CN105242052A - 一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,涉及血清铜直接光度法检测技术领域,特别涉及一种血清铜检测试剂,本发明由试剂R1和R2组成,试剂R1中含有过氧化氢、吐温-80、聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯异辛基苯基醚和醋酸-醋酸钠,防腐剂叠氮钠和二乙胺,试剂R2中含有3,5-idBr-PADAP、醋酸-醋酸钠缓冲液。试剂R1中含有吐温-80、聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯异辛基苯基醚,显著提高了Cu2+与3,5-idBr-PADAP结合形成的络合物的稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及血清铜检测技术领域,特别涉及一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂。
背景技术
铜是人体必需的微量元素之一,正常成人体内铜含量为80~150mg,血循环铜占铜总的10%。血浆中约95%的铜与α2球蛋白牢固结合,称为铜蓝蛋白(Ceruloplasmin),其余5%为游离铜或与白蛋白结合。铜是许多酶的重要组成成分,在中枢神经系统中具有重要作用。它可以和蛋白质结合形成铜蛋白,具有保护细胞的功能,铜还是某些酶的组成部分或激活剂。与白蛋白疏松结合的铜是运输、吸收、排泄的重要形式和中间环节,也是合成各种细胞蛋白的原料。铜参与造血过程,主要影响铁的吸收、运输和利用。铜主要在小肠上段吸收,随胆汁排泄,肝脏是铜代谢的中心。
铜含量异常通常与疾病相关。心脑血管疾病、血液病(如淋巴瘤、霍奇金病等)、恶性肿瘤和肝胆系统疾病均会导致血清铜含量升高。血清铜含量低常见为营养贫血、婴儿营养不良等疾病。
临床上常用的铜检测方法有原子吸收分光光度法和比色法。
1.原子吸收分光光度法
血清用去离子水等量稀释,吸入原子化器,铜在高温下离解成铜原子蒸汽。在铜的空心阴极灯发射的324.5nm谱线中,部分发射光被蒸汽中的基态铜原子吸收,光的吸收量与火焰中铜离子的浓度成正比。该方法特异性好,灵敏度高,检测结果准确可靠,但由于原子吸收光谱仪价格昂贵,无法在临床上普及使用。
2.化学比色法
用稀盐酸使血清中与蛋白质相结合的铜游离出来,再用三氯醋酸沉淀蛋白质,滤液中的铜离子与双环己酮草酰二腙(dicyclohexanoneoxalydihydrazone)反应,生成稳定的蓝色化合物,与同样处理的标准液比较,即可求得血清铜含量。该方法操作简便,试剂易得,临床使用较多,但该方法并不适应全自动生化分析仪。
3.直接光度法
血清铜在试剂R1中的铜解离剂和非离子表面活性剂的作用下从血清蛋白质中快速裂解开来。Cu2+在pH4.0HAc-NaAc缓冲液中与试剂R2中的3,5-二溴-2-吡啶偶氮形成稳定的络合物,吸光度最大且恒定。该方法简单实用,检测结果准确,检测范围广,适合全自动生化分析仪。
鉴于此,本发明在在苦味酸法的基础上,优化反应体系,添加多种抗干扰物质和稳定剂,显著改善了试剂的抗干扰能力。
发明内容
为了克服以上问题,本发明提供了一种适合与全自动生化分析仪配套使用的血清铜检测试剂盒,该试剂盒与常规的试剂盒相比,使用简单、方便,具有很好的准确度、重复性及良好的检测范围,有利于试剂在临床上的推广应用。
基本原理
血清铜在试剂R1中的铜解离剂和非离子表面活性剂的作用下从血清蛋白质中快速裂解开来。Cu2+在pH4.0HAc-NaAc缓冲液中与试剂R2中的3,5-二溴-2-吡啶偶氮形成稳定的络合物。
本发明是通过以下步骤得到的:
一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,由R1、R2双试剂组成。其特征在于:
R1:
过氧化氢1.0%
吐温-800.5%
聚乙二醇辛基苯基醚0.1%
聚氧乙烯异辛基苯基醚0.3%
二乙胺0.5%
叠氮钠0.5g/L
醋酸-醋酸钠缓冲液pH4.0
R2:
3,5-idBr-PADAP2.5g/L
醋酸-醋酸钠缓冲液pH4.0。
一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1:R2=200:50。
一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,所述的非离子表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯异辛基苯基醚和吐温-80。
根据所述的,该试剂适用于多种全自动生化分析仪。
一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,所述的一种防腐剂是NaN3和二乙胺。
本发明的有益效果是:
(1)本发明选择直接光度法设计试剂配方用于检测血清铜,该试剂适用于多种全自动生化分析仪;
(2)本发明使用了三种非离子表面活性剂,分别是聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯异辛基苯基醚和吐温-80,保证了Cu2+与3,5-idBr-PADAP结合形成的络合物的稳定性。
附图说明
图1为两种试剂的相关性曲线图;
图2为本发明试剂开瓶稳定性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明:
实施例1
一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,包试剂R1和试剂R2:
