - при концентрации 20 мг/мл). Процесс получения активного комплекса при этом включает несколько этапов, первый из которых - получение личинок Tenebrio molitor. Для этого насекомых выращивают в питомнике на стандартизированной искусственной среде с соблюдением определенных стадий. Второй этап состоит из сбора и обработки личинок. Полученных личинок промывают 4 раза, используя для каждой промывки 4 объема дистиллированной воды. Обеззараживание личинок производится с помощью УФ-лучей. После этого личинок замораживают при -18°С. Следующий этап заключается в постепенном оттаивании личинок в условиях температуры 20-22°С. После этого биомасса гомогенизируется и измельчается в гомогенизаторе ножами из нержавеющей стали со скоростью 5000 оборотов в минуту до получения частиц размером 9-12 мкм. Следующий этап заключается в фракционном извлечении(водорастворимая фракция и жирорастворимая фракция) биоактивных компонентов из личиночной биомассы. На первом этапе из энтомологической биомассы извлекают водорастворимые компоненты, после чего полученный экстракт отделяют от остальной биомассы вакуумной фильтрацией. Водный экстракт концентрируют выпариванием в вакууме. Экстракцию жирорастворимой фракции проводят 70% этиловым спиртом. После этого полученный экстракт отделяют фильтрованием, после чего экстракт концентрируют вакуумным упариванием при 40°С. Оба экстракта объединяют и весь экстракт лиофилизируют. Общий экстракт готовят в виде активного энтомологического комплекса в вазелиновом масле, следующего состава: общий энтомологический лиофилизированный экстракт - 45...80%; масло вазелиновое - 55...20%. Препарат выпускается в виде- суппозиториев, содержащих 250 мт активного энтомологического комплекса и 1750 мг [1]
Недостатком данного способа получения активного энтомологического комплекса является наличие вакуумного упаривания водно-спиртового экстракта с подогревом экстрактов на стадиях процесса, что может привести к повреждению их термолабильных компонентов.
Известен также способ получения противовоспалительного и антиоксидантного энтомологического препарата, предназначенного для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы, из личинок насекомых отряда чешуекрылых рода Lymantria путем измельчения их в физиологическом растворе до образования однородной массы, фильтрование и удаление воды путем лиофилизации. Состав препарата следующий: белки - 265.0,..292,0 мг/г; липиды ~ 140,0 мг/г, холестерин - 0,1 мг/г; триглицериды - 90,0 мг/г, амилаза - 5,1 МЕ/r, липаза. - 100,0 МЕ/г, антиоксиданты - 16,86 мг/г, незаменимые и полузаменимыс аминокислоты - 379,7 мг/г. Препарат оказывает ингибирующее действие на перекисное окисление липидов, р]
В патенте отсутствует описание процедуры выращивания насекомых с целью получения личиночной биомассы, действующее вещество экстрагируется физиологическим раствором, что не позволяет выделить все биоактивные компоненты.
Другой способ получения энтомологического препарата из биомассы личинок первого возраста Lymantria . ispar заключается в водно-этанольной экстракции биоактивных компонентов биомассы. Личинок лимантрий выращивают в условиях фермы на среде, состоящей из пшеничной муки, сорго, сухой растительной массы, сухого молока, сухих дрожжей, глицерина и меда. Биомассу личинок Lymantria di spar первого возраста промывают 4 раза, каждый раз объемом воды, в 4 раза превышающим объем личинок. Личинки замораживают-размораживают. С помощью ступки с ножами из нержавеющей стали биомасса перемешивается со скоростью 5000 оборотов в минуту и измельчается до получения частиц размером 9-12 мкм, Полученную массу дополнительно подвергают экстракции в течение 60 мин 20%-ным водно-спиртовым раствором. Экстракцию проводят при постоянной температуре (18-20°С) и постоянном перемешивании на орбитальном шейкере со скоростью вращения 280 об/мин (альтернативно 240-320 об/мин). Биомасса отделяется от экстракта вакуумной фильтрацией с последующей лиофилизацией экстракта [3]. Далее получают фармацевтический продукт в виде ректальных суппозиториев, который содержит 60% л иофи лизирова н кого экстракта..
