CN105154408A - 一种检测抗除草剂草甘膦蛋白的单克隆抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种杂交瘤细胞株。该交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.10497。本发明还提供了由该杂交瘤细胞分泌的一种单克隆抗体和它们在检测抗除草剂草甘膦蛋白的用途。本发明的杂交瘤细胞株所分泌得到的单克隆抗体能够用于G2-EPSPS蛋白的免疫杂交检测，可检测到重组G2-EPSPS蛋白及转G2-EPSPS作物种子；对CP4-EPSPS蛋白不呈现交叉反应，和4种不同来源的各种非G2-EPSPS转基因作物也不呈现交叉反应。

Description

一种检测抗除草剂草甘膦蛋白的单克隆抗体及其用途

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种杂交瘤细胞株、一种单克隆抗体及其在检测抗除草剂草甘膦蛋白中的用途。

背景技术

20世纪80年代以来，转基因抗除草剂作物得到了大面积的推广与种植，开创了抗除草剂作物发展的新局面。由于草甘膦除草剂具有广谱、无土壤残留及环境友好的特性，草甘膦陆续在100多个国家注册，其用量与日俱增，成为世界上应用最广、产量最大的农药品种，其年销售值一直居农药之首，全世界年销售值超过了29.3亿美元。但它作为一种非选择性除草剂，对农作物同样有灭生性作用，这极大限制了草甘膦在农业生产中的应用范围。美国孟山督公司通过向植物转入具草甘膦抗性的CP4-EPSPS基因，成功培育出了商业化的转基因抗草甘膦作物，大大减少了田间杂草使用草甘膦的用量及除草费用，为草甘膦的应用发展开辟了新的途径。目前已取得了一系列抗草甘膦作物，它们是：大豆、棉花、玉米、油菜、甜菜、烟草、花生、小麦、向日葵、马铃薯、水稻、番茄、苜蓿、百脉根、黑麦草、杨树等，具有我国自主知识产权的高抗草甘膦的5－烯醇丙酮酸莽草酸－3－磷酸合成酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthase，EPSPS)的转基因油菜、玉米、小麦和棉花已进入中间实验阶段。随着转基因作物研发和商品化的快速发展，转基因作物释放可能带来的环境安全问题引起了人们的高度重视。因此，建立和完善转基因成分的检测技术，尤其是我国比较缺乏的转基因作物蛋白检测技术，既是转基因安全性评价的重要研究内容，也是基因工程安全管理的重要技术保障；为促进我国转基因作物产业化开发提供有力的技术支撑，保护我国人民健康，保护广大农民的利益和我国农业的持续健康发展具有重要意义。

G2-EPSPS蛋白编码基因克隆自草甘膦污染土壤细菌基因组文库，具有很高的草甘膦耐受性。该基因编码的蛋白经分析属于ClassI类型，酶活测定显示该蛋白具有高底物亲和能力和低草甘膦亲和力，因此能赋予宿主高草甘膦除草剂耐受力。在酶学水平上G2-EPSPS基因草甘膦耐受性高于孟山都公司的CP4-EPSPS基因。

在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。这些定性或半定量测定的关键在于单克隆抗体的使用，但是，目前已有的抗G2-EPSPS蛋白的单克隆抗体难以达到较高的敏感度和特异性。

发明内容

本发明的目的是提供一种较高的敏感度和特异性的抗G2-EPSPS蛋白的单克隆抗体。

为了实现上述目的，一方面，一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.10497。

再一方面，本发明还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.10497的杂交瘤细胞株产生。

再一方面，本发明还提供了如上所述的单克隆抗体转G2-EPSPS基因农作物中的用途。

通过上述技术方案，本发明能够通过WESTERNBLOT方法对G2-EPSPS蛋白进行检测，并对CP4-EPSPS蛋白不呈现交叉反应，并且对5种不同来源的各种非G2-EPSPS转基因作物也不呈现交叉反应。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

生物材料保藏

本发明的杂交瘤细胞株是本发明的发明人自行融合筛选得到的，其保藏编号为CGMCCNO.10497，保藏日期为2015年04月10日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为抗G2单克隆抗体杂交瘤细胞株。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是实施例2中单克隆抗体亲和层析纯化的结果图。

