CN105208879A - 产生米糠水解物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了(优选地脱脂的)米糠水解物组合物，所述米糠水解物组合物包含大于50wt％(按干物质计)的(多)肽，并且具有至少10％，优选地在10％与16％之间的DH(水解度)，以及大于90％，优选地大于95％的(多)肽具有大于500Da的分子量(MW)。根据本发明的另一方面，提供了一种产生(优选地，具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量的)(优选地脱脂的)米糠水解物组合物的方法，所述方法包括：-添加含水液体优选地水到(优选地脱脂的)米糠中；-将液体与固体级分分离以获得经洗涤的固体级分；-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；-优选地于在6与8之间的pH下进行酶孵育；-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；-在30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及-任选地将液体与固体级分分离；其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。

Description

产生米糠水解物的方法
技术领域
本发明涉及一种通过有限的蛋白水解来从(优选地，脱脂的)米糠中温和地提取蛋白质的方法。所述米糠在经受有限的蛋白水解之前被洗涤。
背景技术
农业来源的蛋白质提取可受到蛋白质本身的溶解性或者蛋白质在基质中与其他组分的相互作用的妨碍。所述溶解性转而又受到收集蛋白质之前的处理步骤的影响。例如，材料的脱脂极大地降低了蛋白质的溶解性。因此，应用蛋白水解技术来增大蛋白质的溶解性以及由此增加蛋白质提取率。蛋白水解酶的使用大部分由于高水解度而产生苦味产物，其在食品中应用有限。
米糠是碾米过程的副产品。通常，碾米产生约15重量百分数(wt％)的破损籽粒、约10wt％的米糠，约20wt％的外壳，以及约55wt％的完整籽粒。米糠的典型蛋白质含量是约14wt％。米糠中的其他成分是水分(约10wt％)、粗油(约20wt％)、总膳食纤维(约18wt％)、淀粉(约22wt％)、灰分(约8wt％)，以及其他成分(约8wt％)。从米糠中获得的有价值产品是米糠油，米糠油是从胚芽和糠层提取的油。在去油之后，剩余的脱脂产品往往被用于饲料应用中。脱脂米糠的含脂量一般低于5wt％。据估计，年产大于7千万吨米糠，其仍然包含若干有价值的成分，如蛋白质。
米糠蛋白的提取已公布于文献中。提取法包括在碱性条件下使用水和/或有时与植酸酶组合地使用若干糖酶(如淀粉酶)。已知的是，从未经处理的米糠中提取蛋白质是困难的。然而，在脱脂米糠的情况下，蛋白质提取是甚至更艰巨的任务，这是因为在油提取期间，尤其是在用于移除残余己烷的烘烤过程期间的热处理造成蛋白质变性。
US2011/0152180描述了来源于热稳定化的脱脂米糠的生物活性五肽。US2011/0152180使用碱性蛋白酶(Alcalase)，碱性蛋白酶是一种非常活跃的酶并且因此当与不同的米糠来源孵育时导致强烈的蛋白质降解。根据US2011/0152180的实施例1，最佳的水解度是23.4％。
Silpradit等人(OptimizationofricebranproteinhydrolysateproductionusingAlcalase，2010，AsJFoodAg-Ind3(02)，221-231)描述了使用碱性蛋白酶进行米糠水解物生产的条件。
发明概述
本发明提供了(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物，所述米糠水解物组合物包含大于50wt％(按干物质计)的(多)肽，并且具有至少10％，优选地在10％与16％之间的DH(水解度)，以及大于90％，优选地大于95％的(多)肽具有大于500Da的分子量(MW)。
本发明还提供了(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物，所述米糠水解物组合物包含大于50wt％(按干物质计)的(多)肽，并且具有在10％与16％之间的DH(水解度)，以及大于90％，优选地大于95％的(多)肽具有大于500Da的分子量(MW)。
根据本发明的另一方面，提供了一种产生(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体优选地水到(优选地，脱脂的)米糠中；
