CN105246500A

CN105246500A - 基质金属蛋白酶及其用途

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Publication number: CN105246500A
Application number: CN201480030453.7A
Authority: CN
Inventors: 克劳迪娅·齐尔贝尔博格; 格雷格·B·菲尔茨
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-04-05
Filing date: 2014-04-04
Publication date: 2016-01-13
Also published as: CR20150603A; HK1221405A1; WO2014165780A2; US20160053250A1; JP2016520550A; WO2014165780A3; BR112015025390A2; AU2014248002A1; MX2015014053A; KR20160006694A; CA2908739A1; EP2981276A2; SG11201508199QA; PH12015502306A1; RU2015147878A; EP3290047A1; EP2981276A4

Abstract

基质金属蛋白酶(MMP)组合物、MMP的失活形式(例如proMMP)、片段、突变体、变异体或它们的组合。一种药物组合物包括在药物载体中的以上中的一种或多种。一种组合物，包括基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)中的至少一种，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包括：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。用途包括从组织中分离细胞，特别是干细胞，解离组织、蛋白，以及治疗各种病症。

Description

基质金属蛋白酶及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年4月5日提交的题为“基质金属蛋白酶及其用途”的美国临时申请系列号61/808,861的权益，将其全部内容通过引用并入本文中。

技术领域

实施方式涉及基质金属蛋白酶(MMP)的组合物、使用方法及治疗应用。

背景技术

已知间充质干细胞(MSC)具有自我更新和分化为间充质谱系细胞类型包括成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、腱细胞以及成肌细胞的能力，并有助于各种间充质组织的再生。MSC可以在骨髓抽吸(穿刺aspiration)程序后获得，接着在不损失其干细胞潜能的情况下体外培养，从而使它们成为用于细胞疗法的有吸引力的目标。然而，传统的骨髓获取程序对患者来说很痛苦，因为该程序会引起疼痛和发病，且常常一经处理就会生成少量的MSC。脂肪组织(如骨髓)来源于间充质并含有易于分离的支持性基质(supportivestroma)。脂肪组织代表间充质干细胞的丰富来源(ZukPA等人，Mol.Biol.Cell2002,13:4279-4295；BunnellBA等人，Methods2008,45:115-120)，并在患者最小不适的情况下提供了成体干细胞的充足的和可获取的来源。脂肪组织来源的干细胞(ADSC)可以从人抽脂物中分离，并且可以向类似骨髓干细胞(BMSC)的谱系分化。许多研究己表明人ADSC具有与BMSC相似的体外和体内特征。因此，脂肪组织可以是可由比BMSC侵入性更小的方法获得的大量自体干细胞的理想来源。

ADSC的分离主要利用由溶组织梭菌胶原蛋白酶I和II以及嗜热菌蛋白酶组成的释放酶(Liberase)HI(罗氏诊断公司(RocheDiagnostics))实现。所有释放酶制剂都含有内毒素。先前的研究己表明不同胶原蛋白酶制剂中内毒素的相对量和对分离细胞健康的影响(LinetskyE.等人，TransplantationProc.1998；30:345-346；JahrH.等人，J.Mol.Med.(Berl.)1999；77:118-120；SalamoneM等人，TransplantationProc.2010,42:2043-2048)，并且发现内毒素的存在对ADSC的生存力(viability)是有害的。内毒素污染问题的解决方案是产生用于ADSC分离的重组酶。与释放酶HI相比，使用单一胶原蛋白酶分离细胞不那么有效(WoltersG.HJ.等人，Diabetes1995；44:227-234)。一个明显的问题是胶原蛋白酶I是释放酶HI的最不稳定的成分，因为Ia形式被快速自催化降解为Ib形式。降解的胶原蛋白酶对胰岛的生存力具有不利的影响。

发明概述

本发明的实施方式涉及包含一种或多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活形式的MMP(例如proMMP)、其片段、突变体、变异体或组合的组合物。药物组合物包含在药物载体中的以上中的一种或更多种。

在实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)中的至少一种，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在优选的实施方式中，组合物包含至少两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在优选的实施方式中，组合物包含三种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在优选的实施方式中，MMP、失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)或它们的组合。

在实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。在优选的实施方式中，该组合物还包含药学上可接受的试剂(药剂，agent)、药学上可接受的盐或其前药。

在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、变异体、突变体、药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，该组合物包含三种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、变异体、突变体、药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质。在一些实施方式中，该组合物包含有效量的五种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质。

在一些实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的核酸序列，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的两种或更多种核酸序列，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，该组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种核酸序列。

在一些实施方式中，该组合物可选地包含至少一种MMP活化剂、至少一种MMP抑制剂、或它们的组合。将所述至少一种MMP活化剂、或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合可选地封装(胶囊化)用于在时间段、生理条件、温度等进行控释或缓释。在一些实施方式中，该至少一种MMP、至少一种MMP活化剂、或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合包含控释制剂。

在其他实施方式中，组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、变异体、突变体、药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。优选地，有效量的任何一种MMP或其酶原使脂肪组织分解代谢或解离。在另一个实施方式中，有效量的任何两种或更多种MMP或其proMMP使脂肪组织分解代谢或解离。

在另一个实施方式中，一种或更多种MMP或其proMMP的一种或更多种活性片段包含所述活性片段，其中所述活性片段使脂肪组织分解代谢。在一些实施方式中，MMP是活性的或失活的或它们的组合。在另一个优选的实施方式中，该组合物还包含使失活MMP活化的一种或更多种试剂。在一些实施方式中，该组合物还包含药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的盐或其前药。在实施方式中，该基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)包含：核酸序列、蛋白质、多肽、肽、或其突变体和变异体。

在另一个优选的实施方式中，从生物样品中分离干细胞的方法包括：使生物样品与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中该MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、或它们的任何组合，其中该组合物使生物样品分解代谢或解离，从而从该样品中分离干细胞。在一些实施方式中，该组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)，其中该MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-14、MMP-15、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、或它们的任何组合，其中该组合物使该生物样品分解代谢或解离，从而从该样品中分离干细胞。优选地，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含一种或更多种MMP、失活MMP或proMMP的含有所述活性片段的一种或更多种活性片段。在另一个优选的实施方式中，该方法还包括给予使失活MMP或其片段活化的一种或更多种试剂。在优选的实施方式中，该生物样品包含：上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜(basementmembrane)、基底层(basallamina)、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质(stroma)、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体、脑血管组织和液体、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、纤维组织、疤痕组织或任何器官组织。

在另一个优选的实施方式中，治疗患有与过量脂肪组织沉积有关的病症的受试者的方法包括给予受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中该组合物使脂肪组织分解代谢或解离。在一些实施方式中，治疗患有与过量脂肪组织沉积有关的病症的受试者的方法包括给予受试者包含有效量的两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中该组合物使脂肪组织解离或分解代谢。与脂肪组织有关的病症的实例包括：脂肪团、脂肪沉积、肥胖、代谢疾病、糖尿病、或它们的组合。

在另一个优选的实施方式中，减少在需要其的受试者中区域性脂肪沉积的方法包括给予所述受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的药物组合物，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中减少了该区域性脂肪沉积。在一些实施方式中，该药物组合物包含有效量的两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。在一些实施方式中，该药物组合物通过肠胃外、局部、肌内、皮下、或经皮给药途径来给予。在一些实施方式中，该药物组合物在所述区域性脂肪沉积处或接近所述区域性脂肪沉积处被给予。

在另一个优选的实施方式中，从组织中分离干细胞的方法包括：使组织与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中该组合物使组织解离，从而从该组织中分离干细胞。优选地，该组合物包含有效量的至少两种或更多种、至少三种或更多种、至少四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在优选的实施方式中，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或更多种MMP、失活MMP或proMMP的一种或更多种活性片段。在一些实施方式中，所述MMP或其片段是活性的或失活的或它们的组合。在一些优选的实施方式中，该方法还包括给予使失活的MMP或其片段活化的一种或更多种试剂。

在又一个实施方式中，治疗患有纤维性疾病的患者的方法包括给予所述患者包含治疗有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在另一个优选的实施方式中，一种表达载体编码至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在另一个优选的实施方式中，一种表达载体编码两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在另一个优选的实施方式中，一种药物组合物包含编码至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的表达载体，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在另一个优选的实施方式中，一种药物组合物包含编码两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的表达载体，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在另一个优选的实施方式中，一种时间释放制剂包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或proMMP包含：基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在另一个优选的实施方式中，时间释放制剂包含两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或proMMP包含：基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，所述时间释放制剂可选地包含至少一种MMP活化剂、MMP抑制剂或它们的组合。

在另一个优选的实施方式中，一种使组织解离的方法，包括使该组织与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在另一个优选的实施方式中，一种使组织解离的方法，包括使该组织与包含有效量的两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在优选的实施方式中，该组织包含：上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜、基底层、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体(体液)、脑血管组织和液体(体液)、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液(液体，体液)或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、纤维组织、疤痕组织或任何器官组织。

在另一个优选的实施方式中，一种使蛋白基质解离的方法，包括使蛋白基质与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在另一个优选的实施方式中，一种使蛋白基质解离的方法，包括使蛋白基质与包含有效量的两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在优选的实施方式中，所述蛋白基质包含：胶原蛋白、纤连蛋白、明胶、层粘连蛋白、蛋白聚糖(聚集蛋白聚糖，aggregan)、弹性蛋白、纤维蛋白、纤维蛋白原、或它们的组合。

在其他优选的实施方式中，一种治疗或治愈疤痕或伤口的方法包括使疤痕组织或伤口与包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)中的至少一种的组合物接触，其中所述基质金属蛋白酶(MMPs)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。优选地，所述MMP、失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)、或它们的组合。优选地，该组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。在其他优选的实施方式中，该组合物包含有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合，使疤痕组织或伤口解离或分解代谢。

在另一个优选的实施方式中，一种使纤维组织解离的方法包括：使该纤维组织与包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)中的至少一种的组合物接触，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。优选地，所述MMP、失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)、或它们的组合。优选地，该组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。在其他优选的实施方式中，该组合物包含有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合，使纤维组织解离或分解代谢。

在另一个优选的实施方式中，一种试剂盒包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或proMMP包含：基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，该试剂盒还包含至少一种MMP活化剂或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合。

从结合在此阐述的附图的以下描述，通过说明和本发明的实施例、某些实施方式，本发明的其他方面、目的和优点将变得显而易见的。附图构成了本说明书的一部分，并且包括本发明的示例性实施方式且阐明了其各种目的和特征。

附图说明

图1是示出了重组酶活化的图。在37℃下用5μg/ml糜蛋白酶(胰凝乳蛋白酶，chymotrypsin)将MMP-3活化30分钟(淡蓝色)，而MMP-12在TSB中在37℃下自活化过晚。购买活化形式的MMP-9。用5μΜ的Knight底物测试酶活性30分钟。

图2是示出了分离的MSC的形态的扫描照片。从脂肪组织新分离的并在组织培养皿中生长6-7天(0代，顶行)的以及在5代(底行)的MSC的形态未显示出LIBERASE^TM(A)、MMP-3(B)、MMP-12(C)和胶原蛋白酶I(D)分离的细胞之间的任何明显差异。

图3示出了通过流式细胞术进行的MSC免疫表型。检测由LIBERASE^TM、MMP-3和MMP-12分离的MSC表达的表面标记物。透明直方图表示用同型对照抗体染色的细胞，且填充直方图表示用特定标记物染色。在各图中示出了阳性细胞的百分比。

图4是示出通过LIBERASE^TM、MMP-3和MMP-12分离的MSC上CD73、CD90和CD105的平均荧光强度(MFI)的图。

图5是示出了被诱导为脂肪细胞的MSC的组织化学染色(油红O)的扫描照片。MSC被诱导进行脂肪形成10天。油滴在“第9天诱导的”图中呈现为黑点。

图6是示出了在通过冷冻进行酶保存后酶活化的一系列图。**所有酶活化30min。标头表示酶被冷冻的时间的量，而x轴表示测量酶活性的时间的量。

图7是示出了用于MSC阳性标记物的流式细胞检测的结果的图。***释放酶分离的MSC样品含有6％的非MSC细胞(PE-阴性对照)，而所有其他样品含有<1％的非MSC细胞。***通过在37℃下在各MMP为13Wiinsch单位/ml和400ng/ml时在旋转平台上用LIBERASE^TM培养脂肪组织30分钟来分离MSC。Lib＝LIBERASE^TM，Ml＝MMP-1，M3＝MMP-3，M8＝MMP-8，M12＝MMP-12，S1C＝MMP-1催化结构域，S3C＝MMP-3催化结构域，S12C＝MMP-12催化结构域，S19C＝MMP-19催化结构域，S25C＝MMP-25催化结构域，以及S19FL＝MMP-19。

图8是示出使用MMP和LIBERASE^TM分离干细胞获得的流式细胞检测的结果比较的图，如通过CD73强度测量的。Lib＝LIBERASE^TM，Ml＝MMP-1，M3＝MMP-3，M8＝MMP-8，M12＝MMP-12，S1C＝MMP-1催化结构域，S3C＝MMP-3催化结构域，S12C＝MMP-12催化结构域，S19C＝MMP-19催化结构域，S25C＝MMP-25催化结构域，以及S19FL＝MMP-19。

图9是示出使用MMP和LIBERASE^TM分离干细胞获得的流式细胞检测的结果比较的图，如通过CD90强度测量的。Lib＝LIBERASE^TM，Ml＝MMP-1，M3＝MMP-3，M8＝MMP-8，M12＝MMP-12，S1C＝MMP-1催化结构域，S3C＝MMP-3催化结构域，S12C＝MMP-12催化结构域，S19C＝MMP-19催化结构域，S25C＝MMP-25催化结构域，以及S19FL＝MMP-19。

图10是示出了使用MMP和LIBERASE^TM分离干细胞获得的流式细胞检测的结果比较的图，如通过CD105强度测量的。Lib＝LIBERASE^TM，Ml＝MMP-1，M3＝MMP-3，M8＝MMP-8，M12＝MMP-12，SIC＝MMP-1催化结构域，S3C＝MMP-3催化结构域，S12C＝MMP-12催化结构域，S19C＝MMP-19催化结构域，S25C＝MMP-25催化结构域，以及S19FL＝MMP-19。

图11是示出了使用MMP-12催化结构域分离的MSC可以被诱导分化为各种谱系(脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞)的显微照片扫描图。

具体实施方式

ADSC的分离主要用由溶组织梭菌胶原蛋白酶(Clostridiumhistolyticumcollagenase)I和II以及嗜热菌蛋白酶组成的LIBERASE^TM(罗氏诊断公司(RocheDiagnostics))实现。来自溶组织梭菌(Clostridiumhistolyticum)的粗制剂不仅含有一些胶原蛋白酶，而且还含有巯基蛋白酶(sulhydrylprotease)、梭菌蛋白酶、胰蛋白样酶和氨基肽酶。在LIBERASE^TM酶生产过程中，通过除去原材料中存在的相当大量的内毒素的过程将胶原蛋白酶同工酶纯化。与LIBERASE^TM的内毒素水平相比，存在较广范围的传统胶原蛋白酶制剂的内毒素污染。然而，所有的LIBERASE^TM制剂都含有内毒素。因此，与来源无关，来自细菌金(bacterialbullion)的所有纯化胶原蛋白酶和中性蛋白酶都被内毒素污染。先前的研究己表明不同胶原蛋白酶制剂中内毒素的相对量和对分离细胞健康的影响，内毒素的存在对ADSC的生存力是有害的。

本发明的优点是多重的(许多倍的)，因为在没有最高质量的结缔组织降解酶的情况下，事实上不可能释放具有良好和稳定增殖能力的活ADSC。细胞移植的成功与分离的干细胞、培养的细胞以及制备的同种异体移植物(allograft)的质量成正比。本文中具体实施的组合物和方法将对公共健康具有巨大的益处。第一，实现了整个MSC分离和移植技术领域中的突破。第二，收集具有长时间预期寿命的最高质量的MSC。第三，通过消除毒性，提供了用于脂肪组织处理和MSC分离的标准规程。第四，将提供用于组织解离实践(不仅用于脂肪组织解离)的高度纯化的新重组MMP-混合物(MMP-cocktail)，取代微生物来源的现有胶原蛋白酶并成为新的标准。第五，组合物可以用于治疗方法和整容(cosmetic)程序中。根据本说明书，其他益处将是显而易见的。

优选的实施方式的以下描述本质上仅是示例性的，并且决不旨在限制本发明、其应用或用途。在没有所提出的理论方面的情况下，也可以实践本发明的实施方式。而且，虽然提出了理论方面，但应理解申请人不希望受到所提出理论的限制。

应当理解，阐述了大量的具体细节、关系及方法以提供对本发明的充分理解。然而，相关领域的普通技术人员将容易地认识到在没有一种或更多种具体细节或有其他方法的情况下，可以实践本发明。本发明不受行动或事件的说明顺序的限制，因为一些行动可以以不同的顺序和/或与其他行动或事件同时发生。此外，并非所有说明的行动或事件需要实施与本发明一致的方法论。

本文中公开的所有基因、基因名称和基因产物旨在与来自本文中公开的组合物和方法适用的任何物种的同源物对应。因此，术语包括但不限于来自人类和小鼠的基因和基因产物。要理解的是，当公开了来自特定物种的基因或基因产物时，该公开内容旨在仅是示例性的，且除非其出现的上下文中有明确说明，不应被理解为一种限制。因此，例如，对于本文中公开的在一些实施方式中涉及哺乳动物核酸和氨基酸序列的基因或基因产物，旨在包含来自包括但不限于其他哺乳动物、鱼、两栖动物、爬行动物和鸟类的其他动物的同源和/或直系同源基因和基因产物。在优选的实施方式中，基因、核酸序列、氨基酸序列、肽、多肽和蛋白是人类的。

除非另有定义，否则本文中使用的所有术语(包括技术和科学术语)具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意思。还将理解的是，术语诸如常用辞典中定义的那些，应被理解为具有与相关领域情况中其意思一致的意思，且除非本文中明确地这样定义，否则将不会按理想化的或过于正式的意义来理解。

定义

本文中使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的，且并不旨在限制本发明。如本文中使用的，除非上下文另有明确说明，否则单数形式“一种”、“一个”和“该”也旨在包括复数形式。此外，就在具体实施方式和/或权利要求书中使用的术语“包括(including)”、“包含(includes)”、“具有(having)”、“有(has)”、“具有(含有，with)”或其变形而言，这样的术语旨在以与术语“包含(comprising)”相似的方式是包括性的。

如本文中使用的，术语“包括(comprising)”、“包含(comprise)”或“被包括(comprised)及其变形，根据限定或描述的条目(物品，item)、组合物、装置、方法、过程、系统等的元素，意为是包含性的或开放性的，允许另外的要素，从而表明所限定或描述的条目、组合物、装置、方法、过程、系统等包括那些指定的要素—或视情况包括其等同物—并且可以包括其他要素且仍落入所限定的条目、组合物、装置、方法、过程、系统等的范围/定义内。

术语“约”或“大约”指的是在如由本领域普通技术人员所确定的具体值的可接受误差范围内，其部分取决于值是如何被测量或确定的，即测量系统的限制。例如，“约”可以指本领域的每次实践在1或大于1的标准偏差内。可替换地，“约”可以指给定值的可达20％，优选地可达10％，更优选地可达5％以及更优选地又可达1％的范围。可替换地，特别是对于生物系统或过程，所述术语可指在值的数量级内，优选地在5倍内，并且更优选地在2倍内。在申请和权利要求书中描述了具体值的情况下，除非另有说明，否则应假设术语“约”指在对于具体值的可接受误差范围内。

“可选的”或“可选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能未发生，且说明书包括其中所述事件或情况发生的例子和所述事件或情况未发生的例子。

