CN105143199A - 多拉司他汀10和奥里斯他汀的衍生物 - Google Patents

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CN105143199A CN201480023286.3A CN201480023286A CN105143199A CN 105143199 A CN105143199 A CN 105143199A CN 201480023286 A CN201480023286 A CN 201480023286A CN 105143199 A CN105143199 A CN 105143199A
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M·佩雷斯
I·利拉特
M·拉莫特
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Pierre Fabre Medicament SA
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Abstract

本发明涉及下式(I)化合物：其中：-R1是H或OH，-R2是(C1–C6)烷基、COOH、COO–((C1–C6)烷基)或噻唑基，-R3是H或(C1–C6)烷基，以及-R4是：·被选自OH和NR5R6中的一个或多个基团取代的、具有1至8个碳原子的、直链或支链、饱和或不饱和的烃基团，·–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3(CH2CH2X4)a4(CH2CH2X5)a5R7，·被选自OH和NR9R10中的一个或多个基团取代的芳基–(C1–C8)烷基，或者·任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团中的一个或多个基团取代的杂环–(C1–C8)烷基，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，和其用途，特别是用于治疗癌症的用途，以及包含其的药物组合物及其制备方法。

Description

多拉司他汀10和奥里斯他汀的衍生物
技术领域
本发明的主题涉及新的多拉司他汀10(dolastatin10)和奥里斯他汀(auristatin)的衍生物、其制备方法、包含其的药物组合物以及其作为药品特别是在治疗癌症中的用途。
背景技术
多拉司他汀10(D10)是从海洋软体动物(截尾海兔(Dolabelaauricularia))分离到的细胞毒性肽衍生物，其绝对构型被确定并且后来在该产品的全合成之后被证实(PettitG.R.J.Am.Chem.Soc.1987,109,6883；PettitG.R.J.Am.Chem.Soc.1987,109,7581；Pettit,G.R.Heterocycles1989,28,553；Pettit,G.R.J.Am.Chem.Soc.1989,111,5015；PettitG.R.J.Am.Chem.Soc.1991,113,6692)。D10由称为dolavaline(Dov)、缬氨酸(Val)、dolaisoleucine(Dil)、dolaproine(Dap)和dolaphenine(Doe)的5个单元构成。通过修饰其组成的氨基酸的性质已经合成了该化合物的一些类似物(PettitG.R.J.Med.Chem.1990,33,3133；MiyazakiK.PeptideChemistry1993,31,85；MiyazakiK.Chem.Pham.Bul.1995,43,1706)。也已经进行了C–末端部分(右末端)的修饰，并且已经产生了众多的衍生物，其包括奥里斯他汀E或F(PettitG.R.AntiACNcerDrugDesign,1998,13,243；PettitG.R.AntimicrobialAgentsAndChemotherapy,1998,2961)。
本发明专注于修饰多拉司他汀10和奥里斯他汀E和F的衍生物的N–末端部分(左末端)。文献中公开的对该位置修饰的数个示例已经导致活性的丧失(MiyazakiK.Chem.Pham.Bul.1995,43,1706)。本发明描述的化合物在它们原始的化学结构以及它们显著的生物学性质方面不同于现有技术，考虑到文献中公开的元素，所述显著的生物学性质是完全无法预期的。这些显著的活性使得这些化合物适合用于治疗癌症。
另外，这些化合物在作为细胞毒素剂的活性和比母体化合物更易溶方面具有优势。
发明内容
因此，本发明的主题是下式(I)化合物：
其中：
-R1是H或OH，
-R2是基团：(C1–C6)烷基(例如甲基)、COOH、COO–((C1–C6)烷基)(例如COOMe)或噻唑基(例如噻唑–2–基)，
-R3是H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，特别是(C1–C6)烷基，和
-R4是：
·具有1至8个碳原子的、饱和或不饱和、直链或支链的烃链，例如(C1–C8)烷基，所述链被选自OH和NR5R6中的一个或多个(特别是一个)基团取代，其中R5和R6彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，
·–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3(CH2CH2X4)a4(CH2CH2X5)a5R7基团，其中X1、X2、X3、X4和X5彼此独立地代表O或NR8，a2、a3、a4和a5彼此独立地代表0或1(特别是a2+a3+a4+a5＝1或2，特别是1)，并且R7和R8彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，
·任选被选自芳基、OH和NR9R10基团中一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代(优选被取代)的芳基–(C1–C8)烷基，其中R9和R10彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，
·任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团中一个或多个基团(特别是一个基团，优选在杂环部分上)取代的杂环–(C1–C8)烷基，其中R12和R13彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，或者
·被选自OH和NR14R15中一个或多个(特别是一个)基团取代的–CO–((C1–C8)烷基)基团，其中R14和R15彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
基团R2至R4，特别是R4，可以是手性基团，可以是其不同立体异构体的形式，任选是立体异构混合物的形式。
在本发明的含义中，“立体异构体”是指几何异构体或光学异构体。
几何异构体由双键上取代基的不同位置导致，其因此可以具有Z或E构型。
光学异构体特别由包含4个不同取代基的碳原子上的取代基的空间上的不同位置导致。该碳原子于是形成手性或非对称中心。光学异构体包括非对映异构体和对映异构体。在镜子中互为镜像但是不能重叠的光学异构体被称为“对映异构体”。在镜子中互为不可重叠镜像的光学异构体被称为“非对映异构体”。
包含等量的两种相反手性形式的对映异构体的混合物被称为“外消旋混合物”。
在本发明中，“药学上可接受的”是指其可以在制备药物组合物中使用，其一般是安全、无毒的且不是生物学上或其它方面不良的，且其对于兽用以及人类药用都是可接受的。
化合物的“药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物”是指如此处定义的药学上可接受的并具有所期望的母体化合物的药理学活性的盐、水合物或溶剂化物。
药学上可接受的盐尤其包括：
(1)与药学上可接受的无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和类似的酸形成的药学上可接受的酸的加成盐；或与药学上可接受的有机酸如乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硬脂酸、乳酸和类似的酸形成的药学上可接受的酸的加成盐；以及
(2)当存在于母体化合物的酸质子或被金属离子，例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子替换；或与药学上可接受的有机碱如赖氨酸、精氨酸和类似物配合；或与药学上可接受的无机碱如氢氧化钠、碳酸钾、氢氧化钙及类似物配合时形成的药学上可接受的碱的加成盐。
可以使用常规化学方法由包含碱或酸官能团的本发明化合物和相应的酸或碱制备这些盐。
本发明式(I)化合物优选是盐的形式，特别是药学上可接受酸加成盐的形式。
优选地，根据本发明的式(I)化合物是药学上可接受酸加成盐的形式，所述酸例如可能是三氟乙酸、乙酸或盐酸，特别是三氟乙酸。
溶剂化物包括在本发明化合物最后制备步骤中由于溶剂的存在而获得的常规溶剂化物，所述溶剂例如可能是乙醇。
在本发明中“烷基”是指直链或支链、饱和的烃链。例如，可以提及的是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基或己基。
在本发明的含义中，“(Cx–Cy)烷基”是指包含x至y个碳原子的如上所定义的烷基链。因此，(C1–C6)烷基是具有1至6个碳原子的烷基链。
在本发明的含义中，“芳基”是指优选具有6至10个碳原子且可以包含一或两个稠合环的芳香烃基团。例如，可以引例苯基或萘基。有利地，其是苯基。
在本发明的含义中，“杂环”是指具有1或2个稠合环的、饱和、不饱和或芳香的烃基团，其中一个或多个，有利地1至4个，更有利地1或2个碳原子各自被选自氧、氮和硫的杂原子替换。有利地，杂环包含5至10个碳原子和杂原子。例如，可以提及的是呋喃、吡咯、噻吩、噻唑、异噻唑、噁二唑、咪唑、噁唑、异噁唑、吡啶、嘧啶、哌嗪、哌啶、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、苯并呋喃、苯并噻吩、二氢吲哚、吲嗪、苯并噻唑、苯并噻吩、苯并吡喃、苯并噁唑、苯并[1,3]二氧杂环戊烯、苯并异噁唑、苯并咪唑、色满、色烯、二氢苯并呋喃、二氢苯并噻吩、二氢异噁唑、异喹啉、二氢苯并[1,4]二噁英、咪唑并[1,2-a]吡啶、呋喃并[2,3-c]吡啶、2,3-二氢-1H-茚、[1,3]二氧杂环戊并[4,5-c]吡啶、吡咯并[1,2-c]嘧啶、吡咯并[1,2-a]嘧啶、四氢化萘和苯并[b][1,4]噁嗪。
在本发明中，杂环更特别地是具有5至6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环。例如，可以提及的是吡咯、咪唑、吡啶、嘧啶、哌嗪和哌啶环。优选地，其是吡啶、哌啶或咪唑。
在本发明的含义中，“芳基–(C1–C8)烷基”是指通过如上所定义的且包含1至8个，特别地1至6个，有利地1至4个，优选1或2个碳原子的烷基连接至分子的剩余部分的如上所定义的芳基。芳基部分优选是苯基部分。(C1-C8)烷基部分有利地是(C1-C4)烷基，优选是(C1-C2)烷基。特别地，芳基–(C1–C8)烷基是苄基或苯乙基。
在本发明的含义中，“杂环–(C1–C8)烷基”是指通过如上所定义的且包含1至8个，特别地1至6个，有利地1至4个，优选1或2个碳原子的烷基连接至分子的剩余部分的如上所定义的杂环基团。(C1-C8)烷基部分有利地是(C1-C4)烷基，优选是(C1-C2)烷基。杂环更特别地是具有5至6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环，例如吡咯、咪唑、吡啶、嘧啶、哌嗪或哌啶，优选吡啶、哌啶、或咪唑。
“不饱和”是指使化合物包含不饱和性，即双键或三键。
在本发明的化合物中，一种特别推荐类型的化合物对应于式(I)化合物，其中R1是OH且R2代表(C1-C6)烷基，例如甲基。
另一种特别推荐类型的化合物对应于式(I)化合物，其中R1是氢且R2是噻唑(特别是噻唑-2-基)。
另一种特别推荐类型的化合物对应于式(I)化合物，其中R1是氢且R2是COO(C1-C6)烷基，例如COOMe。
另一种特别推荐类型的化合物对应于式(I)化合物，其中R1是氢且R2是COOH基团。
因此，本发明的化合物有利地是式(I)化合物，其中：
-R1＝OH且R2＝Me(甲基)，或
-R1＝H且R2＝COOH、COOMe或噻唑-2-基。
另一种特别推荐类型的化合物对应于式(I)化合物，其中R4是未取代的或被选自NR12R13和OH的基团取代的杂环-(C1-C8)烷基。
类似地，本发明特别涉及式(I)化合物，其中R4是被选自NR9R10和OH中的一个或多个基团取代的芳基-(C1-C8)烷基。
根据本发明的一个特定实施方案，R2更特别是甲基、COOH、COOMe或噻唑-2-基。
优选地，R1是H且R2是COOH或COO(C1-C6)烷基，尤其是COOH或COOMe。
根据第一个优选的实施方案，R1是H且R2是COOH。
根据第二个优选的实施方案，R1是H且R2是COOMe。
R3特别地代表H或甲基，有利地是甲基。
根据特别的实施方案，R4代表：
-具有1至8个碳原子的、饱和或不饱和、直链或支链的烃链，例如(C1-C8)烷基，所述链被选自OH和NR5R6中的一个或多个(特别是一个)基团取代，其中R5和R6彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，
--(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3(CH2CH2X4)a4(CH2CH2X5)a5R7基团，其中X1、X2、X3、X4和X5彼此独立地代表O或NR8，a2、a3、a4和a5彼此独立地代表0或1(特别是a2+a3+a4+a5＝1或2，特别是1)，R7代表H且R8代表H或(C1-C6)烷基(例如甲基)，
-被选自芳基、OH和NR9R10基团中一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代(优选被取代)的芳基-(C1-C8)烷基，其中R9和R10彼此独立地代表H或(C1-C6)烷基(例如甲基)，
-任选被选自(C1-C6)烷基、OH和NR12R13基团中一个或多个基团(特别是一个基团，优选在杂环部分)取代的杂环–(C1-C8)烷基，其中R12和R13彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，或者
-COCHR16NR14R15基团，其中R14和R15彼此独立地代表H后(C1-C6)烷基(例如甲基)，且R16代表H或(C1-C6)烷基，优选(C1-C6)烷基。
根据本发明另一个特别的实施方案，R4代表以下基团：
-被选自OH和NR5R6的基团取代的(C1-C6)烷基，特别是(C2-C6)烷基，
-(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3R7，其中a2+a3有利地代表1或2，特别是1，有利地其中R7＝H，
-被选自OH和NR9R10的基团(优选在芳基部分上)取代的芳基-(C1-C2)烷基，
-任选被选自NR12R13、OH和(C1-C6)烷基，优选选自OH和NR12R13的基团(特别是被一个基团取代，优选在杂环部分上)取代的杂环-(C1-C2)烷基，或者
-COCHR16NR14R15，其中R16代表H或(C1-C6)烷基，优选(C1–C6)烷基。
根据本发明另一个特别的实施方案，R4代表以下基团：
-被选自OH和NR5R6的基团取代的(C1-C6)烷基，特别是(C2-C6)烷基，
-(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3R7，其中a2+a3有利地代表1或2，特别是1，有利地其中R7＝H，
-被选自OH和NR9R10的基团(优选在芳基部分上)取代的芳基-(C1-C2)烷基，或者
-任选被选自NR12R13、OH和(C1-C6)烷基，优选选自OH和NR12R13的基团(特别是被一个基团取代，优选在杂环部分上)取代的杂环-(C1-C2)烷基。
根据另一个特别的实施方案，R4代表：
-任选被选自芳基、OH和NR9R10基团中一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代(优选被取代)的芳基–(C1–C8)烷基，其中R9和R10彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)，或者
-任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团中一个或多个基团(特别是一个基团，优选在杂环部分上)取代的杂环–(C1–C8)烷基，其中R12和R13彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基(例如甲基)。
依然根据另一个特别的实施方案，R4代表：
-被选自OH和NR9R10基团中的一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代的芳基–(C1–C8)烷基，或者
-任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团，优选选自OH和NR12R13中的一个或多个基团(特别是被一个基团取代，优选在杂环部分上)取代的杂环-(C1-C8)烷基。
根据另一个特别的实施方案，R4代表：
-被选自OH和NR9R10基团中的一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代的芳基–(C1–C4)烷基，或者
-任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团，优选选自OH和NR12R13中的一个或多个基团(特别是被一个基团取代，优选在杂环部分上)取代的杂环-(C1-C4)烷基。
依然根据本发明另一个特别的实施方案，R4代表以下基团：
-被选自OH和NR9R10的基团(优选在芳基部分上)取代的芳基-(C1-C2)烷基，或者
-任选被选自NR12R13、OH和(C1-C6)烷基，优选选自OH和NR12R13的基团(特别是被一个基团取代，优选在杂环部分上)取代的杂环-(C1-C2)烷基。
在上面针对R4的特别的实施方案中，芳基有利地是苯基。
在上面针对R4的特别的实施方案中，杂环有利地是具有5或6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环。例如，可以提及的是吡咯、咪唑、吡啶、嘧啶、哌嗪或哌啶环。优选地，其是吡啶、哌啶或咪唑。
在上面针对R4的特别的实施方案中，芳基部分和杂环部分有利地各自被一个基团取代。
有利地，R4代表如下基团：
-–(CH2)mNR5R6，其中m代表1、2、3、4、5、6、7或8，特别是2、3或4，
-–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)(CH2CH2X3)R7或–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)R7，优选–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)R7，有利地其中R7＝H，
-被选自OH和NR9R10的基团(优选在苯基部分上)取代的苯基-(C1-C2)烷基，
-任选被选自OH和NR12R13的基团(优选在杂环部分上)取代的杂环–(C1–C2)烷基，所述杂环是具有5或6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环，特别地选自吡啶、哌啶和咪唑，或者
-–CO–CHR16–NR14R15，其中R16代表(C1–C6)烷基。
特别地，R4代表以下基团：
-–(CH2)mNR5R6，其中m代表1、2、3、4、5、6、7或8，特别是2、3或4，
-–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)(CH2CH2X3)R7或–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)R7，优选–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)R7，有利地其中R7＝H，
-被选自OH和NR9R10的基团(优选在苯基部分上)取代的苯基-(C1-C2)烷基，或
-任选被选自OH和NR12R13的基团(优选在杂环部分上)取代的杂环–(C1–C2)烷基，所述杂环是具有5或6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环，特别地选自吡啶、哌啶和咪唑。
特别地，R4可以代表以下基团：
-被选自OH和NR9R10的基团(优选在苯基部分上)取代的苯基-(C1-C2)烷基，或者
-任选被选自OH和NR12R13的基团(优选在杂环部分上)取代的杂环–(C1–C2)烷基，所述杂环是具有5或6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环，特别地选自吡啶、哌啶和咪唑。
特别地，R4可以代表以下基团：
-被选自OH和NR9R10的一个基团(优选在苯基部分上)取代的苯基-(C1-C2)烷基，或者
-被选自OH和NR12R13的一个基团(优选在杂环部分上)取代的杂环–(C1–C2)烷基，所述杂环是具有5或6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环，特别地选自吡啶、哌啶和咪唑。
R4可以特别地选自：
-–(CH2)2NH2、–(CH2)2NHMe、–(CH2)3NH2、–(CH2)3NHMe、–(CH2)4NH2、–(CH2)4NHMe，
-–(CH2)2O(CH2)2OH、–(CH2)2O(CH2)2NH2、–(CH2)2O(CH2)2NHMe，
R4可以特别地选自：
-–(CH2)2NH2、–(CH2)2NHMe、–(CH2)3NH2、–(CH2)3NHMe、–(CH2)4NH2、–(CH2)4NHMe，
-–(CH2)2O(CH2)2OH、–(CH2)2O(CH2)2NH2、–(CH2)2O(CH2)2NHMe，
有利地，R4选自：
根据本发明另一个特别的实施方案，R4是被选自OH和NR9R10，特别是选自OH和NR9R10中的一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代的芳基–(C1–C8)烷基。有利地，其是被选自OH和NR9R10，特别是选自OH和NR9R10中的一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代的芳基–(C1–C2)烷基。芳基优选是苯基。
根据该实施方案，R3有利地是甲基。
R4有利地代表被选自OH和NR9R10的一个基团取代的，尤其是被NR9R10取代的芳基–(C1–C8)烷基，尤其是芳基–(C1–C4)烷基，例如芳基–(C1–C2)烷基。
R4有利地代表在芳基部分上被选自OH和NR9R10的一个基团取代的，尤其是被NR9R10取代的芳基–(C1–C8)烷基，尤其是芳基–(C1–C4)烷基，例如芳基–(C1–C2)烷基。
芳基有利地是苯基。
因此，R4可以特别地代表(优选在苯基部分上)被选自OH和NR9R10的一个基团取代的，尤其是被NR9R10取代的苯基-(C1-C2)烷基。
因此，R4可以具有下式：
其中X0代表OH或NR9R10，特别是NR9R10，且m代表1至8之间，尤其是1至4之间的整数，有利地是1或2。
根据一个优选的实施方案，R4具有下式：
其中X0和m如上所定义，特别地其中X0＝NR9R10且m＝1或2。
有利地，式(I)化合物选自以下实施例中描述的化合物1至60。
本发明的另一个主题是用作药品，特别是用于治疗或预防癌症或良性增生性疾病的如上所定义的式(I)化合物。
本发明还涉及如上所定义的式(I)化合物在制备药品中的用途，特别是在制备旨在治疗或预防癌症或良性增生性疾病的药品中的用途。
本发明还涉及一种治疗或预防癌症或良性增生性疾病的方法，其包括向需要其的人施用有效量的如上所定义的式(I)化合物。
治疗或预防的癌症更特别是肺癌、胰腺癌、皮肤癌、头癌、颈癌、子宫癌、卵巢癌、肛门癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、小肠癌、甲状腺癌、淋巴系统癌、前列腺癌、肾癌、或膀胱癌、或急性或慢性白血病、或两种或更多种这些癌症的组合。
良性增生性疾病是指不发生转移或还没有发展成癌症(癌前肿瘤)的增生性疾病。
本发明的另一个主题是药物组合物，其包含如上所定义的式(I)化合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
活性成分可以施用的单位形式，与常规药物载体混合施用于动物或人类。合适的施用的单位形式包括经口途径、舌下或颊部施用形式、经胃肠外途径施用的形式(皮下、真皮内、肌肉内或静脉内)、局部施用形式(皮肤和粘膜上，包括鼻内和眼内施用)和直肠施用形式。
这样的组合物可以是固体、液体、乳液、洗液或霜剂形式。
作为用于口服施用的固体组合物，可以使用片剂、丸剂、粉末剂(硬或软明胶胶囊)或颗粒剂。在这些组合物中，本发明的活性成分在氩气流中与一种或多种惰性赋形剂，例如淀粉、纤维素、蔗糖、乳糖或二氧化硅混合。这些组合物还可以包含稀释剂以外的物质，例如一种或多种润滑剂如硬脂酸镁或滑石、着色剂、包衣(包衣片剂)或清漆。
作为用于口服施用的液体组合物，可以使用溶液、混悬液、乳液、糖浆和酏剂，其是药学上可接受的并且包含惰性稀释剂，例如水、乙醇、甘油、植物油或石蜡油。这些组合物还可以包含稀释剂以外的物质，例如润湿剂、甜味剂、增稠剂、调味剂或稳定性产品。
用于胃肠外施用的无菌组合物优选可以是水性或非水性溶液、混悬液或乳液。作为溶剂或载体，可以使用水、丙二醇、聚乙二醇、植物油、特别是橄榄油、可注射的有机酯如油酸乙酯或其它合适的有机溶剂。这些组合物还可包含佐剂，特别是润湿剂、等渗剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。可以数种方式进行灭菌，例如通过消毒过滤、通过向组合物加入杀菌剂、通过放射或通过加热。它们也可以被制成固体无菌组合物，其在使用时溶解于无菌水或任何其它可注射无菌介质中。
用于直肠施用的组合物是栓剂或直肠用胶囊，其除了活性成分还包含赋形剂如可可油、半合成甘油酯或聚乙二醇。
局部施用的组合物例如可以是霜剂、洗液、滴眼剂、漱口剂、滴鼻剂或喷雾剂。
剂量取决于所需的效果、治疗的长度和所施用的途径。通常，医生会根据年龄、重量和特别是针对待治疗受试者的所有其它因素确定合适的剂量。
在根据本发明的药物组合物中可以包含另一种活性成分。特别地，其可以是抗癌剂，特别是细胞毒性抗癌剂例如诺维本、长春氟宁、紫杉醇、泰索帝、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、多柔比星(doxorabicin)、喜树碱、吉西他滨、依托泊苷、顺铂或卡莫司汀(也称为BCNU)，或激素抗癌剂如他莫昔芬或甲羟孕酮。
放射治疗(X-射线或伽马射线)也可以与施用本发明的化合物结合。可以使用外源或通过植入微小内放射源进行这样的放射。
本发明还涉及使用如下合成方案描述的一般方法制备根据本发明的式(I)化合物，所述一般方法当需要时任选补充任何标准操作，其描述于文献中或对本领域技术人员而言是公知的，或描述于本文实验部分的实施例中。
方案1阐明第一种可用于制备式(I)化合物的一般方法。在上述通式中，R1、R2和R3如前所定义，R4a代表任选为受保护形式的如前所定义的R4基团，且G是保护基。