-将液体与固体级分分离以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地于6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-在30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
本发明还提供了一种产生具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量的(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体优选地水到(优选地，脱脂的)米糠中；
-将液体与固体级分分离以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地于6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-在30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
发明详述
贯穿本说明书和所附权利要求书，措词“包括”与“包含”应被解释为包含性的。也就是说，这些措词旨在表达在上下文允许的情况下，可能包括未具体叙述的其他要素或者整体。
本文不使用数量词时是指一个/种或多于一个/种的(即，一个/种或者至少一个/种)的语法对象。例如，“要素”可指一个/种要素或多于一个/种的要素。
在本发明中，源材料(即米糠，优选地脱脂米糠)的洗涤与通过蛋白酶的水解组合在一起，所处的这种条件使得获得的米糠蛋白水解物包含大于50wt％(按干物质计)的(多)肽，其中低量的所述(多)肽具有小于500Da的分子量(MW)。
洗涤和温和水解的技术被优选地应用于脱脂米糠。然而，所描述的方法对于其他米糠来源(诸如，粗米糠和热稳定化的米糠)也是有效的/适用的。
为了保证(优选地，脱脂的)米糠或者其他农业材料的价值，提供了基于有限或温和的水解以及优选地之后进行固/液分离的方法。液体和不可溶的物流都可被进一步干燥。这种蛋白酶处理之后进行分离的一个优点在于所获得的固体级分(团粒)具有高量的总膳食纤维，其也可用于多种食品应用中。
米糠是指稻谷的坚硬外层，由组合的糊粉(aleurone)和果皮(pericarp)组成。米糠与胚芽一起作为完整稻谷的组成部分，并且往往作为精米生产中的碾米副产品被产生。粗米糠是在碾米之后获得的米糠。脱脂米糠是指其中存在的至少部分油被通过例如提取移除的米糠。油提取是例如在大约60-65摄氏度下用己烷进行的，而用于己烷移除的去烘烤一般是在110摄氏度下进行的。稳定化米糠是指在碾米之后一般被在130摄氏度下稳定小于10秒的米糠。
水解以从多种农业来源提取蛋白质是熟知的方法。关于米糠，除了更广泛应用的碱提取技术之外，还存在使用酶获得蛋白质级分的若干研究，参见例如US20110305817。相较于使用糖酶，使用蛋白酶通常更成功(参见例如Fabian和Ju(AReviewonricebranprotein：itspropertiesandextractionmethods，CriticalReviewsinFoodScienceandNutrition，2011，第51卷，816-827)的概述酶促方法的综述)。在文献中已经研究了若干蛋白酶用于获得更高的蛋白质提取率(相较于糖酶)。这些水解产物通常是苦味的水解物组合物，因此不能广泛地应用于食品中。
在本发明中，洗涤(优选地，脱脂的)米糠以及对此经洗涤的米糠使用温和的蛋白水解技术产生相较于未经洗涤的(优选地，脱脂的)米糠水解物具有增大的蛋白质重量百分比(按干物质计)的米糠蛋白水解物。本发明的稻谷水解物组合物广泛适用于多种食品应用，诸如饮料、烘烤食品和乳品应用。
本发明还涉及一种产生(优选地具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量)(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体，优选地水，到(优选地，脱脂的)米糠中；
-将液体与固体级分分离，以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地在6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-在30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
本发明还涉及(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物，所述米糠水解物组合物包含大于90％的分子量(MW)大于500Da的(多)肽以及至少10％，优选地在10％和16％之间的水解度。优选地，所述(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物包含大于95％的分子量大于500Da的(多)肽。
