CN105175425B - 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法 - Google Patents

一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105175425B
CN105175425B CN201510651098.1A CN201510651098A CN105175425B CN 105175425 B CN105175425 B CN 105175425B CN 201510651098 A CN201510651098 A CN 201510651098A CN 105175425 B CN105175425 B CN 105175425B
Authority
CN
China
Prior art keywords
chlorin
petroleum ether
water
several times
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510651098.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105175425A (zh
Inventor
于道永
李泉
李富强
吴晨露
张宏玉
葛保胜
黄方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China University of Petroleum East China
Original Assignee
China University of Petroleum East China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China University of Petroleum East China filed Critical China University of Petroleum East China
Priority to CN201510651098.1A priority Critical patent/CN105175425B/zh
Publication of CN105175425A publication Critical patent/CN105175425A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105175425B publication Critical patent/CN105175425B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种从新鲜钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸Chlorin e6的方法，所述方法的步骤如下：(1)以乙醇为溶剂从钝顶螺旋藻中萃取色素，萃取液中加入适量石油醚混匀，再加水分相，旋荡后进行反萃取，用石油醚重复萃取数次；(2)石油醚相用水－乙醇溶液洗涤数次；(3)石油醚萃取液中加入NaOH的95％乙醇溶液，搅拌反应；(4)往上述混合液中加水，旋荡后静置分离，下层水－乙醇溶液用石油醚洗涤数次；(5)滴加盐酸中和至微酸性，离心分离沉淀或用二氯甲烷萃取，沉淀用少量去离子水分散悬浮后冷冻干燥，或二氯甲烷溶液旋转蒸发回收溶剂，即可获得高纯度的叶绿三酸Chlorin e6固体。本发明制备的Chlorin e6不含其它叶绿酸，HPLC纯度大于99.5％。

