CN105145150A - 植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法，属于植物抗病性鉴定技术领域，其中伤根方法包括如下步骤：将经过消毒处理和浸泡处理的植物种子种至育苗袋内的培养基质中，育苗袋外侧培有培养基质，所述育苗袋由无纺布制成；通过施肥和浇水的日常管理使种子发芽生长，直至植株生长至需要的大小，此时植株的根部分穿过育苗袋生长在育苗袋外的培养基质中，其中浇水是在育苗袋的外侧浇水；将育苗袋从培在其外侧的培养基质中取出，伸出育苗袋的根被扯断，完成伤根。本发明简化了伤根步骤，降低伤根对植物生长的影响，避免影响抗病性的鉴定结果。

Description

植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法

技术领域

本发明涉及植物抗病性鉴定技术领域，尤其涉及一种植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法。

背景技术

植物的病害严重影响了相关种植产业的发展。尤其是农作物的病害对我国农业发展危害严重。以棉花为例，棉花黄萎病是棉花生产上最重要的病害之一，素有棉花“癌症”之称，已严重阻碍了我国棉花产业的健康、可持续发展。棉花黄萎病的病原菌为大丽轮枝菌(VerticilliumdahliaeKleb.)，其寄主范围广，变异性强，给病害的防治工作带来了很大困难。目前，种植抗病品种仍为最经济有效的防治方法。因此，准确快速地鉴定植物品种的抗性，对相关植物病害的防治工作具有重要的意义。

目前，室内鉴定棉花黄萎病等植物病害的方法主要是用病原菌对植物幼苗进行接种，然后统计感病植株的数量来鉴定植物对相关病害的抗性。常见的接种方法有针刺接种、伤根接种和菌液浇根接种。其中针刺接种一般不采用，因为注射不易控制，而且不适宜黄萎病菌等从根部侵染的病原菌的接种。伤根接种是目前最常用的方法，伤根接种发病快，鉴定结果准确。伤根接种法有：(1)纸钵撕底菌液蘸根法，将棉花等植物种植于纸钵中，接种时撕掉纸钵底部，然后放置于盛有病原菌的孢子悬浮液中进行接种，接种10d后开始发病，15d左右达到发病高峰；塑料钵撕底法与纸钵撕底法基本一致，目前最常用的就是塑料钵撕底法，接种时需先将塑料钵底部切去2cm进行伤根；(2)无底塑料钵菌液浇根法，利用厚塑料膜制备6cm×8cm的无底无盖圆桶，装入无菌土，播种置于盆中培养。接种时将无底塑料钵从盆中取出，置于玻璃上轻轻旋转两圈进行伤根，然后将病原菌液缓慢浇于钵底进行接种，20-25d调查发病情况；(3)苗盘移苗蘸根法，首先水培植物苗至适当的大小时，连同基质把苗拔出，切去1cm的水生根进行伤根，然后在病原菌液中蘸根接种，再埋入塑料钵体中，接种10d后开始发病。

以上伤根接种方法需要专门伤根步骤，减去水生根或置于玻璃上旋转进行伤根，步骤繁琐、费时费力。而且无底营养钵接种方法由于无底给种植管理带来很大不便。撕底或剪底接种方法，对基质也有一定的要求，操作也要十分谨慎，否则基质容易散落。苗盘移苗蘸根法需要移栽过程，接种后需要经历缓苗期，缓苗期时棉苗抗病性降低，可能加重了病情，而且移栽导致的叶片脱落给病情调查带来很大干扰。无底纸钵或塑料钵需要制作，一个抗病性鉴定周期一般40-50d，纸钵容易腐烂，不宜操作。

发明内容

有鉴于此，本发明实施例提供一种植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法，主要目的是简化伤根步骤，降低伤根对植物生长的影响。

