CN1563404A - 米糠蛋白降血压肽(ace 抑制肽)的制备方法 - Google Patents

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刘志国
王亚林
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Abstract

一种用米糠蛋白制备降血压肽的方法，其特征在于：将蛋白质浓度为3－10％(W/W)的米糠蛋白溶液，用胃蛋白酶和胰蛋白酶先后水解米糠分离蛋白，经凝胶层析、离子交换层析分离出具有ACE抑制活性的小分子蛋白肽，再经浓缩、喷雾或冷冻干燥，可制成各种制剂。

Description

米糠蛋白降血压肽(ACE抑制肽)的制备方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及生物制药技术或功能性食品加工技术，特别是用米糠蛋白制备降血压肽的方法。
技术背景
血管紧张素转化酶(ACE)在血压调节中扮演重要的角色。降压肽通过抑制血管紧张素I向血管紧张素II转换以及阻止ACE降解缓激肽而起降血压的作用。目前已有多种化学合成肽类药物，抑制ACE活性。这类合成降血压药物作用时间不长，停药后会使血压反弹，而且，这类药物经肾脏排出易造成肾功能的损伤。
食物蛋白质水解产生的降血压肽具有食用安全性高、无副作用，特别是其对高血压患者具有降血压作用，而对血压正常的人无降压作用等优点，近来受到广泛重视。目前已有研究发现胶原蛋白、酪蛋白等经胰蛋白酶水解后的产物具有ACE抑制活性，并通过高压液相色谱分离、分析了部分有抑制活性的组分。这些研究主要采用单一的胰蛋白酶，选择的原料多为动物蛋白质，且分离方法成本太高，不适合大规模生产。
发明目的
为了克服上述方法的不足，本发明利用来源广泛的米糠或大米渣为原料，分离提取米糠或米渣中的蛋白质，利用多种蛋白酶，如：胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K等，单独或不同组合水解米糠蛋白，水解产物经过Sephadex G-15～Sephadex G-25凝胶层析及SP-Sephadex C-25离子交换层析分离获得具有ACE抑制活性的小分子多肽。
技术方案
本发明的目的可通过以下技术方案来实现。
将浓度为3-10％的米糠蛋白(或米渣蛋白)溶液，用浓度为0.15％的胃蛋白酶、胰蛋白酶先后水解米糠分离蛋白，在25-60℃反应2-24小时，搅拌酶解。酶解反应在pH2-8时进行。酶解完后经过Sephadex G-15～Sephadex G-25凝胶层析及SP-Sephadex C-25离子交换层析分离获得具有ACE抑制活性的小分子蛋白多肽。分离产物经浓缩、喷雾或冷冻干燥即成干粉，可制成各种制剂。
本发明所具有的优点是：
1.提供了一种制备降血压肽的新方法。
本发明制品具有生物学功能，对血管紧张素转移酶(ACE)具有极强的抑制活性。同其他生物活性多肽一样，具有直接、快速、主动、完整吸收的特点。特别是对高血压等心血管疾病有疗效。
本发明的制成品可作为药品、健康食品、食品、食品添加剂、药物增效剂、药品配方等，
是一种适宜于工业化生产的方法。
2.工艺科学合理、简单易行。
本发明工艺包括3个主要步骤，即：米糠蛋白的提取-蛋白质的酶解-2步分离，其中分离方法选择2种不同性质的层析方法，这种方法较为简单、有效。
3.原料来源广泛。
本发明所选择的原料来源广泛，资源丰富，使本发明具有较强的实用性。
实施例
将分离得到的米糠蛋白配置成浓度为5％米糠蛋白溶液，调节pH值为2.0，加入1∶3000的胃蛋白酶(终浓度为0.15％)。37℃水解18小时后，将pH调至7.5，加入0.15％胰蛋白酶，于37℃再水解18小时，水解产物经Sephadex G-15凝胶过滤分离后得到6个组分。测定各组分对ACE的抑制率和浓度，计算其IC50，结果列于表1。6个组分中，除组分1的抑制率接近0，而未在表1中列出外，其余各组分对ACE的抑制作用均列于表1中，其中组分6的抑制作用最强。
          表1胃蛋白酶、胰蛋白酶的联合水解组分LogIC50
                  LogIC50(mg/mL)   IC50(mg/mL)   N
        组分2     0.33±0.05        2.13           24
        组分3     0.07±0.04        1.17           34
        组分4     0.13±0.01        1.35           20
        组分5     -0.14±0.10       0.72           24
        组分6     -0.52±0.08       0.32           34
将上述分离的组分6继续用SP-Sephadex C-25离子交换层析分离。采用梯度式洗脱法分离纯化活性肽。洗脱条件为：凝胶柱，10mm i.d×20cm；流动相A(低浓度)：0.02mol/L NaCl，pH＝5的HAC；流动相B(高浓度)：1mol/L NaCl，pH＝5的HAC；流速：20mL/h；检测波长：280nm。分离得到3个组分，结果列于表2中。
            表2离子交换层析分离后组分的LogIC50
                 LogIC50(mg/mL)   IC50(mg/mL)   N
        组分1    -1.10±0.01       0.08           14
        组分2    -0.86±0.12       0.82           12
        组分3    0.13±0.08        1.35           12
SP-Sephadex C-25离子交换层析分离得到的3个组分对ACE均有抑制活性，其中组分1的抑制活性最强。
将上述获得的各活性组分冷冻干燥，即获得具有ACE抑制活性米糠蛋白多肽，各活性组分可单独或不同比例混合制成降血压制品。

Claims (2)

1.一种用米糠蛋白制备降血压肽的方法，其特征在于：将蛋白质浓度为3-10％(W/W)的米糠蛋白溶液，用胃蛋白酶和胰蛋白酶先后水解米糠分离蛋白，水解温度为25-60℃，pH2-8，水解反应2-24h，搅拌酶解。酶解结束后，再经凝胶层析、离子交换层析分离出具有ACE抑制活性的小分子蛋白肽。
2.根据权利要求1所述的米糠蛋白制备降血压肽的方法，其特征在于：分离出的小分子蛋白肽经浓缩、喷雾或冷冻干燥，进一步制成各种制剂。
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