CN105250225A - 一种康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种康普瑞汀聚合物胶束冻干制剂，其包括聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料和康普瑞汀，康普瑞汀包裹于所述共聚物载体材料中，其中康普瑞汀与所述共聚物载体材料的质量比为0.01～0.15；所述的共聚物载体材料为一种聚酯类单体或几种聚酯类单体的混合物与聚乙二醇单甲醚开环聚合形成的嵌段共聚物，聚乙二醇单甲醚与聚酯类的质量比为1∶0.55～2，其中，所述的聚酯类单体为D，L-丙交酯、乙交酯、己内酯和三甲基碳酸酯中的任意一种。本发明通过优选嵌段共聚物中聚酯和聚醚的质量比例，进一步优选康普瑞汀和载体的质量比，其制备的康普瑞汀胶束制剂用水复溶后包封率大于90％的时间可以达到12个小时以上，符合临床药品应用的实际情况，从而满足临床的要求。

Description

一种康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地涉及一种康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂及其制备方法。

背景技术

CombretastatinA-4(CA-4)是从南非灌木柳树皮中分离得到的天然强效小分子抗有丝分裂剂，为一种多羟基二苯乙烯类天然化合物，化学名为顺式-1-(3，4，5-三甲氧苯基)-2-(3′-羟基-4′-甲氧苯基)乙烯，其作用位点与秋水仙碱相同，能够抑制微管蛋白的聚合，同时能够抑制细胞中微管蛋白的解聚和有丝分裂物的累积。CA-4能针对肿瘤的血管显示出特异性靶向和破坏已生成的肿瘤血管，使肿瘤得不到氧气和营养，直到肿瘤“饿死”，从而达到杀死肿瘤细胞的作用，有望开发成临床上有效的抗肿瘤药物。但是CA-4具有很多缺陷，比如水溶性差，反式构型没有活性，且极差的水溶性使CA4口服的生物利用度较低，而其磷酸化的药物CA4P的水溶液对光和热不稳定，给予大鼠静脉注射给药后，消除半衰期仅几分钟，在体内消除很快，稳定性差，限制了临床使用。

纳米聚合物胶束是近年来发展起来的针对难溶性药物的载药系统，具有核-壳状结构，其中核为疏水性部分，壳为亲水性部分。聚合物胶束可以将难溶性药物包裹于核部分达到对难溶性药物的增溶。与常用的增溶剂和潜溶剂相比，由于聚合物胶束载药系统选择生物降解性材料为材料，其安全性较高。因此作为难溶性药物的包载辅料具有很好的应用前景。

发明内容

发明目的：本发明提出一种康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，该康普瑞汀纳米聚合物胶束用水分散后其包封率大于90％的时间可以达到12小时以上，制备的胶束聚合物具有稳定性高、药物泄漏慢、毒性低、耐热压灭菌、生物利用度高等优点，可缓慢、持续释放，能延长药物有效水平的周期、增加药物稳定性，包埋在胶束内的药物能被有效保护，从而降低药物的毒性、提高药物的疗效和增加被包封药物的稳定性。

本发明要解决的另一个技术问题是提供上述康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备方法。

技术内容：为实现上述技术目的，本发明提出了一种康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，所述冻干制剂包括聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料和康普瑞汀，康普瑞汀包裹于所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料中，其中康普瑞汀与所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的质量比为0.01～0.15；所述的聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料为一种聚酯类单体或几种聚酯类单体的混合物与聚乙二醇单甲醚开环聚合形成的嵌段共聚物，聚乙二醇单甲醚与一种聚酯类单体或几种聚酯类单体的混合物的质量比为1∶0.55～2，其中，所述的聚酯类单体为D，L-丙交酯、乙交酯、己内酯和三甲基碳酸酯中的任意一种。

优选地，所述的康普瑞汀与聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的质量比为0.02～0.09。

所述聚乙二醇单甲醚的分子量为1000～20000。

优选地，所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料中聚乙二醇单甲醚与聚酯类单体的质量比为1∶0.9～1.8。

本发明进一步提出了上述康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)合成聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料；

(2)采用薄膜水化法制备载药胶束溶液：将配方量的康普瑞汀和步骤(1)制备的聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料溶于有机溶媒中，混合摇匀，旋转蒸发除去有机溶媒，得到药物和载体材料的凝胶状药膜，然后向药膜中加入水溶解分散所述药膜，制得胶束溶液；优选地，步骤(2)中，旋转蒸发去除有机溶媒的条件为：旋转速度10～150rpm，温度20～80℃，时间1～4h；

(3)将步骤(2)制得的胶束溶液经过滤除菌、冷冻干燥后得到康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂。