为达到上述目的，本发明主要提供如下技术方案：

一方面，本发明实施例提供了一种植物抗病性鉴定的伤根方法，包括如下步骤：

将经过消毒处理和浸泡处理的植物种子种至育苗袋内的培养基质中，育苗袋外侧培有培养基质，所述育苗袋由无纺布制成；

通过施肥和浇水的日常管理使种子发芽生长，直至植株生长至需要的大小，此时植株的根部分穿过育苗袋生长在育苗袋外的培养基质中，其中浇水是在育苗袋的外侧浇水；

将育苗袋从培在其外侧的培养基质中取出，伸出育苗袋的根被扯断，完成伤根。

作为优选，所述消毒处理用的消毒液的有效成分为次氯酸钠，其中有效氯含量为4-10g/L，植物种子在所述消毒液中浸泡7-12分钟消毒后用无菌水将消毒液清洗干净。

作为优选，所述浸泡处理为将植物种子浸泡在无菌水中，适宜的温度和黑暗条件下浸泡至种子露白。

作为优选，浸泡处理的温度为26℃。

作为优选，所述培养基质由无菌土、蛭石和河沙按照2-4:3-2:1的质量比配制而成。

作为优选，培在育苗袋外侧的培养基质的高度不高于育苗袋内的培养基质的高度。

作为优选，所述植株长至两叶一心即可进行伤根。

另一方面，本发明实施例提供了一种植物抗病性鉴定的接种方法，伤根后待鉴定植物幼苗用病原菌进行接种，其中采用上述任一伤根方法进行伤根。

作为优选，伤根后将育苗袋浸入病原菌孢子悬浮液中实现接种，育苗袋浸入悬浮液中的部分为育苗袋内培养基质高度的三分之二，浸入时间为2秒。

再一方面，本发明实施例提供了一种植物抗病性鉴定方法，将待鉴定植物幼苗用病原菌接种，然后继续培养，并观察发病情况，根据统计结果鉴定植物抗病性，其中接种方法为上述任一种接种方法。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明实施例提供的植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法中采用的无纺布袋是市场上应用广泛的一种育苗袋，该育苗袋价格低廉，在环境中可降解，具有良好的融水性、融土性和透气性，保肥保水，不窝根。植物根系可伸出无纺布袋。利用无纺布袋种植的棉花出苗整齐，长势良好，健壮，根系发达。

接种时将无纺布袋从育苗盆中拿出时，伸出无纺布袋的根系被扯断，从而均匀的完成伤根。无需剪根，移苗等过程，不影响棉花正常生长，最大程度的减少了统计误差。接种后发病快、均匀，最早发病的植株与最晚发病的植株相差3d左右。该发明可应用于所有类似棉花黄萎病等从根部侵染的病原菌的伤根接种。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，但不作为对本发明的限定。在下述说明中，不同的“一实施例”或“实施例”指的不一定是同一实施例。此外，一或多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。

以下实施例以棉花对棉花黄萎病的抗病性鉴定为例进行说明。

挑选饱满的棉花种子，品种为新陆早13，用84消毒液(有效成分为次氯酸钠)配制种子消毒液，配置时控制有效氯含量在4-10g/L范围内，本实施例中配制得到的消毒液的有效氯含量为8g/L，用配制得到的消毒液浸种10min，倒掉消毒液，用无菌水冲洗棉种数遍至无残留消毒液，将上述冲洗后的棉种再用无菌水浸泡3h左右，以便进一步除去消毒液，然后倒掉浸泡液，再用无菌水冲洗2-3次，然后将棉种置于无菌水中，26℃，黑暗条件下浸泡12h左右，至种子刚好露白为止；

将培养基质(无菌土：蛭石：河沙的质量比为4:3:1)装入6cm×8cm的无纺布制成的育苗袋中，装至约5cm高；然后将装有培养基质的育苗袋放入育苗盒中，采用50cm×36cm×14cm的塑料盒作为育苗盒，且塑料盒用隔板隔成6排，每排放6个育苗袋，在育苗袋的缝隙中填入3cm厚的培养基质使育苗袋的下部埋在培养基质中；