Недостатком способа является го, что он позволяет получить препарат, состоящий только из компонентов биомассы, которые можно экстрагировать 20%-йым водао-этанольным раствором, в котором отсутствует значительная часть жирорастворимых компонентов. Другим недостатком этого процесса является то, что в качестве сырья для экстракции используется биомасса личинок первого возраста, которая характеризуется небольшой массой из-за мелких размеров, что предполагает удорожание технологии; проводится однократная водао-этанольная экстракция продолжительностью 60 мин, из-за чего часть активных компонентов биомассы остается неиспользованной.
Известен также способ получения энтомологического препарата из куколок, личинок последнего возраста (5-го или 6-го в зависимости от пола) и яиц Lymantria dispar, который включают в фармацевтическую композицию в виде гектильных или вагинальных суппозиториев, предназначенных для лечение геморроя, аденомы простаты, миомы матки [4]. Согласно указанному источнику,- процесс включает в себя следующие этапы работы: сбор куколок и личинок последнего возраста Lymantria dispar начиная с июня и яиц - в августе-сентябре со стволов пораженных дубов и тополей иля выращивание личинок я куколок в специальных лабораторных условиях промывание биологического материала и его ресуспендирование в физиологическом растворе; фильтрация и извлечение биологическотхэ материала; опционально - замораживание материала до дальнейшего использования; измельчение материала до получения частиц размером 9-12 мкм: фильтрование через пластинчатый фильтр Баккера, имеющий 200 отверстий на см2; вакуумное распыление полученного экстракта при температуре 130-140°С на входе и 85-9О°С на выходе или его лиофилизация в течение 24-30 часов - таким обоазом получают дактивное вещество для получения лекарственной формы; исполнение фармацевтической композиции, состоящей из 1 % биологически активного вещества в виде экстракта Lymantria dispar, 82 % масла какао, 10 % дистиллированной воды, 2,68 % хеликса, 2 % лаурата, 1,3 % 2- бром-2~нитропропаиа, 1 % нолиглицерил-4 цетилизостеарат ПЭГ/ППГ диметикан 10/1 и 0,02% диада.; кондиционирование этой формулы путем плавления и гомогенизации полученной смеси при температуре 60сС и разливания ее по формам для супозиториев, упаковка для последующего хранения.
Недостатком этого способа является то, что в качестве биологического сырья используются три фазы развития насекомого - яйца, личинки последних возрастов и куколки. Биохимический состав личинок, куколок и яиц существенно различается. Биологическая активность этих видов биомассы также существенно различается. Например, антирадикальная активность экстракта личинок в 5-7 раз выше по сравнению с активностью яиц и куколок. [3].
Показано также, что с возрастом биологическая активность личинок снижается, например, антирадикальная активность личинок последнего возраста как минимум на 30% ниже по сравнению с активностью личинок первого возраста. Наиболее близким решением является использование личинок последнего возраста, характеризующихся наименьшей антиоксидантной активностью [3].
В то же время источник, выбранный как наиболее близкое решение, не указываются пропорции для получения смеси личинок и куколок. Исходя из их разной активности, в случае применения разных пропорций личинок и куколок будут получены продукты е разной биологической активностью. Также выбранный источник не описывает процесс роста личинок и куколок в лабораторных условиях, что может быть фактором варьирования количества и биологических свойств получаемого биологического материала. Таким образом становится невозможным контроль состава действующего вещества..
Наиболее близким решением заявленной задачи является способ получения активного комплекса из личинок Lymantria dispar 3-4-го возраста, включающий выращивание насекомых Lymantria ispar в лаборатории на стандартизированной среде, замораживая не личинок при -18°С. промывку личинок, первичное измельчение личинок - получение активного комплекса, лиофилизация активного комплекса, измельчение активного комплекса при экстремально низкой температуре (~55°С), гомогенизация активного комплекса (объединение фракций), упаковка активного комплекса, хранение активного комплекса в условиях морозильной камеры (~18°С). Применение данной методики обеспечивает получение препарата е противовоспалительным действием, что обеспечивает снижение выброса интерлейкина 8 на 42% от значения этого показателя без препарата. [5].