第一步包含化合物(II)和化合物(III)的缩合，所述化合物(II)在其胺官能团上受保护基G保护。X可以代表离去基团如氯。在这种情况下，第一步包含酰氯和胺之间的反应。可以使用本领域技术人员公知的方法和技术进行该反应。在一个特别推荐的方法中，在有机或无机碱，例如Et3N、iPr2Net、吡啶、NaH、Cs2CO3、K2CO3存在下，在溶剂如THF、二氯甲烷、DMF、DMSO中，尤其于–20℃至100℃的温度，这两种实体进行反应。X也可以是羟基(OH)。在这种情况下，第一步是羧酸(II)和胺(III)之间的缩合反应。可以依据本领域技术人员公知的方法和技术进行该反应。在一个特别推荐的方法中，在偶联剂如1–(3–二甲基氨基丙基)–3–乙基–碳化二亚胺(EDC)、3–羟基–1,2,3–苯并三嗪–4(3H)–酮、叔胺如二异丙基乙胺存在下，在极性非质子溶剂如二氯甲烷或DMF中，尤其于–15℃至40℃的温度，这两种实体进行反应。在另一个特别推荐的方法中，在氰基磷酸二乙酯(DEPC)、叔胺如三乙胺存在下，在极性非质子溶剂如二氯甲烷或DMF中，尤其于–15℃至40℃的温度，这两种实体进行反应。另一个特别推荐的方法包含在O–(7–氮杂苯并三唑–1–基)–1,1,3,3–四甲基–脲六氟磷酸酯(HATU)、叔胺如二异丙基乙胺存在下，在极性非质子溶剂如二氯甲烷或DMF中，尤其于–15℃至100℃的温度，引起这两种实体反应。
使用本领域技术人员熟知的技术(《ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis》,T.W.Greene,JohnWiley&Sons,2006和《ProtectingGroups》,P.J.Kocienski,ThiemeVerlag,1994)将中间体脱保护之后，可以依据如上所述的方法和技术将化合物(IV)和化合物(V)缩合，以在脱保护步骤之后产生化合物(VI)。然后，该化合物与中间体(VII)缩合和任选脱保护，之后形成式(I)化合物。化合物(VI)也可以与化合物(VII’)偶联，其中R’3是R3的前体，特别是受保护基保护的R3基团。基团R’3脱保护产生R3之后，可以依据如前所述的相同程序进行偶联。
方案2阐明第二种可用于制备式(I)化合物的一般方法。在以上通式中，R1、R2和R3如前所定义，R4a代表任选为受保护形式的如前所定义的R4基团，R4b是R4基团的前体且G是保护基团。
在第一步，将在其胺官能团上受保护基G保护的化合物(IX)与化合物(VI)缩合。X可以代表离去基团如氯。在这种情况下，第一步包含酰氯和胺之间的反应。可以使用本领域技术人员熟知的方法和技术进行该反应。在一个特别推荐的方法中，在有机或无机碱，例如Et3N、iPr2NEt、吡啶、NaH、Cs2CO3、K2CO3存在下，在溶剂如THF、二氯甲烷、DMF、DMSO中，尤其于-20°至100℃的温度，这两种实体进行反应。X也可以代表羟基。在这种情况下，第一步是羧酸(IX)和胺(VI)之间的缩合反应。可以依据本领域技术人员熟知的方法和技术进行该反应。在一个特别推荐的方法中，在1–(3–二甲基氨基丙基)–3–乙基–碳化二亚胺(EDC)、3–羟基–1,2,3–苯并三嗪–4(3H)–酮、叔胺如二异丙基乙胺存在下，在极性非质子溶剂如二氯甲烷或DMF中，尤其于–15℃至40℃的温度，这两种实体进行反应。在另一个特别推荐的方法中，在氰基磷酸二乙酯(DEPC)、叔胺如三乙胺存在下，在极性非质子溶剂如二氯甲烷或DMF中，尤其于–15℃至40℃的温度，这两种实体进行反应。
中间体脱保护之后，使用技术人员熟知的技术，将所得的化合物(VIII)与R4Y反应可以产生式(I)化合物。在这种情况下，Y是离去基团如Cl、Br、I、OSO2CH3、OSO2CF3或O–甲苯磺酰基。在有机或无机碱，例如Et3N、iPr2NEt、NaH、Cs2CO3、K2CO3存在下，在极性无水溶剂如二氯甲烷、THF、DMF、DMSO中，尤其于-20°至100℃的温度进行该反应。在另一个特别推荐的方法中，化合物(VIII)与式R4b–CHO的醛反应，其中R4b对应于R4的前体。在这种情况下，该反应是在还原剂如NaBH4、NaBH3CN、NaBH(OAc)3存在下，在极性溶剂如1,2–二氯乙烷、二氯甲烷、THF、DMF、MeOH中，任选在异丙醇钛(IV)存在下，在通过加入酸如乙酸控制的pH，尤其于–20℃至100℃的温度的还原胺化反应。
在前述合成方案中，式(I)化合物可以在另一反应步骤如皂化反应之后例如使用技术人员熟知的方法产生另一种式(I)化合物，由此代表酯，优选甲酯的R2基团被转变为代表羧酸的R2基团。
如果需要分离包含至少一个碱官能团的酸加成盐形式的式(I)化合物，则可以通过用合适的酸，优选以等同量处理游离碱式(I)化合物(包含至少一个碱官能团)。合适的酸可以特别是三氟乙酸。
因此，本发明的另一个主题是第一种制备式(I)化合物的方法，其包括下式(VI)化合物和下式(VII)化合物之间的缩合反应：
其中R1和R2如前所定义，
其中R3如前所定义，R4a对应于任选为受保护形式的如前所定义的R4基团，且X是OH或Cl。
当X＝OH时，可以在本领域技术人员熟知的肽偶联条件下进行偶联反应。
所述肽偶联可在偶联剂的存在下进行，如二异丙基碳化二亚胺(DIC)、二环己基碳化二亚胺(DCC)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC)、羰基二咪唑(CDI)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、氰基磷酸二乙酯(DEPC)或(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，任选地与偶联辅助剂相结合，如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、N-羟基苯并三唑(HOBt)、3,4-二氢-3-羟基-4-氧代-1,2,3-苯并三唑(HOOBt)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HAt)、N-羟基磺酸基琥珀酰亚胺(磺酸基NHS)或二甲基氨基吡啶(DMAP)。优选偶联剂是HATU或DEPC。
也可以在碱如DIEA(二异丙基乙胺)存在下进行反应。
特别地，在HATU或DEPC和DIEA存在下进行肽偶联。
可以在极性非质子溶剂如二氯甲烷(DCM)或二甲基甲酰胺(DMF)存在下，特别是于–15℃至40℃的温度进行所述反应。
当X＝Cl时，在碱存在下进行缩合反应，所述碱可以是有机或无机碱，例如Et3N、iPr2Net、吡啶、NaH、Cs2CO3、或K2CO3。
可以在溶剂如四氢呋喃(THF)、二氯甲烷(DCM)、二甲基甲酰胺(DMF)、或二甲基亚砜(DMSO)中，特别地于–20°至100℃的温度进行反应。
可以依据以下实验部分描述的合成方案或依据本领域技术人员已知的技术制备式(VI)和(VII)的化合物。
本发明的另一个主题是第二种制备式(I)化合物的方法，其包括下式(VIII)化合物和下式(X)化合物之间的取代反应：
其中R1、R2和R3如前所定义，
R4a–Y(X)
其中R4a是任选为受保护形式的如前所定义的R4基团，且Y是离去基如Cl、Br、I、OSO2CH3、OSO2CF3或O–甲苯磺酰基。
尤其在碱存在下进行取代反应，所述碱可以是有机或无机碱，例如Et3N、iPr2NEt、NaH、Cs2CO3、或K2CO3。
可以在极性溶剂，优选无水，如DCM、THF、DMF或DMSO，特别于–20°至100℃的温度实施反应。
可以依据以下实验部分描述的合成方案或使用本领域技术人员已知的技术制备式(VIII)和(X)的化合物。
本发明的另一个主题是第三种制备式(I)化合物的方法，其中R4是–CH2R4b基团且R4b代表：
·OH、NR5R6、被选自OH和NR5R6中的一个或多个基团(特别是一个基团)取代的、具有1至7个碳原子的、饱和或不饱和的、直链或支链烃链(例如(C1–C7)烷基)，
·–CH2X1(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3(CH2CH2X4)a4(CH2CH2X5)a5R7,
·任选被选自芳基、OH和NR9R10基团中的一个或多个基团(特别是一个基团，优选在芳基部分上)取代的芳基或芳基–(C1–C7)烷基，或者
·任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团中的一个或多个基团(特别是一个基团，优选在杂环部分上)取代的杂环或芳基–(C1–C7)烷基，
所述方法包括下式(VIII)化合物和下式(XI)化合物之间的还原胺化反应：
其中R1、R2和R3如前所定义，
R4b–CHO(XI)
其中R4b如上所定义。
可以在还原剂如NaBH4、NaBH3CN或NaBH(OAc)3和任选的异丙醇钛(IV)存在下进行还原胺化反应。
可以通过加入酸如乙酸控制pH，特别是达到pH4至5。
可以在极性溶剂如DCE(1,2–二氯乙烷)、DCM、THF、DMF或甲醇中，特别于–20°至100℃的温度实施该反应。
可以依据以下实验部分描述的合成方案或使用本领域技术人员已知的技术制备式(VIII)和(XI)的化合物。
可以使用技术人员熟知的方法，使上面三种方法中的一种的缩合/取代/还原胺化步骤之后所得的化合物经历另外的脱保护步骤，特别是涉及取代基R2和R4的脱保护步骤，和任选的另外的官能化步骤。
当R2代表COOH基团时，可以从其中R2基团代表COO–((C1–C6)烷基)酯官能团的式(VI)化合物进行上述缩合/取代/还原胺化步骤，该酯官能团随后可能被皂化以获得其中R2＝COOH的式(I)化合物。
当R4基团包含NH官能团时，该官能团可以通过用N–保护基如Boc或Fmoc基团取代氮原子在进行缩合/取代/还原胺化反应之前被保护。
本发明中“保护基”是指选择性阻断多官能团化合物中反应位点的基团，由此化学反应可以选择性地在化学合成中的通常伴随的另一个非受保护的反应位点进行。
本发明中“N–保护基”是指保护NH基团对抗不需要的反应的任何取代基，例如Greene,《ProtectiveGroupsInOrganicsynthesis》,(JohnWiley&Sons,NewYork(1981))和Harrison等人《CompendiumofSyntheticOrganicMethods》,卷1至8(J.Wiley&sons,1971至1996)中描述的N–保护基。N-保护基包括氨基甲酸酯、酰胺、N-烷基化的衍生物、氨基缩醛衍生物、N-苄基衍生物、亚胺衍生物、烯胺衍生物和N-杂原子衍生物。N-保护基可以是甲酰基；任选被一个或数个甲氧基取代的芳基如苯基，例如对甲氧基苯基(PMP)；芳基-(C1-C6)烷基，如苄基，所述芳基部分任选被一个或数个甲氧基取代，如苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)或3,4-二甲氧基苄基(DMPM)；-CO-RGP1如乙酰基(Ac)、新戊酰基(Piv或Pv)、苯甲酰基(Bz)或对甲氧基苄基羰基(Moz)；-CO2-RGP1如叔丁氧羰基(Boc)、三氯乙氧羰基(TROC)、烯丙氧羰基(Alloc)、苄氧羰基(Cbz或Z)或9-芴甲氧羰基(Fmoc)；-SO2-RGP1如苯磺酰基、甲苯磺酰基(Ts或Tos)或2-硝基苯磺酰基(也被称为甲苯磺酰基-Nos或Ns)；等等，
其中RGP1代表任选被一个或数个卤素原子如F或Cl取代的(C1-C6)烷基；(C2-C6)烯基如烯丙基；任选被选自OMe(甲氧基)和NO2(硝基)中的一个或数个基团取代的芳基如苯基；芳基-(C1-C6)烷基，如苄基，所述芳基部分任选被一个或数个甲氧基取代；或9-芴甲基。
特别地，N-保护基包括甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、苯磺酰基、苄基(Bn)、叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、对甲氧基苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、三氯乙氧羰基(TROC)、烯丙氧羰基(Alloc)、9-芴甲氧羰基(Fmoc)、三氟乙酰基、氨基甲酸苄酯(取代或未取代)和类似基团。特别地，其可以是Boc或Fmoc基团。
缩合/取代/还原胺化反应之后，通过Boc或Fmoc基团的NH胺官能团的保护和其随后的脱保护是本领域技术人员熟知的且特别地描述于以下的实验部分。
也可以通过加入药学上可接受的碱或酸，特别是药学上可接受的酸如三氟乙酸，使上述三种方法中的一种所得的式(I)化合物成盐。当该步骤必须在例如酸介质中进行时，可以任选在另一个反应步骤同时，特别是脱保护步骤同时进行该步骤。
任选在用于脱保护、官能化和/或成盐的另外步骤之后，可以使用技术人员熟知的方法，如通过提取、溶剂蒸发或通过沉淀和过滤从反应介质中分离出这三种方法中的一种所得的化合物。
如果需要，也可以使用技术人员熟知的技术，例如通过重结晶(如果化合物是晶体)、通过蒸馏、通过硅胶柱色谱法或高效液相色谱法(HPLC)纯化化合物。
具体实施方式
如下实施例阐明了本发明而不限制本发明的范围。
实施例
I-本发明化合物的合成
在以下实施例中使用如下缩写：
aq.水性
ee对映体过量
equiv当量
ESI电喷雾电离
LC/MS液相色谱偶联质谱
HPLC高效液相色谱法
NMR核磁共振
sat.饱和的
UV紫外
实施例1
(S)–2–((S)–2–((3–氨基丙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰氨基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺双三氟
实施例1A：(4R,5S)-4-甲基-5-苯基-3-丙酰基-1,3-噁唑烷-2-酮
在惰性气氛中，将(4R,5S)-4-甲基-5-苯基-1,3-噁唑烷-2-酮(5.8g,32.7mmol,1.00当量)溶解于四氢呋喃(THF,120mL)中。将混合物冷却至–78℃，滴加入正丁基锂(14.4mL)。于–78℃搅拌30分钟之后，加入丙酰氯(5.7mL)。于–78℃持续搅拌30分钟，然后于环境温度搅拌过夜。将反应混合物浓缩，然后重新溶解于200mL水中。用碳酸氢钠饱和水溶液调节溶液的pH至7。用100mL乙酸乙酯(EtOAc)萃取该水相3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得6.8g(89％)黄色油形式的化合物1A。
实施例1B：(2S)-2-[(1R,2R)-1-羟基-2-甲基-3-[(4R,5S)-4-甲基-2-氧代-5-苯基-1,3-噁唑烷-3-基]-3-氧代丙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物1A(17.6g,75.45mmol,1.00当量)溶解于二氯甲烷(DCM,286mL)中。用冰浴冷却该溶液。滴加入三乙胺(TEA,12.1mL,1.15当量)和Bu2BOTf(78.3mL,1.04当量)，同时保持反应混合物的温度在2℃以下。于0℃持续搅拌45分钟，之后将反应冷却至–78℃。滴加入(2S)-2-甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8.5g,42.66mmol,0.57当量)在DCM(42mL)中的溶液。于–78℃持续搅拌2小时，然后于0℃搅拌1小时，最后于环境温度搅拌1小时。用72mL磷酸盐缓冲液(pH＝7.2-7.4)和214mL甲醇中和反应，并冷却至0℃。滴加入30％过氧化氢在甲醇(257mL)中的溶液，同时保持温度在10℃以下。于0℃持续搅拌1小时。用142mL中和反应，然后减压下浓缩。用200mLEtOAc萃取所得水溶液3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和乙醚的混合物(EtOAc:PE＝1:8)纯化以获得13.16g(40％)无色油形式的化合物1B。
实施例1C：(2R,3R)-3-[(2S)-1-[(叔丁氧基)羰基]吡咯烷-2-基]-3-羟基-2-甲基丙酸
在过氧化氢(水中30％,15.7mL)存在下，将化合物1B(13.16g,30.43mmol,1.00当量)溶解于THF(460mL)中，然后用冰浴冷却。滴加入氢氧化锂(0.4mol/L,152.1mL)的水溶液，同时保持反应温度在4℃以下。于0℃搅拌反应混合物2.5小时。滴加入Na2SO3(1mol/L,167.3mL)的水溶液，同时保持温度于0℃。于环境温度搅拌反应混合物14小时，然后用150mL冷的碳酸氢钠饱和溶液中和并用50mLDCM洗涤3次。用1MKHSO4的水溶液调节水溶液的pH至2-3。用100mLEtOAc萃取该水相3次。将有机相合并，用饱和NaCl溶液洗涤一次，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得7.31g(88％)无色油形式的化合物1C。
实施例1D：(2R,3R)-3-[(2S)-1-[(叔丁氧基)羰基]吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸
在惰性气氛中在碘甲烷(25.3mL)存在下将化合物1C(7.31g,26.74mmol,1.00当量)溶解于THF(135mL)中。用冰浴冷却反应介质，之后分批加入NaH(油中60％,4.28g)。搅拌下于0℃放置反应3天，然后用100mL碳酸氢钠饱和水溶液中和，并用50mL乙醚洗涤3次。用1MKHSO4的水溶液调节水溶液的pH至3。用100mLEtOAc萃取该水溶液3次。将有机相合并，用100mLNa2S2O3(水中5％)洗涤一次，用NaCl饱和溶液洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得5.5g(72％)无色油形式的化合物1D。
实施例1E：N–甲氧基–N–甲基–2–苯基乙酰胺
将2–苯乙酸(16.2g,118.99mmol,1.00当量)溶解于二甲基甲酰胺(DMF,130mL)中，然后冷却至–10℃。加入氰基磷酸二乙酯(DEPC,19.2mL)、甲氧基(甲基)胺盐酸盐(12.92g,133.20mmol,1.12当量)和三乙胺(33.6mL)。于–10℃搅拌反应混合物30分钟，然后于环境温度搅拌2.5小时。然后用1升EtOAc萃取两次。将有机相合并，用500mLNaHCO3(sat.)洗涤两次，用400mL水洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100至1:3)纯化以获得20.2g(95％)黄色油形式的化合物1E。
实施例1F：2–苯基–1–(1,3–噻唑–2–基)–乙–1–酮
在惰性气氛中，将四甲基乙二胺(TMEDA,27.2mL)溶解于THF(300mL)中，然后在滴加入n–BuLi(67.6mL,2.5M)之前冷却至–78℃。滴加入2–溴–1,3–噻唑(15.2mL)并于–78℃持续搅拌30分钟。滴加入溶解于THF(100mL)中的化合物1E(25g,139.50mmol,1.00当量)。于–78℃持续搅拌30分钟，然后于–10℃搅拌2小时。用500mLKHSO4(sat.)中和反应，然后用1升EtOAc萃取3次。将有机相合并，用400mL水洗涤两次，用700mLNaCl(sat.)洗涤两次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100至1:10)纯化以获得25g(88％)黄色油形式的化合物1F。
实施例1G：(1R)–2–苯基–1–(1,3–噻唑–2–基)–乙–1–醇
在惰性气氛中，将化合物1F(15g,73.8mmol,1.00当量)在乙醚(300mL)中的溶液滴加入(+)-B-二异松蒎基氯硼烷((+)–Ipc2BCl,110.8mL)中。于0℃搅拌反应混合物24小时，然后用300mLNaOH(水中10％)和H2O2(水中30％)的混合物(1:1)中和，最后用500mLEtOAc萃取三次。将有机相合并，用300mLK2CO3(sat.)洗涤两次，用500mLNaCl(sat.)洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:20至1:2)纯化以获得6.3g(42％)白色固体形式的化合物1G。
实施例1H：2–[(1S)–1–叠氮–2–苯基乙基]–1,3–噻唑
在惰性气氛中，在三苯基膦(13g,49.56mmol,1.70当量)存在下，将化合物1G(6g,29.23mmol,1.00当量)溶解于THF(150mL)中，然后冷却至0℃。滴加入偶氮二羧酸二乙酯(DEAD,7.6mL)，接着滴加入叠氮磷酸二苯酯(DPPA,11mL)，然后移走冷浴，搅拌下于环境温度放置溶液48小时。在减压下浓缩介质。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100至1:30)纯化以获得8g黄色油形式的部分纯化的化合物1H。化合物1H就这样用于以下步骤。
实施例1I：N-[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
在惰性气氛中，在三苯基膦(6.5g,33.9mmol,1.20当量)存在下，将化合物1H(6.5g,28.2mmol,1.00当量)溶解于THF(100mL)中，并加热至50℃2小时。然后加入氨水(70mL)并持续加热3小时。将反应冷却，用500mL水中和，然后用500mLEtOAc萃取3次。将有机相合并，用500mL1NHCl萃取两次。将水相合并，通过加入氢氧化钠溶液(水中10％)调节至pH8–9，然后用500mLDCM萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得4.8g(83％)黄色油形式的(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙-1-胺。然后用Boc基团((叔丁氧基)羰基)保护该化合物以便能够将其纯化。在惰性气氛中，将其溶解于1,4–二氧六环(40mL)中，然后冷却至0℃。滴加入稀释于20mL1,4–二氧六环中的(Boc)2O(10.26g,47.01mmol,2.00当量)。移走冷浴，搅拌下于环境温度放置溶液过夜，之后用300mL水中和，用500mLEtOAc萃取两次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100至1:20，ee＝93％)纯化。然后将其在己烷/丙酮混合物(～5–10/1,1g/10mL)中重结晶以获得6g(84％)白色固体形式的化合物1I(ee>99％)。
实施例1J：(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-2-[[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]氨基甲酰基]乙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物1I(3g,9.86mmol,1.00当量)溶解于10mLDCM中。加入三氟乙酸(TFA,10mL)，搅拌下于环境温度放置溶液过夜，然后减压下浓缩以获得2.0g(64％)黄色油形式的(1S)–2–苯基–1–(1,3–噻唑–2–基)–乙–1–胺三氟乙酸盐。将该中间体重新溶解于20mLDCM中，之后加入化合物1D(1.8g,6.26mmol,1.05当量)、DEPC(1.1g,6.75mmol,1.13当量)和二异丙基乙胺(DIEA,1.64g,12.71mmol,2.13当量)。搅拌下于环境温度放置反应混合物过夜，然后减压下浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100至1:3)纯化以获得2.3g(81％)淡黄色固体形式的化合物1J。
实施例1K：(2R,3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
在惰性气氛中，将化合物1J(2.25g,4.75mmol,1.00当量)溶解于10mLDCM中。加入TFA(10mL)，搅拌下于环境温度将溶液放置过夜，然后减压下浓缩以获得2.18g(94％)黄色油形式的化合物1K。
实施例1L：(2S,3S)–2–(苄基氨基)–3–甲基戊酸
于环境温度，将(2S,3S)-2-氨基-3-甲基戊酸(98.4g,750mmol,1.00当量)分批加入至2N氢氧化钠溶液(375mL)中。快速加入苯甲醛(79.7g,751.02mmol,1.00当量)，将所得溶液搅拌30分钟。分小份加入硼氢化钠(10.9g,288.17mmol,0.38当量)，同时保持温度在5至15℃。于环境温度持续搅拌4小时。用200mL水稀释反应混合物，然后用200mLEtOAc洗涤两次。用2N盐酸溶液调节水溶液的pH至7。通过过滤收集形成的沉淀，得到149.2g(90％)白色固体形式的化合物1L。
实施例1M：(2S,3S)–2–[苄基(甲基)氨基]–3–甲基戊酸-
在惰性气氛中，在甲醛(水中36.5％,22.3g)存在下，将化合物1L(25g,112.97mmol,1.00当量)溶解于甲酸(31.2g)中。于90℃搅拌溶液3小时，然后减压下浓缩。将残余物在250mL丙酮中研磨，然后浓缩。用500mL丙酮重复研磨/蒸发操作两次以获得21.6g(81％)白色固体形式的化合物1M。
实施例1N：(2S,3S)–2–[苄基(甲基)氨基]–3–甲基–戊–1–醇
在惰性气氛中，于0℃，将LiAlH4(0.36g)悬浮于10mLTHF中。分小份加入化合物1M(1.5g,6.37mmol,1.00当量)，同时保持温度在0至10℃。于65℃搅拌反应混合物2小时，然后再次冷却至0℃，之后依次加入360μL水、1mL15％氢氧化钠和360μL水中和反应混合物。通过过滤去除沉淀出的铝盐。滤液经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:50)纯化，以获得820mg(58％)淡黄色油形式的化合物1N。
实施例1O：(2S,3S)–2–[苄基(甲基)氨基]–3–甲基戊醛
在惰性气氛中，将草酰氯(0.4mL)溶解于DCM(15mL)中。将溶液冷却至–70℃，经15分钟滴加入二甲基亚砜(DMSO(0.5mL)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物搅拌30分钟，之后经15分钟滴加入化合物1N(820mg,3.70mmol,1.00当量)在DCM(10mL)中的溶液。于低温将反应混合物进一步搅拌30分钟，然后缓慢加入三乙胺(2.5mL)。于–50℃搅拌反应混合物1小时，然后移走冷浴，用25mL水中和反应，同时使温度返回到正常。用30mLNaCl–饱和水溶液洗涤溶液一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:200)纯化以获得0.42g(52％)黄色油形式的化合物1O。
实施例1P：(2S,3S)–N–苄基–1,1–二甲氧基–N,3–二甲基–戊–2–胺
于0℃，将化合物1O(4.7g,21.43mmol,1.00当量)溶解于20mL甲醇中。滴加入浓硫酸(4.3mL)，于0℃持续搅拌30分钟。加入原甲酸三甲酯(21.4mL)，移走冷浴，搅拌下于环境温度放置反应介质3小时。用200mLEtOAc稀释反应介质，依次用100mL10％Na2CO3和200mL饱和NaCl洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得3.4g(60％)淡黄色油形式的化合物1P。
实施例1Q：[[1–(叔丁氧基)乙烯基]氧基](叔丁基)二甲基硅烷
