CN105412917B - 治疗实体瘤的抗癌组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种用于治疗实体瘤的抗癌组合物,其包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体,其中所述抗癌有效成分为一种或多种基质金属蛋白酶,优选为MMP‑1、MMP‑2、MMP‑3、MMP‑8、MMP‑9、MMP‑10、MMP‑11、MMP‑12、MMP‑13和MMP‑18中的一种或其任意组合。本申请还提供了抗癌组合物在制备用于治疗实体瘤的药物中的用途。本发明的抗癌组合物适用于瘤灶内注射或植入、瘤周注射或植入、癌症手术后瘤腔内注射或植入。该抗癌组合物可制成各种药物剂型,优选为注射剂。
Description
技术领域
本申请涉及一种治疗实体瘤的抗癌组合物以及治疗实体瘤的方法,本申请还涉及抗癌组合物在制备治疗实体瘤的药物中的用途。
背景技术
癌症已经成为人类第一位致死性病因,其主要原因是晚期难以控制的转移和扩散。后者是导致癌症患者治疗失败的主要原因。
癌症的转移是一个复杂的多因素参与的过程,其中基质金属蛋白酶(MatrixMetalloproteinases,MMPs)在此过程中起到重要作用(Kumar A,Collins HM,ScholefieldJH,Watson SA:Increased type-IV collagenase(MMP-2and MMP-9)activity followingpreoperative radiotherapy in rectal cancer.Br J Cancer 82:960–965,2000)。MMPs不仅介导肿瘤细胞对宿主的包括基底膜在内的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解,还调控肿瘤新生血管生长、影响细胞粘连分子的功能并在肿瘤发生发展、浸润、扩散、转移方面起着重要的作用。因此多年来,科学家一直试图通过抑制或降低MMPs活性或表达来实现治疗肿瘤的目的,如使用各种MMPs抑制剂、抗MMPs单抗等。然而,到目前为止此类尝试尚未见临床成功的先例。另外,也有研究试图通过激活或促进细胞外基质降解以实现治疗肿瘤的目的,但均未能取得理想疗效。
胶原酶为MMP的一个亚型,其种类繁多,功能尚不清楚;而且不同胶原酶之间的关系也不清楚,与其它MMPs的关系更有待探讨。粗制的胶原酶还含有其它水解酶,因此容易产生其它意想不到的副作用。
因此,需要寻求能够有效治疗癌症特别是实体瘤的新的抗癌组合物和治疗方法。
发明内容
一方面,本申请提供了一种治疗实体瘤的抗癌组合物,其包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体,其中所述抗癌有效成分为基质金属蛋白酶(MMP)。
在优选的实施方案中,抗癌组合物中的基质金属蛋白酶选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13和MMP-18或其任意组合。在更优选的实施方案中,抗癌组合物中的基质金属蛋白酶为MMP-1、MMP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13和MMP-18中的一种或其组合。
在某些实施方案中,上述抗癌组合物被配制成药学上可接受的剂型,优选为注射剂或植入剂。在一些实施方案中,胶原酶Ⅱ的浓度为0.5-250,000U/ml,优选为25-25,000U/ml,更优选为50-25,000U/ml,最优选为500-10,000U/ml。
在一些实施方案中,所述实体瘤可以是原发性的,也可以是转移性的;优选地,实体瘤选自癌、肉瘤和癌肉瘤。在优选的实施方案中,实体瘤选自肝癌、肺癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌或其转移癌。
另一方面,本申请提供了上述抗癌组合物在治疗实体瘤中的用途。
另一方面,提供了本发明的抗癌组合物在制备用于治疗实体瘤的药物中的用途,其中所述抗癌有效成分为基质金属蛋白酶(MMP)。
在一些实施方案中,所述实体瘤可以是原发性的,也可以是转移性的;优选地,实体瘤选自癌、肉瘤和癌肉瘤。在优选的实施方案中,实体瘤选自肝癌、肺癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌或其转移癌。