除非另有说明，否则如本文中使用的，术语“肽”、“多肽”或“蛋白”在本文中可互换地使用，并且指的是不同尺寸的氨基酸的聚合物，例如MMP的片段。这些术语不暗示特定长度的氨基酸聚合物。因此，例如，术语寡肽、蛋白和酶包括在不管是使用重组技术、化学或酶合成生产的还是天然存在的多肽或肽的定义内。该术语也包括诸如通过糖基化、乙酰化、磷酸化等己被修饰或衍生的多肽。

如本文中使用的，“核酸”或“核酸序列”或“cDNA”指的是己从以天然存在的状态位于其侧面的序列分离的核酸段或片段，例如，己从通常与片段相邻的序列例如与其天然存在的基因组中的片段相邻的序列移除的DNA片段，并且指的是己移除一种或更多种内含子的核酸序列。所述术语还适用于己基本上由天然附在核酸上的其他成分，例如细胞中天然伴随的RNA或DNA或蛋白纯化而来的核酸。因此，所述术语包括例如并入载体，并入自主复制质粒或病毒，或并入原核生物或真核生物的基因组DNA的重组DNA，或独立于其他序列作为单个分子(例如，作为通过PCR或限制性酶切(restrictionenzymedigestion)产生的cDNA或基因组或cDNA片段)存在的重组DNA。其还包括重组DNA，例如，编码其他多肽序列的杂种基因的一部分的DNA。

“多核苷酸”指的是单链或平行和反平行链的核酸。因此，多核苷酸可以是单链的或双链的核酸。

术语“变异体”，当用在多核苷酸序列的情况中，可以涵盖与野生型基因有关的多核苷酸序列。该定义也可包括，例如，“等位”、“剪接”、“物种”或“多态”变异体。剪接变异体可与参考分子具有明显的同一性，但由于在mRNA处理期间外显子的选择性剪接，通常将具有较多或较少数目的多核苷酸。相应的多肽可具有其他功能结构域或没有结构域。物种变异体是使一种物种变异为另一种物种的多核苷酸序列。本发明中，野生型基因产物的变异体具有特定实用性。变异体可以由核酸序列中的至少一种突变产生，且可导致改变的mRNA或导致其结构或功能可能改变或可能未改变的多肽。任何给定的天然或重组基因可具有零种、一种或更多种等位基因形式。产生变异体的常见突变变化通常归因于核苷酸的天然缺失、添加或置换。这些类型变化中的每一种可在给定的序列中单独地发生或与其他变化组合发生一次或多次。

“编码”指的是多核苷酸(如基因、cDNA或mRNA)中的核苷酸特定序列的内在特性，作为用于在具有核苷酸(即rRNA、tRNA和mRNA)的限定序列或氨基酸的限定序列的生物过程中合成其他聚合物和大分子的模板，以及由其产生的生物特性。因此，一种基因编码蛋白，如果对应于该基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白。其核苷酸序列与mRNA序列相同且通常在序列表中提供的编码链和用作用于基因或cDNA转录的模板的非编码链都可以指“编码”该蛋白或该基因或cDNA的其他产物。“编码”或“被编码”、“编码”，对于特定核酸，是指包含用于翻译为特定蛋白的信息。编码蛋白的核酸可包含核酸的翻译区内的非翻译序列(例如，内含子)，或可以缺少这样的间插非翻译序列(例如，如cDNA中的)。通过使用密码子来规定碥码蛋白的信息。典型地，使用“通用(遍在)”基因编码由核酸来编码氨基酸序列。

除非另有说明，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括作为彼此退化变体(version)和编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白和RNA的核苷酸序列可包括内含子。

如本文中使用的，“proMMP”用于指由于表达基质金属蛋白酶(又称为基质金属蛋白酶(metalloprotease))的原(pro)形式而获得的蛋白。在该术语的意思内，将理解到，proMMP涵盖由proMMP基因或cDNA，包括缺失、置换和截短的其突变体，以及其修饰形式所编码的所有蛋白。如本文中使用的，术语“proMMP”也包括还未完全处理为活性形式的proMMP的部分处理形式。

如本文中使用的，“基质金属蛋白酶”(MMP)，例如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28，指的是具有任何MMP活性的任何蛋白、肽或多肽。术语“MMP”也指编码具有任何MMP活性的任何MMP-蛋白、肽或多肽的核酸序列。术语“MMP”也指包括编码序列的其他MMP，如其他MMP同型、突变体MMP基因、MMP基因的剪接变异体以及MMP基因多态型。因此，例如MMP-12也指包括编码序列的其他MMP-12，如其他MMP-12同型、突变体MMP-12基因、MMP-12基因的剪接变异体以及MMP-12基因多态型。

如本文中使用的，术语“活化”指的是发生将基质金属蛋白酶的失活原形式(proMMP)变为基质金属蛋白酶(MMP)的活性形式的处理(过程)。“MMP活化剂”是将其特异性的MMP活化或转化为活性形式的分子。相反，“MMP抑制剂”是压抑或抑制或致使其特异性作用的MMP失活的分子。

如本文中使用的，术语“活性”或“活性形式”指的是基质金属蛋白酶(MMP)表现的活性，如根据标准技术在体内或在体外测定的。术语“活性片段”含有赋予活性的分子的活性位点或片段。这样的活性的实例包括但不限于直接活性，如细胞外基质成分(例如胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白等)的催化活性或与配体或其类似物结合的能力，转录活性的变化或通过MMP-活性直接或间接调节的基因或基因产物水平的变化，用于其表达可直接或间接通过MMP-活性影响的另一种蛋白的酶活性的变化，或由MMP-活性的变化导致的细胞生理学的功能性变化。

如本文中使用的，术语“活性位点”指的是直接涉及动物组织(例如动物脂肪)的催化活性的活性MMP或活性MMP的结构基序上的区域。在优选的实施方式中，动物是人。含有具有与所表征的基质金属蛋白酶的多肽序列具有至少90％同一性并且更优选地95％同一性的氨基酸序列的多肽旨在涵盖密切相关形式的MMP，如包括微突变或其他变化但保留酶活性的那些。相似性指的是结构相似性，且通常通过将候选多肽的残基与感兴趣的序列对齐来确定。例如，利用MMP-12，候选MMP-12酶氨基酸序列与MMP-12的已知序列对齐，以优化沿它们的序列长度的相同氨基酸的数量。在进行对齐中允许任一个序列或两者中的缺口(gap)，以优化相同氨基酸序列的数量，但各序列中氨基酸应保持其适合的顺序。优选地，使用BLAST2检索算法的Blastp程序比较两种氨基酸序列，如Tatusova等人(FEMSMicrobiol.Lett,174:247-250(1999))所描述的。

如本文中使用的，术语“核酸序列”、“多核苷酸”和“基因”在整个本说明书中可互换使用，并包括互补DNA(cDNA)、天然和/或修饰的单体或连接物(linkage)的线性或环状寡聚物或聚合物，包括脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、其取代的和α-异头形式、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、硫代磷酸酯(磷硫酰，phosphorothioate)、甲基膦酸酯等。

核酸序列可以是“嵌合的”，即由不同的区域组成。在本发明的上下文中，“嵌合的”化合物是含有两种或更多种化学区域例如一个或多个DNA区、一个或多个RNA区、一个或多个PNA区等的寡核苷酸。各化学区域由至少一种单体单元即核苷酸组成。这些序列典型地包含至少一种区域，在所述区域中将该序列修饰以便显示出一种或更多种所需的特性。

如本文中使用的，术语“单体”典型地指用于形成大小范围从几个单体单元例如从约3-4个单体单元到约几百个单位单元的寡核苷酸的由磷酸二酯键连接的单体或其类似物。磷酸二酯连接的类似物包括：硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、硒代磷酸酯、氨基磷酸酯等，如下文更充分地描述的。

在本申请的上下文中，术语“核酸碱基(核碱基)”涵盖了天然存在的核酸碱基以及非天然存在的核酸碱基。对于本领域技术人员来说，应当清楚的是之前己被认为是“非天然存在的”各种核酸碱基随后己经在自然界中发现。因此，“核酸碱基”不仅包括已知的嘌呤和嘧啶杂环，而且还包括其杂环类似物和互变异构体。核酸碱基的说明性实例是腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶、嘌呤、黄嘌呤、二氨基嘌呤、8-氧代-N6-甲基腺嘌呤、7-脱氮黄嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、N4,N4-桥亚乙基胞嘧啶(N4,N4-ethanocytosin)、N6,N6-桥亚乙基-2,6-二氨基嘌呤、5-甲基胞嘧啶、5-(C3-C6)-炔基胞嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、假异尿嘧啶(pseudoisocytosine)、2-羟基-5-甲基-4-三唑并吡啶、异胞嘧啶、异鸟嘌呤、次黄苷和在Benner等人的美国专利号5,432,272中描述的“非天然存在的”核酸碱基。术语“核酸碱基”旨在涵盖每个和所有的这些实例以及其类似物和互变异构体。特别感兴趣的核酸碱基是腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶，其被认为是与人类中治疗和诊断应用有关的天然存在的核酸碱基。

如本文中使用的，“核苷酸”包括天然核苷酸，其包括2'-脱氧和2'-羟基形式，例如，如在Kornberg和Baker的DNAReplication，2ndEd(DNA复制，第二版)(Freeman,SanFrancisco,1992)中描述的。

关于核苷酸的“类似物”包括具有修饰的碱基部分和/或修饰的糖部分的合成核苷酸，例如，通常由Scheit,NucleotideAnalogs(核苷酸类似物),JohnWiley,NewYork,1980；Freier&Altmann,Nucl.Acid.Res.,1997,25(22),4429-4443,Toulmé,J.J.,NatureBiotechnology19:17-18(2001)；ManoharanM.,BiochemicaetBiophysicaActa1489:117-139(1999)；FreierS.M.,NucleicAcidResearch,25:4429-4443(1997),Uhlman,E.,DrugDiscovery&Development，3:203-213(2000),HerdewinP.,Antisense&NucleicAcidDrugDev.,10:297-310(2000),)；2'-O,3'-C-linked[3.2.0]bicycloarabinonucleosides(2'-O,3'-C-连接的[3.2.0]二环阿拉伯糖核苷酸)(参见例如N.KChristiensen.等人,J.Am.Chem.Soc.,120:5458-5463(1998)所描述的。这样的类似物包括被设计成增强结合性能例如双链或三链稳定性、特异性等的合成核苷酸。

术语“变异体”，当用在多核苷酸序列的情况中，可以涵盖与野生型基因有关的多核苷酸序列。该定义也可以包括，例如“等位”、“剪接”、“物种”或“多态的”变异体。剪接变异体可以与参考分子具有明显的同一性，但由于在mRNA加工期间外显子的选择性剪接，通常将具有较多或较少数量的多核苷酸。相应的多肽可具有其他功能结构域或没有结构域。物种变异体是从一种物种变为另一种物种的多核苷酸序列。本发明中，野生型靶基因产物的变异体具有特定实用性。变异体可以由核酸序列中的至少一种突变产生，并且可导致改变的mRNA或导致其结构或功能可能改变或可能未改变的多肽。任何给定的天然或重组基因可以具有零种、一种或更多种等位基因形式。产生变异体的常见突变变化通常归因于核苷酸的天然缺失、添加或置换。这些类型变化中的每一种可在给定序列中单独地或与其他变化组合发生一次或多次。

所得的多肽通常将相对于彼此具有明显的氨基酸同一性。多态变异体是给定物种的个体之间特定基因的多核苷酸序列中的变异。多态变异体还可以包含“单核苷酸多态性”(SNP)或其中多核苷酸序列变化一个碱基的单碱基突变。SNP的存在可以指示例如具有疾病状态倾向的一定群体，即易感性对抗性。

如本文中使用的，多肽的“变异体”指的是由一种或更多种氨基酸残基改变的氨基酸序列。变异体可具有“保守性”改变，其中取代的氨基酸具有相似的结构或化学性质(例如，用异亮氨酸替换亮氨酸)。更少见地，变异体可具有“非保守性”改变(例如，用色氨酸替换甘氨酸)。类似的微变异也可包括氨基酸缺失或插入，或两者。可使用本领域中熟知的计算机程序例如LASERGENE软件(DNASTAR)发现确定哪些氨基酸残基可以被取代、插入或删除而不会消除生物活性的指导。

如本文中使用的，术语“组织”指的是细胞与它们的形成患者的结构或其他材料中的一种的细胞外物质一起的聚集体。如本文中使用的，术语“组织”旨在包括身体的任何组织，包括但不限于毛细管、血管、肌肉和器官组织、伤口组织、肿瘤组织、骨组织或软骨组织。而且，如本文中使用的术语“组织”还可指单个细胞。

在本发明的上下文中，“基质血管部分(SVF)”是指从脂肪组织分离的细胞，并且指在通过用本文中具体化的组合物治疗脂肪组织来除去大部分成熟脂肪细胞后剩下的细胞群。

“脂肪衍生的基质干细胞”是指从SVF获得的间充质干细胞，且也可被称为“脂肪衍生的干细胞(ASC)”、“脂肪衍生的干细胞(ADSC)”、“脂肪干细胞”等。本发明中的脂肪衍生的基质干细胞可以通过抽脂术或外科手术切除从人皮下静脉脂肪组织分离，但并不特别地限制于此。

“骨髓源性祖细胞(BMDC)”或“骨髓衍生的干细胞”指的是具有自我更新持续活性机制的原始干细胞。该定义中包括的是作为全能的、多能的和是前体的干细胞。“前体细胞”可以是能够分化成更成熟细胞的细胞分化途径中的任何细胞。因此，术语“前体细胞群”指的是能发展成更成熟细胞的细胞群。前体细胞群可以包含全能的细胞、多能的细胞以及是限制的干细胞谱系的细胞(即能够发展成少于所有造血谱系的细胞，或能够发展成例如仅红细胞谱系的细胞)。如本文中使用的，术语“全能细胞”指的是能发展成所有谱系细胞的细胞。类似地，术语“全能细胞群”指的是能发展成所有谱系细胞的细胞的组合(组合物)。同样地，如本文中使用的，术语“多能细胞”指的是能发展成各种(虽然不是所有的)谱系和至少能发展成所有造血谱系(例如，淋巴的、红细胞的和血小板的谱系)的细胞。骨髓衍生的干细胞含有两种良好表征类型的干细胞。间充质干细胞(MSC)正常形成软骨细胞和成骨细胞。造血干细胞(HSC)为中胚层起源，其正常生成血液和免疫系统(例如，红细胞、粒细胞/巨吞噬细胞、巨核细胞和淋巴的谱系)的细胞。另外，也己示出了造血干细胞具有分化为肝的细胞(包括肝细胞、胆管细胞)、肺细胞、肾细胞(例如，肾小管上皮细胞和肾实质)、肠胃道细胞、骨骼肌纤维细胞、CNS星形胶质细胞(astrocyte)、浦肯野(Purkinje)神经元细胞、心肌的细胞(例如心肌细胞)、内皮细胞和皮肤细胞的潜力。如本文中使用的，术语“干细胞”是通用术语，并意在包含所有类型的干细胞。

“分离”细胞或干细胞指的是从组织样品中除去细胞或干细胞并与不是组织的所需细胞或干细胞的其他细胞分开的过程。分离的干细胞通常将没有被其他细胞类型污染，并且通常将具有增殖和分化以产生与其分离自的组织的成熟细胞的能力。然而，当处理干细胞的收集物，例如，干细胞的培养物时，要理解的是，实际上不可能获得100％纯度的干细胞的收集物。因此，在存在不干扰用于分析或产生其他分化的细胞类型的干细胞使用的小部分其他细胞类型的情况下，可以存在分离的干细胞。分离的干细胞通常将为至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、98％或99％纯的。优选地，根据本发明的分离的干细胞将为至少98％或至少99％纯的。干细胞可以从任何组织分离。在一些实施方式中，该组织是脂肪组织。

“生物样品”包括固体(例如组织、器官)和体液样品。本发明中使用的生物样品可包括细胞、蛋白质或细胞的膜提取物、血液或生物体液如腹水液或脑液(例如，脑脊髓液)。固体生物样品的实例包括但不限于取自中枢神经系统、骨、乳房、肾、子宫颈、子宫内膜、头/颈、胆囊、腮腺、前列腺、脑下垂体、肌肉、食管、胃、小肠、结肠、肝、脾、胰腺、甲状腺、心脏、肺、膀胱、动物脂肪、淋巴结、子宫、卵巢、肾上腺、睾丸、扁桃体和胸腺的组织的样品。“体液样品”的实例包括但不限于血液、血清、精子、前列腺液、精液、尿液、唾液、痰、粘液、骨髓、淋巴液和眼泪。

术语“移植物”包括可以引发接受受试哺乳动物中的免疫应答的任何细胞、器官、器官系统或组织。一般而言，因此，移植物包括同种异体移植物或异种移植细胞、器官、器官系统或组织。同种异体移植物指的是从与受体相同的物种的成员获得的移植物(细胞、器官、器官系统或组织)。异种移植物指的是从与受体不同的物种的成员获得的移植物(细胞、器官、器官系统或组织)。

“治疗(处理)”是为了预防紊乱(病症)的发展或改变紊乱的病理或症状而进行的干预。因此，“治疗”指的是治疗性治疗和预防性或防止性措施。“治疗”也可被指定为姑息治疗(安宁治疗，palliativecare)。需要治疗的那些个体包括己患有紊乱的那些个体以及紊乱待预防的那些个体。因此，一种状态、紊乱或病症的“治疗(treating)”或“处理(治疗，treatment)”包括：(1)预防或者延迟在可能患有或易患上所述状态、紊乱或病症但还未经历或显示出该状态、紊乱或病症的临床或亚临床症状的人或其他哺乳动物中发展的状态、紊乱或病症的临床症状的出现；(2)抑制该状态、疾病或病症，即阻止、降低或延迟疾病或其复发症(在维持治疗的情况中)或其至少一种临床或亚临床征状的发展；或(3)缓解疾病，即引起该状况、紊乱或者病症或其临床或亚临床症状中的至少一种的消退。对待治疗个体的益处是统计学上显著的或患者或医师至少察觉不出的。

术语“患者”或“个体”或“受试者”在本文中可互换使用，并且指的是待治疗的哺乳动物受试者，其中人类患者是优选的。在一些情况中，本发明的方法发现用于实验动物、用于兽医应用以及用于疾病的动物模型的开发，包括但不限于包括小鼠、大鼠和仓鼠的啮齿动物以及灵长类动物。

如本文中定义的，化合物或试剂的“治疗有效”量(即，有效剂量)指的是足以产生治疗上(例如，临床上)期望结果的量。该组合物可以按每天一次或多次或每周一次或多次来给药；包括每隔一天一次。技术人员将意识到，某些因素可以影响有效治疗受试者所需的剂量和时间，包括但不限于疾病或紊乱的严重程度、之前治疗、受试者的总体健康和/或年龄以及存在的其他疾病。此外，用治疗有效量的本发明的化合物治疗受试者可以包括单次治疗或一系列治疗。

如本文中限定的，化合物或试剂的“有效”量(即，有效剂量)指的是足以产生(例如，临床上)期望结果的量。在一些实施方式中，所期望的结果是脂肪组织或脂肪沉积的降解。在其他实施方式中，所期望的结果是从各种组织、骨髓、器官分离干细胞。在其他实施方式中，所期望的结果是来自胰腺的胰岛分离。在其他实施方式中，所期望的结果是从人卵巢组织分离活卵泡。在其他实施方式中，所期望的结果是组织解离以分离各种细胞类型，包括心肌细胞、成纤维细胞和树突细胞。

