CN102771326A - 一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法 - Google Patents

一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102771326A
CN102771326A CN2012102802313A CN201210280231A CN102771326A CN 102771326 A CN102771326 A CN 102771326A CN 2012102802313 A CN2012102802313 A CN 2012102802313A CN 201210280231 A CN201210280231 A CN 201210280231A CN 102771326 A CN102771326 A CN 102771326A
Authority
CN
China
Prior art keywords
banana
disease
seedlings
banana seedlings
blight
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2012102802313A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102771326B (zh
Inventor
吕顺
刘文清
曾莉莎
李洪波
王芳
周建坤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DONGGUAN BANANA VEGETABLES RESEARCH INSTITUTE
Original Assignee
DONGGUAN BANANA VEGETABLES RESEARCH INSTITUTE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DONGGUAN BANANA VEGETABLES RESEARCH INSTITUTE filed Critical DONGGUAN BANANA VEGETABLES RESEARCH INSTITUTE
Priority to CN2012102802313A priority Critical patent/CN102771326B/zh
Publication of CN102771326A publication Critical patent/CN102771326A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102771326B publication Critical patent/CN102771326B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y02P60/216—

Landscapes

  • Cultivation Of Plants (AREA)

Abstract

本发明公开了一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，包括建立香蕉苗水培系统、接种体制备及接种、香蕉苗的日常管理、病情调查与分级等步骤，通过香蕉苗期接种及水培鉴定方法能有效控制在香蕉苗期接种鉴定过程中因土壤的结构、营养、微生物等差异造成的干扰，实现对抗香蕉枯萎病种苗快速、准确鉴定，能在较小面积上连续鉴定大量组培香蕉苗，一年进行多次鉴定，提高了试验结果的可靠性、缩短了鉴定周期、节省场地及试验成本。

