ES2693368T3 - Derivados de dolastatina 10 y auristatinas - Google Patents

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Ian RILATT
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Pierre Fabre Medicament SA
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Abstract

Compuesto de la fórmula (I) siguiente:**Fórmula** en la que: - R1 es H u OH, - R2 es un grupo alquilo (C1-C6), COOH, COO-(alquilo (C1-C6)) o tiazolilo, - R3 es H o un grupo alquilo (C1-C6), y - R4 es: -rupo aril-alquilo (C1-C8) sustituido por uno o más grupos seleccionados de entre los grupos OH y NR9R10 con R9 y R10 cada uno independientemente del otro representando H o un grupo alquilo (C1- C6), o -rupo heterociclo-alquilo (C1-C8) opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados de entre los grupos alquilo (C1-C6), OH y NR12R13 con R12 y R13 cada uno independientemente del otro representando H o un grupo alquilo (C1-C6), en el que: un grupo aril-alquilo (C1-C8) es un grupo arilo unido al resto de la molécula mediante un grupo alquilo que comprende 1 a 8 átomos de carbono, siendo el grupo arilo un grupo hidrocarburo aromático que presenta 6 a 10 átomos de carbono y que comprende uno o dos anillos fusionados, y un grupo heterociclo-alquilo (C1-C8) es un grupo heterociclo unido al resto de la molécula mediante un grupo alquilo que comprende 1 a 8 átomos de carbono, siendo el grupo heterociclo un grupo hidrocarburo saturado, insaturado o aromático que presenta 1 o 2 anillos fusionados y en el que 1 a 4 de los átomos de carbono son reemplazados cada uno por un heteroátomo seleccionado de entre oxígeno, nitrógeno y azufre, o sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

Description

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DESCRIPCION
Derivados de dolastatina 10 y auristatinas.
El objeto de la presente invencion se refiere a nuevos derivados de dolastatina 10 y auristatinas, sus procedimientos de produccion, composiciones farmaceuticas que los contienen y la utilizacion de los mismos como medicamento, en particular en el tratamiento del cancer.
La dolastatina 10 (D10) es un derivado peptfdico citotoxico aislado de un molusco marino (Dolabella auricularia) cuya configuracion absoluta se determino y se confirmo posteriormente a continuacion de la smtesis total del producto (Pettit G. R. J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 6883; Pettit G. R. J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 7581; Pettit, G. R. Heterocycles 1989, 28, 553; Pettit, G. R. J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 5015; Pettit, G. R. J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 6692). La D10 esta formada por 5 unidades denominadas dolavalina (Dov), valina (Val), dolaisoleucina (Dil), Dolaproma (Dap) y dolafenina (Doe). Un cierto numero de analogos de este compuesto han sido sintetizados mediante la modificacion de la naturaleza de sus aminoacidos componentes (Pettit G. R. J. Med. Chem. 1990, 33, 3133; Miyazaki K. Peptide Chemistry 1993, 31, 85; Miyazaki K. Chem. Pham. Bull. 1995, 43, 1706). Las modificaciones de la parte C-terminal (extremo derecho) tambien se han realizado y han dado lugar a numerosos derivados, que incluyen auristatina E o F (Pettit G. R. Anticancer Drug Design, 1998, 13, 243; Pettit G. R. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1998, 2961).
imagen1
Dolastatina 10
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Auristatina E
imagen3
Auristatina F
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La presente invencion se ha centrado en la modificacion de la parte N-terminal (extremo izquierdo) de los derivados de dolastatina 10 y auristatinas E y F. Los pocos ejemplos publicados en la literatura sobre las modificaciones realizadas en esta posicion han dado lugar a perdidas de la actividad (Miyazaki K. Chem. Pham. Bull. 1995, 43, 1706). Los compuestos descritos en la presente invencion difieren de la tecnica anterior a traves de sus estructuras qmmicas originales y tambien a traves de su propiedad biologica notable que es totalmente inesperada, teniendo en cuenta los elementos publicados en la literatura. Estas actividades notables resultan en la elaboracion de estos compuestos adecuados para uso en el tratamiento del cancer.
Ademas, estos compuestos tienen la ventaja de ser tanto activos como agentes citotoxicos y mas solubles que los compuestos parentales.
Por lo tanto, el objeto de la presente invencion es un compuesto de la siguiente formula (I):
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en donde:
- R1 es H u OH,
- R2 es un grupo: alquilo (CrCa) (por ejemplo metilo), COOH, COO-(alquilo (CrCa)) (tal como COOMe) o tiazolilo (tal como tiazol-2-ilo),
- R3 es H o un grupo alquilo (CrCa) (tal como metilo), en particular un grupo alquilo (CrCa), y
- R4 es:
■ un grupo aril-alquilo (C1-C8) opcionalmente sustituido (y preferentemente sustituido) por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la parte arilo), seleccionados de entre los grupos arilo, OH y NR9R10 con Rg y R10 cada uno independientemente de otro que representa H o un grupo alquilo (C-rCa) (tal como metilo),
■ un grupo heterociclo-alquilo (C1-C8) opcionalmente sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la parte heterociclo) seleccionados de entre los grupos alquilo (CrCa), OH y NR12R13 con R12 y R13 cada uno independientemente de otro que representa H o un grupo alquilo (CrCa) (tal como metilo), o
■ un grupo -CO-(alquilo (CrC8))sustituido por uno o mas grupos (en particular uno) seleccionados de entre OH y NR14R15 con R14 y R15 cada uno independientemente de otro que representa H o un grupo alquilo (CrCa) (tal como metilo),
en donde:
un grupo aril-alquilo (C1-C8) es un grupo arilo unido a un resto de la molecula mediante un grupo alquilo que comprende 1 a 8 atomos de carbono, siendo el grupo arilo un grupo hidrocarburo aromatico que presenta a a 10 atomos de carbono y que comprende uno o dos anillos fusionados, y
un grupo heterociclo-alquilo (C1-C8) es un grupo heterociclo unido a un resto de la molecula mediante un grupo alquilo que comprende 1 a 8 atomos de carbono, siendo el grupo heterociclo un grupo hidrocarburo saturado, insaturado o aromatico que presenta 1 o 2 anillos fusionados y en el que 1 a 4 de los atomos de carbono son reemplazados cada uno por un heteroatomo seleccionado de entre oxfgeno, nitrogeno y azufre,
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o una sal farmaceuticamente aceptable, hidrato o solvato del mismo.
Los radicales R2 a R4, y en particular R4, pueden ser grupos quirales y pueden estar en la forma de sus diferentes estereoisomeros y, opcionalmente, en la forma de una mezcla de estereoisomeros.
Por «estereoisomero», en el contexto de la presente invencion, se entiende un isomero geometrico o un isomero optico.
Los isomeros geometricos resultan de la diferente posicion de los sustituyentes en un enlace doble que, por lo tanto, puede tener una configuracion Z o E.
Los isomeros opticos resultan, en particular, de la diferente posicion en el espacio de los sustituyentes en un atomo de carbono que comprende 4 sustituyentes diferentes. Este atomo de carbono forma entonces un centro quiral o asimetrico. Los isomeros opticos comprenden diastereoisomeros y enantiomeros. Los isomeros opticos que son imagenes especulares, pero que no se pueden superponer son llamados «enantiomeros». Los isomeros opticos que no son imagenes especulares que se pueden superponer son llamados «diastereoisomeros».
Una mezcla que contiene cantidades iguales de dos formas enantiomericas individuales de quiralidad opuesta se denomina una «mezcla racemica».
En la presente invencion por «farmaceuticamente aceptable» se entiende el que se puede utilizar en la preparacion de una composicion farmaceutica que es generalmente, segura, no toxica y ni biologicamente ni de otro modo indeseable, y que es aceptable para uso veterinario asf como para uso farmaceutico en humanos.
Por «sal farmaceuticamente aceptable, hidrato o solvato» de un compuesto se entiende una sal, hidrato o solvato que es farmaceuticamente aceptable, como se define en la presente memoria y que tiene la actividad farmacologica deseada del compuesto parental.
Las sales farmaceuticamente aceptables comprenden en particular:
(1) las sales de adicion de un acido farmaceuticamente aceptable formado con acidos inorganicos farmaceuticamente aceptables tales como acido clorhndrico, bromhndrico, fosforico, sulfurico y acidos similares; o formadas con acidos organicos farmaceuticamente aceptables tales como acido acetico, trifluoroacetico, propionico, succmico, fumarico, malico, tartarico, cftrico, ascorbico, maleico, glutamico, benzoico, salidlico, toluensulfonico, metansulfonico, estearico, lactico y acidos similares; y
(2) las sales de adicion de una base farmaceuticamente aceptable formadas cuando un proton acido presente en el compuesto parenteral, se reemplaza ya sea por un ion metalico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion de metal alcalino-terreo o un ion de aluminio; o coordinado con una base organica farmaceuticamente aceptable tal como lisina, arginina y similares; o con una base inorganica farmaceuticamente aceptable tal como hidroxido de sodio, potasa, hidroxido de calcio y similares.
Estas sales se pueden preparar a partir de los compuestos de la invencion que contienen una funcion base o acido, y los acidos o bases correspondientes usando procedimientos qrnmicos convencionales.
Los compuestos de formula (I) de la invencion estan preferentemente en forma de sal, y en particular, una sal de adicion acida farmaceuticamente aceptable.
Preferentemente, los compuestos de formula (I) segun la presente invencion estan en la forma de una sal de adicion acida farmaceuticamente aceptable, posiblemente, siendo el acido trifluoroacetico, acido acetico o acido clortndrico por ejemplo, y en particular el acido trifluoroacetico.
Los solvatos comprenden los solvatos convencionales obtenidos en la ultima etapa de preparacion de los compuestos de la invencion debido a la presencia de disolvente, el disolvente posiblemente siendo etanol por ejemplo.
Por «alquilo» en la presente invencion se entiende una cadena de hidrocarburo, lineal o ramificada, saturada. Por ejemplo, se puede hacer mencion de los grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc- butilo, pentilo o hexilo.
Por «alquilo (Cx-Cy)» en el contexto de la presente invencion, se entiende una cadena de alquilo tal como se definio anteriormente, que comprende de x a y atomos de carbono. Por lo tanto, un grupo alquilo (Ci-Ca) es una cadena de alquilo que tiene de 1 a 6 atomos de carbono.
Por «arilo» en el contexto de la presente invencion se entiende un grupo hidrocarburo aromatico que tiene preferentemente de 6 a 10 atomos de carbono y puede comprender uno o dos anillos fusionados. Por ejemplo,
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se puede citar un fenilo o un naftilo. Ventajosamente es un fenilo.
Por «heterocido» en el contexto de la presente invencion se entiende un grupo hidrocarburo saturado, insaturado o aromatico que tiene 1 o 2 anillos fusionados y en el que uno o mas, ventajosamente de 1 a 4, mas ventajosamente 1 o 2 de los atomos de carbono estan reemplazados cada uno por un heteroatomo seleccionado de entre oxfgeno, nitrogeno y azufre. Ventajosamente, el heterociclo comprende de 5 a 10 atomos de carbono y heteroatomos. Por ejemplo, se pueden mencionar furano, pirrol, tiofeno, tiazol, isotiazol, oxadiazol, imidazol, oxazol, isoxazol, piridina, pirimidina, piperazina, piperidina, quinazolina, quinolina, quinoxalina, benzofurano, benzotiofeno, indolina, indolizina, benzotiazol, benzotiofeno, benzopirano, benzoxazol, benzo[1,3]dioxol, benzoisoxazol, bencimidazol, cromano, cromeno, dihidrobenzofurano, dihidrobenzotiofeno, dihidroisoxazol, isoquinolina, dihidrobenzo[1,4]dioxina, imidazo[1,2-a]piridina, furo[2,3-c]piridina, 2,3-dihidro-1H-indeno,
[1,3]dioxolo[4,5-c]piridina, pirrolo[1,2-c]pirimidina, pirrolo[1,2-a]pirimidina, tetrahidronaftaleno y benzo[b][1,4]oxazin.
En la presente invencion, el heterociclo es mas particularmente un anillo saturado, insaturado o aromatico con 5 a 6 miembros que comprende 1 o 2 atomos de nitrogeno. Por ejemplo, se pueden mencionar los anillos de pirrol, imidazol, piridina, pirimidina, piperazina y piperidina. Preferentemente es una piridina, una piperidina, o un imidazol.
Por «aril-alquilo (C1-C8)» en el contexto de la presente invencion se entiende un grupo arilo tal como se definio anteriormente unido al resto de la molecula mediante un grupo alquilo tal como se definio anteriormente y que comprende de 1 a 8, en particular de 1 a 6, ventajosamente de 1 a 4, preferentemente 1 o 2 atomos de carbono. La porcion arilo es preferentemente una porcion fenilo. La porcion alquilo (C1-C8) es ventajosamente un alquilo (C1-C4), preferentemente un alquilo (C1-C2). En particular, el grupo aril-alquilo (C1-C8) es un grupo bencilo o fenetilo.