本发明还提供了(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物，所述米糠水解物组合物包括大于50wt％(按干物质计)的(多)肽，并且具有在10％与16％之间的DH(水解度)，以及大于90％，优选地大于95％的(多)肽具有大于500Da的分子量(MW)。
除了(多)肽之外，所述脱脂米糠水解物组合物可包含碳水化合物、脂肪和矿物质(通常测定为灰分级分)。
优选地，所述(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物是通过本发明的方法可获得的，或者是通过本发明的方法获得的。优选地，本发明的水解物组合物中存在的二肽和三肽的含量小于5wt％。优选地，本发明的水解物组合物中存在的游离氨基酸的含量小于2wt％。有利地，在本发明的方法中使用的米糠是脱脂米糠，以及所获得的水解物组合物是脱脂米糠水解物组合物。
在本文中，“肽”被定义为经由肽键连接的至少两个氨基酸的链。“多肽”在本文中被定义为包含多于30个氨基酸残基的链，并且包括蛋白质。如本文所用的，蛋白水解物是已经在蛋白酶的作用下被水解的蛋白质。蛋白酶是水解氨基酸之间的肽键的酶。蛋白质由一或更多个多肽组成，所述多肽由经由肽键连接在一起的氨基酸组成。蛋白水解物可以是已经被水解到在5％与35％之间，例如在8％与25％之间或者在10％与16％之间的水解度(DH)的蛋白质，所述DH被表示为被切割的肽键/原始存在的肽键总数×100％。
(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物是从(优选地，脱脂的)米糠产生的、包含至少50wt％，优选地至少55wt％，更优选地至少60wt％(按干物质计)的蛋白质诸如(多)肽和游离氨基酸的组合物。
根据本发明，将含水液体优选地水添加到(优选地，脱脂的)米糠中，以及随后从经洗涤的固体级分分离液体。可在添加水之后立即进行分离，或者优选地所述分离在一段时间之后进行，例如在至少0.5分钟、至少1分钟、至少2分钟、至少5分钟、至少20分钟、至少60分钟，或者在0.5分钟与5小时之间之后。在此时间间隔期间，使水与脱脂米糠有利地混合。此后可用任何方便的方式，诸如通过采用过滤和/或离心，从固相或者固体级分分离含水相、含水溶液或者含水级分。所述液体级分一般将包含化合物如碳水化合物和矿物质(灰分)。
本发明因此提供了一种产生(优选地具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量的)米糠蛋白水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体，优选地水，到米糠中；
-用所述含水液体孵育所述米糠至少0.5分钟、至少1分钟、至少2分钟、至少5分钟，优选地至少20分钟，更优选地至少60分钟；
-将液体与固体级分分离，以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，更优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地于6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-在30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
本发明还提供了一种产生(优选地具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量的)米糠蛋白水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体，优选地水，到米糠中；
-在4-80℃的温度下，优选地在室温下用所述含水液体孵育所述米糠至少0.5分钟、至少1分钟、至少2分钟、至少5分钟，优选地至少20分钟，更优选地至少60分钟；
-将液体与固体级分分离，以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地于6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-于30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
本发明还提供了一种产生(优选地具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量的)米糠蛋白水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体，优选地水，到米糠中；
-在4-80℃的温度下，优选地在室温下，混合所述米糠与所述含水液体至少0.5分钟、至少1分钟、至少2分钟、至少5分钟，优选地至少20分钟，更优选地至少60分钟；