Повысить показатели этого процесса можно путем направленной модификации состава биомассы личинок, что приводит к повышению противовоспалительной и антиоксидантной активности получаемого препарата.
Задача, которую решает настоящее изобретение, заключается в разработке способа получения нового активного энтомологического препарата, обеспечивающего качество и эффективность продукта, последовательно реализуя все технологические этапы, основным из которых является выращивание насекомых и получение активного препарата, обладающего мощным противовоспалительным и антиоксидантным действием, эффективного при лечении заболеваний простаты.
Сущность изобретения заключается в том, что предлагается способ получения активного комплекса из личинок Lymantria dispar 4-го возраста, включающий: выращивание насекомых Lymaniria dispar в питомнике на стандартизованной среде следующего состава (на кг среды ):
Пшеничная мука 80-95 г
Кукрузная мука 82-87 г
Сухая растительная масса 110-120 г
Обезжиренное сухое молоко 2,5-3, 5 г
Пчелиный мед 17-19 г
Глипери 10-12 г
Пинобаксин 0,01 -0,02 г
Пиноцембрии 0,01 -0,02 г
Цинка ацетат дигидрат ( п(СНзСОг)2 ' 2Н>О) 0,03-0,05 г
Очищенная вода до 1000г; замораживание личинок при -18°С; промывание личинок; первичное измельчение личинок - получение активного комплекса Аденопросин Плюс; лиофилизация активного комплекса; измельчение активного комплекса при экстремально низкой температуре (- 55вС); гомогенизация активного комплекса (объединение фракций); упаковка активного комплекса; хранение активного комплекса в условиях морозильной камеры (-18°С).
Технический результат изобретения, по сравнению с ближайшим решением, заключается в том. что в процессе получения активного комплекса используется питательная среда для роста личинок, которая содержит ацетат цинка в концентрации 30-50 мг. /кг, что позволяет подучать большее количество биомассы с более высокой биологической активностью. Также биомасса личинок, выращенных на новой среде, накапливает значительно большее количество цинка по сравнению с выращенными на среде, приготовленной по рецепту из ближайшего решения. Также полученная биомасса имеет более высокое содержание иротенногенных аминокислот, в том числе незаменимых. Технический результат изобретения обусловлен благотворным действием цинксодержащей диеты, которая является признанным стимулятором многих метаболических процессов в живых клетках..
Пример реализации изобретения:
Выращивание насекомых Lymantria dispar включает следующие этапы.:
1 , Обеспечение условий для реализации жизненного цикла насекомых. Вырашиванее насекомых проводился в помещениях площадью 15-20 м". Стены покрыты специальной смолой, которую можно дезинфицировать дезинфицирующими растворами. По периметру комнаты расположены полки на которых размещаются затемненные ящики Rubbermaid. Температура в питомнике поддерживается на уровне 27°С, а влажность - 75%. Насекомые выращиваются в условиях фотоперйодичности.
2. Выращивание насекомых. В каждый ящик Rubbermaid помещают 300-500 взрослых особей. После начала вылупления личинок первого возраста собирают и помещают в ящики Rubbermaid с питательной средой следующего состава::
Пшеничная мука 91,45 г
Кукурузная мука 85,55 г
Сухая растительная масса 117,99 г
Обезжиренное сухое молоко 2.95 г
Пчелиный мед 17,70 г
Глицерин 11 ,80 г
Пинобаксин 0,015 г
Пияоцембрин 0,015 г
Ацетат цинка 0,030 г
Очищенная вода 627,54 мл!
Личинок выращивают до тех пор, пока большинство личинок не достигнет 4-го возраста (21-23 день от момента вылупления), с последовательным их переносом на свежую питательную среду..
3. Получение активного энтомологического комплекса из личинок lymantria dispar 4-го возраста. Личинок собирают щипцами и переносят в специальные контейнеры для замораживания. Личинки замораживают при -18°С, В таком виде сырье может храниться 24 месяца и использоваться в зависимости от необходимости.
Перед использованием личинок дважды промывают четырьмя объемами 0.9% физиологического раствора и еще два раза четырьмя объемами очищенной воды. Эта процедура позволяет удалить волоски из внешних оболочек личинок.
