CN105193867B - 一种富含麦角甾醇的灵芝孢子油及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药领域，特别是涉及中药药品和保健品领域，更为具体的说是涉及富含麦角甾醇的灵芝孢子油及其制备方法。针对目前灵芝孢子油的提取工艺，创造性地提出了一种新的富含麦角甾醇的灵芝孢子油提取方法，并且由此获得了一种高麦角甾醇含量的富含麦角甾醇的灵芝孢子油。本发明所公开的灵芝孢子油中灵芝三萜的重量含量为40%~50%，麦角甾醇的重量含量为0.83%以上。本发明以水为溶解媒介，无需添加有机溶剂，更加适合于医药、食品行业，节约后续处理环节，节省处理成本。同时，本发明无需使用二氧化碳超临界萃取设备，成本低，安全性较高，且灵芝三萜及麦角甾醇提出率较传统方式高。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域，特别是涉及中药药品和保健品领域，更为具体的说是涉及富含麦角甾醇的灵芝孢子油及其制备方法。
背景技术
灵芝是我国传统中药领域中的一块瑰宝，为多孔菌科灵芝属的药用真菌，目前主要应用的为赤芝和紫芝品种。在《黄帝内经》中即有收载，被列为中药之上品。明代医药学家李时珍在其名著《本草纲目》中有记载“灵芝性平，味苦，无毒，主胸中结，益心气，补中，增智慧，补颜色，利关节，久服轻身不老”，充分表述了古人对灵芝功效的深刻认识。灵芝作为药材，已被《中华人民共和国药典》所收载，目前已广泛应用于各类药品及保健食品中，现代科学研究证明灵芝子实体具有宁心益智安神，提高人体免疫力，保肝等多种功效。
灵芝孢子为灵芝子实体的繁殖细胞，是灵芝在每年秋季大量喷发生成的细小粉末。目前灵芝孢子粉的大规模收集技术已经成熟，具备了规模化加工生产的条件，已广泛应用于药品、保健食品、化妆品等健康相关领域。灵芝孢子粉针对免疫系统、神经系统、内分泌和代谢系统等均有调节作用，且长期食用安全无副作用。目前，灵芝孢子的低温破壁技术也已成熟，破壁后的灵芝孢子粉更易被人体吸收，功效更加明显。
灵芝孢子油为灵芝孢子粉中所萃取出来的灵芝三萜等脂溶性物质，其中三萜类灵芝酸具有强烈的药理活性，有护肝，解毒，杀灭肿瘤细胞和止痛等功效。目前灵芝孢子油的一般生产工艺为以破壁的灵芝孢子为基础，通过CO2超临界萃取，获得灵芝孢子油。这种工艺不仅复杂，而且成本高昂。同时，以此种方式获得的灵芝孢子油中主要成分为结合有机酸和脂肪酸类成分，三萜类成分的提取率较低，同时其中所含有的麦角甾醇类成分不能被提取。麦角甾醇是广泛存在于虫草、灵芝等真菌药材中的萜类物质，具有抗癌、防衰、减毒功效，其提出效率的高低，直接影响了富含麦角甾醇的灵芝孢子油在抗肿瘤作用中的效果。
发明内容
本发明针对目前灵芝孢子油的提取工艺，创造性地提出了一种新的富含麦角甾醇的灵芝孢子油提取方法，并且由此获得了一种高麦角甾醇含量的富含麦角甾醇的灵芝孢子油。
本发明所公开的富含麦角甾醇的灵芝孢子油中灵芝三萜的重量含量为45%以上，麦角甾醇的重量含量为0.83%以上。
同时，作为本发明的另一发明目的，本发明还公开了一种制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油的方法，其特征是，包括以下步骤：
（1）将破壁的灵芝孢子粉按照1g灵芝孢子粉配比1ml水的组配比例混合，搅拌均匀成浆状；
（2）将步骤（1）获得的浆状物放置在超声波细胞破碎机中超声处理，超声波频率为25~35MHz，超声功率为900~1000W，超声时间20~30分钟；
（3）将超声处理后的浆液采用板框压滤，取滤出液；
（4）滤出液经4000转/分的转速离心8~12分钟，取上清液，既得富含麦角甾醇的灵芝孢子油。
进一步地，我们公开了所述超声波细胞破碎机为Scientz-ⅡD型超声波细胞破碎机。
作为超声处理条件的优选，我们公开独立优选以下条件，
所述步骤（2）中超声波频率为30MHz。
所述步骤（2）中超声功率为950W。