-将液体与固体级分分离，以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地在6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-于30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
本发明还提供了一种产生(优选地具有大于50wt％(按干物质计)的蛋白质含量的)米糠蛋白水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体，优选地水，到米糠中；
-在4-80℃的温度下，优选地在室温下，以及在4-8范围内的pH下，孵育，优选地混合所述米糠与所述含水液体至少0.5分钟、至少1分钟、至少2分钟、至少5分钟，优选地至少20分钟，更优选地至少60分钟；
-将液体与固体级分分离，以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地在6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-于30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地将液体与固体级分分离；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
更优选的pH范围是4-7、5-7或者6-7。
在又一优选实施方式中，所述米糠是脱脂米糠。
所使用的含水液体优选地是水。在本发明的方法中可使用任何种类的水，诸如饮用水、自来水、纯净水(蒸馏水、重蒸馏水、去离子水或者反渗透水)。此外，所使用的水可包含至少一种添加成分，诸如EDTA或者柠檬酸。优选地以低浓度添加此类成分。
通过添加水之后进行分离步骤，相较于没有这些步骤的方法可在最终的米糠水解物组合物中获得增大的蛋白质含量。有利地，本发明的(优选地，脱脂的)米糠水解物包含大于50wt％(按干物质计)的(多)肽。在没有这些步骤的情况下，(优选地，脱脂的)米糠水解物一般包含35wt％到42wt％(按干物质计)的(多)肽。
我们的发明的一个重要方面涉及(脱脂)米糠的蛋白质部分仅被部分水解。这被表示为在例如10％与16％之间的相对低的水解度。较高的水解度通常导致苦味产物，而低程度的水解导致低的蛋白质提取率。在我们的发明中，我们应用的水解度产生的产物可被容易地配制成具有可接受的味道并且同时具有可接受的蛋白质提取率。
酶(包括蛋白酶)以国际公认的IUMB对所有酶的分类和命名方案进行分类。关于蛋白酶EC编号的更新IUMB文本可以在以下互联网站点上找到：http：//www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/index.html。在此系统中，酶是通过它们催化单一反应的事实来定义的。这样做的重要含义是若干种不同的蛋白质都被描述为相同酶，以及催化多于一种反应的蛋白质被视为多于一种酶。所述系统将蛋白酶分类为内切蛋白酶和外切蛋白酶。内切蛋白酶是水解内部肽键的那些酶，外切蛋白酶水解与末端α氨基邻接的肽键(“氨肽酶”)，或者末端羧基与倒数第二个氨基酸之间的肽键(“羧肽酶”)。内切蛋白酶被基于催化机理划分为次亚类。存在的次亚类有丝氨酸内切蛋白酶(EC3.4.21)、半胱氨酸内切蛋白酶(EC3.4.22)、天冬氨酸内切蛋白酶(EC3.4.23)、金属内切蛋白酶(EC3.4.24)和苏氨酸内切蛋白酶(EC3.4.25)。
在本发明的方法中用于获得米糠蛋白水解物组合物的内切蛋白酶有利地是金属内切蛋白酶(EC.3.4.24)，诸如Maxazyme(EC.3.4.24.28；芽孢杆菌中性蛋白酶(bacillolysin))；丝氨酸内切蛋白酶(EC3.4.21)，诸如或者Protease或者半胱氨酸肽链内切酶(EC3.4.22)，诸如木瓜蛋白酶或者菠萝蛋白酶。优选地，所述内切蛋白酶是金属内切蛋白酶，更优选地是芽孢杆菌中性蛋白酶(EC3.4.24.28)。优选地，本发明的方法使用金属内切蛋白酶，诸如MaxazymeNNPDS。
任选地，除内切蛋白酶之外，可使用氨肽酶(EC3.4.11)如Corolase来更进一步地优化米糠蛋白水解物组合物的味道(tasteprofile)。
如先前所提及的，在本发明的方法中使用的悬液的(优选地，脱脂的)米糠浓度在5wt％与30wt％之间，或者更优选地在12wt％与30wt％之间。优选地，所述脱脂米糠浓度在15wt％与25wt％之间，更优选地所述脱脂米糠浓度在15wt％与22wt％之间。在文献中，典型的脱脂米糠浓度是10wt％或者更小。然而，那些低值几乎不具有产业关联度，这是由于获得最终产品必须移除相对较高量的水。