Далее биомассу подвергают измельчению в измельчителе с ножами из нержавеющей стали, чтобы размер полученных частиц не превышал 2 мм. Полученный активный комплекс далее подвергают процессу лиофилизации.
Последний этап заключается в измельчении лиофилизированного активного комплекса в криогенной мельнице при экстремально низкой температуре, что обеспечивает получение дисперсных частиц размером до 200 мкм.
Активный комплекс, полученный описанным выше способом, герметично упаковывают в алюминиевые пакеты и хранят до использования (др 24 месяцев) в условиях морозильной камеры (I - -18±ЗбС). Результаты, полученные в рамках заявляемого способа, сравнивались с результатами, подученными по наиболее близкому решению, В последнем случае (наиболее близкое решение) личинок выращивали в лабораторных условиях на заявляемой среде (п.2 примера), собирали личинок 4-го возраста.
Таблица I
Кол ичество биомассы, содержание цинка, содержание аминокислот и противовоспали тельная активность активного комплекса по заявляемому способу и по ближайшему решению *
Figure imgf000007_0001
* Различия между значениями параметров, полученными по ближайшему решению и по предложенной методике, статистически значимы, р<0,()05.
Из таблицы видно, что предлагаемый процесс более эффективен с точки зрения накопления биомассы на грамм используемого корма. Таким образом, по предложенной методике количество полученной биомассы на единицу используемого корма на 26,8 % выше, чем в случае наиболее близкого решения. Также качество биомассы, полученной но предлагаемому способу, превосходит полученную по наиболее близкому решению: содержание цинка увеличивается в 3,5 раза, количество протеииогешгых аминокислот увеличивается на 52,6 %, в том числе незаменимых - на 59,4 %. . Биологическая активность биомассы, полученной по предлагаемому способу, выше. Таким образом, снижение количества высвобождаемого ИЛ-8 по сравнению с контролем на 27,6% более эффективно по сравнению с наиболее близким решением. Антиоксидантная активность активного комплекса, полученного по предлагаемой методике, на 17,4% выше по сравнению с активностью комплекса, полученного по наиболее близкому раствору. Библиография:
1. Brevet de inventie MD 4296. Preparat din larve de Tenehrio molitor cu ac|iune antioxidants, procedeu de ob|inere a acestuia produs farmaceutic pe baza Ini /Ciuhrii V.
2. Brevet de invenfie MD 2788. Preparat entomofogic antiinflamator §i antioxidant /Ghicavai V., Ciuhrii M., Bacinschi ., Ciuhrii V,, Chicavai V.
3. Ciuhrii V. Biotehnologia ob|inerii formei medicamentoase pentru tratarea hiperplaziei benigne de prostata. Teza de doctor in biologie. Chi§indu 2010, 129 p.
4. Brevet de inventie 001 2332, RO. Compozipe farmaceutica sub forma de supozitoare san ovule, pentru tratarea hemoromlor, adenomului de prostata, fibromul uterin, §i procedeu de preparare /Ciuhrii M.
5. Brevet de inventie MD 4713, Procedeu de obtinere a complexului active din larve de Lyniantria dispar/ Ciuhrii C.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Активный комплекс из личинок Lymantria dispar с высокой биологической активностью и повышенным содержанием цинка, включающий: выращивание насекомых Lymantria dispar в питомнике на стандартизированной среде следующего состава (на кг среды);
Пшеничная мука 80-95 г
Кукурузная мука 82-87 г
Сухая растительная масса 110-120 г
Сухое обезжиренное молоко 2, 5-3,5 г
Пчелиный мед 17- 1 г
Глицерин 10-12 г
Пйнобанксин 0,01 -0,02 г
Пииоцембрин 0,01 -0,02 г
Ацетат цинка двуводный (ZnCCHjCOjh ' 2Н2О) 0,03-0,05 г
Очищенная вода до 1000 г. замораживание личинок при -18°С; промывание личинок; первичное измельчение личинок - получение активного комплекса; лиофилизация активного комплекса; измельчение активного комплекса при экстремально низкой температуре (-55°С); гомогенизация активного комплекса (объединение фракций); упаковка активного комплекса; хранение активного комплекса в условиях морозильной камеры (- 18°С).
PCT/MD2023/000001 2022-02-07 2023-01-24 Способ получения активного комплекса из личинок lymantria dispar WO2023149794A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20220008A MD4845B1 (ru) 2022-02-07 2022-02-07 Способ получения активного комплекса из личинок Lymantria dispar
MDA20220008 2022-02-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023149794A1 true WO2023149794A1 (ru) 2023-08-10