所述步骤（2）中超声时间为25分钟。
本发明所公开的最优选方案为：（1）将破壁的灵芝孢子粉按照1g灵芝孢子粉配比1ml水的组配比例混合，搅拌均匀成浆状；
（2）将步骤（1）获得的浆状物放置在超声波细胞破碎机中超声处理，超声波频率为30MHz，超声功率为950W，超声时间25分钟；
（3）将超声处理后的浆液采用板框压滤，取滤出液；
（4）滤出液经4000转/分的转速离心8~12分钟，取上清液，既得富含麦角甾醇的灵芝孢子油。
通过本发明公开的制备方法获得的富含麦角甾醇的灵芝孢子油具有较高的麦角甾醇提出率，是常规以CO2超临界萃取方法为基础的提出率的50倍以上。
本发明以水为溶解媒介，无需添加有机溶剂，更加适合于医药、食品行业，节约后续处理环节，节省处理成本。同时，本发明无需使用二氧化碳超临界萃取设备，成本低，且灵芝三萜及麦角甾醇提出率较传统方式高。
具体实施方式
在本发明中所使用的试剂，除非特别说明，其他均为市售产品。
实施例1
按照以下方式制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油，
（1）将破壁的灵芝孢子粉（来源：灵芝孢子产自黄山，破壁工序由南京中科药业有限公司完成，要求破壁率＞95%）200g与200ml水混合，搅拌均匀成浆状；
（2）将步骤（1）获得的浆状物放置在超声波细胞破碎机中超声处理，超声波频率为25~35MHz，超声功率为900~1000W，超声时间20~30分钟；
（3）将超声处理后的浆液采用板框压滤，取滤出液；
（4）滤出液经4000转/分的转速离心8~12分钟，取上清液，即得富含麦角甾醇的灵芝孢子油。
实施例2
按照以下方式制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油，
（1）将破壁的灵芝孢子粉（来源：灵芝孢子产自黄山，破壁工序由南京中科药业有限公司完成，要求破壁率＞95%）200g与200ml水混合，搅拌均匀成浆状；
（2）将步骤（1）获得的浆状物放置在超声波细胞破碎机中超声处理，超声波频率为30MHz，超声功率为950W，超声时间25分钟；
（3）将超声处理后的浆液采用板框压滤，取滤出液；
（4）滤出液经4000转/分的转速离心8~12分钟，取上清液，即得富含麦角甾醇的灵芝孢子油。
对照例1
将与实施例1中同来源的灵芝孢子粉用传统的二氧化碳超临界萃取方法萃取。具体方法采用ZL99 123952.0，一种灵芝孢子的超临界加工方法所公开的方法，主要参照其实施例1中的方法,获得灵芝孢子油。
实施例3
将实施例1、实施例2与对照例1中获得的富含麦角甾醇的灵芝孢子油进行灵芝三萜以及麦角甾醇的测定，
一、麦角甾醇的含量测定
按照GB/T 25221-2010粮油检验粮食总麦角甾醇的测定方法检测富含麦角甾醇的灵芝孢子油中的麦角甾醇含量。
二、灵芝三萜的含量测定
按照如下方式检测富含麦角甾醇的灵芝孢子油中灵芝三萜的含量，
检测原理
用氯仿提取富含麦角甾醇的灵芝孢子油中的三萜类化合物，在香草醛-浓硫酸的作用下，反应生成橙色物质，在一定浓度范围内，在500nm波长下，进行比色测定。
检测用仪器：722分光光度计、10ml比色管、水浴锅。
检测用试剂：硫酸溶液（V/V）：取水28ml，加硫酸至100ml；香草醛溶液（80g/L）：取香草醛8g，加甲醇至100ml；氯仿为分析纯。
齐墩果酸对照品（由中国药品生物制品检定所提供）。
检测方法：
1、标准曲线的制备
精密称取在105℃干燥至恒重的齐墩果酸对照品10mg，置于50ml容量瓶中，加氯仿溶解稀释至刻度，得齐墩果酸标准对照品溶液。
精密吸取标准齐墩果酸对照品溶液0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，分别置于10ml比色管中，加热挥去溶剂后，加入80g/L香草醛溶液0.5ml，硫酸溶液5.0ml，混匀后，于60℃水浴中保温30min，取出后冷水浴放置15min。在1cm比色皿中，以试剂空白液为参比，调零，于波长500nm处测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线。
