KR20160003735A - 돌라스타틴 10 및 오리스타틴 유도체 - Google Patents

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KR20160003735A
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equiv
methyl
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미셀 쁘레
이앙 리라뜨
마리 라모뜨
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피에르 파브르 메디카먼트
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Abstract

본 발명은 다음 식 (I) 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물:
Figure pct00156
(I)
식 중:
R1은 H 또는 OH,
R2는 (C1-C6)알킬, COOH, COO-((C1-C6)알킬) 또는 티아졸일기,
R3은 H 또는 (C1-C6)알킬기, 및
R4는: - OH 및 NR9R10기에서 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환되는 아릴-(C1-C8)알킬기, 또는 - 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13기에서 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환되는 헤테로사이클-(C1-C8)알킬기, 및 이의 용도 특히 암 치료 용도, 이를 포함하는 약학조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

돌라스타틴 10 및 오리스타틴 유도체{Derivatives of dolastatin 10 and auristatins}
본 발명은 새로운 돌라스타틴 10 및 오리스타틴 유도체, 이들의 제조방법, 이들을 포함하는 약학조성물 및 특히 암 치료 의약품으로서의 이들의 용도에 관한 것이다.
돌라스타틴 10 (D10)은 해양 연체동물 (Dolabella auricularia)에서 단리된 세포독성 펩티드 유도체로서 절대 구조가 결정되고 생성물의 전 합성 후 확인되었다 (Pettit G. R. J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 6883; Pettit G. R. J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 7581; Pettit, G. R. Heterocycles 1989, 28, 553; Pettit, G. R. J. Am. Chem. Soc. 1989,111, 5015; Pettit G. R. J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 6692). D10은 돌라발린 (Dov), 발린 (Val), 돌라이소루신 (Dil), 돌라프로인 (Dap) 및 돌라페닌 (Doe)이라 칭하는 5개의 단위로 형성된다. 이의 성분 아미노산 특성을 변경시켜 본 화합물의 소정 개수의 유사체가 합성되었다 (Pettit G. R. J. Med. Chem. 1990, 33, 3133; Miyazaki K. Peptide Chemistry 1993, 31, 85; Miyazaki K. Chem. Pham. Bull. 1995, 43, 1706). 또한 C-말단부 (우측) 변경을 통해서 오리스타틴 E 또는 F를 포함한 여러 유도체를 제조하였다 (Pettit G. R. Anticancer Drug Design, 1998, 13, 243; Pettit G. R. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1998, 2961).
Figure pct00001
돌라스타틴 10
Figure pct00002
오리스타틴 E
Figure pct00003
오리스타틴 F
본 발명은 돌라스타틴 10 및 오리스타틴 E 및 F 유도체의 N-말단부 (좌측) 변경에 중점을 두고 있다. 이 위치에서 변경된 문헌의 몇몇 실시예에 의하면 활성이 상실된다 (Miyazaki K. Chem. Pham. Bull. 1995, 43, 1706). 본 발명에 기재된 화합물은 문헌에서 개시된 요소들과 관련하여 본래 화학적 구조 및 완전히 예기치 못한 놀라운 생물학적 특성에 있어서 선행 기술과는 차별된다. 이러한 놀라운 활성으로 이들 화합물은 암 치료 용도로서 적합하다.
또한, 이들 화합물은 세포독성제로서 활성이고 모 화합물들보다 더욱 용해성이므로 유익하다.
따라서 본 발명은 다음 식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물이다:
Figure pct00004
(I)
식 중:
- R1 은 H 또는 OH,
- R2는 기 (group): (C1-C6)알킬 (예를들면 메틸), COOH, COO-((C1-C6)알킬) (예컨대 COOMe) 또는 티아졸일 (예컨대 티아졸-2-일),
- R3은 H 또는 (C1-C6)알킬기 (예컨대 메틸), 특히 (C1-C6)알킬기, 및
- R4는:
- 아릴-(C1-C8)알킬기이고, 이는 임의선택적으로 (및 바람직하게) 아릴, OH 및 NR9R10 기에서 선택되는 하나 이상의 기로 치환되고 (특히 하나, 바람직하게 아릴 부분에), R9, R10 및 R11은 각각 서로 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬기 (예컨대 메틸)를 나타내고, 또는
- 헤테로사이클-(C1-C8)알킬기이고, 이는 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13 기에서 선택되는 하나 이상의 기로 (특히 하나, 바람직하게 헤테로사이클 부분에) 치환되고, R12 및 R13은 각각 서로 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬기 (예컨대 메틸)를 나타낸다.
라디칼 R2 내지 R4, 및 특히 R4는, 키랄 기일 수 있고 서로 다른 입체이성질체 형태일 수 있고 임의선택적으로 입체이성질체의 혼합물 형태일 수 있다.
≪입체이성질체≫란, 본 발명에서 기하이성질체 또는 광학 이성질체를 의미한다.
기하이성질체는 이중결합에 치환체들의 다른 위치로 인한 것이고 따라서 Z 또는 E 배치를 가질 수 있다.
광학 이성질체는 특히 4개의 다른 치환체를 가지는 탄소원자에서 치환체의 다른 공간 위치로 기인한다. 이러한 탄소원자는 키랄 또는 비대칭 중심을 형성한다. 광학 이성질체는 부분입체이성질체 및 거울상이성질체를 포함한다. 서로 거울상이지만 겹치지 않는 광학이성질체를 ≪거울상이성질체≫라고 칭한다. 겹치지 않고 서로 거울상이 아닌 광학이성질체를 ≪부분입체이성질체≫라고 부른다.
반대 키랄성인 두 종의 개별 거울상이성질체 형태를 동량 함유한 혼합물을 ≪라세미 혼합물≫로 칭한다.
본 발명에서 ≪약학적으로 허용되는≫ 이란 약학조성물 제조에 사용될 수 있다는 것이고, 일반적으로 안전하고, 비-독성이고 생물학적으로 또는 달리 불리하지 않고, 인체 약학적 용도뿐 아니라 수의학적으로 허용되는 것을 의미한다.
화합물의 ≪약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물≫이란, 본원에서 정의된 약학적으로 허용되고 모 화합물의 바람직한 약리 활성을 가지는 염, 수화물 또는 용매화물을 의미한다.
약학적으로 허용되는 염은 특히:
(1) 약학적으로 허용되는 무기산 예컨대 염산, 브롬화수소산, 인산, 황산 및 유사한 산; 또는 약학적으로 허용되는 유기산 예컨대 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 숙신산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 스테아르산, 락트산 및 유사한 산으로 형성되는 약학적으로 허용되는 산 부가염; 및
(2) 모 화합물에 존재하는산 양성자가 금속이온 예를들면 알칼리금속이온, 알칼리토금속이온 또는 알루미늄이온에 의해 치환되거나; 또는 약학적으로 허용되는 유기 염기 예컨대 리신, 아르기닌 및 유사한 것; 또는 약학적으로 허용되는 무기 염기 예컨대 수산화나트륨, 칼리, 수산화칼슘 및 유사한 것으로 배위되어 형성되는 약학적으로 허용되는 염기 부가염을 포함한다.
이들 염은 염기 또는 산 기능을 가지는 화합물, 및 상응하는 산 또는 염기로부터 통상의 화학적 방법으로 제조될 수 있다.
본 발명의 식 (I) 화합물은 바람직하게 염 형태이고, 특히 약학적으로 허용되는 산 부가염 형태이다.
바람직하게, 본 발명에 의한 식 (I)의 화합물은 약학적으로 허용되는 산부가염 형태이고, 산은 예를들면 가능한 트리플루오로아세트산, 아세트산 또는 염산이고, 특히 트리플루오로아세트산이다.
용매화물은 용매 존재로 인하여 본 발명의 화합물 제조 마지막 단계에서 수득되는 통상의 용매화물을 포함하고, 용매는 예를들면 가능한 에탄올이다.
≪알킬≫이란, 본 발명에서 직쇄 또는 분지형, 포화 탄화수소 사슬을 의미한다. 예를들면, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸 또는 헥실기가 언급될 수 있다.
≪(Cx-Cy)알킬≫이란 본 발명에서 예컨대 상기 정의된 x 내지 y개의 탄소원자를 가지는 알킬 사슬을 의미한다. 따라서, (C1-C6)알킬기는 1 내지 6개의 탄소원자를 가지는 알킬 사슬이다.
≪아릴≫이란 본 발명에서 바람직하게 6 내지 10개의 탄소원자를 가지고 하나 또는 둘의 융합 고리를 포함할 수 있는 방향족 탄화수소기를 의미한다. 예를들면 페닐 또는 나프틸이 언급된다. 바람직하게는 페닐이다.
≪헤테로사이클≫ 이란 본 발명에서 1 또는 2 융합 고리를 가지고 여기에 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 4, 더욱 바람직하게는 1 또는 2개의 탄소원자가 각각 산소, 질소 및 황에서 선택되는 헤테로원자에 의해 치환되는 포화, 불포화 또는 방향족 탄화수소기를 의미한다. 바람직하게는 헤테로사이클은 5 내지 10개의 탄소원자 및 헤테로원자를 포함한다. 예를들면, 푸란, 피롤, 티오펜, 티아졸, 이소티아졸, 옥사디아졸, 이미다졸, 옥사졸, 이속사졸, 피리딘, 피리미딘, 피페라진, 피페리딘, 퀴나졸린, 퀴놀린, 퀴녹살린, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌린, 인돌리진, 벤조티아졸, 벤조티오펜, 벤조피란, 벤족사졸, 벤조[1,3]디옥솔, 벤조이속사졸, 벤지미다졸, 크로만, 크로멘, 디히드로벤조푸란, 디히드로벤조티오펜, 디히드로이속사졸, 이소퀴놀린, 디히드로벤조[1,4]디옥신, 이미다조[1,2-a]피리딘, 푸로[2,3-c]피리딘, 2,3-디히드로-1H-인덴, [1,3]디옥솔로[4,5-c]피리딘, 피롤로[1,2-c]피리미딘, 피롤로[1,2-a]피리미딘, 테트라히드로나프탈렌 및 벤조[b][1,4]옥사진이 언급될 수 있다.
본 발명에서, 헤테로사이클은 더욱 특히 1 또는 2 질소 원자를 포함하는5 내지 6 원의 포화, 불포화 또는 방향족 고리이다. 예를들면, 피롤, 이미다졸, 피리딘, 피리미딘, 피페라진 및 피페리딘 고리가 언급된다. 바람직하게 피리딘, 피페리딘, 또는 이미다졸이다.
≪아릴-(C1-C8)알킬≫이란 본 발명에서 예컨대 상기 정의되고 1 내지 8, 특히 1 내지 6, 바람직하게는 1 내지 4, 바람직하게 1 또는 2개의 탄소원자를 포함하는 알킬기를 통해 분자의 나머지에 연결되는 예컨대 상기 정의된 아릴기를 의미한다. 아릴 모이어티는 바람직하게 페닐 모이어티이다. (C1-C8)알킬 모이어티는 바람직하게는 (C1-C4)알킬, 바람직하게는 (C1-C2)알킬이다. 특히, 아릴-(C1-C8)알킬기는 벤질 또는 페네틸기이다.
≪헤테로사이클-(C1-C8)알킬≫이란 본 발명에서 알킬기 예컨대 상기 정의되고 1 내지 8, 특히 1 내지 6, 바람직하게는 1 내지 4 및 바람직하게 1 또는 2개의 탄소원자를 통해 분자의 나머지에 연결되는 예컨대 상기 정의된 헤테로사이클기를 의미한다. (C1-C8)알킬 모이어티는 바람직하게는 (C1-C4)알킬, 바람직하게는 (C1-C2)알킬이다. 헤테로사이클은 더욱 특히1 또는 2 질소 원자를 포함하는5 내지 6 원의 포화, 불포화 또는 방향족 고리, 예컨대 피롤, 이미다졸, 피리딘, 피리미딘, 피페라진 또는 피페리딘이고, 바람직하게 피리딘, 피페리딘, 또는 이미다졸이다.
≪불포화≫란 불포화, 즉 이중결합 또는 삼중결합을 가지는 화합물을 말한다.
본 발명의 화합물에서, 특히 주목되는 하나의 화합물 군은 R1은 OH 및 R2는 (C1-C6)알킬기, 예컨대 메틸을 나타내는 식 (I) 화합물이다.
특히 주목되는 또 다른 하나의 화합물 군은 R1은 수소 및 R2는 티아졸 (특히 티아졸-2-일기)인 식 (I) 화합물이다.
특히 주목되는 또 다른 하나의 화합물 군은 R1 은 수소 및 R2 는 COO(C1-C6)알킬기 예컨대 COOMe인 식 (I) 화합물이다.
특히 주목되는 또 다른 하나의 화합물 군은 R1은 수소 및 R2는 COOH 기인 식 (I) 화합물에 상당한다.
따라서 본 발명의 화합물은 바람직하게는 식 (I) 화합물이고:
- R1=OH 및 R2=Me (메틸), 또는
- R1=H 및 R2=COOH, COOMe 또는 티아졸-2-일이다.
특히 주목되는 또 다른 하나의 화합물 군은 R4 는 NR12R13 및OH에서 선택되는 기에 의해 치환되거나 치환되지 않는 헤테로사이클-(C1-C8)알킬인 식 (I) 화합물이다.
유사하게, 본 발명은 특히 R4 는 NR9R10 및 OH에서 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환되는 아릴-(C1-C8)알킬인 식 (I) 화합물에 관한 것이다.
본 발명의 하나의 특정 실시태양에 따르면, R2 는 더욱 특히 메틸, COOH, COOMe 또는 티아졸-2-일기이다.
바람직하게, R1 은 H 및 R2 는 COOH 또는 COO(C1-C6)알킬, 특히 COOH 또는 COOMe이다.
제1 바람직한 실시태양에 의하면, R1 은 H 및 R2 는 COOH이다.
제2 바람직한 실시태양에 의하면, R1 은 H 및 R2 는 COOMe이다.
R3 은 특히 H 또는 메틸기, 바람직하게는 메틸기를 나타낸다.
특정 실시태양에 의하면, R4는 다음을 나타낸다:
- 아릴-(C1-C8)알킬기이고, 이는 OH 및 NR9R10기에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나, 바람직하게 아릴 부분에)로 치환되고, 또는
- 헤테로사이클-(C1-C8)알킬기이고, 이는 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13기, 바람직하게는 OH 및 NR12R13기에서 선택되는 하나 이상의 기로 (특히 하나의 기로, 바람직하게 헤테로사이클 부분에) 치환된다.
본 발명의 또 다른 특정 실시태양에 의하면, R4는 다음 기를 나타낸다:
- OH 및 NR9R10기에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나, 바람직하게 아릴 부분에)로 치환되는 아릴-(C1-C4)알킬기, 또는
- 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13기, 바람직하게 OH 및 NR12R13에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나의 기로 치환, 바람직하게 헤테로사이클 부분에)로 치환되는 헤테로사이클-(C1-C4)알킬기.
본 발명의 또 다른 특정 실시태양에 의하면, R4 는 다음 기를 나타낸다:
- OH 및 NR9R10에서 선택되는 기로 (바람직하게 아릴 모이어티에) 치환되는 아릴-(C1-C2)알킬, 또는
- 임의선택적으로 NR12R13, OH 및 (C1-C6)알킬기, 바람직하게 OH 및 NR12R13에서 선택되는 기 (특히 하나의 기로 치환, 바람직하게 헤테로사이클 모이어티에)로 치환되는 헤테로사이클-(C1-C2)알킬.
R4에 대한 상기 특정 실시태양에서, 아릴 기는 바람직하게는 페닐 기이다.
R4에 대한 상기 특정 실시태양에서, 헤테로사이클은 바람직하게는1 또는 2개의 질소 원자를 가지는5 또는 6 원의 포화, 불포화 또는 방향족 고리이다. 예를들면, 피롤, 이미다졸, 피리딘, 피리미딘, 피페라진, 또는 피페리딘 고리가 언급된다. 바람직하게 피리딘, 피페리딘 또는 이미다졸이다.
R4에 대한 상기 특정 실시태양에서, 아릴 모이어티 및 헤테로사이클 모이어티는 바람직하게는 각각 하나의 기로 치환된다.
바람직하게는, R4 는 다음 기를 나타낸다:
- OH 및 NR9R10에서 선택되는 기로 (바람직하게 페닐 모이어티에) 치환되는 페닐-(C1-C2)알킬, 또는
- 임의선택적으로 OH 및 NR12R13에서 선택되는 기로 (바람직하게 헤테로사이클 모이어티에) 치환되는 헤테로사이클-(C1-C2)알킬, 상기 헤테로사이클은 특히 피리딘, 피페리딘 및 이미다졸에서 선택되는 1 또는 2개의 질소 원자를 포함하는 5 또는 6 원의 포화, 불포화 또는 방향족 고리이다.
특히, R4는 다음 기를 나타낸다:
- OH 및 NR9R10에서 선택되는 하나의 기로 (바람직하게 페닐 모이어티에) 치환되는 페닐-(C1-C2)알킬, 또는
- OH 및 NR12R13에서 선택되는 하나의 기로 (바람직하게 헤테로사이클 모이어티에) 치환되는 헤테로사이클-(C1-C2)알킬, 상기 헤테로사이클은 특히 피리딘, 피페리딘 및 이미다졸에서 선택되는 1 또는 2개의 질소 원자를 포함하는 5 또는 6 원의 포화, 불포화 또는 방향족 고리이다.
R4 는 특히 다음에서 선택된다:
-
Figure pct00005
,
Figure pct00006
,
Figure pct00007
,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
,
Figure pct00010
-
Figure pct00011
,
Figure pct00012
,
Figure pct00013
, 및
Figure pct00014
.
본 발명의 또 다른 특정 실시태양에 의하면 R4는 OH 및 NR9R10에서 선택되는, 특히 OH 및 NR9R10에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나, 바람직하게 아릴 모이어티에)로 치환되는 아릴-(C1-C8)알킬기이다. 바람직하게는, OH 및 NR9R10에서 선택되는, 특히 OH 및 NR9R10에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나, 바람직하게 아릴 모이어티에)로 치환되는 아릴-(C1-C2)알킬기이다. 아릴 기는 바람직하게 페닐 기이다.
본 실시태양에 의하면, R3 은바람직하게는 메틸 기이다.
R4 는 바람직하게는 OH 및 NR9R10에서 선택되는, 특히 NR9R10인 하나의 기에 의해 치환되는 아릴-(C1-C8)알킬기, 특히 아릴-(C1-C4)알킬기, 예컨대 아릴-(C1-C2)알킬기이다.
R4 는 바람직하게는 OH 및 NR9R10에서 선택되는, 특히 NR9R10인 하나의 기에 의해 아릴 모이어티에 치환되는 아릴-(C1-C8)알킬기, 특히 아릴-(C1-C4)알킬기, 예컨대 아릴-(C1-C2)알킬기이다.
아릴 기는 바람직하게는 페닐 기이다.
따라서 R4 는 특히 OH 및 NR9R10에서 선택되는, 특히 NR9R10인 하나의 기에 의해 (바람직하게 페닐 모이어티에) 치환되는 페닐-(C1-C2)알킬이다.
R4 는 따라서 다음 식을 가진다:
Figure pct00015
식 중 X0 는 OH 또는 NR9R10, 특히 NR9R10이고, m은 1 내지 8, 특히 1 내지 4을 포함하는 정수, 바람직하게는 1 또는 2를 나타낸다.
바람직한 실시태양에 의하면, R4는 다음 식을 가진다:
Figure pct00016
식 중 X0 및 m은 상기에서 정의된 바와 같고, 특히 X0=NR9R10 및 m=1 또는 2이다.
바람직하게는, 식 (I) 화합물은 하기 실시예들에서 기재된 화합물 2-5, 8-15, 19-20, 23-25, 27-29, 45-51 및 61-64에서 선택된다.
본 발명은 예컨대 상기 정의된 식 (I) 화합물의 의약품으로서, 특히 암 또는 양성 증식성 질환 치료 또는 예방 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 예컨대 상기 정의된 식 (I) 화합물의, 특히 암 또는 양성 증식성 질환 치료 또는 예방 의약품 제조 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 예컨대 상기 정의된 식 (I) 화합물의 유효 함량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 암 또는 양성 증식성 질환 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.
치료 또는 예방되는 암은 더욱 특히 폐암, 췌장암, 피부암, 두부암, 경부암, 자궁암, 난소암, 항문암, 위암, 대장암, 유방암, 식도암, 소장암, 갑상선암, 림프계암, 전립선암, 신장암, 또는 방광암, 또는 급성 또는 만성 백혈병, 또는 이들 둘 이상의 암의 조합이다.
양성 증식성 질환이란 전이를 일으키지 않거나 또는 암으로 아직 발전하지 않은 증식성 질환을 의미한다 (전암적 종양).
또한 본 발명은 예컨대 상기 정의된 식 (I) 화합물 및 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학조성물에 관한 것이다.
활성 성분은 투여 단위 형태, 통상의 약학적 담체와 함께 혼합물로 동물 또는 인체에 투여된다. 적합한 투여 단위 형태는 경구 경로 형태, 설하 또는 구강점막 투여 형태, 비경구 경로 (피하, 피내, 근내 또는 정맥) 투여 형태, 국소 투여 (비강내 및 안구내 투여를 포함한 피부 및 점막 상) 형태 및 직장내 투여 형태를 포함한다.
이러한 조성물은 고체, 액체, 유화액, 로션 또는 크림 형태일 수 있다.
고체 조성물은, 경구 투여용으로, 정제, 환제, 분말 (경성 또는 연성 젤라틴 캡슐) 또는 과립으로 제조될 수 있다. 이들 조성물에서, 본 발명의 활성 성분은 하나 이상의 불활성 희석제 예컨대 전분, 셀룰로오스, 수크로오스, 락토오스 또는 실리카와 아르곤 흐름에서 혼합된다. 이들 조성물은 또한 희석제 외의 물질들, 예를들면 하나 이상의 윤활제 예컨대 스테아르산 마그네슘 또는 활석, 착색제, 코팅제 (코팅된 정제) 또는 바니쉬를 포함한다.
액체 조성물은 경구 투여용으로, 약학적으로 허용되는 불활성 희석제 예컨대 물, 에탄올, 글리세롤, 식물성 오일 또는 파라핀유를 포함하는 용액, 현탁액, 유화액, 시럽 및 엘리시르로 제조될 수 있다. 이들 조성물은 희석제 외의 물질들; 예를들면 습윤제, 감미제, 증점제, 향미제 또는 안정제를 포함한다.
비경구 투여용 살균 조성물은 바람직하게 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액 또는 유화액일 수 있다. 용매 또는 비히클로서, 물, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 식물성 오일, 특히 올리브유, 주사성 유기에스테르 예를들면 에틸 올리에이트 또는 기타 적합한 유기 용매를 사용할 수 있다. 이들 조성물은 또한 보조제, 특히 습윤제, 등장액, 유화제, 분산제 및 안정화제를 포함한다. 살균화는 다양한 방식으로 진행될 수 있고, 예를들면 살균 여과, 살균제를 조성물에 투입하거나, 방사선 또는 가열하여 수행될 수 있다. 또한 이들은 고체 살균 조성물 형태로 제조되고 살균수 또는 임의의 기타 주사성 살균 매질을 이용하여 필요할 때 용해될 수 있다.
직장 투여용 조성물은 좌약 또는 직장 투여 캡슐이고, 활성 성분 외에도, 부형제 예컨대 코코아 버터, 반-합성 글리세리드 또는 폴리에틸렌글리콜을 포함한다.
국소 투여용 조성물은 예를들면 크림, 로션, 점안액, 양치액, 점비액 또는 분무제일 수 있다.
투여량은 원하는 효과, 치료 기간 및 적용되는 투여 경로에 따라 다르다. 일반적으로 의사는 연령, 체중 및 환자의 기타 모든 인자와 관련하여 적합한 투여량을 결정할 것이다.
또 다른 활성 성분이 본 발명에 의한 약학조성물에 포함될 수 있다. 특히, 이는 항암제, 및 특히 세포독성 항암제 예컨대 나벨빈, 빈플루닌, 탁솔, 탁소텔, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 독소라비신, 캄토테신, 젬시타빈, 에토포시드, cis-플라틴 또는 카르무스틴 (또는 BCNU로 칭함); 또는 호르몬 항암제 예컨대 타목시펜 또는 메드록시프로게스테론일 수 있다.
방사선 치료 (X-선 또는 감마선) 또한 본 발명 화합물 투여와 병용될 수 있다. 외부 소스를 이용하거나 또는 극미의 내부 방사성 소스를 주입하여 이러한 방사선이 제공될 수 있다.
또한 본 발명은 다음 합성 경로에 기재된 총괄적 방법을 이용하는 본 발명에 의한 식 (I) 화합물 제조방법에 관한 것이고, 필요하다면 문헌에 기재되어 있거나 또는 당업자에게 잘 알려져 있거나, 또는 이의 실험 일부의 실시예로 기재되는임의선택적으로 임의의 표준 조작에 의해 보충된다.
Figure pct00017
경로 1
경로 1은 식 (I) 화합물 제조에 적용되는 제1 총괄적 방법을 도시한 것이다. 상기 일반 식들에서, R1, R2, 및 R3은 상기 정의된 바와 같고, R4a는 임의선택적으로 보호 형태의 상기 정의된 R4 기를 나타내고 G는 보호기이다.
제1 단계는 보호기 G에 의해 아민 관능기가 보호되는 화합물 (II)와 화합물 (III)의 축합으로 이루어진다. X는 이탈기 예컨대 염소를 나타낸다. 이러한 경우 제1 단계는 산염화물 및 아민과의 반응으로 이루어진다. 본 반응은 당업자에게 잘 알려진 방법 및 기술로 수행될 수 있다. 하나의 특히 주목되는 방법에서, 두 종의 실체는 용매 예컨대 THF, 디클로로메탄, DMF, DMSO 중, 유기 또는 무기 염기 예를들면 Et3N, iPr2NEt, 피리딘, NaH, Cs2CO3, K2CO3 의 존재에서 특히 -20℃ 내지 100℃에서 반응된다. X는 또한 히드록실 (OH)일 수 있다. 이러한 경우, 제1 단계는 카르복실산 (II) 및 아민 (III) 간의 축합 반응이다. 본 반응은 다음 방법 및 당업자에게 잘 알려진 기술로 수행될 수 있다. 하나의 특히 주목되는 방법에서, 이들 두 종의 실체는 극성 비양성자성 용매 예컨대 디클로로메탄 또는 DMF 중 커플링제 예컨대 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸-카르보디이미드 (EDC), 3-히드록시-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온, 삼차 아민 예컨대 디이소프로필에틸아민의 존재에서, -15℃ 내지 40℃에서 반응된다. 또 다른 특히 주목되는 방법에서, 이들 두 종의 실체는 극성 비양성자성 용매 예컨대 디클로로메탄 또는 DMF 중 디에틸 포스포로시아니데이트 (DEPC), 삼차 아민 예컨대 트리에틸아민의 존재에서, -15℃ 내지 40℃에서 반응된다. 또 다른 특히 주목되는 방법에서 이들 두 종의 실체는, 극성 비양성자성 용매 예컨대 디클로로메탄 또는 DMF 중 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸-우로늄헥사플루오로포스페이트 (HATU), 삼차 아민 예컨대 디이소프로필에틸아민의 존재에서, -15℃ 내지 100℃에서 반응된다.
당업자에게 잘 알려진 기술로 중간체 탈보호 후 (≪Protective Groups in Organic Synthesis≫, T.W. Greene, John Wiley ＆ Sons, 2006 and ≪Protecting Groups≫, P.J. Kocienski, Thieme Verlag, 1994), 상기 방법 및 기술에 따라 화합물 (IV)은 화합물 (V)과 축합되어 탈보호 단계 후 화합물 (VI)이 얻어진다. 이어 본 화합물을 중간체 (VII)와 축합 및 선택적 탈보호 후, 식 (I) 화합물이 형성된다. 화합물 (VI)은 또한 R’3이 R3 전구체, 특히 보호기에 의해 보호된 R3 기인 화합물 (VII’)과 커플링 된다. 커플링에 이어 R3에 이르는 R’3기 탈보호는 상기와 동일한 절차를 따라 수행될 수 있다.
Figure pct00018
경로 2
경로 2는 식 (I) 화합물을 제조하기 위하여 적용되는 제2 총괄적 방법을 도시한 것이다. 상기 일반 식들에서 R1, R2, 및 R3은 상기 정의된 바와 같고, R4a 는 임의선택적으로 보호 형태의 상기 정의된 R4 기를 나타내고, R4b는 R4기의 전구체이고 G는 보호기이다.
제1 단계에서, 아민 관능기가 보호기 G에 의해 보호되는 화합물 (IX)는 화합물 (VI)과 축합된다. X는 이탈기 예를들면 염소를 나타낸다. 이러한 경우, 제1 단계는 산염화물 및 아민과의 반응으로 이루어진다. 본 반응은 당업자에게 알려진 방법 및 기술로 수행된다. 하나의 특히 주목되는 방법에서 두 종의 실체는 용매 예컨대 THF, 디클로로메탄, DMF, DMSO 중 유기 또는 무기 염기 예컨대 Et3N, iPr2NEt, 피리딘, NaH, Cs2CO3, K2CO3 의 존재에서 특히 -20℃ 내지 100℃에서 반응된다. X는 또한 히드록실을 나타낸다. 이러한 경우, 제1 단계는 카르복실산 (IX) 및 아민 (VI) 간의 축합 반응이다. 본 반응은 당업자에게 알려진 방법 및 기술에 따라 수행될 수 있다. 하나의 특히 주목되는 방법에서, 두 종의 실체는, 극성 비양성자성 용매 예컨대 디클로로메탄 또는 DMF 중1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸-카르보디이미드 (EDC), 3-히드록시-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온, 삼차 아민 예컨대 디이소프로필에틸아민의 존재에서, 특히 -15℃ 내지 40℃에서 반응된다. 또 다른 특히 주목되는 방법에서, 이들 두 종의 실체는, 극성 비양성자성 용매 예컨대 디클로로메탄 또는 DMF 중 디에틸 포스포로시아니데이트 (DEPC), 삼차 아민 예컨대 트리에틸아민의 존재에서, 특히 -15℃ 내지 40℃에서 반응된다.
당업자에게 잘 알려진 기술로 중간체 탈보호 후, 수득된 화합물 (VIII)은 R4Y와의 반응 후 식 (I) 화합물에 이른다. 이러한 경우, Y는 이탈기 예컨대 Cl, Br, I, OSO2CH3, OSO2CF3 또는 O-토실이다. 본 반응은 극성 무수 용매 예컨대 디클로로메탄, THF, DMF, DMSO 중 유기 또는 무기 염기 예컨대 Et3N, iPr2NEt, NaH, Cs2CO3, K2CO3 의 존재에서 특히 -20° 내지 100℃에서 수행된다. 또 다른 특히 주목되는 방법에서, 화합물 (VIII)은 식 R4b-CHO의 알데히드와 반응되고, 상기 R4b 는 R4 전구체에 상당한다. 이러한 경우, 본 반응은, 극성 용매 예컨대 1,2-디클로로에탄, 디클로로메탄, THF, DMF, MeOH 중 환원제 예컨대 NaBH4, NaBH3CN, NaBH(OAc)3 의 존재에서, 선택적으로 티타늄 이소프로폭시드 (IV) 존재에서 pH는 산 예컨대 아세트산 첨가로 조정되고 온도는 특히 -20℃ 내지 100℃인 환원적 아민화이다.
전기 합성 경로에서, 식 (I) 화합물은 부가 반응 단계 예를들면 당업자에게 잘 알려진 방법을 이용한 예컨대 비누화 후의 또 다른 식 (I) 화합물에 이르고, 이에 따라 에스테르, 바람직하게 메틸 에스테르를 나타내는 R2 기는, 카르복실산을 나타내는 R2 기로 변환된다.
산부가염 상태에서 적어도 하나의 염기 관능기를 가지는 식 (I) 화합물을 분리하는 것이 바람직하다면, 식 (I) 화합물의 유리 염기 (적어도 하나의 염기 관능기 포함)를 적합한 산, 바람직하게 당량으로 처리할 수 있다. 적합한 산은 특히 트리플루오로아세트산이다.
본 발명은 따라서 식 (I) 화합물의 제1 제조방법으로, 다음 식 (VI) 화합물:
Figure pct00019
(VI)
식 중 R1 및 R2는 상기 정의된 바와 같고, 및
다음 식 (VII) 화합물:
Figure pct00020
(VII)
식 중 R3은 상기 정의된 바와 같고, R4a는 임의선택적으로 보호 형태의 상기 정의된 R4 기, 및 X는 OH 또는 Cl인, 축합 반응을 포함한다.
X = OH일 때, 커플링 반응은 당업자에게 잘 알려진 펩티드 커플링 조건에서 수행될 수 있다.
상기 펩티드 커플링은 임의선택적으로 커플링 보조제 예컨대 N-히드록시 숙신이미드 (NHS), N-히드록시 벤조트리아졸 (HOBt), 3,4-디히드로-3-히드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아졸 (HOOBt), l-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (HAt), N-히드록시실포숙신이미드 (술포 NHS) 또는 디메틸아미노피리딘 (DMAP)와 조합되는, 커플링제 예컨대 디이소프로필카르보디이미드 (DIC), 디시클로헥실카르보디이미드 (DCC), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염 (EDC), 카르보닐디이미다졸 (CDI), 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(lH-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU), O-(7-아조벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU), 디에틸 포스포로시아니데이트 (DEPC) 또는 (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤로디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP)의 존재에서 수행될 수 있다. 바람직하게 커플링제는 HATU 또는 DEPC이다.
반응은 또한 염기 예컨대 DIEA (디이소프로필에틸아민) 의 존재에서 수행될 수 있다.
특히, 펩티드 커플링은 HATU 또는 DEPC 및 DIEA 의 존재에서 수행된다.
상기 반응은 극성 비양성자성 용매 예컨대 디클로로메탄 (DCM) 또는 디메틸포름아미드 (DMF)에서, 특히 -15℃ 내지 40℃에서 수행될 수 있다.
X = Cl일 때, 축합 반응은 유기 또는 무기 염기, 예컨대 Et3N, iPr2NEt, 피리딘, NaH, Cs2CO3, 또는 K2CO3 의 존재에서 수행될 수 있다.
반응은 용매 예컨대 테트라히드로푸란 (THF), 디클로로메탄 (DCM), 디메틸포름아미드 (DMF), 또는 디메틸술폭시드 (DMSO)에서, 특히 -20° 내지 100℃에서 수행된다.
식 (VI) 및 (VII) 화합물은 하기 실험 부분에서 기술된 합성 프로토콜 또는 당업자에게 알려진 기술에 따라 제조될 수 있다.
또한 본 발명은 식 (I) 화합물의 제2 방법으로, 다음 식 (VIII) 화합물:
Figure pct00021
(VIII)
식 중 R1, R2 및 R3 은 상기 정의된 바와 같고, 및
다음 식 (X) 화합물:
R4a-Y (X)
식 중 R4a 는 임의선택적으로 보호 형태의 상기 정의된 R4기이고, Y는 이탈기 예컨대 Cl, Br, I, OSO2CH3, OSO2CF3 또는 O-토실인, 치환 반응을 포함한다.
치환 반응은 특히 유기 또는 무기 염기 예컨대 Et3N, iPr2NEt, NaH, Cs2CO3, 또는 K2CO3 의 존재에서 수행될 수 있다.
본 반응은 극성 용매, 바람직하게 무수, 예컨대 DCM, THF, DMF 또는 DMSO에서, 특히 -20° 내지 100℃에서 구현될 수 있다.
식 (VIII) 및 (X) 화합물은 하기 실험 부분에서 기술된 합성 프로토콜 또는 당업자에게 알려진 기술에 따라 제조될 수 있다.
또한 본 발명은 식 (I) 화합물의 제3 제조방법으로, 식 중 R4는 -CH2R4b기이고 R4b는 다음을 나타내고:
- 임의선택적으로 아릴, OH 및 NR9R10기에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나, 바람직하게 아릴 모이어티에)로 치환되는 아릴 또는 아릴-(C1-C7)알킬기, 또는
- 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13기에서 선택되는 하나 이상의 기 (특히 하나, 바람직하게 헤테로사이클 모이어티에)로 치환되는 헤테로사이클 또는 헤테로사이클-(C1-C7)알킬기,
다음 식 (VIII) 화합물:
Figure pct00022
(VIII)
식 중 R1, R2 및 R3 은 상기 정의된 바와 같고, 및
다음 식 (XI) 화합물:
R4b-CHO (XI)
식 중 R4b 는 예컨대 상기 정의된 바와 같고, 환원적 아민화 반응을 포함한다.
환원적 아민화 반응은 환원제 예컨대 NaBH4, NaBH3CN 또는 NaBH(OAc)3 및 임의선택적으로 티타늄 이소프로폭시드 (IV)의 존재에서 수행될 수 있다.
pH는 산 예컨대 아세트산을 첨가하여, 특히 pH 4 내지 5로 조정할 수 있다.
본 반응은 극성 용매 예컨대 DCE (1,2-디클로로에탄), DCM, THF, DMF 또는 메탄올에서, 특히-20° 내지 100℃에서 구현된다.
식 (VIII) 및 (XI) 화합물은 하기 실험 부분에 기재된 합성 프로토콜에 따라서 또는 당업자에게 알려진 기술을 이용하여 제조될 수 있다.
상기 3가지 방법들 중 하나의 축합/치환/환원적 아민화 단계 후 수득된 화합물에 대하여 당업자에게 잘 알려진 방법으로 특히 치환체 R2 및 R4에 대하여 추가 탈보호 단계 및 임의선택적으로 추가 관능화 단계를 거친다.
R2 가 COOH 기일 때, 상기된 축합/치환/환원적 아민화 단계는 R2 기가 COO-((C1-C6)알킬) 에스테르 관능기를 나타내는 식 (VI) 화합물로부터 수행될 수 있고, 본 에스테르 관능기는 이후 비누화되어 R2 = COOH를 가지는 식 (I) 화합물이 생성된다.
R4 기가 NH 관능기를 포함할 때, 축합/치환/환원적 아민화 반응 수행 전에 이것은 질소 원자를 N-보호기 예컨대 Boc 또는 Fmoc기로 치환하여 보호된다.
본 발명에서 ≪보호기≫란 다중 관능성 화합물에서 반응성 자리를 선택적으로 차단하여 화학 반응이 통상 화학 합성과 연관된 또 다른 비-보호화 반응성 자리에서 선택적으로 수행되도록 하는 기를 의미한다.
본 발명에서 ≪N-보호기≫란 원하지 않은 반응에 대하여 NH 기를 보호하는 임의의 치환체 예컨대 Greene, ≪Protective Groups In Organic synthesis≫, (John Wiley ＆ Sons, New York (1981)) and Harrison et al. ≪Compendium of Synthetic Organic Methods≫, Vols. 1 to 8 (J. Wiley ＆ sons, 1971 to 1996)에 기재된 N-보호기를 의미한다. N-보호기는 카르바메이트, 아미드, N-알킬화 유도체, 아미노 아세탈 유도체, N-벤질 유도체, 이민 유도체, 엔아민 유도체 및 N-헤테로원자 유도체를 포함한다. N-보호기는 포르밀; 아릴, 예컨대 임의선택적으로 하나 이상의 메톡시기로 치환되는 페닐, 예컨대 p-메톡시페닐 (PMP); 아릴-(C1-C6)알킬, 예컨대 벤질, 이때 아릴 모이어티는 임의선택적으로 하나 이상의 메톡시기로 치환되고, 예컨대 벤질 (Bn), p-메톡시벤질 (PMB) 또는 3,4-디메톡시벤질 (DMPM); -CO-RGP1 예컨대 아세틸 (Ac), 피발로일 (Piv 또는 Pv), 벤조일 (Bz) 또는 p-메톡시벤질카르보닐 (Moz); -CO2-RGP1 예컨대 t부틸옥시카르보닐 (Boc), 트리클로로에톡시카르보닐 (TROC), 알릴옥시카르보닐 (Alloc), 벤질옥시카르보닐 (Cbz 또는 Z) 또는 9-플루오렌일메틸옥시카르보닐 (Fmoc); -SO2-RGP1 예컨대 페닐술포닐, 토실 (Ts 또는 Tos) 또는 2-니트로벤젠술포닐 (노실 - Nos 또는 Ns이라고도 칭함); 및 기타 등일 수 있고,
RGP1은 임의선택적으로 하나 이상의 할로겐 원자 예컨대 F 또는 Cl로 치환되는 (C1-C6)알킬; (C2-C6)알켄일 예컨대 알릴; 아릴, 예컨대 임의선택적으로 OMe (메톡시) 및 NO2 (니트로)에서 선택되는 하나 이상의 기로 치환되는 페닐; 아릴-(C1-C6)알킬, 예컨대 벤질, 이때 아릴 모이어티는 임의선택적으로 하나 이상의 메톡시기로 치환되고; 또는 9-플루오렌일메틸기를 나타낸다.
특히, N-보호기는 포르밀, 아세틸, 벤조일, 피발로일, 페닐술포닐, 벤질 (Bn), t-부틸옥시카르보닐 (Boc), 벤질옥시카르보닐 (Cbz), p-메톡시벤질옥시카르보닐, p-니트로벤질-옥시카르보닐, 트리클로로에톡시카르보닐 (TROC), 알릴옥시카르보닐 (Alloc), 9-플루오렌일메틸옥시카르보닐 (Fmoc), 트리플루오로-아세틸, 벤질 카르바메이트 (치환 또는 미치환) 및 유사한 것을 포함한다. 특히 Boc 또는 Fmoc 기이다.
NH 아민 관능기의 Boc 또는 Fmoc기에 의한 보호 및 축합/치환/환원적 아민화 반응 후 연이어 탈보호는 당업자에게 잘 알려져 있고 특히 하기 실험 부분에 기술된다.
상기 3종의 방법들 중 하나에 의해 수득된 식 (I) 화합물은 또한 약학적으로 허용되는 염기 또는 산, 특히 약학적으로 허용되는 산 예컨대 트리플루오로아세트산을 첨가하여 염화될 수 있다. 상기 단계는 임의선택적으로 또 다른 반응 단계와 동시에, 특히 탈보호 단계가 예를들면 산 매질에서 수행될 때 이와 동시에 수행될 수 있다.
3가지 방법들 중 하나에 의해 얻어진 화합물은, 임의선택적으로 탈보호, 관능화 및/또는 염화 추가 단계(들) 후, 당업자에게 잘 알려진 방법으로, 예컨대 추출, 용매 증발 또는 침전 및 여과하여 반응 매질로부터 분리될 수 있다.
또한 화합물은 필요하다면 당업자에게 잘 알려진 기술, 예를들면 화합물이 결정성이면 재결정화, 증류, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 또는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 정제할 수 있다.
다음 실시예들은 범위를 제한하지 않고 본 발명을 설명하는 것이다.
실시예들
I - 본 발명 화합물의 합성
다음 약어들이 다음 실시예들에서 사용된다:
aq.수성
ee거울상이성질체 과잉율
equiv당량
ESI전자분무이온화
LC/MS 질량분석과 결합된 액체 크로마토그래피
HPLC고성능 액체 크로마토그래피
NMR핵자기공명
sat.포화
UV자외선
참고 실시예 1
(S)-2-((S)-2-((3-아미노프로필)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 비스 트리플루오로아세트산
Figure pct00023
실시예 1A: (4R, 5S)-4-메틸-5-페닐-3-프로판오일-1,3-옥사졸리딘-2-온
Figure pct00024
(4R, 5S)-4-메틸-5-페닐-1,3-옥사졸리딘-2-온 (5.8 g, 32.7 mmol, 1.00 equiv)을 불활성 분위기에서 테트라히드로푸란 (THF, 120 mL)에 녹였다. 혼합물을 -78℃로 냉각하고 n-부틸리튬 (14.4 mL)을 적가하였다. 30 분 -78℃에서 교반 후, 프로판오일 클로라이드 (5.7 mL)를 첨가하였다. 30 분 동안 -78℃ 이어 밤새 주위 온도로 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 농축한 후 200 mL 물에 재-용해하였다. 중탄산나트륨 포화 수용액으로 용액 pH를 7로 조정하였다. 본 수성 상을 3 회 100 mL 에틸 아세테이트 (EtOAc)로 추출하였다. 유기 상들을 모아, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하여 6.8 g (89 %)의 화합물 1A를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1B: tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-히드록시-2-메틸-3-[(4R,5S)-4-메틸-2-옥소-5-페닐-1,3-옥사졸리딘-3-일]-3-옥소프로필]피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00025
화합물 1A (17.6 g, 75.45 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 디클로로메탄 (DCM, 286 mL)에 녹였다. 본 용액을 얼음조로 냉각하였다. 반응 혼합물 온도를 2℃ 이하로 유지하면서 트리에틸아민 (TEA, 12.1 mL, 1.15 equiv) 및 Bu2BOTf (78.3 mL, 1.04 equiv)를 적가하였다. 0℃에서 45 분 동안 계속 교반한 후, 반응물을 -78℃로 냉각하였다. DCM (42 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-포르밀피롤리딘-1- 카르복실레이트 용액 (8.5 g, 42.66 mmol, 0.57 equiv)을 적하였다. 2 시간 동안 -78℃, 이어 1 시간 동안 0℃ 및 마지막으로 1 시간 동안 주위 온도에서 계속 교반하였다. 반응물을 72 mL 인산 완충액 (pH = 7.2 - 7.4) 및 214 mL 메탄올로 중화시키고, 0℃로 냉각하였다. 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 메탄올 (257 mL) 중30 % 과산화수소 용액을 적가하였다. 1 시간 동안 0℃에서 계속 교반하였다. 반응물을 142-mL 물로 중화한 후, 감압 농축하였다. 얻어진 수용액을 3 회 200 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 석유 에테르 혼합물 (EtOAc:PE = 1:8)로 실리카 칼럼에서 정제하여 13.16 g (40 %)의 화합물 1B을 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1C: (2R,3R)-3-[(2S)-1-[(tert-but옥시)카르보닐]피롤리딘-2-일]-3-히드록시-2-메틸프로판산
Figure pct00026
화합물 1B (13.16 g, 30.43 mmol, 1.00 equiv)를 과산화수소 (수중 30 %, 15.7 mL)의 존재에서 THF (460-mL)에 용해한 후, 얼음조로 냉각하였다. 반응 온도를 4℃ 이하로 유지하면서 수산화리튬 수용액 (0.4 mol/L, 152.1 mL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 2.5 시간 동안 0℃에서 교반하였다. 0℃를 유지하면서 Na2SO3 수용액(1 mol/L, 167.3 mL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 14 시간 동안 주위 온도에서 교반한 후, 150 mL 냉각 중탄산나트륨 포화 용액으로 중화하고 3 회 50 mL DCM로 세척하였다. 1M KHSO4수용액으로 수용액 pH를 2-3로 조정하였다. 본 수용액을 3 회 100 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, NaCl 포화 용액으로 1회 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하여 7.31 g (88 %)의 화합물 1C를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1D: (2R,3R)-3-[(2S)-1-[(tert-but옥시)카르보닐]피롤리딘-2-일]-3-메톡시-2-메틸프로판산
Figure pct00027
화합물 1C (7.31 g, 26.74 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 요오드화메탄 (25.3 mL) 존재의 THF (135 mL)에 녹였다. 반응물을 얼음조로 냉각시킨 후 NaH (오일 중60 %, 4.28 g)를 분량씩 첨가하였다. 반응물을 3일 동안 0℃에서 교반하면서 방치한 후 100 mL 중탄산나트륨 포화 수용액으로 중화하고 3 회 50 mL 에테르로 세척하였다. 1M KHSO4 수용액으로 수용액 pH를 3으로 조정하였다. 본 수용액을 3 회 100 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 100 mL Na2S2O3 (수중 5 %)로 1회, NaCl-포화 용액으로 1회 세척 후, 황산나트륨으로 건조, 여과 및 농축하여 5.5 g (72 %)의 화합물 1D를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1E: N-메톡시-N-메틸-2-페닐아세트아미드
Figure pct00028
2-페닐아세트산 (16.2 g, 118.99 mmol, 1.00 equiv)을 디메틸포름아미드 (DMF, 130 mL)에 녹인 후 -10℃로 냉각하였다. 디에틸 포스포로시아니데이트 (DEPC, 19.2 mL), 메톡시(메틸)아민 염산염 (12.92 g, 133.20 mmol, 1.12-equiv) 및 트리에틸아민 (33.6 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30 분 동안 -10℃에서, 이어 2.5 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 2회 1 리터 EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 2회 500 mL NaHCO3 (sat.)로, 1회 400 mL 물로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE 혼합물 (1:100 내지 1:3)로 실리카 칼럼에서 정제하여 20.2 g (95 %)의 화합물 1E를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1F: 2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에탄-1-온
Figure pct00029
테트라메틸에틸렌디아민 (TMEDA, 27.2 mL)을 불활성 분위기에서 THF 300 mL에 녹인 후, -78℃로 냉각 후 n-BuLi (67.6 mL, 2.5 M)을 적가하였다. 2-브로모-1,3-티아졸 (15.2 mL)을 적가하고 30 분 동안 -78℃에서 교반하였다. THF (100 mL)에 용해된 화합물 1E (25 g, 139.50 mmol, 1.00 equiv)를 적가하였다. 30 분 -78℃, 이어 2 시간 -10℃에서 계속 교반하였다. 반응물을 500 mL KHSO4 (sat.)로 중화한 후, 1 리터 EtOAc로3 회 추출하였다. 유기상들을 모아, 2회 400 mL 물로 및 2회 700 mL NaCl(sat.)로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물은 EtOAc 및 PE 혼합물 (1:100 내지 1:10)로 실리카 칼럼에서 정제하여 25 g (88 %)의 화합물 1F를 황색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1G: (1R)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에탄-1-올
Figure pct00030
불활성 분위기에서, 에테르 (300 mL) 중의 화합물 1F 용액 (15 g, 73.8 mmol, 1.00 equiv.)을 (+)-B-클로로디이소피노캄페일보란 ((+)-Ipc2BCl, 110.8 mL)에 적가하였다. 반응 혼합물을 24 시간 동안 0℃에서 교반한 후, NaOH (수중 10 %) 및 H2O2 (수중 30 %)의 (1:1) 혼합물300 mL로 중화하고, 마지막으로 3회 500-mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 2회 300 mL K2CO3 (sat.)로 및 1회 500 mL NaCl(sat.)로 세척 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:20 내지 1:2)로 실리카 칼럼에서 정제하여 6.3 g (42 %)의 화합물 1G를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1H: 2-[(1S)-1-아지도-2-페닐에틸]-1,3-티아졸
Figure pct00031
화합물 1G (6 g, 29.23 mmol, 1.00 equiv.)를 불활성 분위기에서 트리페닐포스핀 (13 g, 49.56 mmol, 1.70 equiv.) 존재의 THF (150 mL)에 용해 후, 0℃로 냉각하였다. 디에틸아조디카르복실레이트 (DEAD, 7.6 mL), 이어 디페닐포스포릴아지드 (DPPA, 11 mL)를 적가하고, 냉각조를 치우고 용액을 48 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응물을 감압 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:100 내지 1:30)로 실리카 칼럼에서 정제하여 8 g의 부분 정제 화합물 1H를 황색 오일 형태로 얻었다. 화합물 1H를 그대로 다음 단계에서 사용하였다.
실시예 1I: tert-부틸 N-[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸] 카르바메이트.
Figure pct00032
화합물 1H (6.5 g, 28.2 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 트리페닐포스핀 (6.5 g, 33.9 mmol, 1.20 equiv.) 존재의 THF (100 mL)에서 용해시키고, 50℃에서 2 시간 가열하였다. 이어 암모니아 (70 mL)를 첨가하고 3 시간 계속 가열하였다. 반응물을 냉각하고, 500 mL 물로 중화한 후, 3 회 500 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아 2회 500 mL 1N HCl로 추출하였다. 수상들을 모아, 수산화나트륨 용액 (수중 10 %) 첨가로 pH 8-9로 조정한 후, 3 회 500 mL DCM로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 4.8 g (83 %)의 (1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에탄-1-아민을 황색 오일 형태로 수득하였다. 이어 본 화합물이 정제되도록 Boc 기 ((tert-부톡시)카르보닐)로 보호하였다. 불활성 분위기에서 1,4-디옥산 (40 mL)에 녹이고, 0℃로 냉각하였다. 20 mL 1,4-디옥산에 희석된 (Boc)2O (10.26 g, 47.01 mmol, 2.00 equiv)를 적가하였다. 냉각조를 치우고 용액을 밤새 주위 온도에서 교반시킨 후 300 mL 물로 중화하고 2회 500 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:100 내지 1:20, ee = 93 %)로 실리카 칼럼에서 정제하였다. 헥산/아세톤 혼합물 (~ 5-10 / 1, 1g / 10 mL)에서 재결정하여 6 g (84 %)의 화합물 1I를 백색 고체 형태로 얻었다 (ee > 99 %).
실시예 1J: tert-부틸 (2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-2-[[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]카르바모일]에틸]피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00033
화합물 1I (3 g, 9.86 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 10 mL DCM에 용해하였다. 트리플루오로아세트산 (TFA, 10 mL)를 첨가하고 용액을 밤새 주위 온도에서 교반한 후, 감압 농축하여 2.0 g (64 %)의 (1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에탄-1-아민; 트리플루오로아세트산을 황색 오일 형태로 수득하였다. 본 중간체를 20 mL DCM에 재-용해한 후 화합물 1D (1.8 g, 6.26 mmol, 1.05 equiv), DEPC (1.1 g, 6.75 mmol, 1.13 equiv) 및 디이소프로필에틸아민 (DIEA, 1.64 g, 12.71 mmol, 2.13 equiv)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서교반한 후, 감압 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:100 내지 1:3)로 실리카 칼럼에서 정제하여 2.3 g (81 %)의 화합물 1J를 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1K: (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]프로판아미드; 트리플루오로아세트산
Figure pct00034
화합물 1J (2.25 g, 4.75 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 10 mL DCM에 녹였다. TFA (10 mL)를 첨가하고 용액을 밤새 주위 온도에서 교반한 후, 감압 농축하여 2.18 g (94 %)의 화합물 1K를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1L: (2S,3S)-2-(벤질아미노)-3-메틸펜탄산
Figure pct00035
(2S,3S)-2-아미노-3-메틸펜탄산 (98.4 g, 750 mmol, 1.00 equiv)을 주위 온도에서 분량씩 2N 수산화나트륨 용액 (375-mL)에 첨가하였다. 벤즈알데히드 (79.7 g, 751.02 mmol, 1.00 equiv)를 재빨리 첨가하고 얻어진 용액을 30 분 교반하였다. 5 내지 15℃로 유지하면서 수소화붕소나트륨 (10.9 g, 288.17 mmol, 0.38 equiv)을 소량씩 첨가하였다. 4 시간 동안 주위 온도에서 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 200 mL 물로 희석한 후, 2회 200 mL EtOAc로 세척하였다. 2N 염산 용액으로 수용액 pH를 7로 조정하였다. 생성된 침전물을 여과하여 회수하여 149.2 g (90 %)의 화합물 1L를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1M: (2S,3S)-2-[벤질(메틸)아미노]-3-메틸펜탄산
Figure pct00036
화합물 1L (25 g, 112.97 mmol, 1.00 equiv)을 불활성 분위기에서 포름알데히드 (수중 36.5 %, 22.3 g) 존재의 포름산 (31.2 g)에 녹였다. 용액을 3 시간 90℃에서 교반 후 감압 농축하였다. 잔류물을 250 mL 아세톤에서 분산시킨 후, 농축하였다. 이러한 분산/증발 조작을 2회 500 mL 아세톤으로 반복하여 21.6 g (81 %)의 화합물 1M을 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1N: (2S,3S)-2-[벤질(메틸)아미노]-3-메틸펜탄-1-올
Figure pct00037
LiAlH4 (0.36 g)를 0℃ 불활성 분위기에서 10 mL THF에 현탁하였다. 0 내지 10oC로 유지하면서 화합물 1M (1.5 g, 6.37 mmol, 1.00 equiv)을 소량씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 2 시간 교반 후, 다시 0℃로 냉각 후 360 μL 물, 1 mL 15 % 수산화나트륨 및 360 μL 물을 연속하여 첨가하여 중화하였다. 침전된 알루미늄 염을 여과하여 제거하였다. 여과액을 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:50)로 실리카 칼럼에서 정제하여 820 mg (58 %)의 화합물 1N을 옅은 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1O: (2S,3S)-2-[벤질(메틸)아미노]-3-메틸펜탄알
Figure pct00038
옥살릴 클로라이드 (0.4 mL)를 불활성 분위기에서 DCM (15 mL)에 용해하였다. 용액을 -70℃로 냉각하고 DCM (10 mL) 중의 디메틸술폭시드 용액 (DMSO, 0.5 mL)을 15 분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 30 분 교반 후 DCM (10 mL) 중 화합물 1N 용액 (820 mg, 3.70 mmol, 1.00 equiv)을 15 분 간 적가하였다. 반응 혼합물을 추가로 30 분 동안 저온에서 교반한 후, 트리에틸아민 (2.5 mL)을 서서리 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 -50℃에서 교반한 후, 냉각조를 치우고 온도를 정상화하면서 반응물을 25 mL 물로 중화하였다. 용액을 1회 30 mL NaCl-포화 수용액으로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:200)로 실리카 칼럼에서 정제하여 0.42 g (52 %)의 화합물 1O를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1P: (2S,3S)-N-벤질-1,1-디메톡시-N,3-디메틸펜탄-2-아민
Figure pct00039
화합물 1O (4.7 g, 21.43 mmol, 1.00 equiv)를 0℃에서 20 mL 메탄올에 녹였다. 진한 황산 (4.3 mL)을 적가하고 30 분 동안 0℃에서 계속 교반하였다. 트리메틸 오르토포르메이트 (21.4 mL)를 첨가하고, 냉각조를 치우고 반응물을 3 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응물을 200 mL EtOAc로 희석하고, 100 mL 10 % Na2CO3 및 200 mL 포화 NaCl로 연속하여 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 3.4 g (60 %)의 화합물 1P를 옅은 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1Q: [[1-(tert-부톡시)에텐일]옥시](tert-부틸)디메틸실란
Figure pct00040
디이소프로필아민 (20 g, 186.71 m mol, 1.08 equiv)을 불활성 분위기에서 170 mL THF에 녹이고 -78℃로 냉각하였다. nBuLi (2.4 M, 78.8 mL)를 적가하고 용액을 30 분 저온에서 교반한 후 (LDA-리튬 디이소프로필아미드 생성) tert-부틸 아세테이트 (20 g, 172.18 mmol, 1.00 equiv)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20 분 -78℃에서 교반 후 헥사메틸포스포라미드 (HMPA, 25.8 mL) 및 35 mL THF 중 tert부틸디메틸클로로실란 용액 (TBDMSCl, 28 g, 185.80 mmol, 1.08 equiv)을 첨가하였다. 추가로 20 분 동안 저온에서 계속 교반하고, 냉각조를 치웠다. 용액을 감압 농축하였다. 잔류물을 100 mL 물에서 재-용해하고 3 회 100 mL PE로 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 500 mL NaCl-포화 수용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 증류 정제하여 16.6 g (83 %)의 화합물 1Q를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1R: tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[벤질(메틸)아미노]-3-메톡시-5-메틸 헵타노에이트
Figure pct00041
화합물 1P (2.0 g, 7.54 mmol, 1.00 equiv) 및 화합물 1Q (2.6 g, 11.28-mmol, 1.50 equiv)를 불활성 분위기에서 33 mL DCM에 녹였다. 용액을 0℃로 냉각하였다. 7.5 mL DCM 중 BF3·Et2O 용액 (2.1 g)과 함께 DMF (1.2 g)를 적가하였다. 24 시간 0℃에서 계속 교반하였다. 반응물을 1회 30 mL 탄산나트륨 (10 %) 및 2회 50 mL NaCl-포화 수용액으로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:100)로 실리카 칼럼에서 정제하여 1.82 g (91 %)의 화합물 1R을 황색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1S: (3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노에이트 염산염
Figure pct00042
화합물 1R (2.4 g, 6.87 mmol, 1.00 equiv)을 불활성 분위기에서 Pd/C (0.12 g) 및 진한 염산 (0.63 mL)가 존재하는35 mL 에탄올에 녹였다. 질소 분위기를 수소 분위기로 교체하고 반응물을 18 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하였다. 잔류물을 50 mL 헥산에 분산시키고 상등액을 제거하고, 감압 건조 후 1.66 g (82 %)의 화합물 1S를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1T: tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(벤질옥시)카르보닐]아미노]-N,3-디메틸부탄아미도]-3-메톡시-5- 메틸헵타노에이트
Figure pct00043
(2S)-2-[[(벤질옥시)카르보닐]아미노]-3-메틸부탄산 (15 g, 0.40 mmol, 1.00 equiv)을 DIEA (38.3 mL) 및 브로모트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBrOP, 32.3g) 존재의300 mL DCM에 녹였다. 용액을 30 분 동안 주위 온도에서 교반한 후 화합물 1S (15.99g, 0.42 mmol, 1.07 equiv)를 첨가하였다. 반응물을 2 시간 교반 후 농축하였다. 잔류물을 역상 (C18)에서 아세토니트릴 (ACN) 및 물의 혼합물 (30:70 내지 100:0, 40 분)로 정제하여 17 g (58 %)의 화합물 1T를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1U: tert-부틸 (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도]-3-메톡시-5- 메틸헵타노에이트
Figure pct00044
화합물 1T (76 mg, 0.15 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 Pd/C (0.05 g)가 존재하는 10 mL 에탄올에 용해하였다. 질소 분위기를 수소 분위기로 교체하고 반응물을 2 시간 주위 온도에서 교반하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 64 mg의 화합물 1U를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 1V: (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐] 아미노]-N,3-디메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트
Figure pct00045
화합물 1U (18.19 g, 50.74 mmol, 1.00 equiv)를 중탄산나트륨 (12.78 g, 152 mmol, 3.00 equiv) 및 9H-플루오렌-9-일메틸 클로로포르메이트 (Fmoc-Cl, 19.69 g, 76 mmol, 1.50 equiv)가 존재하는 400 mL 1,4-디옥산/물 혼합물 (1:1)에 녹인 후, 2 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 이어 반응물을 500 mL 물로 희석하고 3 회 200 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 200 mL NaCl-포화 수용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하여 40 g의 부분 정제 화합물 1V를 옅은 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1W: (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카르보닐] 아미노]-N,3-디메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵탄산
Figure pct00046
화합물 1V (40 g, 68.88 mmol, 1.00 equiv)를 중성 분위기에서 600 mL DCM에 용해하였다. TFA (300 mL)를 첨가하였다. 용액을 2 시간 주위 온도에 교반한 후, 감압 농축하였다. 잔류물을 메탄올 및 DCM의 혼합물 (1:10)로 실리카 칼럼에서 정제하여 23.6 g (65 %)의 화합물 1W를 무색 오일 형태로 획득하였다.
실시예 1X: 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-2-[[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]카르바모일]에틸]피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일](메틸) 카르바모일]-2-메틸프로필]카르바메이트
Figure pct00047
화합물 1W (2.53 g, 4.82 mmol, 1.08 equiv)를 화합물 1K (2.18 g, 4.47 mmol, 1.00 equiv), DEPC (875 mg, 5.37 mmol, 1.20 equiv) 및 DIEA (1.25 g, 9.67 mmol, 2.16 equiv)가 존재하는 20 mL DCM에 녹였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반한 후, 50 mL 포화 KHSO4 및 100 mL 물로 연이어 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 메탄올 및 DCM의 혼합물 (1:200 내지 1:40)로 실리카 칼럼에서 정제하여 2.8 g (71 %)의 화합물 1X를 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1Y: (2S)-2-아미노-N-[(3R,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-2-[[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]카르바모일]에틸] 피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N,3-디메틸부탄아미드
Figure pct00048
화합물 1X (2.8 g, 3.18 mmol, 1.00 equiv)를 피페리딘 (3 mL) 존재의 아세토니트릴 (ACN, 12 mL)에 녹이고 18 시간 주위 온도에서 교반하였다. 반응물을 50 mL 물로 중화한 후, 2회 100 mL DCM으로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 메탄올 및 DCM의 혼합물 (1:100 내지 1:40)로 실리카 칼럼에서 정제하여 1.2 g (57 %)의 화합물 1Y를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 1ZA: (2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노]-3-메틸 부탄산
Figure pct00049
(2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]-3-메틸부탄산 (63 g, 289.97 mmol, 1.00 equiv)을 불활성 분위기에서 요오드화메탄 (181 mL)이 존재하는 THF (1000 mL)에 녹였다. 용액을 0℃로 냉각 후 수소화나트륨 (116 g, 4.83 mol, 16.67 equiv)을 소량씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 0oC에서 교반한 후, 냉각조를 치우고 18 시간 계속하여 교반하였다. 반응물을 200 mL 물로 중화한 후 감압 농축하였다. 잔류 수성 상을 4 리터 물로 희석하고, 1회 200 mL EtOAc로 세척하고 pH를 1N 염산 용액으로 3 내지 4로 조정하였다. 얻어진 혼합물을 3 회 1.2 L EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 60 g (89 %)의 화합물 1ZA를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1ZB: 벤질 (2S)-2-[[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트
Figure pct00050
화합물 1ZA (47 g, 203.21 mmol, 1.00 equiv)를 Li2CO3 (15.8 g, 213.83 mmol, 1.05 equiv)가 들어있는 DMF (600 mL)에 용해하였다. 용액을 0℃로 냉각 후 브롬화벤질 (BnBr 57.9 g, 338.53 mmol, 1.67 equiv)을 적가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 후 400 mL 물로 중화하고 여과하였다. 얻어진 용액을 2회 500 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:100 내지 1:20)로 실리카 칼럼에서 정제하여 22.5 g (34 %)의 화합물 1ZB를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1ZC: 벤질 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 염산염
Figure pct00051
화합물 1ZB (22.5 g, 70.00 mmol, 1.00 equiv)를 150 mL DCM에 녹였다. 기체 염산을 주입하였다. 반응물을 1 시간 동안 주위 온도에서 교반 후 감압 농축하여 17 g (94 %)의 화합물 1ZC를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 1ZD: tert-부틸 N-(3,3-디에톡시프로필)카르바메이트
Figure pct00052
3,3-디에톡시프로판-1-아민 (6 g, 40.76 mmol, 1.00 equiv)을 TEA (4.45 g, 43.98 mmol, 1.08 equiv)가 존재하는 1,4-디옥산 (30 mL)에 용해한 후, 0℃로 냉각하였다. 20 mL 1,4-디옥산에 희석된 (Boc)2O (9.6 g, 43.99 mmol, 1.08 equiv)를 적가하였다. 용액을 2 시간 0℃에서 이후 밤새 주위 온도에서 교반한 후 10 mL 물로 중화하였다. HCl (1 %)로 pH를 5로 조정하였다. 용액을 3 회 50 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 8.21 g (81 %)의 화합물 1ZD를 옅은 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1Z: tert-부틸 N-(3-옥소프로필) 카르바메이트
Figure pct00053
화합물 1ZD (8.20 g, 33.15 mmol, 1.00 equiv)를 18.75 mL 아세트산에 녹이고 밤새 주위 온도에서 교반하였다. 이어 반응물을 3 회 30 mL EtOAc로 추출하였따. 유기상들을 모아, 3 회 30 mL NaCl 포화 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하여 5 g (87 %)의 화합물 1ZE를 암적색 오일 형태로 획득하였다.
실시예 1ZF: (2S)-2-[(3-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]프로필)(메틸) 아미노]-3-메틸부탄산
Figure pct00054
화합물 1ZE (2.4 g, 13.86 mmol, 1.00 equiv)를 화합물 1ZC (3.56 g, 13.81 mmol, 1.00 equiv) 및 DIEA (9.16-mL, 4.00 equiv) 존재에서 50 mL THF에 용해하였다. 반응 혼합물을 30 분 동안 주위 온도에 교반한 후 트리아세톡시수소화붕소나트륨 (5.87 g, 27.70 mmol, 2.00 equiv)을 첨가하였다. 밤새 계속 교반 후, 반응물을 100 mL 물로 중화하고 3 회 50 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:4)로 실리카 칼럼에서 부분 정제하였다. 얻어진 조질 생성물을 Pd/C (1.2 g)가 존재하는 20 mL 메탄올에 재-용해하고 20 분 동안 정상 온도 및 압력에서 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 200 mg (5 %)의 화합물 1ZF를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 1ZG: tert-부틸 N-(3-[[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-2-[[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]카르바모일]틸]피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4일](메틸) 카르바모일]-2-메틸프로필]카르바모일]-2-메틸프로필](메틸)아미노]프로필) 카르바메이트
Figure pct00055
화합물 1Y (50 mg, 0.08 mmol, 1.00 equiv)를 화합물 1ZF (26.2 mg, 0.09 mmol, 1.20 equiv), DIEA (37.7 mL) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N’,N’-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 43.3 mg, 0.11 mmol, 1.50 equiv)가 존재하는 2 mL DMF에 용해하였다. 반응물을 밤새 주위 온도에서 교반한 후, 10 mL 물로 희석하고 3 회 5 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 100 mg의 화합물 1ZG를 부분 정제 무색 오일 형태로 얻었다.
실시예 1: 화합물 1ZG (90 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)를 중성 분위기에서 2 mL DCM에 용해하고 용액을 얼음조로 냉각하였다. TFA (1 mL)를 첨가하고 반응물을 2 시간 동안 주위 온도에서 교반한 후, 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는7 분에 18 % 에서 31 % ACN 이어 2 분에 31 % 에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 1을 25 % 수율 (23 mg)의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Atlantis T3 column, 3 μm, 4.6 x 100 mm; 35℃; 1 mL / min, 수중 30 % 에서 60 % ACN (6 분에 20 mM 아세트산암모늄); ESI-(C44H73N7O6S, exact masse 827.53) m/z: 829 (MH+), 5.84 min (93.7 %, 254 nm).
1H NMR-(300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.85 - 7.80 (m, 1H); 7.69 - 7.66 (m, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 5H), 5.80 - 5.63 (m, 1H), 4.80 - 4.65 (m, 2H), 4.22 -4.00 (m, 1H), 3.89 - 0.74 (m, 58H).
실시예 2
(S)-2-((S)-2-(((2-아미노피리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00056
실시예 2A: tert-부틸 (S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00057
화합물 1D (2.5 g, 8.70 mmol, 1.00 equiv) 및 (1S,2R)-2-아미노-1-페닐프로판-1-올 (1.315 g, 8.70 mmol, 1.00 equiv)을 불활성 분위기에서 DMF (35 mL)에 녹였다. 용액을 0 ℃로 냉각시킨 후 DEPC (1.39 mL) 및 TEA (1.82 mL)를 적가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 0 ℃ 이어 4 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 200 mL 물로 희석하고 3회 50 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 50 mL KHSO4 (1 mol/L), 1회 50 mL NaHCO3 (sat.), 1회 50 mL NaCl (sat.)로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 3.6 g (98 %)의 화합물 2A를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 2B: (2R,3R)-N-((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)-3-메톡시-2-메틸-3-((S)-피롤리딘-2-일)프로판아미드2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00058
화합물 2A (2.7 g, 6.42 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 DCM (40 mL)에 녹인 후 0 ℃로 냉각하였다. TFA (25 mL)를 첨가하고 용액을 2 시간 0 ℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 4.4 g의 화합물 2B를 황색 오일 형태로 획득하였다.
실시예 2C: (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일) (메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00059
화합물 2B (4.4 g, 10.13 mmol, 1.00 equiv) 및 1W (5.31 g, 10.12 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 DCM (45 mL)에 용해하였다. 용액을 0℃로 냉각 후 DEPC (1.62 mL) 및 DIEA (8.4 mL)를 적가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 0 ℃에서 이후 주위 온도로 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 100 mL 물로 희석하고 3회 50 mL DCM로 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 50 mL KHSO4 (1 mol/L), 1회 50 mL NaHCO3 (sat.), 1회 50 mL NaCl (sat.)로 세척 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 3.3 g (39 %)의 화합물 2C를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 2D: (S)-2-아미노-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드
Figure pct00060
화합물 2C (300 mg, 0.36 mmol, 1.00 eq.)를 불활성 분위기에서 ACN (2 mL) 및 피페리딘 (0.5 mL)에 용해하였다. 용액을 주위 온도에서 밤새 교반한 후 감압으로 완전 건조할 때까지 증발시켰다. 잔류물을 DCM 및 MeOH의 혼합물 (1:100)로 실리카 칼럼에서 정제하여 150 mg (68 %)의 화합물 2D를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 2E: 메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)이소니코티네이트
Figure pct00061
메틸 2-아미노피리딘-4-카르복실레이트 (2 g, 13.14 mmol, 1.00 equiv)를 tert-부탄올 (20 mL)에 녹인 후 디-tert-부틸 디카르보네이트 (4.02 g, 18.42 mmol, 1.40 equiv)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 밤새 교반한 후 1M NaHCO3 수용액 (50 mL)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 고체를 여과하여 회수하고, 50 mL EtOH로 세척 후 진공 건조하여 2.5 g (75 %)의 화합물 2E를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 2F: tert-부틸 (4-(히드록시메틸)피리딘-2-일)카르바메이트
Figure pct00062
화합물 2E (2.5 g, 9.91 mmol, 1.00 equiv) 및 CaCl2 (1.65 g)를 EtOH (30 mL)에 용해하였다. 용액을 0℃로 냉각 후 NaBH4 (1.13 g, 29.87 mmol, 3.01 equiv)를 점차 첨가하였다. 용액을 밤새 주위 온도에서 교반 후 물 (50 mL)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 혼합물을 20 mL EtOAc로 3회 추출하였다. 유기상들을 모아, 2회 20 mL NaCl (sat.)로 세척 후 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 2.0 g (90 %)의 화합물 2F를 무색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 2G: tert-부틸 (4-포르밀피리딘-2-일)카르바메이트
Figure pct00063
화합물 2F (2.5 g, 11.15 mmol, 1.00 equiv)를 DCE (25 mL)에 녹인 후 19.4 g (223.14 mmol, 20.02 equiv)의 MnO2를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 70 ℃에서 교반 후 고체를 여과하여 제거하였다. 여과액을 건조될 때까지 증발시켜 1.4 g (57 %)의 화합물 2G를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 2H: 벤질 (S)-2-(((2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피리딘-4-일)메틸) (메틸)아미노)-3-메틸부타노에이트
Figure pct00064
화합물 2G (2.3 g, 10.35 mmol, 1.00 equiv)를 화합물 1ZC (2.93 g, 11.37 mmol, 1.10 equiv), DIEA (5.39 g, 41.71 mmol, 4.03 equiv) 및 NaBH(OAc)3 (4.39 g, 20.71 mmol, 2.00 equiv)이 존재하는 25 mL THF에 용해하였다. 반응 혼합물을 6 시간 동안 주위 온도에서 교반 후 60 mL NaHCO3 (sat.)로 중화시키고 3 회 20 mL AcOEt로 추출하였다. 유기상들을 모아, 20 mL NaCl (sat.)로2회 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:15)로 실리카 칼럼에서 정제하여 2.7 g (61 %)의 화합물 2H를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예-2I: (S)-2-(((2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피리딘-4-일)메틸) (메틸)아미노)-3-메틸부탄산
Figure pct00065
화합물 2H (500 mg, 1.17 mmol, 1.00 equiv)를 Pd/C (250 mg)이 존재하는 10 mL AcOEt 및 2 mL 메탄올에 용해하고, 주위 온도 및 대기압에서3 시간 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 254 mg (64 %)의 화합물 2I를 무색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 2J: tert-부틸 (4-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-부틸)-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-3,6-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7-디옥소-11-옥사-2,5,8-트리아자도데실)피리딘-2-일) 카르바메이트
Figure pct00066
화합물 2J를 DMF (3 mL) 중의 아민 2D (85.2 mg, 0.14 mmol, 1.50 equiv), 산 2I (31.7 mg, 0.09 mmol, 1.00 equiv), HATU (42.9 mg, 0.11 mmol, 1.20 equiv) 및 DIEA (36.7 mg, 0.28 mmol, 3.02 equiv)으로부터 화합물 1ZG와 유사한 방식으로 제조하였다. 건조될 때까지 증발 후, 100 mg의 조질 생성물을 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 2: 화합물 2J (100 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv)를 2 mL DCM 및 1 mL TFA 중에 용해하였다. 반응물을 1 시간 동안 주위 온도에서 교반한 후, 감압 농축하였다. 잔류물 (80 mg)을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10 분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 2를 6 % (6.3 mg) 수율의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.8-mL/min, 6 분에 수중 10 %에서 95 % ACN (0.05 % TFA)); ESI-(C45H73N7O7, exact mass 823.56) m/z: 824.5 (MH+) 및 412.9 (M.2H+/2, 100 %), 3.21 min (99.2 %, 210 nm)
1H-NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.81 - 7.79 (m, 1H); 7.39 - 7.29 (m, 5H); 6.61 - 6.59 (m, 2H); 4.84 - 4.52 (m, 1H); 4.32 - 4.02 (m, 1H); 3.90 - 2.98 (m, 10H); 2.90 - 2.78 (m, 1H); 2.55 - 0.81 (m, 39H).
실시예 3
메틸 ((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(피리딘-4-일메틸)아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄o일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트, 트리플루오로아세트산
Figure pct00067
실시예 3A: tert-부틸 (S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00068
화합물 1D (3 g, 10.44 mmol, 1.00 equiv) 및 메틸 (S)-2-아미노-3-페닐프로파노에이트 (2.25 g, 12.55 mmol, 1.20 equiv)를 불활성 분위기에서 DMF (40 mL)에 녹였다. 용액을 0 ℃로 냉각하고 DEPC (1.67 mL, 1.05 equiv) 및 TEA (3.64 mL, 2.50 equiv)를 적가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 0 ℃ 이어 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 100 mL 물로 희석하고 3회 50 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 100 mL KHSO4 (1 mol/L), 1회 100 mL NaHCO3 (sat.), 1회 100 mL NaCl (sat.)로 세척 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 4 g (85 %)의 화합물 3A를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 3B: 메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-3-((S)-피롤리딘-2-일)프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트의2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00069
화합물 3A (5 g, 11.15 mmol, 1.00 equiv)을 불활성 분위기에서 DCM (40 mL)에 용해하였다. TFA (25 mL)를 첨가하고 용액을 2 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 8 g의 화합물 3B를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 3C: 메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트
Figure pct00070
화합물 3B (8.03 g, 17.36 mmol, 1.00 equiv) 및 1W (9.1 g, 17.34 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 DCM (80 mL)에 용해하였다. 용액을 0 ℃로 냉각 후 DEPC (2.8 mL) 및 DIEA (12 mL)를 적가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 0 ℃에서 이어 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 200 mL 물로 희석하고 50 mL DCM으로3회 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 50 mL KHSO4 (1 mol/L), 1회 50 mL NaHCO3 (sat.), 1회 50 mL NaCl (sat.)로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 5 g (34 %)의 화합물 3C를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 3D: 메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트
Figure pct00071
화합물 3C (5.5 g, 6.43 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 DMF (100 mL) 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드 용액 (TBAF, 2.61 g, 9.98 mmol, 1.55 quiv)에 녹였다. 용액을 주위 온도에서 2 시간 교반 후 100 mL 물로 희석하고 3회 50 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 3.3 g (81 %)의 화합물 3D를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 3E: 벤질 (S)-3-메틸-2-(메틸(피리딘-4-일메틸)아미노) 부타노에이트
Figure pct00072
피리딘-4-카르브알데히드 (1 g, 9.34 mmol, 1.00 equiv)를 화합물 1ZC (2.9 g, 11.25 mmol, 1.21 equiv) 및 티타늄 이소프로폭시드 (IV) (4.19 mL, 1.40 equiv)가 존재하는 10 mL 1,2-디클로로에탄 (DCE)에 용해하였다. 혼합물을 주위 온도에서 30 분 교반 후 2.77 g의 NaBH(OAc)3 (13.07 mmol, 1.40 equiv)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반한 후 100 mL 물로 중화하고 혼합물을 3 회 50 mL AcOEt로 추출하였다. 유기상들을 모아 완전히 건조될 때까지 증발하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:20)로 실리카 칼럼에서 정제하여 1.3 g (45 %)의 화합물 3E를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예-3F: (S)-3-메틸-2-(메틸(피리딘-4-일메틸)아미노)부탄산
Figure pct00073
화합물 3E (800 mg, 2.56 mmol, 1.00 equiv)를 Pd/C (300 mg)의 존재에서 30 mL AcOEt에 녹이고 3 시간 동안 주위 온도 및 대기압에서 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하였다. 잔류물을 DCM 및 MeOH의 혼합물 (100:1 내지 5:1)로 실리카 칼럼에서 정제하여 100 mg (18 %)의 화합물 3F를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 3: 화합물 3D (50 mg, 0.08 mmol, 1.00 equiv) 및 3F (26.34 mg, 0.12 mmol, 1.50 equiv)를 3 mL DCM에 용해하였다. 용액을 0 ℃로 냉각 후 0.018 mL DEPC 및 0.0392 mL DIEA를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 이어 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응물을 감압 농축하고 잔류물 (70 mg)을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 3을 27 % (20 mg) 수율의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8분에 수중 10 %에서 95 % ACN (0.05 % TFA)); ESI-(C46H72N6O8, exact mass 836.5) m/z: 837.5 (MH+) 및 419.4 (M.2H+/2 (100 %)), 7.04 min (90.0 %, 210 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.76 - 8.74 (m, 2H); 8.53 - 8.48 (m, 0.4H, NHCO incomplete exchange); 8.29 - 8.15 (m, 0.8H, NHCO incomplete exchange); 8.01 (s, 2H), 7.31 - 7.22 (m, 5H), 4.88 - 4.68 (m, 3H); 4.31 - 4.07 (m, 2H); 3.94 - 2.90 (m, 18H); 2.55 - 0.86 (m, 38H).
실시예 4
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(피리딘-4-일메틸)아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 트리플루오로아세트산
Figure pct00074
실시예 4: 화합물 3 (100 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv)을 물 (5 mL), ACN (5 mL) 및 피페리딘 (2.5 mL)의 혼합물에 용해하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 후 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 20 mg (20 %)의 화합물 4를 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8분에 수중 10 %에서 95 % ACN (0.05 % TFA)); ESI-(C45H70N6O8, exact mass 822.5) m/z: 823.5 (MH+) 및 412.4 (M.2H+/2, 100 %), 6.84 min (89.1 %, 210 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.79 - 8.78 (m, 2H); 8.09 (m, 2H); 7.30 - 7.21 (m, 5H); 4.80 - 4.80 (m, 1H), 4.36 - 0.87 (m, 58H).
실시예 5
(S)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(피리딘-4-일메틸)아미노)부탄아미도)부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00075
실시예 5: 화합물 5를 DCM (3 mL) 중의 아민 1Y (50 mg, 0.08 mmol, 1.00 equiv), 산 3F (25 mg, 0.11 mmol, 1.48 equiv), DEPC (0.0174 mL, 1.5 equiv) 및 DIEA (0.0377 mL, 3 equiv)로부터 화합물 3와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (80 mg)을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 20 mg (27 %)의 화합물 5를 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV (Eclipse Plus C8, 3.5 μm column, 4.6 x 150 mm; 40℃; 1.0 mL/min, 18분에 수중 40 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C47H71N7O8S, exact mass 861.5) m/z: 862.5 (MH+) 및 431.9 (M.2H+/2, 100 %), 12.69 min (88.9 %, 254 nm).
1H NMR: 400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.78 (d, 2H, J = 6.8 Hz); 8.27 - 8.16 (m, 0.4H, NHCO incomplete exchange);-8.08 (d, 2H, J = 6.4 Hz); 7.85 - 7.79 (m, 1H); 7.60 - 7.50 (m, 1H), 7.19 - 7.38 (m, 5H), 5.79 - 5.60 (m, 1H); 4.90 - 4.69 (m, 2H); 4.34 - 2.97 (m, 18H); 2.59 - 0.81 (m, 35H).
실시예 6
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-아미노프로필) (메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 비스 트리플루오로아세트산
Figure pct00076
실시예 6A: 메틸 (2S)-2-[(2R)-2-[(R)-[(2S)-1-[(3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(3-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]프로필)(메틸)아미노]-3-메틸 부탄아미도]-N,3-디메틸부탄아미도]-3-메톡시-5-메틸헵타노일]피롤리딘-2-일](메톡시)메틸]프로판아미도]-3-페닐프로파노에이트
Figure pct00077
화합물 3D (157.5 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv)를 0℃ 불활성 분위기에서 카르복실산 1ZF (78.7 mg, 0.27 mmol, 1.10 equiv), DEPC (46 μl) 및 DIEA (124 μl)가 존재하는 3 mL DCM에 녹였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 저온에서 교반하고 냉각조를 치우고 4 시간 동안 계속하여 교반하였다. 이어 감압 농축하여 200 mg의 화합물 6A를 조질 황색 오일 형태로 얻었다. 그대로 다음 단계에서 사용하였다.
실시예 6: 화합물 6A (200 mg, 0.22 mmol, 1.00 equiv)를 0℃의 불활성 분위기에서 2 mL DCM에 용해하였다. TFA (1 mL)를 적가하고 냉각조를 제거하였따. 반응 혼합물을 1 시간 동안 주위 온도에서 교반 후 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기), 60 mg (26 %, 두 단계들에서 수율)의 화합물 6을 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Zorbax Eclipse Plus C8, 3.5 μm, 4.6 x 150 mm; 1 mL/min, 40℃, 18분에 수중 30 내지 80 % 메탄올 (0.1 % H3PO4)); ESI-(C43H74N6O8, exact mass 802.56) m/z: 804 (MH+); 11.50 min (91.5 %, 210 nm).
1H NMR (300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.52 (d, 0.3H, NHCO incomplete exchange); 8.25 (d, 0.5H, NHCO incomplete exchange); 7.30-7.22 (m, 5H); 4.9-4.6 (m, 3H); 4.2-4.0 (m, 1H); 4.0-0.86 (m, 61H).
참고 실시예 7
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-아미노프로필) (메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일) 피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 비스 트리플루오로아세트산
Figure pct00078
실시예 7: 화합물 6 (70 mg, 0.08 mmol, 1.00 equiv)을 물 (5 mL), ACN (2.5 mL) 및 피페리딘 (5 mL)의 혼합물에 용해하였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반 후, 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; UV 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기), 14.6 mg (21 %)의 화합물 7를 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 1.5 mL/min, 40℃, 8 분에 수중 0 내지 80 % 메탄올 (0.05 % TFA)); ESI-(C42H72N6O8, exact mass 788.54) m/z: 790 (MH+), 5.71 min (96.83 %, 210 nm).
1H NMR (300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.42 (d, 0.3H, NHCO incomplete exchange); 8.15 (d, 0.2H, NHCO incomplete exchange); 7.31-7.21 (m, 5H); 4.9-4.6 (m, 3H); 4.25-4.0 (m, 1H); 4.0-0.86 (m, 59H).
실시예 8
(S)-2-((S)-2-(((2-아미노피리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00079
실시예 8A: tert-부틸 (4-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-부틸)-3,6-디이소프로필-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-2,8-디메틸-4,7-디옥소-11-옥사-2,5,8-트리아자도데실)피리딘-2-일) 카르바메이트
Figure pct00080
화합물 8A를 DCM (3 mL) 중의 아민 1Y (39 mg, 0.06 mmol, 1.00 equiv), 산 2I (20 mg, 0.06 mmol, 1.00 equiv), HATU (27 mg, 0.07 mmol, 1.20 equiv) 및 DIEA (23.2 mg, 0.18 mmol, 3.01 equiv)로부터 화합물 2J와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 정제하지 않았다.
실시예 8: 화합물 8을 중간체 8A (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 유사한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (100 mg)을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 7 분에 18 % 에서 31 % ACN 이어 2 분에 31 % 에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 8을 8 % (8 mg) 수율로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Atlantis T3 column, 3 μm, 4.6 x 100 mm; 35℃; 1.8 mL / min, 7분에 수중 25 %에서 80 % ACN (0.05 % TFA)); ESI-(C47H72N8O6S, exact mass 876.5) m/z: 877.5 (MH+) 및 439.5 (M.2H+/2, 100 %), 4.87 min (95.1 %, 254 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.83 - 7.78 (m, 2H); 7.56 - 7.52 (m, 1H); 7.34 - 7.17 (m, 5H); 6.64 - 6.62 (m, 2H); 5.77 - 5.61 (m, 1H); 4.86 - 4.68 (m, 2H); 4.25 - 4.05 (m, 1H); 3.87 - 2.83 (m, 17H); 2.56 - 0.84 (m, 37H).
실시예 9
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(((2-아미노피리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 트리플루오로아세트산
Figure pct00081
실시예 9A: 메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(((2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)피리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)-3-메틸 부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트
Figure pct00082
화합물 9A를 DCM (5 mL) 중의 아민 3D (170 mg, 0.27 mmol, 1.00 equiv), 산 2I (99.7 mg, 0.30 mmol, 1.10 equiv), DEPC (0.049 mL, 1.05 equiv) 및 DIEA (0.133 mL, 3.00 equiv)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:1)로 실리카 칼럼에서 정제하여 200 mg (78 %)의 화합물 9A를 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
실시예 9: 화합물 9를 DCM (4 mL) 및 TFA (2 mL) 중의 중간체 9A (200 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 9를 수율 10 % (20 mg)로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C46H73N7O8, exact mass 851.6) m/z: 852.5 (MH+) 및 426.9 (M.2H+/2, 100 %), 6.92 min (92.7 %, 254 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.51 - 8.45 (m, 0.5H, NH incomplete exchange); 8.30 - 8.24 (m, 0.3H, NH incomplete exchange); 8.17 - 8.07 (m, 0.8H, NH incomplete exchange); 7.79 - 7.77 (m, 1H); 7.36 - 7.18 (m, 5H); 7.21 - 7.16 (m, 1H); 6.94 - 6.89 (m,1H); 4.85 - 4.65 (m, 3H); 4.20 - 3.10 (m, 20H); 3.00 - 2.85 (m, 2H); 2.55 - 0.80 (m, 36H).
실시예 10
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(((2-아미노피리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 트리플루오로아세트산
Figure pct00083
실시예 10: 화합물 9 (100 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv)를 물 (5 mL), ACN (5 mL) 및 피페리딘 (2.5 mL)의 혼합물에 용해하였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반하고 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 32.2 mg (33 %)의 화합물 10을 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C45H71N7O6, exact mass 837.5) m/z: 838.5 (MH+) 및 419.9 (M.2H+/2, 100 %), 6.81 min (97.7 %, 220 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.41 - 8.32 (m, 0.3H, NH incomplete exchange); 8.20 - 8.07 (m, 0.8H, NH incomplete exchange); 7.82 - 7.75 (m, 1H); 7.36 - 7.158 (m, 5H); 7.12 - 7.03 (m, 1H); 6.94 - 6.88 (m,1H); 4.85 - 4.66 (m, 3H); 4.20 - 3.10 (m, 16H); 3.00 - 2.85 (m, 2H); 2.57 - 0.80 (m, 37H).
실시예 11
(S)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(4-(메틸아미노)페네틸)아미노) 부탄아미도)부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00084
실시예 11A: tert-부틸 N-[4-(2-히드록시에틸)페닐]카르바메이트
주위 온도에서 THF 중 2-(4-아미노페닐)에탄올과 BOC2O의 반응으로 화합물 11A를 75 % 수율로 얻었다.
실시예 11B: tert-부틸 N-[4-(2-옥소에틸)페닐]카르바메이트
Figure pct00085
화합물 11A (2.5 g, 10.5 mmol, 1.00 equiv)를 25 mL DCM에 녹인 후 -78℃로 냉각시켰다. DCM (10 mL) 중의 Dess-Martin 페리오디난 용액 (DMP, 6.71 g, 15.8 mmol, 1.5 equiv)을 적가하였다. 냉각조를 치우고 1 시간 동안 주위 온도에서 계속 교반하였다. 반응물을 중탄산나트륨-포화 수용액 및 Na2S2O3-포화 수용액의 50/50 혼합물60 mL로 중화하였다. 얻어진 용액을 30 mL EtOAc로 3 회 추출하였다. 유기상들을 모아, 2회 NaCl-포화 수용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc/PE 1/15)에서 정제하여 1.0 g (40 %)의 화합물 11B를 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
실시예 11C: 벤질 (2S)-2-[[2-(4-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]페닐) 에틸](메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트.
Figure pct00086
화합물 1ZC (3.5 g, 13.6 mmol, 1.1 equiv)를 DIEA (6.4 g, 49.7 mmol, 4.0 equiv), 알데히드 11B (2.9 g, 12.3 mmol, 1.0 equiv) 및 트리아세톡시수소화붕소나트륨 (5.23 g, 49.7 mmol, 2.0 equiv)이 존재하는 THF (30 mL)에 녹였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반한 후, 60 mL 중탄산나트륨-포화 용액으로 중화하였다. 얻어진 용액을 3 회 30 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 2회 NaCl-포화 수용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc/PE 1:20)로 정제하여 3.7 g (68 %)의 화합물 11C를 황색 오일 형태로 획득하였다.
실시예 11D: (2S)-2-[[2-(4-[[(tert-부톡시)카르보닐]아미노]페닐)에틸] (메틸)아미노]-3-메틸부탄산
Figure pct00087
화합물 11C (2 g, 4.5 mmol, 1 equiv)를 Pd/C (2 g)이 존재하는 10 mL 메탄올에 용해하고 2 시간 동안 정상 온도 및 압력에서 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 1.2 g (75 %)의 화합물 11D를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 11E: (2S)-2-[[2-(4-[[(tert-부톡시)카르보닐](메틸)아미노]페닐) 에틸](메틸) 아미노]-3-메틸부탄산
Figure pct00088
화합물 11D (1.2 g, 3.4 mmol, 1.00 equiv)를 불활성 분위기에서 THF (20 mL)에 용해하였다. 반응물을 얼음조로 냉각한 후 NaH (오일 중 60 %, 549 mg, 13.7 mmol, 4.0 equiv)를 분량씩 첨가하고, 이어 요오드화메탄 (4.9 g, 34 mmol, 10 equiv)을 첨가하였다. 반응물을 밤새 주위 온도에서 교반한 후, 물로 중화하고 100 mL EtOAc로 세척하였다. 1N HCl로 수용액 pH를 6-7로 조정하였다. 본 수용액을 3 회 100 mL EtOAc로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 800 mg (64 %)의 화합물 11E를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 11F: tert-부틸 N-[4-(2-[[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-2-[[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]카르바모일]에틸]피롤리딘-1-일]-5-메틸-1-옥소헵탄-4일] (메틸)카르바모일]-2-메틸프로필]카르바모일]-2-메틸프로필](메틸)아미노] 에틸)페닐]-N- 메틸카르바메이트
Figure pct00089
화합물 11F를 아민 1Y (150 mg, 0.22 mmol, 1.2 equiv) 및 산 11E (70 mg, 0.19 mmol, 1.0 equiv)로부터 화합물 6A와 유사한 방식으로 제조하였다. 실리카 겔 (EtOAc/PE 1:1)에서 정제 후 100 mg (52 %)의 원하는 생성물을 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
실시예 11: 화합물 11을 중간체 11F (100 mg, 0.1 mmol)로부터 화합물 1과 유사한 방식으로 제조하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 11을 수율 39 % (39.7 mg)의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Eclipse Plus C8, 3.5 μm, 4.6 x 150 mm; 1 mL/min, 40℃, 18 분에 수중 50 내지 95 % 메탄올 (0.05 % TFA)); ESI-(C50H77N7O6S, exact mass 903.57) m/z: 904.5 (MH+), 7.53 min (93.68 %, 254 nm).
1H NMR (300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.84 (d, 0.5H, NHCO incomplete exchange); 8.7-8.5 (m, 0.9H, NHCO incomplete exchange); 7.76-7.73 (m, 1H); 7.55 - 7.4 (m, 1H); 7.28-7.22 (m, 7H); 7.08-7.05 (m, 2H); 5.51-5.72 (m, 1H); 4.9-4.80 (m, 2H); 4.3-0.7 (m, 60H).
실시예 12
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(4-(메틸아미노)페네틸)아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 트리플루오로아세트산
Figure pct00090
실시예 12: 화합물 1 합성에서 최종 상과 동일한 방식으로, 화합물 12를 아민 3D (118 mg, 0.19 mmol) 및 산 11E (82 mg, 0.22 mmol)로부터 두 단계로 제조하였다. 최종 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 12를 7 % (13.7 mg) 수율로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Eclipse Plus C8, 3.5 μm, 4.6 x 150 mm; 1 mL/min, 40℃, 18 분에 수중 40 내지 95 % 메탄올 (0.05 % TFA)); ESI-(C49H78N6O8, exact mass 878.59) m/z: 879.7 (MH+), 10.07 min (90.6 %, 254 nm).
1H:NMR (300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.40 (se, 2H); 7.38-7.22 (m, 7H); 4.95-4.7 (m, 3H); 4.2-4.0 (m, 1H); 3.9-0.86 (m, 62H).
실시예 13
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(4-(메틸아미노)페네틸)아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸 헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 트리플루오로아세트산
Figure pct00091
실시예 13: 화합물 13을 화합물 12 (100 mg, 0.10 mmol)로부터 화합물 7과 유사한 방식으로 제조하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 13을 20 % (20 mg) 수율로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 1.5 mL/min, 40℃, 8 분에 수중 10 내지 95 % 메탄올 (0.05 % TFA)); ESI-(C48H76N6O8, exact mass 864.57) m/z: 865.6 (MH+), 6.05 min (90.9 %, 210 nm).
1H NMR: (300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.32-7.19 (m, 9H); 4.9-4.65 (m, 3H); 4.2-4.0 (m, 1H); 3.9-0.86 (m, 59H).
실시예 14
(S)-2-((S)-2-((3-아미노벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00092
실시예 14A: tert-부틸 (3-(히드록시메틸)페닐) 카르바메이트
Figure pct00093
(3-아미노페닐)메탄올 (3 g, 24.36 mmol, 1.00 equiv)을 THF (60 mL)에 녹인 후 디-tert-부틸 디카르보네이트 (6.38 g, 29.23 mmol, 1.20 equiv)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반하고 반응물을 200 mL 물로 희석하였다. 생성물을 3 회 100 mL AcOEt로 추출하고 유기 상들을 모았다, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 조질 생성물 (13.85 g의 화합물 14A)을 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 14B: tert-부틸 (3-포르밀페닐)카르바메이트
Figure pct00094
화합물 14A (13.8 g, 61.81 mmol, 1.00 equiv)를 DCE (400 mL)에 녹이고 MnO2 (54 g, 621.14 mmol, 10.05 equiv)를 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 3 일 동안 교반 후 고체들을 여과하여 제거하였다. 여과액을 증발시켜 완전히 건조하고 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:30)로 실리카 칼럼에서 정제하여 3 g (22 %)의 화합물 14B를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 14C: 벤질 (S)-2-((3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)벤질) (메틸)아미노)-3-메틸부타노에이트
Figure pct00095
화합물 14B (1 g, 4.52 mmol, 1.00 equiv)를 화합물 1ZC (1.16 g, 4.50 mmol, 1.00 equiv), DIEA (3 mL) 및 NaBH(OAc)3 (1.92 g, 9.06 mmol, 2.01 equiv) 존재의 20 mL THF에 녹였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반한 후 100 mL 물로 중화하고 3 회 50 mL AcOEt로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:50)로 실리카 칼럼에서 정제하여 1.9 g (99 %)의 화합물 14C를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 14D: (S)-2-((3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄산
Figure pct00096
화합물 14C (1 g, 2.34 mmol, 1.00 equiv)를 Pd/C (400 mg)가 존재하는 30 mL AcOEt 및 4 mL 메탄올에 용해하고 1 시간 동안 주위 온도 및 대기압에서 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 680 mg (86 %)의 화합물 14D를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 14E: tert-부틸 (3-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-부틸)-3,6-디이소프로필-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-2,8-디메틸-4,7-디옥소-11-옥사-2,5,8- 트리아자도데실)페닐) 카르바메이트
Figure pct00097
화합물 14E를 DCM (3 mL) 중의 아민 1Y (100 mg, 0.15 mmol, 1.00 equiv), 산 14D (102.27 mg, 0.30 mmol, 2.00 equiv), DEPC (0.053 mL) 및 DIEA (0.046 mL)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (80 mg)을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:1)로 실리카 칼럼에서 정제하여 100 mg (67 %)의 화합물 14E를 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
실시예 14: 화합물 14를 중간체 14E (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (80 mg)을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 14를 수율 10 % (10 mg)로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Eclipse plus C8 column, 3.5 μm, 4.6 x 150 mm; 40℃; 1.0 mL / min, 18분에 수중 40 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C48H73N7O6S, exact mass 875.5) m/z: 876.5 (MH+) 및 438.9 (M.2H+/2, 100 %), 11.35 min (95.6 %, 210 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.92 - 8.86 (m, 0.4H, NH incomplete exchange); 8.70 - 8.54 (m, 0.6H, NH incomplete exchange); 7.88 - 7.78 (m, 1H); 7.60 - 7.50 (m, 1H); 7.45 - 6.97 (m, 9H); 5.80 - 5.65 (m, 1H); 4.85 - 4.70 (m, 1H); 4.40 - 0.80 (m, 56H).
실시예 15
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-아미노벤질) (메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 트리플루오로아세트산
Figure pct00098
실시예 15A: 메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트
Figure pct00099
화합물 15A를 DCM (5 mL) 중의 아민 3D (200 mg, 0.32 mmol, 1.00 equiv), 산 14D (212.6 mg, 0.63 mmol, 2.00 equiv), DEPC (0.1103 mL) 및 DIEA (0.157 mL, 3.00 equiv)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:1)로 실리카 칼럼에서 정제하여 200 mg (67 %)의 화합물 15A를 황색 고체 형태로 획득하였다.
실시예 15: 화합물 15를 중간체 15A (200 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv)에서 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters UV 검출기 2545). 화합물 15를 수율 19 % (38.6 mg)의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C47H74N6O8, exact mass 850.5) m/z: 851.5 (MH+) 및 426.4 (M.2H+/2, 100 %), 6.61 min (91.1 %, 210 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.53 - 7.42 (m, 1H); 7.35 - 7.18 (m, 8H); 4.88 - 4.79 (m, 2H); 4.42 - 4.00 (m, 3H); 3.93 - 2.71 (m, 22H); 2.61 - 0.81 (m, 33H).
실시예들 19 및 20
Figure pct00100
화합물 19 및 20을 아민 1Y 및 1ZC 및 상응하는 알데히드로부터 화합물 1과 유사한 방식으로 제조하였다.
화합물 19 제조에 포함되는 tert-부틸 4-포르밀페닐 탄산염을 다음과 같이 단일 단계로 제조하였다: 4-히드록시벤즈알데히드 (2.5 g, 20.5 mmol, 1.0 equiv)를 불활성 분위기에서 18-크라운-6 (0.25 g) 및 탄산칼륨 (5 g)가 존재하는 THF (20 mL)에 용해하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 이어 디-tert-부틸 디카르보네이트 (5.8 g, 26.58 mmol, 1.30 equiv)를 첨가하였다. 1 시간 동안 저온에서 계속 교반한 후 반응물을 30 mL 물로 중화하였다. 얻어진 용액을 200 mL EtOAc로3회 추출하였다. 유기상들을 모아, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과 및 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc/PE 1:10)로 정제하여 4.2 g (92 %)의 tert-부틸 4-포르밀페닐 탄산염을 옅은 황색 고체 형태로 얻었다.
화합물 20 제조에 포함되는 4-니트로벤즈알데히드는 상업적으로 입수하였다.
화합물 20 합성은 니트로기 환원으로 완료되었다. 이는 다음과 같이 수행되었다: (2S)-N-[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-2-[[(1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일]카르바모일]-1-메톡시-2-메틸에틸]피롤리딘-1-일]-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N,3-디메틸-2-[(2S)-3-메틸-2-[메틸[(4-니트로페닐)메틸]아미노]부탄아미도]부탄아미드 (40 mg, 0.05-mmol, 1.0 equiv)를 15 mL 에탄올에 녹였다. 무수 염화주석 (II) (317 mg, 1.4 mmol, 30 equiv)을 첨가하고 용액을 3 일 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응물을 50 mL 물로 중화한 후, 50 mL EtOAc로 3회 추출하였따. 유기상들을 모아, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 화합물 20을 조질 상태로 얻었다.
No 명칭 x R 순도* 정량
18 (S)-2-((S)-2-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)(메틸) 아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노) 프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산 1
Figure pct00101
 94.5 % 46.4 mg
19 (S)-2-((S)-2-((4-히드록시벤질) (메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노) 프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산 1
Figure pct00102
 93.2 % 21.6 mg
20 (S)-2-((S)-2-((4-아미노벤질) (메틸)아미노)-3-메틸 부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산 1
Figure pct00103
 96.7 % 21.1 mg
* 화합물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기), 상응하는 TFA 염을 백색 고체 형태로 얻었다.
최종 생성물 특정: 화합물 19 LC/MS/UV-ESI:
(C48H72N6O7S, exact mass 876.52) m/z 877 (MH+), 439 [100 %, (M.2H+)/2]; UV: RT = 1.76 min (93.2 %, 220 nm). 화합물 20 1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.85-7.80 (m, 1H); 7.6-7.5 (m, 1H); 7.4-7.15 (m, 5H); 7.1-7.05 (m, 2H); 6.73-6.70 (m, 2H); 5.8-5.55 (m, 1H); 5.0-4.7 (m, 2H); 4.25-4.05 (m, 1H); 4.0-0.8 (m, 54H). LC/MS/UV ESI:-(C48H73N7O7S, exact mass 875.53) m/z 876 (MH+), 439 [75 %, (M.2H+)/2]; UV: RT = 4.83 min (96.8 %, 254 nm). 1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.85-7.80 (m, 1H); 7.6-7.5 (m, 1H); 7.4-7.1 (m, 7H); 6.76-6.72 (m, 2H); 5.8-5.55 (m, 1H); 4.9-4.65 (m, 2H); 4.25-4.05 (m, 1H); 4.0-0.8 (m, 54H).
실시예들 23 및 24
Figure pct00104
화합물 23 및 24를 아민 1Y를 아민 2D로 교체하여 화합물 19 및 20과 유사한 방식으로 제조하였다.
No 명칭 x R 순도* 정량
23 (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-2-((S)-2-((4-히드록시벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산 1
Figure pct00105
 98.5 % 5.8 mg
24 (S)-2-((S)-2-((4-아미노벤질) (메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산 1
Figure pct00106
 99.1 % 6.9 mg
* 화합물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기), 상응하는 TFA 염을 백색 고체 형태로 얻었다.
최종 생성물 특정: 화합물 23 LC/MS/UV-(ESI)
(C46H73N5O8, exact mass 823.55) m/z 824 (MH+), 846 (MNa+), 413 (100 %, (M.2H+)/2); UV: 4.76 min (98.5 %, 215 nm).-1H NMR (400MHz, CDCl3, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.5-7.2 (m, 5H); 7.9-7.75 (m, 2H); 5.5-5.3 (m, 1H); 4.9-4.6-(m, 2H); 4.55-4.15 (m, 4H); 4.0-0.8 (m, 55H). 화합물 24 LC/MS/UV-(ESI)-(C46H74N6O7, exact mass 822.56) m/z 823 (MH+), 845 (MNa+), 861 (MK+); UV: 3.68 min (99.15 %, 254 nm).-1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.0-7.7 (m, 0.5H, NHCO incomplete exchange); 7.5-7.0 (m, 7H); 6.75-6.65 (m, 2H); 4.85-4.5 (m, 2H); 4.4-4.05 (m, 2H); 4.0-0.8 (m, 56H).
실시예 25
(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(피리딘-4-일메틸)아미노)부탄아미도)부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00107
실시예 25: 화합물 25를 DCM (3 mL) 중의 아민 2D (50 mg, 0.08 mmol, 0.67 equiv), 산 3F (27.56 mg, 0.12-mmol, 1.00 equiv), DEPC (0.0189 mL) 및 DIEA (0.041 mL)로부터 화합물 3과 유사한 방식으로 제조하였다. 건조될 때까지 증발 후 조질 생성물 (80 mg)을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 25를 수율 17 % (20 mg)로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Waters XBridge Shield RP18 column, 3.5 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.0 mL / min, 13 분에 수중 50 %에서 85 % MeOH (0.05 % TFA) 이어 5분에 85 % MeOH) ESI-(C45H72N6O7, exact mass 808.6) m/z: 809.5 (MH+) 및 405.4 (M.2H+/2, 100 %), 10.60 min (87.0 %, 210 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.79 (s, 2H); 8.26 - 8.14 (m, 0.6H, NH incomplete exchange); (8.12 - 8.00 (m, 2H); 7.50 - 7.20 (m, 5H); 4.85 - 4.52 (m, 3H); 4.37 - 4.02 (m, 3H); 4.00 - 3.40 (m, 10H); 3.25 - 2.95 (m, 3H); 2.63 - 0.80 (m, 41H).
실시예 27
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-히드록시페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 트리플루오로아세트산
Figure pct00108
실시예 27: 화합물 27을 DCM (3 mL) 중의 아민 3D (70 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv), 산 49C (55.5 mg, 0.22-mmol, 2.00 equiv), DEPC (0.034 mL, 2.00 equiv) 및 DIEA (0.055 mL, 3.00 equiv)로부터 화합물 3과 유사한 방식으로 제조하였다. 조질 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10 분에 20 %에서 45 % ACN 이어 2 분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 27을 3 % (2.9 mg) 수율의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV (Eclipse Plus C8 column, 3.5 μm, 4.6 x 150 mm; 40℃; 1.5 mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C48H75N5O9, exact mass 866.56) m/z: 866.5 (MH+) 및 433.9 (M.2H+/2, 100 %), 6.61 min (89.1 %, 210 nm).
1H NMR (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.70 - 8.49 (m, 0.9 H, NH/OH incomplete exchange); 8.30 - 8.22 (m, 0.3H, NH incomplete exchange); 7.36 - 7.02 (m, 7H); 6.86 - 6.62 (m, 2H); 4.82 - 4.69 (m, 2H); 4.20 - 4.03 (m, 1H); 3.91 - 3.33 (m, 12H); 3.30 - 2.90 (m, 17H); 2.55 - 0.80 (m, 35H).
실시예 28
(S)-2-((S)-2-((3-아미노벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00109
실시예 28A: tert-부틸 (3-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-부틸)-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-3,6-디이소프로필-2,8-디메틸-4,7-디옥소-11-옥사-2,5,8-트리아자도데실)페닐)카르바메이트
Figure pct00110
화합물 28A를 DCM (3 mL) 중의 아민 2D (100 mg, 0.17 mmol, 1.00 equiv), 산 14D (111.25 mg, 0.33 mmol, 2.00 equiv), DEPC (0.058 mL) 및 DIEA (0.05 mL)로부터 화합물 3과 유사한 방식으로 제조하였다. 잔류물을 EtOAc 및 헥산의 혼합물 (1:1)로 실리카 칼럼에서 정제하여 100 mg (66 %)의 화합물 28A를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 28: 화합물 28을 중간체 28A (100 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (80 mg)을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 28을 20 % (20 mg) 수율의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C46H74N6O7, exact mass 822.56) m/z: 823.5 (MH+) 및 412.4 (M.2H+/2, 100 %), 12.45 min (87.2 %, 210 nm).
1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.47 - 7.20 (m, 5H); 7.10 - 7.01 (m, 1H); 6.80 - 6.56 (m, 3H); 4.82 - 4.52 (m, 3H); 4.33 - 4.03 (m, 2H); 3.91 - 3.82 (m, 0.5H); 3.75 - 3.35 (m, 9.5H); 3.28 - 3.10 (m, 2H); 2.79 - 2.90 (m, 1H); 2.60 - 2.40 (m, 2H); 2.30 - 0.80 (m, 40H).
실시예 29
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-아미노벤질) (메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 트리플루오로아세트산
Figure pct00111
실시예 29: 화합물 15 (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)를 물 (5 mL), ACN (5 mL) 및 피페리딘 (2.5 mL)의 혼합물에 용해하였다. 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반한 후 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 20 mg (20 %)의 화합물 29를 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Eclipse Plus C8 column, 3.5 μm, 4.6 x 150 mm; 40℃; 1.0 mL/min, 18분에 수중 40 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C46H72N6O8, exact mass 836.54) m/z: 837.5 (MH+) 및 419.4 (M.2H+/2, 100 %), 10.61 min (92.5 %, 210 nm).
1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.38 - 7.15 (m, 6H); 7.00 - 6.99 (m, 3H); 4.85 - 4.68 (m, 2H); 4.37 - 3.38 (m, 11H); 3.31 - 2.70 (m, 8H); 2.60 - 0.82 (m, 35H).
참고 실시예 35
(S)-2-((S)-2-((2-(2-아미노에톡시)에틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 비스 트리플루오로아세트산
Figure pct00112
실시예 35A: tert-부틸 (2-(2-히드록시에톡시)에틸)카르바메이트
Figure pct00113
2-(2-아미노에톡시)에탄올 (5 g, 47.56 mmol, 1.00 equiv)을 0℃ THF (100 mL)에 녹이고 수산화나트륨 (2 g, 50.00 mmol, 1.05 equiv)을 첨가하였다 (25 mL 수용액). THF (20 mL) 중의 디-tert-부틸 디카르보네이트 (10.38 g, 47.56 mmol, 1.00 equiv) 용액을 적가하고 반응물을 밤새 주위 온도에서 교반하였따. 반응물을 50 mL 물을 첨가하여 희석하고 생성물을 3 회 75 mL AcOEt로 추출하였다. 유기상들을 모아, 1회 100 mL NaCl (sat.)로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 9 g (92 %)의 화합물 35A를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 35B: tert-부틸 (2-(2-옥소에톡시)에틸)카르바메이트
Figure pct00114
DCM (20 mL) 중의 DMSO 용액 (3.46 mL, 5.00 equiv)을 DCM (20 mL) 중의 옥살릴 클로라이드 용액 (1.9 mL, 2.30 equiv)에 -78 ℃에서 질소하에 적가하였다. 첨가 후 (30 min), 용액을 30 분 교반한 후 20 mL DCM 중의 화합물 35A 용액 (2 g, 9.74 mmol, 1.00 equiv)을 첨가하였다. TEA (12.2 mL) 첨가 후, 반응물을 -78 ℃에서 30 분 이어 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 반응물을 100 mL 물을 첨가하여 희석하고 생성물을 50 mL AcOEt로3 회 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 1.9 g의 화합물 35B를 황색 오일 형태로 얻었다.
실시예 35C: 벤질 (S)-12-이소프로필-2,2,11-트리메틸-4-옥소-3,8-디옥사-5,11-디아자트리데칸-13-오에이트
Figure pct00115
화합물 35C를 THF (40 mL) 중의 아민 1ZC (2.4 g, 9.31 mmol, 1.00 equiv), 알데히드 35B (1.9 g, 9.35 mmol, 1.00 equiv), NaBH(OAc)3 (3.96 g, 18.68 mmol, 2.00 equiv) 및 DIEA (6.2 mL)로부터 화합물 14C와 동일한 방식으로 합성하였다. 반응 혼합물을 200 mL 물로 중화하고 3 회 100 mL AcOEt로 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하여 2.3 g의 화합물 35C를 황색 오일 형태로 획득하였다.
실시예 35D: (S)-12-이소프로필-2,2,11-트리메틸-4-옥소-3,8-디옥사-5,11-디아자트리데칸-13-산
Figure pct00116
화합물 35C (200 mg, 0.49 mmol, 1.00 equiv)를 Pd/C (200 mg)이 존재하는 10 mL EtOH에 용해하고 밤새 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 150 mg (96 %)의 화합물 35D를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 35E: tert-부틸 ((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2,14-디옥사-5,8,11-tri아자헥사데칸-16-일) 카르바메이트
Figure pct00117
화합물 35E를 DCM (3 mL) 중의 아민 1Y (70 mg, 0.11 mmol, 1.00equiv), 산 35D (40.6 mg, 0.13 mmol, 1.20 equiv), DEPC (0.0324 mL) 및 DIEA (0.0527 mL)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (100 mg, 98 %)을 황색 오일 형태로 분리하고 그대로 계속 사용하였다.
실시예 35: 화합물 35를 중간체 35E (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-010), SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 100 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 35를 수율 23 % (22.9 mg)로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5-mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C45H75N7O7S, exact mass 857.54) m/z: 858.5 (MH+) 및 429.9 (M.2H+/2, 100 %), 5.89 min (89.7 %, 210 nm).
1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) δ 8.9 - 8.5 (m, 0.5H, NHCO incomplete exchange), 7.8 - 7.7 (m, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 1H), 7.35 - 7.1 (m, 5H), 5.45 - 5.5 (m, 1H), 4.9 -4.6 (m, 1H), 4.3 - 0.75 (m, 62H).
실시예 45
(S)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(2-(피페라진-1-일)에틸)아미노)부탄아미도)부탄아미드, 트리스 트리플루오로아세트산
Figure pct00118
실시예 45A: tert-부틸 4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-카르복실레이트
Figure pct00119
2-(피페라진-1-일)에탄-1-올 (5 g, 38.41 mmol, 1.00 equiv)을 DCM (100 mL)에 용해하고, DCM (20 mL) 중의 디-tert-부틸 디카르보네이트 용액 (8.38 g, 38.40 mmol, 1.00 equiv)을 적가하였다. 반응물을 밤새 주위 온도에서 교반하였다. 반응을 증발시켜 완전히 건조시키고 잔류물을 200 mL AcOEt에 녹이고, 5 회 NaCl (sat.)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 8.5 g (96 %)의 화합물 45A를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 45B: tert-부틸 4-(2-옥소에틸)피페라진-1-카르복실레이트
Figure pct00120
화합물 45B를 화합물 45A (1 g, 4.34 mmol, 1.00 equiv), 옥살릴 클로라이드 (610 mg, 4.80 mmol, 1.12 equiv), TEA (2.13 g, 21.09 mmol, 4.90 equiv) 및 DMSO (0.82 g, 2.40 equiv)로부터 화합물 35B와 유사한 방식으로 제조하였다. 화합물 45B (0.8 g, 81 %)를 무색 오일 형태로 분리하였다.
실시예 45C: tert-부틸 (S)-4-(2-((1-(벤질옥시)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
Figure pct00121
화합물 45C를 THF (50 mL) 중의 아민 1ZC (720 mg, 2.79 mmol, 0.80 equiv), 알데히드 45B (800 mg, 3.50-mmol, 1.00 equiv), NaBH(OAc)3 (1.6 g, 7.55 mmol, 2.15 equiv) 및 DIEA (2.5 mL)로부터 화합물 14C와 동일한 방식으로 합성하였다. 반응 혼합물을 5 mL 물로 중화하고 5 mL AcOEt로 3회 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc/PE (3:1)로 정제하여 400 mg (33 %)의 화합물 45C를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 45D: (S)-2-((2-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄산
Figure pct00122
화합물 45C (400 mg, 0.92 mmol, 1.00 equiv)를 Pd/C (400 mg) 존재의 30 mL MeOH에 녹이고 1 시간 동안 주위 온도 및 대기압에서 수소화하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 300 mg (95 %)의 화합물 45D를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 45E: tert-부틸 4-((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자트리데칸-13-일)피페라진-1-카르복실레이트
Figure pct00123
화합물 45E를 DCM (3 mL) 중의 아민 1Y (60 mg, 0.09 mmol, 1.00 equiv), 산 45D (62.7 mg, 0.18 mmol, 2.00 equiv), DEPC (0.0278 mL) 및 DIEA (0.0452 mL)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (100 mg)을 그대로 계속하여 사용하였다.
실시예 45: 화합물 45를 중간체 45E (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 100 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충되는 물 / ACN; 구배10 분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 95 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 45를 수율 19 % (19.4 mg)의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Agilent ZORBAX SB-Aq column, 1.8 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.0 mL/min, 1분에 수중 2 % MeOH (0.05 % TFA) 이어 13분에 수중 2 %에서 95 % MeOH 이어 2분에 수중 5 % MeOH); ESI (C47H78N8O6S, exact mass 882.6) m/z: 883.5 (MH+) 및 442.4 (M.2H+/2, 100 %), 10.95 min (98.8 %, 210 nm).
1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers), 7.80 - 7.70 (m, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 1H), 7.31 - 7.09 (m, 5H), 5.70 - 5.51 (m, 1H), 4.80 - 4.60 (m, 1H), 4.20 - 0.75 (m, 66H).
실시예 46
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(2-(피페라진-1-일)에틸)아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 트리스 트리플루오로아세트산
Figure pct00124
실시예 46A: tert-부틸 4-((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11-디메틸-6,9-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자트리데칸-13-일)피페라진-1-카르복실레이트
Figure pct00125
화합물 46A를 DCM (5 mL) 중의 아민 3D (170 mg, 0.27 mmol, 1.00 equiv) 산 45D (184.6 mg, 0.54 mmol, 2.00 equiv), DEPC (0.0819 mL) 및 DIEA (0.133 mL)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물 (200 mg)을 그대로 계속하여 사용하였다.
실시예 46: 화합물 46을 중간체 46A (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 2와 동일한 방식으로 합성하였다. 조질 생성물을 제조용 HPLC로 정제하였따 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 100 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충되는 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 95 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 46을 수율 19 % (19.1 mg)의 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5 mL/min, 8분 동안 수중 10 %에서 95 % MeCN (0.05 % TFA) 이어 2분 동안 수중 95 % MeCN); ESI-(C46H79N7O8, exact mass 857.6) m/z: 858.6 (MH+) 및 429.9 (M.2H+/2, 100 %), 5.93 min (100 %, 210 nm).
1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.58 - 8.50 (m, 0.5 H, NHCO, incomplete exchange), 8.29 - 8.22 (m, 0.4 H, NHCO, incomplete exchange), 7.35 - 7.15 (m, 5H), 4.87 - 4.69 (m, 3H), 4.22 - 0.82 (m, 68H).
실시예 47
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸(2-(피페라진-1-일)에틸)아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 트리스 트리플루오로아세트산
Figure pct00126
화합물 47을 화합물 46 (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)으로부터 화합물 4와 유사한 방식으로 제조하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, Atlantis Prep OBD T3 column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 32.6 mg (33 %)의 화합물 47을 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV-(Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5 mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C46H77N7O8, exact mass 843.6) m/z: 844.6 (MH+) 및 422.9 (M.2H+/2, 100 %), 5.73 min (100 %, 210 nm).
1H-NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.66 - 8.57 (m, 0.3 H, NHCO, incomplete exchange), 8.41 - 8.32 (m, 0.3 H, NHCO, incomplete exchange), 8.13 - 8.06 (m, 0.2 H, NHCO, incomplete exchange), 7.30 - 7.10 (m, 5H), 4.80 - 4.61 (m, 3H), 4.19 - 0.78 (m, 65H).
실시예 48
(S)-2-((S)-2-(((1H-이미다조l-2-일)메틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00127
화합물 48을 아민 1Y 및 1ZC 및 1H-이미다졸-2-카르브알데히드로부터 화합물 1과 유사한 방식으로 제조하였다. 최종 생성물을 제조용 HPLC로 다음 조건에 따라 정제하였다: SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19x150 mm, 0.05 % TFA로 완충되는 이동상, 구배는 10분에 수중 15.0에서 30 % ACN 이어 2분 동안 95.0 % ACN까지, UV 검출 UV 220 nm.
LC/MS/UV-(Zorbax Eclipse Plus C8, 1.8 μm, 4.6 x 100 mm; 1 mL/min, 40℃, 1분 동안 수중 2 % 메탄올 (0.05 % TFA로 완충되는 용리상), 이어 12분 동안 2 %에서 95 % 메탄올; ESI-(C45H70N8O6S, exact mass 850.51) m/z: 851.2 (MH+), 873.5 (MNa+), 426.3 (M.2H+/2); 12.75 min (90.5 %, 210 nm).
1H-NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.83 - 7.81 (m, 1H), 7.80 - 7.53 (m, 3H), 7.53 - 7.22 (m, 5H), 5.6 -5.8 (m, 1H), 5.0 - 4.6 (m, 2H); 4.6 - 0.85 (m, 55H).
실시예 49
(S)-2-((S)-2-((4-히드록시페네틸)(m틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드, 트리플루오로아세트산
Figure pct00128
실시예 49A: 2-(4-히드록시페닐)아세트알데히드
Figure pct00129
4-(2-히드록시에틸)페놀 (4 g, 28.95 mmol, 1.00 quiv)을 DMSO (32 mL)에 녹이고 TEA (8.8 mL, 2.20 equiv)를 적가하였다. DMSO (36 mL) 중의 SO3.Py 용액 (10 g, 2.20 equiv)을 첨가하고 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 250 mL 물로 중화하고 3 회 100 mL AcOEt로 추출하였따. 유기상들을 모아, 5 회 물 (100 mL)로 이어 2회 150 mL NaCl (sat.)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc/PE (1:10)에서 정제하여 1 g (25 %)의 화합물 49A를 무색 오일 형태로 수득하였다.
실시예 49B: 벤질 (S)-2-((4-히드록시페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부타노에이트
Figure pct00130
화합물 49B를 THF (25 mL) 중의 아민 1ZC (1.5 g, 5.82 mmol, 0.99 equiv), 알데히드 49A (800 mg, 5.88 mmol, 1.00 equiv), NaBH(OAc)3 (2.7 g, 12.74 mmol, 2.17 equiv) 및 DIEA (4.23 mL)로부터 화합물 14C와 동일한 방식으로 합성하였다. 반응 혼합물을 50 mL 물로 중화하고 50 mL AcOEt로 3회 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 (EtOAc/PE (1:10)에서 정제하여 600 mg (37 %)의 화합물 49B를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 49C: (S)-2-((4-히드록시페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄산
Figure pct00131
화합물 49B (0.5 g, 1.46 mmol, 1.00 equiv)를 Pd/C (250 mg)가 있는 40 mL MeOH에 용해하고 3 시간 동안 주위 온도 및 대기압에서 수첨하였다. 반응물을 여과 및 감압 농축하여 0.4 g의 화합물 49C를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 49: 화합물 49를 DCM (3 mL) 중의 아민 1Y (53.4 mg, 0.08 mmol, 2.00 equiv), 산 49C (70 mg, 0.28 mmol, 1.00 equiv), DEPC (0.032 mL, 2.00 equiv) 및 DIEA (0.053 mL, 3.00 equiv)로부터 화합물 3과 동일한 방식으로 합성하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, Atlantis Prep OBD T3 column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 45 % ACN 이어 2분에45 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 3 mg (1 %)의 화합물 49를 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5 mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C49H74N6O7S, exact mass 890.5) m/z: 891.5 (MH+) 및 446.4 (M.2H+/2, 100 %), 6.69 min (100 %, 210 nm).
1H NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.92 - 8.87 (m, 0.5 H, NHCO, incomplete exchange), 8.70 - 8.63 (m, 0.4 H, NHCO, incomplete exchange), 8.85 - 8.77 (m, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.35 - 7.03 (m, 7H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 5.77 - 5.58 (m, 1H), 5,81 - 5.70 (m, 1H), 4.21 - 0.80 (m, 58H).
실시예 50
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-히드록시페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산, 트리플루오로아세트산
Figure pct00132
실시예 50: 화합물 50을 화합물 27 (100 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv)로부터 화합물 4와 유사한 방식으로 제조하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, Atlantis Prep OBD T3 column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분에 20 %에서 40 % ACN 이어 2분에 40 %에서 100 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2545 UV 검출기), 10.7 mg (11 %)의 화합물 50을 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18 column, 2.7 μm, 4.6 x 100 mm; 40℃; 1.5 mL/min, 8 분에 수중 10 %에서 95 % MeOH (0.05 % TFA)); ESI-(C47H73N5O9, exact mass 851.5) m/z: 852.5 (MH+) 및 426.8 (M.2H+/2, 100 %), 6.46 min (91.7 %, 210 nm).
1H-NMR: (400MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 7.34 - 7.15 (m, 5H); 7.15 - 7.04 (se, 2H), 6.82 - 6.83 (m, 2H), 4.83 - 4.70 (m, 1H), 4.21 - 4.00 (m, 1H), 3.90 - 3.80 (m, 1H), 3.74 - 3.62 (m, 1H), 3.57 - 2.86 (m, 20H), 2.56 - 0.80 (m, 36H).
실시예 51
메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-히드록시벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3- 페닐프로파노에이트, 트리플루오로아세트산
Figure pct00133
실시예 51A: tert-부틸 (4-포르밀페닐)탄산염
Figure pct00134
4-히드록시벤즈알데히드 (3.0 g, 24 mmol)를 4-DMAP (300 mg, 2.46 mmol, 0.1 equiv.) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (5.35 g, 24 mmol, 1.0 equiv.)가 존재하는 30 mL DCM에 용해하고 1 시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 이어 용액을 200 mL 물로 희석하고 100 mL DCM으로 3 회 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 5 g (92 %)의 화합물 51A를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예 51B: 벤질 (S)-2-((4-((tert-부톡시카르보닐)옥시)벤질)(메틸) 아미노)-3-메틸부타노에이트
Figure pct00135
화합물 51A (220 mg, 0.99 mmol)를 화합물 1ZC (255 mg, 0.99 mmol, 1.0 equiv.), NaBH(OAc)3 (420 mg, 2 mmol, 2.0 equiv.) 및 DIEA (654 μl)가 존재하는 5 mL THF에 녹이고 밤새 주위 온도에서 교반하였다. 이어 용액을 100 mL 물로 희석하고 50 mL EtOAc로 3회 추출하였다. 유기상들을 모아, 황산나트륨에서 건조하고, 여과 및 감압 농축하였다. 잔류물을 EtOAc 및 PE의 혼합물 (1:100)로 실리카 칼럼에서 정제하여 200 mg (47 %)의 화합물 51B를 백색 고체 형태로 얻었다.
실시예-51C: (S)-2-((4-((tert-부톡시카르보닐)옥시)벤질)(메틸)아미노)-3-메틸 부탄산
Figure pct00136
화합물 51C를 화합물 3F 제조에 적용된 프로토콜에 따라 화합물 51B (200 mg)를 수소화하여 제조하였다.
실시예 51D: 메틸 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-((tert-부톡시카르보닐)옥시)벤질)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트
Figure pct00137
화합물 51D를 화합물 3 제조에 적용된 프로토콜에 따라 화합물 51C와 아민 3D을 커플링하여 원하는 생성물을 황색 오일 형태로 60 % 수율로 획득하였다.
실시예 51: 화합물 51D (80 mg, 0.08 mmol)를 0.5 mL TFA가 존재하는 1 mL DCM에 용해하고, 2 시간 주위 온도에서 교반 후 감압 농축하였다. 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (Pre-HPLC-010, SunFire Prep C18 OBD column, 5 μm, 19 x 150 mm; 용리상: 0.05 % TFA로 완충된 물 / ACN; 구배는 10분 동안 23 %에서 40 % ACN 이어 2 분 동안 40 %에서 95 % ACN; 254 nm 및 220 nm에서의 Waters 2489 UV 검출기). 화합물 51을 수율 24 % (20 mg)로 백색 고체 형태로 얻었다.
LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1.8 μm, 4.6 x 100 mm; 1분 동안 수중 2 % MeOH (0.05 % TFA) 이어 13분 동안 2 %에서 95 % MeOH); ESI (C47H73N5O9, exact mass 851.54) m/z: 874.5 (MNa+), 426.9 (M.2H+/2); 12.48 min (96 %, 210 nm).
1H NMR: (300MHz, CD3OD, ppm): δ (Presence of rotamers) 8.1 - 8.6 (m, 0.9H, NHCO incomplete exchange); 7.29 - 7.27 (m, 2H), 7.25 - 6.86 (m, 5H), 6.84 - 6.83 (m, 2H), 4.83 - 4.72 (m, 3H), 4.26 - 0.82 (m, 58H).
실시예 61
(S)-2-((S)-2-((4-아미노페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드
Figure pct00138
실시예 61A: N-(4-아미노페네틸)-N-메틸-L-발린 디히드로클로라이드
Figure pct00139
화합물 11D (962 mg, 2.75 mmol)를 상업적으로 입수된 프로판-2-올 (5- ) 중의 HCl 용액 10 ml에 용해하고, 실온에서 2 시간 교반하였다. TLC 분석으로 출발 물질이 완전히 소비된 것을 확인하였다. 감압하여 용매를 증발시키고, 얻어진 황색 고체를 Et2O (2 x 10 ml)로 분산시켰다. 생성물을 진공 건조하여 화합물 61A를 황색 고체 (322 mg, 47 %)로 얻었다.
실시예 61: 카르복실산 61A (73 mg, 0.23 mmol, 1 eq.) 및 아민 1Y (150 mg, 0.23 mmol, 1 eq.)을 무수 DMF (2 ml)에 녹였다. DIEA (158 μl, 0.90 mmol, 4 eq.) 및 DECP (51 μl, 0.34 mmol, 1.5 eq.)를 첨가하고 반응물을 4 시간 동안 실온에서 교반하였다. LC-MS 분석으로 출발 물질이 완전히 소모된 것을 확인하였다. 감압하여 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 (DCM/MeOH)에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 화합물 61을 밝은 황색 고체 (83 mg, 40 %)로 획득하였다.
1H NMR: (500MHz, DMSO-d 6, ppm): δ (Presence of rotamers), 8.86 (d, 0.5H, NHCO); 8.65 (d, 0.5H, NHCO), 8.11-8.05 (m, 1H, NHCO), 7.80 (d, 0.5H, 티아졸), 7.78 (d, 0.5H, 티아졸), 7.65 (d, 0.5H, 티아졸), 7.63 (d, 0.5H, 티아졸), 7.32 - 7.12 (m, 5H), 6.83 (d, J=8.3 Hz, 2H), 6.45 (d, J=8.3 Hz, 2H), 5.56 - 5.49 (m, 0.5 H), 5.42 - 5.35 (m, 0.5H), 4.78 (s, 2H, NH2), 4.74 - 4.46 (m, 2H), 4.01 - 0.66 (m, 57H).
HPLC (Xbridge Shield C18, 3.5 μm, 4.6 x 50 mm; 3.5 ml/min, , 2.25 분에 수중 0에서 95 % MeCN (0.1 % TFA) 이어 0.5분에 95 % MeCN, Tr = 1.31 min (96.5 %, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 890.5558 (2%, MH+, C49H76N7O6S requires 890.5572), 445.7834 (100 %, (MH2)2+, C49H77N7O6S requires 445.7823).
실시예 62
메틸 ((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-아미노페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판오일)-L-페닐alaninate
Figure pct00140
실시예 62: 카르복실산 61A (69 mg, 0.21 mmol, 1 eq.), 아민 3D (135 mg, 0.21 mmol, 1 eq.), DIEA (75 μl, 0.43 mmol, 2 eq.) 및 DECP (49 μl, 0.32 mmol, 1.5 eq.)를 사용하여 화합물 61과 유사한 방식으로 화합물 62를 제조하였다. 조질 생성물을 실리카 겔 (DCM/MeOH)에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 화합물 62를 황색 고체 (82 mg, 45 %)로서 얻었다.
1H NMR: (500MHz, DMSO-d 6, ppm): δ (Presence of rotamers), 8.50 (d, J=8.3, 0.5H, NHCO); 8.27 (d, J=8.0, 0.5H, NHCO), 8.15-8.04 (m, 1H, NHCO), 7.27 - 7.13 (m, 5H), 6.86 - 6.79 (m, 2H), 6.48 - 6.42 (m, 2H), 4.78 (s, 2H, NH2), 4.74 - 4.44 (m, 3H), 4.01 - 3.72 (m, 1.5H), 3.66 (s, 1.5H, CO2Me), 3.63 (s, 1.5H, CO2Me), 3.57 - 0.65 (m, 55.5H).
HPLC (Xbridge Shield C18, 3.5 μm, 4.6 x 50 mm-; 3.5 ml/min, , 2.25 분에 수중 0에서 95 % MeCN (0.1 % TFA) 이어 0.5 분에 95 % MeCN, Tr = 1.29 min-(95.3 %, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 865.5800 (2%, MH+, C48H77N6O8 requires 865.5797), 433.2937 (100 %, (MH2)2+, C48H78N6O8 requires 433.2935).
실시예 63
((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-아미노페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판오일)-L-페닐알라닌 2,2,2-트리플루오로아세테이트
Figure pct00141
실시예 63: 화합물 62 (23 mg, 0.03 mmol)를 물 (1 ml) 및 아세토니트릴 (1 ml)의 혼합물에 용해하였다. 피페리딘 (0.75 ml)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 5 시간 교반하였다. TLC 분석으로 출발 물질이 완전히 소모된 것이 확인되었다. 용매를 감압하여 증발시키고, 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하였다 (SunFire Prep column C18 OBD, 5 μm, 19 x ; Mobile 상: 0.1 % TFA로 완충된 물/MeCN; 구배는10 분에 20 %에서 40 % MeCN, 이어 2분에 40 %에서 100 % MeCN; 254 nm 및 220 nm에서 Waters 2545 UV 검출기). 화합물 63을 백색 고체 (14 mg, 66 %)로 얻었다.
1H NMR: (500MHz, DMSO-d 6, ppm): δ (Presence of rotamers), 12.7 (s(br), 1H, CO2H), 9.58 (m(br), 1H); 9.04 - 8.89 (m, 1H), 8.41 (d, 0.6H, NHCO), 8.15 (d, 0.4H, NHCO), 7.27 - 7.13 (m, 5H), 7.13 - 6.99 (m(br), 2H), 6.90 - 6.64 (s(br), 2H), 4.77 - 3.40 (m, 10H), 3.34 - 2.75 (m, 20H), 2.34 - 1.94 (m, 4H), 1.90 - 0.7 (m, 25H).
HPLC (Xbridge Shield C18, 3.5 μm, 4.6 x 50 mm; 3.5 ml/min, , 2.25 분에 수중 0에서 95 % MeCN (0.1 % TFA) 이어 0.5분에 95 % MeCN, Tr = 1.24 min (100 %, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 851.5641 (6%, MH+, C47H75N6O8 requires 851.5641), 426.2854 (100 %, (MH2)2+, C47H76N6O8 requires 426.2857).
실시예 64
(S)-2-((S)-2-((4-아미노페네틸)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드
Figure pct00142
카르복실산 61A (93 mg, 0.29 mmol, 1 eq.), 아민 2D (174 mg, 0.29 mmol, 1 eq.), DIEA (100 μl, 0.58 mmol, 2 eq.) 및 DECP (66 μl, 0.43 mmol, 1.5 eq.)를 사용하여 화합물 61과 유사한 방식으로 화합물 64를 제조하였다. 조질 생성물을 실리카 겔 (DCM/MeOH)에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 화합물 64를 회백색 고체 (51 mg, 21 %)로 수득하였다.
1H NMR: (500MHz, DMSO-d 6, ppm): δ (Presence of rotamers), 9.61 (m(br), 1H); 9.05 - 8.89 (m, 1H), 7.93 (d, 0.6H, NHCO), 7.64 (d, 0.4H, NHCO), 7.36 - 6.98 (m, 7H), 6.92 - 6.70 (m(br), 2H), 5.45 (s(br), 1H), 4.80 - 4.41 (m, 3H), 4.06 - 3.44 (m, 4H), 3.37 - 2.79 (m, 18H), 2.45 - 2.21 (m, 3H), 2.17 - 0.70 (m, 35H).
HPLC (Xbridge Shield C18, 3.5 μm, 4.6 x 50 mm; 3.5 ml/min, , 2.25 분에 수중 0 내지 95 % MeCN (0.1 % TFA) 이어 0.5 분에서 95 % MeCN, Tr = 1.20 min (100 %, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 837.5826 (33%, MH+, C47H77N6O7 requires 837.5848), 419.2956 (100 %, (MH2)2+, C47H76N6O8 requires 419.2961).
II - 본 발명 화합물의 생물학적 활성
본 발명의 유도체는 강력한 세포독성제이다. 다음 방법 및 기술에 따라 이들의 항-증식 활성을 종양주에 대하여 결정하였다.
방법:
세포 배양. A549 (비소세포암 - ATCC CCL-185) 및 MDA-MB-231 (유방선암- ATCC HTB-26) 세포들을 % 우아혈청 (FCS)이 보충된 Eagle 최소필수배지 (MEM) 및 10% FCS가 보충된 Dulbecco 변형 Eagle 배지 (DMEM)에서 배양하였다. MCF7 (유방유관암 - ATCC HTB-22) 및 SN- (신장암 - ATCC) 세포들을 10% FCS가 함유된 RPMI1640 배지 (MCF7 세포용 페놀 레드 부재)에 유지하였다. 모든 배지에 훈기존 (1.25 μg/mL) 및 페니실린-스트렙토마이신 (100 U / 100 μg/mL)을 보충하였다. 세포들을 배양기에서 , 5% CO2 및 95% 습도의 표준 조건에서 배양하였다.
4 종의 종양 세포주에 대한 항증식 활성. 본 발명 화합물에 대한 항증식 활성을 4 세포주의 포괄적 판넬에서 ATPlite 증식반응측정 (Perkin Elmer, Villebon sur Yvette, France)으로 평가하였다. 0일에 세포들을 96 웰 플레이트에 (A549에 대하여는103 cells/well, MCF7, MDA-MB-231 및 SN12C에 대하여는2.103) 72 h 약물 치료 기간 동안 세포가 지수 세포 성장 단계에 있도록 보장되는 농도로 접종하였다. 24h 배양 후, 모든 세포를 시험 화합물로 연속 희석 처리하였다 (1% DMSO 중의10X 용액11μL - 6 웰/ 조건). 화합물이 팁에 부착되는 것을 방지하기 위하여, 연속 희석 간에는 팁을 바꾸었다. 이어 세포를 , 5% CO2 배양기에 두었다. 4일째, 생존 세포에서 방출하는 ATP를 주입하여 세포 생상판별시험을 평가하였다. 용매 처리 세포의 수와 비교하여 생존세포수를 분석하였다. GraphPad Software (GraphPad Software Inc., CA, USA)에 의해 제공되는 알고리즘으로 수행되는 곡선일치분석법 (S자형 용량 반응, 가변 힐 슬로프 계수를 가지는 비선형 회귀 모델)으로 EC50 값을 결정하였다.
결과:
다양한 화합물:
본 발명에 의한 다양한 화합물을 시험하여 상기 방법에 따라 MDA-MB-231 세포중에 대한 항증식 활성을 결정하였다. 측정된 활성은 값 EC50-< 0.1μM를 보인다.
본 발명에 의한 화합물에서 선택되는 다음 실시예들은 놀라운 항증식 특성을 보인다:
실시예 3: EC50 = 4.10x10-10 M; 실시예 12: EC50 = 5.80x10-10 M; 실시예 13: EC50 = 7.95x10-8 M; 실시예 15: EC50 = 1.70x10-10 M; 실시예 27: EC50 = 1.20x10-10 M.
다양한 세포중 :
화합물 15를 상기 방법에 따라 상이한 세포주 (A549, MDA-MB-231, MCF-7, SN12C)에 대하여 시험하였다. 측정된 활성은 값 EC50-<-0.1μM을 보인다.
EC50 (M) A549 MDA-MB-231 MCF-7 SN12C
화합물 15 1.45x10-10 1.70x10-10 7.15x10-10 2.18x10-10
비교 실시예들:
하기 비교 실시예들에서 페닐 고리에서의 치환 (아미노/히드록실 v. 카르복실)을 연구하여 아미노 또는 히드록실 치환체를 포함하는 본 발명에 의한 약물의 개선된 항증식 활성을 보였다.
Figure pct00143

Claims (15)

  1. 식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물:
    Figure pct00144
    (I)
    식 중:
    R1은 H 또는 OH,
    R2는 (C1-C6)알킬, COOH, COO-((C1-C6)알킬) 또는 티아졸일기,
    R3은 H 또는 (C1-C6)알킬기, 및
    R4는:
    - OH 및 NR9R10기에서 선택되는 하나 이상의 기로 치환되는 아릴-(C1-C8)알킬기, 이때 R9 및 R10은 각각 서로 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬기를 나타내고, 또는
    - 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13 기에서 선택되는 하나 이상의 기로 치환되는 헤테로사이클-(C1-C8)알킬기, 이때 R12 및 R13 은 각각 서로 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬기를 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서,
    - R1=OH이고 R2는 (C1-C6)알킬기이고, 또는
    - R1=H이고 R2는 COOH, COO-(C1-C6)알킬 또는 티아졸기인 것을 특징으로 하는, 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R1은 H이고 R2는 COOH 또는 COOMe인 것을 특징으로 하는, 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, R3은 H 또는 메틸기인 것을 특징으로 하는, 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, R4는 다음 기들 중 하나인 것을 특징으로 하는, 화합물.
    - OH 및 NR9R10에서 선택되는 하나의 기로 치환되는 아릴-(C1-C2)알킬, 또는
    - NR12R13, OH 및 (C1-C6)알킬에서 선택되는 하나의 기로 치환되는 헤테로사이클-(C1-C2)알킬.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, R4는 하나의 NR9R10기에 의해 아릴 모이어티에 치환되는 아릴-(C1-C2)알킬기인 것을 특징으로 하는, 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 아릴기는 페닐기이고 헤테로사이클은1 또는 2 질소 원자를 포함하는 5 또는 6 원의 포화, 불포화 또는 방향족 고리이고, 피리딘, 피페리딘 및 이미다졸에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물.
  8. 제1항에 있어서, 다음에서 선택되는, 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염 예컨대 트리플루오로아세트산으로 형성되는 염:
    Figure pct00145

    Figure pct00146

    Figure pct00147

    Figure pct00148

    Figure pct00149

    Figure pct00150

    Figure pct00151
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 의약품으로 사용되는, 화합물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 암 또는 양성 증식성 질환 치료용 의약품으로 사용되는, 화합물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 의한 식 (I) 화합물 및 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학조성물.
  12. 제11항에 있어서, 바람직하게는 항암제, 특히 세포독성 항암제 예컨대 나벨빈, 빈플루닌, 탁솔, 탁소텔, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 독소라비신, 캄토테신, 젬시타빈, 에토포시드, cis-플라틴 또는 카르무스틴; 및 호르몬 항암제 예컨대 타목시펜 또는 메드록시프로게스테론에서 선택되는 또 다른 활성 성분을 더욱 포함하는, 약학조성물.
  13. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 의한 식 (I) 화합물 제조방법으로서, 다음 식 (VI) 화합물:
    Figure pct00152
    (VI)
    식 중 R1 및 R2 는 제1항에서 정의된 바와 같고, 및
    다음 식 (VII) 화합물:
    Figure pct00153
    (VII)
    식 중 R3은 제1항에서 정의된 바와 같고, R4a 는 임의선택적으로 보호 형태인 제1항에서 정의된 R4 기를 나타내고, X는 OH 또는 Cl인, 축합 반응을 포함하는, 방법.
  14. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 의한 식 (I) 화합물 제조방법으로서, 다음 식 (VIII) 화합물:
    Figure pct00154
    (VIII)
    식 중 R1, R2 및 R3 은 제1항에서 정의된 바와 같고, 및
    다음 식 (X) 화합물:
    R4a-Y (X)
    식 중 R4a는 임의선택적으로 보호 형태인 제1항에서 정의된 R4 기를 나타내고, Y는 이탈기 예컨대 Cl, Br, I, OSO2CH3, OSO2CF3 또는 O-토실인, 치환 반응을 포함하는, 방법.
  15. 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 의한 식 (I) 화합물 제조방법으로서, 이때 R4는 -CH2R4b기를 나타내고 R4b는 다음을 나타내고:
    - OH 및 NR9R10기에서 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환되는 아릴기 또는 아릴-(C1-C7)알킬기, 또는
    - 임의선택적으로 (C1-C6)알킬, OH 및 NR12R13 기에서 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환되는, 헤테로사이클 또는 헤테로사이클-(C1-C7)알킬기,
    다음 식 (VIII) 화합물:
    Figure pct00155
    (VIII)
    식 중 R1, R2 및 R3 은 제1항에서 정의된 바와 같고, 및
    다음 식 (XI) 화합물:
    R4b-CHO (XI)
    식 중 R4b 는 상기 정의된 바와 같고, 환원적 아민화 반응을 포함하는, 방법.
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