Por «heterociclo-alquilo (C-i-C8)» en el contexto de la presente invencion se entiende un grupo heterociclo tal como se definio anteriormente unido al resto de la molecula mediante un grupo alquilo tal como se definio anteriormente y que tiene de 1 a 8, en particular de 1 a 6, ventajosamente de 1 a 4 y preferentemente 1 o 2 atomos de carbono. La porcion alquilo (C1-C8) es ventajosamente un alquilo (C1-C4), preferentemente un alquilo (C1-C2). El heterociclo es mas particularmente un anillo saturado, insaturado o aromatico con 5 a 6 miembros que comprende 1 o 2 atomos de nitrogeno, tales como un pirrol, un imidazol, una piridina, una pirimidina, una piperazina o una piperidina, preferentemente una piridina, una piperidina, o un imidazol.
Por «insaturado» se entiende la calificacion de un compuesto que comprende una insaturacion es decir, un enlace doble o triple.
Entre los compuestos de la invencion, una clase particularmente apreciada de compuestos corresponde a los compuestos de formula (I) en la que R1 es OH y R2 representa un grupo alquilo (C1-C6), tal como metilo.
Otra clase particularmente apreciada de los compuestos corresponde a los compuestos de formula (I) en la que R1 es hidrogeno y R2 es un grupo tiazol (en particular un grupo tiazol-2-ilo).
Otra clase de compuestos particularmente apreciados corresponde a los compuestos de formula (I) en la que R1 es hidrogeno y R2 es un grupo COO alquilo (C1-C6), tal como COOMe.
Otra clase de compuestos particularmente apreciados corresponde a los compuestos de formula (I) en la que R1 es hidrogeno y R2 es un grupo COOH.
Por lo tanto los compuestos de la invencion son ventajosamente compuestos de formula (I) en los que:
- R1 = OH y R2 = Me (metilo) o
- R1 = H y R2 = COOH, COOMe o tiazol-2-ilo.
Otra clase de compuestos particularmente apreciados corresponde a los compuestos de formula (I) en la que R4 es un heterociclo-alquilo (C1-C8) no sustituido o sustituido por un grupo seleccionado de entre NR12R13 y OH.
Del mismo modo, la presente invencion se refiere particularmente a los compuestos de formula (I) en la que R4 es un aril-alquilo (C1-C8) sustituido con uno o mas grupos seleccionados de entre NR9R10 y OH.
Segun una forma de realizacion particular de la presente invencion, R2 es mas particularmente un grupo metilo, COOH, COOMe o tiazol-2-ilo.
Preferentemente, R1 es H y R2 es COOH o COO alquilo (C1-C6), en particular COOH o COOMe.
Segun una primera forma de realizacion preferida, R1 es H y R2 es COOH.
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Segun una segunda forma de realizacion preferida, Ri es H y R2 es COOMe.
R3 particularmente representa H o un grupo metilo, ventajosamente un grupo metilo.
R4 representa:
- un grupo aril-alquilo (C1-C8) sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la parte arilo), seleccionados de entre los grupos arilo, OH y NR9R10 con Rg y R10 cada uno independientemente de otro que representa H o un grupo alquilo (Ci-Ca) (tal como metilo), o
- un grupo heterociclo-alquilo (C1-C8) opcionalmente sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la parte heterociclo) seleccionados de entre los grupos alquilo (Ci-Ca), OH y NR12R13 con R12 y R13 cada uno independientemente de otro que representa H o un grupo alquilo (Ci-Ca) (tal como metilo).
Segun otra forma de realizacion particular, R4 representa:
- Un grupo aril-alquilo (C1-C4) sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la parte arilo) seleccionados de entre los grupos OH y NR9R10, o
- un grupo heterociclo-alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido por uno o mas grupos (en particular sustituido con un grupo, preferentemente en la parte heterociclo) seleccionado de entre los grupos alquilo (Ci-Ca), OH y NR12R13, preferentemente seleccionados de entre OH y NR12R13.
Segun incluso otra forma de realizacion particular de la invencion, R4 representa un grupo:
- aril-alquilo (Ci-C2) sustituido por un grupo (preferentemente en la porcion arilo) seleccionado de entre OH y NRgRi0, o
- heterociclo-alquilo (Ci-C2) opcionalmente sustituido por un grupo (en particular sustituido con un grupo, preferentemente en la porcion heterociclo) seleccionado de entre los grupos NRi2Ri3, OH y alquilo (Ci-Ca), preferentemente seleccionado de entre OH y NRi2Ri3.
En las formas de realizacion particulares anteriores para R4, el grupo arilo es ventajosamente un grupo fenilo.
En las formas de realizacion particulares anteriores para R4, el heterociclo es ventajosamente un anillo saturado, insaturado o aromatico con 5 o a miembros que tienen i o 2 atomos de nitrogeno. Por ejemplo, se pueden mencionar los anillos pirrol, imidazol, piridina, pirimidina, piperazina o piperidina. Preferentemente es una piridina, piperidina o imidazol.
En las formas de realizacion particulares anteriores para R4, la porcion arilo y la porcion heterociclo ventajosamente estan sustituidas cada una con un solo grupo.
Ventajosamente, R4 representa un grupo:
- fenil-alquilo (Ci-C2) sustituido por un grupo (preferentemente en la porcion fenilo) seleccionado de entre OH y NRgRi0, o
- heterociclo-alquilo (Ci-C2) opcionalmente sustituido con un grupo (preferentemente en la porcion heterociclo) seleccionado de entre OH y NRi2Ri3, el heterociclo siendo un anillo saturado, insaturado o aromatico con 5 o a miembros que comprende i o 2 atomos de nitrogeno, seleccionados en particular de entre piridina, piperidina e imidazol, o
En particular, R4 representa un grupo:
- fenil-alquilo (Ci-C2) sustituido por un grupo (preferentemente en la porcion fenilo) seleccionado de entre OH y NRgRi0, o
- heterociclo-alquilo (Ci-C2) opcionalmente sustituido por un grupo (preferentemente en la porcion heterociclo) seleccionado entre OH y NRi2Ri3, el heterociclo siendo un anillo saturado, insaturado o aromatico con 5 o a miembros que comprende i o 2 atomos de nitrogeno, seleccionado en particular de entre piridina, piperidina e imidazol.
Ventajosamente, R4 se selecciona de entre:
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Segun otra forma de realizacion particular de la invencion R4 es un grupo aril-alquilo (C1-C8) sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la porcion arilo) seleccionados de entre OH y NR9R10, y en particular de entre OH y NR9R10. Ventajosamente, es un grupo aril-alquilo (C1-C2) sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la porcion arilo) seleccionados de entre OH y NR9R10, y en particular de entre OH y NR9R10. El grupo arilo es preferentemente un grupo fenilo.
Segun esta forma de realizacion, R3 es ventajosamente un grupo metilo.
R4 representa ventajosamente un grupo aril-alquilo (C1-C8), en particular un grupo aril-alquilo (C1-C4), tal como un grupo aril-alquilo (C1-C2), sustituido por un grupo seleccionado de entre OH y NR9R10, y especialmente siendo NR9R10.
R4 representa ventajosamente un grupo aril-alquilo (C1-C8), en particular un grupo aril-alquilo (C1-C4), tal como un grupo aril-alquilo (C1-C2), sustituido por un grupo en la porcion arilo seleccionado de entre OH y NR9R10, y siendo en particular NR9R10.
El grupo arilo es ventajosamente un grupo fenilo.
Por lo tanto R4 puede representan en particular un fenil-alquilo (C1-C2) sustituido por un grupo (preferentemente en la porcion fenilo) seleccionado de entre OH y NR9R10, y siendo en particular NR9R10.
R4 puede tener entonces la siguiente formula:
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en donde X0 representa OH o NR9R10, en particular, NR9R10, y m representa un numero entero comprendido entre 1 y 8, especialmente entre 1 y 4, y ventajosamente es 1 o 2.
Segun una forma de realizacion preferida, R4 tiene la siguiente formula:
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con Xo y m como se definio anteriormente, y en particular con Xo = NR9R10 y m = l o 2.
Ventajosamente, el compuesto de formula (I) se selecciona de entre los compuestos 1 a 60 descritos en los ejemplos a continuacion.
Un objeto adicional de la presente invencion es un compuesto formal (I) tal como se definio anteriormente para su uso como medicamento, en particular para el tratamiento o prevencion del cancer o trastornos proliferativos benignos.
La presente invencion tambien se refiere a la utilizacion de un compuesto de formula (I) tal como se definio anteriormente para la produccion de un medicamento, particularmente destinado para el tratamiento o la prevencion del cancer o trastornos proliferativos benignos.
La presente invencion tambien se refiere a un procedimiento para tratar o prevenir el cancer o trastornos proliferativos benignos que comprende la administracion a una persona que necesita del mismo, de una cantidad eficaz de un compuesto de formula (I) tal como se definio anteriormente.
El cancer que se debe tratar o prevenir es mas particularmente el cancer de pulmon, pancreas, piel, cabeza, cuello, utero, ovarios, ano, estomago, colon, mama, esofago, intestino delgado, glandula tiroides, sistema linfatico, prostata, rinon, o vejiga, o una leucemia aguda o cronica, o una combinacion de dos o mas de estos tipos de cancer.
Por trastornos proliferativos benignos se entienden trastornos proliferativos que no pueden dar lugar a metastasis o que aun no han progresado hacia un cancer (tumores precancerosos).
Un objeto adicional de la presente invencion es una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) tal como se definio anteriormente y por lo menos un excipiente farmaceuticamente aceptable.
El principio activo se puede administrar en formas de administracion unitarias, en una mezcla con vehnculos farmaceuticos convencionales, a los animales o a los seres humanos. Las formas de administracion unitarias adecuadas comprenden las formas por via oral, las formas para administracion sublingual o bucal, las formas para administracion por via parenteral (subcutanea, intradermica, intramuscular o intravenosa), las formas para administracion topica (sobre la piel y mucosa, incluyendo la administracion intranasal e intraocular) y las formas de administracion rectal.
Dichas composiciones pueden estar en la forma de un solido, lfquido, emulsion, locion o crema.
Como las composiciones solidas, para administracion oral, se pueden utilizar comprimidos, pfldoras, polvos (capsulas de gelatina dura o blanda) o granulos. En estas composiciones, el principio activo de la invencion se mezcla con uno o mas diluyentes inertes, tales como almidon, celulosa, sacarosa, lactosa o sflice, en una corriente de argon. Estas composiciones tambien pueden comprender sustancias distintas de los diluyentes, por ejemplo uno o mas lubricantes tales como estearato de magnesio o talco, un agente colorante, un revestimiento (grageas) o un barniz.
Como las composiciones lfquidas para administracion oral, se puede hacer uso de soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes y elixires que son farmaceuticamente aceptables y contienen diluyentes inertes tales como agua, etanol, glicerol, aceites vegetales o aceite de parafina. Estas composiciones pueden comprender sustancias distintas a los diluyentes; por ejemplo productos humectantes, edulcorantes, espesantes, aromatizantes o estabilizantes.
Las composiciones esteriles para administracion parenteral pueden ser preferentemente soluciones acuosas o no acuosas, suspensiones o emulsiones. Como disolvente o vehnculo, se puede hacer uso de agua, propilenglicol, un polietilenglicol, aceites vegetales, en particular aceite de oliva, esteres organicos inyectables, por ejemplo, oleato de etilo u otros disolventes organicos adecuados. Estas composiciones tambien pueden contener adyuvantes, en particular agentes humectantes, isotonicos, emulsionantes, dispersantes y agentes estabilizantes. La esterilizacion se puede realizar de varias maneras, por ejemplo mediante la filtracion para esterilizar, mediante la incorporacion de agentes esterilizantes dentro de la composicion, mediante la radiacion o calentamiento. Tambien se pueden preparar en la forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse en el momento de utilizacion en agua esteril o en cualquier otro medio esteril inyectable.
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Las composiciones para administracion rectal son los supositorios o las capsulas rectales que, ademas del principio activo, contienen excipientes tales como manteca de cacao, gliceridos semisinteticos o polietilenglicoles.
Las composiciones para administracion topica pueden ser, por ejemplo, cremas, lociones, colirios, colutorios, gotas nasales o aerosoles.
Las dosis dependen del efecto deseado, de la duracion del tratamiento y de la via de administracion utilizada. En general, el medico determinara la dosis adecuada en relacion con la edad, el peso y todos los demas factores propios del sujeto que debe ser tratado.
Otro principio activo puede estar contenido en las composiciones farmaceuticas segun la presente invencion. En particular, puede ser un agente anticanceroso, y en particular un agente anticanceroso citotoxico tal como navelbina, vinflunina, taxol, taxotero, 5-fluorouracilo, metotrexato, doxorubicina, camptotecina, gemcitabina, etoposido, cis-platino o carmustina (tambien llamada BCNU); o un agente anticanceroso hormonal tales como tamoxifeno o medroxiprogesterona.