图2是实施例2中单克隆抗体2KG3低倍稀释应用在WesternBlot检测里的结果图。

图3是实施例2中单克隆抗体2KG3高倍稀释应用在WesternBlot检测里的结果图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

一方面，一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.10497。

再一方面，本发明还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.10497的杂交瘤细胞株产生。

其中，由保藏编号为CGMCCNO.10497的杂交瘤细胞株产生单克隆抗体的方法可以为本领域常规的方法，例如小鼠腹水法。

再一方面，本发明还提供了如上所述的单克隆抗体转G2-EPSPS基因农作物中的用途。

其中，可以使用本领域常规的蛋白免疫检测方法将如上所述的单克隆抗体用于检测转G2-EPSPS基因农作物。例如，可以从待检测的农作物中提取全蛋白，然后用免疫杂交(WESTERNBLOT)的方法进行检测，如果出现G2-EPSPS的阳性条带，则指示待检测的农作物为转G2-EPSPS基因农作物。

以下，通过实施例进一步详细说明本发明。以下实施例中，所用的试剂均为商购获得。

实施例1

对取自草甘膦污染土壤样品提取细菌总DNA，经电泳检测后来自2号样品(G2)的总DNA质量较好。对G2细菌总DNA进行部分酶切(Sau3AI)，回收3-20kb大小片段，同时对pACYC184质粒进行BamHI酶切，然后进行连接反应。将连接产物转化aroA基因缺失大肠杆菌ER2799，在M9培养基上筛选生长菌落。从生长菌落中提取质粒后进行测序鉴定，将含有EPSPS编码基因aroA的质粒命名为pAC_G2aroA。根据NCBIblast分析结果，找到一个长1332bp编码444个氨基酸的aroA基因，根据G2-aroA(即G2-EPSPS)序列设计引物，在上游引物5’端人工添加BamHI酶切序列，在下游引物5’端人工添加HindIII酶切序列。引物合成、测序均由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。具体所用引物序列如表1所示。

表1

按照表2和表3所列的条件进行PCR反应。

表2

成分	体积
		模板：pACG2aroA质粒	1μL(30-50ng)
引物1：G2aroA(FB)	1μL(50pM)
		引物2：G2aroA(RH)	1μL(50pM)
dNTPs	2μL(2.0mM)
		10×Buffer	2μL
E×Taq	0.2μL(2.5U)
		ddH2O	12.8μL
共计	20μL

表3

94℃预变性DNA	5min
		94℃变性	30sec
59℃退火	30sec
		72℃延伸	30sec
30个循环后
		72℃补充延伸	10min

按照表4所列的条件进行PCR产物与pGEM-T载体连接，并将连接产物转化大肠杆菌。

表4

成分	体积
		10×连接酶缓冲液	1μL
pGEM-T载体	1μL(50ng)
		PCR产物	2μL(≈25ng)
T4DNA连接酶(3U/μL)	1μL
		ddH2O	5μL
共计	10μL

其中，连接和转化的条件包括：4℃过夜连接，连接产物转化入大肠杆菌(E.coli)JM109的感受态细胞中，涂布在加有Amp(50mg/mL)，IPTG(200mg/mL)和X-gal(20mg/mL)的LB平板上进行重组转化的白色菌落筛选。质粒提取及酶切鉴定后送于诺赛生物公司测序鉴定。

按照表5和表6所列的条件，将测序检测正确插入目的片段基因序列的重组质粒利用BamHI和HindIII限制性内切酶消化，连接到相应内切酶消化的表达载体pET28a上，构建成重组表达载体。

表5

成分	体积
		ddH2O	15μL
重组质粒	2μL(约100ng)
		BamHI	0.5μL(2,000U)
HindIII	0.5μL(2,000U)
		10×缓冲液	2μL
共计	20μL

表6

成分	体积
		ddH2O	15μL
载体pET28a	2μL(约100ng)
		BamHI	0.5μL(2,000U)
HindIII	0.5μL(2,000U)
		10×缓冲液	2μL
共计	20μL