在惰性气氛中，将二异丙基胺(20g,186.71mmol,1.08当量)溶解于170mLTHF中并冷却至–78℃。滴加入nBuLi(2.4M,78.8mL)，于低温搅拌溶液30分钟(以获得LDA-二异丙基氨基锂)，之后加入乙酸叔丁酯(20g,172.18mmol,1.00当量)。于–78℃搅拌反应混合物20分钟，之后加入六甲基磷酰胺(HMPA,25.8mL)和叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl,28g,185.80mmol,1.08当量)在35mLTHF中的溶液。于低温持续搅拌另外的20分钟，然后移走冷浴。减压下浓缩溶液。将残余物重新溶解于100mL水中并用100mLPE萃取3次。将有机相合并，用500mLNaCl-饱和水溶液洗涤一次，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过蒸馏纯化以获得16.6g(83％)无色油形式的化合物1Q。
实施例1R：(3R,4S,5S)-4-[苄基(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物1P(2.0g,7.54mmol,1.00当量)和化合物1Q(2.6g,11.28mmol,1.50当量)溶解于33mLDCM中。将溶液冷却至0℃。滴加入DMF(1.2g)以及BF3·Et2O(2.1g)在7.5mLDCM中的溶液。于0℃持续搅拌24小时。将反应介质用30mL碳酸钠(10％)洗涤一次，用50mLNaCl–饱和水溶液洗涤两次，然后经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100)纯化以获得1.82g(91％)黄色油形式的化合物1R。
实施例1S：(3R,4S,5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸酯盐酸盐
在惰性气氛中，在Pd/C(0.12g)和浓盐酸(0.63mL)存在下，将化合物1R(2.4g,6.87mmol,1.00当量)溶解于35mL乙醇中。将氮气氛替换为氢气氛，搅拌下于环境温度放置反应介质18小时。将反应介质过滤和减压下浓缩。将残余物在50mL己烷中研磨，移走上清液，将上清液减压下干燥以获得1.66g(82％)白色固体形式的化合物1S。
实施例1T：(3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(苄氧基)羰基]氨基]-N,3-二甲基丁酰胺基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯
在DIEA(38.3mL)和吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP,32.3g)存在下，将(2S)–2–[[(苄氧基)羰基]氨基]–3–甲基丁酸(15g,0.40mmol,1.00当量)溶解于300mLDCM中。于环境温度搅拌溶液30分钟，之后加入化合物1S(15.99g,0.42mmol,1.07当量)。将反应介质搅拌2小时，然后浓缩。将残余物经反相(C18)用乙腈(ACN)和水的混合物(40分钟内30:70至100:0)纯化以获得17g(58％)无色油形式的化合物1T。
实施例1U：(3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-氨基-N,3-二甲基丁酰胺基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯
在惰性气氛中，在Pd/C(0.05g)存在下，将化合物1T(76mg,0.15mmol,1.00当量)溶解于10mL乙醇中。将氮气氛替换为氢气氛，于环境温度搅拌反应2小时。将反应介质过滤和减压下浓缩以获得64mg无色油形式的化合物1U。
实施例1V：(3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(9H–芴–9–基甲氧基)羰基]氨基]–N,3–二甲基丁酰胺基]–3–甲氧基–5–甲基庚酸酯
在碳酸氢钠(12.78g,152mmol,3.00当量)和9H–芴–9–基甲基氯甲酸酯(Fmoc–Cl,19.69g,76mmol,1.50当量)存在下，将化合物1U(18.19g,50.74mmol,1.00当量)溶解于400mL1,4–二氧六环/水混合物(1:1)中，然后于环境温度搅拌2小时。然后将反应介质用500mL水稀释，并用200mLEtOAc萃取3次。将有机相合并，用200mLNaCl–饱和水溶液洗涤一次,经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得40g淡黄色油形式的部分纯化的化合物1V。
实施例1W：(3R,4S,5S)–4–[(2S)–2–[[(9H–芴–9–基甲氧基)羰基]氨基]–N,3–二甲基丁酰胺基]–3–甲氧基–5–甲基庚酸
在中性气氛中，将化合物1V(40g,68.88mmol,1.00当量)溶解于600mLDCM中。加入TFA(300mL)。于环境温度搅拌溶液2小时，然后减压下浓缩。将残余物在硅胶柱上用甲醇和DCM的混合物(1:10)纯化以获得23.6g(65％)无水油形式的化合物1W。
实施例1X：9H–芴–9–基甲基N–[(1S)–1–[[(3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–[(2S)–2–[(1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–2–[[(1S)–2–苯基–1–(1,3–噻唑–2–基)乙基]氨基甲酰基]乙基]吡咯烷–1–基]–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基](甲基)氨基甲酰基]–2–甲基丙基]氨基甲酸酯
在化合物1K(2.18g,4.47mmol,1.00当量)、DEPC(875mg,5.37mmol,1.20当量)和DIEA(1.25g,9.67mmol,2.16当量)存在下，将化合物1W(2.53g,4.82mmol,1.08当量)溶解于20mLDCM中。搅拌下于环境温度放置反应混合物过夜，然后依次用50mL饱和KHSO4和100mL水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用甲醇和DCM的混合物(1:200至1:40)纯化以获得淡黄色固体形式的2.8g(71％)化合物1X。
实施例1Y：(2S)-2-氨基-N-[(3R,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-2-[[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]氨基甲酰基]乙基]吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N,3-二甲基丁酰胺
在哌啶(3mL)存在下，将化合物1X(2.8g,3.18mmol,1.00当量)溶解于乙腈(ACN,12mL)中，并搅拌下于环境温度放置18小时。将反应用50mL水中和，然后用100mLDCM萃取两次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用甲醇和DCM的混合物(1:100至1:40)纯化以获得黄色固体形式的1.2g(57％)化合物1Y。
实施例1ZA：(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]-3-甲基丁酸
在惰性气氛中，在碘甲烷(181mL)存在下，将(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3-甲基丁酸(63g,289.97mmol,1.00当量)溶解于THF(1000mL)中。将溶液冷却至0℃，之后分小份加入氢化钠(116g,4.83mol,16.67当量)。于0℃搅拌反应混合物1.5小时，然后移走冷浴并持续搅拌18小时。用200mL水中和反应，然后减压下浓缩。用4升水稀释残余水相，用200mLEtOAc洗涤一次，用1N盐酸溶液调节其pH至3-4。用1.2LEtOAc萃取所得的混合物3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得60g(89％)黄色油形式的化合物1ZA。
实施例1ZB：(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]-3-甲基丁酸苄酯
在Li2CO3(15.8g,213.83mmol,1.05当量)存在下，将化合物1ZA(47g,203.21mmol,1.00当量)溶解于DMF(600mL)中。将溶液冷却至0℃，然后滴加入溴苄(BnBr57.9g,338.53mmol,1.67当量)。将反应混合物搅拌下放置过夜，之后用400mL水中和并过滤。用500mLEtOAc萃取所得的溶液两次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100至1:20)纯化以获得黄色油形式的22.5g(34％)化合物1ZB。
实施例1ZC：(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸苄酯盐酸盐
将化合物1ZB(22.5g,70.00mmol,1.00当量)溶解于150mLDCM中。气态盐酸鼓泡。于环境温度搅拌反应1小时，然后减压下浓缩以获得17g(94％)黄色固体形式的化合物1ZC。
实施例1ZD：N–(3,3–二乙氧基丙基)氨基甲酸叔丁酯
在TEA(4.45g,43.98mmol,1.08当量)存在下，将3,3–二乙氧基戊–1–胺(6g,40.76mmol,1.00当量)溶解于1,4–二氧六环(30mL)中，然后冷却至0℃。滴加入稀释于20mL1,4–二氧六环中的(Boc)2O(9.6g,43.99mmol,1.08当量)。将溶液于0℃搅拌2小时，然后于环境温度搅拌过夜，之后用10mL水中和。用HCl(1％)调节pH至5。用50mLEtOAc萃取溶液3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得8.21g(81％)淡黄色油形式的化合物1ZD。
实施例1Z：N–(3–氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物1ZD(8.20g,33.15mmol,1.00当量)溶解于18.75mL乙酸中，搅拌下于环境温度放置过夜。然后用30mLEtOAc萃取反应介质3次。将有机相合并，用30mL饱和NaCl溶液洗涤3次，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得5g(87％)暗红色油形式的化合物1ZE。
实施例1ZF：(2S)-2-[(3-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]丙基)(甲基)氨基]-3-甲基丁酸
在化合物1ZC(3.56g,13.81mmol,1.00当量)和DIE(9.16mL,4.00当量)存在下，将化合物1ZE(2.4g,13.86mmol,1.00当量)溶解于50mLTHF中。于环境温度搅拌反应混合物30分钟，之后加入三乙酰氧基硼氢化钠(5.87g,27.70mmol,2.00当量)。持续搅拌过夜，然后用100mL水中和反应并50mLEtOAc萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:4)部分纯化。在Pd/C(1.2g)存在下将所得的粗产品重新溶解于20mL甲醇中，在标准温度和压力下氢化20分钟。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得200mg(5％)白色固体形式的化合物1ZF。
实施例1ZG：N-(3-[[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-2-[[(1S)-2-苯基-1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]氨基甲酰基]乙基]吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4基](甲基)氨基甲酰基]-2-甲基丙基]氨基甲酰基]-2-甲基丙基](甲基)氨基]丙基)氨基甲酸叔丁酯
在化合物1ZF(26.2mg,0.09mmol,1.20当量)、DIEA(37.7mL)和O–(7–氮杂苯并三唑–1–基)–N,N,N’,N’–四甲基脲六氟磷酸酯(HATU,43.3mg,0.11mmol,1.50当量)存在下，将化合物1Y(50mg,0.08mmol,1.00当量)溶解于2mLDMF中。于环境温度将反应搅拌下放置过夜，然后用10mL水稀释，并用5mLEtOAc萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得100mg部分纯化的无色油形式的化合物1ZG。
实施例1：在中性气氛中，将化合物1ZG(90mg,0.10mmol,1.00当量)溶解于2mLDCM中，并用冰浴冷却溶液。加入TFA(1mL)，于环境温度搅拌反应2小时，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经7分钟18％至31％ACN，然后经2分钟31％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物1，产率25％(23mg)。
LC/MS/UV(AtlantisT3柱,3μm,4.6x100mm；35℃；1mL/min,水中30％至60％ACN(经6分钟20mM乙酸铵)；ESI(C44H73N7O6S,精确分子量827.53)m/z：829(MH+),5.84min(93.7％,254nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.85-7.80(m,1H)；7.69-7.66(m,1H),7.40-7.10(m,5H),5.80-5.63(m,1H),4.80-4.65(m,2H),4.22–4.00(m,1H),3.89-0.74(m,58H)。
实施例2
(S)–2–((S)–2–(((2–氨基吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–1–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–3–甲氧基–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
实施例2A：(S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–羧酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物1D(2.5g,8.70mmol,1.00当量)和(1S,2R)–2–氨基–1–苯基丙–1–醇(1.315g,8.70mmol,1.00当量)溶解于DMF(35mL)中。将溶液冷却至0℃，然后滴加入DEPC(1.39mL)和TEA(1.82mL)。于0℃搅拌反应混合物2小时，然后于环境温度搅拌4小时。用200mL水稀释反应混合物，然后用50mLEtOAc萃取三次。将有机相合并，用50mLKHSO4(1mol/L)洗涤一次，用50mLNaHCO3(sat.)洗涤一次，用50mLNaCl(sat.)洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得3.6g(98％)黄色固体形式的化合物2A。
实施例2B：(2R,3R)–N–((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基–3–((S)–吡咯烷–2–基)丙酰胺2,2,2–三氟乙酸盐
在惰性气氛中，将化合物2A(2.7g,6.42mmol,1.00当量)溶解于DCM(40mL)中，然后冷却至0℃。加入TFA(25mL)，于0℃搅拌溶液2小时。将反应混合物减压下浓缩以获得4.4g黄色油形式的化合物2B。
实施例2C：(9H–芴–9–基)甲基((S)–1–(((3R,4S,5S)–1–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–3–甲氧基–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)(甲基)氨基)–3–甲基–1–氧代丁烷–2–基)氨基甲酸酯
在惰性气氛中，将化合物2B(4.4g,10.13mmol,1.00当量)和1W(5.31g,10.12mmol,1.00当量)溶解于DCM(45mL)中。将溶液冷却至0℃，然后滴加入DEPC(1.62mL)和DIEA(8.4mL)。于0℃搅拌反应混合物2小时，然后于环境温度搅拌过夜。用100mL水稀释反应混合物，然后用50mLDCM萃取三次。将有机相合并，用50mLKHSO4(1mol/L)洗涤一次，用50mLNaHCO3(sat.)洗涤一次，用50mLNaCl(sat.)洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得3.3g(39％)黄色固体形式的化合物2C。
实施例2D：(S)–2–氨基–N–((3R,4S,5S)–1–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–3–甲氧基–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺
在惰性气氛中，将化合物2C(300mg,0.36mmol,1.00eq.)溶解于ACN(2mL)和哌啶(0.5mL)中。于环境温度将溶液搅拌下放置过夜，然后减压下蒸发至干。将残余物在硅胶柱上用DCM和MeOH的混合物(1:100)纯化以获得白色固体形式的150mg(68％)化合物2D。
实施例2E：2–((叔丁氧基羰基)氨基)异烟酸甲酯
将2–氨基吡啶–4–羧酸甲酯(2g,13.14mmol,1.00当量)溶解于叔丁醇(20mL)，之后加入二碳酸二叔丁酯(4.02g,18.42mmol,1.40当量)。于60℃将反应混合物搅拌过夜，然后通过加入1MNaHCO3水溶液(50mL)使反应终止。通过过滤回收固体，用50mLEtOH洗涤，然后经真空干燥以获得2.5g(75％)白色固体形式的化合物2E。
实施例2F：(4–(羟甲基)吡啶–2–基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物2E(2.5g,9.91mmol,1.00当量)和CaCl2(1.65g)溶解于EtOH(30mL)中。将溶液冷却至0℃，然后逐渐加入NaBH4(1.13g,29.87mmol,3.01当量)。于环境温度将溶液搅拌下放置过夜，然后加入水(50mL)使反应终止。用20mLEtOAc萃取混合物三次。将有机相合并，用20mLNaCl(sat.)洗涤两次，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得2.0g(90％)无色固体形式的化合物2F。
实施例2G：(4–甲酰基吡啶–2–基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物2F(2.5g,11.15mmol,1.00当量)溶解于DCE(25mL)中，然后加入19.4g(223.14mmol,20.02当量)MnO2。于70℃将混合物搅拌下放置过夜，然后通过过滤去除固体。将滤液蒸发至干以获得1.4g(57％)白色固体形式的化合物2G。
实施例2H：(S)–2–(((2–((叔丁氧基羰基)氨基)吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸苄酯
在化合物1ZC(2.93g,11.37mmol,1.10当量)、DIEA(5.39g,41.71mmol,4.03当量)和NaBH(OAc)3(4.39g,20.71mmol,2.00当量)存在下，将化合物2G(2.3g,10.35mmol,1.00当量)溶解于25mLTHF中。于环境温度将反应混合物搅拌6小时，然后用60mLNaHCO3(sat.)中和并用20mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，用20mLNaCl(sat.)洗涤两次，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:15)纯化以获得2.7g(61％)白色固体形式的化合物2H。
实施例2I：(S)–2–(((2–((叔丁氧基羰基)氨基)吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
在Pd/C(250mg)存在下，将化合物2H(500mg,1.17mmol,1.00当量)溶解于10mLAcOEt和2mL甲醇中，于环境温度和大气压力下氢化3小时。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得254mg(64％)无色固体形式的化合物2I。
实施例2J：(4–((3S,6S,9S,10R)–9–((S)–仲丁基)–10–(2–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–3,6–二异丙基–2,8–二甲基–4,7–二氧代–11–氧杂–2,5,8–三氮杂十二烷基)吡啶–2–基)氨基甲酸叔丁酯
以相似于化合物1ZG的方式，在DMF(3mL)中，由胺2D(85.2mg,0.14mmol,1.50当量)、酸2I(31.7mg,0.09mmol,1.00当量)、HATU(42.9mg,0.11mmol,1.20当量)和DIEA(36.7mg,0.28mmol,3.02当量)制备化合物2J。蒸发至干之后，获得100mg白色固体形式的粗产物。
实施例2：将化合物2J(100mg,0.11mmol,1.00当量)溶解于2mLDCM和1mLTFA中。于环境温度搅拌反应1小时，然后减压下浓缩。将残余物(80mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相；0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物2，产率6％(6.3mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.8mL/min,经6分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％ACN)；ESI(C45H73N7O7,精确分子量823.56)m/z：824.5(MH+)和412.9(M.2H+/2,100％),3.21min(99.2％,210nm)
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.81-7.79(m,1H)；7.39-7.29(m,5H)；6.61-6.59(m,2H)；4.84-4.52(m,1H)；4.32-4.02(m,1H)；3.90-2.98(m,10H)；2.90-2.78(m,1H)；2.55-0.81(m,39H)。
实施例3
((S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(吡啶–4–基甲基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例3A：(S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–3–(((S)–1–甲氧基–1–氧代–3–苯基丙烷–2–基)氨基)–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–羧酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物1D(3g,10.44mmol,1.00当量)和(S)–2–氨基–3–苯基丙酸甲酯(2.25g,12.55mmol,1.20当量)溶解于DMF(40mL)中。将溶液冷却至0℃，然后滴加入DEPC(1.67mL,1.05当量)和TEA(3.64mL,2.50当量)。于0℃搅拌反应混合物2小时，然后于环境温度搅拌过夜。用100mL水稀释反应混合物，然后用50mLEtOAc萃取三次。将有机相合并，用100mLKHSO4(1mol/L)洗涤一次，用100mLNaHCO3(sat.)洗涤一次，用100mLNaCl(sat.)洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得4g(85％)无色油形式的化合物3A。
实施例3B：(S)–2–((2R,3R)–3–甲氧基–2–甲基–3–((S)–吡咯烷–2–基)丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯的2,2,2–三氟乙酸盐
在惰性气氛中，将化合物3A(5g,11.15mmol,1.00当量)溶解于DCM(40mL)中。加入TFA(25mL)，并搅拌溶液2小时。将反应混合物减压下浓缩以获得8g黄色油形式的化合物3B。
实施例3C：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((((9H–芴–9–基)甲氧基)羰基)氨基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
在惰性气氛中，将化合物3B(8.03g,17.36mmol,1.00当量)和1W(9.1g,17.34mmol,1.00当量)溶解于DCM(80mL)中。将溶液冷却至0℃，然后滴加入DEPC(2.8mL)和DIEA(12mL)。于0℃搅拌反应混合物2小时，然后于环境温度搅拌过夜。用200mL水稀释反应混合物，然后用50mLDCM萃取三次。将有机相合并，用50mLKHSO4(1mol/L)洗涤一次，用50mLNaHCO3(sat.)洗涤一次，用50mLNaCl(sat.)洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得5g(34％)黄色固体形式的化合物3C。
实施例3D：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–氨基–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯
在惰性气氛中，将化合物3C(5.5g,6.43mmol,1.00当量)溶解于四丁基氟化铵(TBAF,2.61g,9.98mmol,1.55当量)的DMF(100mL)溶液中。于环境温度将溶液搅拌2小时，然后用100mL水稀释，并用50mLEtOAc萃取三次。将有机相合并，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得3.3g(81％)黄色固体形式的化合物3D。
实施例3E：(S)–3–甲基–2–(甲基(吡啶–4–基甲基)氨基)丁酸苄酯
在化合物1ZC(2.9g,11.25mmol,1.21当量)和异丙醇钛(IV)(4.19mL,1.40当量)存在下，将吡啶–4–甲醛(1g,9.34mmol,1.00当量)溶解于10mL1,2–二氯乙烷(DCE)中。于环境温度搅拌混合物30分钟，然后加入2.77gNaBH(OAc)3(13.07mmol,1.40当量)。将反应介质搅拌下放置过夜，然后用100mL水中和，并用50mLAcOEt萃取混合物3次。将有机相合并，蒸发至干。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:20)纯化以获得1.3g(45％)无色油形式的化合物3E。