在某些实施方案中,包含本发明抗癌有效成分的药物以注射、灌注或植入的方式给药,优选地,所述药物经局部给药。在优选的实施方案中,所述药物经瘤灶内注射、瘤周注射或癌症手术后瘤腔内注射给药,优选地经瘤灶内注射给药。在另一实施方案中,所述药物经瘤灶内植入、瘤周植入或癌症手术后瘤腔内植入给药,优选地经瘤灶内植入给药。
在一些实施方案中,本发明的抗癌有效成分,即基质金属蛋白酶的给药剂量为每千克个体体重给予0.01到5,000,000U,优选为5到500,000U,更优选为5到100,000U,最优选为5-50,000U。再一方面,提供了治疗癌症,特别是实体肿瘤的方法,该方法包括将抗癌组合物给予患病个体来治疗实体瘤。在一些实施方案中,所述实体瘤可以是原发性的,也可以是转移性的;优选地,实体瘤选自癌、肉瘤和癌肉瘤。在优选的实施方案中,实体瘤选自肝癌、肺癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌或其转移癌。
具体实施方式
本申请提供了一种治疗实体瘤的抗癌组合物,其包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体,其中所述抗癌有效成分为基质金属蛋白酶(MMP)。
在优选的实施方案中,上述抗癌组合物包含的基质金属蛋白酶选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13和MMP-18或其任意组合。在更优选的实施方案中,抗癌组合物中的基质金属蛋白酶为MMP-1、MMP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13和MMP-18中的一种或其任意组合。
本发明所述的“基质金属蛋白酶(MMP)”是一类对细胞外基质(ECM)有特殊降解作用的蛋白水解酶,能降解细胞外基质的多种成分。这些成分包括但不限于胶原蛋白、明胶蛋白、纤维蛋白、结缔组织、糖蛋白、聚糖蛋白、糖胺聚糖(例如,透明质酸、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、肝素和硫酸角质素素等)、肿瘤血管、肿瘤细胞基膜、细胞结构蛋白、粘连蛋白、跨膜蛋白、各种细胞因子、受体(例如,VEGF、EGF、FGF、TGF)等。本发明可用的MMP有二十多种,根据其蛋白结构和作用底物的特异性可以分为5个亚型:(1)胶原酶、(2)明胶酶、(3)间质溶解素、(4)模型MTMMPs(MMP14,15,16,17,24,25)以及(5)其他亚群(MMP7,12,20,23)等。
在本发明某些实施方案中,本发明抗癌组合物中的MMP为胶原酶。目前认为胶原酶至少有5种以上。胶原酶在其活性位点含有Zn2+,且与其底物的结合及形成完全催化活性所需的构型需要Ca2+。通过在三股螺旋上多个位点的水解,它将胶原降解成短肽,后者可能对肿瘤血管有抑制作用。
胶原酶不仅可以分解或降解多种胶原蛋白,还参与机体免疫及蛋白跨膜运动。胶原酶是降解细胞外基质特别是降解胶原蛋白的主要成员。在明胶酶和或间质溶解素存在的情况下,胶原酶对ECM的降解作用明显增强。此外,胶原酶对其它细胞外间质及其中的巨噬细胞、免疫细胞、细胞生长因子、血管生长因子均有不同程度的直接或间接的降解作用。
本发明的基质金属蛋白酶的来源包括但不限于从组织细胞提取获得、由发酵工程获得等。基质金属蛋白酶可以为重组蛋白,还可以是合成的氨基酸片段等。
适用于本发明的基质金属蛋白酶可以为目前已知的MMP,未来开发出的具有降解ECM功能的蛋白水解酶同样适用于本发明,以及对目前已知的MMP进行修饰、改造所得到的衍生物、氨基酸片段,以及具有降解、水解、破坏细胞外基质功能的其他蛋白水解酶同样适用于本发明。
在优选的实施方案中,本发明抗癌组合物中的MMP可以选自MMP-1、8、13、18中的一种或其组合;可以为MMP-2和/或MMP-9;以及可以为MMP-3、10、11中的一种或其组合。本发明药物组合物中的MMPs还可以选自以下组合:
1)MMP-1与MMP-2、MMP-9、MMP-3、MMP-10或MMP-11的组合;
2)MMP-8与MMP-2、MMP-9、MMP-3、MMP-10或MMP-11的组合;
3)MMP-13与MMP-2、MMP-9、MMP-3、MMP-10或MMP-11的组合;
4)MMP-18与MMP-2、MMP-9、MMP-3、MMP-10或MMP-11的组合;以及
5)MMP-2或MMP-9与MMP-3、MMP-10或MMP-11的组合。