具体地，所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的通过下述方法制备：称取配方量的聚酯单体和聚乙二醇单甲醚备用，将配方量的聚乙二醇单甲醚在60～130℃下在反应器中真空干燥2～8h，氮气置换，然后加入配方量的聚酯单体，再投入催化剂辛酸亚锡，辛酸亚锡的量占聚酯单体和聚乙二醇单甲醚总质量的0.05％～0.5wt％，接着抽真空，待聚酯单体全部熔融后，氮气置换三次，然后再抽真空，保证反应器中为负压，密闭或氮气保护，然后升温至125～150℃，反应4～20h，反应完毕，得淡黄色澄明粘稠的液体；向所述淡黄色澄明粘稠的液体中加入有机溶剂进行溶解，搅拌30～50min，然后继续加入醚类溶剂搅拌20～40min，在0～5℃下静置12～24h后，抽滤后真空干燥，即得聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物。

其中，在上述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的制备方法中，所述的有机溶剂为乙腈、甲醇、丙酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亚飒、四氢呋喃、丙酮、短链脂肪醇和乙酸乙酯中的任意一种或几种，有机溶剂的用量为每克淡黄色澄明粘稠的液体中加入0.2～1ml的有机溶剂。

其中，所述的醚类溶剂为无水冰乙醚、异丙醚、石油醚中的任意一种或几种，每克淡黄色澄明粘稠的液体加入5～10ml醚类溶剂。

优选地，步骤(2)中所述的有机溶媒选自乙腈、甲醇、丙酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亚飒、四氢呋喃、丙酮、短链脂肪醇、乙酸乙酯中的任意一种或几种，有机溶媒的用量为每克聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料中加入0.5～2g的有机溶媒。

步骤(2)中，向药膜中加入水的用量为每克聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物载体材料中加入5～25ml的水。

有益效果：本发明通过采用合适质量比的聚乙二醇单甲醚聚酯嵌段共聚物为载体材料，同时，选择合适的药物与载体材料的比例，使得制备出的康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，水分散后包封率大于90％的时间可以达到12小时以上，符合临床药品应用的实际情况，而其磷酸化的药物CA4P的水溶液对光和热不稳定，静脉注射给药后，消除半衰期仅几分钟，在体内消除很快，稳定性差，限制了临床使用。通过优选辅料载体的分子量和载药量，使得康普瑞汀更好的被载体所包裹，两者相容性好，稳定性高，显著降低了毒性。

附图说明

图1为聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物的CDCl₃ ¹HNMR图谱；

图2为聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物GPC图谱；

图3为聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物热扫描图谱；

图4为康普瑞汀聚合物胶束热扫描图谱；

图5为康普瑞汀聚合物胶束动态光散射粒径；

图6为康普瑞汀聚合物胶束的释放度检测结果。

具体实施方式

以下通过具体实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1双亲性生物降解两嵌段共聚物载体材料的制备。

配方用量：D，L-丙交酯150g，聚乙二醇单甲醚100g。

称取配方量的D，L-丙交酯和聚乙二醇单甲醚备用，将配方量的聚乙二醇单甲醚在110℃下在反应器中真空干燥2h，氮气置换，然后加入配方量的D，L-丙交酯，再投入催化剂辛酸亚锡，辛酸亚锡的量占D，L-丙交酯和聚乙二醇单甲醚总质量的0.2％，接着抽真空，待D，L-丙交酯全部熔融后，氮气置换三次，然后再抽真空，保证反应器中为负压，密闭或氮气保护，然后升温至140℃，反应6h，反应完毕，得淡黄色澄明粘稠的液体；向所述淡黄色澄明粘稠的液体中加入二氯甲烷60ml进行溶解，搅拌30min，然后继续加入2L无水冰乙醚搅拌30min，在4℃下静置24h后，抽滤后真空干燥，即得聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物。制备的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物的表征结果如图1～3所示。其中，GPC检测条件为：洗脱液THF，检测温度23℃，流速1.00ml/min。GPC检测结果如下所示：

从结果中可以看出，制备的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物是单分散的，PD值接近1.

对制备的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物进行DSC测定，DSC检测的条件为以10℃/min的速率从0℃增加至250℃。结果如图3所示。从图中可以看出，制备的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物在42.58℃处有一吸热峰，吸热值为76.614J/g。

实施例2

配方用量：D，L-丙交酯100g，乙交酯100g，聚乙二醇单甲醚100g。

称取配方量的D，L-丙交酯、乙交酯和聚乙二醇单甲醚备用，将配方量的聚乙二醇单甲醚在100℃下在反应器中真空干燥3h，氮气置换，然后加入配方量的D，L-丙交酯、乙交酯，再投入催化剂辛酸亚锡，辛酸亚锡的量占D，L-丙交酯、乙交酯和聚乙二醇单甲醚总质量的0.3％，接着抽真空，待D，L-丙交酯、乙交酯全部熔融后，氮气置换三次，然后再抽真空，保证反应器中为负压，密闭或氮气保护，然后升温至120℃，反应8h，反应完毕，得淡黄色澄明粘稠的液体；向所述淡黄色澄明粘稠的液体中加入二氯甲烷50ml进行溶解，搅拌30min，然后继续加入2L无水冰异丙醚搅拌30min，在4℃下静置24h后，抽滤后真空干燥，即得聚乙二醇单甲醚-聚乳酸乙醇酸嵌段共聚物。