实施例3F：(S)–3–甲基–2–(甲基(吡啶–4–基甲基)氨基)丁酸
在Pd/C(300mg)存在下，将化合物3E(800mg,2.56mmol,1.00当量)溶解于30mLAcOEt中，于环境温度和大气压力下氢化3小时。将反应介质过滤和减压下浓缩。将残余物在硅胶柱上用DCM和MeOH的混合物(100:1至5:1)纯化以获得白色固体形式的100mg(18％)化合物3F。
实施例3：将化合物3D(50mg,0.08mmol,1.00当量)和3F(26.34mg,0.12mmol,1.50当量)溶解于3mLDCM中。将溶液冷却至0℃，然后加入0.018mLDEPC和0.0392mLDIEA。于0℃搅拌反应2小时，然后于环境温度搅拌过夜。将反应介质减压下浓缩，将残余物(70mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物3，产率27％(20mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％ACN)；ESI(C46H72N6O8,精确分子量836.5)m/z：837.5(MH+)和419.4(M.2H+/2(100％)),7.04min(90.0％,210nm)
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.76-8.74(m,2H)；8.53-8.48(m,0.4H,NHCO不完全的交换)；8.29-8.15(m,0.8H,NHCO不完全的交换)；8.01(s,2H),7.31-7.22(m,5H),4.88-4.68(m,3H)；4.31-4.07(m,2H)；3.94-2.90(m,18H)；2.55-0.86(m,38H)。
实施例4
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(吡啶–4–基甲基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例4：将化合物3(100mg,0.11mmol,1.00当量)溶解于水(5mL)、ACN(5mL)和哌啶(2.5mL)的混合物中。将反应混合物搅拌下放置过夜，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得20mg(20％)白色固体形式的化合物4。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％ACN)；ESI(C45H70N6O8,精确分子量822.5)m/z：823.5(MH+)和412.4(M.2H+/2,100％),6.84min(89.1％,210nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.79-8.78(m,2H)；8.09(m,2H)；7.30-7.21(m,5H)；4.80-4.80(m,1H),4.36-0.87(m,58H)。
实施例5
(S)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(吡啶–4–基甲基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺三氟乙酸盐
实施例5：以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(50mg,0.08mmol,1.00当量)、酸3F(25mg,0.11mmol,1.48当量)、DEPC(0.0174mL,1.5当量)和DIEA(0.0377mL,3当量)合成化合物5。将粗产物(80mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得20mg(27％)白色固体形式的化合物5。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8,3.5μm柱,4.6x150mm；40℃；1.0mL/min,经18分钟从水中(0.05％TFA)40％至95％MeOH)；ESI(C47H71N7O8S,精确分子量861.5)m/z：862.5(MH+)和431.9(M.2H+/2,100％),12.69min(88.9％,254nm)。
1HNMR:400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.78(d,2H,J＝6.8Hz)；8.27-8.16(m,0.4H,NHCO不完全的交换)；8.08(d,2H,J＝6.4Hz)；7.85-7.79(m,1H)；7.60-7.50(m,1H),7.19-7.38(m,5H),5.79-5.60(m,1H)；4.90-4.69(m,2H)；4.34-2.97(m,18H)；2.59-0.81(m,35H)。
实施例6
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((3–氨基丙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯双三氟乙酸盐
实施例6A：(2S)–2–[(2R)–2–[(R)–[(2S)–1–[(3R,4S,5S)–4–[(2S)–2–[(2S)–2–[(3–[[(叔丁氧基)羰基]氨基]丙基)(甲基)氨基]–3–甲基丁酰胺基]–N,3–二甲基丁酰胺基]–3–甲氧基–5–甲基庚酰基]吡咯烷–2–基](甲氧基)甲基]丙酰胺基]–3–苯基丙酸甲酯
于0℃，在惰性气氛中，在羧酸1ZF(78.7mg,0.27mmol,1.10当量)、DEPC(46μl)和DIEA(124μl)存在下，将化合物3D(157.5mg,0.25mmol,1.00当量)溶解于3mLDCM中。于低温搅拌反应混合物2小时，然后移走冷浴并持续搅拌4小时。然后减压下浓缩以获得200mg粗黄色油形式的化合物6A。其就这样用于以下步骤。
实施例6：在惰性气氛中，于0℃将化合物6A(200mg,0.22mmol,1.00当量)溶解于2mLDCM中。滴加入TFA(1mL)，移走冷浴。于环境温度搅拌反应混合物1小时，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化，以获得60mg(26％，2步骤产率)白色固体形式的化合物6。
LC/MS/UV(ZorbaxEclipsePlusC8,3.5μm,4.6x150mm；1mL/min,40℃,经18分钟从水中(0.1％H3PO4)30至80％甲醇)；ESI(C43H74N6O8,精确分子量802.56)m/z：804(MH+)；11.50min(91.5％,210nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.52(d,0.3H,NHCO不完全的交换)；8.25(d,0.5H,NHCO不完全的交换)；7.30–7.22(m,5H)；4.9–4.6(m,3H)；4.2–4.0(m,1H)；4.0–0.86(m,61H)。
实施例7
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((3–氨基丙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸双三氟乙酸盐
实施例7：将化合物6(70mg,0.08mmol,1.00当量)溶解于水(5mL)、ACN(2.5mL)和哌啶(5mL)的混合物中。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的UVWaters2489紫外检测器)纯化，以获得14.6mg(21％)白色固体形式的化合物7。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18,2.7μm,4.6x100mm；1.5mL/min,40℃,经8分钟从水中(0.05％TFA)0至80％甲醇)；ESI(C42H72N6O8,精确分子量788.54)m/z：790(MH+),5.71min(96.83％,210nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.42(d,0.3H,NHCO不完全的交换)；8.15(d,0.2H,NHCO不完全的交换)；7.31–7.21(m,5H)；4.9–4.6(m,3H)；4.25–4.0(m,1H)；4.0–0.86(m,59H)。
实施例8
(S)–2–((S)–2–(((2–氨基吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
实施例8A：(4–((3S,6S,9S,10R)–9–((S)–仲丁基)–3,6–二异丙基–10–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–2,8–二甲基–4,7–二氧代–11–氧杂–2,5,8–三氮杂十二烷基)吡啶–2–基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物2J的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(39mg,0.06mmol,1.00当量)、酸2I(20mg,0.06mmol,1.00当量)、HATU(27mg,0.07mmol,1.20当量)和DIEA(23.2mg,0.18mmol,3.01当量)合成化合物8A。该粗产物未纯化。
实施例8：以相似于化合物2的方式，由中间体8A(100mg,0.10mmol,1.00当量)合成化合物8。将粗产物(100mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经7分钟18％至31％ACN，然后经2分钟31％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物8，产率8％(8mg)。
LC/MS/UV(AtlantisT3柱,3μm,4.6x100mm；35℃；1.8mL/min,经7分钟从水中(0.05％TFA)25％至80％ACN)；ESI(C47H72N8O6S,精确分子量876.5)m/z：877.5(MH+)和439.5(M.2H+/2,100％),4.87min(95.1％,254nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.83-7.78(m,2H)；7.56-7.52(m,1H)；7.34-7.17(m,5H)；6.64-6.62(m,2H)；5.77-5.61(m,1H)；4.86-4.68(m,2H)；4.25-4.05(m,1H)；3.87-2.83(m,17H)；2.56-0.84(m,37H)。
实施例9
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–(((2–氨基吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例9A：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–(((2–((叔丁氧基羰基)氨基)吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(5mL)中，由胺3D(170mg,0.27mmol,1.00当量)、酸2I(99.7mg,0.30mmol,1.10当量)、DEPC(0.049mL,1.05当量)和DIEA(0.133mL,3.00当量)合成化合物9A。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:1)纯化，以获得200mg(78％)淡黄色固体形式的化合物9A。
实施例9：以相同于化合物2的方式，在DCM(4mL)和TFA(2mL)中由中间体9A(200mg,0.21mmol,1.00当量)合成化合物9。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物9，产率10％(20mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C46H73N7O8,精确分子量851.6)m/z：852.5(MH+)和426.9(M.2H+/2,100％),6.92min(92.7％,254nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.51-8.45(m,0.5H,NH不完全的交换)；8.30-8.24(m,0.3H,NH不完全的交换)；8.17-8.07(m,0.8H,NH不完全的交换)；7.79-7.77(m,1H)；7.36-7.18(m,5H)；7.21-7.16(m,1H)；6.94-6.89(m,1H)；4.85-4.65(m,3H)；4.20-3.10(m,20H)；3.00-2.85(m,2H)；2.55-0.80(m,36H)。
实施例10
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–(((2–氨基吡啶–4–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例10：将化合物9(100mg,0.11mmol,1.00当量)溶解于水(5mL)、ACN(5mL)和哌啶(2.5mL)的混合物中。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得32.2mg(33％)白色固体形式的化合物10。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C45H71N7O6,精确分子量837.5)m/z：838.5(MH+)和419.9(M.2H+/2,100％),6.81min(97.7％,220nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.41-8.32(m,0.3H,NH不完全的交换)；8.20-8.07(m,0.8H,NH不完全的交换)；7.82-7.75(m,1H)；7.36-7.158(m,5H)；7.12-7.03(m,1H)；6.94-6.88(m,1H)；4.85-4.66(m,3H)；4.20-3.10(m,16H)；3.00-2.85(m,2H)；2.57-0.80(m,37H)。
实施例11
(S)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(4–(甲基氨基)苯乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺三氟乙酸盐
实施例11A：N–[4–(2–羟乙基)苯基]氨基甲酸叔丁酯
于环境温度2–(4–氨基苯基)乙醇和BOC2O在THF中反应之后，获得化合物11A，产率75％。
实施例11B：N–[4–(2–氧代乙基)苯基]氨基甲酸叔丁酯
将化合物11A(2.5g,10.5mmol,1.00当量)溶解于25mLDCM中，然后冷却至–78℃。滴加入DCM(10mL)中戴斯-马丁高碘烷溶液(DMP,6.71g,15.8mmol,1.5当量)。移走冷浴，于环境温度持续搅拌1小时。用60mL碳酸氢钠–饱和水溶液和Na2S2O3–饱和水溶液50/50混合物中和反应。用30mLEtOAc萃取所得溶液3次。将有机相合并，用NaCl–饱和水溶液洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE1/15)以获得1.0g(40％)淡黄色固体形式的化合物11B。
实施例11C：(2S)–2–[[2–(4–[[(叔丁氧基)羰基]氨基]苯基)乙基](甲基)氨基]–3–甲基丁酸苄酯。
在DIEA(6.4g,49.7mmol,4.0当量)、醛11B(2.9g,12.3mmol,1.0当量)和三乙酰氧基硼氢化钠(5.23g,49.7mmol,2.0当量)存在下，将化合物1ZC(3.5g,13.6mmol,1.1当量)溶解于THF(30mL)中。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，然后用60mL碳酸氢钠–饱和溶液中和。用30mLEtOAc萃取所得溶液3次。将有机相合并，用NaCl–饱和水溶液洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE1:20)以获得3.7g(68％)黄色油形式的化合物11C。
实施例11D：(2S)–2–[[2–(4–[[(叔丁氧基)羰基]氨基]苯基)乙基](甲基)氨基]–3–甲基丁酸
在Pd/C(2g)存在下，将化合物11C(2g,4.5mmol,1当量)溶解于10mL甲醇中，在标准温度和压力下氢化2小时。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得1.2g(75％)黄色油形式的化合物11D。
实施例11E：(2S)–2–[[2–(4–[[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基]苯基)乙基](甲基)氨基]–3–甲基丁酸
在惰性气氛中，将化合物11D(1.2g,3.4mmol,1.00当量)溶解于THF(20mL)中。用冰浴冷却反应介质，之后分批加入NaH(油中60％,549mg,13.7mmol,4.0当量)，接着加入碘甲烷(4.9g,34mmol,10当量)。于环境温度将反应搅拌下放置过夜，然后用水中和，用100mLEtOAc洗涤。用1NHCl调节水溶液的pH至6–7。用100mLEtOAc萃取该水溶液3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得800mg(64％)黄色固体形式的化合物11E。
实施例11F：N–[4–(2–[[(1S)–1–[[(1S)–1–[[(3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–[(2S)–2–[(1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–2–[[(1S)–2–苯基–1–(1,3–噻唑–2–基)乙基]氨基甲酰基]乙基]吡咯烷–1–基]–5–甲基–1–氧代庚烷–4基](甲基)氨基甲酰基]–2–甲基丙基]氨基甲酰基]–2–甲基丙基](甲基)氨基]乙基)苯基]–N-甲基氨基甲酸叔丁酯
以相似于化合物6A的方式，由胺1Y(150mg,0.22mmol,1.2当量)和酸11E(70mg,0.19mmol,1.0当量)制备化合物11F。经硅胶(EtOAc/PE1:1)纯化之后，获得100mg(52％)淡黄色固体形式的所需产物。
实施例11：以相同于化合物1的方式，由中间体11F(100mg,0.1mmol)制备化合物11。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物11，产率39％(39.7mg)。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8,3.5μm,4.6x150mm；1mL/min,40℃,经18分钟从水中(0.05％TFA)50至95％甲醇)；ESI(C50H77N7O6S,精确分子量903.57)m/z：904.5(MH+),7.53min(93.68％,254nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.84(d,0.5H,NHCO不完全的交换)；8.7–8.5(m,0.9H,NHCO不完全的交换)；7.76–7.73(m,1H)；7.55-7.4(m,1H)；7.28–7.22(m,7H)；7.08–7.05(m,2H)；5.51–5.72(m,1H)；4.9–4.80(m,2H)；4.3–0.7(m,60H)。
实施例12
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(4–(甲基氨基)苯乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例12：以合成化合物1最后阶段的相同方式，由胺3D(118mg,0.19mmol)和酸11E(82mg,0.22mmol)经两步骤制备化合物12。将最终残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物12，产率7％(13.7mg)。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8,3.5μm,4.6x150mm；1mL/min,40℃,经18分钟从水中(0.05％TFA)40至95％甲醇)；ESI(C49H78N6O8,精确分子量878.59)m/z：879.7(MH+),10.07min(90.6％,254nm)。
1H:NMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.40(se,2H)；7.38–7.22(m,7H)；4.95–4.7(m,3H)；4.2–4.0(m,1H)；3.9–0.86(m,62H)。
实施例13
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(4–(甲基氨基)苯乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例13：以相同于化合物7的方式，由化合物12(100mg,0.10mmol)制备化合物13。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物13，产率20％(20mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18,2.7μm,4.6x100mm；1.5mL/min,40℃,经8分钟从水中(0.05％TFA)10至95％甲醇)；ESI(C48H76N6O8,精确分子量864.57)m/z：865.6(MH+),6.05min(90.9％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.32–7.19(m,9H)；4.9–4.65(m,3H)；4.2–4.0(m,1H)；3.9–0.86(m,59H)。
实施例14
(S)–2–((S)–2–((3–氨基苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
实施例14A：(3–(羟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
将(3–氨基苯基)甲醇(3g,24.36mmol,1.00当量)溶解于THF(60mL)中，之后加入二碳酸二叔丁酯(6.38g,29.23mmol,1.20当量)。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，然后加入200mL水稀释反应。用100mLAcOEt萃取产物3次，然后将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得黄色油形式的粗产物(13.85g化合物14A)。
实施例14B：(3–甲酰基苯基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物14A(13.8g,61.81mmol,1.00当量)溶解于DCE(400mL)中，然后加入MnO2(54g,621.14mmol,10.05当量)。于环境温度将混合物搅拌下放置3天，之后通过过滤去除固体。将滤液蒸发至干，将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:30)纯化以获得3g(22％)白色固体形式的化合物14B。
实施例14C：(S)–2–((3–((叔丁氧基羰基)氨基)苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸苄酯
在化合物1ZC(1.16g,4.50mmol,1.00当量)、DIEA(3mL)和NaBH(OAc)3(1.92g,9.06mmol,2.01当量)存在下，将化合物14B(1g,4.52mmol,1.00当量)溶解于20mLTHF中。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，然后用100mL水中和，并用50mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:50)纯化以获得1.9g(99％)白色固体形式的化合物14C。
实施例14D：(S)–2–((3–((叔丁氧基羰基)氨基)苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
在Pd/C(400mg)存在下，将化合物14C(1g,2.34mmol,1.00当量)溶解于30mLAcOEt和4mL甲醇中，于环境温度和大气压力下氢化1小时。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得680mg(86％)白色固体形式的化合物14D。
实施例14E：(3–((3S,6S,9S,10R)–9–((S)–仲丁基)–3,6–二异丙基–10–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–2,8–二甲基–4,7–二氧代–11–氧杂–2,5,8-三氮杂十二烷基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(100mg,0.15mmol,1.00当量)、酸14D(102.27mg,0.30mmol,2.00当量)、DEPC(0.053mL)和DIEA(0.046mL)合成化合物14E。将粗产物(80mg)在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:1)纯化以获得100mg(67％)淡黄色固体形式的化合物14E。
实施例14：以相同于化合物2的方式，由中间体14E(100mg,0.10mmol,1.00当量)制备化合物14。将粗产物(80mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物14，产率10％(10mg)。
LC/MS/UV(EclipseplusC8柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.0mL/min,经18分钟从水中(0.05％TFA)40％至95％MeOH)；ESI(C48H73N7O6S,精确分子量875.5)m/z：876.5(MH+)和438.9(M.2H+/2,100％),11.35min(95.6％,210nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.92-8.86(m,0.4H,NH不完全的交换)；8.70-8.54(m,0.6H,NH不完全的交换)；7.88-7.78(m,1H)；7.60-7.50(m,1H)；7.45-6.97(m,9H)；5.80-5.65(m,1H)；4.85-4.70(m,1H)；4.40-0.80(m,56H)。