El tratamiento con radiacion (rayos X o rayos gamma) tambien se puede asociar con la administracion de un compuesto de la presente invencion. Dicha radiacion se puede administrar utilizando una fuente externa o mediante la implantacion de fuentes radiactivas internas por minuto.
La presente invencion tambien se refiere a la preparacion de los compuestos de formula (I) segun la invencion utilizando los procedimientos generales descritos en los siguientes esquemas de smtesis, opcionalmente suplementados por cualquier operacion estandar cuando sea necesario como se describe en la bibliografia o como es conocido por los expertos en la materia, o como se describe en los ejemplos en la parte experimental de la presente memoria.
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El esquema 1 ilustra el primer procedimiento general que se puede utilizar para preparar los compuestos de formula (I). En las formulas generales anteriores, Ri, R2, y R3 son tal como se definio anteriormente, R4a representa un grupo R4 tal como se definio anteriormente, opcionalmente en forma protegida y G es un grupo protector.
La primera etapa consiste en la condensacion del compuesto (II), protegido en su funcion amina por un grupo protector G, con el compuesto (III). X puede representar un grupo saliente tal como un atomo de cloro. En este caso, la primera etapa consiste en la reaccion entre un cloruro acido y una amina. Esta reaccion puede llevarse a cabo usando procedimientos y tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia. En un procedimiento particularmente apreciado, las dos entidades se hacen reaccionar en la presencia de una base organica o inorganica, por ejemplo Et3N, iPr2NEt, piridina, NaH, Cs2CO3, K2CO3 en un disolvente tales como THF, diclorometano, DMF, DMSO, a una temperatura en particular entre -20°C y 100°C. X tambien puede ser un hidroxilo (OH). En este caso, la primera etapa es una reaccion de condensacion entre el acido carboxflico (II) y la amina (III). Esta reaccion se puede llevar a cabo siguiendo los procedimientos y tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia. En un procedimiento particularmente apreciado, estas dos entidades se hacen reaccionar
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en presencia de un agente de acoplamiento tales como l-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida (EDC), 3- hidroxi-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona, una amina terciaria tal como diisopropiletilamina, en un disolvente aprotico polar tal como diclorometano o DMF, a una temperatura en particular entre -15°C y 40°C. En otro procedimiento particularmente apreciado, estas dos entidades se hacen reaccionar en presencia de fosforocianidato de dietilo (DEPC), una amina terciaria tal como trietilamina, en un disolvente aprotico polar tales como diclorometano o DMF, a una temperatura entre -15°C y 40°C. Otro procedimiento particularmente apreciado consiste en hacer que estas dos entidades reaccionen en presencia de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil- uroniumhexafluorofosfato (HATU), una amina terciaria tal como diisopropiletilamina, en un disolvente aprotico polar tales como diclorometano o DMF, a una temperatura de entre -15°C y 100°C.
Despues de la desproteccion del producto intermedio utilizando las tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia («Protective Groups in Organic Synthesis», T.W. Greene, John Wiley & Sons, 2006 y «Protecting Groups», P.J. Kocienski, Thieme Verlag, 1994), el compuesto (IV) se puede condensar con el compuesto (V) siguiendo los procedimientos y tecnicas anteriormente descritas para producir el compuesto (VI) a continuacion de una etapa de desproteccion. Posteriormente, este compuesto puede, a continuacion de la condensacion con el producto intermedio (VII) y la desproteccion opcional, llevar a la formacion de los compuestos de formula (I). El compuesto (VI) tambien se puede acoplar con un compuesto (VII') en el que R'3 es un precursor de R3, en particular un grupo R3 protegido por un grupo protector. El acoplamiento seguido por la desproteccion del grupo R'3 para conducir a R3 puede llevarse a cabo siguiendo los mismos procedimientos como se describieron anteriormente.
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H2N^A
1- Acoplamiento
2- Desproteccion
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FU-Y
or R^CHO
Luego desproteccion
opcional
Esquema 2
El esquema 2 ilustra el segundo procedimiento general que se puede utilizar para preparar los compuestos de formula (I). En las formulas generales anteriores R1, R2, y R3 son tal como se definieron anteriormente, R4a representa un grupo R4 tal como se definio anteriormente, opcionalmente en forma protegida, R4b es un precursor de un grupo R4 y G es un grupo protector.
En la primera etapa, el compuesto (IX) protegido en su funcion amina por un grupo protector G se condensa con el compuesto (VI). X puede representar un grupo residual, por ejemplo, un atomo de cloro. En este caso, la primera etapa consiste en la reaccion entre un cloruro acido y una amina. Esta reaccion se puede realizar utilizando procedimientos y tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia. En un procedimiento particularmente apreciado las dos entidades se hacen reaccionar en presencia de una base organica o inorganica tales como Et3N, iPr2NEt, piridina, NaH, Cs2CO3, K2CO3 en un disolvente tales como THF, diclorometano, DMF, DMSO a una temperatura en particular entre -20° y 100°C. X tambien puede representar un grupo hidroxilo. En este caso, la primera etapa es una reaccion de condensacion entre el acido carboxflico (IX) y la amina (VI). Esta reaccion puede llevarse a cabo siguiendo los procedimientos y tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia. En un procedimiento particularmente apreciado, las dos entidades se hacen reaccionar en presencia de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida (EDC), 3-hidroxi-1,2,3-benzotriazin-4(3H)- ona, una amina terciaria tal como diisopropiletilamina, en un disolvente aprotico polar tales como diclorometano o DMF, a una temperatura en particular entre -15°C y 40°C. En otro procedimiento particularmente apreciado, estas dos entidades se hacen reaccionar en presencia de fosforocianidato de dietilo (DEPC), una amina terciaria tal
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como trietilamina, en un disolvente aprotico polar tales como diclorometano o DMF, a una temperature en particular entre -15°C y 40°C.
Despues de la desproteccion del producto intermedio, usando tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia, el compuesto obtenido (VIII) puede conducir a los compuestos de formula (I) a continuacion de la reaccion con R4Y En este caso, Y es un grupo saliente tales como Cl, Br, I, OSO2CH3, OSO2CF3 u O-Tosilo. La reaccion se lleva a cabo en presencia de una base organica o inorganica tales como Et3N, iPr2NEt, NaH, Cs2CO3, K2CO3, en un disolvente anhidro polar tales como diclorometano, THF, DMF, DMSO a una temperatura en particular entre -20° y 100°C. En otro procedimiento particularmente apreciado, el compuesto (VIII) se hace reaccionar con un aldetndo de formula R4b-CHO donde R4b corresponde a un precursor de R4. En este caso, la reaccion es una aminacion reductiva en presencia de un agente reductor tales como NaBH4, NaBH3CN, NaBH(OAc)3, en un disolvente polar tales como 1,2-dicloroetano, diclorometano, THF, DMF, MeOH, en la presencia opcional de isopropoxido de titanio (IV), a un pH que puede ser controlado por la adicion de un acido tal como acido acetico a una temperatura en particular entre -20°C y 100°C.
En los esquemas de smtesis anteriores, un compuesto de formula (I) puede conducir a otro compuesto de formula (I) a continuacion de una etapa de reaccion adicional, tal como saponificacion por ejemplo, usando procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia mediante los cuales un grupo R2 que representa un ester, preferentemente un ester de metilo, se cambia a un grupo R2 que representa un acido carboxflico.
Si se desea aislar un compuesto de formula (I) que contiene por lo menos una funcion base en el estado de una sal de adicion acida, esto es posible mediante el tratamiento de la base libre del compuesto de formula (I) (que contienen por lo menos una funcion base) con un acido adecuado, preferentemente en cantidad equivalente. El acido adecuado puede ser en particular acido trifluoroacetico.
Por tanto, un objeto adicional de la presente invencion es un primer procedimiento para preparar un compuesto de formula (I), que comprende una reaccion de condensacion entre un compuesto de formula (VI):
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en donde R1 y R2 son tal como se definio anteriormente, y un compuesto de la siguiente formula (VII):
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en donde R3 es tal como se definio anteriormente, R4a corresponde a un grupo R4 tal como se definio anteriormente, opcionalmente en forma protegida, y X es OH o Cl.
Cuando X = OH, la reaccion de acoplamiento se puede realizar bajo condiciones de acoplamiento de peptidos bien conocidas por los expertos en la materia.
Dicho acoplamiento del peptido puede llevarse a cabo en presencia de un agente de acoplamiento tales como diisopropilcarbodiimida(DIC), diciclohexilcarbodiimida (DCC), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida (EDC), carbonildiimidazol (CDI), hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HATU), fosforocianidato de dietilo (DEPC) o hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi) tripirrolodinofosfonio (PyBOP), opcionalmente asociado con un auxiliar de acoplamiento tales como N-hidroxi succinimida (NHS), N-hidroxi
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benzotriazol (HOBt), 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-1,2,3-benzotriazol (HOOBt), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HAt), N- hidroxisilfosuccinimida (sulfo NHS) o dimetilaminopiridina (DMAP). Preferentemente, el agente de acoplamiento es HATU o DEPC.
La reaccion tambien se puede realizar en presencia de una base tal como DIEA (diisopropiletilamina).
En particular, el acoplamiento peptidico se realiza en presencia de HATU o DEPC y DIEA.
Dicha reaccion se puede llevar a cabo en un disolvente aprotico polar tal como diclorometano (DCM) o dimetilformamida (dMf), en particular a una temperatura de entre -15°C y 40°C.
Cuando X = Cl, la reaccion de condensacion se llevara a cabo en presencia de una base que puede ser organica o inorganica, tales como Et3N, iPr2NEt, piridina, NaH, Cs2CO3 o K2CO3.
La reaccion se puede llevar a cabo en un disolvente tal como tetrahidrofurano (THF), diclorometano (DCM), dimetilformamida (DMF), o dimetilsulfoxido (DMSO), en particular a una temperatura de entre -20° y 100°C.
Los compuestos de formulas (VI) y (VII) se pueden preparar siguiendo los protocolos de smtesis descritos en la parte experimental a continuacion o siguiendo las tecnicas conocidas por los expertos en la materia.
Un objeto adicional de la presente invencion es un segundo procedimiento para preparar un compuesto de formula (I) que comprende una reaccion de sustitucion entre un compuesto de la siguiente formula (VIII):
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en donde R1, R2 y R3 son como se definio anteriormente, y un compuesto de la siguiente formula (X):
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en donde R4a es un grupo R4 tal como se definio anteriormente, opcionalmente en forma protegida, e Y es un grupo saliente tales como Cl, Br, I, OSO2CH3, OSO2CF3 u O-Tosilo.
La reaccion de sustitucion se lleva a cabo en particular en presencia de una base que puede ser organica o inorganica, tales como Et3N, iPr2NEt, NaH, Cs2CO3, o K2CO3.
Esta reaccion puede llevarse a cabo en un disolvente polar, preferentemente anhidro, tales como DCM, THF, DMF o DMSO, en particular, a una temperatura de entre -20° y 100°C.
Los compuestos de formulas (VIII) y (X) se pueden preparar siguiendo los protocolos de smtesis descritos en la parte experimental a continuacion o usando las tecnicas conocidas por los expertos en la materia.
Un objeto adicional de la presente invencion es un tercer procedimiento para preparar un compuesto de formula (I) en la que R4 es un grupo -CH2R4b con R4b representando:
■ un grupo arilo o aril-alquilo (C1-C7) opcionalmente sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la porcion arilo) seleccionados de entre los grupos arilo, OH y NR9R10, o
■ un grupo heterociclo o heterociclo-alquilo (C1-C7) opcionalmente sustituido por uno o mas grupos (en particular uno, preferentemente en la porcion heterociclo) seleccionados de entre los grupos alquilo (C1-C6), OH y NR12R13,
que comprende una reaccion de aminacion reductiva entre un compuesto de la siguiente formula (VIII):
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en donde Ri, R2 y R3 son tal como se definio anteriormente, y un compuesto de la siguiente formula (XI):
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en donde R4b es tal como se definio anteriormente.
La reaccion de aminacion reductiva se puede llevar a cabo en presencia de un agente reductor tal como NaBH4, NaBH3CN o NaBH(OAc)3 y opcionalmente isopropoxido de titanio (IV).
El pH se puede controlar mediante la adicion de un acido tal como acido acetico, en particular, para alcanzar un pH de entre 4 y 5.
Esta reaccion puede llevarse a cabo en un disolvente polar tal como DCE (1,2-dicloroetano), DCM, THF, DMF o metanol, en particular, a una temperatura de entre -20° y 100°C.
Los compuestos de formulas (VIII) y (XI) se pueden preparar siguiendo los protocolos de smtesis descritos en la parte experimental a continuacion o usando las tecnicas conocidas por los expertos en la materia.