在更优选的实施方案中,本发明抗癌组合物中的MMP为单独的MMP-1、MMP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13或MMP-18,或者其任意组合。
本发明人经过大量研究发现,应用纯化的胶原酶、明胶酶等基质金属蛋白酶对癌症的生长具有明显的剂量依赖性抑制作用,局部应用基质金属蛋白酶可以有效地治疗癌症,尤其是局部应用时对实体肿瘤有出乎意料的治疗优势。本发明应用的外源性MMP可能在作用于癌细胞的同时,还会作用于细胞外间质,降解胶原蛋白或结缔组织、肿瘤血管和/或肿瘤细胞基膜,通过对间质的水解作用使肿瘤生长失去支撑和必要的营养。结果,肿瘤的供血减少或停止,导致肿瘤细胞死亡。这一过程还可能激活一系列的细胞免疫,从而诱发或激活免疫系统向肿瘤进一步的攻击,从而抑制肿瘤生长和扩散。另外,基质金属蛋白酶可能直接降解肿瘤细胞的胶原蛋白或通过激活其它蛋白水解酶发挥作用。
本申请所述的“药学上可接受的载体”指不干扰活性成分的生物活性有效性的载体。本申请的药学上可接受的载体可以为固体或液体,包括药学上可接受的赋形剂、缓冲剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、稀释剂、封装剂、填充剂等。例如,药学上可接受的缓冲剂进一步包括磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐以及碳酸盐等。
本申请的抗癌组合物可以呈现为单位剂量形式,并且可以通过任一制药领域公知的方法制备。所有方法都包括将本申请的活性成分与一种或几种药学上可接受的载体结合的步骤。通常,通过将活性成分与液体载体、固体载体或二者结合来制备组合物,随后根据需要来定型制备的产物。例如,适于胃肠外给药的组合物可以是包含活性组分的无菌水性或非水性制剂。可以根据已知的方法,使用合适的分散剂或湿润剂以及悬浮剂制备上述制剂。在可接受的载体或溶剂中,可以使用水、林格氏液以及等渗的氯化钠溶液等。
在某些实施方案中,本发明所述的抗癌组合物被配制成药学上或临床上可接受的任一剂型,包括但不限于片剂、胶囊、软膏、糊剂、贴剂、颗粒剂、喷雾剂、注射剂、缓释微球、植入剂等。在优选的实施方案中,所述剂型为缓释剂。更优选地,配制的剂型为注射剂或植入剂。
本发明的“注射剂”是指由药物制成的供注入体内的溶液(包括乳浊液和混悬液)以及供临用前配成溶液或混悬液的粉末或溶液。所述注射剂包括但不限于水溶液注射剂、微球注射剂、凝胶型注射剂、脂质体注射剂、纳米粒注射剂、储库型控释注射剂、无针注射释药系统等。
本发明的“植入剂”指将药物与辅料制成的小块状或条状供植入体内的无菌固体制剂。植入剂可采用特制的注射器植入,也可用手术切开植入。本发明的植入剂还包括以液体形式注射于人体、在生理条件下转变为固体或半固体药物贮库的植入剂形式,即注射型原位形成植入剂(injectable in situ forming implants)。
在优选的实施方案中,将本发明的抗癌组合物制备成局部应用的水溶液,其含有安全且有效治疗浓度的基质金属蛋白酶。优选地,将所述组合物制备成在相对小体积中MMP浓度较高的水溶液。可选地,也可以将本发明的抗癌组合物先冷冻干燥,装在安剖瓶中,临用前将其配制成适用于注射入肿瘤内的药学上可接受的水溶液。
优选地,用新鲜蒸馏的去离子无菌水来制备用于可注射用溶液的缓冲液。可以使用任何合适的缓冲溶液如磷酸缓冲液、Ringers缓冲液或Tris缓冲液来配制抗癌组合物。优选的缓冲液的pH范围约为6.0到8.0,优选为6.5到7.5,更优选为6.7-7.0。例如,可以使用浓度为0.1-0.25mol/L、优选0.15-0.2mol/L的氯化钠来溶解或稀释组合物。再例如,使用的磷酸缓冲液的浓度为0.02-0.2mol/L,优选为0.05-0.15mol/L。上述缓冲液适用于MMP的配制,如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-13和MMP-18等。
在某些实施方案中,本发明的抗癌活性成分基质金属蛋白酶在注射剂中的浓度为0.5-250,000U/ml,优选为25-25,000U/ml,更优选为50-25,000U/ml,最优选为500-10,000U/ml。
本发明所用的基质金属蛋白酶可以自制,也可以商购。可以是重组、合成的蛋白,也可以是从人及动物组织细胞分离纯化的。优选地,本发明所用的基质金属蛋白酶为纯化的MMP。例如,MMP-1、2、8、9、13、18可从Sigma或Life Technologies等公司购得。作为示例,MMP-1的酶活力为26800U/100mg/支,用无热原的盐水重新溶解至所需的浓度。所有酶的活性都以每mg国际单位表示。例如,一个单位胶原酶活性的定义为在钙离子存在时,在温度为37℃以及pH为7.4的条件下,5小时内能从天然胶原释放肽(相当于茚三酮颜色)成1微摩尔L-亮氨酸的胶原酶量。可以按本领域已知的方法确定胶原酶和其它酶的活性。