经过限制性内切酶消化的重组质粒和载体片段利用QXIIDNA纯化回收试剂盒(QIAEXIIDNAGelExtractionKit)经过凝胶电泳进行目的片段回收，回收方法包括：(1)将目的条带从0.5％的琼脂糖凝胶上切下，称量其重量；(2)加入3倍体积的QXIBuffer和2倍体积的灭菌的超纯水和5μl的QXII悬浮液；(3)50℃水浴10min，直至胶全部溶解；(4)以最大速度离心0.5min，弃上清；(5)沉淀重悬于500μL的QXIBuffer，以最大速度离心0.5min，弃上清；(6)沉淀重悬于500μL的PEBuffer，以最大速度离心0.5min，弃上清；(7)沉淀干燥后加入30μL的ddH₂O；(8)50℃水浴10min；(9)以最大速度离心0.5min，上清转管(即为所得纯化的总DNA液体)；(10)电泳检测，贮存于-20℃。

利用T4DNA连接酶将回收后的BamHI和HindIII消化后的目的片段和载体pET28a片段连接，连接混合液中加入载体和外源片段的摩尔比约为1:3。连接体系如表7所示。

表7

成分	体积
		10×Ligase buffer	1μL
pET28a Vector	1μL(50ng)
		目的片段	1.5μL(≈25ng)
T4DNA Ligase(3U/μL)	1μL
		ddH2O	5.5μL
Total	10μL

混匀，4℃过夜连接，连接产物转化入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)的感受态细胞中，在含有50μg/mL的Km抗生素的平板上进行筛选并进行质粒的酶切鉴定。

将BL28_G2AroA接入到50mL含50mg/L卡那霉素(Km)LB液体培养基中，37℃摇菌培养至OD₆₀₀值为0.5～0.7时，加入IPTG(200mg/mL)诱导蛋白的表达，菌液转入30℃培养，0～8h每隔1h取样1.5mL菌液，SDS-PAGE电泳检测。将IPTG诱导合适时间的菌液离心并收集菌体，加入2mLE-Buffer(5mMTris-HClpH7.8，1mMEDTApH8.0，1mMDTT)重悬菌体，于-86℃冻融一次，然后超声波破碎(200W，超声1.5Sec，间隔2.5Sec，10-20min)，4℃，12,000rpm离心去除细胞碎片，上清液为粗提物，取少量上清液进行SDS-PAGE电泳检测，其余上清液加入50％(w/v)甘油，混匀后于-20℃保存备用。

从上清液中提纯G2-aroA蛋白(即G2-EPSPS蛋白)。融合蛋白的N端含有6个His-Tag，因此采用Ni-NTA偶联的NTA树脂进行亲和层析纯化。首先将G2-aroA融合蛋白上清液逐步滴加到层析柱中，利用重力作用过滤溶液。而后层析柱用含不同咪唑梯度(10，50，100，150，200，250mM)的NTA洗脱液洗脱蛋白，分部收集洗脱液。当洗脱液中的咪唑浓度在200mM时，蛋白洗脱量最大。聚丙烯酰胺凝胶电泳检测收集到的蛋白纯度后用透析液(20mMHepe、pH7.5、1mMDTT、200mMKCl和50％甘油)对纯化蛋白进行透析，将纯化的蛋白分装，-70℃保存。

实施例2

G2-EPSPS蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

1.实验方法

1.1小鼠的免疫

(1)选用8W⁺的BALB/c雌小鼠按剂量分组免疫4次：(初次免疫前取眼血作为阴性对照)，免疫剂量分别为50、100、150、200μg/只(即实施例1得到的G2-EPSPS蛋白)。初次免疫时加等体积福氏完全佐剂皮下多点注射；以后隔两周进行一次免疫，以相同剂量重组抗原加等体积福氏不完全佐剂皮下多点注射，追加免疫两次。第三次免疫结束后10天左右用重组抗原包被ELISA板，用间接ELISA测定小鼠血清的抗体效价；