Family

ID=85383304

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/MD2023/000001 WO2023149794A1 (ru) 2022-02-07 2023-01-24 Способ получения активного комплекса из личинок lymantria dispar

Country Status (2)

Country Link
MD (1) MD4845B1 (ru)
WO (1) WO2023149794A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD4713C1 (ru) * 2018-07-19 2021-04-30 Чеслав ЧУХРИЙ Способ получения активного комплекса из личинок Lymantria dispar

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020017944A1 (ru) * 2018-07-19 2020-01-23 Чеслав ЧУХРИЙ Активный комплекс из личинок lymantria dispar и способ его получения

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020017944A1 (ru) * 2018-07-19 2020-01-23 Чеслав ЧУХРИЙ Активный комплекс из личинок lymantria dispar и способ его получения

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
E.V. BUDKO; A.I. KONOPLYA; A.A. HABAROV; L.A. GORBACHEVA; N.O. ELTSOVA: "Obogashchenie drozhzhey solyami tsinka [ENRICHMENT OF YEAST BY USING ZINC SALTS]", AKTUAL'NYE PROBLEMY MEDITSINY, pages 1 - 4, XP009548538, Retrieved from the Internet <URL:https://cyberleninka.ru/article/n/obogaschenie-drozhzhey-solyami-tsinka?ysclid=Igcb6zkgq2707076> [retrieved on 20230417] *

Also Published As

Publication number Publication date
MD4845B1 (ru) 2023-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102088986A (zh) 类囊体的大规模制备方法
US4268632A (en) Process for isolation of ribulose 1,5-diphosphate carboxylase from plant leaves
KR101889982B1 (ko) 약초 추출박을 급이하여 생육한 곤충의 유충을 이용한 애완동물사료 제조방법
CN101962634B (zh) 一种从宣木瓜果实中提取木瓜蛋白酶和sod粗酶的方法
WO2023149794A1 (ru) Способ получения активного комплекса из личинок lymantria dispar
EP3308655B1 (en) Method for producing fermented bamboo extract and immunostimulator
EP4062903A1 (en) Active complex from lymantria dispar larvae and method for producing same
RU2402920C1 (ru) Способ приготовления кормовой добавки из личинок трутней для повышения резистентности организма собак при паразитозах
US20200390711A1 (en) Customizable cannabinoid powder and production methods
RU2291704C2 (ru) Способ приготовления препарата для повышения общей и специфической резистентности организма животных
RU2377930C1 (ru) Способ получения биологически активной добавки (варианты)
RU2305939C1 (ru) Способ получения биологически активного препарата из древесины лиственницы
RU2346457C1 (ru) Способ получения кормовой добавки из личинок трутней и подмора пчел
EA044135B1 (ru) Способ получения активного комплекса из личинок lymantria dispar
JP2992737B2 (ja) 凍結細胞膜破壊による動植物エキスの抽出法
CN110839763A (zh) 一种黑鱼的混合饵料鱼干粉及其制备方法
RU2270584C1 (ru) Способ производства биологически активной добавки
CN108849753A (zh) 一种大头金蝇培养基及其制备方法与养殖方法
RU2699656C1 (ru) Способ получения плодово-ягодных экстрактов
TWI703981B (zh) 香蕉偽莖嫩心萃取物於抗乳癌之用途
CN113135980A (zh) 一种燕窝小分子活性肽的生物制备方法
Moiseyenko et al. Processing of food produection waste for melanin production
RU2280463C1 (ru) Способ получения препарата для повышения резистентности организма
RU2053257C1 (ru) Способ получения медицинского жира
JP3393132B2 (ja) 細胞膜の破壊されたクロレラの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23750024

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1