Description

一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法
技术领域
本发明涉及农业植物保护技术领域，尤其涉及一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法。
背景技术
香蕉枯萎病是分布于世界各主要香蕉产区的重要病害。由于香蕉枯萎病是典型的土传病害, 其防治非常困难, 应用抗病品种防治香蕉枯萎病是目前最经济有效的方法。
目前，我国普遍使用的香蕉枯萎病抗病种苗鉴定一般采用以土壤、细砂或基质为载体的盆栽接种的方法，如应用最广泛的盆栽灌根法和浸根后移栽法等，上述盆栽接种方法主要存在以下问题：1、由于土壤微生物的交互作用会影响试验结果的准确性，必须事先进行大规模的土壤消毒，操作不便，不利于抗病种苗的大量筛选；2、鉴定周期长，通常鉴定一次需要30天以上；3、种苗与土壤接触可能遭受其他土传病害的干扰，影响试验结果的准确性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的上述不足，提供一种通过在水培条件下对香蕉苗进行苗期接种，提高香蕉枯萎病育种的效率，同时为香蕉与病原菌互作机制、病原菌致病性分化、寄主抗性遗传、植物抗病机制、抗病种质资源筛选及抗病品种选育等研究提供便利的快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法。
本发明一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，通过如下步骤实现：
（1）、建立香蕉苗水培系统
选取一定容积的水培容器，所述水培容器为水培箱、水培种植槽或水培池，水培容器内加入香蕉苗水培营养液，水培容器内嵌置有定植板，所述定植板为厚度2-3cm的轻质聚苯乙烯泡沫板，所述定植板上开设有若干直径为5-6 cm的开孔，开孔内匹配置放有培养杯，所述培养杯壁上开设有若干孔洞，所述培养杯内放置有香蕉苗；将培养杯置放于开孔内后，培养杯接触香蕉苗水培营养液深度为0.5-2.0cm，以避免香蕉苗整个球茎浸没入香蕉苗水培营养液中；所述水培容器通过管道连通有小型电动加氧泵，以用于提供香蕉苗水培营养液循环及加氧；电动加氧泵上设置有定时控制器，定时控制器控制电动加氧泵启动和关闭来调节香蕉苗水培营养液中含氧量。
（2）、接种体制备及接种
制备浓度为105-108cfu/ml的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液作为接种体，选取叶龄为5-12叶期，株高为8-35cm的健康组培香蕉苗；采用伤根浸菌液法进行接种，将组培香蕉苗自苗床拨出，用自来水冲洗干净，再分别浸在配制好的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液中，以清水作对照，浸泡30-60 min后，将接种后的香蕉苗放置于培养杯内，并进行固定，移栽到盛有香蕉苗水培营养液的水培容器中；所述香蕉枯萎病病原菌为尖孢镰孢菌古巴专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense），包括4号生理小种（Foc4）、1号生理小种（Foc1）、2号生理小种或大蕉枯萎病菌等。
（3）、香蕉苗的日常管理
将接种后的香蕉苗置于温度为20~32℃、光照的环境中进行观察，光照提供方式可为自然光或人造光，保持水培容器内的香蕉苗水培营养液每小时通电加氧10-20min，并定期对香蕉苗水培营养液进行补充，记录植株的生长情况。
（4）、病情调查与分级
接种香蕉枯萎病病原菌大约10天后病症初显，开始按照病害评价等级对香蕉苗进行病害等级鉴定，记录香蕉苗的发病率及病情指数，每隔3-5天调查一次，共调查3-5次，根据发病率和病情指数判断植株抗病能力。
其中叶片病情调查方法为0级：无症状；1级：叶片黄化或萎蔫面积不超过叶片总面积的50%；2级：叶片黄化或萎蔫面积超过叶片总面积的50%；3级：叶片萎蔫或枯死，仅生长点存活；4级：整株枯死。
同时，如仅对香蕉品种抗性进行鉴定不需保留抗性的香蕉苗，在最后一次调查时同时切开球茎调查球茎危害状况。其中球茎内部症状病情调查方法为0级：球茎全部干净，维管束不变色；1级：球茎全部干净，维管束有零星小点变色；2级：维管束组织变色小于1/3；3级：维管束组织变色在1/3至2/3之间；4级：维管束组织变色大于2/3；5级：维管束组织全部变色。
本发明与现有技术比较具有以下有益效果：
（1）能直接观察不同发病时期香蕉苗根系及假茎、球茎的变化情况，为香蕉枯萎病病原菌侵染过程及寄主与病原互作机制等研究提供便利；