如先前所提及的，在本发明的酶孵育步骤中使用的孵育pH在6与8之间。优选地所述孵育pH在6.5与7.5之间。甚至更优选地，所述孵育pH在7与7.5之间。
在本发明的酶孵育步骤中使用的孵育时间一般在1小时与6小时之间。优选地所述孵育在1小时与4小时之间。甚至更优选地，所述孵育时间在1小时与2小时之间。
如先前所提及的，所述酶孵育步骤的孵育温度在45℃与65℃之间。优选地，所述孵育温度在45℃与55℃之间。更优选地，所述孵育温度在48℃与55℃之间。
根据本发明的另一方面，用本发明的方法产生的水解物组合物被使用固/液分离器分离成固体级分和液体级分。可以任何方便的方式，诸如通过采用过滤和/或离心从固相或者固体级分分离含水相、含水溶液或者含水级分。可以以任何方便的方式干燥所得的液体和/或固体级分。可以在例如喷雾干燥器、鼓式干燥器以及其他类型的干燥器中进行可溶级分的干燥。可以在例如鼓式干燥器、带式干燥器以及可处理高固相载量的其他设备上干燥固体或者纤维级分。
在本发明的水解之后，可以使酶或者酶组合物失活。例如可以应用热休克。
虽然本发明的方法可以小规模地进行，但是优选地用至少2升的悬液，更优选地至少4升或者6升的悬液，以及最优选地至少8升或者10升的悬液大规模地进行所要求保护的方法。
本发明方法的产物一般包含按干物质计在50wt％与65wt％之间的蛋白质含量。(优选地，脱脂的)米糠水解物组合物的水解度有利地在5％与35％之间，例如在8％与25％之间或者在10％与20％之间。更优选地，水解度为至少10％，最优选地在10％与16％之间。
功能性如氮溶解度或者发泡能力以及稳定性可以通过本文的实验部分中给出的方法来测定。
现将参照以下实施例来说明本发明，但是本发明不限于以下实施例。
方法和材料
材料
脱脂米糠(defattedricebran，DRB)是市售的并且可通过以下方式从粗米糠获得：首先在55-65℃的升高的温度下进行小于1小时的己烷提取，之后在105-110℃下进行所谓的烘烤步骤以移除残余的己烷。
酶MaxazymeNNP是DSM(荷兰)的商品并且是金属蛋白酶。
EDTA：分析纯(纯度99.7％)，MerckKGaADarmstadt，德国。
柠檬酸盐：分析纯(纯度大于99％)，Merck，KGaA，Darmstadt，德国。
蛋白质含量
蛋白质含量是根据测牛奶中(总)氮的AOAC官方方法991.20通过凯氏定氮法(Kieldahlmethod)测定的。使用6.25的换算因数来确定蛋白质的量(％(w/w))。
碳水化合物含量
通过改进的NREL(国家可再生能源实验室)方法NREL/TP-510-42618来定量总碳水化合物。相较于此方法，水解之后游离单糖的检测是借助于定量NMR(QNMR)用马来酸作为内标物实现的。在装备有5mm冷冻探针的BrukerAvanceIII600MHzNMR系统上记录NMR谱。将所述探针的温度设置为280K。
SDS-PAGE
用SDS-PAGE显示肽谱。用于SDS-PAGE和染色的所有材料是从Invitrogen(Carlsbad，CA，US)购买的。样品是使用SDS缓冲液，根据制造商说明书制备的，并且是使用MES-SDS缓冲体系，根据制造商说明书，在12％Bis-Tris凝胶上分离的。染色是使用SimplyBlueSafeStain(胶体考马斯G250)进行的。
氮溶解度(NS％)
通过在去离子水中以2％(w/w)的蛋白质浓度溶解蛋白质粉末来制备蛋白质溶液。用4MHCl或者4MNaOH(未添加额外的盐)将pH调节到4、6.8或者8.0。
在50℃下孵育溶液2小时，同时进行剧烈振荡。随后，以20,000g离心样品5分钟，以及收集上清液。通过凯氏定氮法分析所述上清液和所述蛋白质粉末样品的蛋白质含量。氮溶解度(NS％)被定义为：
发泡能力与稳定性
通过在去离子水中以2％(w/w)的蛋白质浓度溶解蛋白质粉末来制备蛋白质溶液。用4MHCl或者4MNaOH将pH调节到4、6.8或者8。泡沫是通过剧烈搅打100g蛋白质溶液1分钟(在1L烧杯中使用转速18,000rpm的具有4个旋转叶片的韦林氏搅拌器(Warningblender))产生的。在泡沫产生之后，将泡沫/液体内容物转移到250ml的量筒中。蛋白质的发泡能力是通过测量制备泡沫30秒后泡沫的体积而测定的。泡沫稳定性被定义为在制备泡沫30分钟后的泡沫体积。
干物质含量
干物质含量是使用红外方法在105℃测定的。
水解度
水解度是用快速OPA测试(Nielsen，P.M.，Petersen，D.，Dambmann，C.，Improvedmethodfordeterminingfoodproteindegreeofhydrolysis，JournalofFoodScience，2001，66，642-646)测定的。所使用的凯氏(Kieldahl)因数是6.25。
游离氨基酸含量的测定