如本文中使用的术语“药学上可接受的前药”指的是通过本发明的方法形成的MMP化合物的那些前药，其在合理的医学判断范围内适合用于与具有异常毒性、刺激性、过敏性应答等的人类和低等动物的组织接触，符合合理的利益/风险比，并且对它们的预期用途有效，以及在可能的情况下，是本发明的化合物的两性离子形式。如本文中使用的“前药”指的是通过代谢手段(例如通过水解)在体内可转化以提供由本发明规则所限定的任何化合物的化合物。各种形式的前药在本领域中是已知的，例如，如在Bundgaard,(ed.),DesignofProdrugs,Elsevier(1985)；Widder等人(ed.),MethodsinEnzymology,vol.4,AcademicPress(1985)；Krogsgaard-Larsen等人,(ed)."DesignandApplicationofProdrugs,TextbookofDrugDesignandDevelopment,Chapter5,113-191(1991)；Bundgaard等人,JournalofDrugDeliverReviews,8:1-38(1992)；Bundgaard,J.ofPharmaceuticalSciences,77:285etseq.(1988)；HiguchiandStella(eds.)ProdrugsasNovelDrugDeliverySystems,AmericanChemicalSociety(1975)；以及BernardTesta&JoachimMayer,"HydrolysisInDrugAndProdrugMetabolism:Chemistry,BiochemistryAndEnzymology,"JohnWileyandSons,Ltd.(2002)中所讨论的。

如本文中使用的，术语“药学上可接受的盐”指的是通过本发明的方法形成的化合物的那些盐，其在合理的医学判断范围内，适用于与没有异常毒性、刺激性、过敏性应答等的人类和低等动物的组织接触，且符合合理的利益/风险比。药学上可接受的盐是本领域中众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.PharmaceuticalSciences,66:1-19(1977)中描述了药学上可接受的盐。该盐在本发明分子的最终分离和纯化过程中可以原位制备，或通过使游离碱基官能团与合适的有机酸反应来分别制备。药学上可接受的盐的实例包括但不限于无毒酸加成盐，即利用无机酸或利用有机酸或通过使用本领域中使用的其他方法如离子交换而形成的氨基的盐，该无机酸为诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，该有机酸为诸如乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸。其他药学上可接受的盐包括但不限于己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱性或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。其他药学上可接受的盐包括，适当时，无毒铵、季铵以及使用抗衡离子如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、具有1-6个碳原子的烷基、磺酸盐和芳基磺酸盐形成的胺阳离子。

如本文中使用的，术语“试剂盒”指的是用于递送材料的任何递送系统。术语“试剂盒”包括用于研究和临床应用的试剂盒。在反应测定的情况下，这样的递送系统包括允许从一个位置到另一个位置储存、运输或递送反应试剂(例如，在适合的容器中的寡核苷酸、酶等)和/或支持材料(例如，缓冲液、用于进行测定的书面说明等)的系统。例如，试剂盒包括含有相关反应试剂和/或支持材料的一种或更多种外壳(例如，盒子)。如本文中使用的，术语“分部式试剂盒(碎片化试剂盒，fragmentedkit)”是指包含两个或多个分开的容器的递送系统，每个容器容纳全部试剂盒成分的子部分(subportion)。可以一起或分开地将该容器递送至期望的受体。例如，第一容器可以容纳用于测定的酶，而第二容器容纳寡核苷酸。术语“分部式试剂盒”旨在涵盖容纳联邦食品、药品和化妆品法案(FederalFood,Drug,andCosmeticAct)的条款520(e)下监管的分析物特异性试剂(Analytespecificreagents)(ASR’s)的试剂盒，但并不限于此。事实上，在术语“分部式试剂盒”中包括包含各容纳全部试剂盒成分的子部分的两个或多个分开的容器的任何递送系统。相反，“组合式试剂盒(combinedkit)”是指在单个容器中(例如，在容纳各所需成分的单个盒子中)容纳反应测定的所有成分的递送系统。术语”试剂盒”包括分部式试剂盒和组合式试剂盒两者。

通用技术

对于在本发明的实践中有用的通用技术的进一步详细说明，实践者可参考细胞生物学、组织培养、胚胎学和生理学的标准教科书和综述。

对于组织培养和胚胎干细胞，读者可能希望参考畸胎瘤和胚胎干细胞：Apracticalapproach(E.J.Robertson,ed.,IRLPressLtd.1987)；GuidetoTechniquesinMouseDevelopment(P.M.Wasserman等人eds.,AcademicPress1993)；EmbryonicStemCellDifferentiationinvitro(体外胚胎干细胞分化)(M.V.Wiles,Meth.Enzymol.225:900,1993)；PropertiesandusesofEmbryonicStemCells:ProspectsforApplicationtoHumanBiologyandGeneTherapy(胚胎干细胞的性质和用途：用于人生物学和基因治疗应用的前景)(P.D.Rathjen等人,Reprod.Fertil.Dev.10:31,1998)。

分子和细胞生物化学中的通用方法可在这种标准教科书如MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆：实验手册),3rdEd.(Sambrook等人.,HarborLaboratoryPress2001)；ShortProtocolsinMolecularBiology,4thEd.(Ausubel等人eds.,JohnWiley&Sons1999)；ProteinMethods(蛋白质方法)(Bollag等人,JohnWiley&Sons1996)；NonviralVectorsforGeneTherapy(Wagner等人eds.,AcademicPress1999)；ViralVectors(Kaplift&Loewyeds.,AcademicPress1995)；ImmunologyMethodsManual(免疫方法手册)(I.Lefkovitsed.,AcademicPress1997)；以及CellandTissueCulture:LaboratoryProceduresinBiotechnology(细胞和组织培养：生物技术实验室程序)(Doyle&Griffiths,JohnWiley&Sons1998)中找到。本发明中涉及的用于基因操作的试剂、克隆载体和试剂盒可从商业供应商如BioRad、Stratagene、Invitrogen、Sigma-Aldrich和ClonTech获得。

组合物

基质金属蛋白酶(MMP)是消化细胞外基质蛋白如胶原蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白的结构上相关的锌依赖性蛋白水解酶的家族。已识别了至少22种不同哺乳动物MMP-蛋白，且基于底物特异性和域结构对其分组。MMP的酶活性不仅通过其在各种细胞类型中的基因表达，而且还通过活化其失活酶原前体(proMMP)和由内源抑制剂和金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)抑制来精确控制。酶在正常自我平衡组织重塑事件中起关键作用，但也被认为在对许多结缔组织疾病如关节炎、牙周炎和组织溃疡以及癌细胞入侵和转移中的基质的病理破坏中起关键作用。

本发明的实施方式涉及包含一种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)的组合物。MMP可以是活化状态或处于失活形式，如例如，酶原形式(proMMP)，或含有活性片段。本文中具体实施的各种组合物中的MMP包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP。在其他实施方式中，本文中具体实施的各种组合物中的MMP包含至少两种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP。在其他实施方式中，在本文中具体实施的各种组合物中的MMP包含至少三种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP。在其他实施方式中，本文中具体实施的各种组合物中的MMP包含至少四种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP。在其他实施方式中，本文中具体实施的各种组合物中的MMP包含至少五种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP。在其他实施方式中，本文中具体实施的各种组合物中的MMP包含至少六种、七种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP。如上所讨论的，除非另有说明，否则本文中具体实施的各种组合物中的术语“MMP”或“proMMP”包含核酸序列，氨基酸序列，活性片段，合成片段，包括缺失、置换和截短的突变体，以及其修饰形式，衍生物，变异体，同源和/或直向同源基因、cDNA、RNA、嵌合分子、同型基因、突变基因、基因剪接变异体、基因多态型、或它们的任何组合。本文中具体实施的分子包括其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

可希望首先降解某些组织成分，例如，胶原蛋白。在实施方式中，该组合物包含活性和失活形式的MMP。例如，一种MMP可以是活性形式，第二种MMP可以是失活形式。可以在任何时间通过加入活化剂(例如酶)使失活的MMP被活化。因此，可以首先降解一种组织成分，接着降解另一种等。

在一个优选的实施方式中，组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一个优选的实施方式中，组合物包含有效量的至少两种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一个优选的实施方式中，组合物包含有效量的至少三种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一个优选的实施方式中，组合物包含有效量的至少四种、至少五种、至少六种或七种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在优选的实施方式中，所述MMP、失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)、或它们的组合。

在其他实施方式中，该组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在其他实施方式中，该组合物包含有效量的至少两种、至少三种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一个优选的实施方式中，组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：药物组合物中的MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在一个优选的实施方式中，组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：药物组合物中的MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

在一些实施方式中，有效量的任一种MMP或其酶原(即proMMP)使脂肪组织分解代谢。在其他实施方式中，有效量的任何两种或更多种MMP或其proMMP使脂肪组织解离或分解代谢。

脂肪组织细胞外基质(ECM)己被描述为“疏松结缔组织”。牛脂肪组织ECM的免疫荧光染色显示出I型、III型、IV型、V型和VI型胶原蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白。更详细的蛋白质组学分析己示出基于物种的一些变异，但胶原蛋白是一致的。核心蛋白聚糖(decorin)或其他蛋白聚糖在脂肪组织ECM中可能很重要。人脂肪组织ECM的量化示出了酸可溶性胶原蛋白和弹性蛋白为显著水平，但硫酸化的葡萄胺聚糖(glycoaminoglycan)(GAGs)为低水平。基质金属蛋白酶(MMP)是能够催化本质上所有ECM成分(包括胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白和弹性蛋白)降解的酶的家族。MMP的广谱抑制损害脂肪组织生长，而MMP-3和MMP-11缺陷小鼠比野生型小鼠发展更多的脂肪组织。这表明MMP参与脂肪组织重塑。

考虑到脂肪组织ECM组合物(组成)，在一些实施方式中，该组合物包含用于有效消化ECM和释放ADSC的MMP的混合物。例如，可能需要MMP-1或MMP-8(对于I型和III型胶原蛋白)、MMP-3或MMP-19(对于IV型胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白)和MMP-2或MMP-9(对于IV型和V型胶原蛋白)的组合。如果希望VI型胶原蛋白的消化，则可以使用MMP-11，而弹性蛋白消化需要MMP-12。

MMP和它们的特异性底物的实例包括但不限于：MMP-1，底物包括胶原蛋白I、II、III、VII、VIII、X、明胶。MMP-2，底物包括明胶、胶原蛋白I、II、III、IV、VII、X。MMP-3，底物包括胶原蛋白II、IV、IX、X、XI、明胶。MMP-7，底物包括：纤连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白IV、明胶。MMP-8，底物包括胶原蛋白I、II、III、VII、VIII、X、聚集蛋白聚糖、明胶。MMP-9，底物包括明胶、胶原蛋白IV、V。MMP-10，底物包括胶原蛋白IV、层粘连蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白。MMP-11，底物包括胶原蛋白IV、纤连蛋白、层粘连蛋白、蛋白聚糖(聚集蛋白聚糖，aggrecan)。MMP-12，底物包括弹性蛋白、纤连蛋白、胶原蛋白IV。MMP-13，底物包括胶原蛋白I、II、III、IV、IX、X、XIV、明胶。MMP-14，底物包括明胶、纤连蛋白、层粘连蛋白。MMP-15，底物包括明胶、纤连蛋白、层粘连蛋白。MMP-16，底物包括明胶、纤连蛋白、层粘连蛋白。MMP-17，底物包括纤维蛋白原、纤维。MMP-18又称为胶原蛋白酶4、xcol4、爪蟾(Xenopus)胶原蛋白酶。MMP-19又称为RASI-1，偶尔称为溶基质素-4。MMP-20，又称为釉质溶解素。MMP-21又称为X-MMP-。MMP-23A(CA-MMP-)膜相关的II型跨膜半胱氨酸阵列。MMP-23B-膜相关的II型跨膜半胱氨酸阵列。MMP-24(MT5-MMP-)膜相关的I型跨膜MMP-。MMP-25(MT6-MMP-)膜相关的糖基肌醇磷脂-附着的。MMP-26又称为基质溶解因子-2、内膜基质酶。MMP-27又称为MMP-22、C-MMP-。MMP-28又称为上皮水解素(epilysin)。

因此，用于解离细胞团块(例如，肿瘤)、蛋白质、组织和器官或用于从各种组织和器官分离不同细胞类型的MMP的组合物可以随待解离的细胞团块、蛋白质、组织或器官的种类或包含用于分离的所需细胞的组织或器官的解离变化。例如，用于有效分解代谢脂肪组织的MMP的混合物包含两种或更多种MMP，例如，如包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-19和MMP-25。在这种情况下，MMP-1和MMP-8可以基于其有效裂解I-III型胶原蛋白的能力来选择。MMP-2和MMP-9裂解IV和V型胶原蛋白。MMP-3和MMP-19具有对IV型胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白的活性，MMP-12有效裂解弹性蛋白，以及MMP-11裂解VI型胶原蛋白。典型地，使用丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶)接着丝氨酸蛋白酶抑制剂来活化MMP。

在另一个实施方式中，用于从胰腺或胰腺组织分离胰岛细胞的组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、或它们的任何组合。

在另一个优选的实施方式中，从胰腺或胰腺组织分离胰岛细胞的方法包括：使生物样品与包含有效量的至少两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、或它们的任何组合，其中该组合物使胰腺或胰腺组织分解代谢或解离，从而分离干细胞。优选地，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或更多种MMP、失活MMP或proMMP的一种或更多种活性片段。在另一个优选的实施方式中，该方法还包括给予使失活MMP或其片段活化的一种或更多种试剂。

在另一个实施方式中，用于分离心肌细胞的组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含有效量的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

在另一个实施方式中，用于组织解离的组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含有效量的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。如上讨论的，该组织可以是任何类型的组织，且细胞可以是任何类型的细胞。例如，成纤维细胞、树突细胞、干细胞等。

在另一个实施方式中，用于从人卵巢组织分离活卵泡的组合物包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含有效量的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

由于该组合物的无毒性，分离的细胞可以用于治疗患者的各种程序，例如细胞的体外扩增以及如例如在治疗纤维性疾病中的细胞再灌注入受试者、移植、分离细胞的移植、干细胞在再生医药中的使用、细胞或组织团块的分解等。

在其他实施方式中，组合物包含一种或多种MMP或其proMMP的一种或多种活性片段，含有所述活性片段，其中活性片段使脂肪组织分解代谢。在一些实施方式中，MMP是活性的或失活的，或该组合物包含MMP的活性和失活形式的组合。在其他实施方式中，该组合物还包含活化剂，例如酶。在其他实施方式中，该活化剂单独给予或可以是组合物的成分。在其他实施方式中，该组合物包含药物赋形剂。

本文中具体实施的组合物包含各种浓度、比例、类型的一种或多种MMP。特定组合物中存在的MMP的类型、量等随用于分离特定细胞类型或用于消化(分解)或解离组织、组织和细胞团块、或器官等的组织或器官的类型而变化。例如，如果组织包含间质胶原蛋白，则可以使用“溶胶原”MMP-[催化一种或多种肠胶原蛋白(I-III型)在其三螺旋结构域内水解的一种MMP]。溶胶原MMP包括分泌的蛋白酶MMP-1、MMP-2、MMP-8、MMP-9和MMP-13以及膜结合的蛋白酶MTI-MMP-和MT2-MMP-。为了分解(消化)该特定组织并且如果需要为了分离特定细胞，该组合物包含MMP-1和/或MMP-8(对于I型和III型胶原蛋白)、MMP-3和/或MMP-19(对于IV型胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白)和MMP-2和/或MMP-9(对于IV型和V型胶原蛋白)的组合。如果该组织包含VI型胶原蛋白，则MMP-11会是MMP-组合物的成分。如果需要弹性蛋白分解，那么可以使用MMP-12。

在其他实施方式中，组合物包含一种类型的MMP和/或其酶原MMP。在另一个实施方式中，组合物包含两种类型的MMP和/或其酶原MMP。在另一个优选的实施方式中，组合物包含一种或多种失活MMP。在另一个实施方式中，组合物包含一种或多种MMP或其酶原、活化剂和其抑制剂。在这样的实施方式中，该组合物可以是分开的，即MMP、其酶原可以保持与包含一种或多种活化剂(例如，胰蛋白酶、糜蛋白酶、乙酸4-氨基苯汞)的组合物或包含MMP的抑制剂(例如，金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP)、马立马司他(marimastat))的又一种组合物分开。

例如，MMP可以通过蛋白酶或在体外通过化学剂如硫醇修饰剂(乙酸4-氨基苯汞、HgCl₂和N-乙基马来酰亚胺)、氧化型谷胱甘肽、SDS、离液剂和活性氧来活化。低pH和热处理也可以引起活化。在许多情况下，MMP的蛋白水解活化是逐步的。最初的蛋白水解攻击发生在前肽的第一和第二螺旋之间的暴露的疏松区域。诱饵区域的裂解特异性由各MMP中发现的序列指示。一旦除去前肽的一部分，则这可能破坏前肽的剩余部分，其允许通过部分活化的MMP中间体或其他活性MMP来进行分子间处理。因此，活化的最终步骤是通过MMP进行的。

通过质粒进行的proMMP的活化是相关的体内途径。通过与纤维蛋白结合的组织纤溶酶原活化子和与特异性细胞表面受体结合的尿激酶纤溶酶原活化子由纤溶酶原生成质粒。纤溶酶原和尿激酶纤溶酶原活化子都是膜相关的，从而产生局部化的proMMP活化和之后的ECM变换。己报道质粒能活化proMMP-1、proMMP-3、proMMP-7、proMMP-9、proMMP-10和proMMP-13。活化的MMP可参与处理其他MMP。逐步活化系统可能己发展为适应较好的调控机制以控制破坏酶，因为TIMP可能干扰通过与完全活化前的中间体MMP相互作用进行的活化。

大部分proMMP分泌自细胞并在细胞外被活化。例如，proMMP-11(溶基质素3)通过弗林蛋白酶(furin)在细胞外被活化。ProMMP-11具有弗林蛋白酶识别序列，在前肽C末端的KX(R/K)R。一些其他MMP，包括六种MT-MMP、MMP-23和上皮水解素(MMP-28)，在前肽中具有相似的碱基基序。因为这些蛋白质大部分可能分泌为活性酶，所以它们的基因表达和通过内源抑制剂进行的抑制对活性的调控将是至关重要的。

TIMP是按1:1化学计量结合MMP的特异性抑制剂。己在脊椎动物中识别出四种TIMP(TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3和TIMP-4)，并在发展和组织重塑期间调控它们的表达。在与不平衡MMP活性有关的病理情况下，TIMP水平的变化被认为是重要的，因为它们直接影响MMP活性的水平。

蛋白质如血浆α-巨球蛋白是在抑制剂的诱饵区蛋白水解后通过将蛋白酶截留在巨球蛋白内来抑制大部分蛋白酶的一般肽链内切酶抑制剂。MMP-1与α2-巨球蛋白反应比在溶液中与TIMP-1反应更容易。

在其他实施方式中，MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或多种MMP或proMMP的一种或多种活性片段，其中活性片段使脂肪组织分解代谢。

在其他实施方式中，MMP或其片段是活性的或失活的，或该组合物含有MMP或其片段的组合。在一些实施方式中，该组合物包含使失活MMP或其片段活化的一种或多种试剂。

肽：仅用于说明的目的，术语“MMP”也将包括proMMP形式、活性形式、失活形式和其活性片段。该术语包括但不限于等位基因变异体、物种变异体、剪接变异体、突变体、片段等。

在实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。在优选的实施方式中，该组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。

在一些实施方式中，该组合物包含三种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、变异体、突变体、药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质。在一些实施方式中，该组合物包含五种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的有效量的肽或蛋白质。

在一个优选的实施方式中，MMP肽包含至少五种连续氨基酸残基，其中理解成它们是“活性”肽。“活性”包括包含如本文中已知的功能而且还包括任何其他功能的各MMP的一种或多种功能，所述其他功能是MMP分子本身具有的或包括可以基于最终使用者的任何操作改变的功能。