（2）可在较短时间内连续鉴定较大数量的组培香蕉苗，有利于大规模筛选香蕉枯萎病抗病种苗；
（3）经鉴定为具有抗性的香蕉苗可不伤根系移栽至田间继续生长；
（4）采用香蕉苗水培营养液为香蕉苗提供生长载体，可减少其他土传病害的干扰，提高试验结果准确性； 
（5）香蕉枯萎病抗病鉴定时容易进行人工控制，满足不同试验需要。
综上所述，本发明一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，通过香蕉苗期接种及水培鉴定方法，在较小面积上连续鉴定大量组培香蕉苗，一年可进行多次鉴定，提高了试验结果的可靠性、缩短了鉴定周期、节省场地及试验成本；能有效排除土壤的结构、营养、微生物等物理化学生物性差异，病原菌量差异及其他病害对香蕉枯萎病抗病性鉴定的干扰。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的特征、技术手段以及所达到的具体目的、功能，下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细描述。
本发明一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，通过对巴西（感病品种）、农科1号（中抗品种）、抗枯5号（高抗品种）3个不同抗性的香蕉品种的抗病性鉴定中，并与田间病害评价进行对照。
1.准备接种体。基于前期的致病力检测试验，采用致病力较强的供试致病菌株尖孢镰孢菌古巴专化型4号生理小种（Foc4）。4号生理小种菌株接种于无菌马铃薯乳糖产孢子培养液中（马铃薯200g，乳糖20g，水1000mL，121℃高温灭菌20min），在温度为25-28℃、转速为150r/min恒温条件下振荡培养5-7天后，4号生理小种菌液用无菌水配成浓度为106cfu/ml的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液。
2.选取叶龄为5-6叶期，株高约10cm的健康组培香蕉苗。
3.以容积为40cm ×30cm ×20cm的塑料箱作为水培容器，在水培容器上面置放厚为2 cm定植板，定植板上开有三行、每行两个直径为5.5cm的开孔，开孔内放置装有香蕉苗的多孔洞培养杯，培养杯接触营养液的部分应有5-20mm深。池外放置小型电动加氧泵用于营养液加氧，电动加氧泵接上定时器并接通电源，每小时通电加氧15min。
4.营养液的配方参考刘士哲主编的《无土栽培技术》，采用香蕉沙培营养液配方，大量元素包括：Ca(NO3)2·4H2O400 mg/L、KNO3200 mg/L、MgSO4·7H2O220mg/L、KH2PO4120mg/L、NH4NO350mg/L；微量元素包括 ：EDTA-2NaFe（含Fe14.0%）20-40mg/L、H3BO32.86mg/L、MnSO4·4H2O2.13mg/L、ZnSO4·7H2O0.22 mg/L、CuSO4·5H2O0.08mg/L、(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.02 mg/L，该配方一个剂量的EC值为1.2ms/cm，调节培养液的PH至5.8-6.0。
5.选取巴西（感病品种，重病地发病率70%以上）、农科1号（中抗品种，重病地发病率20-40%）、抗枯5号（高抗品种，重病地发病率5%左右）3个不同抗性的香蕉品种，采用浸根后移栽法进行接种，将组培香蕉苗自苗床拨出，用自来水冲洗干净，剪除部分根系，保留根长2-3cm，再分别浸在配制好的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液中，以清水做对照，浸泡30 min后置放于多孔洞培养杯里面，移栽到盛有营养液的水培容器中，置于温度为25-28℃、自然光或人工光照的环境中观察发病情况，每3天观察并调查一次发病率及叶片病情指数。每个品种接种组培香蕉苗30株，做3次重复实验，每个品种均设置清水对照。鉴定结果如下：
3个不同香蕉品种不同接种时期的发病情况
Figure 771954DEST_PATH_IMAGE002
综上所述，本发明一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法通过对比3个不同抗性品种的平均病情指数与田间病害评价结果一致，在接种后第9天即能达到明显区分，证明应用本发明提供的接种方法能够快速、准确地区分香蕉枯萎病病原菌的感病与抗病品种，并为大量筛选香蕉枯萎病抗病种苗提供了一个良好依据。
以上所述实施例仅表达了本发明的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (9)