挑选饱满、露白的种子种至育苗袋中，毎袋1粒，再用培养基质覆盖1cm厚左右，从育苗袋缝隙中浇水，浸润，之后于26℃，湿度为40-50％的人工气候室培养，并每周浇0.5L的Hoagland’s植物营养液，培养28-30d左右，长至两叶一心待用；

将试管保存的棉花黄萎病菌落叶型菌系592(由石河子大学农学院植物病理研究室提供，致病力较强)转移至PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基，PDA即PotatoDextroseAgar的缩写)平板上，然后于26℃霉菌培养箱中黑暗培养10d，用灭菌打孔器在菌丝生长比较一致的地方打5个直径为4mm的菌饼，将菌饼放入装有300mL的Czapek’s培养基的三角瓶中，黑暗条件下26℃，220rpm振荡培养7d，然后用4层无菌纱布过滤获得棉花黄萎病菌孢子悬浮液，用血球计数板计数并调至浓度为1×10⁶cfu/mL；

在接种前一天，棉苗在保证健康存活的条件下不要浇水。将育苗袋从育苗盒中拿出，伸出育苗袋的根在拿出时被扯断，从而完成伤根，然后在准备好的孢子悬浮液中浸蘸2sec(或者将孢子悬浮液5-10ml倒入培养皿、纸盘等容器，将育苗袋放入容器中，定量接种)，育苗袋浸入孢子悬浮液中的部分为育苗袋内培养基质高度的三分之二，然后放回育苗盒，继续在上述条件下培养，并观察发病情况。

按如下标准进行统计：

分级标准：0级：健苗，无病状；

一级：1-2片子叶表现病状，真叶不显病状；

二级：子叶和1片真叶表现病状；

三级：2片真叶表现病状；

四级：全部叶片表现病状，严重时叶片脱落，顶心枯死。

发病率(％)＝(发病株数/调查总株数)×100％。

病情指数＝(∑(各级病株数×相应病级)/调查总株数×最高病级)×100。

本发明实施例以棉花对棉花黄萎病的抗病性鉴定为例进行说明，其他植物及其他病原菌均可采用本发明实施例的方法，本领域技术人员只需根据现有技术针对不同的植物调整相应的培育步骤及参数或调整病原菌孢子悬浮液的准备步骤。本发明实施例的方法尤其适于对从根部侵染的病原菌的抗病性的鉴定。

本发明实施例中采用的无纺布袋是市场上应用广泛的一种育苗袋，该育苗袋价格低廉，在环境中易降解，具有良好的融水性、融土性和透气性，保肥保水，不窝根。本发明主要应用了植物的根系可伸出无纺布这一优点。利用无纺布袋种植的棉花出苗整齐，长势良好，健壮，根系发达。接种时将无纺布袋从育苗盆中拿出时，伸出无纺布袋的根系被扯断，从而均匀的完成伤根。无需专门的伤根步骤。无需剪根，移苗等过程，不影响棉花正常生长，避免了缓苗期时棉苗抗病性降低，加重了病情，而造成鉴定结果不准确，最大程度的减少了统计误差。采用本发明实施例的伤根方法接种后棉花发病快、均匀，最早发病的植株与最晚发病的植株相差3d左右，发病率98％以上。本发明亦适用于其他伤根接种的植物病原菌。

植物种子的消毒可选用其他适合的消毒液，如75％的乙醇，0.1％的升汞，双氧水等。本发明实施例采用次氯酸钠作为有效组分的消毒液消毒可促进种子萌发，而且消毒后易清除，影响小。可用84消毒液进行配置，原料易得。采用次氯酸钠作为有效组分的消毒液时，有效率含量可以根据情况进行调整，有效氯含量为4-10g/L仅为较优的浓度，但不限于此。