在另一个优选的实施方式中，MMP肽包括肽本身、其化学等同物、其异构体(例如，其同分异构体、立体异构体、逆异构体(回复异构体，retroisomer)、逆反异构体(retro-inversoisomer)、全[D]异构体、全[L]异构体、或混合的[L]和[D]异构体)、其内的连续置换、其前体形式、其内源蛋白水解处理的形式，如从本发明的肽的N或C端或活性代谢物裂解单个氨基酸、其药学上可接受的盐和酯以及由翻译后修饰得到的其他形式。还包括的是任何母序列，长度为可达并包括10、9、8、7、6、5和4种氨基酸(来自核心母序列的环状的或线性的或分支的)，其指定的序列为子序列。本领域技术人员将理解其中肽可以是单体、二聚体、三聚体等。本发明的肽的用途包括其中一个活性片段或多个活性片段复合为一种或多种结合配对物(bindingpartners)的肽的用途。保留本发明的肽活性的修饰肽包括在本发明的范围内。

在另一个优选的实施方式中，MMP肽包含至少一种非天然氨基酸残基或非氨基酸分子。“非天然”氨基酸残基包含对由MMP核酸序列编码的氨基酸的任何变化。因此，非天然氨基酸残基或非氨基酸分子包含但不限于：化学等同物、类似物、合成分子、衍生物、变异体、置换(substitution)、肽核酸、连接子分子、无机分子等。

可以以核酸水平或以氨基酸水平引入突变体。对于特定核酸序列，由于基因编码的退化，大量功能相同的核酸编码任何给定的蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在由密码子指定丙氨酸的每个位置，在不改变编码的多肽的情况下，密码子可以被改变成所描述的相应密码子中的任一种。这样的核酸变异是“沉默变异”，其是保守修饰的变异中的一种。如果引入核酸水平的突变来编码特定氨基酸，那么改变了一种或多种核酸。例如，脯氨酸是由CCC、CCA、CCG、CCU编码的；因此，一个碱基，例如CCC(脯氨酸)变为GCC，生成丙氨酸。因此，通过实例，本文中编码天然或非天然多肽的每个天然或非天然核酸序列也描述了天然或非天然核酸的每一个可能的沉默变异。技术人员将认识到天然或非天然核酸(除通常仅是蛋氨酸的密码子的AUG和通常仅是色氨酸的密码子的TGG之外)中的各密码子可以改变以生成功能上相同的分子或不同的分子。相应地，在所述各序列中暗示了编码天然和非天然多肽的天然和非天然核酸的各沉默变异。

关于氨基酸序列，对改变、添加或删除编码的序列中的单个天然和非天然氨基酸或小比例的天然和非天然氨基酸的核酸、肽、多肽或蛋白质序列的单个置换、缺失或添加，改变导致氨基酸的缺失、氨基酸的增加、或用化学相似的氨基酸置换天然和非天然氨基酸。提供功能相似的天然氨基酸的保守置换表是本领域中众所周知的。这样的保守修饰的变异体在本文中所描述的方法和组合物的多态变异体、种间同源物以及等位基因之外，且并不排除这些。

“非天然氨基酸”指的是一种不是20种普通氨基酸或吡咯赖氨酸(pyrolysine)或硒代半胱氨酸(selenocysteine)中的氨基酸。可以与术语“非天然氨基酸”同义使用的其他术语是“非天然编码的氨基酸”、“非天然的氨基酸”、“非天然存在的氨基酸”以及其各种带有连字符号的和不带有连字符号的版本。术语“非天然氨基酸”包括但不限于通过天然编码的氨基酸(包括但不限于，20种普通氨基酸或吡咯赖氨酸和硒代半胱氨酸)的修饰而自然发生的，但在没有使用者操作的情况下，本身不会通过翻译复合物并入生长的多肽链的氨基酸。不是天然编码的天然存在的氨基酸的实例包括但不限于N-乙酰基葡萄糖胺基-L-丝氨酸、N-乙酰基葡萄糖胺基-L-苏氨酸和O-磷酸酪氨酸。另外，术语“非天然氨基酸”包括但不限于不天然存在的且可合成地获得或可通过非天然氨基酸的修饰获得的氨基酸。

在一些情况下，非天然氨基酸的一种或多种置换或一种或多种并入在多肽内将与其他添加、置换或缺失组合，以影响其他化学、物理、药理和/或生物特性。在一些情况下，其他添加、置换或缺失可增加多肽的稳定性(包括但不限于对蛋白降解的抗性)或增加多肽对其适合的受体、配体和/或结合蛋白的亲和性。在一些情况下，其他添加、置换或缺失可增加多肽的溶解性。在一些实施方式中，除了用于为了在重组宿主细胞中表达后提高多肽溶解性而并入非天然氨基酸的另一位点之外，还选择用于与天然编码的或非天然氨基酸置换的位点。在一些实施方式中，该多肽包含调节对于相关配体、结合蛋白和/或受体的亲和力、调节(包括但不限于增加或降低)受体二聚化作用、稳定受体二聚物、调节循环半衰期、调节释放或生物可利用性、促进纯化、或改善或改变特定给药途径的另添加增加、置换或缺失。相似地，该非天然氨基酸多肽可包含改善检测(包括但不限于GFP)、纯化、穿过组织或细胞膜的运输、前药释放或活化、尺寸缩减或其他多肽特性的化学或酶裂解序列、蛋白酶裂解序列、反应基团、抗体结合结构域(包括但不限于FLAG或聚组氨酸(poly-His))或其他基于亲和力的序列(包括但不限于FLAG、聚组氨酸、GST等)或连接的分子(包括但不限于生物素)。

本文中描述的方法和组合物包括向多肽中并入一种或多种非天然氨基酸。可以在不破坏多肽的活性的一个或多个特定位置并入一种或多种非天然氨基酸。这可以通过进行“保守的”置换来实现，该置换包括但不限于用非天然或天然疏水氨基酸置换疏水氨基酸、用非天然或天然大体积氨基酸置换大体积氨基酸、用非天然或天然亲水氨基酸置换亲水氨基酸)和/或将非天然氨基酸插入活性不需要的位置。

可以使用各种生化和结构途经来选择多肽内用于用非天然氨基酸置换的所需位点。多肽链的任何位置适合于选择来并入非天然氨基酸，并且可以基于合理设计或通过用于任何或没有特定所需目的的任意选择来进行选择。所需位点的选择可以基于产生具有任何所需性质或活性的非天然氨基酸多肽(其可进一步被修饰或保持未修饰)，包括但不限于激动剂、超激动剂、部分激动剂、反向激动剂、拮抗剂、受体结合调节剂、受体活性调节剂、与粘合剂伙伴结合的调节剂、结合伙伴活性调节剂、结合伙伴构型调节剂、二聚体或多聚体形成、与天然分子相比活性或性质无变化、或操纵多肽的任何物理或化学性质如溶解性、聚集性或稳定性。例如，多肽的生物活性所需的多肽中的位置可以使用包括但不限于点突变分析、丙氨酸扫描或同源物扫描方法的方法来识别。除了通过包括但不限于丙氨酸或同源物扫描突变形成的方法被识别为对生物活性至关重要的那些以外的残基依据多肽所寻求的所需活性，可以是用于用非天然氨基酸置换的良好候选物。可替换地，再次依据多肽所寻求的所需活性，被识别为对生物活性至关重要的位点也可以是用于用非天然氨基酸置换的良好候选物。另一个备选方案是在多肽链上的各位置用非天然氨基酸进行系列置换，并观察对多肽活性的影响。用于选择任何多肽中用于用非天然氨基酸置换的位置的任何手段、技术或方法适用于本文中描述的方法、技术和组合物。

也可以检查包含缺失的多肽的天然存在的突变体的结构和活性，以确定可能容忍用非天然氨基酸置换的蛋白的区域。一旦己消除可能不能容忍用非天然氨基酸置换的残基，可以使用包括但不限于相关多肽的三维结构和任何相关配体或结合蛋白的方法来检查每个剩余位置处所建议置换的影响。许多多肽的X射线晶体和NMR结构可从蛋白数据库(PDB,rcsb.org)，一种含有蛋白质和核酸的大分子的三维结构数据的集中式数据库，获得，该数据库可以用于识别可用非天然氨基酸置换的氨基酸位置。另外，如果三维结构数据不可获得，则可以制造研究多肽的二级和三级结构的模型。因此，可以容易地获得可用非天然氨基酸置换的氨基酸位置的同一性。非天然氨基酸并入的示例性位点包括但不限于从潜在的受体结合区排除的那些，或用于与结合蛋白或配体结合的区域可以全部或部分地暴露于溶剂，具有最小的或没有与附近残基的氢键(结合)相互作用，可以最小化地暴露于附近的反应残基，和/或可以在如由特定多肽及其相关受体、配体或结合蛋白的三维晶体结构预测的高度灵活的区域中。

各种各样的非天然氨基酸可以被置换为或并入多肽中的给定位置。通过举例，可以基于对多肽及其相关配体、受体和/或结合蛋白的三维晶体结构的检查选择用于并入，优选用于保守置换的特定非天然氨基酸。

如本文中进一步使用的，本发明的多肽的“化学等同物”是具有与本文中描述的肽相同的所需活性例如胶原蛋白酶活性，且显示出轻微化学差异的分子，或在温和条件下被转化为本发明的肽的分子(例如，本发明的肽的酯、醚、还原产物和复合物)。

此外，如本文中使用的，“保守置换”是功能上与置换的氨基酸残基相当的那些氨基酸置换，因为其具有相似的极性或空间排列，或因为其属于与置换的残基相同的类(例如，疏水、酸性或碱性)。如本文中定义的术语“保守置换”包括对本发明的肽加强天然免疫的能力具有无关紧要的影响的置换。保守置换的实例包括用极性(亲水)残基置换另一种(例如，精氨酸/赖氨酸、谷氨酰胺/天冬酰胺或苏氨酸/丝氨酸)；用非极性(疏水)残基(例如异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸)置换另一种，用酸性残基(例如，天冬氨酸或谷氨酸)置换另一种；或用碱性残基(例如，精氨酸、组氨酸、赖氨酸或鸟氨酸)置换另一种。

如本文中使用的术语“类似物”包括具有与本文中描述的序列基本相同的氨基酸序列的任何肽，其中至少一种残基己被功能上相似的残基保守置换。“类似物”包括MMP-肽的氨基酸序列的功能变异体和明显的化学等同物。如本文中进一步使用的，术语“功能变异体”指的是显示出酶能力如例如，催化一种或多种间质胶原蛋白水解的肽的活性。“类似物”还包括如本文中描述的类似物的任何药学上可接受的盐。

如本文中使用的“衍生物”指的是具有通过官能侧基的反应而化学衍生的一种或多种氨基酸的本发明的肽。示例性衍生的分子包括但不限于肽分子，在该肽分子中，游离氨基己通过添加乙酰基、胺盐酸盐、苄氧羰基、氯乙酰基、甲酰基、对甲苯磺酰基或叔丁氧羰基被衍生以形成盐或酰胺。游离羟基可被衍生以形成O-酰基或O-烷基衍生物。此外，游离羧基可被衍生以形成盐、酯(例如，甲基和乙基酯)或酰肼。因此，“衍生物”还包括如本文中描述的衍生物的任何药学上可接受的盐。

在本发明的一个实施方式中，MMP肽包含修饰的C-末端和/或修饰的N-末端。例如，分离的肽可具有酰胺化的C-末端。例如，氨基末端可以被乙酰化(Ac)或羧基末端可以被酰胺化(NH₂)。然而，在本发明的一个实施方式中，如果这样的修饰会导致所需活性的损失，则本发明的肽优选不被乙酰化。氨基末端修饰包括甲基化(即，-NHCH₃或-NH(CH₃)₂、乙酰化、增加苄氧羰基或用含有由RCOO-限定的羧酸盐官能团的任何阻断基团阻断氨基末端，其中R选自由萘基、吖啶基、甾基和相似基团组成的组。羧基末端修饰包括用羧酰胺基取代游离酸或在羧基末端形成环内酰胺以引入结构限制。

在一个实施方式中，可以进行主链置换，如NH置换为NCH₃。肽也可以具有修饰(例如，点突变，如插入或缺失或截短)。通过举例，肽可包含含有修饰残基的氨基酸序列，该修饰残基通过D氨基酸的至少一个点插入，只要保留所需的活性。例如，可以使用脯氨酸残基的环大小由5元变为4、6或7元的脯氨酸类似物。环状基团可以是饱和的或不饱和的，且如果是不饱和的，可以是芳香族或非芳香族的。

在另一个优选的实施方式中，用具有相似性质的其他侧链例如用基团如烷基、低级烷基、环形4-、5-、6-至7-元烷基酰胺、酰胺低级烷基酰胺二(低级烷基)、低级烷氧基、羟基、羧基和其低级酯衍生物，以及用4-、5-、6-至7-元杂环替换20种遗传地编码的氨基酸(或D氨基酸)的天然存在的侧链。

这样的置换可以包括但不必限于：(1)非标准带正电荷的氨基酸，如：鸟氨酸，Nlys；具有与“N-末端”连接的赖氨酸侧链并与连接至甘氨酸的氨基基团的氨丙基或氨乙基基团的化合物的N-(4-氨基丁基)-甘氨酸；(2)没有净电荷和与精氨酸相似的侧链的非天然存在的氨基酸，如，Cit；瓜氨酸和Hci；具有一个多亚甲基基团的瓜氨酸；(3)具有OH的非标准非天然存在的氨基酸(例如，如丝氨酸)，如，hSer；高丝氨酸(一个多亚甲基，Hyp)；羟脯氨酸，Val(βOH)；羟缬氨酸，Pen；青霉胺，(Val(βSH)；(4)脯氨酸衍生物，如，D-Pro，如3,4-脱氢脯氨酸，Pyr；焦谷氨酰胺，环上具有氟取代的脯氨酸，1,3-噻唑烷-+羧酸(环内有S的脯氨酸)；(5)组氨酸衍生物，如Thi；β-(2-噻吩基)-丙氨酸；或(6)烷基取代物，如Abu；2-氨基丁酸(Ca上的乙基)，Nva；戊氨酸(Ca上的丙基)，Nle；正亮氨酸(Ca上的丁基)，Hol；高亮氨酸(Ca上的丙基)，Aib，α-氨基异丁酸(没有亚甲基的缬氨酸)。本领域技术人员知道保留母肽/序列的活性的那些置换。

在另一个可替换的实施方式中，C-末端羧基或C-末端酯可以通过用N-末端氨基分别内部替换羧基或酯的-OH或酯(-OR)被诱导环化以形成环肽。例如，在合成和裂解以生成肽酸后，在溶液例如在亚甲基氯(CH₂C1₂)、二甲基甲酰胺(DMF)混合物中，游离酸由适合的羧基活化剂如二环己基碳二亚胺(DCC)转化为活化的酯。然后通过用N-末端胺内部替换活化的酯来形成环肽。可以通过使用非常稀的溶液来加强与聚合不同的内部环化。这样的方法在本领域中是众所周知的。

本发明的肽可以被环化，或位于肽末端的脱氨基或脱羧基残基可以被并入，使得不具有末端氨基或羧基基团，例如，以保持失活，直到给予活化剂的时间时，或限制肽的构型。本发明化合物的C-末端官能团包括酰胺、酰胺低级烷基、酰胺二(低级烷基)、低级烷氧基、羟基和羧基及其低级酯衍生物，以及其药学上可接受的盐。

可以通过加入N和/或C末端半胱氨酸和通过二硫连接(二硫键)或其他侧链相互作用环化肽来环化本发明的肽。

核酸：本发明的实施方式还涉及核酸序列，包含编码MMP、proMMP、其活性片段、突变体、变异体或其组合的核酸的组合物。该MMP-核酸序列可包含一种或多种突变、置换、缺失、插入、修饰、修饰的核酸碱基、连接(linkage)、类似物、衍生物等。术语“MMP”是指包含所有这些分子。因此，当提到MMP-1时，该术语指的是MMP-1蛋白，proMMP-1，其活性片段，突变体，变异体，包含一种或多种突变、置换、缺失、插入、修饰、修饰的核酸碱基、连接、类似物、衍生物等的MMP-1核酸序列。为了简洁，将使用术语“核酸序列”，并且其将包括但不限于分离的核酸或cDNA序列、合成的或合成核酸序列、嵌合核酸序列、同源物、直系同源物、变异体、突变体或其组合。

在一些实施方式中，组合物包含具有分离的核酸或cDNA序列或合成核酸序列的编码基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的表达载体，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些优选的实施方式中，该组合物包含具有分离的核酸或cDNA序列或合成核酸序列的编码两种或更多种，或三种或更多种，或四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的表达载体，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，表达载体编码基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的核酸序列，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含与野生型基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)具有至少约50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、99％或99.9％同一性的序列。

在一些实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的两种或更多种核酸序列，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、其活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的核酸序列，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含与野生型基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)具有至少约50％同一性的序列，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，该组合物包含基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)、活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、药物组合物、其药学上可接受的盐或其任何组合中的两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种核酸序列。

在其他实施方式中，MMP核酸序列包含与野生型MMP或其cDNA序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的序列。

在其他实施方式中，基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)核酸序列，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP核酸序列包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28或其活性片段或其cDNA序列，包含与野生型MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、其活性片段或其cDNA序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的序列。

在一些实施方式中，MMP的核酸序列还包含一种或多种突变、置换、缺失、变异体或其组合。

在一些实施方式中，包含一种或多种突变、置换、缺失、变异体或其组合的MMP核酸序列和天然的或野生型或MMP的cDNA序列之间的同源性、序列同一性或互补性为约50％至约60％。在一些实施方式中，同源性，序列同一性或互补性为约60％至约70％。在一些实施方式中，同源性，序列同一性或互补性为约70％至约80％。在一些实施方式中，同源性，序列同一性或互补性为约80％至约90％。在一些实施方式中，同源性，序列同一性或互补性为约90％、约92％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％。

在一个实施方式中，载体包含编码MMP或其proMMP的多核苷酸，其包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、其变异体、突变体或其活性片段。

在一个实施方式中，可以将表达一种或多种MMP的载体给予患者，其中MMP或其proMMP的表达使与待治疗病症有关的蛋白质或组织解离，所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、其变异体、突变体或其活性片段。

已知许多载体能够介导基因产物向哺乳动物细胞的转移，如本领域中已知的和本文中所描述的。“载体”(有时称为基因递送或基因转移“载体”)指的是含有在体外或在体内待递送至宿主细胞的多核苷酸的大分子或分子复合物。待递送的多核苷酸可包含基因治疗中感兴趣的编码序列。载体包括，例如病毒载体(如腺病毒(“Ad”)、腺病毒相关病毒(AAV)和水泡性口炎病毒(VSV)及逆转录酶病毒)、脂质体或其他含脂质复合物，以及能够介导多核苷酸向宿主细胞递送的其他大分子复合物。载体也可以包含进一步调节基因递送和/或基因表达或以其他方式为靶细胞提供有益性质的其他成分或功能(官能团)。如下面更详细地描述和说明的，这样的其他成分包括例如影响结合或靶向细胞的成分(包括介导细胞类型或组织特异性结合的成分)；影响细胞摄入载体核酸的成分；影响摄入后细胞内多核苷酸定位的成分(如介导核定位的试剂)；以及影响多核苷酸的表达的成分。这样的成分还可包括标记物，如可用于为己开始和正表达由载体递送的核酸的细胞检测或选择的可检测和/或可选择标记物。这样的成分可被提供作为载体的自然特征(如具有介导结合和摄入的成分或功能的某些病毒载体的用途)，或载体可被修饰以提供这种功能。其他载体包括Chen等人；BioTechniques,34:167-171(2003)描述的那些。各种各样的这样的载体在本领域中是已知的，且一般是可获得的。