另一方面,提供了上述抗癌组合物在治疗实体瘤中的用途。
本文所用的“治疗”包括抑制、治愈和减轻癌症、特别是实体瘤或其症状,以及预防或延缓原发癌症的转移。
另一方面,提供了本发明的抗癌组合物在制备用于治疗癌症、特别是实体瘤的药物中的用途。在优选的实施方案中,所述药物的有效成分为基质金属蛋白酶。在更优选的实施方案中,所述抗癌有效成分选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13和MMP-18或其任意组合。
在优选的实施方案中,本发明的抗癌有效成分、优选为MMP-1、MMP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13或MMP-18的给药剂量为每千克个体体重给予0.01到5,000,000U,优选为5到500,000U,更优选为5到100,000U,最优选为5-50,000U,例如为5-1,000U。胶原酶Ⅱ的剂量在实际应用时可以按照医生的要求选用。
给药剂量可以按患者的年龄、病症的特性、肿瘤体积、组合物的效力及给药途径变化。例如,对小于3g的肿瘤,可以应用单次灌输的剂量。灌输剂量可以为2-5ml,优选地含有25-25,000U/ml胶原酶Ⅱ。缓慢地将药物注射入肿瘤,如约5-10分钟。当肿瘤为5到10g时,在第一次注射剂量后还可以再次施用较大剂量的抗癌组合物。例如,第一次施用5ml灌注剂量。然后,缓慢地施用第二份20-40ml的相同组合物,例如给药时间为约10-20分钟。如果需要可以顺序给药,但一般不超过80ml总体积。例如,可以再次应用这种治疗,如每周或每月给药一次。对于大于10到15g的肿瘤,第一次给药的灌注剂量可以至多为60ml,随后可以应用更大的剂量,但一般不超过100ml的总体积。
在某些实施方案中,上述药物以注射、灌注或植入的方式给药,优选地,所述药物经局部给药。局部给药包括将药物应用于脏器和/或癌细胞或肿瘤内或其附近,优选为肿瘤内。局部给药还包括用药物包围癌性肿瘤或将药物应用于癌性肿瘤的表面。在一实施方案中,将药物通过直接的肿瘤内注射或灌注给药于癌症局部,优选实体瘤局部。例如,小容量如约2ml或更少的药物通过注射给药。而较大的容量如8ml以上的药物则通过缓慢灌注约10-30分钟给药。
在优选的实施方案中,所述药物经瘤灶内注射、瘤周注射或癌症手术后瘤腔内注射给药,优选地经瘤灶内注射给药。在其他优选的实施方案中,所述药物经瘤灶内植入、瘤周植入或癌症手术后瘤腔内植入给药,优选地经瘤灶内植入给药。
可选地,可以通过任意其他方式,将酶特异性导向癌内或癌周围。可以选用的方式例如利用不同的载体系统将组合物送递到所需的部位。可以应用缓释组合物,例如可以用缓释植入法提供这种制剂,或以微胶囊或吸附于生物可降解聚合物提供这种制剂。其它载体系统文献已有描述,例如将酶制剂包埋在生物可降解小泡中的方法,以保护酶的活性且有利于特异性送递。例如可以将酶包埋在脂质体或其它生物可降解微胶囊中,与用于特异性定位的组织特异性单克隆抗体相连。各种形式的酶包埋技术可用于包埋酶,包括但不限于活细胞空胞、合成的聚合物微胶囊以及由胆固醇、卵磷脂和磷脂酸构成的脂类小泡(脂质体)等。用受体本身的红细胞递送活性酶可以避免由潜在的在合成载体(如脂质体和微胶囊)中应用酶所引起的免疫和生理问题。将聚乙二醇(PEG)共价连接于酶可以使这些蛋白质无免疫原性,可以延长它们的循环半衰期,从而逃避天然酶抑制剂的抑制作用,而且可以在减少自体溶解的情况下提高酶活性。PEG与蛋白质的连接可以采用本领域公知的方法来实现,此外通过超滤纯化可以得到均匀的反应产物。
本发明的抗癌活性成分、或包含该活性成分的抗癌组合物或药物可以治疗的实体瘤为原发性的或转移性的,优选地选自癌、肉瘤和癌肉瘤,以及优选地,所述实体瘤包括但不限于:鳞癌、腺癌、间皮瘤、中枢神经系统肿瘤、胶质瘤、呼吸系统肿瘤、肺癌、泌尿生殖系统肿瘤、肾癌、膀胱癌、消化系统肿瘤、肝癌、胆囊癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、直结肠癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、皮肤癌、血管瘤、骨肿瘤、淋巴瘤、骨肉瘤、乳腺癌、视网膜肿瘤、鼻咽癌、子宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌等等。可以治疗的癌症还包括上述原发癌症的转移瘤,例如结直肠癌的肝转移,乳腺癌的骨转移、全身肿瘤的脑转移等。在更优选的实施方案中,所述实体瘤选自肝癌、肺癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌或其转移癌。