为保证棉花的健康成长，消除缺素等对棉花接种造成的影响，本发明使用的是植物Hoagland’s营养液。在保证植物健康存活的条件下亦可选用其他营养液配方。

育苗用的培养基质可选用其他不带病原菌的土；根据不同植物需要，土、蛭石、河沙的比例可适当调整。一般无菌土：蛭石：河沙的质量比为2-4:3-2:1较优。本发明实施例中上述组分采用的质量比为4:3:1，能增加土壤的通气性，提高土壤的含水量，棉花出苗不卡壳，根系发达，无烂根现象。

育苗袋的大小要适宜植株的生长，并且保证伤根时，植株的根能够伸出育苗袋。育苗袋内的培养基质的高度同样根据需要进行确定。其中较佳的高度为3-8cm。培在育苗袋外的培养基质的高度一般低于育苗袋内的培养基质的高度1cm或更多。培在育苗袋外的培养基质的高度一般2cm左右即可保证伸出育苗袋的根系保持活力。

育苗袋缝隙中填入适量的培养基质，是为了保证伸出育苗袋的根系保持活力，否则伸出育苗袋的根在空气中容易老化，变黑，干枯，影响接种效果。

在植物接种前一天，为了使棉苗更好的吸收孢子悬浮液，不要浇水，但要保证棉苗健康存活。培养基质稍干，可以扯断更多的根，保证更好的伤根效果。接种完成后育苗袋可以放入其他干净的育苗盒或其他容器，此时育苗袋的缝隙中可以不用填入培养基质，棉苗亦可长势良好。

本发明实施例中种子的前处理(消毒、浸泡处理等)及菌种的培养等均可采用现有技术。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.植物抗病性鉴定的伤根方法，其特征在于，包括如下步骤：

将经过消毒处理和浸泡处理的植物种子种至育苗袋内的培养基质中，育苗袋外侧培有培养基质，所述育苗袋由无纺布制成；

通过施肥和浇水的日常管理使种子发芽生长，直至植株生长至需要的大小，此时植株的根部分穿过育苗袋生长在育苗袋外的培养基质中，其中浇水是在育苗袋的外侧浇水；

将育苗袋从培在其外侧的培养基质中取出，伸出育苗袋的根被扯断，完成伤根。

2.根据权利要求1所述的伤根方法，其特征在于，所述消毒处理用的消毒液的有效成分为次氯酸钠，其中有效氯含量为4-10g/L，植物种子在所述消毒液中浸泡7-12分钟消毒后用无菌水将消毒液清洗干净。

3.根据权利要求1所述的伤根方法，其特征在于，所述浸泡处理为将植物种子浸泡在无菌水中，适宜的温度和黑暗条件下浸泡至种子露白。

4.根据权利要求1所述的伤根方法，其特征在于，浸泡处理的温度为26℃。

5.根据权利要求1所述的伤根方法，其特征在于，所述培养基质由无菌土、蛭石和河沙按照2-4:3-2:1的质量比配制而成。

6.根据权利要求1所述的伤根方法，其特征在于，培在育苗袋外侧的培养基质的高度不高于育苗袋内的培养基质的高度。

7.根据权利要求1所述的伤根方法，其特征在于，所述植株长至两叶一心即可进行伤根。

8.植物抗病性鉴定的接种方法，伤根后的待鉴定植物幼苗用病原菌进行接种，其特征在于，采用权利要求1-7任一项所述的伤根方法进行伤根。

9.根据权利要求1所述的接种方法，其特征在于，伤根后将育苗袋浸入病原菌孢子悬浮液中实现接种，育苗袋浸入悬浮液中的部分为育苗袋内培养基质高度的三分之二，浸入时间为2秒。

10.植物抗病性鉴定方法，将待鉴定植物幼苗用病原菌接种，然后继续培养，并观察发病情况，根据统计结果鉴定植物抗病性，其特征在于，其中接种方法为权利要求8或9所述的接种方法。