“重组病毒载体”指的是包含一种或多种异源基因产物或序列的病毒载体。由于许多病毒载体表现出与包装有关的尺寸限制，因此典型地通过替换病毒基因组的一个或多个部分引入异源基因产物或序列。这样的病毒可变为复制缺陷型，从而需要在病毒复制和衣壳化过程中以反式提供一个或多个删除的功能(通过使用，例如辅助病毒或携带复制和/或衣壳化必须的基因产物的包装细胞系)。还己描述了其中在病毒颗粒外携带待递送的多核苷酸的修饰的病毒载体(参见，例如，Curiel,DT等人.PNAS:8850-8854,1991)。

合适的核酸递送系统包括病毒载体，典型地是来自腺病毒、腺病毒相关病毒(AAV)、辅助依赖型腺病毒、逆转录酶病毒、或日本血凝病毒-脂质体(HVJ)复合物中的至少一种的序列。优选地，该病毒载体包含与多核苷酸可操作性连接的强真核启动子，例如巨细胞病毒(CMV)启动子。

其他优选的载体包括病毒载体、融合蛋白和化学结合物(conjugate)。逆转录病毒载体包括莫洛尼小鼠白血病病毒(Moloneymurineleukemiaviruse)和基于HIV的病毒。一种优选的基于HIV的病毒载体包含至少两种载体，其中gag和pol基因来自HIV基因组，以及env基因来自另一种病毒。DNA病毒载体是优选的。这些载体包括pox载体(如orthopox或avipox载体)、疱疹病毒载体如I型单纯疱疹病毒(HSV)载体[Geller,A.I.等人,J.Neurochem,64:487(1995)；Lim,F.等人inDNACloning:MammalianSystems(DNA克隆：哺乳动物系统),D.Glover,Ed.(OxfordUniv.Press,OxfordEngland)(1995)；Geller,A.I.等人,ProcNatl.Acad.Sci.:U.S.A.:907603(1993)；Geller,A.I.等人,ProcNatl.Acad.Sci.USA:87:1149(1990)]、腺病毒载体[LeGalLaSalle等人,Science,259:988(1993)；Davidson等人,Nat.Genet.3:219(1993)；Yang等人,J.Virol.69:2004(1995)]以及腺相关病毒载体[Kaplitt,M.G等人,Nat.Genet.8:148(1994)]。

Pox病毒载体将基因引入到细胞质中。Avipox病毒载体仅引起核酸的短期表达。腺病毒载体、腺相关病毒载体和单纯疱疹病毒(HSV)载体可以是用于本发明的一些实施方式的指征。腺病毒载体导致比腺相关病毒更短期的表达(例如，小于约1个月)，在一些实施方式中，可显示出更长时间的表达。所选择的特定载体将取决于靶细胞和所治疗的病症。可以容易地完成适合启动子的选择。优选地，启动子的选择将使用高表达启动子。适合的启动子的实例是763个碱基对的巨细胞病毒(CMV)启动子。也可使用劳氏肉瘤病毒(RSV)(Davis等人,HumGeneTher4:151(1993))和MMT启动子。某些蛋白可以使用其天然启动子来表达。也可以包括可加强表达的其他要素(元件)，如导致高水平表达的增强子或系统，如tat基因和tar元件。然后可以将该基因盒(cassette)插入载体中，例如质粒载体如pUC19、pUC118、pBR322或包括例如大肠杆菌复制起点的其他己知质粒载体。参见Sambrook等人,MolecularCloning(分子克隆)：ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratorypress,(1989)。质粒载体也可包括可选择的标记物如用于氨比西林抗药性的β-内酰胺酶基因，条件是标记物多肽不会不利地影响所治疗生物体的新陈代谢。该基因盒也可以与合成递送系统中的核酸结合基序(部分)结合。

如果需要，本发明的多核苷酸也可以与微递送载体如阳离子脂质体和腺病毒载体一起使用。

可以根据已知的技术来生产复制缺陷型重组腺病毒载体。参见Quantin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:2581-2584(1992)；Stratford-Perricadet等人,J.Clin.Invest.90:626-630(1992)；以及Rosenfeld等人,Cell,68:143-155(1992)。

可以通过本领域中已知的任何启动子/加强子元件来控制MMP的表达，但这些调控元件必须在为表达所选择的宿主中有作用。可用于控制MMP-基因表达的启动子包括但不限于巨细胞病毒(CMV)启动子(美国专利号5,385,839和5,168,062)、SV40早期启动子区(Benoist和Chambon,1981,Nature290:304-310)、劳斯氏肉瘤病毒的3'长末端重复中包含的启动子(Yamamoto等人,Cell22:787-797,1980)、疱疹胸腺激酶启动子(Wagner等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.78:1441-1445,1981)、金属硫蛋白基因的调控序列(Brinster等人,Nature296:39-42,1982)；原核表达载体如β-内酰胺酶启动子(VIIIa-Kamaroff等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.75:3727-3731,1978)或tac启动子(DeBoer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:21-25,1983)；还参见来自酵母或其他真菌的启动子元件如Gal4启动子、ADC(乙醇脱氢酶)启动子、PGK(磷酸甘油激酶)启动子、碱性磷酸酶启动子；以及显示出组织特异性且己用在转基因动物中的动物转录控制区：在胰腺腺泡细胞中是活性的弹性蛋白酶I基因控制区(Swift等人,Cell38:639-646,1984；Ornitz等人,ColdSpringHarborSymp.Quant.Biol.50:399-409,1986；MacDonald,Hepatology7:425-515,1987)；在胰岛β细胞中是活性的胰岛素基因控制区(Hanahan,Nature315:115-122,1985)、在淋巴细胞中是活性的免疫球蛋白基因控制区(Grosschedl等人,Cell38:647-658,1984；Adames等人,Nature318:533-538,1985；Alexander等人,Mol.Cell.Biol.7:1436-1444,1987)、在睾丸、乳腺、淋巴样和肥大细胞中是活性的小鼠乳腺肿瘤病毒控制区(Leder等人,Cell45:485-495,1986)、在肝中是活性的白蛋白基因控制区(Pinkert等人,GenesandDevel1:268-276,1987)、在肝中是活性的α-胎蛋白基因控制区(Krumlauf等人,Mol.Cell.Biol.5:1639-1648,1985；Hammer等人,Science235:53-58,187)、在肝中是活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制区(Kelsey等人,GenesandDevel.1:161-171,1987)、在骨髓细胞中是活性的β-球蛋白基因控制区(Mogram等人,Nature315:338-340,1985；Kollias等人,Cell46:89-94,1986)、在脑中的少突胶质细胞中是活性的髓鞘碱性蛋白基因控制区(Readhead等人,Cell48:703-712,1987)、在骨骼肌中是活性的肌球蛋白轻链-2基因控制区(Sani,Nature314:283-286,1985)以及在下丘脑中是活性的促性腺激素释放激素基因控制区(Mason等人,Science234:1372-1378,1986)。

各种各样的宿主/表达载体组合可以用于表达本发明的DNA序列。例如，有用的表达载体可由染色体、非染色体和合成DNA序列的片段组成。适合的载体包括SV40的衍生物和已知的细菌质粒，例如大肠杆菌质粒colEl、pCRl、pBR322、pMal-C2、pET、pGEX(Smith等人,Gene67:31-40,1988)、pMB9和其衍生物、质粒如RP4；噬菌体DNA，例如噬菌体1的许多衍生物，例如NM989和其他噬菌体DNA，例如M13和丝状单链噬菌体DNA；酵母质粒如2μ质粒或其衍生物，在真核细胞中有用的载体，如在昆虫或哺乳动物细胞中有用的载体；由质粒和噬菌体DNA的组合衍生的载体，如己被修饰为使用噬菌体DNA或其他表达控制序列的质粒等。

根据本发明也可以使用酵母表达系统来表达MMP。例如，根据本发明可以使用非融合pYES2载体(XbaI、SphI、ShoI、NotI、GstXI、EcoRI、BstXI、BamHl、SacI、KpnI和HindIII克隆位点；Invitrogen)或融合pYESHisA、B、C(XbaI、SphI、ShoI、NotI、BstXI、EcoRI、BamHl、SacI、KpnI和HindIII克隆位点，用ProBond树脂纯化和用肠激酶裂解的N-末端肽；Invitrogen)，仅提及这两种。根据本发明可以制备酵母双杂交表达系统。

一种优选的递送系统是其中并入一种或多种多核苷酸，优选地约一种多核苷酸的重组病毒载体。优选地，本发明的方法中使用的病毒载体具有约10⁸至约5×10¹⁰pfu的pfu(空斑形成单位)。在多核苷酸待与非病毒载体一起给予的实施方式中，约0.1纳克至约4000微克之间的使用常常会是有用的，例如，约1纳克至约100微克。

用途、制剂、给药

组合物在体外和体内的各种程序和方法中是有用的。例如，分离干细胞、从胰腺分离胰岛细胞或从任何组织或器官分离任一种类型的细胞，降解所选的组织、降解组织或细胞团块、降解组织成分或组织支架(例如，纤维、胶原蛋白、弹性蛋白等)美容的用途，例如脂肪沉积、脂肪团等的催化作用。

干细胞：在一个优选的实施方式中，从胰腺分离胰岛细胞的方法包括使胰腺与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的组合物接触，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。可以用MMP混合物灌注胰腺，或可以在用本文中具体实施的组合物培育之前将胰腺切片，且可以通过本领域中已知的方法分离和纯化胰岛。在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

在另一个优选的实施方式中，解离组织或器官以用于分离各种细胞类型的方法包括使组织或器官与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的组合物接触，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

可以用MMP混合物(例如两种或更多种MMP分子的组合)灌注组织或器官，或可以在用本文中具体实施的组合物培育之前将器官切片，且可以通过本领域中已知的方法分离和纯化所需的细胞。细胞类型的实例包括但不限于心肌细胞、成纤维细胞(fibroblast)、树突细胞、来自卵巢组织的卵泡等。

在一个实施方式中，从脂肪组织分离干细胞的方法包括：使脂肪组织与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的组合物接触，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中该组合物使组织分解代谢，从而从组织中分离干细胞。在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

在一个实施方式中，从生物样品中分离干细胞的方法包括：使生物样品与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的组合物接触，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。例如，该生物样品可以是脐带血、骨髓、骨、胎盘、脂肪组织、胰腺、心脏等。脐带血中干细胞的实例：(a)体细胞；(b)间充质干细胞；(c)内皮细胞祖细胞和血管生成刺激细胞；以及(d)造血干细胞。在一些实施方式中，生物样品包含：上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜、基底层、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体、脑血管组织和液体、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、纤维组织、疤痕组织或任何器官组织。

可以从组织分离的干细胞或前体细胞包括但不限于，例如外周血干细胞(PBSC)，从骨髓分离的干细胞(骨髓细胞；BMC)；从脂肪组织中分离的干细胞；间充质干细胞(MSC)，从脐带血、月经液分离的干细胞、源于心脏的细胞、胚胎干细胞、CD30+细胞、CD34+细胞、CD34-细胞、CD9+细胞、CD29+细胞、CD44+细胞、CD45+细胞、CD49+细胞、CD54+细胞、CD56+细胞、CD59+细胞、CD71+细胞、CD90+细胞，例如CD90.1+或CD90.2+细胞、CD105+细胞、CD133+细胞、CD135+(flt-3+)细胞、CD140a+细胞、CDCP1+细胞、CD146+(muc-18+)细胞、ABCG2+细胞、CD144+细胞、胎儿肝脏激酶1+细胞、Stro-l+细胞、CD117+(c-kit+)细胞、巢蛋白+细胞、PSA-NCAm+细胞、CD30+细胞、p75神经营养蛋白+细胞、CD106+细胞、CD120a+细胞、CD124+细胞、CD166+细胞、干细胞因子+(SCF+)细胞、Sca-1+细胞、SH2+细胞、SH3+细胞、HLA，例如HLA-ABC细胞、骨形态发生蛋白蛋白+(BMP)的细胞，例如BMP2+和BMP4+细胞、Gap43+细胞、胶质纤维酸性蛋白质+(GFAP+)细胞、髓鞘碱性蛋白+(MBP+)细胞、O4+细胞、O1+细胞、突触蛋白+细胞、碱性磷酸酶+细胞、cripto+(TDGF-1+)细胞、足细胞标志蛋白+(podocalyxin)细胞、硫酸蛋白多糖+细胞，例如甲硅烷基化硫酸角蛋白多糖+细胞、阶段特异性胚胎抗原+(例如，SSEA-1、-3和-4)细胞、TRA-l-60+细胞、TTRA-1-81+细胞、骨钙蛋白+细胞、基质gla蛋白+细胞、骨桥蛋白+细胞、Thyl+细胞、II型胶原蛋白+细胞、IV型胶原蛋白+细胞、脂肪酸转运+细胞和β1整合蛋白+细胞。

间充质干细胞(MSC)是尤其在骨髓、血液、真皮和骨膜中发现的形成性多能母细胞，该形成性多能母细胞能依据来自生物活性因子如细胞因子的各种影响而被分化为多于一种具体类似的间充质或结缔组织(即支持专门的元件的身体组织；例如脂肪、骨、间质，软骨，弹性的和纤维结缔组织)。

大约地，粘附至塑料的30％的人骨髓抽出细胞被认为是MSC。这些细胞在体外扩增，然后被诱导分化。成体MSC可以在体外扩增并被刺激形成骨、软骨、肌腱、肌肉或脂肪细胞的事实使它们对于组织工程和基因治疗策略很有吸引力。己研究体内试验来测定MSC功能。被注入循环的MSC可以整合入上面描述的许多组织中。具体而言，可以通过暴露于5-氮胞苷诱导骨骼肌和心肌，且可以通过暴露于β-巯基乙醇、DMSO或叔丁基化的羟基茴香醚来诱导大鼠和人MSC在培养中的神经分化[Woodbury(2000)J.Neurosci.Res.61:364-370]。此外，在外周注射后以及将人MSC直接注入大鼠大脑后，MSC衍生的细胞被认为深入整合到大脑中；这些细胞沿在神经干细胞迁移期间发展地使用的途径迁移，变得分布广泛，并开始损失HSC特化的标记物[Azizi(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:3908-3913]。在美国专利号6,248,587中公开了用于促进间充质干细胞和谱系特异性细胞增殖的方法。

美国专利号5,486,359中描述的人间充质干细胞(hMSC)如SH2、SH3和SH4表面上的表位可以被用作从如存在于例如骨髓中的异源细胞群筛选和捕获间充质干细胞群的试剂。对于CD45，前体间充质干细胞是阳性的。这些前体间充质干细胞可以分化为各种间充质细胞谱系。

在另一个优选的实施方式中，分离的干细胞是胚胎干细胞、成体干细胞、脐带血干细胞、体干细胞、癌干细胞或心脏干细胞。

此外，本发明的干细胞可以是造血干细胞或间充质干细胞。本发明的干细胞可以是全能、多能、多潜能或单能干细胞。本发明的干细胞可以是原代干细胞，或可以源于所建立的干细胞系、癌前干细胞系、癌细胞系或显示任何干细胞标记物的任何细胞系。原代干细胞可以源自癌症患者或健康患者。

根据本发明该方面的优选干细胞是人干细胞。

在一些实施方式中，干细胞从脂肪组织中分离。由包含CD44、CD73、CD90、CD105或其组合的标记物来识别该干细胞。

脂肪、脂肪沉积、脂肪团：组合物可以用于美容目的，以降低脂肪沉积或治疗与脂肪沉积有关的病症如，例如脂肪瘤。在身体内可以不规则地发生脂肪储存的积累。例如，一些人可能主要使脂肪积累在腹腔中，而其他人主要积累在皮下组织中。性别差异也可能是明显的，女性使脂肪积累在大腿和侧臀部，而男性积累在腰部。女性可能积累大腿的脂肪沉积，其具有起皱或“橘皮表面”的外观，从而导致称为脂肪团的病症。脂肪团可能与允许皮下脂肪形成疝，有时称为脂肪突起的表皮结构有关。可能与脂肪团有关的其他因素包括改变的和/或降低的结缔组织隔膜、引起流体液积累的血管和淋巴变化，以及炎症。脂肪组织也可以以纤维脂肪沉积(称为脂肪瘤)的形式积累。脂肪储存的利用可不规则地发生。大幅减重的人仍可能具有区域性脂肪积累袋，除非实现减重的不健康极端，否则该袋耐受降低。锻炼可不同程度地影响皮下脂肪储存，其中深层组织以脂解回应，而表层储存更有抗性。尽管体重降低，但还仍可能存在脂肪团，且典型地脂肪瘤不受减重的影响。

本文提供的是用来实现区域性脂肪、脂肪组织、脂肪团和脂肪细胞降低治疗的药物组合物、制剂(剂型)、方法和系统。

在一些实施方式中，降低需要其的受试者(例如，患有肥胖的受试者)中区域性脂肪沉积的方法包括给予受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的药物组合物，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中区域性脂肪沉积降低。

在一个实施方式中，降低需要其的受试者(例如患有肥胖的受试者)中区域性脂肪沉积的方法包括给予受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的药物组合物，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中降低了区域性脂肪沉积。在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

在实施方式中，通过肠胃外、局部、肌内、皮下或经皮给药途径来给予该药物组合物。在某些方面中，在区域性脂肪沉积处或接近区域性脂肪沉积处来给予该药物组合物。

在一个实施方式中，治疗患有与增加的脂肪组织有关的病症的受试者的方法，包括给予受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的组合物，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中该组合物使脂肪组织分解代谢。在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

在实施方式中，所述MMP或其proMMP可选地包含含有活性片段的一种或多种MMP或proMMP的一种或多种活性片段，其中所述活性片段使脂肪组织分解代谢。与脂肪组织增加有关的病症的实例包括：脂肪团、脂肪沉积、脂肪瘤、肥胖、糖尿病、代谢疾病或它们的组合。因此，由于美容或健康原因，该组合物有效地使任何脂质或脂肪沉积分解代谢。

在一些实施方式中，该组合物通过皮下或肌内注射来局部给予。在一些实施方式中，一种或多种MMP或proMMP被封装，并在注入受试者后随时间释放。

在一些实施方式中，对己给予药物组合物或缓释药物组合物的受试者进行吸脂程序，该药物组合物或缓释药物组合物包含治疗有效量的用于使脂肪组织分解代谢的至少一种化合物。

组织、蛋白质、基质、器官：在其他实施方式中，本文中具体实施的组合物使蛋白质、基质、组织或器官解离。在一个优选的实施方式中，用于使组织解离的方法包括：使组织与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。组织的非限制性实例包括：上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜、基底层、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体、脑血管组织和液体、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、纤维组织、疤痕组织或任何器官组织。组织或器官的具体来源包括但不限于：动物脂肪/脂肪、肾上腺、骨、脑、软骨、结肠、内皮、上皮、眼、心脏、肠、肾、肝、肺、淋巴结、乳腺、各种肌肉(杂肌)、神经、胰腺、腮腺、垂体、前列腺、生殖系统、鳞片(scale)、皮肤、脾、脑干、胸腺、甲状腺/甲状旁腺、扁桃体或肿瘤。

在另一个优选的实施方式中，使蛋白基质解离的方法包括使蛋白基质与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。蛋白基质的实例包含：胶原蛋白、纤连蛋白、明胶、层粘连蛋白、蛋白聚糖、弹性蛋白、纤维蛋白、纤维蛋白原或它们的组合。该组合物可以应用于许多医药或美容领域。例如，疤痕的减少或消除、组织团块、伤口愈合、组织的选择性移除等。

在其他优选的实施方式中，治疗或治愈疤痕或伤口的方法包括使疤痕组织或伤口与包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。优选地，所述MMP、失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)或它们的组合。优选地，该组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。在其他优选的实施方式中，该组合物包含有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、其活性片段、变异体、突变体或其任何组合，使疤痕组织或伤口解离或分解代谢。