El compuesto obtenido a continuacion de la etapa de condensacion/sustitucion/aminacion reductiva de uno de los tres procedimientos anteriormente se puede someter a las etapas adicionales de desproteccion, particularmente en relacion con los sustituyentes R2 y R4 y las etapas de funcionalizacion opcionalmente adicionales usando los procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia.
Cuando R2 representa un grupo COOH, la etapa de condensacion/sustitucion/aminacion reductora anteriormente mencionado se puede realizar a partir de un compuesto de formula (VI) con un grupo R2 que representa una funcion COO-ester (alquilo (C1-C6)), a continuacion esta funcion ester posiblemente se saponifica para producir un compuesto de formula (I) con R2 = COOH.
Cuando el grupo R4 comprende una funcion NH, esta se puede proteger antes de realizar la reaccion de condensacion/sustitucion/aminacion reductiva mediante la sustitucion del atomo de nitrogeno por un grupo N- protector tales como un grupo Boc o Fmoc.
Por «grupo protector» en la presente invencion se entiende un grupo que bloquea selectivamente un sitio reactivo en un compuesto multifuncional, de tal manera que una reaccion qrnmica selectivamente se puede llevar a cabo en otro sitio reactivo no protegido en el sentido convencionalmente asociado con este en la smtesis qrnmica.
Por «grupo protector de N» en la presente invencion se entiende cualquier sustituyente que protege el grupo NH contra las reacciones indeseables tales como los grupos N-protectores descritos en Greene, «Protective Groups In Organic Synthesis», (John Wiley & Sons, Nueva York (1981)) y Harrison et al. «Compendium of Synthetic Organic Methods», Vols. 1 a 8 (J. Wiley & Sons, 1971 a 1996). Los grupos N-protectores comprenden carbamatos, amidas, derivados N-alquilados, derivados de amino acetal, derivados de N-bencilo, derivados de imina, derivados de enamina y derivados de N-heteroatomo. Los grupos N-protectores pueden ser formilo; un arilo, tal como un fenilo, opcionalmente sustituido con uno o varios grupos metoxi, tales como p-metoxifenilo (PMP); un aril-alquilo (C1-C6), tal como un bencilo, la porcion arilo siendo opcionalmente sustituida con uno o varios grupos metoxi, tales como bencilo (Bn), p-metoxibencilo (PMB) o 3,4-dimetoxibencilo (DMPM); -CO-Rgp1 tal como acetilo (Ac), pivaloilo (Piv o Pv), benzoilo (Bz) o p-metoxibencilcarbonilo (Moz); -CO2-RGP1 tales como tbutiloxicarbonilo (Boc), tricloroetoxicarbonilo (TROC), aliloxicarbonilo (Alloc), benciloxicarbonilo (Cbz o Z) o 9- fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); -SO2-RGP1 tales como fenilsulfonilo, tosilo (Ts o Tos) o 2-nitrobencensulfonilo (tambien llamado nosilo - Nos o Ns); y los similares,
con Rgp1 representando un alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o varios atomos de halogeno tales
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como F o Cl; un alquenilo (C2-C6) tal como un alilo; un arilo, tal como un fenilo, opcionalmente sustituido con uno
0 varios grupos seleccionados de entre OMe (metoxi) y NO2 (nitro); un aril-alquilo (Ci-Ca), tal como un bencilo, la porcion arilo siendo opcionalmente sustituida con uno o varios grupos metoxi; o un grupo 9-fluorenilmetilo.
En particular, el grupo N-protector comprende formilo, acetilo, benzoflo, pivaloilo, fenilsulfonilo, bencilo (Bn), t- butiloxicarbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (Cbz), p-metoxibenciloxicarbonilo, p-nitrobencil-oxicarbonilo, tricloroetoxicarbonilo (TROC), aliloxicarbonilo (Alloc), 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), trifluoro-acetilo, carbamatos de bencilo (sustituidos o no) y similares. Este puede ser, en particular, un grupo Boc o Fmoc.
La proteccion de la funcion amina NH por un grupo Boc o Fmoc y su posterior desproteccion, a continuacion de la reaccion de condensacion/sustitucion/aminacion reductiva, son bien conocidas por los expertos en la materia y se describen en particular en la parte experimental a continuacion.
El compuesto de formula (I) obtenido con uno de los tres procedimientos anteriormente mencionados tambien puede ser salificado mediante la adicion de una base o acido farmaceuticamente aceptable, en particular un acido farmaceuticamente aceptable tal como acido trifluoroacetico. Dicha etapa se puede realizar opcionalmente al mismo tiempo que otra etapa de reaccion, en particular, al mismo tiempo que una etapa de desproteccion cuando este se debe realizar en un medio acido, por ejemplo.
El compuesto obtenido con uno de estos tres procedimientos, opcionalmente a continuacion de la(s) etapa(s) adicional(es) para la desproteccion, funcionalizacion y/o salificacion, se puede separar del medio de reaccion usando procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia, tales como mediante extraccion, evaporacion del disolvente o por precipitacion y filtracion.
Si es necesario el compuesto tambien se puede purificar, utilizando tecnicas bien conocidas por los expertos en la materia, por ejemplo, mediante recristalizacion si el compuesto es cristalino, mediante destilacion, por cromatograffa en columna de gel de sflice o cromatograffa lfquida de alto rendimiento (HPLC).
Los siguientes ejemplos ilustran la invencion sin limitar el alcance de la misma.
Ejemplos
1 - Sintesis de los compuestos de la invencion
Las siguientes abreviaturas se usan en los siguientes ejemplos:
ac. acuoso
ee exceso enantiomerico
equiv equivalente
ESI ionizacion por electroaspersion
LC/MS cromatograffa lfquida acoplada a espectrometffa de masas
HPLC cromatograffa ffquida de alto rendimiento
NMR resonancia magnetica nuclear
sat saturado
UV ultravioleta
Ejemplo de referencia 1
(S)-2-((S)-2-((3-ammopropM)(metil)ammo)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((lR,2R)-1- metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-feml-1-(tiazol-2-il)etil)ammo)propil)pirrolidm-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)- W,3-dimetilbutanamida, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 1A: (4R,5S)-4-metil-5-fenil-3-propanoil-1,3-oxazolidin-2-ona
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(4R,5S)-4-metil-5-fenil-1,3-oxazolidin-2-ona (5,8 g, 32,7 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en tetrahidrofurano (THF, 120 ml) en una atmosfera inerte. La mezcla se enfrio a -78°C y se anadio n-butil-litio (14,4 ml) gota a gota. a continuacion de agitacion durante 30 minutos a -78°C, se anadio cloruro de propanoilo (5,7 ml). La agitacion continuo durante 30 minutos a -78°C y a continuacion durante la noche a temperatura ambiente. A continuacion la mezcla de reaccion se concentro, se redisolvio en 200 ml de agua. El pH de la solucion se ajusto a 7 con solucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Esta fase acuosa se extrajo 3 veces con 100 ml de acetato de etilo (EtOAc). Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 6,8 g (89%) del compuesto 1A en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1B: ferc-butil (2S)-2-[(lR,2R)-1-hidroxi-2-metil-3-[(4R,5S)-4-metil-2-oxo-5-fenil-1,3-oxazolidin-3-il]-3- oxopropil]pirrolidin-1-carboxilato
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El compuesto 1A (17,6 g, 75,45 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en diclorometano (DCM, 286 ml) en una atmosfera inerte. Esta solucion se enfrio con un bano de hielo. Se anadieron trietilamina (TEA, 12,1 ml, 1,15 equiv) y Bu2BOTf (78,3 ml, 1,04 equiv) gota a gota mientras se mantema la temperatura de la mezcla de reaccion por debajo de 2°C. La agitacion continuo a 0°C durante 45 minutos, a continuacion de lo cual la reaccion se enfrio a -78°C. Se anadio gota a gota una solucion de ferc-butil (2S)-2-formilpirrolidin-1-carboxilato (8,5 g, 42,66 mmoles, 0,57 equiv) en DCM (42 ml). La agitacion continuo durante 2 horas a -78°C, a continuacion durante 1 hora a 0°C y finalmente 1 hora a temperatura ambiente. La reaccion se neutralizo con 72 ml de regulador de pH de fosfato (pH = 7,2 - 7,4) y 214 ml de metanol, y se enfrio a 0°C. Se anadio gota a gota una solucion de peroxido de hidrogeno al 30% en metanol (257 ml) mientras se mantema la temperatura por debajo de 10°C. La agitacion continuo durante 1 hora a 0°C. La reaccion se neutralizo con 142 ml de agua, a continuacion se concentro bajo presion reducida. La solucion acuosa resultante se extrajo 3 veces con 200 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y eter de petroleo (EtOAc:PE = 1:8) para producir 13,16 g (40%) del compuesto 1B en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 1C: Acido (2R,3R)-3-[(2S)-1-[(ferc-butoxi)carbonil]pirrolidin-2-il]-3-hidroxi-2-metilpropanoico
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El compuesto 1B (13,16 g, 30,43 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en THF (460 ml) en presencia de peroxido de hidrogeno (30% en agua, 15,7 ml), a continuacion se enfrio con un bano de hielo. Se anadio gota a gota una solucion acuosa de hidroxido de litio (0,4 mol/l, 152,1 ml) mientras se mantema la temperatura de reaccion por debajo de 4°C. La mezcla de reaccion se agito 2,5 horas a 0°C. Se anadio gota a gota una solucion acuosa de Na2SO3 (1 mol/l, 167,3 ml) mientras se mantema la temperatura a 0°C. La mezcla de reaccion se agito 14 horas a temperatura ambiente, a continuacion se neutralizo con 150 ml de solucion fria saturada de bicarbonato de sodio y se lavo 3 veces con 50 ml de DCM. El pH de la solucion acuosa se ajusto a 2-3 con una solucion acuosa 1 M de KHSO4. Esta solucion acuosa se extrajo 3 veces con 100 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con solucion saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 7,31 g (88%) del compuesto 1C en forma de un aceite incoloro.
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Ejemplo ID: Acido (2R,3R)-3-[(2S)-1-[(terc-butoxi)carbonil]pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoico
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El compuesto 1C (7,31 g, 26,74 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (135 ml) en presencia de yodometano (25,3 ml). El medio de reaccion se enfrio con un bano de hielo a continuacion de lo cual se anadio NaH (60% en aceite, 4,28 g) en porciones. La reaccion se dejo bajo agitacion 3 dfas a 0°C y a continuacion se neutralizo con 100 ml de solucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se lavo 3 veces con 50 ml de eter. El pH de la solucion acuosa se ajusto a 3 con solucion acuosa de KHSO4 1M. Esta solucion acuosa se extrajo 3 veces con 100 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 100 ml de Na2S2O3 (5% en agua), una vez con solucion saturada de NaCl, a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 5,5 g (72%) del compuesto 1D en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 1E: A/-metoxi-W-metil-2-fenilacetamida
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El acido 2-fenilacetico (16,2 g, 118,99 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en dimetilformamida (DMF, 130 ml) a continuacion se enfrio a -10°C. Se anadieron dietil fosforocianidato (DEPC, 19,2 ml), clorhidrato de metoxi(metil)amina (12,92 g, 133,20 mmoles, 1,12 equiv) y trietilamina (33,6 ml). La mezcla de reaccion se agito 30 minutos a -10°C y a continuacion 2,5 horas a temperatura ambiente. A continuacion, se extrajo dos veces con 1 litro de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con 500 ml de NaHCO3 (sat.), una vez con 400 ml de agua, a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100 a 1:3) para producir 20,2 g (95%) del compuesto 1E en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1F: 2-fenil-1-(l,3-tiazol-2-il)etan-1-ona
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Se disolvio tetrametiletilendiamina (TMEDA, 27,2 ml) en 300 ml de THF) en una atmosfera inerte, a continuacion se enfrio a -78°C antes de la adicion, gota a gota, de n-BuLi (67,6 ml, 2,5 M). Se anadio 2-bromo-1,3-tiazol (15,2 ml) gota a gota y la agitacion continuo durante 30 minutos a -78°C. El compuesto 1E (25 g, 139,50 mmoles, 1,00 equiv) disuelto en THF (100 ml) se anadio gota a gota. La agitacion continuo durante 30 minutos a -78°C y a continuacion 2 horas a -10°C. La reaccion se neutralizo con 500 ml de KHSO4 (sat.), a continuacion se extrajo 3 veces con 1 litro de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con 400 ml de agua y dos veces con 700 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100 a 1:10) para producir 25 g (88%) del compuesto 1F en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1G: (lR-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etan-1-ol
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En una atmosfera inerte, se anadio gota a gota una solution del compuesto 1F (15 g, 73,8 mmoles, 1,00 equiv.) en eter (300 ml) a (+)-B-clorodiisopinocanfeilborano((+)- Ipc2BCl, 110,8 ml). La mezcla de reaction se agito 24 horas a 0°C, a continuation se neutralizo con 300 ml de una mezcla (1:1) de NaOH (10% en agua) y H2O2 (30% en agua), y finalmente se extrajo tres veces con 500 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con 300 ml de K2CO3 (sat.) y una vez con 500 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:20 a 1:2) para producir 6,3 g (42%) del compuesto 1G en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 1H: 2-[(1S)-1 -azido-2-feniletil]-1,3-tiazol
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El compuesto 1G (6 g, 29,23 mmoles, 1,00 equiv.) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (150 ml) en presencia de trifenilfosfina (13 g, 49,56 mmoles, 1,70 equiv.), a continuacion se enfrio a 0°C. Se anadio gota a gota azodicarboxilato de dietilo (DEAD, 7,6 ml), seguido de difenilfosforilazida (DPPA, 11 ml), el bano frfo se retiro y la solucion se dejo bajo agitation 48 horas a temperatura ambiente. El medio se concentro a presion reducida. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100 a 1:30) para producir 8 g del compuesto 1H parcialmente purificado en forma de un aceite de color amarillo. El compuesto 1H se uso como tal en la siguiente etapa.