1.一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于，通过如下步骤实现：
（1）、建立香蕉苗水培系统
选取一定容积的水培容器，水培容器内加入香蕉苗水培营养液，水培容器内嵌置有定植板，所述定植板上开设有若干开孔，开孔内匹配置放有培养杯，所述培养杯壁上开设有若干孔洞，所述培养杯内放置香蕉苗；
（2）、接种体制备及接种
制备浓度为105-108cfu/ml的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液作为接种体，选取叶龄为5-12叶期，株高为8-35cm的健康组培香蕉苗；采用伤根浸菌液法进行接种，将组培香蕉苗自苗床拨出，用自来水冲洗干净，再分别浸在配制好的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液中，以清水作对照，浸泡30-60min后，将接种后的香蕉苗放置于培养杯内，并进行固定，移栽到盛有香蕉苗水培营养液的水培容器中；
（3）、香蕉苗的日常管理
将接种后的香蕉苗置于温度为20-32℃、光照的环境中进行观察，保持水培容器内的香蕉苗水培营养液每小时通电加氧10-20min，并定期对香蕉苗水培营养液进行补充，记录植株的生长情况；
（4）、病情调查与分级
香蕉枯萎病病症初显后，开始按照病害评价等级对香蕉苗进行病害等级鉴定，记录香蕉苗的发病率及病情指数，每隔3-5天调查一次，共调查3-5次，根据发病率和病情指数判断植株抗病能力。
2.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于：所述水培容器为水培箱、水培种植槽或水培池。
3.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于：所述水培容器通过管道连通有电动加氧泵，所述电动加氧泵上设置有定时控制器，电动加氧泵启动和关闭通过定时控制器控制。
4.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于：所述定植板为厚度2-3cm的轻质聚苯乙烯泡沫板。
5.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于：所述开孔直径范围为5-6 cm。
6.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于：所述培养杯接触香蕉苗水培营养液深度为0.5-2.0cm。
7.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于：所述香蕉枯萎病病原菌为尖孢镰孢菌古巴专化型，包括4号生理小种、1号生理小种、2号生理小种或大蕉枯萎病菌。
8.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于，所述香蕉苗的发病率及病情指数按照0-4级进行病害评价，其中，香蕉苗叶片病情调查方法是0级：无症状；1级：叶片黄化或萎蔫面积不超过叶片总面积的50%；2级：叶片黄化或萎蔫面积超过叶片总面积的50%；3级：叶片萎蔫或枯死，仅生长点存活；4级：整株枯死。
9.根据权利1要求所述的一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，其特征在于，所述香蕉苗的发病率及病情指数按照0-5级进行病害评价，其中，香蕉苗内部症状病情调查方法为0级：球茎全部干净，维管束不变色；1级：球茎全部干净，维管束有零星小点变色；2级：维管束组织变色小于1/3；3级：维管束组织变色在1/3至2/3之间；4级：维管束组织变色大于2/3；5级：维管束组织全部变色。
CN2012102802313A 2012-08-08 2012-08-08 一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法 Expired - Fee Related CN102771326B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012102802313A CN102771326B (zh) 2012-08-08 2012-08-08 一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012102802313A CN102771326B (zh) 2012-08-08 2012-08-08 一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102771326A true CN102771326A (zh) 2012-11-14
CN102771326B CN102771326B (zh) 2013-04-17