在另一个优选的实施方式中，使纤维组织解离的方法包括：使纤维组织与包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。优选地，MMP、失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)或它们的组合。优选地，该组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。在其他优选的实施方式中，该组合物包含有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、其活性片段、变异体、突变体或其任何组合，使纤维组织解离或分解代谢。

因此，该组合物也可用于对烧伤和溃疡清理、伤口愈合、正形成的疤痕或已形成的疤痕的组织的局部治疗，对佩罗尼氏病(Peyronie'sdisease)的治疗，对骨(例如，异常骨形成或生长)的治疗，异常或椎间盘脱出的矫正(reformation)。

疾病：本文中具体实施的组合物可用于体内治疗或预防其中MMP的混合物将是有益的疾病。这些包括病毒疾病、细胞感染、原生寄生虫感染、癌症、自身免疫性疾病、炎症、移植、神经系统疾病或紊乱、帕金森氏病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、多发性硬化症、阿尔茨海默氏病、肝疾病或紊乱、胃肠道疾病或紊乱、糖尿病、癌症、自身免疫性、免疫相关的疾病或紊乱、神经系统疾病或紊乱、神经变性疾病或紊乱、神经修复和麻痹、神经内分泌分化、炎性疾病、肌肉疾病或紊乱、与传染性有机体有关的疾病或紊乱等。

在具体实施例中，本文中的组合物可以用于治疗例如纤维化疾病、癌症、与蛋白沉积有关的疾病例如阿尔茨海默氏病等、肿瘤疾病、炎性疾病、冠状动脉疾病、闭塞性心血管疾病、退行性疾病和传染病、白内障、异常蛋白沉积等。肿瘤疾病的一些实例可以是但不限于癌症、淋巴瘤、白血病和脑瘤。炎性疾病的一些实例可以是但不限于关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、克罗恩病、结肠炎、皮炎、红斑狼疮等。传染病的一些实例可包括但不限于细菌、病毒、真菌、支原体、某些遗传性疾病及其他感染。

在一个优选的实施方式中，治疗患有或有发展纤维化疾病风险的患者的方法包括给予治疗有效量的包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)或其proMMP的组合物，其中所述MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，该组合物包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

“治疗有效量”指的是当给予受试者用于治疗疾病时足以实现对疾病的这样的治疗的化合物的量。“治疗有效量”可以随化合物、疾病和其严重程度以及待治疗受试者的年龄、重量等变化。短语“药学上可接受的”指的是当给予人时，生理上可忍受的且典型地不产生过敏性或相似不良反应如胃部不适、头晕等的分子实体和组合物。

基于对技术人员可用的任何信息，可相信用作治疗化合物的MMP的种类和量具有治疗活性。例如，基于医师案头参考(Physician'sDeskReference)中包含的信息，可相信原型(prototype)化合物具有治疗活性。此外，通过非限制性实例，基于临床医生的经验、化合物的结构、结构活性关系数据、EC₅₀、测定数据、IC₅₀测定数据、动物或临床研究或任何其他基础或这样的基础的组合，可相信治疗化合物具有治疗活性。

治疗活性化合物是具有治疗活性的化合物，该活性包括例如当给予受试者或在体外测试时诱发指定应答的化合物的能力。治疗活性包括疾病或病症的治疗，包括预防治疗和改善治疗。疾病或病症的治疗可包括通过任何量对疾病或病症的改善，包括疾病或病症的预防、改善和消除。可以针对任何疾病或病症，包括例如在一个优选的实施方式中，对受益于组织或细胞团块的解离的任何疾病或紊乱，进行治疗活动。为了确定治疗活性，可以使用通过其可评价化合物的治疗活性的任何方法。例如，可以使用体内和体外方法，包括例如临床评价、EC₅₀和IC₅₀测定以及剂量反应曲线。

制剂、给药：本文中具体实施的组合物被配制用于通过任何适合的方法给药，例如，如在Remington:TheScienceAndPracticeOfPharmacy(21sted.,LippincottWilliams&Wilkins)中所描述的。示例性的给药途径包括但不限于肠胃外、口服、皮下、局部、肌内、经皮、经粘膜、舌下、鼻内、经血管、皮下、眼窝、或它们的组合。在一些实施方式中，该组合物被配制成用于在需要治疗的区域例如在区域性脂肪沉积处注射。在另一个实施方式中，该组合物可以被配制为局部制剂，例如以消除或降低受试者中的疤痕形成。在一些实施方式中，组合物包含至少一种或多种、或至少两种或更多种、或至少三种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、cDNA序列、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

在一些实施方式中，该组合物包含四种或更多种，或五种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

本发明的核酸、蛋白质、肽或试剂可以通过任何适合的途径包括通过静脉、腹膜内、肌内注射或口服给予需要治疗的患者。精确的剂量将取决于许多因素，包括核酸、蛋白质、肽或试剂是用于诊断，还是用于治疗，还是用于预防。成年患者的剂量或给药方案可以按比例调节用于孩童和婴儿，并且也可以调节用于其他给药或其他形式(format)，例如按分子量。给药或治疗可以由医师决定按适当的间隔重复。

本发明的核酸、蛋白质、肽或试剂常将通常以药物组合物的形式给药，除核酸、蛋白质、肽或试剂之外，该药物组合物还可包含至少一种成分。因此，根据本发明并且供本发明使用的药物组合物除活性成分之外，还可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲液、稳定剂或本领域技术人员熟知的其他材料。这样的材料应是无毒的，且应不干扰活性成分的功效。载体或其他材料的准确性质将取决于给药途径，其可以是口服的或通过注射(例如静脉注射)或通过在肿瘤位点沉积。

在一些实施方式中，MMP、proMMP、活化剂、MMP的抑制剂或其组合被配制为结晶微粒悬浮液，以延长释放，从而进一步维持组织、蛋白基质、器官等的分解代谢。该组合物可以通过局部施用、静脉滴注或注射、皮下、肌内、腹膜内、颅内和脊椎注射、经口服途径吞咽、吸入、经上皮扩散或可移植定时释放药物递送装置来给药。

在其他实施方式中，本文中具体实施的组合物可以与载体一起配制，其被配制为用于所述MMP、proMMP、活化剂、MMP的抑制剂或其组合的定时释放。考虑了各种定时释放排列。例如，组合物中MMP的顺序释放是有利的，使得存在特定MMP的连续的或定时的释放。这在对具有不同底物层的组织、基质、器官的应用中是特别期望的。例如，如果第一层是胶原蛋白且第二层是纤连蛋白，则可能期望释放MMP-2以降解胶原蛋白，接着释放MMP-12以使纤连蛋白分解代谢。此外，如果使用失活形式的MMP，则可能期望同时地、一种在另一种之前、一种在另一种之后或以它们的组合来释放MMP和特定活化剂。此外，如果期望包括对MMP特异性的抑制剂，则它们可被配制成在MMP己使所需的组织或蛋白基质分解代谢后的时间点释放。

在另一方面中，本发明提供了一种包含MMP、proMMP、活化剂、MMP的抑制剂或其组合、或药学上可接受的酯、盐或其前药以及药学上可接受的载体的药物组合物。本文中具体实施的组合物可以作为药物组合物通过任何常规途径给药，特别是肠内地(例如，口服地)，例如以片剂或胶囊剂的形式、或肠胃外地(例如，以注射液或悬浮剂的形式)、局部地(例如以洗剂、胶凝剂、软膏剂或霜剂的形式、或经鼻或栓剂的形式)。可以常规的方式通过混合、制粒或包衣方法来制造自由形式的或药学上可接受的盐形式的与至少一种药学上可接受的载体或稀释剂结合的本发明的包含MMP、proMMP、活化剂、MMP的抑制剂或其组合的药物组合物。例如，口服组合物可以是片剂或明胶胶囊剂，其含有活性成分以及a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂，还包含c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，包含d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。注射组合物可以是等渗水溶液或悬浮液，且栓剂可以由脂肪乳剂或悬浮液制得。该组合物可以是无菌的和/或含有佐剂(adjuvant)如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲液。此外，该组合物还可以含有其他治疗上有价值的物质。用于透皮给药的适合的制剂包括有效量的本发明的化合物和载体。载体可以包括可吸收的药学上可接受的溶剂，以帮助穿过宿主的皮肤。例如，透皮装置为含有支持元件的绷带、容纳化合物及可选地连同载体的储存器、可选地，随延长的时间段以受控和预定的速率将化合物递送至宿主皮肤的速率控制屏障以及将装置固定至皮肤的装置。也可以使用基质透皮制剂。用于局部给予例如皮肤和眼睛的适合制剂优选是本领域中熟知的水溶液、软膏剂、霜剂或凝胶。这样的制剂可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂(tonicityenhancingagent)、缓冲剂和防腐剂。可以使用适用于特定给药途径的任何合适的药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的载体的实例包括但不限于缓冲液、盐水或其他含水介质。本发明的化合物优选地可溶于用于其给药(例如皮下)的载体中。可替换地，使用在合适的载体中的一种或多种活性化合物的悬浮液(例如结晶微粒的悬浮液)。在一些实施方式中，MMP或proMMP中的一种或多种在液体载体中被配制成例如溶液、悬浮液、凝胶和/或乳液。一些实施方式包含任何适合的亲脂载体，例如修饰油(例如，CREMOPHOR^TMBASF，德国)、大豆油、丙二醇、聚乙二醇、衍生的聚醚、它们的组合等。一些实施方式包含用于MMP或proMMP中的至少一种的微粒和/或纳米颗粒载体。一些实施方式包含一种或多种时间(定时)释放试剂、缓释或控释载体或试剂，例如聚合物微球。时间(定时)释放试剂的实例包含：甘油、乙二醇、赤藓醇、阿拉伯醇、木糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、异麦芽糖、麦芽糖醇、乳糖醇和聚乙烯醇，单糖和二糖。MMP等可以被封装，从而随着时间被释放。一些实施方式包含适用于MMP、proMMP或其活性片段、活化剂或其抑制剂的微粒的稳定悬浮液的赋形剂。

本文中具体实施的组合物可以与载体材料一起配制，所述载体材料适于呈现物理特征如生物相容性且优选地，生物可降解性和生物可吸收性的组合，同时提供用于释放一种或多种MMP、proMMP、活化剂、MMP的抑制剂或其组合的递送载体。所用的载体材料是生物相容的，使得当被移植、降解或吸收时其不会导致诱发炎症或刺激。

因此，根据本发明的载体可以是生物可降解的或非生物可降解的。生物可降解组合物的代表性实例包括白蛋白、透明质酸、淀粉、纤维素和纤维素衍生物(例如，甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯)、酪蛋白、葡聚糖、多糖、纤维蛋白原、聚(D,L-丙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(羟基丁酸酯)、聚(烷基碳酸酯)和聚(原酸酯)、聚酯、聚(羟基戊酸)、聚二噁烷酮，聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚(苹果酸)、聚(羟基丙二酸)、聚酐、聚磷腈、聚(氨基酸)以及它们的共聚物。

非降解聚合物的代表性实例包括聚(乙烯-乙酸乙烯酯)(“EVA”)共聚物、硅酮橡胶、丙烯酸聚合物(聚丙烯酸，聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、聚烷基氰基丙烯酸酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚酰胺(尼龙6,6)、聚氨酯、聚(酯氨酯)、聚(醚氨酯)、聚(酯-脲)、聚醚(聚(环氧乙烷)、聚(环氧丙烷)、普朗尼克(pluronics)和聚(四甲撑二醇))、硅酮橡胶和乙烯基聚合物(聚乙烯吡咯烷酮、聚(乙烯醇)、聚(邻苯二甲酸乙酸乙烯酯)。也可以开发这样的聚合物，其是阴离子的(例如，海藻酸盐、羧甲基纤维素和聚(丙烯酸))、或阳离子的(例如，壳聚糖、聚-L-赖氨酸、聚乙烯亚胺、和聚(烯丙胺))。

聚合物载体包括聚(乙烯-乙酸乙烯酯)、聚氨酯、聚(D,L-乳酸)低聚物和聚合物、聚(L-乳酸)低聚物和聚合物、聚(乙醇酸)、乳酸和乙醇酸的共聚物、聚(己内酯)、聚(戊内酯)、聚酸酐、聚(己内酯)或聚(乳酸)与聚乙二醇(例如，MePEG)的共聚物、以及上述中任一种的混合物、共混物或共聚物。其他优选的聚合物包括多糖(如透明质酸、壳聚糖和脱氧半乳聚糖)、以及多糖与降解聚合物的共聚物。

可用于这些应用的其他聚合物包括羧酸聚合物、聚乙酸酯、聚丙烯酰胺、聚碳酸酯、聚醚、聚酯、聚乙烯、聚乙烯醇缩丁醛、聚硅烷、聚脲、聚氨酯、聚氧化物、聚苯乙烯、聚硫化物、聚砜、聚亚砜、聚卤乙烯、吡咯烷酮、热固性(定型)聚合物、可交联的丙烯酸和甲基丙烯酸聚合物、乙烯丙烯酸共聚物、苯乙烯丙烯酸共聚物、乙酸乙烯酯聚合物和共聚物、乙烯基乙缩醛聚合物和共聚物、环氧树脂、三聚氰胺、其他氨基树脂、酚醛聚合物、以及它们的共聚物、水不溶性纤维素酯聚合物(包括乙酸丙酸纤维素、乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、硝酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、及其混合物)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚环氧乙烷、聚乙烯醇、聚醚、多糖、亲水性聚氨酯、聚羟基丙烯酸酯、葡聚糖、黄原胶、羟丙基纤维素、甲基纤维素，以及N-乙烯基吡咯烷酮、N-乙烯基内酰胺、N-乙烯基丁内酰胺、N-乙烯基己内酰胺、具有极性侧基的其他乙烯基化合物、具有亲水酯化基团的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯、羟基丙烯酸酯和丙烯酸的均聚物和共聚物、及其组合；纤维素酯和醚，乙基纤维素、羟乙基纤维素、硝酸纤维素、乙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸丙酸纤维素；聚氨酯；聚丙烯酸酯；天然和合成的弹性体，橡胶、乙缩醛、尼龙、聚酯、苯乙烯聚丁二烯、丙烯酸树脂、聚偏氯乙烯、聚碳酸酯；乙烯基化合物、聚氯乙烯、聚氯乙酸乙烯酯的均聚物和共聚物。一般而言，参见授予Williams的美国专利号6,514,515；授予Park等人的美国专利号6,506,410；授予Mathiowitz等人的美国专利号6,531,154，授予Chudzik等人的美国专利号6,344,035；授予Zdrahala等人的美国专利号6,376,742；以及Griffith,L.A.,Ann.N.Y.Acad,ofSciences,961:83-95(2002)；以及Chaikof等人,Ann.N.Y.Acad,ofSciences,961:96-105(2002)。

此外，如本文中描述的聚合物也可以按需要在各种组合物(组成)中混合或共聚。如所讨论的聚合物载体可以制成具有所需的释放特征和/或具有特定所需性质的各种形式。例如，聚合物包衣可以制成以便一旦暴露给特定的触发事件如pH就释放MMP。pH敏感性聚合物的代表性实例包括聚(丙烯酸)及其衍生物(包括例如，均聚物如聚(氨基羧酸)；聚(丙烯酸)；聚(甲基丙烯酸)、这样的均聚物的共聚物、和聚(丙烯酸)和丙烯类单体(acrylmonomer)的共聚物，诸如上面讨论的那些。其他pH敏感性聚合物包括多糖如邻苯二甲酸乙酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素、偏苯三甲酸乙酸纤维素和壳聚糖。还有其他的pH敏感性聚合物包括pH敏感性聚合物和水溶性聚合物的任何混合物。

同样地，聚合物载体可以制成是温度敏感性的。热凝胶化聚合物(thermogellingpolymer)和其明胶温度的代表性实例包括均聚物如聚(N-甲基-N-正丙基丙烯酰胺)(19.8℃)、聚(N-正丙基丙烯酰胺)(21.5℃)、聚(N-甲基-N-异丙基丙烯酰胺)(22.3℃)、聚(N-正丙基甲基丙烯酰胺)(28.0℃)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)(30.9℃)、聚(N,n-二乙基丙烯酰胺)(32.0℃)、聚(N-异丙基甲基丙烯酰胺)(44.0℃)、聚(N-环丙基丙烯酰胺)(45.5℃)、聚(N-乙基甲基丙烯酰胺)(50.0℃)、聚(N-甲基-N-乙基丙烯酰胺)(56.0℃)、聚(N-环丙基甲基丙烯酰胺)(59.0℃)、聚(N-乙基丙烯酰胺)(72.0℃)。此外，热凝胶化聚合物可以通过制备上述的单体之间的共聚物，或通过将这样的均聚物与其他水溶性聚合物如丙烯类单体(例如，丙烯酸和其衍生物如甲基丙烯酸、丙烯酸酯和其衍生物如丁基甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺和N-正丁基丙烯酰胺)结合来制得。

可注射制剂使用本领域中己知的任何方法，例如使用单针、多针和/或使用无针注射装置来给药。在一些实施方式中，组织负载剂量的活性成分在通过注射递送的合适载体中配制。在一些实施方式中，递送包括单针注射。在一些实施方式中，递送包括使用多针阵列注射，在一些实施方式中，多针阵列注射使制剂在靶组织中广泛分散。在一些实施方式中，制剂以允许分散进入具有区域性脂肪的区域中组织或皮下脂肪的适当层中的方式来注射。

在一些实施方式中，例如，所述MMP、proMMP、活化剂或其任何组合，作为单独的制剂被注射，或可替换地，通过单独的途径给药。

在一些实施方式中，制剂包含用于提供持久或控制释放MMP或proMMP或活化剂或活性片段或其任何组合的一种或多种缓释或控释试剂。在这样的制剂中，MMP或proMMP或活化剂或活性片段或其任何组合，或者被封装入缓释或控释试剂或载体中、与其结合和/或与共轭至缓释或控释试剂或载体。在一些实施方式中，生物相容的、生物可降解的缓释或控释制剂提供了局部组织活性。缓释可以进行约12小时至12个月的时间段，例如1天、3天、7天、10天、1个月、45天、2个月、3个月、4个月、6个月、8个月、9个月、10个月、11个月或从约12小时至约12个月的任何其他时间段。适合的缓释或控释试剂或载体包括聚合物、大分子、活性成分轭合物、水凝胶、其污染物等。缓释载体的一些实施方式靶向脂肪，例如脂质体。优选地，选择缓释材料以便于每单位时间基本相同量的活性物质的递送。可以随时间进行几轮缓释制剂的注射以治疗单个区域。在一些实施方式中，缓释是由于将MMP等配制作为结晶药物微粒的悬浮液。

在一些实施方式中，该缓释试剂包含用于与一种或多种活性成分封装、结合或共轭的聚合物，例如，聚交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯乙交酯)聚乳酸、聚乙醇酸、聚酸酐、聚原酸酯、聚醚酯、聚己内酯、聚酯酰胺、聚碳酸酯，聚氰基丙烯酸酯、聚氨酯、聚丙烯酸酯和上述的混合物、共混物或共聚物。缓释聚合物的一些实施方式包含与一种或多种活性成分共轭的聚乙二醇基团。在一些实施方式中，该缓释试剂包含聚(丙交酯乙交酯)(PLGA，聚(乳酸-共-乙醇酸))共聚物。

该缓释试剂的一些实施方式包含包括修饰的海藻酸盐的一种或多种水凝胶。适合的修饰的海藻酸盐的实例包括WO98/12228中公开的那些海藻酸盐。该缓释试剂的一些实施方式包含基于白蛋白的纳米颗粒载体或赋形剂。