Description

一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法
技术领域
本发明涉及光动力学疗法天然光敏剂技术领域，尤其涉及一种第二代光敏剂叶绿三酸Chlorin e6的高效高纯度制备方法。
背景技术
叶绿三酸Chlorin e6及其衍生物属于光动力学疗法的第二代光敏剂。Chlorin e6是源自叶绿素的天然分子，具有光激发三线态寿命长，在可见光的红区具有较高的摩尔吸光系数，与其他卟啉类光敏剂相比价格低廉，其研究应用处于临床试验阶段。
Chlorin e6一般通过叶绿素a碱性水解转化获得，商品化的Chlorin e6的制备方法中涉及叶绿素的柱层析法分离提纯，叶绿素a的得率较低，获得的Chlorin e6纯度一般93％～98％。
本发明不需要采用柱层析法分离提纯叶绿素或叶绿三酸，无柱层析损失，叶绿素a利用效率高，最终获得的叶绿三酸Chlorin e6产率高。
钝顶螺旋藻是蓝藻的一种，本发明以钝顶螺旋藻为原料，制备的Chlorin e6不含叶绿素a以外的其它叶绿素转化的叶绿酸，HPLC纯度大于99.5％。
发明内容
本发明针对商品化叶绿三酸Chlorin e6产率和纯度较低的问题，提出了一种高效高纯度Chlorin e6的制备方法。
本发明采取的技术方案是：
本发明高纯度叶绿三酸Chlorin e6制备方法的具体步骤如下：
⑴以培养至对数生长期末期的钝顶螺旋藻为原料，离心收集藻体。
⑵藻体用乙醇萃取数次，萃取液合并。
⑶萃取液中加入适量石油醚(沸程60～90℃)混匀，再加入萃取液1/5～1/3体积的水，旋荡后进行反萃取，石油醚重复萃取数次，含色素的石油醚相用水－乙醇溶液(体积比1:1)洗涤数次。
⑷石油醚萃取液中加入1mol/L NaOH的95％乙醇溶液，搅拌反应0.5～6h。
⑸往上述混合液中加入去离子水，旋荡后静置分离，上层石油醚相含有类胡萝卜素呈橙黄色，下层蓝绿色的水－乙醇溶液用石油醚洗涤数次，至洗涤液无色。
⑹滴加5mol/L盐酸中和，离心分离沉淀，沉淀用去离子水洗涤数次。
⑺沉淀用少量去离子水分散悬浮，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿三酸Chlorine6固体粉末。
⑻在上述步骤⑹中，5mol/L盐酸中和后，加入二氯甲烷溶剂萃取，萃取液用去离子水洗涤数次。
⑼采用旋转蒸发的方法回收二氯甲烷，得到密实的叶绿三酸Chlorin e6固体。
本发明制备的Chlorin e6不含叶绿素a以外的其它叶绿素转化的叶绿酸，HPLC纯度大于99.5％。
附图说明
图1为实施例4所得叶绿三酸Chlorin e6的结构图。
图2为实施例4碱催化反应后石油醚相类胡萝卜素溶液的吸收光谱。
图3为实施例4碱催化反应后水-乙醇相含镁叶绿三酸钠盐的吸收光谱。
图4为实施例4所得产品叶绿三酸钠盐乙醇溶液的吸收光谱。
图5为实施例4所得产品叶绿三酸乙醇溶液的吸收光谱图。
图6为实施例4所得产品的基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱图。基质中的三氟乙酸使得叶绿三酸带正电，分子离子峰([M+H]+)的质荷比m/z为597.541，与叶氯三酸的理论分子量596.67一致。
具体实施方式
下面的实施例是对本发明的进一步描述。
实施例1
本发明的高纯度叶绿三酸Chlorin e6的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入20mL石油醚(沸程60～90℃)混匀，再加入萃取液1/3体积的水，旋荡后进行反萃取，石油醚重复萃取两次，含色素的石油醚相用20mL水－乙醇溶液(体积比1:1)洗涤两次。
石油醚萃取液中加入1mol/L NaOH的95％乙醇溶液10mL，搅拌反应0.5h。
往上述混合液中加入10mL水，旋荡后静置分离，上层石油醚相含有类胡萝卜素呈橙黄色，下层蓝绿色的水－乙醇溶液用石油醚洗涤两次。
滴加5mol/L盐酸中和至pH约为5，离心分离沉淀，沉淀用去离子水洗涤两次。
沉淀用少量去离子水分散悬浮，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿三酸Chlorin e6固体粉末。
实施例2
本发明的高纯度叶绿三酸Chlorin e6的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用40mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入15mL石油醚(沸程60～90℃)混匀，再加入萃取液1/3体积的水，旋荡后进行反萃取，石油醚重复萃取两次，含色素的石油醚相用0.5mol/L NaOH的水－乙醇溶液(体积比1:1)15mL快速洗涤两次。
石油醚萃取液中加入1mol/L NaOH的95％乙醇溶液10mL，搅拌反应2h。
往上述混合液中加入10mL水，旋荡后静置分离，上层石油醚相含有类胡萝卜素呈橙黄色，下层蓝绿色的水－乙醇溶液用石油醚洗涤两次。
滴加5mol/L盐酸中和至pH约为5，离心分离沉淀，沉淀用去离子水洗涤两次。
沉淀用少量去离子水分散悬浮，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿三酸Chlorin e6固体粉末。
实施例3
本发明的高纯度叶绿三酸Chlorin e6的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入20mL石油醚(沸程60～90℃)混匀，再加入萃取液1/3体积的水，旋荡后进行反萃取，石油醚重复萃取两次，含色素的石油醚相用20mL水－乙醇溶液(体积比1:1)洗涤两次。
石油醚萃取液中加入1mol/L NaOH的95％乙醇溶液10mL，搅拌反应3h。
往上述混合液中加入10mL水，旋荡后静置分离，上层石油醚相含有类胡萝卜素呈橙黄色，下层蓝绿色的水－乙醇溶液用石油醚洗涤两次。
滴加5mol/L盐酸中和至pH约为5，加入二氯甲烷溶剂萃取，萃取液用去离子水洗涤数次。
采用旋转蒸发的方法回收二氯甲烷，得到密实的叶绿三酸Chlorin e6固体。
实施例4
本发明的高纯度叶绿三酸Chlorin e6的制备方法的具体步骤如下：
取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用40mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
萃取液中加入15mL石油醚(沸程60～90℃)混匀，再加入萃取液1/3体积的水，旋荡后进行反萃取，石油醚重复萃取两次，含色素的石油醚相用0.5mol/L NaOH的水－乙醇溶液(体积比1:1)15mL快速洗涤两次。
石油醚萃取液中加入1mol/L NaOH的95％乙醇溶液10mL，搅拌反应6h。
往上述混合液中加入10mL水，旋荡后静置分离，上层石油醚相含有类胡萝卜素呈橙黄色，下层蓝绿色的水－乙醇溶液用石油醚洗涤两次。
滴加5mol/L盐酸中和至pH约为5，加入二氯甲烷溶剂萃取，萃取液用去离子水洗涤数次。
采用旋转蒸发的方法回收二氯甲烷，得到密实的叶绿三酸Chlorin e6固体。
尽管已经示出了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据上述说明对这些实施例进行改进或变换，而这些改进或变换都应属于本发明所述权利要求的保护范围。

Claims (6)