R1:
过氧化氢1.0%
吐温-800.5%
聚乙二醇辛基苯基醚0.1%
聚氧乙烯异辛基苯基醚0.3%
二乙胺0.5%
叠氮钠0.5g/L
醋酸-醋酸钠缓冲液pH4.0
R2:
3,5-idBr-PADAP2.5g/L
醋酸-醋酸钠缓冲液pH4.0。
本实施例试剂的使用方法:
本实施例描述的血清铜检测试剂,在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪,如日立7180全自动分析仪等,利用两点终点法进行测定。将R1和R2按照4:1的比例放置到对应的试剂位上,在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本,操作如表1:
表1实施例1试剂检测方法
血清铜的含量(μmol/L)=(?A测定/min÷?A标准/min)×C标准。
实施例2
干扰性试验:取新鲜混合血清,分成2等份,然后将每等份再分成5等份,加入不同的干扰物质,使其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂,与市场常见并认可的血清铜试剂同时对比测定血清铜的含量,对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值-对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。
表2实施例试剂抗干扰性能比较
由表2可以看出,实施例1试剂在D-青霉胺≤250mg/L、尿酸≤2250mg/L、胆红素≤100mg/L、血红蛋白≤200mg/L、肝素钠≤200mg/L对测试结果没有明显干扰。与对照试剂检测结果一致,说明实施例1的试剂在准确度和抗干扰能力上达标。
实施例3
相关性实验:利用实施例1配方配制试剂,与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的血清铜试剂盒进行对照检测,同时检测了20个临床血清样本,检测结果如表3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示),通过检测结果显示,两个试剂盒的相关系数为0.999,说明了两者有极大的相关性。
表3实施例1试剂与市场常见并得到认可的血清铜测定试剂盒对比检测结果
试验所用校准品和质控品分别为:
校准品:朗道复合标准(938UN),其中Cu的含量为19.2μmol/L;
质控品:朗道复合质控(1005UN)其中Cu的靶值为15.8μmol/L,靶值范围:12.6-19.0μmol/L。
实施例4
试剂稳定性验证试验的具体操作方法:
将本发明实施例1~3中所得检测试剂作为试验组,取一种市售血清铜检测试剂盒作为对照组,试验组与对照组试剂每组各自取相同的两份,一份做15天开瓶稳定性试验,将试剂开瓶放置在仪器的2-8℃冷藏箱中(15天不取出),作为15天开瓶稳定性检测;另一份做37℃热稳定性检测试验,封闭放置在37℃恒温水浴锅中(每天仅在检测的时候取出,检测完毕后,依然封口放回37℃水浴锅中,连续7天),作为7天37℃热稳定性验证。将试剂同时在日立7180全自动生化分析仪器上,按照表1方法进行检测,并在仪器上建立标准曲线。取朗道的冻干粉质控品,溶解均匀后,平均分成15份,-20℃储存,每天质控一个,并且跟踪检测结果,其开瓶跟踪监测趋势如图2。
Claims (5)
1.一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,由R1、R2双试剂组成,其特征在于:
R1组分:
过氧化氢1.0%
吐温-800.5%
聚乙二醇辛基苯基醚0.1%
聚氧乙烯异辛基苯基醚0.3%
二乙胺0.5%
叠氮钠0.5g/L
醋酸-醋酸钠缓冲液pH4.0
R2组分:
3,5-idBr-PADAP2.5g/L
醋酸-醋酸钠缓冲液pH4.0。
2.根据权利要求1所述的一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1:R2=200:50。
3.根据权利要求1所述的一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,其特征在于,该试剂适用于多种全自动生化分析仪。
4.根据权利要求1所述的一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,其特征在于,稳定剂为聚乙二醇辛基苯基醚、聚氧乙烯异辛基苯基醚和吐温-80。
5.根据权利要求1所述的一种适合全自动生化分析仪的血清铜检测试剂盒,其特征在于防腐剂为NaN3和二乙胺。
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CN106501244A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-03-15 | 宁波普瑞柏生物技术股份有限公司 | 血清铜离子定量检测试剂 |
CN111239120A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-05 | 绍兴市人民医院 | 一种血液钙离子检测试纸 |
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- 2015-10-24 CN CN201510694529.2A patent/CN105242052A/zh active Pending
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