在一些实施方式中，包含预聚物溶液的制剂被注入到靶组织位点中，然后在该组织位点其在体内聚合(例如通过光聚合)或固化(例如通过使用温度敏感性胶凝材料)。

在一些实施方式中，该控释材料具有设计用于组织、蛋白质或基质减少的具体应用的释放特征。在一些实施方式中，缓释或控释试剂形成为被配制为注射液和/或凝胶的微粒如微球。在一些实施方式中，微粒大小的范围是直径为约10μm至约100μm(例如，约15μm、20μm、25μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm或从约10μm至约100μm的任何其他直径)。在一些实施方式中，该微粒的尺寸是均匀的。在其他实施方式中，该微粒大小的变化范围为约10％至约300％，例如30％、40％、50％、70％、80％、90％、120％、150％、170％、190％、200％、225％、250％、275％，或约10％至约300％内的任何其他百分比的大小变化。在一些实施方式中，包含MMP等的制剂被提供作为可注射凝胶或被加工成微球。在其他实施方式中，将它们形成为结晶微粒。用于微粒形成的适合的注射生物可降解的、生物相容性材料的其他实例包括壳聚糖、葡聚糖、羟磷灰石和硅。

使用任何方法包括通过溶剂蒸发和/或乳化聚合来形成微球和/或微粒。在一些实施方式中，该微球的平均直径为约5μm至约60μm，优选地，约20μm。在一些实施方式中，依据一种或多种活性成分的期望的释放速率，以不同的丙交酯与乙交酯的比例来制备PLGA。由于该共聚物的降解速率与其结晶度和制剂中乙交酯的比率成比例，因此丙交酯和/或乙交酯的非外消旋混合物提高了结晶度并减慢了降解速率。较高比例的丙交酯提高了降解速率。在一些实施方式中，约65％-75％丙交酯与约25％-35％乙交酯的比率使活性成分在约2周至约45天内释放。在其他实施方式中，丙交酯与乙交酯的比率为约0:100至约100:0，从而提供了其他释放速率。

该微球或微粒的一些实施方式包含空心和/或多孔内部。在一些实施方式中，该微球包含实心或多孔外壳。

在一些实施方式中，包含多孔外壳和/或微球的制剂展现了一种或多种活性成分随一种或多种活性成分的初始突释和接着与聚合物微球的降解有关的缓释的两阶段释放曲线。虽然不希望受理论的约束，但认为初始突释使组织负载有有效分解脂肪或分解代谢浓度的一种或多种活性成分，其中之后的更缓慢的释放维持所需的浓度。

在一些实施方式中，一种或多种活性成分以与聚合物微球相比，按质量计约10-12％的比例与聚合物封装、结合和/或共轭。作为载体(例如微粒或微球)的质量百分比的活性成分的量在本文中称为“活性成分负载”。如本文中使用的，术语“负载的”或“负载”指的是活性成分与载体基本上封装结合和/或共轭。在一些实施方式中，该活性成分负载可达约75％。因此，一些优选的制剂包含以每约10mg至约200毫克聚合物约1mg至约20mg活性成分(例如，约2mg、5mg、7mg、10mg、12mg、14mg、15mg、17mg、18mg或约1mg至约20mg内的任何其他量的活性成分)负载在聚合物微球上的一种或多种活性成分和/或其生理上可接受的盐和溶剂化物。在一些实施方式中，具有该活性成分负载的制剂足以用于提供按适于产生如本文中具体实施的分解脂肪的浓度的约12小时至约45天(例如，约3天、7天、16天、20天、25天、30天、35天、40天、42天或约12小时至45天内的任何其他时间段)的活性成分释放。

在一些实施方式中，两种或更多种活性成分负载到相同的微粒中，例如负载到脂质体或PLGA中。因此，一些实施方式中，封装一种或多种MMP等的聚合物被同时递送至脂肪组织。可替换地，两种活性成分负载在单独的微粒上。然后将两种类型的微球混合以获得具有所需各比率的制剂，然后同时给药。可替换地，两种类型的微粒被顺序给药。

将包含一种或多种活性成分的微球悬浮在约10ml至约20ml的适合的生理上可接受的液体载体中。在使用活性成分的分开的微球的一些实施方式中，微球在液体载体中混合在一起。在其他实施方式中，每种类型的微球分别与液体载体混合。在一些实施方式中，然后将微球悬浮液以1.0ml等份(小份，aliquot)皮下注射到刚好真皮下面，从而每ml微球悬浮液覆盖2.0cm²的面积，例如用于治疗脂肪团。在一些实施方式中，给予约10至约20次注射以覆盖从约20cm²至约40cm²的面积。在各种实施方式中治疗了较大和/或较小的面积。可替换地，在一些实施方式中，1.0ml至10.0ml的弹丸式注射被注入脂肪累积处(如颏下区域、髋外侧和臀部)或组织。可替换地，使用封装各活性成分的两种微球制剂在相同位置处分开和顺序地进行如上所述的注射。

在一些实施方式中，无针注射用于给予微粒制剂如悬浮剂或粉末化负载的微粒，即无需液体载体。

PLGA15微球封装疏水化合物比亲水化合物更容易。为了增加亲水性活性成分的负载，在一些实施方式中，用聚乙二醇单元来修饰微球。某些大小的微球基本上不被血液吸收，或不会被淋巴除去，从而能在靶区域内提供一种或多种活性成分的定位释放。例如，在一些实施方式中，该微球的直径为约20μm至约200μm，例如约30μm至约175μm、约50μm至约150μm、约75μm至约125μm或约20μm至约200μm内的任何其他直径。微球的大小也影响一种或多种活性成分在组织中的释放分布(曲线)。一般而言，较大的微球提供了较长和较均匀的释放分布。因此，在一些实施方式中，将基于所需的释放持续时间来选择制剂中的平均粒径。

在一些实施方式中，为待治疗的受试者提供非缓释制剂。在一些实施方式中，在单次给药后，非缓释制剂提供了一种或多种MMP等的活性。

在一些实施方式中，使用本领域中已知的任何适合方法，例如作为局部应用的霜或通过帖剂来经皮递送制剂。可替换地，本领域中已知的其他经皮递送手段也是有用的，例如通电设备(electircal)。还提供了可经皮递送的制剂的缓释实施方式，例如使用生物可降解的、生物相容性的活性成分-聚合物制剂或脂质体制剂，如本文中所述的。

在一些实施方式中，利用了药物或药物组合物的局部应用。对于单种物质，分配系数一般被测量为辛醇:水的比率或“LogP”，并且是给定物质的辛醇与水的相对亲和性的度量。LogP越高，物质越倾向于吸引辛醇，并且反之亦然。换言之，提供了用于给定物质的亲脂性与亲水性的相对度量。为了将试剂递送到皮肤中，最佳LogP的范围为1.0至5.0。福莫特罗(Formoterol)的LogP范围为2-4。酮替芬(Ketotifen)具有允许其被递送进入和穿过皮肤的相似物理性质。

各种局部制剂(包括软膏剂和霜剂)适用于药物或药物组合的递送。用于所提出的组合的示例性局部载体包括但不限于萜烯(如桉树脑(cineole)、乙酸芳樟酯、薄荷酮、d/l-薄荷醇)、脂肪酸酯(例如肉豆蔻酸异丙酯、油酸乙酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸丁酯)和长链醇(1-辛醇、1-癸醇、1-十二烷醇)。N-甲基吡咯烷酮与萜烯、脂肪酸酯和长链醇组合。萜烯、脂肪酸酯和长链醇与N-甲基吡咯烷酮的重量与重量比可以从100:0直至最大值60:40。在一些实施方式中，药物或药物组合的无针皮内注射被用于皱纹、疤痕形成和其他真皮病症的治疗。

本发明包含本发明化合物的药学上可接受的局部制剂。如本文中使用的术语“药学上可接受的局部制剂”指药学上可接受的用于本发明化合物通过对表皮施用制剂进行的皮内给药的任何制剂。在本发明的某些实施方式中，局部制剂包含载体系统。药学上有效的载体包括但不限于溶剂(例如，醇、多元醇、水)、霜剂、洗剂、软膏剂、油剂、硬膏剂、脂质体、粉末剂、乳剂、微乳剂和缓冲液(例如，低渗或缓冲盐水)或本领域中已知的用于局部给予药物的任何其他载体。本领域已知载体的更完全的清单由作为本领域中标准的参考文本提供，例如均由MackPublishingCompany，Easton，Pa.出版的Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明顿药物科学)的1980第16版和1985第17版，其全部公开内容通过引用的方式并入本文中。在某些其他实施方式中，本发明的局部制剂可包含赋形剂。本领域中已知的任何药学上可接受的赋形剂可以用于制备本发明的药学上可接受的局部制剂。可包含在本发明的局部制剂中的赋形剂的实例包括但不限于防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、滑润剂、缓冲剂、增溶剂，其他渗透剂、皮肤保护剂、表面活性剂和推进剂，和/或与本发明的化合物组合使用的其他治疗剂。适合的防腐剂包括但不限于醇、季胺类、有机酸、对羟苯甲酸酯和酚类。适合的抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸及其酯、亚硫酸氢钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基茴香醚、生育酚及类EDTA和柠檬酸的螯合剂。适合的保湿剂包括但不限于甘油、山梨糖醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。与本发明一起使用的适合的缓冲剂包括但不限于柠檬酸、盐酸和乳酸缓冲液。适合的增溶剂包括但不限于季铵氯化物、环糊精、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。可以用在本发明的局部制剂中的适合的皮肤保护剂包括但不限于维生素E油、尿囊素、二甲聚硅氧烷、甘油、矿脂和氧化锌。

还将意识到，本发明的药物组合物可以用在组合治疗中，即本文中具体实施的化合物和药物组合物可以与一种或多种其他所需治疗或医疗程序同时，在其之前或在其之后给予。组合方案中使用的治疗方法(治疗或程序)的特定组合将考虑所需治疗和/或程序的相容性以及待实现的所需治疗效果。还将意识到，所用的治疗(疗法)可实现对相同紊乱的所需效果，或它们可实现不同效果(例如，对任何副作用的控制)。

在某些实施方式中，本发明的药学上可接受的局部制剂包含至少一种本发明的化合物和渗透增强剂。局部制剂的选择将依据一些因素，包括待治疗的病症、本发明化合物和存在的其他赋形剂的理化特征、它们在制剂中的稳定性、可用的制造设备和成本约束。如本文中使用的，术语“渗透增强剂”指的是能将药理学上活性的化合物运输通过角质层并进入表皮或真皮的试剂，优选地，具有很少的或没有全身吸收。己评价了各种各样化合物的增强药物穿过皮肤的渗透速率的有效性。参见，例如，调查了各种皮肤渗透增强剂的用途和检验的PercutaneousPenetrationEnhancers(经皮渗透增强剂)，MaibachH.I.和SmithH.E.(eds.),CRCPress,Inc.,BocaRaton,Fla.(1995)和Buyuktimkin等人,ChemicalMeansofTransdermalDrugPermeationEnhancementinTransdermalandTopicalDrugDeliverySystems(经皮和局部药物递送系统中经皮药物渗透加强的化学手段)，GoshT.K.,PfisterW.R.,YumS.I.(Eds.),InterpharmPressInc.,BuffaloGrove,IU.(1997)。在某些示例性的实施方式中，与本发明一起使用的渗透剂包括但不限于甘油三酯(例如，大豆油)、芦荟组合物(例如，芦荟凝胶)、乙醇、异丙醇、辛基苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、N-癸甲基亚砜、脂肪酸酯(例如，肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、油酸甘油酯和丙二醇单油酸酯)和N-甲基吡咯烷。

在某些实施方式中，该组合物的形式可以为软膏剂、膏剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。在某些示例性的实施方式中，根据本发明的组合物的制剂是霜刘，其还可含有饱和的或不饱和的脂肪酸如硬脂酸、棕榈酸、油酸、棕榈油酸、鲸蜡醇或油醇，硬脂酸是特别优选的。本发明的霜剂也可含有非离子表面活性剂，例如，聚乙二醇-40-硬脂酸酯。在某些实施方式中，在无菌条件下将活性成分与可能需要的药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或缓冲剂混合。在本发明的范围内也考虑了眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂。此外，本发明考虑了具有能向身体提供化合物的可控递送的附加优点的经皮贴剂的用途。这样的剂型通过在适合的介质中溶解或分散化合物而制得。如上所讨论的，渗透增强剂也可以用来增加化合物穿过皮肤的通量。该速率可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。

试剂盒

本文提供了试剂盒，其包含在包装中准备用于根据本发明的方法的组分。典型地，也将提供实践本发明方法的书面说明书。所述试剂盒可包括一种或多种MMP等、介质等。也可提供用于稀释或重新制备活性成分的适合的缓冲剂。一些组分可以提供为干燥形式，并且可能需要重新制备。

在实施方式中，试剂盒包含一种或多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。在一些实施方式中，试剂盒包含一种或多种MMP、proMMP、片段和/或活化剂。活化剂的实例包括酶，例如将proMMP裂解为其活性形式的蛋白酶。在其他实施例中，如果例如，通过将MMP-活性位点修饰例如通过糖基化等使MMP-失活，则消除该修饰的试剂将是活化剂。

在一些实施方式中，用于分离干细胞的试剂盒包含一种或多种MMP、proMMP、片段和/或活化剂。活化剂的实例包括酶，例如将proMMP裂解为其活性形式的蛋白酶。在其他实施例中，如果例如，通过将MMP活性位点修饰例如通过糖基化等使MMP-失活，则消除该修饰的试剂将是活化剂。

在其他实施方式中，用于减少脂肪沉积、脂肪组织催化的试剂盒包含一种或多种MMP、proMMP、片段和/或活化剂。

在本申请中引用的所有出版物和专利文献出于所有目的通过引用并入相关部分中，程度如同如此单独地指示每个单独的公布或专利文献一样。申请人在本文件中对各种参考文献的引用并非是承认任何具体的参考文献是他们的发明的“现有技术”。

上述公开内容一般性描述了本发明。通过参考以下的具体实施例可以获得更全面的理解，本文中提供实施例仅用于说明的目的，并不旨在限制本发明的范围。

实施例

实施例1：MMP诱导的从脂肪组织中分离干细胞

主要己用胶原蛋白酶I或者由胶原蛋白酶I和II和嗜热菌蛋白酶组成的释放酶实现了源于脂肪的基质干细胞(ADSC)的分离(Priya,Sarcar等人,(2012)J.TissueEng.Regen.Med.Jul.27:1-9)。从极危险的梭状芽胞杆菌，一种气性坏疽试剂，纯化I和II型胶原蛋白酶。此外，来自溶组织梭菌的粗制剂不仅含有一些胶原蛋白酶，而且还含有巯基蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白样酶和氨基肽酶(aminopeptidase)。在释放酶产生的过程中，通过除去原材料中存在的相当大量的内毒素的过程来纯化胶原蛋白酶同工酶。相较于释放酶的内毒素水平，存在宽范围的传统胶原蛋白酶制剂的内毒素污染。然而，与来源无关，来自细菌金的所有纯化的胶原蛋白酶和中性蛋白酶都被内毒素污染(Priya,Sarcar等人,(2012)J.TissueEng.Regen.Med.Jul.27:1-9)。之前的研究己研究了不同胶原蛋白酶酶制剂中内毒素的相对量和对分离细胞健康的影响(Linetsky,E.,L.Inverardi等人(1998)。TransplantationProc.30:345-346；Jahr,H.,G.Pfeiffer等人(1999)J.Mol.Med.(Berl.)77:118-120；Salamone,M.,G.Seidita等人(2010)TransplantationProc.42:2043-2048)，并观察到内毒素的存在对ADSC生存力是有害的。此外，细胞移植的成功与分离的、培养的干细胞以及制备的同种异体移植物的质量成正比。

内毒素污染问题的解决方案是生产用于ADSC分离的重组酶。一个显著问题是I型胶原蛋白酶是释放酶的最不稳定的成分，因为Ia形式会被快速自催化降解为Ib形式。降解的胶原蛋白酶对胰岛生存力具有副作用(Brandhorst,H.,N.Raimsch-Guenther,等人(2008)TransplantationProc.40:370-371)。

本文中描述的是与胶原蛋白酶I和LIBERASE^TM(Hoffman-LaRoche,Ltd.)相比，利用MMP-3、MMP-9和MMP-12从脂肪组织中分离间充质干细胞(MSC)。分离的MSC在组织培养物中增殖，并表征形态和免疫表型(phetypically)。为了确保MSC分化潜能，诱导脂肪细胞分化。

材料和方法

酶：MMP的混合物用于实现对脂肪组织的有效分解代谢。包括广泛范围的MMP，其包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-19和MMP-25。MMP-1和MMP-8基于它们有效裂解I-III型胶原蛋白的能力来选择。MMP-2和MMP-9裂解IV和V型胶原蛋白。MMP-3和MMP-19具有对IV型胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白的活性，MMP-12有效裂解弹性蛋白，以及MMP-11裂解VI型胶原蛋白。该实验室己多年生产重组MMP-1、MMP-3、MMP-8、MMP-9和MMP-12。感兴趣的其他MMP(MMP-11、MMP-19和MMP-25)的重组生产可以在本发明的发明人的实验室中合成。

酶活化：从Sigma(St.Louis,MO(圣路易斯港口))获得了缓冲剂和糜蛋白酶。从Roche(旧金山，加利福尼亚)获得LIBERASE^TM。从WorthingtonBiochemical(莱克伍德，新泽西)获得I型胶原蛋白酶。从R&DBiosciences(圣迭，加利福尼亚)获得MMP-3和MMP-12，而从Calbiochem(比勒利卡，马萨诸塞州(MA))获得活性MMP-9。在37℃下用5ng糜蛋白酶/5ng胰蛋白酶混合物将MMP-3在20ng/μl浓度下活化30分钟。通过加入2mM的PMSF(Biosynth公司，伊塔斯加，IL)终止反应。MMP-12在TSB(50mM的Tris，150mM的NaCl，10mM的CaCl₂，1μΜ的ZnCl₂，0.01％的Brij-35，pH7.5)中自活化30小时。在TSB中用5μΜ的Knight底物测试125ng/μl的MMP-3和20ng/μl的MMP-12的酶活性。Knight单链肽(SSP)[Mca-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Lys(Dnp)-Ala-Arg-NH₂(SEQIDNO:1)]通过之前描述的方法合成(Nagase,H.,C.G.Fields等人(1994).J.Biol.Chem.269:20952-20957；Neumann,U.,H.Kubota等人(2004)。Anal.Biochem.328:166-173)。

从脂肪组织分离间充质干细胞：通过抽脂术从患者收集抽脂物。用PBS洗涤组织一次(50/50)，然后在37℃下，在间歇摇晃下在TSB(50mM的Tris，150mM的NaCl，10mM的CaCl₂，1μΜ的ZnCl₂，0.01％的Brij-35，pH7.5)中用酶(400ng/ml的各MMP-的脂肪组织，120U/m的脂肪组织胶原蛋白酶I和0.45Wunsch单位/ml的脂肪组织LIBERASE^TM作为对照)将2-10ml的组织消化60分钟。通过加入相同体积的DMEM-LG/10％的MSC合格的FBS和以3000×g离心20分钟来终止反应。去除顶层部分，并将含有MSC的剩余基质血管部分(SVF)重新悬浮在20ml的DMEM-LG/10％FBS中，通过100μm的尼龙网过滤，并以1200×g离心20分钟。通过在37℃下在RBC裂解缓冲液(8.7g/L的氯化铵)中培养SVF持续10分钟来去除残余的RBC。用DMEM-LG/10％的FBS通过以1200×g离心5分钟洗涤细胞。将细胞重新悬浮在DMEM-LG、10％的FBS和1×青霉素/链霉素中，并以5000个细胞/cm²的密度铺板到组织培养皿中。在细胞粘附1天后更换培养基。每3天更换一次培养基，直到实现70-80％的细胞汇合，此时细胞用TRYPLE^TM试剂(LifeTechnologies公司，Carlsbad，CA)去粘附，并以200个细胞/cm²传代进入MESENPRORS^TM培养基(LifeTechnologies公司，卡尔斯巴德，CA)。