实施例15
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((3–氨基苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例15A：(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-((叔丁氧羰基)氨基)苄基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(5mL)中，由胺3D(200mg,0.32mmol,1.00当量)、酸14D(212.6mg,0.63mmol,2.00当量)、DEPC(0.1103mL)和DIEA(0.157mL,3.00当量)合成化合物15A。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:1)纯化以获得200mg(67％)黄色固体形式的化合物15A。
实施例15：以相同于化合物2的方式，由中间体15A(200mg,0.21mmol,1.00当量)合成化合物15。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器，)纯化。获得白色固体形式的化合物15，产率19％(38.6mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C47H74N6O8,精确分子量850.5)m/z：851.5(MH+)和426.4(M.2H+/2,100％),6.61min(91.1％,210nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.53-7.42(m,1H)；7.35-7.18(m,8H)；4.88-4.79(m,2H)；4.42-4.00(m,3H)；3.93-2.71(m,22H)；2.61-0.81(m,33H)。
实施例16至20
以相同于化合物1的方式，由胺1Y和1ZC和相应的醛制备化合物16至20。
如用于化合物1ZE那样，由4,4–二乙氧基丁–1–胺经2步骤制备在化合物16的制备中涉及的(4–氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯。
在化合物17制备中涉及的N–甲基–N–(2–氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯是商业可得的。
在化合物18制备中使用涉及的2–(2–((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)乙醛如下经2步骤制备：
在惰性气氛中，在4–二甲基氨基吡啶(DMAP,80mg,0.65mmol,0.1当量)存在下，将2–(2–羟基乙氧基)乙–1–醇(7g,66mmol,9.9当量)溶解于吡啶(10mL)中。将溶液冷却至0℃，然后分批加入TBDMSCl(1g,6.6mmol,1.0当量)。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，用100mLEtOAc稀释，依次用100mL1NHCl洗涤两次，NaCl–饱和水溶液洗涤两次。将有机相经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得1.3g(88％)无色油形式的2–[2–[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]乙氧基]乙–1–醇。
在惰性气氛中，将草酰氯(760mg,6mmol,1.3当量)溶解于DCM(40mL)中，然后冷却至-78℃。滴加入稀释于DCM(5mL)中的二甲基亚砜(DMSO,1.07g,13.7mmol,3当量)。于低温搅拌30分钟之后，加入溶解于5mLDCM中的2–[2–[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]乙氧基]乙–1–醇(1g,4.5mmol,1.0当量)。于低温持续搅拌1小时，之后加入TEA(2.78g,27mmol,6当量)。将反应混合物于-78℃搅拌15分钟，然后于环境温度搅拌过夜，之后用100mL水中和。然后用100mLDCM萃取3次。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。将残余物在硅胶上纯化(EtOAc/PE1:20)，获得0.8g(80％)无色油形式的2–[2–[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]乙氧基]乙醛。
在化合物19制备中涉及的4–甲酰基苯基碳酸叔丁酯如下经单一步骤制备：在惰性气氛中，在18–冠醚–6(0.25g)和碳酸钾(5g)存在下，将4–羟基苯甲醛(2.5g,20.5mmol,1.0当量)溶解于THF(20mL)中。将反应混合物冷却至0℃，然后加入二碳酸二叔丁酯(5.8g,26.58mmol,1.30当量)。于低温持续搅拌1小时，之后用30mL水中和反应。用200mLEtOAc萃取所得的溶液三次。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。在硅胶上(EtOAc/PE1:10)纯化残余物，获得4.2g(92％)的淡黄色固体形式的4–甲酰基苯基碳酸叔丁酯。
在化合物20制备中涉及的4–硝基苯甲醛是商业可得的。
通过甲硅烷基化醇的脱保护完成化合物18的合成。该合成如下进行：在惰性气氛中，在TBAF(2mg,0.09mmol,2当量)存在下，将(S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)-11–异丙基-2,2,3,3,10-五甲基-4,7-二氧杂-10-氮杂-3-硅杂十二烷-12-酰胺(40mg,0.04mmol,1.0当量)溶解于THF(10mL)中，并于于环境温度搅拌4小时。将反应用50mL水中和，然后用50mLEtOAc萃取三次。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得粗品状态的化合物18。
通过还原硝基完成化合物20的合成。该合成如下进行：将(2S)–N–[(3R,4S,5S)–1–[(2S)–2–[(1R,2R)–2–[[(1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基]氨基甲酰基]–1–甲氧基–2–甲基乙基]吡咯烷–1–基]–3–甲氧基–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基]–N,3–二甲基–2–[(2S)–3–甲基–2–[甲基[(4–硝基苯基)甲基]氨基]丁酰胺基]丁酰胺(40mg,0.05mmol,1.0当量)溶解于15mL乙醇中。加入二水合的氯化锡(II)(317mg,1.4mmol,30当量)，于环境温度将溶液搅拌下放置3天。将反应用50mL水中和，然后用50mLEtOAc萃取三次。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得粗品状态的化合物20。
*将化合物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化，以获得相应的白色固体形式的TFA盐。
终产物的鉴定：化合物16LC/MS/UV(EclipsePlusC8,3.5μm,4.6x150mm；1mL/min,40℃,经18分钟从水中(0.05％TFA)5至95％甲醇)；ESI:(C45H75N7O6S,精确分子量841.55)m/z842.5(MH+),421.9(100％,(M.2H+)/2)；UV:14.02min(94.9％,210nm)。1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.55–8.2(m,0.8H,NHCO不完全的交换)；8.0(0.55H,NHCO不完全的交换)；7.70(d,1H)；7.44(d,1H)；7.21–7.15(m,5H)；5.65–5.45(m,1H)；4.8–4.5(m,2H)；4.15–3.9(m,2H)；3.8–0.6(m,59H)。化合物17LC/MS/UVESI:(C44H73N7O6S,精确分子量827.53)m/z828(MH+),415[100％,(M.2H+)/2]；UV:RT＝6.72min(99.6％,254nm)1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.82–7.80(m,1H)；7.56–7.54(m,1H)；7.35–7.20(m,5H)；5.8–5.55(m,1H)；4.85–4.6(m,1H)；4.25–4.05(m,1H)；3.95–0.8(m,60H)。化合物18LC/MS/UV(AtlantisT3,3μm,4.6x100mm；1.2mL/min,40℃,经7分钟从水中(0.05％TFA)5至95％甲醇)i；ESI:(C45H74N6O8S,精确分子量858.53)m/z859(MH+),881(MNa+),430(100％,(M.2H+)/2)；UV:4.85min(96.8％,220nm)。1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.75–8.55(m,0.5H,NHCO不完全的交换)；7.85–7.80(m,1H)；7.6–7.5(m,1H)；7.40–7.15(m,5H)；5.8–5.6(m,1H)；4.8–4.55(m,2H)；4.15–4.0(m,1H)；4.0–0.8(m,60H)。化合物19LC/MS/UVESI:(C48H72N6O7S,精确分子量876.52)m/z877(MH+),439[100％,(M.2H+)/2]；UV:RT＝1.76min(93.2％,220nm)。化合物201HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.85–7.80(m,1H)；7.6–7.5(m,1H)；7.4–7.15(m,5H)；7.1–7.05(m,2H)；6.73–6.70(m,2H)；5.8–5.55(m,1H)；5.0–4.7(m,2H)；4.25–4.05(m,1H)；4.0–0.8(m,54H)。LC/MS/UVESI:(C48H73N7O7S,精确分子量875.53)m/z876(MH+),439[75％,(M.2H+)/2]；UV:RT＝4.83min(96.8％,254nm)。1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.85–7.80(m,1H)；7.6–7.5(m,1H)；7.4–7.1(m,7H)；6.76–6.72(m,2H)；5.8–5.55(m,1H)；4.9–4.65(m,2H)；4.25–4.05(m,1H)；4.0–0.8(m,54H)。
实施例21至24
以相同于化合物17至20的相同方式，将胺1Y替换为胺2D来制备化合物21至24。
*将化合物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化，以获得相应的白色固体形式的TFA盐。
终产物的鉴定：化合物21LC/MS/UV(ESI)(C42H74N6O7,精确分子量774.56)m/z775(MH+),797(MNa+),388(100％,(M.2H+)/2)；UV:3.14min(97.6％,215nm)。1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.05–7.7(m,0.8H,NHCO不完全的交换)；7.45–7.15(m,5H)；4.9–4.45(m,2H)；4.35–4.00(m,2H)；3.95–0.8(m,61H)。化合物22LC/MS/UV(ESI)(C43H75N5O9,精确分子量805.56)m/z806(MH+),828(MNa+),404(100％,(M.2H+)/2)；UV:4.47min(95.6％,215nm)。1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.1–7.7(m,0.4H,NHCO不完全的交换)；7.45–7.15(m,5H)；4.9–4.5(m,3H)；4.4–4.05(m,2H)；4.05–0.8(m,61H)。化合物23LC/MS/UV(ESI)(C46H73N5O8,精确分子量823.55)m/z824(MH+),846(MNa+),413(100％,(M.2H+)/2)；UV:4.76min(98.5％,215nm)。1HNMR(400MHz,CDCl3,ppm):δ(存在旋转异构体)7.5–7.2(m,5H)；7.9–7.75(m,2H)；5.5–5.3(m,1H)；4.9–4.6(m,2H)；4.55–4.15(m,4H)；4.0–0.8(m,55H)。化合物24LC/MS/UV(ESI)(C46H74N6O7,精确分子量822.56)m/z823(MH+),845(MNa+),861(MK+)；UV:3.68min(99.15％,254nm)。1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.0–7.7(m,0.5H,NHCO不完全的交换)；7.5–7.0(m,7H)；6.75–6.65(m,2H)；4.85–4.5(m,2H)；4.4–4.05(m,2H)；4.0–0.8(m,56H)。
实施例25
(S)–N–((3R,4S,5S)–1–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–3–甲氧基–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(吡啶–4–基甲基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺三氟乙酸盐
实施例25：以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺2D(50mg,0.08mmol,0.67当量)、酸3F(27.56mg,0.12mmol,1.00当量)、DEPC(0.0189mL)和DIEA(0.041mL)制备化合物25。蒸发至干之后，将粗产物(80mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物25，产率17％(20mg)。
LC/MS/UV(WatersXBridgeShieldRP18柱,3.5μm,4.6x100mm；40℃；1.0mL/min,经13分钟从水中(0.05％TFA)50％至85％MeOH，然后85％MeOH持续5分钟)ESI(C45H72N6O7,精确分子量808.6)m/z:809.5(MH+)和405.4(M.2H+/2,100％),10.60min(87.0％,210nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.79(s,2H)；8.26-8.14(m,0.6H,NH不完全的交换)；(8.12-8.00(m,2H)；7.50-7.20(m,5H)；4.85-4.52(m,3H)；4.37-4.02(m,3H)；4.00-3.40(m,10H)；3.25-2.95(m,3H)；2.63-0.80(m,41H)。
实施例26
(S)–2–((S)–2–((2–氨基乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺双三氟乙酸盐
实施例26A：(S)–2–((2–((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸苄酯
以相同于化合物2H的方式，在THF(25mL)中，由胺1ZC(1.3g,5.04mmol,1.00当量)、(2–氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(800mg,5.03mmol,1.00当量)、DIEA(3.52g,27.24mmol,5.42当量)和NaBH(OAc)3(2.25g,10.62mmol,2.11当量)制备化合物26A。将混合物搅拌下放置过夜并用50mL水中和。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(10:1)纯化以获得0.6g(33％)无色油形式的化合物26A。
实施例26B：(S)–2–((2–((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
在Pd/C(300mg)存在下，将化合物26A(600mg,1.65mmol,1.00当量)溶解于40mLTHF中，于环境温度和大气压力下氢化1小时。将反应介质过滤和减压下浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和MeOH的混合物纯化以获得0.4g(89％)无色油形式的化合物26B。
实施例26C：((3R,4S,7S,10S)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11–二甲基–6,9–二氧代–2–氧杂-5,8,11–三氮杂十三烷–13–基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(70mg,0.11mmol,1.00当量)、酸26B(58.4mg,0.21mmol,2.00当量)、DEPC(0.032mL)和DIEA(0.053mL)制备化合物26C。蒸发至干之后，获得黄色油形式的化合物26C(100mg)。
实施例26：以相同于化合物2的方式，在DCM(3mL)和TFA(1.5mL)中，由中间体26C(100mg,0.11mmol,1.00当量)合成化合物26。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至45％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物26，产率38％(38.1mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.0mL/min,经18分钟从水中(0.05％TFA)5％至95％MeOH)；ESI(C43H71N7O6S,精确分子量813.52)m/z:814.5(MH+)和407.9(M.2H+/2,100％),15.78min(91.2％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.90-8.82(m,0.5H,NH不完全的交换)；8.71-8.65(m,0.3H,NH不完全的交换)；(7.85-7.77(m,1H)；7.60-7.49(m,1H)；7.37-7.15(m,5H)；5.78-5.55(m,1H)；4.82-4.62(m,1.6H)；4.32-3.83(m,3.6H)；3.75-3.35(m,7.4H)；3.30-2.60(m,13H)；2.58-0.80(m,42H)。
实施例27
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((4–羟基苯乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例27：以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺3D(70mg,0.11mmol,1.00当量)、酸49C(55.5mg,0.22mmol,2.00当量)、DEPC(0.034mL,2.00当量)和DIEA(0.055mL,3.00当量)制备化合物27。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至45％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物27，产率3％(2.9mg)。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C48H75N5O9,精确分子量866.56)m/z:866.5(MH+)和433.9(M.2H+/2,100％),6.61min(89.1％,210nm)。
1HNMR(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.70-8.49(m,0.9H,NH/OH不完全的交换)；8.30-8.22(m,0.3H,NH不完全的交换)；7.36-7.02(m,7H)；6.86-6.62(m,2H)；4.82-4.69(m,2H)；4.20-4.03(m,1H)；3.91-3.33(m,12H)；3.30-2.90(m,17H)；2.55-0.80(m,35H)。
实施例28
(S)–2–((S)–2–((3–氨基苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–1–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–3–甲氧基–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
实施例28A：(3–((3S,6S,9S,10R)–9–((S)–仲丁基)–10–(2–((S)–2–((1R,2R)–3–(((1S,2R)–1–羟基–1–苯基丙烷–2–基)氨基)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–3,6–二异丙基–2,8–二甲基–4,7–二氧代–11–氧杂–2,5,8–三氮杂十二烷基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺2D(100mg,0.17mmol,1.00当量)、酸14D(111.25mg,0.33mmol,2.00当量)、DEPC(0.058mL)和DIEA(0.05mL)制备化合物28A。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和己烷的混合物(1:1)纯化以获得100mg(66％)白色固体形式的化合物28A。
实施例28：以相同于化合物2的方式，由中间体28A(100mg,0.11mmol,1.00当量)合成化合物28。将粗产物(80mg)通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物28，产率20％(20mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C46H74N6O7,精确分子量822.56)m/z:823.5(MH+)和412.4(M.2H+/2,100％),12.45min(87.2％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.47-7.20(m,5H)；7.10-7.01(m,1H)；6.80-6.56(m,3H)；4.82-4.52(m,3H)；4.33-4.03(m,2H)；3.91-3.82(m,0.5H)；3.75-3.35(m,9.5H)；3.28-3.10(m,2H)；2.79-2.90(m,1H)；2.60-2.40(m,2H)；2.30-0.80(m,40H)。
实施例29
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((3–氨基苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例29：将化合物15(100mg,0.10mmol,1.00当量)溶解于水(5mL)、ACN(5mL)和哌啶(2.5mL)的混合物中。于环境温度将反应混合物搅拌下放置过夜，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处中Waters2545紫外检测器)纯化，以获得20mg(20％)白色固体形式的化合物29。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.0mL/min,经18分钟从水中(0.05％TFA)40％至95％MeOH)；ESI(C46H72N6O8,精确分子量836.54)m/z:837.5(MH+)和419.4(M.2H+/2,100％),10.61min(92.5％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.38-7.15(m,6H)；7.00-6.99(m,3H)；4.85-4.68(m,2H)；4.37-3.38(m,11H)；3.31-2.70(m,8H)；2.60-0.82(m,35H)。
实施例30
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((4–氨基丁基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯双三氟乙酸盐
实施例30：以相同于化合物16的方式，由胺3D和相应的羧酸制备化合物30。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18,2.7μm,4.6x100mm；1.5mL/min,40℃,经15分钟从水中(0.05％TFA)10至95％甲醇)；ESI(C44H76N6O8,精确分子量816.57)m/z:817.6(MH+),409.4(M.2H+/2)；12.0min(90％,210nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.7–8.2(m,1H,NHCOs,不完全的交换)；7.4–7.1(m,5H)；4.95–4.7(m,3H)；4.2–4.0(m,1H)；3.9–0.8(m,63H)。
实施例31
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((4–氨基丁基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸双三氟乙酸盐
实施例31：以相同于化合物4的方式，由甲酯30制备化合物31。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18,2.7μm,4.6x100mm；1.5mL/min,40℃,经18分钟从水中(0.05％TFA)10至95％甲醇)；ESI(C43H74N6O8,精确分子量802.56)m/z:803.6(MH+),402.4(M.2H+/2)；13.68min(98.9％,210nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.4–7.1(m,5H)；4.95–4.7(m,3H)；4.2–4.0(m,1H)；3.9–0.8(m,61H)。
实施例32
(S)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(3–(甲基氨基)丙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺双三氟乙酸盐