在一实施方案中,本发明的抗癌组合物用于治疗肝癌。例如,通过肝内局部注射组合物来治疗肝癌。可以通过经皮穿刺路径给药,所应用的组合物的给药体积为0.001ml到80ml,优选含有0.5到250,000U/ml的MMP-1;更优选地,含有50到25,000U/ml的MMP-1。
在一实施方案中,本发明的抗癌组合物用于肺癌的治疗。例如,通过肺内局部注射组合物来治疗肺癌。可以通过经皮穿刺路径给药,所应用的组合物的给药体积为0.001ml到80ml,优选含有0.5到250,000U/ml MMP-8;更优选地,含有50到25,000U/ml的MMP-8。
在一实施方案中,本发明的组合物用于治疗乳腺癌。例如,通过乳腺内局部注射组合物治疗乳腺癌。可以通过在指诊控制和/或超声波指导下,将一长的细针插入乳腺内进行乳腺内注射。这种注射通常是在局部麻醉下进行的,且注射溶液可以用碘卡因稀释。在注射过程中,针可以不时地重定位,以使组合物得到能最好地分布。
在一实施方案中,本发明的组合物用于治疗前列腺癌。例如,通过前列腺内局部注射含有MMP-18的组合物来治疗前列腺癌。前列腺内注射可以经腹膜或经直肠路径,所应用的组合物的给药体积为0.001ml到80ml,优选含有0.5到25,000U/ml的MMP-18;更优选地,含有50到25,000U/ml的MMP-18。
在另一实施方案中,本发明的抗癌组合物含有MMP-2,用于直肠癌治疗;在又一实施方案中,本发明的抗癌组合物含有MMP-8、MMP-9、MMP-13或其任意组合,用于胃癌治疗。在又一实施例中,本发明的抗癌组合物含有MMP-9用于甲状腺癌治疗;在另一实施例中,抗癌组合物含有MMP-13用于乳腺腺癌治疗。
因此,在另一方面,本申请提供了利用抗癌组合物治疗癌症的方法,该方法包括给予患病个体治疗有效量的抗癌活性成分。优选地,该有效量足以降解肿瘤、肿瘤间质、间质内血管、肿瘤细胞及各种细胞因子,治愈或减轻癌症。上述抗癌组合物可以治疗的癌症选自原发癌症或转移癌症,如原发或转移的癌、肉瘤、癌肉瘤,包括但不限于,鳞癌、腺癌、间皮瘤、中枢神经系统肿瘤、胶质瘤、呼吸系统肿瘤、肺癌、泌尿生殖系统肿瘤、肾癌、膀胱癌、消化系统肿瘤、肝癌、胆囊癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、直结肠癌、头颈部肿瘤、口腔肿瘤、甲状腺癌、皮肤癌、血管瘤、骨肿瘤、淋巴瘤、骨肉瘤、乳腺癌、视网膜肿瘤、鼻咽癌、子宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、转移瘤等。
在优选的实施方案中,所述抗癌活性成分选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13和MMP-18或其任意组合。更优选地,所述抗癌活性成分为MMP-1、MMP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13和MMP-18的一种或其组合。
在优选的实施方案中,本发明的抗癌有效成分的给药剂量为每千克个体体重给予0.01到5,000,000U,优选为5到500,000U,更优选为5到100,000U,最优选为5-50,000U,例如5-1,000U。
本申请所述的“个体”,是指哺乳动物,包括但不限于灵长类动物、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫以及诸如大鼠和小鼠的啮齿类动物。
本文中,有效成分、活性成分以及活性组分可以交替使用,除非另有所指。基质金属蛋白酶与MMP可以交替使用,除非另有所指。
本说明书和权利要求书中,词语“包括”、“包含”和“含有”意指“包括但不限于”,且并非意图排除其他部分、添加物、组分、或步骤。
应该理解,在本发明的特定方面、实施方案或实施例中描述的特征、特性、组分或步骤,可适用于本文所描述的任何其他的方面、实施方案或实施例,除非与之矛盾。