将样品溶于已知量的0.1NHCL溶液中。将100μl的此溶液与包含氨基酸的同位素标记类似物的内标(internalstandard，IS)溶液混合以校正源于共洗脱肽的离子抑制效应。将10μl的此样品/IS溶液与70μl的Waters硼酸盐缓冲液和20μl的Waters衍生化试剂混合。在混合之后，在55℃下加热溶液10分钟。将1μl注入UPLC-MS/MS系统。
在Waters的联合aXevoTQ质谱仪的超高压液相色谱仪上进行分析。柱为WatersBEHC18柱(150×2.1mm，1.7μ)，在43℃下以0.4ml/分钟的流速操作。流动相为Waters的AccQ-Tag洗脱液A和AccQ-Tag洗脱液B。根据表1应用梯度。
表1：梯度谱
时间(分) 溶剂A(％) 溶剂B(％) 曲线
0 99.9 0.1
1.14 99.9 0.1 线性
2.00 98.5 1.5 线性
5.50 98.1 1.9 线性
6.50 98.0 2.0 凸线
10.00 97.6 2.4 线性
12.00 96.0 4.0 线性
20.00 88.0 12.0 线性
35.00 85.0 15.0 凸线
36.00 2.0 98.0 线性
38.00 2.0 98.0 线性
39.00 99.9 0.1 线性
60.00 99.9 0.1
使用电喷雾离子化以正模式离子化氨基酸衍生物。通过如前所述被衍生的含有氨基酸和同位素标记氨基酸的外部校准曲线测定游离氨基酸的量。
二肽和三肽的量的测定
根据下述方法测定二肽和三肽的量：
-利用质谱(MS)分析已知浓度的10种不同二肽和10种不同三肽的混合物
-利用MS分析提供的样品：通过3kD旋转柱离心1ml样品溶液(2mg/ml)并分析滤液。
-分析空白样品(MQ)
二肽和三肽的混合物包含下述肽：
二肽：
GC、AG、FG、GP、RW、WL、VP、KK、AA、FL
三肽：
WGP、GGP、YPP、LAL、LAV、EGP、LAK、LAW、VPL、NPI
(对于氨基酸，使用1个字母的缩写)
最小二肽(GG)至最大三肽(WWW)的质量范围为133Da到575Da。使用这个质量范围确定样品的总峰面积。从样品注射中减去空白样品注射的峰面积以排除背景离子。
分子量分布的确定
一式两份称量200mg米糠水解物组合物样品加入10mL容量瓶中并利用MQ-水补足体积。在室温下，利用磁力搅拌器以900rpm混合这种悬液30分钟。
随后，将500μl悬液装载在100kDa截取过滤器(cut-offfilter)(Pallnanosep100komega)上并以20,000g离心5分钟。随后，将滤液装载在30kDa截取过滤器(Pallnanosep30kOmega)上并以20,000g离心8分钟。随后，将滤液装载在3kDa截取过滤器(Pallnanosep3kOmega)上并以20,000g离心15分钟。
将所有三种过滤器上的残余物重新溶解在500μL的MQ-水中。因此，共收集到四种样品：100kDa残余物(＞100kDa)，30kDa残余物(30-100kDa)，3kDa残余物(3-30kD)和通过所有三种过滤器的滤液(约450μL)(＜3kDa)。通过凯氏法测定蛋白质含量以及计算所有样品之间的相对蛋白质浓度以产生分子量分布。
蛋白质提取率
所述蛋白质提取率被定义为：
可替代地，包含沉淀(pellet)中水的蛋白质提取率可如下计算：
实施例
实施例1：
在1530克15℃的饮用水(15wt％)中良好混合(well-mixed)270克DRB(脱脂米糠)，在15℃下孵育1小时。在1小时孵育之后，通过离心进行S/L分离(使用具有甩平式转子的SorvallEvolutionRC离心机，以5000RCF离心5分钟)。移除1187克上清液。将613克固体溶于1140克50℃的饮用水中。添加0.75ml的MaxazymeNNP(4ml/kg的干DRB)以及在pH7.2，50℃下孵育2小时。在孵育1小时之后，再次添加0.38ml的MaxazymeNNPDS(2ml/kg的干燥DRB)。在合计2小时的孵育之后，再次进行S/L分离。收集1258克的上清液，以及分析蛋白质含量、干物质含量和水解度。结果：
结果
干物质 2.18wt％
凯氏氮 2490[mg/kg]
按干物质计的蛋白质(冻干样品) 62wt％
水解度 10.9％
在第一次S/L分离期间，通过排出上清液移除了8.2wt％的总蛋白质含量。
发现具有大于500Da的分子量(MW)的(多)肽的量大于90wt％。
作为对照，进行没有良好混合的孵育步骤的实验，并且在上述水解条件下直接水解DRB。所述对照水解物组合物具有35％-42％的蛋白质干物质含量。
实施例2：
在1530克50℃的饮用水(15wt％)中良好混合270克DRB(脱脂米糠)，在50℃下孵育1小时。在1小时孵育之后，通过离心进行S/L分离(使用具有甩平式转子的SorvallEvolutionRC离心机，以5000RCF离心5分钟)。移除1133克上清液。将572克固体的523克溶于1056克50℃的饮用水中。添加0.75ml的MaxazymeNNPDS(4ml/kg的干燥DRB)以及在pH7.2，50℃下孵育2小时。在孵育1小时之后，再次添加0.38ml的MaxazymeNNPDS(2ml/kg的干燥DRB)。在合计2小时的孵育之后，再次进行S/L分离；收集991克的上清液，以及分析蛋白质含量、干物质含量和水解度。结果：