分离的ADSC-生存力的评价：细胞用台盼蓝染色，并用CellometerT4Auto自动细胞计数器(NexcelomBioscience公司，Lawrence，MA)评价。

分离的ADSC-流式细胞的评价：在VGTI流式细胞核心设施(PortSt.Lucie，FL)上进行流式细胞实验。MSC用包括hMSC阳性标记物(CD73、CD90和CD105)、hMSC阴性标记物(CD1lb、CD19、CD34、CD45和HLA-DR)和同型对照抗体的BDSTEMFLOW^TM人MSC分析试剂盒(BDBiosciences公司，富兰克林湖，新泽西)染色。用不同方法分离的并且生长至第5代的MSC在4℃下在暗处用阳性、阴性和同型抗体染色对照染色30分钟。对于各样品，在BDLSRII分析仪(BDBiosciences公司，富兰克林湖，新泽西)上采集50000个事件，并通过Flowjo软件分析数据。

分离的ADSC-成脂分化的评价：使用成脂分化试剂盒(LifeTechnologies，卡尔斯巴德，CA)在汇合(confluent)培养物中诱导脂肪形成10天。在10天后，在室温下用200μl的油红O溶液(Sigma公司，圣路易斯，MO)将细胞染色10分钟以检测油滴形成。

结果

酶活化：根据厂商的说明书来活化市场上可购买的重组MMP-3和MMP-12酶，同时购买活性形式的MMP-9。使用自身产生的荧光Knight底物测试酶活性。所有酶显示出对Knight底物的可比较活性(图1)。

MSC的分离：在37℃下用胶原蛋白酶I、LIBERASE^TM、MMP-3、MMP-9或MMP-12将脂肪组织抽出物处理30分钟。SVF导致可变化的总细胞数并显示63.9％(对于MMP-3处理的样品)直至82.5％(对于MMP12处理的样品)之间的生存力。将分离的SVF以10⁴个细胞/cm²的密度铺板到10cm³组织培养皿中，并且在24小时后除去未粘附的细胞。将细胞培养5-7天以实现80％的汇合0代培养。

表1分离的SVC总细胞数和百分比生存力

酶	SVF细胞数/ml脂肪细胞	生存力％
			胶原蛋白酶I	1.36×10⁶	74.0
LIBERASE^TM	2.44×10⁶	70.0
			MMP-3	4.16×10⁵	63.9
MMP-9	3.19×10⁵	73.4
			MMP-12	3.0×10⁶	82.5

尽管最初MMP-9分离的SVF样品的强健的生存力，但是我们还是无法促进该样品中的MSC生长。由于SVF是不仅含有ADSC而且还含有前脂肪细胞、成纤维细胞、常驻单核细胞、淋巴细胞、血管平滑肌细胞和其他细胞的细胞异源混合物，因此初始计数和生存力必须包括没有ADSC被分离的所有上述细胞。所有其他处理的样品导致具有形态学相似的细胞的强健的MSC培养物。此外，在5代后，来自所有样品(除了前述MMP-9-分离物)的细胞保留优良的生存力和相似的形态。在生长参数如通过第10代的倍增时间和不同样品之间的细胞铺展中未观察到差异。由于通过胶原蛋白酶I和LIBERASE^TM分离的细胞的相似特征，本文示出的另外的实验比较了MMP-3、MMP-12和LIBERASE^TM分离的样品。

MSC的免疫表型特征：虽然没有唯一限定MSC的表面标记物，但普通表面标记物曲线(例如，CD34^-、CD45^-(HSC标记物)、CD31^-(内皮细胞标记物)、CD44⁺、CD90⁺、CD73⁺和CD105⁺)已经经常被用于限定MSC。对第5代进行了通过LIBERASE^TM、MMP-3和MMP-12分离的样品中表型MSC标记物的流式细胞分析(图3)。所有样品对MSC标记物、D73、CD90和CD105是呈99.8％或更高的阳性。使用其他MMP分离的MSC的分析产生了相似的结果(图7-10)。此外，这些样品中的MSC显示出了非常相似的标记物表达水平(图4)。由MMP-3和LIBERASE^TM分离的细胞对标记物CD44呈100％的阳性，而由MMP-12分离的样品，由于样品中低的细胞数，对该标记物未产生可靠结果。所有样品都测试了MSC阴性标记物(CD1lb、CD19、CD34、CD45和HLA-DR)和具有阴性结果的同型对照抗体的表达。

脂肪形成：通过用油红O对脂滴形成进行染色来检测由MMP-3、MMP-12、LIBERASE^TM(图5)和胶原蛋白酶I分离的样品的脂肪细胞分化潜力。由微观评价显示的所有样品中脂肪形成是可比较的。也观察了MMP-12分离后MSC的骨形成和软骨形成分化(图11)。

讨论

用于获得间充质干细胞的大量储存和可靠的分离方法对在未来临床使用中成功应用的这些细胞是至关重要的。由于几乎所有的干细胞应用在其目标使用之前都需要一定程度的体外扩增和操作，因而MSC的丰富来源是必要的。脂肪组织是这些MSC(ADSC)的理想来源，因为其是普遍存在且易获得的成体干细胞的来源，与其他MSC来源(如骨髓)相反，其具有最小的患者不适度。这些ADSC的分离必须是容易进行的和成本有效的，以及没有可能危害收获的细胞的有毒副产物。通过使用重组MMP分离ADSC可解决这些需求。

在该实施例中，己成功地展示了用MMP-3和MMP-12对ADSC进行分离，并且比较了用常用的胶原蛋白酶I和LIBERASE^TM分离的ADSC的形态、表型和脂肪形成潜力。

ADSC的形态学特征是：培养物中的成纤维细胞样形状、多向分化、广泛的增殖能力和普通表面标记物曲线(例如，CD34^-、CD45^-(HSC标记物)、CD31^-(内皮细胞标记物)、CD44⁺、CD90⁺、CD73⁺和CD105⁺)。通过MMP-3和MMP-12分离的ADSC显示出与通过细菌衍生的胶原蛋白酶I和LIBERASE^TM分离的细胞基本相同的形态和表型特征。用MMP-3、MMP-12和LIBERASE^TM分离的样品具有如由流式细胞术测定的相当水平的CD73、CD90和CD105，且阴性标记物呈阴性。此外，证明了与用LIBERASE^TM和胶原蛋白酶I分离的细胞相比，通过MMP-3和MMP-12分离的ADSC的保留了脂肪形成潜力。

有趣的是，对脂肪组织的MMP-9处理未生成任何ADSC。这可能是由于以下事实，即MMP-9是明胶酶且不能进入常驻在脂肪组织内含有的完整成胶的ECM网络中的ADSC。其他实验包括测试MMP和其他MMP(MMP-1、MMP-8(用于I型和III型胶原蛋白)、MMP-19(用于IV型胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白)、以及MMP-11(用于VI型胶原蛋白的消化))的混合物。

结论

本文中描述的应用重组MMP来分离ADSC是非常重要的，因为在没有最高质量的结缔组织降解酶的情况下，实际上不可能释放活ADSC而没有毒性副产物。该创新方法预期能得到以下成果。第一，将实现整个MSC分离和移植技术领域中的突破。第二，收集具有长时间预期寿命的最高质量的MSC将是可能的。第三，通过消除酶毒性，将开发用于脂肪组织处理和MSC分离的标准规程。第四，将在组织解离实践中引入高纯化的新重组MMP混合物，取代微生物来源的现有胶原蛋白酶并成为新标准。第五，该方法可以用于分离其他细胞，如胰岛细胞，其中现在的标准仍依赖于细菌来源的胶原蛋白酶。总之，本文中描述的研究将对多种组织和器官来源的细胞分离具有重大影响。

实施例2：各种细胞的分离

来自胰腺的胰岛分离：存在三个主要步骤：用MMP-混合物(例如两种或更多种MMP)原位灌注胰腺、胰腺消化和胰岛纯化。

首先用戊巴比妥或类似物麻醉小鼠，然后移到罩(hood)中。使各小鼠躺下，腹部侧向上，并用70％乙醇对其皮肤消毒。绕上腹部制作切口，以暴露肝和肠。用手术钳将小鼠壶腹部夹在十二指肠壁上，以阻塞胆汁到十二指肠的路径。通过将MMP混合物溶解在5ml的1×HBSS中制得3ml的缓冲液，并吸入装有30G1/2-G针头的5ml注射器中。然后在显微镜下将针头经肝管和胆囊管的结合位点插入胆总管中，并到达胆总管的中间。将溶液缓慢注入以使胰腺膨胀。移出胰腺，并置于容纳2ml的上述缓冲液的50ml的管中。短暂地摇晃该管，然后在37.5℃的水浴中放置15分钟。在培育后，用手摇晃该管以破坏胰腺，直至悬浮液变得均匀。一旦组织悬浮液溶解成非常细小的颗粒，通过将管放在冰上并在1×HBSS中加入25ml的1mM的CaCl₂来终止消化。在4℃下以290g离心30s，并弃去上清液。然后，用20ml冰冷的1mM的CaCl₂在1×HBSS缓冲液中重新悬浮小粒(pellet)，再次在4℃下以290g离心30s，并弃去上清液。用15ml的1mM的CaCl₂在1×HBSS液中重新悬浮所得小粒，然后倒入预湿润的70μm的细胞过滤网上。用20ml的1mM的CaCl₂洗涤该管，再次倒于过滤网上。通过过滤器在1×HBSS中倒入另外25ml的1mM的CaCl₂。过滤网倒置地盖在新的盖培养皿上，并用15ml的由L-谷氨酸盐(20mM)、盘尼西林(100Uml^-1)、链霉素(10μgml^-1)和RPMI1640介质中的FBS(10％)组成的缓冲液将获的的胰岛冲入皿中。使用具有大开口尖端的移液管手动挑选分离的胰岛，计数并在37℃下置于5％的CO₂培养箱中。

组织解离以分离各种细胞类型，包括心肌细胞、成纤维细胞和树突细胞：用于制备细胞悬浮液的方法是：(a)用机械通过切碎、筛分或刮开；(b)化学上是在没有二价阳离子的情况下进行；和(c)酶促上是通过用MMP、胶原蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、弹性蛋白酶、链霉蛋白酶、玻璃酸酶或用这些酶的选择性组合进行消化。

Claims

1.一种组合物，包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中，所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述MMP、所述失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)、或它们的组合。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物可选地包含至少一种MMP活化剂、至少一种MMP抑制剂、或它们的组合。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述至少一种MMP活化剂、或所述至少一种MMP抑制剂、或它们的组合可选地被封装。

6.根据权利要求4所述的组合物，其中，至少一种MMP、至少一种MMP活化剂、或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合包含控释制剂。

7.一种组合物，包含至少两种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的肽或蛋白质，其中，所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述组合物还包含三种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。

10.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述组合物可选地包含至少一种MMP活化剂、至少一种MMP抑制剂、或它们的组合。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中，所述至少一种MMP活化剂、或所述至少一种MMP抑制剂、或它们的组合可选地被封装。

12.根据权利要求10所述的组合物，其中，至少一种MMP、至少一种MMP活化剂、或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合包含控释制剂。

13.一种组合物，包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合。

14.根据权利要求13所述的组合物，其中，所述有效量的任何一种MMP或其酶原使脂肪组织解离或分解代谢。

15.根据权利要求13所述的组合物，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使脂肪组织解离或分解代谢。

16.根据权利要求13所述的组合物，包含含有所述活性片段的一种或更多种MMP或proMMP的一种或多种活性片段，其中，所述活性片段使脂肪组织分解代谢。

17.根据权利要求13所述的组合物，其中，所述MMP是活性的或失活的或它们的组合。

18.根据权利要求13所述的组合物，还包含使失活MMP活化的一种或多种试剂。

19.根据权利要求13所述的组合物，还包含药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的盐或其前药。

20.根据权利要求13所述的组合物，其中，所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)包含：核酸序列、蛋白质、多肽、肽、或其突变体和变异体。

21.一种从生物样品中分离干细胞的方法，包括：使所述生物样品与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中，所述组合物使所述生物样品分解代谢或解离，从而从所述样品中分离干细胞。

22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或多种MMP、失活MMP或proMMP的一种或多种活性片段。

23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述MMP或其片段是活性的或失活的或它们的组合。

24.根据权利要求22所述的方法，还包括给予使所述失活MMP或其片段活化的一种或多种试剂。

25.根据权利要求22所述的方法，其中，所述生物样品包含：上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜、基底层、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体、脑血管组织和液体、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、或任何器官组织。

26.根据权利要求22所述的组合物，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述生物样品解离或分解代谢，从而分离所述干细胞。

27.一种治疗患有与过量脂肪组织沉积有关的病症的受试者的方法，包括给予所述受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中，所述组合物使所述脂肪组织解离或分解代谢。

28.根据权利要求27所述的方法，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或多种MMP、失活MMP或proMMP的一种或多种活性片段，其中所述活性片段使脂肪组织解离或分解代谢。

29.根据权利要求27所述的方法，其中，与脂肪组织有关的病症包括：脂肪团、脂肪沉积、肥胖、代谢疾病或它们的组合。

30.根据权利要求27所述的方法，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述脂肪组织解离或分解代谢。

31.一种降低需要其的受试者中区域性脂肪沉积的方法，包括给予所述受试者包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的药物组合物，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-19、MMP-25、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中，降低了所述区域性脂肪沉积。

32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述药物组合物通过肠胃外、局部、肌内、皮下、或经皮给药途径来给予。

33.根据权利要求31所述的方法，其中，所述药物组合物在所述区域性脂肪沉积处或接近所述区域性脂肪沉积给予。

34.根据权利要求31所述的方法，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述脂肪沉积解离或分解代谢。

35.一种从组织中分离干细胞的方法，包括：使组织与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中，所述组合物使所述组织解离，从而从所述组织中分离干细胞。

36.根据权利要求35所述的方法，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或多种MMP、失活MMP或proMMP的一种或多种活性片段。

37.根据权利要求35所述的方法，其中，所述MMP或其片段是活性的或失活的或它们的组合。

38.根据权利要求35所述的方法，还包括给予使所述失活MMP或其片段活化的一种或多种试剂。

39.根据权利要求35所述的方法，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述组织解离或分解代谢。

40.根据权利要求35所述的方法，其中，所述组织包含上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜、基底层、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体、脑血管组织和液体、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、或任何器官组织。

41.一种治疗患有纤维性疾病的患者的方法，包括给予所述患者包含治疗有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述纤维组织解离或分解代谢。

43.一种编码至少一种或多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的表达载体，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

44.一种药物组合物，包含编码至少两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的表达载体，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

45.一种时间释放制剂，包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中，所述MMP、失活MMP或proMMP包含：基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

46.根据权利要求47所述的时间释放制剂，其中，所述时间释放制剂可选地包含至少一种MMP活化剂、MMP抑制剂或它们的组合。

47.根据权利要求45所述的时间释放制剂，还包含有效量的至少两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、或者五种或更多种所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合。

48.一种用于使组织解离的方法，包括使所述组织与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

49.根据权利要求48所述的方法，其中，所述组合物包含有效量的至少两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

50.根据权利要求48所述的方法，其中，所述组织包含：上皮细胞、结缔组织、脂肪组织、内皮细胞、基底膜、基底层、心脏组织、心内膜、顶端膜、基侧膜、细胞外基质、致密结缔组织、纤维结缔组织、嗅上皮、疏松结缔组织、粘蛋白、间皮、间质、网状结缔组织、骨髓、血液、血管、淋巴组织、肺、心血管组织、脑组织、脑脊髓组织和液体、脑血管组织和液体、神经组织、大脑、骨组织、皮肤、肌肉、胰腺组织、卵泡、脐带血组织、胎盘、肠道粘膜、脑组织、脊髓组织、心血管组织、结缔组织、脑脊髓液或组织、骨髓、真皮、血液、骨膜、纤维组织、疤痕组织、或任何器官组织。

51.一种使蛋白基质解离的方法，包括使蛋白基质与包含有效量的基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

52.根据权利要求51所述的方法，其中，所述组合物包含有效量的至少两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)。

53.根据权利要求51所述的方法，其中，所述蛋白基质包含：胶原蛋白、纤连蛋白、明胶、层粘连蛋白、蛋白聚糖、弹性蛋白、纤维蛋白、纤维蛋白原、或它们的组合。

54.一种组合物，包含编码至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的核酸序列，其中，所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

55.根据权利要求54所述的组合物，其中，所述组合物还包含编码至少两种或更多种、至少三种或更多种、至少四种或更多种、或者五种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的核酸序列，其中所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

56.根据权利要求54所述的组合物，其中，所述组合物可选地包含至少一种MMP活化剂、至少一种MMP抑制剂、或它们的组合。

57.根据权利要求56所述的组合物，其中，所述至少一种MMP活化剂、或所述至少一种MMP抑制剂、或它们的组合可选地被封装。

58.根据权利要求56所述的组合物，其中，至少一种MMP、至少一种MMP活化剂、或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合包含控释制剂。

59.一种治疗或治愈疤痕或伤口的方法，包括使疤痕组织或伤口与包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中，所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

60.根据权利要求59所述的方法，其中，所述MMP、所述失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)、或它们的组合。

61.根据权利要求59所述的方法，其中，所述组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。

62.根据权利要求59所述的方法，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述疤痕组织或伤口解离或分解代谢。

63.一种使纤维组织解离的方法，包括使所述纤维组织与包含至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中，所述基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体或它们的任何组合。

64.根据权利要求63所述的方法，其中，所述MMP、所述失活MMP或酶原(proMMP)包含：蛋白质、肽、多肽、核酸序列、cDNA、核糖核酸序列、嵌合分子、模拟肽、肽核酸(PNA)、或它们的组合。

65.根据权利要求63所述的方法，其中，所述组合物还包含药学上可接受的试剂、药学上可接受的盐或其前药。

66.根据权利要求63所述的方法，其中，所述有效量的任何两种或更多种MMP或proMMP、活性片段、变异体、突变体、或它们的任何组合使所述纤维组织解离或分解代谢。

67.一种从胰腺或胰腺组织中分离胰岛细胞的方法，包括：使所述胰腺或胰腺组织与包含有效量的至少一种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或其酶原(proMMP)的组合物接触，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合，其中，所述组合物使所述胰腺或胰腺组织分解代谢或解离，从而分离所述胰岛细胞。

68.根据权利要求67所述的方法，其中，所述MMP、失活MMP或其proMMP可选地包含含有所述活性片段的一种或多种MMP、失活MMP或proMMP的一种或多种活性片段。

69.根据权利要求67所述的方法，其中，所述MMP或其片段是活性的或失活的或它们的组合。

70.根据权利要求67所述的方法，还包括给予使所述失活MMP或其片段活化的一种或多种试剂。

71.根据权利要求67所述的方法，包括：使所述胰腺或胰腺组织与包含有效量的两种或更多种基质金属蛋白酶(MMP)或失活MMP或酶原(proMMP)、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合的组合物接触。

72.一种试剂盒，包括至少一种基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中，所述MMP、失活MMP或proMMP包含：基质金属蛋白酶(MMP)、失活MMP或其酶原(proMMP)，其中所述MMP、失活MMP或其proMMP包含：MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20、MMP-21、MMP-23A、MMP-23B、MMP-24、MMP-25、MMP-26、MMP-27、MMP-28、活性片段、突变体、变异体、其药物组合物、药学上可接受的盐或其前药、或它们的任何组合。

73.根据权利要求72所述的试剂盒，还包括至少一种MMP活化剂或至少一种MMP抑制剂、或它们的组合。