Ejemplo 1I: terc-butil N-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]carbamato
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El compuesto 1H (6,5 g, 28,2 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (100 ml) en presencia de trifenilfosfina (6,5 g, 33,9 mmoles, 1,20 equiv.), y se calento a 50°C durante 2 horas. A continuacion se anadio amomaco (70 ml) y continuo el calentamiento durante 3 horas. La reaccion se enfrio, se neutralizo con 500 ml de agua, a continuacion se extrajo 3 veces con 500 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron y se extrajeron dos veces con 500 ml de HCl 1N. Las fases acuosas se combinaron, se llevaron a pH 8-9 mediante la adicion de una solucion de hidroxido de sodio (10% en agua), a continuacion se extrajeron 3 veces con 500 ml de DCM. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 4,8 g (83%) de (1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etan-1-amina en forma de un aceite de color amarillo. A continuacion, este compuesto se protegio con un grupo Boc ((terc-butoxi)carbonilo) para que se pudiera purificar. Se disolvio en una atmosfera inerte en 1,4-dioxano (40 ml), a continuacion se enfrio a 0°C. (Boc)2O (10,26 g, 47,01 mmoles, 2,00 equiv), se diluyo en 20 ml de 1,4-dioxano anadido gota a gota. El bano frio se retiro y la solucion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente antes de ser neutralizada con 300 ml de agua y se extrajo dos veces con 500 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100 a 1:20, ee = 93%). A continuacion, se recristalizo en una mezcla de hexano/acetona (~5-10/1, 1 g/10 ml) para producir 6 g (84%) del compuesto 1I en forma de un solido de color blanco (ee > 99%).
Ejemplo 1J: terc-butilo (2S)-2-[(lR,2R)-1-metoxi-2-metil-2-[[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-
il)etil]carbamoil]etil]pirrolidin-1-carboxilato
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El compuesto 1I (3 g, 9,86 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en 10 ml de DCM. Se anadio acido trifluoroacetico (TFA, 10 ml) y la solucion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion se concentro a presion reducida para producir 2,0 g (64%) de (1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etan-1-
amina; acido trifluoroacetico en forma de un aceite de color amarillo. Este producto intermedio se volvio a disolver en 20 ml de DCM a continuacion de lo cual, se anadieron el compuesto 1D (1,8 g, 6,26 mmoles, 1,05 equiv), DEPC (1,1 g, 6,75 mmoles, 1,13 equiv) y diisopropiletilamina (DIEA, 1,64 g, 12,71 mmoles, 2,13 equiv). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion se 5 concentro a presion reducida. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100 a 1:3) para producir 2,3 g (81%) del compuesto 1J en forma de un solido de color amarillo palido.
Ejemplo 1K: (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-N-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida;
acido trifluoroacetico
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El compuesto 1J (2,25 g, 4,75 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en 10 ml de DCM. Se anadio TFA (10 ml) y la solucion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion 15 se concentro a presion reducida para producir 2,18 g (94%) del compuesto 1K en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1L: Acido (2S,3S)-2-(bencilamino)-3-metilpentanoico
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El acido (2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoico (98,4 g, 750 mmoles, 1,00 equiv) se anadio a temperatura ambiente y en porciones a una solucion de hidroxido de sodio 2 N (375 ml). El benzaldehido (79,7 g, 751,02 mmoles, 1,00 equiv) se anadio rapidamente y la solucion resultante se agito 30 minutos. Se anadio borohidruro de sodio (10,9
25 g, 288,17 mmoles, 0,38 equiv) en pequenas porciones, mientras se mantema la temperatura entre 5 y 15°C. La agitacion continuo durante 4 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con 200 ml de agua, a continuacion se lavo dos veces con 200 ml de EtOAc. El pH de la solucion acuosa se ajusto a 7 con una solucion de acido clorhidrico 2N. El precipitado formado se recogio por filtracion y produjo 149,2 g (90%) del compuesto 1L en forma de un solido de color blanco.
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Ejemplo 1M: Acido (2S,3S)-2-[bencil(metil)amino]-3-metilpentanoico
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35 El compuesto 1L (25 g, 112,97 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en acido formico (31,2 g) en presencia de formaldehido (36,5% en agua, 22,3 g). La solucion se agito 3 horas a 90°C y a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se trituro en 250 ml de acetona, a continuacion se concentro. Esta operation de trituracion/evaporacion se repitio dos veces con 500 ml de acetona para producir 21,6 g (81%) del compuesto 1M en forma de un solido de color blanco.
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Ejemplo 1N: (2S,3S)-2-[bencil(metil)amino]-3-metilpentan-1-ol
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El LiAlH4 (0,36 g) se suspendio en 10 ml de THF en una atmosfera inerte a 0°C. El compuesto 1M (1,5 g, 6,37 mmoles, 1,00 equiv) se anadio en pequenas porciones mientras se mantema la temperatura entre 0 y 10°C. La mezcla de reaccion se agito 2 horas a 65°C, a continuacion se enfrio de nuevo a 0°C antes de ser 5 neutralizada con adiciones sucesivas de 360 jl de agua, 1 ml de hidroxido de sodio al 15% y 360 jl de agua. Las sales de aluminio que se precipitaron se separaron por filtracion. El filtrado se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (1:50) para producir 820 mg (58%) del compuesto 1N en forma de un aceite de color amarillo palido.
10 Ejemplo 1O: (2S,3S)-2-[bencil(metil)amino]-3-metilpentanal
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El cloruro de oxalilo (0,4 ml) se disolvio en DCM (15 ml) en una atmosfera inerte. La solucion se enfrio a -70°C y 15 se anadio gota a gota una solucion de dimetilsulfoxido (DMSO (0,5 ml) en DCM (10 ml) durante 15 minutos. La mezcla de reaccion se agito 30 minutos, a continuacion de lo cual se anadio gota a gota una solucion del compuesto 1N (820 mg, 3,70 mmoles, 1,00 equiv) en DCM (10 ml) durante 15 minutos. La mezcla de reaccion se agito otros 30 minutos a baja temperatura, a continuacion, se anadio lentamente trietilamina (2,5 ml). La mezcla de reaccion se agito 1 hora a -50°C, el bano fno se retiro y la reaccion se neutralizo con 25 ml de agua al tiempo 20 que se permitfa que la temperatura volviera a la normalidad. La solucion se lavo una vez con 30 ml de solucion acuosa saturada de NaCl, a continuacion, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:200) para producir 0,42 g (52%) del compuesto 1O en forma de un aceite de color amarillo.
25 Ejemplo 1P: (2S,3S)-W-bencil-1,1-dimetoxi-W,3-dimetilpentan-2-amina
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El compuesto 1O (4,7 g, 21,43 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 20 ml de metanol a 0°C. Se anadio gota a gota 30 acido sulfurico concentrado (4,3 ml) y continuo la agitacion durante 30 minutos a 0°C. Se anadio trimetil ortoformiato (21,4 ml), el bano fno se retiro y el medio de reaccion se dejo bajo agitacion durante 3 horas a temperatura ambiente. El medio de reaccion se diluyo con 200 ml de EtOAc, se lavo sucesivamente con 100 ml de Na2CO3 al 10% y 200 ml de NaCl saturado, a continuacion se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 3,4 g (60%) del compuesto 1P en forma de un aceite de color 35 amarillo palido.
Ejemplo 1Q: [[1-(ferc-butoxi)etenil]oxi](ferc-butil) dimetilsilano
TBDMS^
TBDMSCI
LDA, THF, HMPA 40
Se disolvio diisopropilamina (20 g, 186,71 mmoles, 1,08 equiv) en 170 ml de THF en una atmosfera inerte y se enfrio a -78°C. Se anadio nBuLi (2,4 M, 78,8 ml) gota a gota y la solucion se agito 30 minutos a baja temperatura (para producir LDA-diisopropilamida de litio) antes de anadir acetato de ferc-butilo (20 g, 172,18 mmoles, 1,00 equiv). La mezcla de reaccion se agito 20 minutos a -78°C antes de anadir hexametilfosforamida (HMPA, 45 25,8 ml) y una solucion de ferc-butildimetilclorosilano (TBDMSCl, 28 g, 185,80 mmoles, 1,08 equiv) en 35 ml de
THF. La agitacion continuo durante 20 minutos adicionales a baja temperatura, y a continuacion se retiro el bano fno. La solucion se concentro bajo presion reducida. El residuo se volvio a disolver en 100 ml de agua y se extrajo 3 veces con 100 ml de PE. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 500 ml de solucion acuosa saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo 50 se purifico por destilacion para producir 16,6 g (83%) del compuesto 1Q en forma de un aceite incoloro.
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Ejemplo 1R: ferc-butil (3R,4S,5S)-4-[bencil(metil)amino]-3-metoxi-5-metil heptanoato
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5 El compuesto 1P (2,0 g, 7,54 mmoles, 1,00 equiv) y el compuesto 1Q (2,6 g, 11,28 mmoles, 1,50 equiv) se disolvieron en 33 ml de DCM en una atmosfera inerte. La solucion se enfrio a 0°C. El DMF (1,2 g) se anadio gota a gota junto con una solucion de BFa^O (2,1 g) en 7,5 ml de DCM. La agitacion continuo durante 24 horas a 0°C. El medio de reaccion se lavo una vez con 30 ml de carbonato de sodio (10%) y dos veces con 50 ml de solucion acuosa saturada de NaCl, a continuacion se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro. El 10 residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100) para producir 1,82 g (91%) del compuesto 1R en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1S: clorhidrato de (3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-(metilamino)heptanoato
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El compuesto 1R (2,4 g, 6,87 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en 35 ml de etanol en presencia de Pd/C (0,12 g) y acido clorhndrico concentrado (0,63 ml). La atmosfera de nitrogeno se reemplazo por una atmosfera de hidrogeno y el medio de reaccion se dejo bajo agitacion 18 horas a temperatura ambiente. 20 El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se trituro en 50 ml de hexano y se elimino el sobrenadante que, a continuacion de secar bajo presion reducida, produjo 1,66 g (82%) del compuesto 1S en la forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 1T: ferc-butil (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(benciloxi)carbonil]amino]-W,3-dimetilbutanamido]-3-metoxi-5-
25 metiloheptanoato
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El acido (2S)-2-[[(benciloxi)carbonil]amino]-3-metilbutanoico (15 g, 0,40 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 30 300 ml de DCM en presencia de DiEa (38,3 ml) y hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfonio (PyBrOP, 32,3
g). La solucion se agito 30 minutos a temperatura ambiente antes de la adicion del compuesto 1S (15,99 g, 0,42 mmoles, 1,07 equiv). El medio de reaccion se agito 2 horas y a continuacion se concentro. El residuo se purifico en fase inversa (C18) con una mezcla de acetonitrilo (ACN) y agua (30:70 a 100:0 por 40 minutos) para producir 17 g (58%) del compuesto 1T en forma de un aceite lfquido incoloro.
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Ejemplo 1U: ferc-butil (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-amino-W,3-dimetilbutanamido]-3-metoxi-5-metilheptanoato
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40 El compuesto 1T (76 mg, 0,15 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en 10 ml de etanol en presencia de Pd/C (0,05 g). La atmosfera de nitrogeno se reemplazo por una atmosfera de hidrogeno y la reaccion se agito 2 horas a temperatura ambiente. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 64 mg del compuesto 1U en forma de un aceite incoloro.
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Ejemplo 1V: (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino-N,3-dimetilbutanamido]-3-metoxi-5-
metilheptanoato
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El compuesto 1U (18,19 g, 50,74 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 400 ml de una mezcla de 1,4-dioxano/agua (1:1) en presencia de bicarbonato de sodio (12,78 g, 152 mmoles, 3,00 equiv) y cloroformiato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (Fmoc-Cl, 19,69 g, 76 mmoles, 1,50 equiv), a continuaciOn se agito 2 horas a temperatura ambiente. El medio de reacciOn se diluyO entonces con 500 ml de agua y se extrajo 3 veces con 200 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 200 ml de soluciOn acuosa saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 40 g del compuesto 1V parcialmente purificado en forma de un aceite de color amarillo palido.