(2)融合前三天对抗体效价最高的(1:10⁵以上)小鼠尾静脉注射加强免疫(50μg)。追加免疫72h后进行细胞融合。

1.2细胞融合

1.2.1饲养细胞制备

细胞融合前一天，按照以下方法制备饲养层细胞：

(1)将8W⁺健康雄性BALB/c小鼠，拉颈处死后，于75％乙醇浸泡2-3min；

(2)移至超净台内，以仰卧位固定在解剖板上，用眼科剪剪开胸腹部皮肤，用镊子纵向两侧剥离，暴露腹壁，并用75％乙醇消毒其腹膜；

(3)用止血钳轻轻拉起腹膜，将10mL预温的1640培养基用注射器注入腹腔，用棉球轻揉腹腔1-2min，吸出细胞悬液，放入离心管中；

(4)离心：1000rpm，5min，弃上清；

(5)用10mL含血清HAT培养基将细胞混匀，细胞计数，调整细胞密度于2×10⁵/mL；

(6)将此细胞悬液加入96孔细胞培养板，100μL/孔，则细胞数为2×10⁴/孔；

(7)置37℃，5％CO₂孵箱培养，供次日融合实验用。

1.2.2骨髓瘤细胞SP2/0的制备

(1)收获对数生长期SP2/0细胞，用1640培养基洗涤3次，离心1000rpm，5min，弃上清；

(2)用1640培养基重悬细胞。取100μL细胞悬液，以0.2％台盼蓝染色，进行细胞计数，要求细胞活力>95％，并调整细胞密度待用。

1.2.3脾细胞悬液的制备

(1)将3天前经过冲击免疫的BABL/c小鼠摘除眼球放血，断颈处死，于75％乙醇浸泡2min；

(2)移至超净台内，剪开腹部皮肤向两侧剥离，暴露腹壁；换剪刀、镊子，剪开腹膜，取出脾脏，去掉脂肪和结缔组织，用1640培养基冲洗；

(3)将脾脏置于200目的筛网上，一边用注射器芯轻轻地研磨；一边以培养液冲洗，收集脾细胞悬液，离心1000rpm，5min，弃上清；

(4)用1640培养基重悬细胞，离心洗涤2次：1000rpm，5min，弃上清；

(5)用10mL不完全培养基重悬。取100μL细胞悬液，以0.2％台盼蓝染色，要求细胞活力>95％，并计数脾细胞。剩余细胞调整细胞密度待用。

1.2.4细胞融合及培养

(1)将脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以5:1比例放于50mL离心管中混匀，1000rpm离心5min，弃上清，用食指轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散呈糊状；

(2)一边均匀转动离心管，一边用1mL吸管逐滴加入50℃预温的50％PEG40001mL，于1min内完成；

(3)加1mL,37℃预热的1640培养基，在1min内完成；

(4)加10mL，37℃预热的1640培养基，在5min内完成；

(5)离心：800rpm，8min；细胞沉淀重悬于100mLHAT培养基中；

(6)按100μL/孔将细胞悬液转移到接种了饲养细胞的细胞培养板中，同时留2孔加未经融合的SP2/0细胞作对照，观察细胞对HAT的敏感性。培养板置于37℃、5％CO₂孵箱中培养；

(7)融合7天后，采用半量换液的方式更换HAT培养液。以后每3-5天半量换液一次；

(8)3-4周后，换完全培养基维持培养。

1.3ELISA筛选阳性杂交瘤细胞

(1)融合后的细胞培养约12-15天左右，生长到培养孔底面积的1/4时，取上清用间接ELISA法检测特异性反应和交叉反应，对杂交瘤细胞进行筛选。重组蛋白G2-EPSPS为包被抗原，包被浓度5μg/mL常规包被ELISA板。往包被ELISA板中加100μL/孔的细胞培养上清液，以免疫鼠血清为阳性对照(1:50稀释，稀释液为PBS)，SP2/0细胞孔培养上清为阴性对照。细胞上清与包被ELISA板孵育1h，充分洗涤后加入HRP标记的羊抗鼠IgG抗体(1:10000稀释)100μL/孔，37℃孵育30min，弃二抗。充分洗板后每孔加TMB100μL显色15min，再加入1NH₂SO₄50μL/孔终止反应。测定OD₄₅₀值。