实施例32A：(3,3–二乙氧基丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物1ZD(247mg,1mmol,1.00当量)溶解于30mLTHF和DMF的1:1混合物中。用冰浴冷却反应介质，之后分批加入NaH(60％油中,60mg,1.5当量)，接着滴加入MeI(0.28mL)。于环境温度将反应搅拌下放置2天，然后用5mLNH4Cl–饱和水溶液中和，并用15mLEtOAc萃取两次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得200mg(77％)黄色固体形式的化合物32A。
实施例32B：(S)-2-((3-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)丙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸
依据制备化合物1ZF描述的相同方案，将化合物1ZD替换为化合物32A来制备化合物32B。
实施例32：依据制备化合物1描述的相同方案，由胺1Y和羧酸32B来制备化合物32。
LC/MS/UV(ZorbaxSB–Aq,1.8μm,4.6x100mm,40℃,经13分钟从水中(0.05％TFA)10至95％甲醇)；ESI(C45H75N7O6S,精确分子量842.19)m/z:843(MH+),421.9(M.2H+/2)；11.91min(88％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.5-9.0(m,0.5H,不完全的交换NHCOs),7.85-7.80(m,1H)；7.60-7.50(m,1H),7.35-7.15(m,5H),5.80-5.63(m,1H),4.80-4.65(m,2H),4.30-4.00(m,1H),3.95-0.80(m,61H)。
实施例33和34
以相同于化合物6和7的方式，将羧酸1ZF替换为化合物32B来制备化合物33和34。
*将化合物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化，以获得相应的白色固体形式的TFA盐。
终产物的鉴定：化合物33LC/MS/UV(ESI)(C44H76N6O8,精确分子量816.57)m/z817.6(MH+),409.4(M.2H+/2)；UV:5.94min(95％,210nm)。1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)δ8.6-8.2(m,0.8H,NHCO不完全的交换)7.30-7.22(m,5H),4.80(m,2H),4.23-0.86(m,66H)。化合物34LC/MS/UV(ESI)(C43H74N6O8,精确分子量802.56)m/z803.6(MH+),402.4(M.2H+/2)；UV:5.94min(97.5％,210nm)。1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)δ7.30-7.20(m,5H),4.80(m,2H),4.25-0.86(m,63H)。
实施例35
(S)–2–((S)–2–((2–(2–氨基乙氧基)乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺双三氟乙酸盐
实施例35A：(2–(2–羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
于0℃将2–(2–氨基乙氧基)乙醇(5g,47.56mmol,1.00当量)溶解于THF(100mL)中，然后加入氢氧化钠(2g,50.00mmol,1.05当量)(25mL水溶液)。滴加入二碳酸二叔丁酯(10.38g,47.56mmol,1.00当量)在THF(20mL)中的溶液，然后于环境温度搅拌下放置过夜。通过加入50mL水稀释反应，用75mLAcOEt萃取产物3次。将有机相合并，用100mLNaCl(sat.)洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得9g(92％)黄色油形式的化合物35A。
实施例35B：(2–(2–氧代乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
于–78℃氮气下，将DMSO(3.46mL,5.00当量)的DCM(20mL)溶液滴加入草酰氯(1.9mL,2.30当量)的DCM(20mL)溶液中。加入(30min)之后，搅拌溶液30分钟，然后加入化合物35A(2g,9.74mmol,1.00当量)在20mLDCM中的溶液。加入TEA(12.2mL)之后，于–78℃搅拌反应30分钟，然后于环境温度搅拌过夜。通过加入100mL水稀释反应，用50mLAcOEt萃取产物3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得1.9g黄色油形式的化合物35B。
实施例35C：(S)-12–异丙基–2,2,11–三甲基–4–氧代–3,8–二氧杂–5,11–二氮杂十三烷–13–酸苄酯
以相同于化合物14C的方式，在THF(40mL)中，由胺1ZC(2.4g,9.31mmol,1.00当量)、醛35B(1.9g,9.35mmol,1.00当量)、NaBH(OAc)3(3.96g,18.68mmol,2.00当量)和DIEA(6.2mL)合成化合物35C。用200mL水中和反应混合物，并用100mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩以获得2.3g黄色油形式的化合物35C。
实施例35D：(S)–12–异丙基–2,2,11–三甲基–4–氧代–3,8–二氧杂–5,11–二氮杂十三烷–13–酸
在Pd/C(200mg)存在下，将化合物35C(200mg,0.49mmol,1.00当量)溶解于10mL乙醇中并氢化过夜。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得150mg(96％)白色固体形式的化合物35D。
实施例35E：((3R,4S,7S,10S)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11–二甲基–6,9–二氧代–2,14–二氧杂–5,8,11–三氮杂十六烷–16–基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(70mg,0.11mmol,1.00当量)、酸35D(40.6mg,0.13mmol,1.20当量)、DEPC(0.0324mL)和DIEA(0.0527mL)合成化合物35E。分离到黄色油形式的粗产物(100mg,98％)，其随后就这样使用。
实施例35：以相同于化合物2的方式，由中间体35E(100mg,0.10mmol,1.00当量)合成化合物35。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物35，产率23％(22.9mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C45H75N7O7S,精确分子量857.54)m/z:858.5(MH+)和429.9(M.2H+/2,100％),5.89min(89.7％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)δ8.9-8.5(m,0.5H,NHCO不完全的交换),7.8-7.7(m,1H),7.55-7.45(m,1H),7.35-7.1(m,5H),5.45-5.5(m,1H),4.9–4.6(m,1H),4.3-0.75(m,62H)。
实施例36
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((7S,10S,13S,14R)–1–氨基–13–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–14–甲氧基–6,12–二甲基–8,11–二氧代–3–氧杂–6,9,12–三氮杂十六烷–16–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯双三氟乙酸盐
实施例36A：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((12S,15S,18S,19R)–18–((S)–仲丁基)–12,15–二异丙基–19–甲氧基–2,2,11,17–四甲基–4,13,16–三氧代–3,8–二氧杂–5,11,14,17–四氮杂二十一烷–21–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺3D(50mg,0.08mmol,1.00当量)、酸35D(25mg,0.11mmol,1.48当量)、DEPC(0.0337mL)和DIEA(0.0548mL)合成化合物36A。分离到黄色油形式的粗产物(100mg)，其随后就这样使用。
实施例36：以相同于化合物2的方式，由中间体36A(100mg,0.11mmol,1.00当量)合成化合物36。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物36，产率13％(12.7mg)。
LC/MS/UV(AgilentZORBAXSB–Aq柱,1.8μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,水中(0.05％TFA)2％MeOH持续1分钟，然后经13分钟从水中2％至95％MeOH，然后水中95％MeOH持续2分钟)；ESI(C44H76N6O9,精确分子量832.57)m/z:833.5(MH+)和417.4(M.2H+/2,100％),11.58min(98.5％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.1-8.5(m,0.8H,NHCO不完全的交换),7.30-7.1(m,5H),4.9-4.6(m,3H),4.2-0.8(m,64H)。
实施例37
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((7S,10S,13S,14R)–1–氨基–13–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–14–甲氧基–6,12–二甲基–8,11–二氧代–3–氧杂–6,9,12–三氮杂十六烷–16–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸双三氟乙酸盐
实施例37：以相同于化合物4的方式，由化合物36(100mg,0.11mmol,1.00当量)制备化合物37。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,AtlantisPrepOBDT3柱,5μm,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得18.4mg(19％)白色固体形式的化合物37。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C43H74N6O9,精确分子量818.6)m/z:819.6(MH+)和410.4(M.2H+/2,100％),5.48min(96.7％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.35-7.2(m,5H),5.0-4.65(m,3H),4.3-0.8(m,61H)。
实施例38
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((2–氨基乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯双三氟乙酸盐
实施例38A：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((9S,12S,15S,16R)–15–((S)–仲丁基)–9,12–二异丙基–16–甲氧基–2,2,8,14–四甲基–4,10,13–三氧代–3–氧杂–5,8,11,14–四氮杂十八烷–18–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺3D(70mg,0.11mmol,1.00当量)、酸26B(60.7mg,0.22mmol,2.00当量)、DEPC(0.0337mL)和DIEA(0.0548mL)合成化合物38A。分离到黄色油形式的粗产物(100mg)。
实施例38：以相同于化合物2的方式，由中间体38A(100mg,0.11mmol,1.00当量)合成化合物38。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物38，产率10％(10.3mg)。
LC/MS/UV(AgilentZORBAXSB–Aq柱,1.8μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,水中(0.05％TFA)2％MeOH持续1分钟，然后经13分钟从水中2％至95％MeOH，然后水中95％MeOH持续2分钟)；ESI(C42H72N6O8,精确分子量788.5)m/z:789.5(MH+)和395.4(M.2H+/2,100％),12.97min(91.0％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.30-7.1(m,5H),4.9-4.6(m,3H),4.2-0.8(m,60H)。
实施例39
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((2–氨基乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸双三氟乙酸盐
实施例39：以相同于化合物4的方式，由化合物38(100mg,0.11mmol,1.00当量)制备化合物39。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处中的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得8.2mg(8％)白色固体形式的化合物39。
LC/MS/UV(EclipsePlusC18柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C41H70N6O8,精确分子量774.5)m/z:775.5(MH+)和388.4(M.2H+/2,100％),6.47min(93.6％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.35-7.15(m,5H),4.9-4.6(m,3H),4.2-0.8(m,57H)。
实施例40
(S)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(4–(甲基氨基)丁基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺双三氟乙酸盐
实施例40A：(4,4–二乙氧基丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物11E的方式，在THF/DMF(40/20mL)中，由(4,4–二乙氧基丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(5.5g,19.97mmol,1.00当量)、NaH(油中60％,3.2g,80.00mmol,4.01当量)和碘甲烷(14mL)制备化合物40A。用50mLNH4Cl(aq)中和反应。分离到黄色油形式的化合物40A，5.5g(95％)。
实施例40B：甲基(4–氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物40A(3g,10.89mmol,1.00当量)溶解于AcOH和水(15/4mL)的混合物中，将溶液搅拌下放置过夜。用NaHCO3–饱和水溶液将pH调节至7–8，然后用50mLEtOAc萃取两次。将有机相合并，用50mLNaCl–饱和水溶液洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。分离到黄色油形式的化合物40B，2.1g(96％)。
实施例40C：(S)–2–((4–((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丁基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸苄酯
以相同于化合物14C的方式，在THF(15mL)中，由胺1ZC(2.45g,9.53mmol,0.80当量)、醛40B(2.4g,11.92mmol,1.00当量)、NaBH(OAc)3(5.06g,23.87mmol,2.00当量)和DIEA(6.16g,47.66mmol,4.00当量)合成化合物40C。用100mL水中和反应混合物，并用100mLAcOEt萃取两次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(1:100–1:20))以获得1.2g(25％)黄色油形式的化合物40C。
实施例40D：(S)–2–((4–((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丁基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
在Pd/C(550mg)存在下，将化合物40C(500mg,1.23mmol,1.00当量)溶解于20mLEtOH中，于环境温度和大气压力下氢化1小时。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得350mg(90％)无色油形式的化合物40D。
实施例40E：((3R,4S,7S,10S)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11–二甲基–6,9–二氧代–2–氧杂–5,8,11–三氮杂十五烷–15–基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(60mg,0.09mmol,1.00当量)、酸40D(57.8mg,0.18mmol,2.00当量)、DEPC(0.0278mL)和DIEA(0.0452mL)合成化合物40E。粗产物(100mg)随后就这样使用。
实施例40：以相同于化合物2的方式，由中间体40E(100mg,0.10mmol,1.00当量)制备化合物40。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物40，产率24％(24.6mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C46H77N7O6S,精确分子量855.6)m/z:856.6(MH+)和428.8(M.2H+/2,100％),5.89min(97.0％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.9-8.5(0.7H,NHCO不完全的交换),7.8-7.7(m,1H),7.55-4.45(m,1H),7.35-7.1(m,5H),5.5-5.75(m,1H),4.9-4.6(m,2H),4.2-0.8(m,64H)。
实施例41
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((8S,11S,14S,15R)–14–((S)–仲丁基)–8,11–二异丙基–15–甲氧基–7,13–二甲基–9,12–二氧代–2,7,10,13–四氮杂十七烷–17–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯双三氟乙酸盐
实施例41A：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((11S,14S,17S,18R)–17–((S)–仲丁基)–11,14–二异丙基–18–甲氧基–2,2,5,10,16–五甲基–4,12,15–三氧代–3–氧杂–5,10,13,16–四氮杂二十烷–20–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(5mL)中，由胺3D(170mg,0.27mmol,1.00当量)、酸40D(170mg,0.54mmol,2.09当量)、DEPC(0.0819mL)和DIEA(0.133mL)合成化合物41A。粗产物(200mg)随后就这样使用。
实施例41：以相同于化合物2的方式，由中间体41A(100mg,0.11mmol,1.00当量)合成化合物41。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物41，产率25％(25mg)。
LC/MS/UV(AgilentZorbaxSB–Aq柱,1.8μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,水中(0.05％TFA)2％MeOH持续1分钟，然后经13分钟从水中2％至95％MeOH，然后95％MeOH水中持续2分钟)；ESI(C45H78N6O8,精确分子量830.6)m/z:831.6(MH+)和416.4(M.2H+/2,100％),11.58min(97.2％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.55-8.15(0.75H,NHCO不完全的交换),7.30-7.1(m,5H),4.9-4.6(m,3H),4.2-0.8(m,67H)。
实施例42
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((8S,11S,14S,15R)–14–((S)–仲丁基)–8,11–二异丙基–15–甲氧基–7,13–二甲基–9,12–二氧代–2,7,10,13–四氮杂十七烷–17–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸双三氟乙酸盐
实施例42：以相同于化合物4的方式，由化合物41(100mg,0.11mmol,1.00当量)制备化合物42。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,AtlantisPrepOBDT3柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得30.6mg(31％)白色固体形式的化合物42。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)0％至95％MeOH)；ESI(C44H76N6O8,精确分子量816.6)m/z:817.6(MH+)和409.4(M.2H+/2,100％),5.75min(100％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.5-8.1(0.3H,NHCO不完全的交换),7.30-7.1(m,5H),4.9-4.6(m,3H),4.2-0.8(m,64H)。
实施例43
(S)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((R)–3–甲基–2–(甲基(2–(2–(甲基氨基)乙氧基)乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺双三氟乙酸盐
实施例43A：(2–(2–((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
在惰性气氛中，将化合物35A(((2–(2–羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯)(8.21g,40.00mmol,1.00当量)和咪唑(6g,88.14mmol,2.20当量)溶解于DCM(200mL)。滴加入叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl,6.62g,43.92mmol,1.10当量)，于环境温度将反应介质搅拌下放置过夜。用100mLDCM稀释反应混合物，然后用200mL0.5MHCl洗涤两次，用200mLNaHCO3(sat.)洗涤两次，然后用300mLNaCl(sat.)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(1:3)以获得10g(78％)白色固体形式的化合物43A。
实施例43B：(2–(2–((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物11E的方式，在DMF(200mL)中，由化合物43A(10g,31.30mmol,1.00当量)、NaH(油中60％,5g,208.33mmol,4.00当量)和碘甲烷(22g,5.00当量)制备化合物43B。用200mL水中和反应介质，并用100mLAcOEt萃取3次，然后用300mLNaCl(sat.)萃取。将有机相经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得10g(96％)白色固体形式的化合物43B。
实施例43C：(2–(2–羟基乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物43B(10g,29.89mmol,1.00当量)和TBAF.3H2O(20.8g,65.93mmol,2.20当量)溶解于THF(200mL)中。于环境温度搅拌混合物2小时，然后用100mLAcOEt萃取3次。将有机相再合并，用300mL水洗涤两次，用300mLNaCl(sat.)洗涤两次，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(1:3-1:1)以获得6.6g无色油形式的化合物43C。
实施例43D：甲基(2–(2–氧代乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物35B的方式，由化合物43C(2g,9.12mmol,1.00当量)、草酰氯(1.9mL)、TEA(11.3mL)和DMSO(3.3mL)制备化合物43D。分离到黄色油形式的化合物43D(2g)。
实施例43E：(S)–12–异丙基–2,2,5,11–四甲基–4–氧代–3,8–二氧杂–5,11–二氮杂十三烷–13–酸苄酯
以相同于化合物14C的方式，在THF(100mL)中，由胺1ZC(2.4g,9.31mmol,1.00当量)、醛43D(2g,9.16mmol,1.00当量)、NaBH(OAc)3(4g,18.87mmol,2.06当量)和DIEA(6mL)合成化合物43E。用100mL水中和反应混合物，并用100mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(4:1)以获得1g(37％)白色固体形式的化合物43E。
实施例43F：(S)–12–异丙基–2,2,5,11–四甲基–4–氧代–3,8–二氧杂–5,11–二氮杂十三烷–13–酸