Ejemplo 1W: Acido (3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino]-N,3-dimetilbutanamido]-3- metoxi-5-metilheptanoico
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El compuesto 1V (40 g, 68,88 mmoles, 1,00 equiv) se disolviO en una atmOsfera neutra en 600 ml de DCM. Se anadiO TFA (300 ml). La soluciOn se agitO 2 horas a temperatura ambiente, a continuaciOn se concentrO a presiOn reducida. El residuo se purificO en una columna de sflice con una mezcla de metanol y DCM (1:10) para producir 23,6 g (65%) del compuesto 1W en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 1X: 9H-fluoren-9-ilmetil W-[(1S)-1 -[[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -[(2S)-2-[(1R,2R)-1 -metoxi-2-metil-2-[[(1S)-2- fenil-1 -(1,3-tiazol-2-il)etil]carbamoil]etil]pirrolidin-1 -il]-5-metil-1 -oxoheptan-4-il](metil)carbamoil]-2- metilpropil]carbamato
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El compuesto 1W (2,53 g, 4,82 mmoles, 1,08 equiv) se disolviO en 20 ml de DCM en presencia del compuesto 1K (2,18 g, 4,47 mmoles, 1,00 equiv), DEPC (875 mg, 5,37 mmoles, 1,20 equiv) y DIEA (1,25 g, 9,67 mmoles, 2,16 equiv). La mezcla de reacciOn se dejO bajo agitaciOn durante la noche a temperatura ambiente, a continuaciOn se lavO sucesivamente con 50 ml de soluciOn saturada de KHSO4 y 100 ml de agua, se secO sobre sulfato de sodio, se filtrO y se concentrO. El residuo se purificO en una columna de sflice con una mezcla de metanol y DCM (1:200 a 1:40) para producir 2,8 g (71%) del compuesto 1X en forma de un sOlido de color amarillo palido.
Ejemplo 1Y: (2S)-2-amino-N-[(3R,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-2-[[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol- 2-il)etil]carbamoil]etil]pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N,3-dimetilbutanamida
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El compuesto 1X (2,8 g, 3,18 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en acetonitrilo (ACN, 12 ml) en presencia de piperidina (3 ml) y se dejo bajo agitacion 18 horas a temperatura ambiente. La reaccion se neutralizo con 50 ml de agua, a continuacion se extrajo dos veces con 100 ml de DCM. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de metanol y DCM (1:100 a 1:40) para producir 1,2 g (57%) del compuesto 1Y en forma de un solido de color amarillo.
Ejemplo 1ZA: Acido (2S)-2-[[(terc-butoxi)carbonil](metil)amino]-3-metil butanoico
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El acido (2S)-2-[[(terc-butoxi)carbonil]amino]-3-metilbutanoico (63 g, 289,97 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (1000 ml) en presencia de yodometano (181 ml). La solucion se enfrio a 0°C antes de anadir hidruro de sodio (116 g, 4,83 moles, 16,67 equiv) en pequenas porciones. La mezcla de reaccion se agito durante 1,5 horas a 0°C, el bano frio se retiro y la agitacion continuo durante 18 horas. La reaccion se neutralizo con 200 ml de agua y a continuacion se concentro a presion reducida. La fase acuosa residual se diluyo con 4 litros de agua, se lavo una vez con 200 ml de EtOAc y su pH se ajusto entre 3 y 4 con una solucion de acido clorhndrico 1N. La mezcla obtenida se extrajo 3 veces con 1,2 L de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 60 g (89%) del compuesto 1ZA en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1ZB: bencil (2S)-2-[[(terc-butoxi)carbonil](metil)amino]-3-metilbutanoato
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El compuesto 1ZA (47 g, 203,21 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en DMF (600 ml) en presencia de U2CO3 (15,8 g, 213,83 mmoles, 1,05 equiv). La solucion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadio gota a gota bromuro de bencilo (BnBr 57,9 g, 338,53 mmoles, 1,67 equiv). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche antes de ser neutralizada con 400 ml de agua y se filtro. La solucion obtenida se extrajo dos veces con 500 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100 a 1:20) para producir 22,5 g (34%) del compuesto 1ZB en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 1ZC: clorhidrato de bencil (2S)-3-metil-2-(metilamino) butanoato
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El compuesto 1ZB (22,5 g, 70,00 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 150 ml de DCM. Se burbujeo acido clorhndrico gaseoso. La reaccion se agito 1 hora a temperatura ambiente y a continuacion se concentro a presion reducida para producir 17 g (94%) del compuesto 1ZC en forma de un solido de color amarillo.
Ejemplo 1ZD: terc-butil A/-(3,3-dietoxipropil)carbamato
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La 3,3-dietoxipropan-1-amina (6 g, 40,76 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 1,4-dioxano (30 ml) en presencia de TEA (4,45 g, 43,98 mmoles, 1,08 equiv), a continuacion se enfrio hasta 0°C. (Boc)2O (9,6 g, 43,99 mmoles, 1,08 equiv) diluido en 20 ml de 1,4-dioxano se anadio gota a gota. La solucion se agito 2 horas a 0°C, a continuacion
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Ejemplo 1Z: ferc-butil A/-(3-oxopropil)carbamato
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El compuesto 1ZD (8,20 g, 33,15 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 18,75 ml de acido acetico y se dejo en agitacion durante la noche a temperatura ambiente. El medio de reaccion se extrajo 3 veces con 30 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron 3 veces con 30 ml de solucion saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 5 g (87%) del compuesto 1ZE en forma de un aceite de color rojo oscuro.
Ejemplo 1ZF: Acido (2S)-2-[(3-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]propil)(metil)amino]-3-metilbutanoico
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El compuesto 1ZE (2,4 g, 13,86 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 50 ml de THF en presencia del compuesto 1ZC (3,56 g, 13,81 mmoles, 1,00 equiv) y DIEA (9,16 ml, 4,00 equiv). La mezcla de reaccion se agito 30 minutos a temperatura ambiente antes de anadir triacetoxiborohidruro de sodio (5,87 g, 27,70 mmoles, 2,00 equiv). La agitacion continuo durante una noche, a continuacion la reaccion se neutralizo con 100 ml de agua y se extrajo 3 veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico parcialmente en una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (1:4). El producto bruto obtenido se volvio a disolver en 20 ml de metanol en presencia de Pd/C (1,2 g) y se hidrogeno durante 20 minutos a temperatura y presion normal. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 200 mg (5%) del compuesto 1ZF en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 1ZG: ferc-butil N-(3-[[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-[(lR,2R)-1-metoxi-2-metil-2-[[(1S)- 2-fenil-1-(l,3-tiazol-2-il)etil]carbamoil]til]pirrolidin-1 -il]-5-metil-1 -oxoheptan-4-il](metil)carbamoil]-2- metilpropil]carbamoil]-2-metilpropil](metil)amino]propil)carbamato
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El compuesto 1Y (50 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 2 ml de DMF en presencia del compuesto 1ZF (26,2 mg, 0,09 mmoles, 1,20 equiv), DIEA (37,7 ml) y hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazo-1-il)-W,W,W,W- tetrametiluronio (HATU, 43,3 mg, 0,11 mmoles, 1,50 equiv). La reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion se diluyo con 10 ml de agua y se extrajo 3 veces con 5 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 100 mg del compuesto 1ZG en forma de un aceite incoloro parcialmente purificado.
Ejemplo de referencia 1: El compuesto 1ZG (90 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera neutra en 2 ml de DCM y la solucion se enfrio con un bano de hielo. Se anadio TFA (1 ml) y la reaccion se agito durante 2 horas a temperatura ambiente, a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (columna Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de
elucion: agua/ACN con pH regulado con 0,05% de TFA; gradiente de 18% a 31% de ACN durante 7 minutes y a continuacion de 31% a 100% de ACN durante 2 minutes; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 1 se obtuvo con un rendimiento del 25% (23 mg) en forma de un solido de color blanco.
5 LC/MS/UV (columna Atlantis T3, 3 pm, 4,6 x 100 mm; 35°C; 1 ml/min, de 30% a 60% de ACN en agua (acetato de amonio 20 mM por 6 minutos); ESI (C44H73N7O6S, masa exacta 827,53) m/z: 829 (MH+), 5,84 min (93,7%, 254 nm).
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,85-7,80 (m, 1H); 7,69-7,66 (m, 1H), 7,40-7,10 10 (m, 5H), 5,80-5,63 (m, 1H), 4,80-4,65 (m, 2H), 4,22-4,00 (m, 1H), 3,89-0,74 (m, 58H).
Ejemplo 2
(S)-2-((S)-2-(((2-ammopmdm-4-il)metN)(metM)ammo)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3- 15 (((1S,2R)-1-hidroxM-femlpropan-2-N)ammo)-1-metoxi-2-metM-3-oxopropN)pirrolidm-1-M)-3-metoxi-5-metN-
1-oxoheptan-4-M)-W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
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20 Ejemplo 2A: rerc-butil (S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-mdroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-
oxopropil)pirrolidin-1-carboxilato
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25 El compuesto 1D (2,5 g, 8,70 mmoles, 1,00 equiv) y (1S,2R)-2-amino-1-fenilpropan-1-ol (1,315 g, 8,70 mmoles, 1,00 equiv) se disolvieron en una atmosfera inerte en DMF (35 ml). La solucion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadieron gota a gota DEPC (1,39 ml) y TEA (1,82 ml). La mezcla de reaccion se agito 2 horas a 0°C, a continuacion 4 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con 200 ml de agua y se extrajo tres veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 ml de KHSO4 (1 30 mol/l), una vez con 50 ml de NaHCO3 (sat.), una vez con 50 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion reducida para producir 3,6 g (98%) del compuesto 2A en forma de un solido de color amarillo.
Ejemplo 2B: (2R,3R)-W-((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)-3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-il)propanamida- 35 2,2,2-trifluoroacetato
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El compuesto 2A (2,7 g, 6,42 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en DCM (40 ml), a 40 continuacion se enfrio a 0°C. Se anadio TFA (25 ml) y la solucion se agito durante 2 horas a 0°C. La mezcla de reaccion se concentro a presion reducida para producir 4,4 g del compuesto 2B en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 2C: (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-
il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-
oxobutan-2-il)carbamato
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Los compuestos 2B (4,4 g, 10,13 mmoles, 1,00 equiv) y 1W (5,31 g, 10,12 mmoles, 1,00 equiv) se disolvieron en una atmosfera inerte en DCM (45 ml). La solucion se enfrio a 0°C, a continuacion se anadieron gota a gota DEPC (1,62 ml) y DIEA (8,4 ml). La mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a 0°C y a continuacion a
10 temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se diluyo con 100 ml de agua y se extrajo tres veces con 50 ml de DCM. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 ml de KHSO4 (1 mol/l), una vez con 50 ml de NaHCO3 (sat.), una vez con 50 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion para producir 3,3 g (39%) del compuesto 2C en forma de un solido de color amarillo.
15
Ejemplo 2D: (S)-2-amino-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-
metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida
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El compuesto 2C (300 mg, 0,36 mmoles, 1,00 eq.) se disolvio en una atmosfera inerte en ACN (2 ml) y piperidina (0,5 ml). La solucion se dejo bajo agitacion a temperatura ambiente durante la noche y a continuacion se evaporo hasta sequedad a presion reducida. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de DCM y MeOH (1:100) para producir 150 mg (68%) del compuesto 2D en forma de un solido de color blanco.
25
Ejemplo 2E: metil 2-((ferc-butoxicarbonil)amino)isonicotinato
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30 El metil 2-aminopiridin-4-carboxilato (2 g, 13,14 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en ferc-butanol (20 ml) a continuacion de lo cual se anadio di-ferc-butil dicarbonato (4,02 g, 18,42 mmoles, 1,40 equiv) (20 ml). La mezcla de reaccion se agito a 60°C durante la noche, a continuacion la reaccion se detuvo mediante la adicion de una solucion acuosa de NaHCO3 1M (50 ml). El solido se recupero por filtracion, se lavo con 50 ml de EtOH, a continuacion se seco in vacuo para producir 2,5 g (75%) del compuesto 2E en forma de un solido de color 35 blanco.
Ejemplo 2F: ferc-butil (4-(hidroximetil)piridin-2-il)carbamato
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5 El compuesto 2E (2,5 g, 9,91 mmoles, 1,00 equiv) y CaCl2 (1,65 g) se disolvieron en EtOH (30 ml). La solucion se enfrio a 0°C, a continuacion se anadio gradualmente NaBH4 (1,13 g, 29,87 mmoles, 3,01 equiv). La solucion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion la reaccion se detuvo con la adicion de agua (50 ml). La mezcla se extrajo tres veces con 20 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con 20 ml de NaCl (sat.) y a continuacion se secaron sobre sulfato sodico, se 10 filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir 2,0 g (90%) del compuesto 2F en forma de un solido incoloro.