(3)ELISA筛选获得132株分泌G2-EPSPS单抗的细胞株；上述132株G2-EPSPS单抗的细胞株所分泌的单克隆抗体均对重组G2-EPSPS蛋白具有阳性反应。选择其中阳性反应最强的20株细胞进一步亚克隆培养，其余细胞株直接扩大培养，冻存和少量生产腹水。

1.4有限稀释法进行克隆化培养

(1)克隆化的前一天按照上述方式制备饲养层细胞；用HT培养液按100μL/孔接种于96孔培养板中；

(2)用移液器将待克隆的细胞吹打混匀，用含20％血清的HT选择培养液稀释至1个细胞/孔的密度；

(3)按照1个细胞/孔加到已有饲养细胞的细胞板，置5％CO₂、37℃的培养箱中进行培养；

(4)培养至第4天时，在倒置显微镜下观察并记录细胞单克隆生长孔；培养1周左右，当细胞培养液变黄时，做好标记，吸取100μL上清，用上述ELISA法检测细胞培养上清；

(5)隔3天左右待培养液变黄，再次对初检阳性孔做ELISA检测；

(6)将两次检测均为强阳性的孔内细胞进行2-3次亚克隆，直到最后一次所有仅一个细胞集落生长的培养孔上清ELISA检测结果均为阳性为止；

(7)将最后一次有限稀释后ELISA检测结果最好的杂交瘤细胞克隆转至24孔再扩大培养到6孔培养板，最后至100mL培养瓶收集细胞，冻存强阳性单克隆杂交瘤细胞。

1.5单克隆抗体的制备

1.5.1腹水的制备

(1)选取10周龄BALB/c小鼠，腹腔注射液体石蜡0.5mL/只；

(2)7天后，腹腔接种经PBS稀释的培养至对数期的阳性杂交瘤细胞，每只小鼠5×10⁵/mL杂交瘤细胞；

(3)5天后观察，当小鼠腹部明显膨胀时，用12号注射针头收集腹水，每隔3天收集一次，直到小鼠死亡；

(4)将腹水以4000rpm，离心10min；留上清分装后-70℃冰箱保存。

1.5.2单克隆抗体的纯化(proteinA亲和层析)

(1)装柱：用EquilibrationBuffer(50mMTris-HCl，150mMNaCl，pH8.6)湿润柱子，检查柱子是否堵塞，加5mLProteinAAgarose于柱中；

(2)加入10倍柱体积的EquilibrationBuffer平衡柱子；

(3)使腹水缓慢流过凝胶床；如有必要，可将收集的流出液再次上柱；

(4)加入10倍柱体积的EquilibrationBuffer，按4-5mL/管收集穿透液直至OD₂₈₀<0.1；

(5)准备收集管，收集洗脱液的试管按500μL/管加入中和缓冲液(20mM磷酸盐缓冲液，pH7.7)。

(6)用5倍柱体积的ElutionBuffer(50mMglycine，0.5MNaCl，pH2.3)洗脱，按1.5mL/管收集洗脱液直至OD₂₈₀<0.1；

(7)用5倍柱体积的EquilibrationBuffer洗柱及平衡柱子。

1.6适应于WESTERNBLOT的单克隆抗体筛选

将所获得的20株纯化单抗，使用WESTERNBLOT方法，通过对G2-EPSPS重组抗原，对非G2-EPSPS转基因作物的特异性筛选，最后筛选出只针对G2-EPSPS高特异性高灵敏性的单抗。

WESTERNBLOT单克隆抗体筛选的操作步骤：

(1)12％SDS-PAGE电泳分离蛋白。泳道1为蛋白Marker；泳道2为转Bar水稻种子抽提物(0.2g/mL)；泳道3为转NPTII油菜种子抽提物(0.2g/mL)；泳道4为转HPT水稻种子抽提物(0.2g/mL)；泳道5为转BTCry1Ac玉米种子抽提物(0.2g/mL)；泳道6为转CP4-EPSPS大豆种子抽提物(0.2g/mL)；泳道7为重组G2-EPSPS蛋白(1mg/mL)；泳道8为转G2-EPSPS玉米种子抽提物(0.2g/mL)；泳道9为转G2-EPSPS水稻种子抽提物(0.2g/mL)。