实施例3

配方用量：ε-己内酯80g，聚乙二醇单甲醚100g。

称取配方量的ε-及内酯和聚乙二醇单甲醚备用，将配方量的聚乙二醇单甲醚在120℃下在反应器中真空干燥4h，氮气置换，然后加入配方量的ε-及内酯，再投入催化剂辛酸亚锡，辛酸亚锡的量占ε-己内酯和聚乙二醇单甲醚总质量的0.1％，接着抽真空，待ε-及内酯全部熔融后，氮气置换三次，然后再抽真空，保证反应器中为负压，密闭或氮气保护，然后升温至130℃，反应10h，反应完毕，得淡黄色澄明粘稠的液体；向所述淡黄色澄明粘稠的液体中加入二氯甲烷40ml进行溶解，搅拌30min，然后继续加入2L无水冰石油醚搅拌30min，在4℃下静置24h后，抽滤后真空干燥，即得聚乙二醇单甲醚-聚己内酯嵌段共聚物。

实施例4康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备。

配方用量：CA-45g(上海涵香生物科技有限公司99.8％)，实施例1制备的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物100g。

制备方法：精密称取处方量的CA-4、聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物置茄形瓶。加入乙腈200ml，超声20min使溶解。在旋转蒸发仪上50℃水浴减压蒸去乙腈，蒸发时间为90min，得到淡黄色CA-4聚合物凝胶。加水1000g溶解，得到CA-4聚合物胶束溶液。经0.22um微孔滤膜过滤，收集滤液。用液相测定滤液中含量，计算装量。分装至西林瓶中，冻干，得到康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂。

实施例5康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备。

配方用量：同实施例4。

制备方法：精密称取处方量的CA-4、聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物置茄形瓶。加入丙酮200ml，超声20min使溶解。在旋转蒸发仪上60℃水浴减压蒸去乙腈，蒸发时间为60min，得到淡黄色CA-4聚合物凝胶。加水1000g溶解，得到CA-4聚合物胶束溶液。经0.22μm微孔滤膜过滤，收集滤液。用液相测定滤液中含量，计算装量。分装至西林瓶中，冻干，得到康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂。将康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂复溶，热扫描结果如图4所示，其检测条件为以10℃每分钟的速率从0℃到100℃，结果表明，康普瑞汀与聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物相容性好，在40.72℃有一吸热单峰，吸热值为66.4931J/g，均较制备的聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物的吸热温度和吸热值低。粒径测定结果如图5所示，平均粒径在35.4nm左右。

实施例6康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备。

配方用量：CA-49g(上海涵香生物科技有限公司99.8％)，实施例3聚乙二醇单甲醚-聚己内酯嵌段共聚物100g。

制备方法：精密称取处方量的CA-4、嵌段共聚物置茄形瓶。加入甲醇200ml，超声20min使溶解。在旋转蒸发仪上55℃水浴减压蒸去乙腈，蒸发时间为90min，得到淡黄色CA-4聚合物凝胶。加水1000g溶解，得到CA-4聚合物胶束溶液。经0.22um微孔滤膜过滤，收集滤液。用液相测定滤液中含量，计算装量。分装至西林瓶中，冻干，得到康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂。

实施例7康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备。

配方用量：CA-42g(上海涵香生物科技有限公司99.8％)，实施例2聚乙二醇单甲醚-聚乳酸乙醇酸嵌段共聚物100g。

制备方法：精密称取处方量的CA-4、嵌段共聚物置茄形瓶。加入乙酸乙酯200ml，超声20min使溶解。在旋转蒸发仪上50℃水浴减压蒸去乙腈，蒸发时间为90min，得到淡黄色CA-4聚合物凝胶。加水1000g溶解，得到CA-4聚合物胶束溶液。经0.22um微孔滤膜过滤，收集滤液。用液相测定滤液中含量，计算装量。分装至西林瓶中，冻干，得到康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂。

实施例8康普瑞汀纳米聚合物胶束(CA-4聚合物胶束)冻干制剂(实施例5制备的)的性质测定。

(1)对制备的药物聚合物胶束的包封率进行测定，包封率的计算公式为：

包封率(％)＝离心后CA-4峰面积/离心前CA-4峰面积×100％。

(2)CA-4聚合物胶束的稳定性：取CA-4聚合物胶束冻干粉用0.9％氯化钠注射液复溶，25℃下放置，于0h、4h、6h、8h、12h、24h小时后分别测定其粒径。结果见表1。可见：CA-4聚合物胶束在室温下放置12小时后仍稳定，其粒径未发生明显变化，且其粒径与空白胶束粒径相当。