样品的测定
称取富含麦角甾醇的灵芝孢子油样品120～150mg，加氯仿溶解于100ml容量瓶中。
精密吸取样品溶液0.2ml至10ml比色管中，加热挥去溶剂后，加入80g/L香草醛溶液0.5ml，硫酸溶液5.0ml，混匀后，于60℃水浴中保温30min，取出后冷水浴放置15min。在1cm比色皿中，在1cm比色皿中，以试剂空白液为参比，调零，于波长500nm处测定吸光度，按下式计算含量。
式中：
W-样品中灵芝三萜的含量，%
C-从标准曲线中查得的齐墩果酸的含量，mg/ml
V-比色液体积， ml
F-稀释倍数
m-样品的质量， mg。
检测结果如表1所示，
表1：
| 对照例1 | 实施例1 | 实施例2 | |
| 灵芝三萜含量 | 20% | 43% | 45% |
| 麦角甾醇含量 | 未测出 | 0.79% | 0.83% |
实施例4 抑瘤率检测
分别取实施例1和对照例1得到的富含麦角甾醇的灵芝孢子油，进行抑瘤率检测。
检测方法：取ICR小鼠（18-22g，雌雄各半，）60只，按移植性肿瘤研究法[1] 接种S180实体型瘤（在无菌操作下取瘤块，称重，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放人无菌容器内，加生理盐水稀释成1:3的细胞悬液，容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前将细胞混匀，每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2 ml），接种后24小时称鼠重，并随机分为3组，空白对照组（0.5%CMC-Na）、对照例1组（100mg/kg）组、实施例1组（100mg/kg）。于接种24小时后给药，每天一次，共给药7次，于停药后第2天处死荷瘤小鼠称重，并分离瘤块称重，所得数据进行统计学处理（t检验）。
检测结果如表2
与阴性对照组相比，*P<0.05 ，**P<0.01
由上表可知，实施例1获得的灵芝孢子油较对照例1所代表的传统方式获得的灵芝孢子油具有更好的抑瘤率。
Claims (6)
1.富含麦角甾醇的灵芝孢子油，其特征是，所述灵芝孢子油中灵芝三萜的重量含量45%，麦角甾醇的重量含量0.83%。
2.一种制备权利要求1所述的富含麦角甾醇的灵芝孢子油的方法，其特征是，包括以下步骤： （1）将破壁的灵芝孢子粉按照1g灵芝孢子粉配比1ml水的组配比例混合，搅拌均匀成浆状； （2）将步骤（1）获得的浆状物放置在超声波细胞破碎机中超声处理，超声波频率为25~35MHz，超声功率为900~1000W，超声时间20~30分钟； （3）将超声处理后的浆液采用板框压滤，取滤出液； （4）滤出液经4000转/分的转速离心8~12分钟，取上清液，即得富含麦角甾醇的灵芝孢子油。
3.根据权利要求2所述的制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油的方法，其特征是，所述超声波细胞破碎机为Scientz-ⅡD型超声波细胞破碎机。
4.根据权利要求2所述的制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油的方法，其特征是，所述步骤（2）中超声波频率为30MHz。
5.根据权利要求2所述的制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油的方法，其特征是，所述步骤（2）中超声功率为950W。
6.根据权利要求2所述的制备富含麦角甾醇的灵芝孢子油的方法，其特征是，所述步骤（2）中超声时间为25分钟。
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