在Pd/C(1g)存在下，将化合物43E(1g,2.37mmol,1.00当量)溶解于40mLMeOH中，于环境温度和大气压力下氢化1小时。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得600mg(76％)白色固体形式的化合物43F。
实施例43G：((3R,4S,7S,10R)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11–二甲基–6,9–二氧代–2,14–二氧杂–5,8,11–三氮杂十六烷–16–基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(1mL)中，由胺1Y(50mg,0.08mmol,1.00当量)、酸43F(50mg,0.08mmol,1.00当量)、DEPC(24.79mg,0.15mmol,2.00当量)和DIEA(29.46mg,0.23mmol,3.00当量)合成化合物43G。粗产物(59mg)随后就这样使用。
实施例43：以相同于化合物2的方式，由中间体43G(81mg,0.08mmol,1.00当量)合成化合物43。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物43，产率64％(52.6mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,水中(0.05％TFA)10％至95％MeCN持续8分钟，然后水中95％MeCN持续2分钟)；ESI(C48H77N7O7S,精确分子量871.6)m/z:872.5(MH+)和436.9(M.2H+/2,100％),3.90min(100％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.8-7.7(m,1H),7.55-4.45(m,1H),7.35-7.1(m,5H),5.5-5.75(m,1H),4.9-4.6(m,2H),4.2-0.8(m,64H)。
实施例44
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((9S,12S,15S,16R)–15–((S)–仲丁基)–9,12–二异丙基–16–甲氧基–8,14–二甲基–10,13–二氧代–5–氧杂–2,8,11,14–四氮杂十八烷–18–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯双三氟乙酸盐
实施例44A：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((12S,15S,18S,19R)–18–((S)–仲丁基)–12,15–二异丙基–19–甲氧基–2,2,5,11,17–五甲基–4,13,16–三氧代–3,8–二氧杂–5,11,14,17–四氮杂二十一烷–21–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(1.5mL)中，由胺3D(60mg,0.09mmol,1.00当量)、酸43F(47mg,0.14mmol,1.50当量)、DEPC(31mg,0.19mmol,2.00当量)和DIEA(37mg,0.28mmol,3.00当量)合成化合物44A。粗产物(58mg)随后就这样使用。
实施例44：以相同于化合物2的方式，由中间体44A(58mg,0.06mmol,1.00当量)合成化合物44。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物44，产率40％(23.7mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,水中(0.05％TFA)10％至95％MeCN持续8分钟，然后水中95％MeCN持续2分钟)；ESI(C45H78N6O9,精确分子量846.6)m/z:847.6(MH+)和424.4(M.2H+/2,100％),3.20min(100％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.3-7.1(m,5H),4.9-4.6(m,3H),4.2-0.8(m,67H)。
实施例45
(S)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(2–(哌嗪–1–基)乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺三三氟乙酸盐
实施例45A：4–(2–羟乙基)哌嗪–1–羧酸叔丁酯
将2–(哌嗪–1–基)乙–1–醇(5g,38.41mmol,1.00当量)溶解于DCM(100mL)中，滴加入二碳酸二叔丁酯(8.38g,38.40mmol,1.00当量)在DCM(20mL)中的溶液。于环境温度将反应搅拌下放置过夜。将反应蒸发至干，将残余物溶解于200mLAcOEt中，用NaCl(sat.)洗涤5次，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得8.5g(96％)白色固体形式的化合物45A。
实施例45B：4–(2–氧代乙基)哌嗪–1–羧酸叔丁酯
以相同于化合物35B的方式，由化合物45A(1g,4.34mmol,1.00当量)、草酰氯(610mg,4.80mmol,1.12当量)、TEA(2.13g,21.09mmol,4.90当量)和DMSO(0.82g,2.40当量)制备化合物45B。分离到无色油形式的化合物45B(0.8g,81％)。
实施例45C(S)-4–(2–((1–(苄氧基)–3–甲基–1–氧代丁烷–2–基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪–1–羧酸叔丁酯
以相同于化合物14C的方式，在THF(50mL)中，由胺1ZC(720mg,2.79mmol,0.80当量)、醛45B(800mg,3.50mmol,1.00当量)、NaBH(OAc)3(1.6g,7.55mmol,2.15当量)和DIEA(2.5mL)合成化合物45C。用5mL水中和反应混合物，并用5mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(3:1)以获得400mg(33％)无色油形式的化合物45C。
实施例45D：(S)–2–((2–(4–(叔丁氧基羰基)哌嗪–1–基)乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
在Pd/C(400mg)存在下，将化合物45C(400mg,0.92mmol,1.00当量)溶解于30mLMeOH中，于环境温度和大气压力下氢化1小时。将反应介质过滤，减压下浓缩以获得300mg(95％)白色固体形式的化合物45D。
实施例45E：4–((3R,4S,7S,10S)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11–二甲基–6,9–二氧代–2–氧杂–5,8,11–三氮杂十三烷–13–基)哌嗪–1–羧酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(60mg,0.09mmol,1.00当量)、酸45D(62.7mg,0.18mmol,2.00当量)、DEPC(0.0278mL)和DIEA(0.0452mL)合成化合物45E。粗产物(100mg)随后就这样使用。
实施例45：以相同于化合物2的方式，由中间体45E(100mg,0.10mmol,1.00当量)合成化合物45。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物45，产率19％(19.4mg)。
LC/MS/UV(AgilentZORBAXSB–Aq柱,1.8μm,4.6x100mm；40℃；1.0mL/min,水中(0.05％TFA)2％MeOH持续1分钟，然后经13分钟从水中2％至95％MeOH，然后95％MeOH水中持续2分钟)；ESI(C47H78N8O6S,精确分子量882.6)m/z:883.5(MH+)和442.4(M.2H+/2,100％),10.95min(98.8％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体),7.80-7.70(m,1H),7.52-7.43(m,1H),7.31-7.09(m,5H),5.70-5.51(m,1H),4.80-4.60(m,1H),4.20-0.75(m,66H)。
实施例46
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(2–(哌嗪–1–基)乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯三三氟乙酸盐
实施例46A：4–((3R,4S,7S,10S)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–3–(((S)–1–甲氧基–1–氧代–3–苯基丙烷–2–基)氨基)–2–甲基–3–氧代丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11–二甲基–6,9–二氧代–2–氧杂–5,8,11–三氮杂十三烷–13–基)哌嗪–1–羧酸叔丁酯
以相同于化合物3的方式，在DCM(5mL)中，由胺3D(170mg,0.27mmol,1.00当量)、酸45D(184.6mg,0.54mmol,2.00当量)、DEPC(0.0819mL)和DIEA(0.133mL)合成化合物46A。粗产物(200mg)随后就这样使用。
实施例46：以相同于化合物2的方式，由中间体46A(100mg,0.10mmol,1.00当量)合成化合物46。将粗产物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物46，产率19％(19.1mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,水中(0.05％TFA)10％至95％MeCN持续8分钟，然后水中95％MeCN持续2分钟)；ESI(C46H79N7O8,精确分子量857.6)m/z:858.6(MH+)an429.9(M.2H+/2,100％),5.93min(100％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.58-8.50(m,0.5H,NHCO,不完全的交换),8.29-8.22(m,0.4H,NHCO,不完全的交换),7.35-7.15(m,5H),4.87-4.69(m,3H),4.22-0.82(m,68H)。
实施例47
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–N,3–二甲基–2–((S)–3–甲基–2–(甲基(2–(哌嗪–1–基)乙基)氨基)丁酰胺基)丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三三氟乙酸盐
以相同于化合物4的方式，由化合物46(100mg,0.10mmol,1.00当量)制备化合物47。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,AtlantisPrepOBDT3柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得32.6mg(33％)白色固体形式的化合物47。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C46H77N7O8,精确分子量843.6)m/z:844.6(MH+)和422.9(M.2H+/2,100％),5.73min(100％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.66-8.57(m,0.3H,NHCO,不完全的交换),8.41-8.32(m,0.3H,NHCO,不完全的交换),8.13-8.06(m,0.2H,NHCO,不完全的交换),7.30-7.10(m,5H),4.80-4.61(m,3H),4.19-0.78(m,65H)。
实施例48
(S)–2–((S)–2–(((1H–咪唑–2–基)甲基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
以相同于化合物1的方式，由胺1Y和1ZC和1H–咪唑–2–甲醛制备化合物48。通过制备型HPLC以如下条件纯化终产物：SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm,0.05％TFA缓冲的流动相,梯度经10分钟水中15.0至30％ACN，然后经2分钟达到95.0％ACN,紫外检测UV220nm。
LC/MS/UV(ZorbaxEclipsePlusC8,1.8μm,4.6x100mm；1mL/min,40℃,水中2％甲醇(0.05％TFA缓冲的洗脱相)持续1分钟,然后2％至95％甲醇持续12分钟；ESI(C45H70N8O6S,精确分子量850.51)m/z:851.2(MH+),873.5(MNa+),426.3(M.2H+/2)；12.75min(90.5％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.83-7.81(m,1H),7.80-7.53(m,3H),7.53-7.22(m,5H),5.6–5.8(m,1H),5.0-4.6(m,2H)；4.6-0.85(m,55H)。
实施例49
(S)–2–((S)–2–((4–羟基苯乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
实施例49A：2–(4–羟基苯基)乙醛
将4–(2–羟乙基)苯酚(4g,28.95mmol,1.00quiv)溶解于DMSO(32mL)中，然后滴加入TEA(8.8mL,2.20当量)。加入SO3.Py(10g,2.20当量)在DMSO(36mL)中的溶液，于环境温度将混合物搅拌下放置过夜。用250mL水中和反应混合物，并用100mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，用水(100mL)洗涤5次，然后用150mLNaCl(sat.)洗涤两次，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(1:10)以获得1g(25％)无色油形式的化合物49A。
实施例49B：(S)–2–((4–羟基苯乙基)(甲基)氨基)–3-甲基丁酸苄酯
以相同于化合物14C的方式，在THF(25mL)中，由胺1ZC(1.5g,5.82mmol,0.99当量)、醛49A(800mg,5.88mmol,1.00当量)、NaBH(OAc)3(2.7g,12.74mmol,2.17当量)和DIEA(4.23mL)合成化合物49B。用50mL水中和反应混合物，并用50mLAcOEt萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物经硅胶纯化(EtOAc/PE(1:10)以获得600mg(37％)白色固体形式的化合物49B。
实施例49C：(S)–2–((4–羟基苯乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
在Pd/C(250mg)存在下，将化合物49B(0.5g，1.46mmol，1.00当量)溶解于40mLMeOH中，于环境温度和大气压力下氢化35小时将反应介质过当滤，减压于下浓缩以获得0.4g白色固体形式的化合物49C。
实施例49：以相同于化合物3的方式，在DCM(3mL)中，由胺1Y(53.4mg,0.08mmol,2.00当量)、酸49C(70mg,0.28mmol,1.00当量)、DEPC(0.032mL,2.00当量)和DIEA(0.053mL,3.00当量)合成化合物49。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,AtlantisPrepOBDT3柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至45％ACN，然后经2分钟45％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得3mg(1％)白色固体形式的化合物49。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C49H74N6O7S,精确分子量890.5)m/z:891.5(MH+)和446.4(M.2H+/2,100％),6.69min(100％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.92-8.87(m,0.5H,NHCO,不完全的交换),8.70-8.63(m,0.4H,NHCO,不完全的交换),8.85-8.77(m,1H),7.59-7.51(m,1H),7.35-7.03(m,7H),6.82-6.71(m,2H),5.77-5.58(m,1H),5,81-5.70(m,1H),4.21-0.80(m,58H)。
实施例50
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((4–羟基苯乙基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例50：以相同于化合物4的方式，由化合物27(100mg,0.10mmol,1.00当量)制备化合物50。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–001SHIMADZU,AtlantisPrepOBDT3柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟20％至40％ACN，然后经2分钟40％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2545紫外检测器)纯化，以获得10.7mg(11％)白色固体形式的化合物50。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C47H73N5O9,精确分子量851.5)m/z:852.5(MH+)和426.8(M.2H+/2,100％),6.46min(91.7％,210nm)。
1HNMR:(400MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.34-7.15(m,5H)；7.15-7.04(se,2H),6.82-6.83(m,2H),4.83-4.70(m,1H),4.21-4.00(m,1H),3.90-3.80(m,1H),3.74-3.62(m,1H),3.57-2.86(m,20H),2.56-0.80(m,36H)。
实施例51
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((4–羟基苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3-苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例51A：(4–甲酰基苯基)羧酸叔丁酯
在4–DMAP(300mg,2.46mmol,0.1当量)和二碳酸二叔丁酯(5.35g,24mmol,1.0当量)存在下，将4–羟基苯甲醛(3.0g,24mmol)溶解于30mLDCM中，并于环境温度搅拌1小时。然后用200mL水稀释溶液，并用100mLDCM萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩以获得5g(92％)白色固体形式的化合物51A。
实施例51B：(S)–2–((4–((叔丁氧基羰基)氧基)苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸苄酯
在化合物1ZC(255mg,0.99mmol,1.0当量)、NaBH(OAc)3(420mg,2mmol,2.0当量)和DIEA(654μl)存在下，将化合物51A(220mg,0.99mmol)溶解于5mLTHF中，并于环境温度搅拌过夜。然后将反应介质用100mL水稀释，并用50mLEtOAc萃取3次。将有机相合并，经硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩。将残余物在硅胶柱上用EtOAc和PE的混合物(1:100)纯化以获得200mg(47％)白色固体形式的化合物51B。
实施例51C：(S)–2–((4–((叔丁氧基羰基)氧基)苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酸
依据制备化合物3F使用的方案，通过氢化化合物51B(200mg)制备化合物51C。
实施例51D：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3R,4S,5S)–4–((S)–2–((S)–2–((4–((叔丁氧基羰基)氧基)苄基)(甲基)氨基)–3–甲基丁酰胺基)–N,3–二甲基丁酰胺基)–3–甲氧基–5–甲基庚酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯
通过偶联化合物51C和胺3D制备化合物51D，依据制备化合物3使用的方案获得黄色油形式的所需产物，产率60％。
实施例51：在0.5mLTFA存在下，将化合物51D(80mg,0.08mmol)溶解于1mLDCM中，于环境温度搅拌2小时，然后减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–010,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x150mm；洗脱相：0.05％TFA缓冲的水/ACN；梯度经10分钟23％至40％ACN，然后经2分钟40％至95％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物51，产率24％(20mg)。
LC/MS/UV(ZorbaxSB–Aq,1.8μm,4.6x100mm；水中(0.05％TFA)2％MeOH持续1分钟，然后经13分钟从2％至95％MeOH)；ESI(C47H73N5O9,精确分子量851.54)m/z:874.5(MNa+),426.9(M.2H+/2)；12.48min(96％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.1-8.6(m,0.9H,NHCO不完全的交换)；7.29-7.27(m,2H),7.25-6.86(m,5H),6.84-6.83(m,2H),4.83-4.72(m,3H),4.26-0.82(m,58H)。
实施例52
(S)–N–((S)–1–(((S)–1–(((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)(甲基)氨基)–3–甲基–1–氧代丁烷–2–基)氨基)–3–甲基–1–氧代丁烷–2–基)–N,4–二甲基–2–(甲基氨基)戊酰胺三氟乙酸盐
实施例52A：(S)–2–((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)–4–甲基-戊酸
在惰性气氛中，将Boc–Leu–OH(4.7g,30mmol)溶解于150mLTHF中。于0℃分批加入氢化钠(3.2g,133mmol,4.0当量)。于低温将反应混合物搅拌1小时，之后加入碘甲烷(14.2g,100mmol,5.0当量)。于环境温度将反应搅拌下放置过夜，然后用100mL水中和，并用200mLEtOAc洗涤3次。用1NHCl将水相调节至pH3，然后用100mLEtOAc萃取3次。将有机相合并，用300mLNaCl–饱和水溶液洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压下浓缩，获得红色油形式的4.7g(94％)化合物52A。
实施例52B：((S)–2–((S)–2–((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)–N,4–二甲基戊酰胺基)–3–甲基丁酸苄酯
以相同于化合物1ZG的方式，在DMF(150mL)中，由胺1ZC(1.9g,7.4mmol,0.9当量)、酸52A(2.0g,8.1mmol)、HATU(4.7g,12mmol,1.5当量)和DIEA(9mL)制备化合物52B。在硅胶柱(EtOAc/EP＝1/10)纯化之后，获得白色固体形式的化合物52B(0.8g,24％)。
实施例52C：(S)–2–((S)–2–((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)–N,4–二甲基戊酰胺基)–3–甲基丁酸
依据制备化合物3F使用的方案，通过氢化化合物52B(300mg)制备化合物52C，产率83％。
实施例52D：((3R,4S,7S,10S,13S)–4–((S)–仲丁基)–7,10–二异丙基–3–(2–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–2–氧代乙基)–5,11,15–三甲基–6,9,12–三氧代–2–氧杂–5,8,11–三氮杂十六烷–13–基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
依据制备化合物1ZG使用的方案，通过偶联化合物52C和胺1Y制备化合物52D。获得黄色油形式的所需产物，产率94％。
实施例52：依据制备化合物1使用的方案，通过脱保护化合物52D制备化合物52。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–010,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm,0.05％TFA缓冲的洗脱相,经10分钟从水中20％至45％ACN，然后经2分钟从45％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物52，产率13％(14mg)。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.0mL/min,经过18分钟从水中(0.05％TFA)5％至95％ACN)；ESI(C48H79N7O7S,精确分子量897.58)m/z:898.5(MH+),449.9(M.2H+/2)；16.46min(88％,210nm)。
1HNMR(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.1-8.6(m,0.9H,NHCO不完全的交换)；7.81-7.78(m,1H),7.56-7.52(m,1H),7.32-7.27(m,5H),5.70(m,1H),4.80–0.86(m,68H)。
实施例53