结果
干物质 2.53wt％
凯氏氮 2490[mg/kg]
按干物质计的蛋白质 61wt％
水解度 11.5％
在第一次S/L分离期间，通过排出上清液移除了15.2％的总蛋白质含量。
发现具有大于500Da的分子量(MW)的(多)肽的量大于90wt％。
实施例3：
在1530克10℃的饮用水(15wt％)中良好混合270克DRB(脱脂米糠)，在10℃下孵育1小时。在1小时孵育之后，通过离心进行S/L分离(使用具有甩平式转子的SorvallEvolutionRC离心机，以5000RCF离心5分钟)。移除1142克上清液。将616克固体中的579克溶于772克50℃的饮用水中。添加0.79ml的MaxazymeNNPDS(4ml/kg的干燥DRB)以及在pH7.2，50℃下孵育2小时。在孵育1小时之后，再次添加0.4ml的MaxazymeNNPDS(2ml/kg的干燥DRB)。在合计2小时的孵育之后，再次进行S/L分离。收集797克的上清液，以及分析蛋白质含量、干物质含量和水解度。结果：
结果
干物质 3.48wt％
凯氏氮 3360[mg/kg]
按干物质计的蛋白质 60.34wt％
水解度 10.60％
在第一次S/L分离期间，通过排出上清液移除了12.6％的总蛋白质含量。
发现具有大于500Da的分子量(MW)的(多)肽的量大于90wt％。
实施例4：
在另一实施例中，进行分析以分析涉及不同组分的被洗涤掉的材料。
在此实验中，在698克15℃的饮用水(22wt％)中良好混合202克DRB(脱脂米糠)，以及在此15℃的温度下孵育1小时。在1小时孵育之后，通过离心进行S/L分离(使用具有甩平式转子的SorvallEvolutionRC离心机，以5000RCF离心5分钟)。移除了513克上清液，以及收集到385克固体。伴随所述上清液移除了17％的总糖以及7％的凯氏氮(N-Kieldahl)。
实施例5：
在本实施例中，使用以下水溶液展示脱脂米糠的洗涤：1wt％的TitripexIII.2aq(EDTA，Merck)、1wt％的柠檬酸钠.2aq(Merck)，未校正pH(导致悬液的pH为6.5)、pH4(用HCl校正)，以及pH2(用HCl校正)。
每一添加是以下列方式完成的。在良好混合条件下，在1小时期间于环境温度下在765克水中悬浮135克脱脂米糠。以分开实验进行到此悬液中的下列添加：9克EDTA，9克柠檬酸盐(二水合柠檬酸三钠)，无添加，25g的4NHCl，45g的4NHCl。
在离心(如实例4中所描述的)之后，在上清液相中观测到了干物质和氮的下列收率：

Claims (12)

1.米糠蛋白水解物组合物，所述米糠蛋白水解物组合物包含大于50wt％(按干物质计)的(多)肽，并且具有至少10％，优选地在10％与16％之间的DH(水解度)，以及大于90％，优选地大于95％的所述(多)肽具有大于500Da的分子量(MW)。
2.根据权利要求1所述的米糠蛋白水解物组合物，其具有按干物质计小于2wt％的游离氨基酸含量。
3.根据权利要求1或2所述的米糠蛋白水解物组合物，其是脱脂米糠蛋白水解物。
4.一种产生米糠蛋白水解物组合物的方法，所述方法包括：
-添加含水液体，优选地水，到米糠中；
-将液体与固体级分分离以获得经洗涤的固体级分；
-添加酶或者酶组合物到经洗涤的固体级分的悬液中，所述悬液的浓度在5wt％与30wt％之间，优选地在12wt％与30wt％之间；
-优选地在6与8之间的pH下进行酶孵育；
-进行所述酶孵育到水解程度为10％与16％之间的DH(水解度)；
-在30℃与80℃之间，优选地在45℃与65℃之间的温度下进行所述酶孵育；以及
-任选地从固体级分分离液体；
其中所述酶或者酶组合物包含内切蛋白酶。
5.根据权利要求6所述的产生米糠蛋白水解物组合物的方法，其中所述内切蛋白酶是金属内切蛋白酶，优选地是芽孢杆菌中性蛋白酶(EC3.4.24.28)。
6.根据权利要求4或5所述的产生水解物组合物的方法，其中所述米糠是脱脂米糠。
7.根据权利要求4到6中任一项所述的方法，其中所述米糠是用所述含水液体在4-8的pH下孵育的。
8.根据权利要求4到7中任一项所述的方法，其中所述米糠是用所述含水液体在4-80℃的温度下，优选地在室温下孵育的。
9.根据权利要求4到8中任一项所述的方法，其中用所述含水液体孵育所述米糠至少0.5分钟、至少1分钟、至少2分钟，优选地至少5分钟，更优选地至少20分钟，更优选地至少60分钟。
10.根据权利要求4到9中任一项所述的方法，其中所述米糠与所述含水液体混合。.