Family

ID=47116644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012102802313A Expired - Fee Related CN102771326B (zh) 2012-08-08 2012-08-08 一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102771326B (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104152532A (zh) * 2014-08-07 2014-11-19 贵州省烟草科学研究院 一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法
CN104160846A (zh) * 2014-07-15 2014-11-26 武汉市蔬菜科学研究所 一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法
CN105145150A (zh) * 2015-08-04 2015-12-16 新疆农垦科学院 植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法
CN106852250A (zh) * 2016-12-15 2017-06-16 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 改良土壤酸度‑精准施肥‑配套间作综合防控香蕉枯萎病的高效栽培方法
CN109006000A (zh) * 2018-08-07 2018-12-18 广西壮族自治区农业科学院 一种鉴定筛选香蕉枯萎病抗耐病种苗的方法
CN109593823A (zh) * 2018-12-26 2019-04-09 云南省农业科学院农业环境资源研究所 香蕉品种抗性鉴定方法
CN110073957A (zh) * 2019-04-18 2019-08-02 广东省农业科学院果树研究所 一种利用无土栽培技术对香蕉镰刀菌枯萎病的抗病性进行快速鉴定的系统和方法
CN113061639A (zh) * 2021-03-22 2021-07-02 内蒙古农业大学 一种马铃薯黄萎病病原菌致病性测定方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202043495U (zh) * 2011-02-28 2011-11-23 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 用于人工接种枯萎病菌用的香蕉育苗容器
CN102613053A (zh) * 2012-04-05 2012-08-01 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种水培香蕉组培苗的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202043495U (zh) * 2011-02-28 2011-11-23 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 用于人工接种枯萎病菌用的香蕉育苗容器
CN102613053A (zh) * 2012-04-05 2012-08-01 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 一种水培香蕉组培苗的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
薛玉潇; 贾慧升; 王国芬; 刘磊; 黄俊生: "接种生防菌和病原菌对香蕉抗枯萎病的诱导", 《热带生物学报》, 31 March 2012 (2012-03-31) *
马冉; 徐春玲; 项宇; 赵传波; 谢辉: "南方根结线虫和香蕉枯萎病菌4号生理小种对香蕉复合致病力的测定", 《华中农业大学学报》, 29 February 2012 (2012-02-29) *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104160846A (zh) * 2014-07-15 2014-11-26 武汉市蔬菜科学研究所 一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法
CN104160846B (zh) * 2014-07-15 2016-02-17 武汉市蔬菜科学研究所 一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法
CN104152532A (zh) * 2014-08-07 2014-11-19 贵州省烟草科学研究院 一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法
CN104152532B (zh) * 2014-08-07 2016-01-20 贵州省烟草科学研究院 一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法
CN105145150A (zh) * 2015-08-04 2015-12-16 新疆农垦科学院 植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法
CN105145150B (zh) * 2015-08-04 2018-11-09 新疆农垦科学院 植物抗病性鉴定方法、伤根方法及接种方法
CN106852250A (zh) * 2016-12-15 2017-06-16 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 改良土壤酸度‑精准施肥‑配套间作综合防控香蕉枯萎病的高效栽培方法
CN109006000A (zh) * 2018-08-07 2018-12-18 广西壮族自治区农业科学院 一种鉴定筛选香蕉枯萎病抗耐病种苗的方法
CN109593823A (zh) * 2018-12-26 2019-04-09 云南省农业科学院农业环境资源研究所 香蕉品种抗性鉴定方法
CN110073957A (zh) * 2019-04-18 2019-08-02 广东省农业科学院果树研究所 一种利用无土栽培技术对香蕉镰刀菌枯萎病的抗病性进行快速鉴定的系统和方法
CN113061639A (zh) * 2021-03-22 2021-07-02 内蒙古农业大学 一种马铃薯黄萎病病原菌致病性测定方法
CN113061639B (zh) * 2021-03-22 2023-08-22 内蒙古农业大学 一种马铃薯黄萎病病原菌致病性测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN102771326B (zh) 2013-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102771326B (zh) 一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法
CN101496481B (zh) 一种烟草青枯病抗性的苗期鉴定方法
CN101319193B (zh) 一种蜡蚧轮枝菌菌株及其应用
CN104099287B (zh) 高产原花青素刺葡萄愈伤组织的获取与继代保持方法
CN101643772B (zh) 一种对香蕉镰刀菌枯萎病的抗病性进行快速鉴定的方法
CN102487742A (zh) 水稻稻瘟病抗性鉴定方法
CN105969652B (zh) 模拟植物悬浮细胞与其内生真菌代谢交流的共培养装置
CN105368720B (zh) 棉花内生真菌cef-082及其在棉花黄萎病防治中的应用
CN102168042A (zh) 一种铜绿假单胞菌菌株及其应用
CN100557009C (zh) 一种玫烟色拟青霉菌菌株及其应用
CN102792892A (zh) 一种花生离体诱变定向筛选抗性体的方法
CN105409613A (zh) 一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法
CN106973791A (zh) 一种甲基磺酸乙酯离体诱变大花萱草产生突变体的方法
CN105420115A (zh) 一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基及方法和应用
CN108260470A (zh) 一种提高松茸菌根化育苗的方法及应用
CN100557010C (zh) 一种粉虱座壳孢菌菌株及其应用
CN107667738A (zh) 苗期鉴定西瓜枯萎病抗性的方法
CN103146609B (zh) 一株荧光假单胞菌及其对辣椒疫霉病的防治方法
CN106434362A (zh) 一株抗紫外线的高毒力金龟子绿僵菌诱变菌株MaUV‑1及其应用
CN105660404A (zh) 一种抗peg苜蓿愈伤组织再分化的方法
CN103798044A (zh) 甘薯近缘野生种抗茎线虫病抗性鉴定方法
CN109750080A (zh) 一种快速筛选花生抗果腐病种质资源的方法
CN106613351B (zh) 一种阿魏菇液体菌种野外接种阿魏植物的方法
CN109402009A (zh) 一种筛选拮抗立枯丝核菌的固氮蓝藻的方法及其应用
CN105638417B (zh) 耐低钙大白菜品系的苗期筛选方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130417

Termination date: 20160808