上述公开内容总体上描述了本发明,通过下面的实施例进一步示例本发明。描述这些实施例仅为说明本发明,而不是限制本发明的范围。尽管本文中使用了特殊的术语和值,这些术语和值同样被理解为示例性的,并不限定本发明的范围。除非特别指明,本说明书中的实验方法和技术为本领域技术人员所公知的方法和技术。
实施例
以下实施例中使用的实验动物为体重20-26g的雄性昆明小鼠,购自山东鲁抗医药集团中心实验动物室。注射的癌瘤细胞由山东省医学科学院提供。实验中使用的MMP购自Life Technologies公司,菠萝蛋白酶购自Sigma公司。
肿瘤体积的测量方法:用游标卡尺分别测量肿瘤的长径和短径,肿瘤体积的计算公式为:V=(长径*短径2)/2。
统计学方法:结果以均值±标准误表示。两组数据间采用t-检验分析,多组结果比较采用单因素方差分析Tukey检验(One-way ANOVA Tukey's test)进行分析,P<0.05为差异有显著性。
实施例1 不同剂量的MMP对肝脏肿瘤生长的影响
将2x105个肝癌瘤细胞皮下注射于小白鼠的季肋部,待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只,见表1)。第1组为对照组,第2-4组为MMP-1治疗组,第5-7组为菠萝蛋白酶治疗组,第8-10组为MMP-7治疗组。药物经瘤内注射,剂量按公斤体重(mg/kg)计算(具体剂量见表1),每天给药一次,共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小,比较各组的治疗效果(参见表1)。所用的MMP-1的活力为268U/mg,菠萝蛋白酶的活力为800U/mg,MMP-7的活力为186U/mg。
表1
组别(n=6) | 接受治疗 | 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) | P值 |
1 | 对照 | 3892±670 | |
2 | MMP-1,0.04mg/kg | 2811±249 | <0.05 |
3 | MMP-1,0.08mg/kg | 1946±195 | <0.01 |
4 | MMP-1,0.16mg/kg | 973±97.3 | <0.001 |
5 | 菠萝蛋白酶,0.5mg/kg | 3568±541 | >0.05 |
6 | 菠萝蛋白酶,2mg/kg | 3027±486 | >0.05 |
7 | 菠萝蛋白酶,8mg/kg | 2270±368 | <0.01 |
8 | MMP-7,0.10mg/kg | 3784±649 | >0.05 |
9 | MMP-7,0.20mg/kg | 3568±486 | >0.05 |
10 | MMP-7,0.40mg/kg | 3297±357 | >0.05 |
如表1的结果所示,不同的MMP单独应用时对肿瘤生长的抑制作用差别很大。例如,MMP-1在仅为0.04mg/kg时,就能够显著抑制肿瘤生长;而MMP-7在高达0.40mg/kg时仍无明显的抑瘤作用。菠萝蛋白酶在0.5和2mg/kg不能有效地抑制肿瘤生长,当增加到8mg/kg时,对肿瘤产生了显著的抑制作用(P<0.01)。
MMP-1能够显著抑制肿瘤生长,其作用表现出明显的量效关系。例如,0.04mg/kgMMP-1治疗组的肿瘤体积为2811±249mm3(P<0.05,相比于对照组的肿瘤体积3892±670mm3);用0.08mg/kg MMP-1治疗时,肿瘤体积降到了1946±195mm3(P<0.01);0.16mg/kgMMP-1治疗组的肿瘤体积则进一步降至973±97.3mm3(P<0.001)。
这些数据表明,MMP-1在剂量远远低于其他MMP时就能够产生显著的抑制肿瘤作用。而且,MMP-1对抗肿瘤的生长呈现剂量依赖性。
实施例2 不同剂量的MMP对直肠肿瘤生长的影响
将2x105个直肠癌瘤细胞经皮下注射于小白鼠季肋部,待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只,见表2)。第1组为对照组,第2-4组为MMP-2治疗组,第5-7组为菠萝蛋白酶治疗组,第8-10组为MMP-7治疗组。药物经瘤内注射,剂量按公斤体重(mg/kg)计算(具体剂量见表2),每天给药一次,共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小,比较各组的治疗效果(参见表2)。所用的MMP-2的活力为180U/mg,菠萝蛋白酶的活力为800U/mg,MMP-7的活力为186U/mg。