(2)电泳完毕取出凝胶，以20伏恒压1h半干转移凝胶中的蛋白至硝酸纤维膜(NC膜)。

(3)电转完成后取出NC膜，以封闭液(5％脱脂奶粉/PBST)置室温下在脱色摇床上封闭2h，PBST洗涤5min×3次。

(4)以筛选出的20株抗G2-EPSPS单抗为一抗，用封闭液分别按1：250比例稀释，室温下在脱色摇床上轻轻振荡孵育2h后弃反应液，PBST洗涤NC膜5min×3次。

(5)以HRP标记羊抗鼠IgG为二抗，用封闭液按1：20000比例稀释，室温下摇床孵育2h后弃反应液，PBST洗涤5min×5次。

(6)DAB显色液显色

1.7单克隆抗体亚类的鉴定

利用免疫球蛋白标准亚类鉴定试剂盒(SouthernBiotech公司)对单抗进行亚类鉴定，具体试验方法如下：

(1)重组G2-EPSPS蛋白5μg/mL包被酶标板，每孔100μL，37℃过夜；

(2)次日，甩掉未结合的蛋白，PBST洗涤3次，每次5min；每孔加入100μL的0.5％BSA封闭，37℃放置1h；

(3)在封闭好的酶标板中分别加入1:1000倍稀释的纯化单克隆抗体，100μL/孔，37℃孵育1h；PBST洗涤3次，每次5min；

(4)向酶标板中依次加入用PBS1:250稀释的HRP标记的羊抗鼠二抗(分别为抗鼠κ、λ、IgM、IgA、IgG₁、IgG_2a、IgG_2b和IgG₃)，100μL/孔，37℃放置1h，PBST洗涤3次，每次5min；

(5)37℃孵育30min，弃二抗。充分洗板后每孔加TMB100μL显色15min，再加入1NH₂SO₄50μL/孔终止反应。测定OD₄₅₀值。

2.实验数据及结果

2.1单克隆抗体纯度及亚类的鉴定结果

实验最终得到适用于WESTERNBLOT的单克隆抗体2KG3，单抗2KG3纯化结果如图1示，纯度大于95％。

单抗2KG3亚类鉴定结果为IgG1亚型；轻链为Kappa链。

2.2单克隆抗体特异性和灵敏度评价

WESTERNBLOT实验筛选到的单克隆抗体2KG3按1：250稀释时，对4种不同来源的各种非G2-EPSPS转基因作物(表8)没有交叉反应且能够特异性检测到重组G2-EPSPS蛋白及转G2-EPSPS作物种子，结果如表8和图2示。将单抗2KG3按1：1000稀释，仍能检测到重组G2-EPSPS蛋白及转G2-EPSPS作物种子，说明单抗2KG3有良好的检测灵敏度，结果如图3所示。

表8

单克隆抗体	2KG3(1：250稀释)	2KG3(1：1000稀释)
			No1 Bar Rice	-	-
No2 NPTII Rape	-	-
			No3 HPT Rice	-	-
No4 Cry1Ac Corn	-	-

No5 CP4-EPSPS RR soybean	-	-
			No6 G2-EPSPS Corn	+	+
No7 G2-EPSPS Rice	+	+

将产2KG3单克隆抗体的杂交瘤细胞株进行保藏，保藏编号为CGMCCNO.10497。

根据实施例2可以看出，本发明筛选到了一种单克隆抗体，能够用于WESTERNBLOT检测。可检测到重组G2-EPSPS蛋白及转G2-EPSPS作物种子；对CP4-EPSPS蛋白不呈现交叉反应，和4种不同来源的各种非G2-EPSPS转基因作物也不呈现交叉反应。

以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (3)

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.10497。

2.一种单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.10497的杂交瘤细胞株产生。

3.权利要求2所述的单克隆抗体在转G2-EPSPS基因农作物中的用途。