1.一种制备叶绿三酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)以钝顶螺旋藻为原料，离心收集藻体，藻体用乙醇萃取数次，每次萃取10～30min，萃取液合并；
(2)萃取液中加入石油醚混匀，再加入萃取液1/5～1/3体积的水，旋荡后进行反萃取，上层含色素的石油醚相用水－乙醇溶液洗涤数次；
(3)石油醚萃取液中加入1mol/L NaOH的95％乙醇溶液，搅拌反应0.5～6h；
(4)往上述混合液中加入去离子水，旋荡后静置分离，上层石油醚相含有类胡萝卜素呈橙黄色，下层蓝绿色的水－乙醇溶液用石油醚洗涤数次，至洗涤液无色；
(5)滴加5mol/L盐酸中和至微酸性，离心分离沉淀，沉淀用去离子水洗涤数次；
(6)沉淀用去离子水分散悬浮，-80℃速冻后冷冻干燥，获得叶绿三酸Chlorin e6固体粉末；
步骤(5)中所述微酸性是指pH值的范围为5～6；
获得的上述叶绿三酸Chlorin e6固体粉末不含叶绿素a以外的其它叶绿素转化的叶绿酸，纯度大于99.5％。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)中用5mol/L盐酸中和至微酸性后，加入二氯甲烷溶剂萃取，萃取液用去离子水洗涤数次。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(6)中还包括采用旋转蒸发的方法回收二氯甲烷，得到密实的叶绿三酸Chlorin e6固体。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述钝顶螺旋藻为培养至对数生长期末期的钝顶螺旋藻。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述石油醚的沸程为60～90℃。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中水－乙醇溶液的水与乙醇的体积比为1:1。
CN201510651098.1A 2015-10-10 2015-10-10 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法 Active CN105175425B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510651098.1A CN105175425B (zh) 2015-10-10 2015-10-10 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510651098.1A CN105175425B (zh) 2015-10-10 2015-10-10 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105175425A CN105175425A (zh) 2015-12-23
CN105175425B true CN105175425B (zh) 2017-08-11

Family

ID=54897936

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510651098.1A Active CN105175425B (zh) 2015-10-10 2015-10-10 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105175425B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106318620A (zh) * 2016-08-15 2017-01-11 中国石油大学(华东) 微藻天然染料的制备及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101595209A (zh) * 2006-11-03 2009-12-02 光州科学技术院 制备叶绿素a和二氢卟酚e6的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101595209A (zh) * 2006-11-03 2009-12-02 光州科学技术院 制备叶绿素a和二氢卟酚e6的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NOVEL DRUG FORM OF CHLORIN E6;O.Yu.Abakumova et al.;《Proceedings of SPIE》;20001231;第4059卷;第130-138页 *
卟啉第二代光敏剂的发展;马金石;《感光科学与光化学》;20020331;第20卷(第2期);第133页最后一段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105175425A (zh) 2015-12-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2023010925A1 (zh) 一种近红外二区荧光小分子的制备方法
CN108102408B (zh) 一种基于氮杂氟硼烷的近红外染料的制备及应用
CN102050822B (zh) 一种从马铃果中提取它勃宁的方法
CN105175425B (zh) 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿三酸的方法
CN107312536B (zh) 一种红色发光稀土复合材料、制备方法及应用
CN105062469B (zh) 一种六核三聚磷腈铽配合物发光材料及其制备方法
CN104327017B (zh) 一种褐藻黄素的提取和纯化方法
CN102584686A (zh) 一种水溶性三联吡啶荧光化合物及其制备方法
CN104478898A (zh) 依维莫司及其中间体的制备方法
CN103524314A (zh) 一种采用高速逆流色谱法分离制备左旋棉酚的方法
CN104086554B (zh) 一种新型的完全水溶的光敏剂单体及其制备方法及应用
CN105964306A (zh) 一种基于聚离子液体磁性纳米粒子、制备方法及其在三组分反应中的应用
CN107556155B (zh) 一种合成α,β-双溴化合物的方法
CN103910723B (zh) 一种可见光催化合成吲哚并喹啉类衍生物的方法
CN102180914A (zh) 一种2-脱氧-d-葡萄糖的制备方法
CN103923090B (zh) 1,4-卟啉-二氢吡啶-氧化石墨烯复合物的制备方法
WO2020093686A1 (zh) 一种用胆绿素Ⅸα二酯制备高含量胆红素Ⅸα的方法
CN105884585A (zh) 一种具有固态发光性质的杯[4]芳烃荧光染料的制备方法
CN105542759A (zh) 一种基于红薯提取液制备荧光碳点的方法
Osadchii et al. Study of plant coumarins 1. Transformations of peucedanin
CN106674177B (zh) 一种7-丙烯酰氧基-4-甲基香豆素的合成方法
CN103130714A (zh) 富勒烯基丙二酰胺苄氧基吡啶酮衍生物及其制备方法
CN110759924B (zh) 脱镁叶绿酸a甲酯的制备方法
CN105080527A (zh) 一种复合催化剂、其制备方法和木质素的解聚方法
CN109422742B (zh) 9位取代的娃儿藤碱衍生物及其制备和在抗烟草花叶病毒活性中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant