CN103975955B - 用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂及其制备和使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂及其制备和使用方法，复合生物种衣剂包括枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌，还包含作为载体介质的水、作为粘着剂的羟甲基纤维素钠、作为扩散剂的木质素磺酸钠、作为成膜剂的壳聚糖和聚乙烯醇、作为防腐剂的苯甲酸钠、作为着色剂的玫瑰精。制备方法：（1）分别制备枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌发酵液；（2）将枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌的发酵液按2∶1的比例搅拌混合；（3）按比例加入羟甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇、苯甲酸钠、玫瑰精，最后以水补足余量。使用方法：包衣、蘸根、灌根。该复合生物种衣剂抗病效果明显、持效期长、省种壮苗等功效、无环境污染。

Description

用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂及其制备和使用方法

技术领域

本发明涉及一种防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂，具体涉及含有2种土壤有益微生物、对蔬菜土传病害具有防治作用的复合生物种衣剂，以及所述生物种衣剂的制备和使用方法。

背景技术

蔬菜土传病害主要是由镰刀菌（Fusarium）、疫霉（Phytophthora）、腐霉（Pythium）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）和假单胞杆菌（Pseuodomonos）等病原菌引起的一类分布面广、危害重、防治难的植物维管束病害。病害种类很多，主要有瓜类、茄果、豆类、叶菜类立枯病、枯萎病、猝倒病、菌核病、炭疽病、根腐病等。土传病害的发生致使蔬菜生产严重减产甚至绝收，严重影响了蔬菜的产量和质量。近年来我国蔬菜生产发展迅速，全国主要蔬菜年种植面积达2.8亿亩，蔬菜产量6亿吨，其中设施蔬菜面积3000万亩，占世界设施园艺面积的80％。随着我国温室大棚蔬菜面积逐年扩大，土地利用强度增加，出现了土壤次生盐渍化、酸化及连作障碍等一系列土壤质量退化问题。土壤中有毒有害物质逐渐累积，土壤微生物种群数量及结构发生变化，有害微生物数量增加，土传病害严重。对山东寿光170栋蔬菜大棚随机调查，土传病害严重发生的达73.2%；河南济源市2500栋大棚，发生土传病害的占95%以上，土传病害已成为制约设施栽培蔬菜持续、高效发展的主要因素。长期以来的化学防治不仅未能控制病害发展，而且造成严重的农药残留和土壤污染。植物根围土壤中广泛存在能产生拮抗性物质、抑制病原菌侵染、促进植物的生长的有益微生物，如芽孢杆菌、放线菌等，是经济有效的生防因子，利用土壤有益微生物防治植物土传病害，探索控制土传病害的生物防治途径，对农业可持续发展具有重大意义。

大量研究证明有多种拮抗性细菌在土传病害生物防治上具有潜力，链霉菌(Streptomycesspp.)能产生多种抗生素，从泥炭藓中分离获得的灰绿链霉菌K61(S.griseoviridis)对康乃馨枯萎病、瓜果腐霉都有很强的抑制作用可降低病原菌的扩展，提高康乃馨和瓜果的产量；农抗120是中国农科院生防所首次研制成功的一种广谱抗真菌微生物农药，对西瓜枯萎病防治效果达55%-98.1%。西北农业大学筛选的生防放线菌Act1在植物根部具有较好的定殖稳定性，能够促使西瓜根域土壤由真菌型向细菌型转变，形成含有大量拮抗性放线菌、抗御西瓜枯萎菌等土传病害致病菌的生物屏障。美国爱达荷州大学分离的放线菌WYEC108能有效抑制多种真菌生长，对豌豆种子进行包衣处理终极腐霉菌（Pythiumultimum）的侵染率下降了70%，同时株高、净重都显著增加。多种芽孢杆菌被广泛研究并作为商业化生产的生防菌，用分离自丝瓜土壤的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilus)TG26浸根处理西瓜和烟草幼苗，对西瓜枯萎病和烟草青枯病的防效均达100％，田间试验对西瓜枯萎病和烟草青枯病防效分别为73.1％和79.6％，并有明显的增产效应。哈茨木霉(Trihoderma.harzianum)T-22菌株是由哈茨木霉T-95和从哥伦比亚土壤根围分离的定殖能力强的哈茨木霉菌株经细胞融合而获得，能降低番茄的根腐病和枯萎病的发病率，用哈茨木霉处理种子，灌溉温室土壤，或者制成颗粒沟施，哈茨木霉都能定殖在根系的所有部位并且能维持很长一段时间，该菌已商业化生产并用于大田和温室土传病害防治。目前美国和澳大利亚已有80多种微生物农药注册用于防治大田和温室土传病害，而包括我国在内的大多数国家均极少有防治植物土传病害的生物农药注册登记。

近年来通过向土壤或特定的受侵染区域施用添加枯草芽孢杆菌等拮抗菌的有机肥而直接导入拮抗菌进行生物防治取得了一定的成效，同样也有将枯草芽孢制备成拌种剂用于蔬菜土传病害的防治。但枯草芽孢杆菌等单一制剂作用速度慢、防效不稳定。放线菌由于代谢产生抗生素而对多种土传病害有明显抑制作用，但由于不能在植物根际持久定殖，持效性较短，这些实际问题制约了应用有益微生物防治土传病害技术的进一步推广应用。公开号为CN1930991A、公开日为2007年3月21日的中国发明专利申请公开了一类含有地衣芽孢杆菌的复配杀菌剂，将地衣芽孢杆菌与生物杀菌剂按一定比例混配成常规剂型使用，生物杀菌剂包括枯草芽孢杆菌等，采用这种复配的杀菌剂优于单一制剂，但是防治效果还是不理想。“一种海洋放线菌的分离鉴定及活性研究”（信艳娟等，生物技术发展，第二卷第5期，第354页-358页）公开了分离得到的一株娄彻氏链霉菌，其发酵液仅仅对供试的辣椒疫霉具有抑菌活性，其并没有公开对其他植物的抑菌活性。公开号为CN1398521A、公开日为2003年2月26日的中国发明专利申请公开了一种防病微生物农药可湿性粉剂的生产工艺：BSN菌种→种子灌接种培养→移种至发酵罐培养→加稳定剂和助剂→出料→高压喷雾干燥→包装。但是采用这种制备方法需要通过高压喷雾干燥处理，生产成本高，工艺复杂。公开号为CN102972447A、公开日为2013年3月20日的中国发明专利申请公开了一种生物拌种剂，包含作为载体介质的膨润土、作为粘着剂的淀粉和羟甲基纤维素及土壤有益微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌及娄彻氏链霉菌，但是这种生物拌种剂存在以下缺陷：扩散、成膜效果差，包衣处理不均匀，枯草芽孢杆菌在植物根际定殖速度慢、定殖量少，使用效果不稳定。

种子包衣技术是国际上广泛运用、防治植物土传病虫害、调节植物生长的种子加工技术。传统的种衣剂都是由化学农药加成膜材料组成的，使用后容易造成环境污染和农药残留，不利于土壤微生物类群的改善，因此开发新型生物种衣剂是种子处理技术未来的发展方向。

发明内容

本发明的目的提供一种用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂及其制备和使用方法，复合生物种衣剂具有抗病效果明显、持效期长、省种壮苗等功效，还具备使用方便、使用方法多样、对作物安全、能促进蔬菜种苗生长发育、提高蔬菜产量等优点。

本发明目的是通过以下技术方案实现的：

一种用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂，包括枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌，其特征是，还包含作为载体介质的水、作为粘着剂的羟甲基纤维素钠、作为扩散剂的木质素磺酸钠、作为成膜剂的壳聚糖和聚乙烯醇、作为防腐剂的苯甲酸钠、作为着色剂的玫瑰精。所述枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为45-60%，枯草芽孢杆菌含量≥3×10¹⁰cfu/g，娄彻氏链霉菌含量≥10PMV/g；所述羟甲基纤维素钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为3-5%；所述木质素磺酸钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.5-0.6%；所述壳聚糖的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为1-1.5%；所述聚乙烯醇的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为2-2.5%；所述苯甲酸钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.2-0.3%；所述玫瑰精的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.1-0.2%；余量为载体介质水。

进一步地，所述复合生物种衣剂中各组分的含量分别为：30%枯草芽孢杆菌发酵浓缩液（活菌数≥10¹¹cfu/mL）；15%娄彻氏链霉菌发酵浓缩液（生物量≥70PMV/m）；羟甲基纤维素钠3.5%、木质素磺酸钠0.5%、壳聚糖1%、苯甲酸钠0.2%、玫瑰精0.1%、2%聚乙烯醇。

本发明还提供一种复合生物种衣剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）有益微生物枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌菌源由蔬菜根际土壤分离获得。制备按照常规微生物培养方法制备：菌种→斜面→摇瓶→种子罐→发酵罐→发酵液。枯草芽孢杆菌发酵液经超滤膜过滤浓缩至含菌量>10¹¹cfu/g。娄彻氏链霉菌经超滤膜浓缩至含量>70PMV/g；

（2）将上述浓缩的枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌的发酵液按重量比2∶1的比例在反应釜中搅拌混合；

（3）上述有益微生物菌混合液中按比例加入羟甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇、苯甲酸钠、玫瑰精，其中聚乙烯醇以少量60-70℃热水预溶并冷却至室温后加入。最后以水补足余量，制备获得复合生物种衣剂。

本发明还提供了三种复合生物种衣剂的使用方法：

第一种使用方法是复合生物种衣剂与蔬菜种子以重量比1:20-1:50进行包衣，重量比优选1:30-1:40，包衣种子直接播种育苗。

第二种使用方法是防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂用于蔬菜种苗移栽时蘸根处理，将种苗在防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂50-100倍稀释液中浸渍湿润后移栽，稀释倍数优选80-90。

第三种使用方法是复合生物种衣剂用于蔬菜种苗移栽后灌根处理，将防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂稀释300-500倍后，每穴灌根20-50mL。稀释倍数优选400-450，每穴灌根优选40-45mL。

与现有技术相比，本发明具有以下有意效果：第一，土壤中有益微生物枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌对多种土传病菌具有抑制效果，两种有益菌联合使用对土传病害具有协同防治作用，适当的配比表现出显著增效作用，利用有益微生物的联合增效作用制备复合生物种衣剂，可以显著提高生物种衣剂对蔬菜土传病害的防治作用。第二，蔬菜种子通过复合种衣剂包衣处理，使种子接种具有拮抗作用的娄彻氏链霉菌，娄彻氏链霉菌代谢产生阻止病原菌侵入的酶和抗生素，在植物根围形成保护层，抑制先侵染的病原菌的繁殖。同时枯草芽孢杆菌在植物根际定殖力强，能在植株根际迅速形成枯草芽孢杆菌群落，代谢消化根际富余营养物质，阻止种子腐烂和秧苗枯萎，起到持久防治效果。第三，复合生物种衣剂无环境污染、使用安全，而且能显著促进蔬菜种苗发芽、生长，增强抗逆能力、促进作物增产。第四，复合生物种衣剂加工工艺简单，贮藏期长，成本低，同时采用壳聚糖、聚乙烯醇作为成膜剂，成膜性好，附着力强，种子包衣均匀，显著提高了产品的稳定性，为蔬菜土传病害的防治开辟新的途径。

附图说明

图1是复合生物种衣剂中枯草芽孢杆菌在黄瓜苗根部的定殖作用效果图；

图2是复合生物拮抗种衣剂对不同黄瓜品种种子发芽率的影响结果图；

图3是复合生物拮抗种衣剂对不同黄瓜品种种子发芽势的影响结果图；

图4是复合生物拮抗种衣剂包衣处理对不同黄瓜品种出苗率的影响结果图。

具体实施方式

一种用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂，复合生物种衣剂其特征是利用土壤中有益微生物枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌对土传病害的协同防治作用制备得到的。复合生物种衣剂包含作为载体介质的水、作为粘着剂的羟甲基纤维素钠、作为扩散剂的木质素磺酸钠、作为成膜剂的壳聚糖和聚乙烯醇、作为防腐剂的苯甲酸钠、作为着色剂的玫瑰精及2种蔬菜根际有益微生物枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌。

枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为45-60%，其中枯草芽孢杆菌含量>3×10¹⁰cfu/g，娄彻氏链霉菌含量≥10PMV/g；所述羟甲基纤维素的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为3-5%；所述木质素磺酸钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.5-0.6%；所述壳聚糖的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为1-1.5%；所述聚乙烯醇的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为2-2.5%；所述苯甲酸钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.2-0.3%；所述玫瑰精的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.1-0.2%，余量为载体介质水。

上述用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）有益微生物枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌菌源由蔬菜根际土壤分离获得。制备按照常规微生物培养方法制备：菌种→斜面→摇瓶→种子罐→发酵罐→发酵液。枯草芽孢杆菌发酵液经超滤膜过滤浓缩至含菌量>10¹¹cfu/g。娄彻氏链霉菌经超滤膜浓缩至含量>70PMV/g；

（2）将（1）中所述枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌的发酵液按2∶1的重量比在反应釜中搅拌混合，得到有益微生物菌混合液；

（3）（2）中有益微生物菌混合液中按重量比例加入所述羟甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇、苯甲酸钠、玫瑰精，所述聚乙烯醇以少量60-70℃热水预溶并冷却至室温后加入有益微生物菌混合液中，最后以水补足余量，获得复合生物种衣剂。

上述用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，将所述防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂与蔬菜种子以重量比1:20-1:50进行包衣，优选以1:30-1:40的重量比进行包衣，包衣种子直接播种育苗。

上述用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂用于蔬菜种苗移栽时蘸根处理，将种苗在防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂50-100倍稀释液中浸渍湿润后移栽。稀释倍数优选80-90。

上述用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂用于蔬菜种苗移栽后灌根处理，将防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂稀释300-500倍后，每穴灌根20-50mL。稀释倍数优选400-450，每穴灌根优选40-45mL。

实施例1

采用共毒系数法测定枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌的协同作用。用电子天平准确称取枯草芽孢杆菌（10¹¹cfu/g）和娄彻氏链霉菌（70PMV/g）菌液，按照枯草芽孢杆菌∶娄彻氏链霉菌比例为1∶0、1∶1、3∶2、2∶1、5∶2、3∶1的不同比例配制混合菌液。在超净工作台上将7中不同比例菌液用无菌水稀释成5个浓度梯度的药液，用微量移液器从低浓度到高浓度吸取4mL药液，分别加入到事先融化灭菌的含36mLPDA培养基(温度50℃～55℃)的三角瓶中，充分摇匀，然后等量倒入4个灭菌的直径9cm的培养皿中，冷却后即成相应浓度的含药培养基平板。试验设不含药剂的处理作空白对照。在培养5d的黄瓜枯萎病菌菌落边缘，用直径5mm的灭菌打孔器打取菌饼，用接种针将菌饼接种于含药培养基平板中央，每个培养皿放置1个菌饼。每一处理重复4次。在（25±1）℃恒温培养箱中培养7d，测量菌落直径，检测菌丝生长抑制率，计算回归方程，按孙云沛（1960）的农药联合毒力计算方法计算共毒系数。结果表明不同比例的两种混合菌液对黄瓜枯萎病菌的联合抑制作用表现为相加和增效作用，其中以枯草芽孢杆菌∶娄彻氏链霉菌为2∶1增效作用最为显著，共毒系数达139.93。说明枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌合理配备可以显著提高有益菌对黄瓜枯萎病等土传病害的抑制作用。

表1枯草芽孢杆菌与链霉菌不同配比对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制活性

实施例2

在反应釜中按照实施例1中枯草芽孢杆菌∶娄彻氏链霉菌=2∶1的增效组合比例加入30%枯草芽孢杆菌发酵浓缩液（活菌数≥10¹¹cfu/g）、15%娄彻氏链霉菌发酵浓缩液(生物量≥70PMV/g)，充分搅拌混合。

上述枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌混合液中加入羟甲基纤维素钠3.5%、木质素磺酸钠0.5%、壳聚糖1%、苯甲酸钠0.2%、玫瑰精0.1%后，继续搅拌混合。

2%聚乙烯醇溶解在适量60-70℃的热水中溶解后冷却至室温，加入上述混合液中，加入蒸馏水补充至100%，继续搅拌混合即制得复合生物种衣剂。

实施例3

室内测定复合生物种衣剂对黄瓜枯萎病菌的抑制作用及包衣处理对黄瓜种苗生长的影响。按照实施案例2中方法，分别以45%枯草芽孢杆菌、45%娄彻氏链霉菌为有效成制备枯草芽孢杆菌及娄彻氏链霉菌单剂的生物种衣剂，以此为对照采用菌丝生长速率法比较实施例2中制备复合生物种衣剂的效果。用电子天平准确称取3种制备的供试种衣剂。在超净工作台上将供试种衣剂用无菌水稀释成50倍，用微量移液器从低浓度到高浓度吸取4mL药液，分别加入到事先融化灭菌的含36mLPDA培养基的三角瓶中，充分摇匀，然后等量倒入4个灭菌的直径9cm的培养皿中，冷却后即成含有0.2%种衣剂的培养基平板。试验设不含种衣剂的处理作空白对照。在培养5d的黄瓜枯萎病菌菌落边缘，用直径5mm的灭菌打孔器打取菌饼，用接种针将菌饼接种于含药培养基平板中央，每个培养皿放置1个菌饼。每一处理重复4次。在（25±1）℃恒温培养箱中培养7d，测量菌落直径，计算菌丝生长抑制率。另用3种生物种衣剂与黄瓜种子以1∶20比例包衣后，点播在预置蒸馏水湿润滤纸的培养皿中，每皿播种20粒，重复3次，置25℃光照培养箱中，定期加蒸馏水保湿，观察生长情况，培养7d后检查株高和鲜重。结果表明，500倍复合生物种衣剂对黄瓜枯萎病病菌抑制效果达84.65%，显著高于枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌单剂种衣剂的抑菌效果。同时，复合生物种衣剂对黄瓜出苗生长具有促进作用，株高和植株促进率显著分别达7.74%和14.71%，明显高于单一菌源的种衣剂（表2）。

表2不同处理对黄瓜生长的影响及对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制活性

实施例4

以复合生物种衣剂包衣黄瓜种子测定有益菌在植物根际的定殖作用。将菌株枯草芽孢杆菌单菌落接种至含有5μg／mL利福平的NA平板中，置于28℃下培养。2d后将新长出来的菌落接入同一浓度利福平的NA平板中继代培养1次后转移到10μg／mL利福平的NA平板中。依此重复操作，以两倍系列增加利福平浓度，直至筛选出300μg／mL的利福平标记菌株。标记菌株能在300μg／mL利福平的NA平板上正常生长，未标记菌株在该平板上不能生长，且标记枯草芽孢杆菌菌株与原始菌株的菌落形态特征一致，抑菌活性相当。以此标记枯草芽孢杆菌菌株代替实施例2中枯草芽孢杆菌，按实施例2方法制备含标记枯草芽孢杆菌菌株的复合生物种衣剂，复合生物种衣剂与黄瓜种子按1∶40比例拌种风干后，播种于预先高温灭菌（200℃,2h）无菌土中，置光照培养箱中，控制温度25℃，定期浇灌无菌水。以未包衣处理直接种植的黄瓜种子处理为对照。播种出苗后5、10、15、20、25、30d。取适量黄瓜苗的根际土壤、根、茎组织，采用稀释分离法回收标记枯草芽孢杆菌菌株。每处理设3次重复，28℃培养3d后，计算菌落数。结果表明，枯草芽孢菌株在黄瓜根际土壤中定殖时间超过30d，菌体数量变化幅度不大，5d时略高于其他时间；枯草芽孢菌株可进入黄瓜植株内，并在体内定殖传导，接种后5d可在根中回收，茎中含量较低，10d后在茎中含量为2.1x10²cfu／g。标记枯草芽孢菌株的定殖动态能反映出原始菌株的群体定殖动态，即枯草芽孢杆菌能在黄瓜根际土壤、根中迅速定殖，茎组织中枯草芽孢杆菌定殖量较少。定殖菌量呈先增后减的趋势。(见图1)。

实施例5

用新四号、南水2号、线杂1号等3个黄瓜品种的种子测定复合生物种衣剂对黄瓜种子发芽、出苗的影响。分别按生物种衣剂与黄瓜种子比例为1︰2.5、1︰5、1︰10进行包衣，包衣后摊晒2-3h凉干。用保湿培养法，取两层滤纸平展在直径15cm的玻璃培养皿中并充分吸水，将各处理的包衣种子摆放在吸水纸上。以未包衣种子作为对照。每处理一皿，每皿播种种子100粒，每处理4次重复。放置（25±1）℃光照培养箱中培养，发芽期间每日记录发芽数。在第3d测定发芽势；第7d种子发芽结束时测发芽率，每个培养皿随机取10株幼苗，用直尺测定主根长，同时调查一级侧根数。另将各处理的包衣种子分别播种于花盆内平整、营养一致的土壤表面，再覆一层薄土，用小型手动喷雾器喷蒸馏水，使花盆中土壤湿透。以未包衣种子作为对照。每处理一盆，每盆播种50粒，4次重复。25℃光照培养箱中分别培养，光照/黑暗︰12h/12h。播种后9d检查出苗数，计算出苗率。播种后15d，每盆随机抽取10株幼苗，分别测幼苗苗高、根长、根数、鲜重、根/茎鲜重比。发芽试验结果表明，复合生物种衣剂包衣后的新四号、南水2号、线杂1号3种黄瓜种子的发芽势、发芽率均高于相对应的空白对照，且每个黄瓜品种在3种药种比浓度处理下，发芽率、发芽势均无显著差异（见图2、3）。盆钵试验结果表明，复合生物种衣剂包衣后的新四号、南水2号、线杂1号黄瓜种子的出苗率分别为93.0%～94.0%、93.5%～94.5%、93.5%～95.0%，均高于空白对照的出苗率（图4）。

实施例6

室内盆钵处理接病土试验测定实施例2中复合生物种衣剂不同剂量处理对黄瓜苗期病害的防治效果。以复合生物种衣剂与黄瓜种子按照1︰20、1︰30、1︰50的不同比例包衣处理黄瓜种子后，播种在预先高温灭菌并分别接种了黄瓜立枯病菌、猝倒病菌和枯萎病菌的不同盆钵中，同时以10%福美双悬浮种衣剂1︰100和蒸馏水处理作对照。播种盆钵至25℃光照培养箱内培养，观察黄瓜种苗的生长和发病情况，培养20d后调查防效。试验结果表明，复合生物种衣剂不同浓度拌种对黄瓜立枯病、猝倒病、枯萎病等多种病害均有较高防效，防治效果分别在79.68%～84.04%、80.26%～86.92%、70.35%～78.51%之间，药种比1︰20、1︰30的防治效果与10%福美双1︰100拌种的防效无显著差异。

表3生物种衣剂对黄瓜苗期病害的防治效果

实施例7

采用包衣、蘸根、灌根等3种不同处理方式试验复合生物种衣剂的应用效果。生物种衣剂以药种比1︰20包衣育苗定植移栽、育苗定植时100倍蘸根和500倍灌根3种方式处理黄瓜、番茄和辣椒，定殖地为立枯病发生较重的大棚中。定殖20d后调查不同处理方式对立枯病的防治效果。结果表明，复合生物种衣剂3种不同处理方式对对黄瓜、番茄、辣椒立枯病的都有较好防效，其中以包衣处理防治效果最好，对3种蔬菜立枯病防效达在82%以上（表4）。

表4不同施药方式对立枯病的防治效果

实施例8

以番茄和辣椒试验复合生物种衣剂对作物生长发育的影响。生物种衣剂以药种比1︰20包衣育苗定植移栽、育苗定植时100倍蘸根和500倍灌根3种方式处理番茄和辣椒，定殖蔬菜大棚中，常规栽培管理。测定不同处理番茄和辣椒的平均株高、果重及单株产量。结果表明，用复合生物种衣剂包衣、蘸根、灌根处理对辣椒和番茄生长都具有明显促进作用，表现在植株株高增高、果重增加、座果期延长、产量增加，番茄平均单株产量增加10.1%～14.59%，辣椒平均单株产量增加7.67%～13.57%（表5，6）。

表5复合生物种衣剂不同处理对番茄生长及产量影响

表6复合生物种衣剂不同处理对辣椒生长及产量影响

实施例9

在反应釜中按照实施例1中枯草芽孢杆菌∶娄彻氏链霉菌=2∶1的比例加入40%枯草芽孢杆菌发酵浓缩液（活菌数≥10¹¹cfu/g）、20%娄彻氏链霉菌发酵浓缩液(生物量≥30PMV/_g)，充分搅拌混合。上述枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌混合液中加入羟甲基纤维素钠5%、木质素磺酸钠0.6%、壳聚糖1.5%、苯甲酸钠0.3%、玫瑰精0.2%后，继续搅拌混合。