11.根据权利要求4到10中任一项所述的方法，其中所述米糠蛋白水解物是蛋白质含量大于50wt％(按干物质计)的米糠蛋白水解物。
12.通过权利要求4到11中任一项所述的方法能够获得的米糠蛋白水解物。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017216931A (ja) * 2016-06-07 2017-12-14 奥野製薬工業株式会社 飲料用泡品質改良剤およびその製造方法
CN110386969B (zh) * 2019-08-21 2023-02-14 沈阳师范大学 一种提高米糠蛋白乳化稳定性的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563404A (zh) * 2004-04-01 2005-01-12 武汉工业学院 米糠蛋白降血压肽(ace 抑制肽)的制备方法
CN101434980A (zh) * 2008-12-08 2009-05-20 广东省农业科学院农业生物技术研究所 一种米糠短肽的制备方法
CN102030773A (zh) * 2010-10-27 2011-04-27 江南大学 一种以脱脂米糠为原料联产植酸和低聚肽的工艺
US8575310B2 (en) * 2009-12-17 2013-11-05 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Bioactive pentapeptides from rice bran and use thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3139563B2 (ja) * 1992-02-21 2001-03-05 株式会社成和化成 米糠蛋白誘導ペプチドの製造方法
BR9508847A (pt) * 1994-09-20 1999-11-30 Novo Nordisk A S E Slagterisel Processo para tratar uma solução aquosa de proteìna e para produzir um gênero alimentìcio à base de carne, mistura de solução de proteìna/hidrolisado tratada com calor, ou hidrolisado lìquido tratado com calor, gênero alimentìcio à base de carne e uso da mistura de solução de proteìna/hidrolisado tratada com calor, ou de hidrolisado lìquido tratado com calor
US7255890B2 (en) * 2000-10-04 2007-08-14 Peptonas Vegetales, S. L. Continuous direct enzymatic protein solubilization process for industrial wastes

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563404A (zh) * 2004-04-01 2005-01-12 武汉工业学院 米糠蛋白降血压肽(ace 抑制肽)的制备方法
CN101434980A (zh) * 2008-12-08 2009-05-20 广东省农业科学院农业生物技术研究所 一种米糠短肽的制备方法
US8575310B2 (en) * 2009-12-17 2013-11-05 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Bioactive pentapeptides from rice bran and use thereof
CN102030773A (zh) * 2010-10-27 2011-04-27 江南大学 一种以脱脂米糠为原料联产植酸和低聚肽的工艺

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KOOLAWADEE SILPRADIT 等: "Optimization of rice bran protein hydrolysate production using alcalase", 《ASIAN JOURNAL OF FOOD AND AGRO-INDUSTRY》 *
何东平 等: "脱脂米糠饼制备米糠多肽的研究", 《粮食与饲料工业》 *
张丙华: "脱脂米糠联产植酸和蛋白酶解物研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *
邹礼根 等: "《农产品加工副产物综合利用技术》", 31 March 2013, 杭州：浙江大学出版社 *
郑宝东: "《食品酶学》", 31 October 2006, 南京：东南大学出版社 *
金世合 等: "酶解米糠蛋白的功能性质研究", 《食品工业科技》 *

Also Published As

Publication number Publication date
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