Ejemplo 2G: ferc-butil (4-formilpiridin-2-il)carbamato
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El compuesto 2F (2,5 g, 11,15 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en DCE (25 ml) y a continuacion se anadieron 19,4 g (223,14 mmoles, 20,02 equiv) de MnO2. La mezcla se dejo bajo agitacion durante la noche a 70°C, a continuacion los solidos se retiraron por filtracion. El filtrado se evaporo hasta sequedad para producir 1,4 g 20 (57%) del compuesto 2G en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 2H: bencil (S)-2-(((2-((ferc-butoxicarbonil)amino)piridin-4-il)metil)(metil)amino)-3-metilbutanoato
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El compuesto 2G (2,3 g, 10,35 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 25 ml de THF en presencia del compuesto 1ZC (2,93 g, 11,37 mmoles, 1,10 equiv), DIEA (5,39 g, 41,71 mmoles, 4,03 equiv) y NaBH(OAc)3 (4,39 g, 20,71 mmoles, 2,00 equiv). La mezcla de reaccion se agito durante 6 horas a temperatura ambiente y a continuacion se neutralizo con 60 ml de NaHCO3 (sat.) y se extrajo 3 veces con 20 ml de AcOEt. Las fases 30 organicas se combinaron, se lavaron dos veces con 20 ml de NaCl (sat.), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (1:15) para producir 2,7 g (61%) del compuesto 2H en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 2I: Acido (S)-2-(((2-((ferc-butoxicarbonil)amino)piridin-4-il)metil)(metil)amino)-3-metilbutanoico 35
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El compuesto 2H (500 mg, 1,17 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 10 ml de AcOEt y 2 ml de metanol en presencia de Pd/C (250 mg), y se hidrogeno durante 3 horas a temperatura ambiente y presion atmosferica. El 40 medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 254 mg (64%) del compuesto 2I en forma de un solido incoloro
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Ejemplo 2J: ferc-butil (4-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-butil)-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-
fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil) pirrolidin-1 -il)-2-oxoetM)-3,6-diisopropil-2,8-dimetil-4,7-dioxo- 11-oxa-2,5,8-triazadodecil)piridin-2-il)carbamato
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El compuesto 2J se preparo de forma similar al compuesto 1ZG a partir de la amina 2D (85,2 mg, 0,14 mmoles, 1,50 equiv), el acido 2I (31,7 mg, 0,09 mmoles, 1,00 equiv), HATU (42,9 mg, 0,11 mmoles, 1,20 equiv) y DIEA (36,7 mg, 0,28 mmoles, 3,02 equiv) en DMF (3 ml). a continuacion de evaporacion hasta sequedad, se obtuvieron 100 mg del producto bruto en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 2: El compuesto 2J (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 2 ml de DCM y 1 ml de TFA. La reaccion se agito durante 1 hora a temperatura ambiente, a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo (80 mg) se purifico por HPLC preparativa (columna Pre-HPLC-001 SHIMADZU, SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con 0,05% de TFA; gradiente de 20% a 40% de aCn por 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 2 se obtuvo con un rendimiento del 6% (6,3 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,8 ml/min, de 10% a 95% de ACN en agua (0,05% de TFA) por 6 minutos); ESI (C45H73N7O7, masa exacta 823,56) m/z: 824,5 (MH+) y 412,9 (M,2H+/2, 100%), 3,21 min (99,2%, 210 nm)
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,81-7,79 (m, 1H); 7,39-7,29 (m, 5H); 6,61-6,59 (m, 2H); 4,84-4,52 (m, 1H); 4,32-4,02 (m, 1H); 3,90-2,98 (m, 10H); 2,90-2,78 (m, 1H); 2,55-0,81 (m, 39H).
Ejemplo 3
metil ((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-W,3-di-metN-2-((S)-3-metM-2-(metN(piridm-4-MmetM)
ammo)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoil) pirroMdm-2-M)-3-metoxi-2-metilpropanamido)- 3-fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 3A: ferc-butil (S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-3-(((S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-2-metil-3-
oxopropil)pirrolidin-1-carboxilato
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El compuesto 1D (3 g, 10,44 mmoles, 1,00 equiv) y metil (S)-2-amino-3-fenilpropanoato (2,25 g, 12,55 mmoles, 1,20 equiv) se disolvieron en una atmosfera inerte en DMF (40 ml). La solucion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadieron gota a gota DEPC (1,67 ml, 1,05 equiv) y TEA (3,64 ml, 2,50 equiv). La mezcla de reaccion se agito 2 horas a 0°C y a continuacion a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se diluyo con 100 ml de agua y se extrajo tres veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 100 ml de KHSO4 (1 mol/l), una vez con 100 ml de NaHCO3 (sat.), una vez con 100 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion para producir 4 g (85%) del compuesto 3A en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 3B: 2,2,2-trifluoroacetato de metil (S)-2-((2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-((S)-pirrolidin-2-il)propanamido)-3- fenilpropanoato
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El compuesto 3A (5 g, 11,15 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en DCM (40 ml). Se anadio TFA (25 ml) y la solucion se agito durante 2 horas. La mezcla de reaccion se concentro a presion reducida para producir 8 g del compuesto 3B en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 3C: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-N,3- dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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Los compuestos 3B (8,03 g, 17,36 mmoles, 1,00 equiv) y 1W (9,1 g, 17,34 mmoles, 1,00 equiv) se disolvieron en una atmosfera inerte en DCM (80 ml). La solucion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadieron gota a gota DEPC (2,8 ml) y DIEA (12 ml). La mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a 0°C y a continuacion a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reaccion se diluyo con 200 ml de agua y se extrajo tres veces con 50 ml de DCM. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 50 ml de KHSO4 (1 mol/l), una vez con 50 ml de NaHCO3 (sat.), una vez con 50 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion reducida para producir 5 g (34%) del compuesto 3C en forma de un solido de color amarillo.
Ejemplo 3D: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-amino-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-
metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)- 3-fenilpropanoato
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El compuesto 3C (5,5 g, 6,43 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en una solucion de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 2,61 g, 9,98 mmoles, 1,55 equiv) en DMF (100 ml). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas y a continuacion se diluyo con 100 ml de agua y se extrajo tres veces con 50 ml de
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EtOAc. Las fases organicas se combinaron, a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir 3,3 g (81%) del compuesto 3D en forma de un solido de color amarillo.
Ejemplo 3E: bencil (S)-3-metil-2-(metil(piridin-4-ilmetil)amino)butanoato
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La piridina-4-carbaldehndo (1 g, 9,34 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 10 ml de 1,2-dicloroetano (DCE) en presencia del compuesto 1ZC (2,9 g, 11,25 mmoles, 1,21 equiv) e isopropoxido de titanio (IV) (4,19 ml, 1,40 equiv). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos y a continuacion se anadieron 2,77 g de NaBH(OAc)3 (13,07 mmoles, 1,40 equiv). El medio de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche y a continuacion se neutralizo con 100 ml de agua y la mezcla se extrajo 3 veces con 50 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron y se evaporaron hasta sequedad. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:20) para producir 1,3 g (45%) del compuesto 3E en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 3F: Acido (S)-3-metil-2-(metil(piridin-4-ilmetil)amino)butanoico
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El compuesto 3E (800 mg, 2,56 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 30 ml de AcOEt en presencia de Pd/C (300 mg) y se hidrogeno durante 3 horas a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de DCM y MeOH (100:1 a 5:1) para producir 100 mg (18%) del compuesto 3F en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 3: Los compuestos 3D (50 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv) y 3F (26,34 mg, 0,12 mmoles, 1,50 equiv) se disolvieron en 3 ml de DCM. La solucion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadieron 0,018 ml de DEPC y 0,0392 ml de DIEA. La reaccion se agito a 0°C durante 2 horas y a continuacion a temperatura ambiente durante la noche. El medio de reaccion se concentro a presion reducida y el residuo (70 mg) se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con 0,05% de TFA; gradiente de 20% a 40% de aCn por 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 3 se obtuvo con un rendimiento del 27% (20 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, del 10% al 95% de ACN en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C46H72N6O8, masa exacta 836,5) m/z: 837,5 (MH+) y 419,4 (M,2H+/2 (100%)), 7,04 min (90,0%, 210 nm)
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,76-8,74 (m, 2H); 8,53-8,48 (m, 0,4H, NHCO intercambio incompleto); 8,29-8,15 (m, 0,8H, NHCO intercambio incompleto); 8,01 (s, 2H), 7,31-7,22 (m, 5H), 4,88-4,68 (m, 3H); 4,31-4,07 (m, 2H); 3,94-2,90 (m, 18H); 2,55-0,86 (m, 38H).
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Ejemplo 4
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil(piridm-4-
ilmetil)ammo)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2- metilpropanamido)-3-fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 4: El compuesto 3 (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una mezcla de agua (5 ml), ACN (5 ml) y piperidina (2,5 ml). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche y a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 20 mg (20%) del compuesto 4 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de ACN en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C45H70N6O8, masa exacta 822,5) m/z: 823,5 (MH+) y 412,4 (M,2H+/2, 100%), 6,84 min (89,1%, 210 nm).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,79-8,78 (m, 2H); 8,09 (m, 2H); 7,30-7,21 (m, 5H); 4,80-4,80 (m, 1H), 4,36-0,87 (m, 58H).
Ejemplo 5
(S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxM-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-feml-1-(tiazol-2- il)etil)ammo)propil)pirrolidm-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil(piridm-4- ilmetil)amino)butanamido)butanamida), acido trifluoroacetico
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Ejemplo 5: El compuesto 5 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (50 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv), el acido 3F (25 mg, 0,11 mmoles, 1,48 equiv), DEPC (0,0174 ml, 1,5 equiv) y DIEA (0,0377 ml, 3 equiv) en DcM (3 ml). El producto bruto (80 mg) se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC- 001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN por 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 20 mg (27%) del compuesto 5 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,0 ml/min, 40% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 18 minutos); ESI (C47H71N7O8S, masa exacta 861,5) m/z: 862,5 (MH+) y 431,9 (M,2H+/2, 100%), 12,69 min (88,9%, 254 nm).
1H NMR: 400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,78 (d, 2H, J = 6,8 Hz); 8,27-8,16 (m, 0,4H,
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Ejemplo 6
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-aminopropil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)- W,3-dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoM)pirroMdm-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 6A: metil (2S)-2-[(2R)-2-[(R)-[(2S)-1-[(3R,4S,5S)-4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(3-[[(terc-
butoxi)carbonil]amino]propil)(metil)amino]-3-metilbutanamido]-W,3-dimetilbutanamido]-3-metoxi-5-
metilheptanoil]pirrolidin-2-il](metoxi)metil]propanamido]-3-fenilpropanoato
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El compuesto 3D (157,5 mg, 0,25 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio a 0°C en una atmosfera inerte, en 3 ml de DCM en presencia de acido carboxflico 1ZF (78,7 mg, 0,27 mmoles, 1,10 equiv), DEPC (46 jl) y DIEA (124 jl). La mezcla de reaccion se agito 2 horas a baja temperatura y a continuacion se retiro el bano frio y la agitacion continuo durante 4 horas. A continuacion, se concentro bajo presion reducida para producir 200 mg del compuesto 6A en forma de un aceite bruto de color amarillo. Se utilizo como tal en la siguiente etapa.
Ejemplo de referencia 6: El compuesto 6A (200 mg, 0,22 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte a 0°C en 2 ml de DCM. Se anadio TFA (1 ml) gota a gota y el bano frio se retiro. La mezcla de reaccion se agito 1 hora a temperatura ambiente y a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 sHlMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 jm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFAal 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm), para producir 60 mg (26%, rendimiento en 2 etapas) del compuesto 6 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (Zorbax Eclipse Plus C8, 3,5 jm, 4,6 x 150 mm; 1 ml/min, 40°C, de 30 a 80% de metanol en agua (H3PO4 al 0,1%) por 18 minutos); ESI (C43H74N608, masa exacta 802,56) m/z: 804 (MH+); 11,50 min (91,5%, 210 nm).
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,52 (d, 0,3H, NHCO intercambio incompleto); 8,25 (d, 0,5H, NHCO intercambio incompleto); 7,30-7,22 (m, 5H); 4,9-4,6 (m, 3H); 4,2-4,0 (m, 1H); 4,0-0,86 (m, 61H).
Ejemplo de referencia 7
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-aminopropil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W,3- dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 7: El compuesto 6 (70 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una mezcla de agua (5 ml), ACN (2,5 ml) y piperidina (5 ml). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperature ambiente, a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de aCn por 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm), para producir 14,6 mg (21%) del compuesto 7 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 1,5 ml/min, 40°C, de 0 a 80% de metanol en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C42H72N6O8, masa exacta 788,54) m/z: 790 (MH+), 5,71 min (96,83%, 210 nm).