表1聚合物胶束溶液随时间的变化的情况

(3)聚合物胶束体外释放

实验方法：取载药胶束冻干粉末约2g，精密称定，置50mL容量瓶，用pH7.4的磷酸盐缓冲液溶解，定容。在37℃下，50rpm搅拌72h。分别在0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h，取样品2mL用高速离心机离心(10000r/min，10min)，取上清液，HPLC法测定含量，计算释放百分比。康普瑞汀聚合物胶束的释放度检测结果如图6所示。

从结果中可以看出，聚合物胶束在pH7.4磷酸盐缓冲液中在前2个小时释放10％左右，4小时释放15～20％，48小时释放70～80％，在72小时释放比较完全。

综上所述，本发明通过选择合适的药物与载体材料的比例，使得制备出的康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂水分散后包封率大于90％的时间可以达到12小时以上，符合临床药品应用的实际情况。而其磷酸化的药物CA4P的水溶液对光和热不稳定，静脉注射给药后，消除半衰期仅几分钟，在体内消除很快，稳定性差，限制了临床使用。通过优选辅料载体的分子量和载药量，使得康普瑞汀更好的被载体所包裹，两者相容性好，稳定性高，显著降低了毒性。

Claims (10)

1.一种康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，其特征在于，所述冻干制剂包括聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料和康普瑞汀，康普瑞汀包裹于所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料中，其中康普瑞汀与所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的质量比为0.01～0.15；所述的聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料为一种聚酯类单体或几种聚酯类单体的混合物与聚乙二醇单甲醚开环聚合形成的嵌段共聚物，聚乙二醇单甲醚与一种聚酯类单体或几种聚酯类单体的混合物的质量比为1∶0.55～2，其中，所述的聚酯类单体为D，L-丙交酯、乙交酯、己内酯和三甲基碳酸酯中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，其特征在于，所述的康普瑞汀与聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的质量比为0.02～0.09。

3.根据权利要求1所述的康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，其特征在于，所述聚乙二醇单甲醚的分子量为1000～20000。

4.根据权利要求1所述的康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂，其特征在于，所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料中聚乙二醇单甲醚与聚酯类单体的质量比为1∶0.9～1.8。

5.权利要求1所述的康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)合成聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料；

(2)采用薄膜水化法制备载药胶束溶液：将配方量的康普瑞汀和步骤(1)制备的聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料溶于有机溶媒中，混合摇匀，旋转蒸发除去有机溶媒，得到药物和载体材料的凝胶状药膜，然后向药膜中加入水溶解分散所述药膜，制得胶束溶液；

(3)将步骤(2)制得的胶束溶液经过滤除菌、冷冻干燥后得到康普瑞汀纳米聚合物胶束冻干制剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料的通过下述方法制备：称取配方量的聚酯单体和聚乙二醇单甲醚备用，将配方量的聚乙二醇单甲醚在60～130℃下在反应器中真空干燥2～8h，氮气置换，然后加入配方量的聚酯单体，再投入催化剂辛酸亚锡，辛酸亚锡的量占聚酯单体和聚乙二醇单甲醚总质量的0.05％～0.5wt％，接着抽真空，待聚酯单体全部熔融后，氮气置换三次，然后再抽真空，保证反应器中为负压，密闭或氮气保护，然后升温至125～150℃，反应4～20h，反应完毕，得淡黄色澄明粘稠的液体；向所述淡黄色澄明粘稠的液体中加入有机溶剂进行溶解，搅拌30～50min，然后继续加入醚类溶剂搅拌20～40min，在0～5℃下静置12～24h后，抽滤后真空干燥，即得聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为乙腈、甲醇、丙酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亚飒、四氢呋喃、丙酮、短链脂肪醇和乙酸乙酯中的任意一种或几种，有机溶剂的用量为每克淡黄色澄明粘稠的液体中加入0.2～1ml的有机溶剂。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的醚类溶剂为无水冰乙醚、异丙醚、石油醚中的任意一种或几种，加入量为每克淡黄色澄明粘稠的液体加入5～10ml醚类溶剂。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的有机溶媒选自乙腈、甲醇、丙酮、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亚飒、四氢呋喃、丙酮、短链脂肪醇、乙酸乙酯中的任意一种或几种，有机溶媒的用量为每克聚乙二醇单甲醚-聚酯嵌段共聚物载体材料中加入0.5～2g的有机溶媒。

10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，向药膜中加入水的用量为每克聚乙二醇单甲醚聚乳酸嵌段共聚物载体材料中加入5～25ml的水。