表2
组别(n=6) | 接受治疗 | 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) | P值 |
1 | 对照 | 2143±217 | |
2 | MMP-2,0.03mg/kg | 1468±197 | <0.05 |
3 | MMP-2,0.07mg/kg | 1027±126 | <0.01 |
4 | MMP-2,0.14mg/kg | 470±141 | <0.001 |
5 | 菠萝蛋白酶,0.5mg/kg | 1996±232 | >0.05 |
6 | 菠萝蛋白酶,2mg/kg | 1761±191 | >0.05 |
7 | 菠萝蛋白酶,8mg/kg | 1321±112 | <0.01 |
8 | MMP-7,0.10mg/kg | 2084±338 | >0.05 |
9 | MMP-7,0.20mg/kg | 1996±211 | >0.05 |
10 | MMP-7,0.40mg/kg | 1849±167 | >0.05 |
如表2的结果所示,不同的MMP单独应用时对肿瘤生长的抑制程度差别很大。例如,MMP-2在仅为0.03mg/kg时,就能够显著抑制肿瘤生长;而MMP-7在高达0.40mg/kg时仍无明显的抑瘤作用。菠萝蛋白酶在0.5和2mg/kg不能有效地抑制肿瘤生长,当增加到8mg/kg时,对肿瘤产生了显著的抑制作用(P<0.01)。
MMP-2在剂量远远低于其他MMP时就能够产生显著的抑制肿瘤作用。而且,MMP-2以剂量依赖性的方式对抗肿瘤生长。
实施例3 MMP-8对不同体积肿瘤的抑制作用比较
将相同性别、相近体重的小白鼠分为3组,分别将不同数量的肺癌瘤细胞经皮下注射于小白鼠季肋部,其中第1组皮下注射2x105个瘤细胞,第2组皮下注射5x105个瘤细胞,第3组皮下注射2x106个瘤细胞。待肿瘤生长14天后测量瘤体大小,然后每组动物随机分为两小组(n=6),其中一组接受MMP-8瘤内注射,经瘤内一次注射0.1ml,每毫升注射剂含1000UMMP-8,另一组接受等量生理盐水。治疗后第10天再次测量肿瘤体积大小,比较肿瘤生长抑制率(见表3)。所用胶原酶Ⅱ(MMP-8)的活力为342U/mg。
表3
表3的数据表明,MMP-8能够显著抑制肿瘤的生长,而且应用等量的MMP-8对不同体积的肿瘤生长抑制程度不同。肿瘤体积越大,实现相同的抑制效果需要的药物剂量越大。
实施例4 不同剂量的MMP对胃癌抑制作用的比较
将2x105个胃癌瘤细胞经皮下注射于小白鼠季肋部,待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只,见表4)。第1组为对照组,第2-4组为MMP-8治疗组,第5-7组为MMP-9治疗组,第8-10组为MMP-13治疗组。药物经瘤内注射,剂量按公斤体重(mg/kg)计算(具体剂量见表1),每天给药一次,共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小,比较各组的治疗效果(参见表4)。所用的胶原酶Ⅱ(MMP-8)的活力为342U/mg;MMP-9的活力为219U/mg;MMP-13的活力为240U/mg。
表4
组别(n=6) | 接受治疗 | 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) | P值 |
1 | 对照 | 1650±315 | |
2 | MMP-8,0.04mg/kg | 1295±96.5 | <0.05 |
3 | MMP-8,0.08mg/kg | 939±107 | <0.01 |
4 | MMP-8,0.16mg/kg | 457±93.9 | <0.001 |
5 | MMP-9,0.10mg/kg | 1269±165 | <0.05 |
6 | MMP-9,0.20mg/kg | 914±117 | <0.01 |
7 | MMP-9,0.40mg/kg | 482±147 | <0.001 |
8 | MMP-13,0.10mg/kg | 1269±152 | <0.05 |
9 | MMP-13,0.20mg/kg | 1015±132 | <0.01 |
10 | MMP-13,0.40mg/kg | 508±147 | <0.001 |