2.25%聚乙烯醇溶解在适量60-70℃的热水中溶解后冷却至室温，加入上述混合液中，加入蒸馏水补充至100%，继续搅拌混合即制得复合生物种衣剂。

实施例10

在反应釜中按照实施例1中枯草芽孢杆菌∶娄彻氏链霉菌=2∶1的比例加入35%枯草芽孢杆菌发酵浓缩液（活菌数≥10¹¹cfu/g）、17.5%娄彻氏链霉菌发酵浓缩液(生物量≥30PMV/g)，充分搅拌混合。

上述枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌混合液中加入羟甲基纤维素钠4%、木质素磺酸钠0.55%、壳聚糖1.25%、苯甲酸钠0.25%、玫瑰精0.15%后，继续搅拌混合。

2.15%聚乙烯醇溶解在适量60-70℃的热水中溶解后冷却至室温，加入上述混合液中，加入蒸馏水补充至100%，继续搅拌混合即制得复合生物种衣剂。

Claims (8)

1.一种用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂，包括枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌，其特征是，还包含作为载体介质的水、作为粘着剂的羟甲基纤维素钠、作为扩散剂的木质素磺酸钠、作为成膜剂的壳聚糖和聚乙烯醇、作为防腐剂的苯甲酸钠、作为着色剂的玫瑰精，所述枯草芽孢杆菌和娄彻氏链霉菌的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为45-60%，枯草芽孢杆菌含量>3×10¹⁰cfu/g，娄彻氏链霉菌含量≥10PMV/g；所述羟甲基纤维素钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为3-5%；所述木质素磺酸钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.5-0.6%；所述壳聚糖的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为1-1.5%；所述聚乙烯醇的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为2-2.5%；所述苯甲酸钠的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.2-0.3%；所述玫瑰精的重量占所述复合生物种衣剂总重量的比例为0.1-0.2%；余量为载体介质水；

所述用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）按照常规微生物培养方法，将所述枯草芽孢杆菌及娄彻氏链霉菌菌种分别制备成发酵液，枯草芽孢杆菌含量>10¹¹cfu/g，娄彻氏链霉菌含量>30PMV/g；

（2）将（1）中所述枯草芽孢杆菌、娄彻氏链霉菌的发酵液按重量比2∶1的比例在反应釜中搅拌混合，得到有益微生物菌混合液；

（3）在（2）中有益微生物菌混合液中按重量比例加入所述羟甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇、苯甲酸钠、玫瑰精，所述聚乙烯醇以少量60-70℃热水预溶并冷却至室温后加入有益微生物菌混合液中，最后以水补足余量，获得复合生物种衣剂。

2.根据权利要求1所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂，其特征是，所述复合生物种衣剂中各组分的含量分别为：30%枯草芽孢杆菌发酵浓缩液，枯草芽孢杆菌发酵浓缩液中的活菌数≥10¹¹cfu/g；15%娄彻氏链霉菌发酵浓缩液，娄彻氏链霉菌发酵浓缩液中生物量≥70PMV/g；羟甲基纤维素钠3.5%、木质素磺酸钠0.5%、壳聚糖1%、苯甲酸钠0.2%、玫瑰精0.1%、2%聚乙烯醇。

3.如权利要求1所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，其特征是，将所述复合生物种衣剂与蔬菜种子以重量比1:20-1:50进行包衣，包衣种子后播种育苗。

4.根据权利要求3所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，其特征是，所述复合生物种衣剂与蔬菜种子以重量比为1:30-1:40进行包衣。

5.如权利要求1所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，其特征是，所述复合生物种衣剂用于蔬菜种苗移栽时蘸根处理，将种苗在防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂50-100倍稀释液中浸渍湿润后移栽。

6.根据权利要求5所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，其特征是，所述稀释液的稀释倍数为80-90。

7.如权利要求1所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，其特征是，所述复合生物种衣剂用于蔬菜种苗移栽后灌根处理，将防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂稀释300-500倍后，每穴灌根20-50mL。

8.如权利要求7所述的用于防治蔬菜土传病害的复合生物种衣剂的使用方法，其特征是，所述稀释倍数为400-450倍，每穴灌根40-45mL。