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3S,6S,9S,12S,13R)–12–((S)–仲丁基)–3–异丁基–6,9–二异丙基–13–甲氧基–5,11–二甲基–4,7,10–三氧代–2,5,8,11–四氮杂十五烷–15–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例53A：(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((6S,9S,12S,15S,16R)–15–((S)–仲丁基)–6–异丁基–9,12–二异丙基–16–甲氧基–2,2,5,8,14–五甲基–4,7,10,13–四氧代–3–氧杂–5,8,11,14–四氮杂十八烷–18–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯。
依据制备化合物3使用的方案，通过偶联化合物52C和胺3D制备化合物53A。获得的所需产物为黄色油形式的非对映异构体混合物。其就这样用于以下步骤。
实施例53：依据制备化合物1使用的方案，通过脱保护化合物53A制备化合物53。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–010,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm,0.05％TFA缓冲的洗脱相,经10分钟从水中20％至45％ACN，然后经2分钟从45％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物53，产率12％(13mg)。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％ACN)；ESI(C47H80N6O9,精确分子量872.60)m/z:873.6(MH+),437.4(M.2H+/2)；6.97min(91％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.1-8.6(m,0.7H,NHCO不完全的交换)；7.70-7.10(m,5H),4.80–0.8(m,72H)。
实施例54
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3S,6S,9S,12S,13R)–12–((S)–仲丁基)–3–异丁基–6,9–二异丙基–13–甲氧基–5,11–二甲基–4,7,10–三氧代–2,5,8,11–四氮杂十五烷–15–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例54：依据制备化合物4使用的方案，通过皂化化合物53制备化合物54。将残余物通过制备型HPLC(Pre–HPLC–010,SunFirePrepC18OBD柱,5μm,19x100mm,0.05％TFA缓冲的洗脱相,经10分钟从水中20％至45％ACN，然后经2分钟从45％至100％ACN；254nm和220nm处的Waters2489紫外检测器)纯化。获得白色固体形式的化合物54，产率23％(22mg)。
LC/MS/UV(ZorbaxSB–Aq,1.8μm,4.6x100mm；水中(0.05％TFA)2％MeOH持续1分钟，然后经13分钟从2％至95％MeOH)；ESI(C46H78N6O9,精确分子量859.15)m/z:860(MH+),430.4(M.2H+/2)；12.19min(86％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.70-7.10(m,5H),4.80–0.8(m,69H)。
实施例55
(2S,3S)–N–((S)–1–(((S)–1–(((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)(甲基)氨基)–3–甲基–1–氧代丁烷–2–基)氨基)–3–甲基–1–氧代丁烷–2–基)–N,3–二甲基–2–(甲基氨基)戊酰胺三氟乙酸盐
实施例55：依据制备化合物52的步骤相同的顺序，将Boc–Leu–OH替换为Boc–Ile–OH来制备化合物55。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.0mL/min,经18分钟从水中(0.05％TFA)5％至95％MeOH)；ESI(C48H79N7O7S,精确分子量898.25)m/z:899.5(MH+),449.9(M.2H+/2)；16.34min(92％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.9-8.5(0.65H,NHCO不完全的交换),7.76(m,1H),7.6-7.4(m,1H),7.3-7.1(m,5H),5.7-5.5(m,1H),4.8-0.8(m,68H)。
实施例56
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3S,6S,9S,12S,13R)–3,12–二((S)–仲丁基)–6,9–二异丙基–13–甲氧基–5,11–二甲基–4,7,10–三氧代–2,5,8,11–四氮杂十五烷–15–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例56：依据制备化合物53的步骤相同的顺序，将Boc–Leu–OH替换为Boc–Ile–OH来制备化合物56。
LC/MS/UV(EclipsePlusC8柱,3.5μm,4.6x150mm；40℃；1.0mL/min,经18分钟从水中(0.05％TFA)5％至95％MeOH)；ESI(C47H80N6O9,精确分子量872.6)m/z:873.6(MH+),437.4(M.2H+/2)；16.18min(90％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.6-7.4(1.5H,NHCO不完全的交换),7.4-7.2(m,5H),4.8-0.8(m,72H)。
实施例57
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3S,6S,9S,12S,13R)–3,12–二((S)–仲丁基)–6,9–二异丙基–13–甲氧基–5,11–二甲基–4,7,10–三氧代–2,5,8,11–四氮杂十五烷–15–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例57：依据制备化合物54的步骤相同的顺序，将Boc–Leu–OH替换为Boc–Ile–OH来制备化合物57。
LC/MS/UV(ZorbaxSB–Aq,1.8μm,4.6x100mm；2％MeOH(0.05％TFA)持续2分钟，然后2％至95％持续12分钟)；ESI(C46H78N6O9,精确分子量858.58)m/z:859.6(MH+),430.4(M.2H+/2)；12.81min(91％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.6-7.4(0.8H,NHCO不完全的交换),7.4-7.2(m,5H),4.8-0.8(m,69H)。
实施例58
(S)–2–((S)–2–((S)–N,3–二甲基–2–(甲基氨基)丁酰胺基)–3–甲基丁酰胺基)–N–((3R,4S,5S)–3–甲氧基–1–((S)–2–((1R,2R)–1–甲氧基–2–甲基–3–氧代–3–(((S)–2–苯基–1–(噻唑–2–基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷–1–基)–5–甲基–1–氧代庚烷–4–基)–N,3–二甲基丁酰胺三氟乙酸盐
实施例58：依据制备化合物52的步骤相同的顺序，将Boc–Leu–OH替换为Boc–Val–OH来制备化合物58。
LC/MS/UV(AscentisExpressC18柱,2.7μm,4.6x100mm；40℃；1.5mL/min,经8分钟从水中(0.05％TFA)10％至95％MeOH)；ESI(C47H77N7O7S,精确分子量883.56)m/z:884.6(MH+),442.9(M.2H+/2)；6.84min(95％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.9-8.2(1H,NHCO不完全的交换),7.80(m,1H),7.6-7.4(m,1H),7.4-7.2(m,5H),5.7-5.6(m,1H),4.8-0.8(m,66H)。
实施例59
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3S,6S,9S,12S,13R)–12–((S)–仲丁基)–3,6,9–三异丙基–13–甲氧基–5,11–二甲基–4,7,10–三氧代–2,5,8,11–四氮杂十五烷–15–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸甲酯三氟乙酸盐
实施例59依据制备化合物53的步骤相同的顺序，将Boc–Leu–OH替换为Boc–Val–OH来制备化合物59。
LC/MS/UV(ZorbaxSB–Aq,1.8μm,4.6x100mm；30％MeOH(0.05％TFA)持续1分钟，然后30％至95％持续13分钟)；ESI(C46H78N6O9,精确分子量858.58)m/z:859.6(MH+),430.4(M.2H+/2)；12.18min(91％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)8.5-8.0(0.6H,NHCO不完全的交换),7.3-7.1(m,5H),4.8-0.8(m,70H)。
实施例60
(S)–2–((2R,3R)–3–((S)–1–((3S,6S,9S,12S,13R)–12–((S)–仲丁基)–3,6,9–三异丙基–13–甲氧基–5,11–二甲基–4,7,10–三氧代–2,5,8,11–四氮杂十五烷–15–酰基)吡咯烷–2–基)–3–甲氧基–2–甲基丙酰胺基)–3–苯基丙酸三氟乙酸盐
实施例60：依据制备化合物54的步骤相同的顺序，将Boc–Leu–OH替换为Boc–Val–OH来制备化合物60。
LC/MS/UV(ZorbaxSB–Aq,1.8μm,4.6x100mm；30％MeOH(0.05％TFA)持续1分钟，然后30％至95％持续13分钟)；ESI(C45H76N6O9,精确分子量844.57)m/z:845.6(MH+),423.4(M.2H+/2)；11.64min(86％,210nm)。
1HNMR:(300MHz,CD3OD,ppm):δ(存在旋转异构体)7.7-7.4(0.6H,NHCO不完全的交换),7.3-7.2(m,5H),4.8-0.8(m,67H)。
实施例61
(S)-2-((S)-2-((4-氨基苯乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((3R,4S,5S)-3-甲氧基-1-((S)-2-((1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-(((S)-2-苯基-1-(噻唑-2-基)乙基)氨基)丙基)吡咯烷-1-基)-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-N,3-二甲基丁酰胺
实施例61A：N-(4-氨基苯乙基)-N-甲基-L-缬氨酸二盐酸盐
将化合物11D(962mg,2.75mmol)溶解于10mL商业可得的HCl的2-丙醇溶液(5-6M)中，并于室温搅拌2小时。TLC分析表明起始原料被消耗完全。将溶剂减压下蒸发，用Et2O(2x10ml)研磨所得的黄色固体。将产物真空下干燥以提供黄色固体状的化合物61A(322mg,47％)。
实施例61：将羧酸61A(73mg,0.23mmol,1eq.)和胺1Y(150mg,0.23mmol,1eq.)溶解于干燥DMF(2ml)中。加入DIEA(158μl,0.90mmol,4eq.)和DECP(51μl,0.34mmol,1.5eq.)，于室温搅拌反应4小时。LC-MS分析表明起始原料被消耗完全。将溶剂减压下蒸发，将残余物在硅胶上(DCM/MeOH)通过闪式色谱法纯化以提供淡黄色固体状的化合物61(83mg,40％)。
1HNMR:(500MHz,DMSO-d6,ppm):δ(存在旋转异构体),8.86(d,0.5H,NHCO)；8.65(d,0.5H,NHCO),8.11-8.05(m,1H,NHCO),7.80(d,0.5H,噻唑),7.78(d,0.5H,噻唑),7.65(d,0.5H,噻唑),7.63(d,0.5H,噻唑),7.32–7.12(m,5H),6.83(d,J＝8.3Hz,2H),6.45(d,J＝8.3Hz,2H),5.56–5.49(m,0.5H),5.42–5.35(m,0.5H),4.78(s,2H,NH2),4.74–4.46(m,2H),4.01–0.66(m,57H)。
HPLC(XbridgeShieldC18,3.5μm,4.6x50mm；3.5ml/min,40℃,经2.25分钟从水中(0.1％TFA)0至95％MeCN，然后95％MeCN持续0.5分钟,Tr＝1.31min(96.5％,220nm)。
m/z(Q-TOFESI+)890.5558(2％,MH+,C49H76N7O6S要求890.5572),445.7834(100％,(MH2)2+,C49H77N7O6S要求445.7823)。
实施例62
((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-氨基苯乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-L-苯基丙氨酸甲酯
实施例62：以相同于化合物61的方式，使用羧酸61A(69mg,0.21mmol,1eq.)、胺3D(135mg,0.21mmol,1eq.)、DIEA(75μl,0.43mmol,2eq.)和DECP(49μl,0.32mmol,1.5eq.)制备化合物62。将粗产物在硅胶上(DCM/MeOH)经闪式色谱法纯化以提供淡黄色固体状的化合物62(82mg,45％)。
1HNMR:(500MHz,DMSO-d6,ppm):δ(存在旋转异构体),8.50(d,J＝8.3,0.5H,NHCO)；8.27(d,J＝8.0,0.5H,NHCO),8.15-8.04(m,1H,NHCO),7.27–7.13(m,5H),6.86–6.79(m,2H),6.48–6.42(m,2H),4.78(s,2H,NH2),4.74–4.44(m,3H),4.01–3.72(m,1.5H),3.66(s,1.5H,CO2Me),3.63(s,1.5H,CO2Me),3.57-0.65(m,55.5H)。
HPLC(XbridgeShieldC18,3.5μm,4.6x50mm；3.5ml/min,40℃,经2.25分钟从水中(0.1％TFA)0至95％MeCN，然后95％MeCN持续0.5分钟,Tr＝1.29min(95.3％,220nm)。
m/z(Q-TOFESI+)865.5800(2％,MH+,C48H77N6O8要求865.5797),433.2937(100％,(MH2)2+,C48H78N6O8要求433.2935)。
实施例63
((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-氨基苯乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-L-苯基丙氨酸2,2,2-三氟乙酸盐
实施例63：将化合物62(23mg,0.03mmol)溶解于水(1ml)和乙腈(1ml)的混合物中。加入哌啶(0.75ml)，于室温搅拌混合物5小时。TLC分析表明起始原料被消耗完全。将溶剂减压下蒸发，将残余物通过制备型HPLC(SunFire制备型柱C18OBD,5μm,19x150mm；流动相：0.1％TFA缓冲的水/MeCN；梯度经10分钟20％至40％MeCN,然后经2分钟40％至100％MeCN；254nm和220nm处的紫外检测器Waters2545)纯化。获得白色固体状的化合物63(14mg,66％)。
1HNMR:(500MHz,DMSO-d6,ppm):δ(存在旋转异构体),12.7(s(br),1H,CO2H),9.58(m(br),1H)；9.04–8.89(m,1H),8.41(d,0.6H,NHCO),8.15(d,0.4H,NHCO),7.27–7.13(m,5H),7.13–6.99(m(br),2H),6.90–6.64(s(br),2H),4.77–3.40(m,10H),3.34–2.75(m,20H),2.34–1.94(m,4H),1.90–0.7(m,25H)。
HPLC(XbridgeShieldC18,3.5μm,4.6x50mm；3.5ml/min,40℃,经2.25分钟从水中(0.1％TFA)0至95％MeCN，然后95％MeCN持续0.5分钟,Tr＝1.24min(100％,220nm)。
m/z(Q-TOFESI+)851.5641(6％,MH+,C47H75N6O8要求851.5641),426.2854(100％,(MH2)2+,C47H76N6O8要求426.2857)。
实施例64
(S)-2-((S)-2-((4-氨基苯乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基)-N,3-二甲基丁酰胺
以相同于化合物61的方式，使用羧酸61A(93mg,0.29mmol,1eq.)、胺2D(174mg,0.29mmol,1eq.)、DIEA(100μl,0.58mmol,2eq.)和DECP(66μl,0.43mmol,1.5eq.)制备化合物64。将粗产物在硅胶上(DCM/MeOH)通过闪式色谱法纯化以提供灰白色固体状的化合物64(51mg,21％)。
1HNMR:(500MHz,DMSO-d6,ppm):δ(存在旋转异构体),9.61(m(br),1H)；9.05–8.89(m,1H),7.93(d,0.6H,NHCO),7.64(d,0.4H,NHCO),7.36–6.98(m,7H),6.92–6.70(m(br),2H),5.45(s(br),1H),4.80–4.41(m,3H),4.06–3.44(m,4H),3.37–2.79(m,18H),2.45–2.21(m,3H),2.17–0.70(m,35H)。
HPLC(XbridgeShieldC18,3.5μm,4.6x50mm；3.5ml/min,40℃,经2.25分钟从水中(0.1％TFA)0至95％MeCN，然后95％MeCN持续0.5分钟,Tr＝1.20min(100％,220nm)。
m/z(Q-TOFESI+)837.5826(33％,MH+,C47H77N6O7要求837.5848),419.2956(100％,(MH2)2+,C47H76N6O8要求419.2961)。
II-本发明化合物的生物活性
本发明的衍生物具有强力的细胞毒性。根据以下的方法和技术确定它们对肿瘤细胞系的抗增殖活性。
方法：
细胞培养.将A549(非小细胞肺癌-ATCCCCL-185)和MDA-MB-231(乳腺癌–ATCCHTB-26)细胞分别培养于含有5％胎牛血清(FCS)的最低必需培养基Eagle(MEM)和含有10％FCS的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中。将MCF7(乳腺导管癌–ATCCHTB-22)和SN-12C(肾癌–ATCC)细胞维持在含有10％FCS的RPMI1640培养基中(对MCF7细胞没有酚红)。所有的培养基均补充有两性霉素(1.25μg/mL)和盘尼西林-链霉素(100U/100μg/mL)。标准条件下培养器中于37℃、5％CO2和95％大气湿度培养细胞。
对4种肿瘤细胞系的抗增殖活性。使用ATPlite增殖试验(PerkinElmer，VillebonsurYvette，法国)在4种细胞系的综合板上考察根据本发明的化合物的抗增殖活性。于第0天将细胞接种于96孔板上(对于A549是103细胞/孔，对于MCF7、MDA-MB-231和SN12C是2.103)，其浓度能够保证细胞在72小时药物处理期处于对数细胞生长期。24小时培养期之后，所有细胞用系列稀释的受试化合物处理(11μL10X在1％DMSO中的溶液–6孔/条件)。为了避免细胞粘附到枪头(tip)，在两个连续稀释度之间更换枪头。然后将细胞放置于37℃、5％CO2培养器中。在第4天，通过定量活细胞释放的ATP评估细胞存活率。与溶剂处理的细胞的数量相比分析活细胞的数量。采用通过GraphPad软件(GraphPadSoftwareInc.,CA,USA)提供的算法进行的曲线拟合分析(具有S形剂量响应的非线性回归模型，可变坡面系数)确定EC50值。
结果：
各种化合物：
依据上述的方法，测试根据本发明的各种化合物以确定它们对MDA–MB–231细胞系的抗增殖活性。测量的活性给出EC50<0.1μM的值。
选自根据本发明的化合物的数个以下的示例证明它们完全显著的抗增殖性质：
实施例3：EC50＝4.10x10-10M；实施例12：EC50＝5.80x10-10M；实施例13：EC50＝7.95x10-8M；实施例15：EC50＝1.70x10-10M；实施例27：EC50＝1.20x10-10M。
各种细胞系：
依据上述方法，在不同细胞系(A549、MDA–MB–231、MCF-7、SN12C)上测试化合物15。测量的活性给出EC50<0.1μM的值。
EC50(M) A549 MDA-MB-231 MCF-7 SN12C
化合物15 1.45x10-10 1.70x10-10 7.15x10-10 2.18x10-10
对比例：
在以下的对比实施例中研究了苯环上的取代(氨基/羟基相比于羧基)，结果显示具有改善的抗增殖活性的根据本发明的药物含有氨基或羟基取代基。

Claims (15)

1.一种下式(I)的化合物：
其中：
-R1是H或OH，
-R2是(C1–C6)烷基、COOH、COO–((C1–C6)烷基)或噻唑基，
-R3是H或(C1–C6)烷基，和
-R4是：
■具有1至8个碳原子的、直链或支链的、饱和或不饱和烃链，例如(C1–C8)烷基，所述链被选自OH和NR5R6中的一个或多个基团取代，其中R5和R6彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基，
■-(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3(CH2CH2X4)a4(CH2CH2X5)a5R7基团，其中X1、X2、X3、X4和X5彼此独立地代表O或NR8，a2、a3、a4和a5彼此独立地代表0或1，R7代表H且R8代表H或(C1-C6)烷基，
■被选自OH和NR9R10基团中一个或多个基团取代的芳基–(C1–C8)烷基，其中R9和R10彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基，或者
■任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13基团中一个或多个基团取代的杂环–(C1–C8)烷基，其中R12和R13彼此独立地代表H或(C1–C6)烷基，
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：
-R1＝OH且R2代表(C1-C6)烷基，或者
-R1＝H且R2代表COOH、COO–(C1–C6)烷基或噻唑基团。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R1代表H且R2代表COOH或COOMe。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其特征在于，R3代表H或甲基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其特征在于，R4代表如下基团：
-被选自OH和NR5R6的基团取代的(C1–C6)烷基，
-–(CH2CH2X1)(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3R7，
-被选自OH和NR9R10的一个基团取代的芳基-(C1-C2)烷基，或者
-被选自NR12R13、OH和(C1–C6)烷基的一个基团取代的杂环-(C1-C2)烷基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其特征在于，R4代表在芳基部分被一个NR9R10基团取代的芳基–(C1–C2)烷基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其特征在于，所述芳基是苯基，且所述杂环是具有5或6个环原子包含1或2个氮原子的、饱和、不饱和或芳香的环，特别地选自吡啶、哌啶和咪唑。
8.根据权利要求1所述的化合物，其选自：
和其药学上可接受的盐，例如与三氟乙酸形成的盐。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其用作药品。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其用作旨在治疗癌症或良性增生性疾病的药品。
11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的式(I)化合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其进一步包含另一种活性成分，所述另一种活性成分有利地选自抗癌剂，所述抗癌剂特别地包含细胞毒性抗癌剂例如诺维本、长春氟宁、紫杉醇、泰索帝、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、多柔比星、喜树碱、吉西他滨、依托泊苷、顺铂或卡莫司汀，和激素抗癌剂如他莫昔芬或甲羟孕酮。
13.一种制备根据权利要求1至8中任一项所述的式(I)化合物的方法，其包括下式(VI)化合物和下式(VII)化合物之间的缩合反应：
其中R1和R2如权利要求1中所定义，
其中R3如权利要求1中所定义，R4a代表任选为受保护形式的如权利要求1中所定义的R4基团，且X是OH或Cl。
14.一种制备根据权利要求1至8中任一项所述的式(I)化合物的方法，其包括下式(VIII)化合物和下式(X)化合物之间的取代反应：
其中R1、R2a、dR3如权利要求1中所定义，
R4a–Y(X)
其中R4a代表任选为受保护形式的如权利要求1所定义的R4基团，且Y是离去基如Cl、Br、I、OSO2CH3、OSO2CF3或O–甲苯磺酰基。
15.一种制备根据权利要求1至8中任一项所述的式(I)化合物的方法，其中R4代表–CH2R4b基团且R4b代表：
■OH、NR5R6、被选自OH和NR5R6中的一个或多个基团取代的、含有1至7个碳原子的、直链或支链、饱和或不饱和的烃基团，
■–CH2X1(CH2CH2X2)a2(CH2CH2X3)a3(CH2CH2X4)a4(CH2CH2X5)a5R7，
■被选自OH和NR9R10中的一个或多个基团取代的芳基或芳基–(C1–C7)烷基，或者
■任选被选自(C1–C6)烷基、OH和NR12R13中的一个或多个基团取代的杂环或芳基–(C1–C7)烷基，
所述方法包括下式(VIII)化合物和下式(XI)化合物之间的还原胺化反应：
其中R1、R2和R3如权利要求1中所定义，
R4b–CHO(XI)
其中R4b如前述所定义。
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