如表4的结果所示,几种MMP即MMP-8、MMP-9和MMP-13在不同的剂量均可显著抑瘤肿瘤生长,并且其作用均表现出明显的量效关系。此外,从剂量上看,0.16mg/kg的MMP-8的抑制作用与0.4mg/kg的MMP-9和MMP-13的抑制作用相当,这表明在相同剂量下MMP-8能更好地抑制肿瘤生长。
实施例5 MMP-13对不同体积肿瘤的抑制作用比较
将相同性别、相近体重的小白鼠分为3组,分别将不同数量的乳腺癌瘤细胞经皮下注射于小白鼠季肋部,其中第1组皮下注射2x105个瘤细胞,第2组皮下注射5x105个瘤细胞,第3组皮下注射2x106个瘤细胞。待肿瘤生长14天后测量瘤体大小,然后每组再随机分成两小组(n=6),一小组接受MMP-13瘤内注射,另一小组注射等量生理盐水。MMP-13经瘤内一次注射0.1ml,每毫升注射剂含1000U MMP-13。治疗后第10天再次测量肿瘤体积大小,比较肿瘤生长抑制率(见表5)。所用的MMP-13的活力为240U/mg。
表5
如表5的结果所示,应用等量的MMP-13对不同体积的肿瘤生长抑制程度不同。肿瘤体积越大,实现相同的抑制效果需要的药物剂量越大。
实施例6 MMP-18经不同途径给药时的体内抑瘤效果比较
将5x105个前列腺癌瘤细胞皮下注射于小白鼠的季肋部,待肿瘤生长7天后将其分为以下10组(每组6只,见表6),通过不同途径注射MMP-18。第1组为对照,第2-4组为瘤内注射(IT)组,第5-7组为瘤周注射(PT)组,第8-10组为皮下注射(SC,距离肿瘤边缘1-2厘米)组。药物的给药剂量按公斤体重(U/kg)计算,每毫升注射剂含1000UMMP-18。每天给药一次,共3次。治疗后第15天测量肿瘤体积大小,比较各组的治疗效果(见表6)。所用MMP-18的活力为356U/mg。
表6
试验组(n=6) | 接受治疗 | 肿瘤体积(mm<sup>3</sup>) | P值 |
1 | 对照 | 1868±343 | |
2 | IT,100U/kg | 824±129 | <0.05 |
3 | IT,300U/kg | 494±98.9 | <0.01 |
4 | IT,900U/kg | 330±115 | <0.001 |
5 | PT,100U/kg | 1236±146 | <0.05 |
6 | PT,300U/kg | 961±206 | <0.05 |
7 | PT,900U/kg | 604±132 | <0.05 |
8 | SC,100U/kg | 1786±302 | >0.05 |
9 | SC,300U/kg | 1483±231 | >0.05 |
10 | SC,900U/kg | 1181±168 | <0.05 |
如表6的结果所示,MMP-18的给药途径不同,对肿瘤生长的抑制程度有明显差异。瘤内注射组(组2-4)和瘤周注射组(组5-7)在几个不同的剂量(100U/kg,300U/kg和900U/kg)均能显著抑制肿瘤生长,其中瘤内注射组的抑瘤作用最强,且呈现明显的剂量依赖性。相比之下,皮下注射组(组8-10)在给药剂量为900U/kg才产生有统计学意义的抑瘤作用。
可以理解,尽管本发明以某种形式被说明,但本发明并不局限于本说明书中所显示和描述的内容。对本领域的技术人员显而易见的是,在不偏离本发明的范围的前提下还可做出各种变化。这些变化都在本发明要求保护的范围内。
Claims (7)
1.抗癌组合物在制备用于治疗实体瘤的药物中的用途,所述组合物包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体,其中所述抗癌有效成分为MMP-1,以及所述实体瘤为肝癌或其转移癌。
2.抗癌组合物在制备用于治疗实体瘤的药物中的用途,所述组合物包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体,其中所述抗癌有效成分为MMP-13,以及所述实体瘤选自乳腺癌、胃癌或其转移癌。
3.抗癌组合物在制备用于治疗实体瘤的药物中的用途,所述组合物包含抗癌有效成分以及药学上可接受的载体,其中所述抗癌有效成分为MMP-18,以及所述实体瘤为前列腺癌或其转移癌。
4.如权利要求1-3任一项所述的用途,其中所述抗癌组合物被配制成药学上可接受的剂型。
5.如权利要求1-3任一项所述的用途,其中所述抗癌组合物被配制为注射剂、植入剂或灌注剂。
6.如权利要求1-3任一项所述的用途,其中所述药物被配制为经局部给药的剂型。
7.如权利要求6所述的用途,其中所述局部为瘤灶内、瘤周或癌症手术后瘤腔内。
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