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,42 (d, 0,3H, NHCO intercambio incompleto); 8,15 (d, 0,2H, NHCO intercambio incompleto); 7,31-7,21 (m, 5H); 4,9-4,6 (m, 3H); 4,25-4,0 (m, 1H); 4,0-0,86 (m, 59H).
Ejemplo 8
(S)-2-((S)-2-(((2-aminopiridin-4-il)metil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2- ((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((s)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4- il)-W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 8A: ferc-butil (4-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-butil)-3,6-diisopropil-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-
3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-2,8-dimetil-4,7-dioxo-11-oxa-2,5,8-
triazadodecil)piridin-2-il)carbamato
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El compuesto 8A se sintetizo de la misma manera que el compuesto 2J a partir de la amina 1Y (39 mg, 0,06 mmoles, 1,00 equiv), el acido 2I (20 mg, 0,06 mmoles, 1,00 equiv), HATU (27 mg, 0,07 mmoles, 1,20 equiv) y DIEA (23,2 mg, 0,18 mmoles, 3,01 equiv) en DCM (3 ml). El producto bruto no se purifico.
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Ejemplo 8: El compuesto 8 se sintetizo de forma similar al compuesto 2 a partir del producto intermedio 8A (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto (100 mg) se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 |jm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 18% a 31% de aCn durante 7 minutos y a continuacion de 31% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 8 se obtuvo con un rendimiento del 8% (8 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Atlantis T3, 3 jm, 4,6 x 100 mm; 35°C; 1,8 ml/min, de 25% a 80% de ACN en agua (TFAal 0,05%) durante 7 minutos); ESI (C47H72N8O6S, masa exacta 876,5) m/z: 877,5 (MH+) y 439,5 (M,2H+/2, 100%),
4,87 min (95,1%, 254 nm).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,83-7,78 (m, 2H); 7,56-7,52 (m, 1H); 7,34-7,17 (m, 5H); 6,64-6,62 (m, 2H); 5,77-5,61 (m, 1H); 4,86-4,68 (m, 2H); 4,25-4,05 (m, 1H); 3,87-2,83 (m, 17H); 2,560,84 (m, 37H).
Ejemplo 9
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(((2-aminopiridin-4-il)metil)(metil)amino)-3-
metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)- 3-fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 9A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(((2-((ferc-butoxicarbonil)amino)piridin-4-
il)metil)(metil)amino)-3-butanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-
metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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El compuesto 9A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (170 mg, 0,27 mmoles, 1,00 equiv), el acido 2I (99,7 mg, 0,30 mmoles, 1,10 equiv), DEPC (0,049 ml, 1,05 equiv) y DIEA (0,133 ml, 3,00 equiv) en DCM (5 ml). El producto bruto se purifico sobre una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:1) para producir 200 mg (78%) del compuesto 9A en forma de un solido de color amarillo palido.
Ejemplo 9: El compuesto 9 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 9A (200 mg, 0,21 mmoles, 1,00 equiv) en DCM (4 ml) y TFA (2 ml). El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 sHiMaDzU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 jm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 9 se obtuvo con un rendimiento del 10% (20 mg) en forma de un solido de color blanco.
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1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,51-8,45 (m, 0,5H, NH intercambio incomplete); 8,30-8,24 (m, 0,3H, NH intercambio incomplete); 8,17-8,07 (m, 0,8H, NH intercambio incomplete); 7,79-7,77 (m, 1H); 7,36-7,18 (m, 5H); 7,21-7,16 (m, 1H); 6,94-6,89 (m, 1H); 4,85-4,65 (m, 3H); 4,20-3,10 (m, 20H); 3,00-2,85 (m, 2H); 2,55-0,80 (m, 36H).
Ejemplo 10
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(((2-aminopiridin-4-il)metil)(metil)amino)-3-
metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)- 3-fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 10: El compuesto 9 (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una mezcla de agua (5 ml), ACN (5 ml) y piperidina (2,5 ml). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente y a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 32,2 mg (33%) del compuesto 10 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C45H71N7O6, masa exacta 837,5) m/z: 838,5 (MH+) y 419,9 (M,2H+/2, 100%), 6,81 min (97,7%, 220 nm).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,41-8,32 (m, 0,3H, NH intercambio incompleto); 8,20-8,07 (m, 0,8H, NH intercambio incompleto); 7,82-7,75 (m, 1H); 7,36-7,158 (m, 5H); 7,12-7,03 (m, 1H); 6,94
6,88 (m, 1H); 4,85-4,66 (m, 3H); 4,20-3,10 (m, 16H); 3,00-2,85 (m, 2H); 2,57-0,80 (m, 37H).
Ejemplo 11
(S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-
il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil (4-(metilamino)
fenetil)amino) butanamido) butanamida, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 11A: rerc-butil A/-[4-(2-mdroxietil)fenil] carbamato
El compuesto 11Ase obtuvo con un rendimiento del 75% a continuacion de la reaccion a temperatura ambiente del 2-(4-aminofenil)etanol con BOC2O en THF.
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Ejemplo 11B: ferc-butil A/-[4-(2-oxoetil)fenil]carbamato
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El compuesto 11A (2,5 g, 10,5 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 25 ml de DCM y a continuacion se enfrio a - 78°C. Una solucion de Dess-Martin periodinano (DMP, 6,71 g, 15,8 mmoles, 1,5 equiv) en DCM (10 ml) se anadio gota a gota. El bano fno se retiro y la agitacion continuo durante 1 hora a temperatura ambiente. La reaccion se neutralizo con 60 ml de una mezcla 50/50 de solucion acuosa de bicarbonato de sodio saturado y solucion acuosa saturada de Na2S2O3. La solucion resultante se extrajo 3 veces con 30 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con solucion acuosa saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se purifico sobre gel de silice (EtOAc/PE 1/15) para producir 1,0 g (40%) del compuesto 11B en forma de un solido de color amarillo palido.
Ejemplo 11C: bencil (2S)-2-[[2-(4-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]fenil)etil](metil)amino]-3-metilbutanoato.
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El compuesto 1ZC (3,5 g, 13,6 mmoles, 1,1 equiv) se disolvio en THF (30 ml) en presencia de DIEA (6,4 g,
49.7 mmoles, 4,0 equiv), aldetndo 11B (2,9 g, 12,3 mmoles, 1,0 equiv) y triacetoxiborohidruro sodico (5,23 g,
49.7 mmoles, 2,0 equiv). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion se neutralizo con 60 ml de solucion saturada de bicarbonato de sodio. La solucion resultante se extrajo 3 veces con 30 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con solucion acuosa saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se purifico sobre gel de sflice (EtOAc/PE 1:20) para producir 3,7 g (68%) del compuesto 11C en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 11D: Acido (2S)-2-[[2-(4-[[(ferc-butoxi)carbonil]amino]fenil)etil](metil)amino]-3-metilbutanoico
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El compuesto 11C (2 g, 4,5 mmoles, 1 equiv) se disolvio en 10 ml de metanol en presencia de Pd/C (2 g) y se hidrogeno durante 2 horas a temperatura y presion normal. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 1,2 g (75%) del compuesto 11D en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 11E: Acido (2S)-2-[[2-(4-[[(ferc-butoxi)carbonil](metil)amino]fenil)etil](metil)amino]-3-metilbutanoico
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El compuesto 11D (1,2 g, 3,4 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (20 ml). El medio de reaccion se enfrio con un bano de hielo a continuacion de lo cual se anadio NaH (60% en aceite, 549 mg,
13,7 mmoles, 4,0 equiv) en porciones, seguido de yodometano (4,9 g, 34 mmoles, 10 equiv). La reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, a continuacion se neutralizo con agua y se lavo con 100 ml de EtOAc. El pH de la solucion acuosa se ajusto a 6-7 con HCl 1N. Esta solucion acuosa se extrajo 3 veces con 100 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y
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Ejemplo 11F: ferc-butil A/-[4-(2-[[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-[(lR,2R)-1-metoxi-2-metil-2- [[(1S)-2-fenil-1 -(l,3-tiazol-2-il)etil]carbamoil]etil]pirrolidin-1 -il]-5-metil-1 -oxoheptan-4-M](metM)carbamoM]-2- metilpropil]carbamoil]-2-metilpropil](metil)amino]etil)fenil]-W-metilcarbamato
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El compuesto 11F se preparo de manera similar al compuesto 6A a partir de la amina 1Y (150 mg, 0,22 mmoles, 1,2 equiv) y el acido 11E (70 mg, 0,19 mmoles, 1,0 equiv). A continuacion de la purificacion sobre gel de silice (EtOAc/PE 1:1) se obtuvieron 100 mg (52%) del producto deseado en forma de un solido de color amarillo palido.
Ejemplo 11: El compuesto 11 se preparo de la misma manera que para el compuesto 1 a partir del producto intermedio 11F (100 mg, 0,1 mmoles). El residuo se purifico por HpLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN por 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 11 se obtuvo con un rendimiento del 39% (39,7 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 1 ml/min, 40°C, de 50 a 95% de metanol en agua (TFA al 0,05%) durante 18 minutos); ESI (C50H77N7O6S, masa exacta 903,57) m/z: 904,5 (MH+), 7,53 min (93,68%, 254 nm).
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,84 (d, 0,5H, NHCO intercambio incompleto); 8,78,5 (m, 0,9H, NHCO intercambio incompleto); 7,76-7,73 (m, 1H); 7,55-7,4 (m, 1H); 7,28-7,22 (m, 7H); 7,08-7,05 (m, 2H); 5,51-5,72 (m, 1H); 4,9-4,80 (m, 2H); 4,3-0,7 (m, 60H).
Ejemplo 12
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil(4-
(metilamino)fenetil)amino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2- metilpropanamido)-3-fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 12: De la misma manera que para las fases finales en la smtesis del compuesto 1, el compuesto 12 se preparo en dos etapas a partir de la amina 3D (118 mg, 0,19 mmoles) y el acido 11E (82 mg, 0,22 mmoles). El residuo final se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 ObD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 12 se obtuvo con un rendimiento del 7% (13,7 mg) en forma de un solido de color blanco.
1H: NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,40 (se, 2H); 7,38-7,22 (m, 7H); 4,95-4,7 (m, 3H); 4,2-4,0 (m, 1H); 3,9-0,86 (m, 62H).
5 Ejemplo 13
Acido (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil (4-(metilamino) fenetil)amino) butanamido) butanamido)-3-metoxi-5-metil heptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-
fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 13: El compuesto 13 se prepare de la misma manera que para el compuesto 7 a partir del compuesto l2 (100 mg, 0,10 mmoles). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna 15 SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 13 se obtuvo con un rendimiento del 20% (20 mg) en forma de un solido de color blanco.
20 LC/MS/UV (Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 1,5 ml/min, 40°C, de 10 a 95% de metanol en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C48H76N6O8, masa exacta 864,57) m/z: 865,6 (MH+), 6,05 min (90,9%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,32-7,19 (m, 9H); 4,9-4,65 (m, 3H); 4,2-4,0 (m, 25 1H); 3,9 a 0,86 (m, 59H).
Ejemplo 14
(S)-2-((S)-2-((3-aminobencil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi- 30 2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-
dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
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35 Ejemplo 14A: ferc-butil (3-(hidroximetil)fenil)carbamato
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(3-aminofenil)metanol (3 g, 24,36 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en THF (60 ml) a continuacion de lo cual se 40 anadio di-ferc-butil dicarbonato (6,38 g, 29,23 mmoles, 1,20 equiv). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion
durante la noche a temperatura ambiente y a continuacion se diluyo la reaccion mediante la adicion de 200 ml de agua. El producto se extrajo 3 veces con 100 ml de AcOEt y las fases organicas se recombinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a presion reducida para producir el producto bruto (13,85 g
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Ejemplo 14B: ferc-butil(3-formilfenil)carbamato
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El compuesto 14A (13,8 g, 61,81 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en DCE (400 ml) y a continuacion se anadio MnO2 (54 g, 621,14 mmoles, 10,05 equiv). La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 3 dfas a continuacion de lo cual los solidos se separaron por filtracion. El filtrado se evaporo hasta sequedad y el residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:30) para producir 3 g (22%) del compuesto 14B en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 14C: bencil (S)-2-((3-((ferc-butoxicarbonil)amino)bencil)(metil)amino)-3-metilbutanoato
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El compuesto 14B (1 g, 4,52 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 20 ml de THF en presencia del compuesto 1ZC (1,16 g, 4,50 mmoles, 1,00 equiv), DIeA (3 ml) y NaBH(OAc)3 (1,92 g, 9,06 mmoles, 2,01 equiv). La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente y a continuacion se neutralizo con 100 ml de agua y se extrajo 3 veces con 50 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y PE (1:50) para producir 1,9 g (99%) del compuesto 14C en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 14D: Acido (S)-2-((3-((ferc-butoxicarbonil)amino)bencil)(metil)amino)-3-metilbutanoico
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El compuesto 14C (1 g, 2,34 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 30 ml de AcOEt y 4 ml de metanol en presencia de Pd/C (400 mg) y se hidrogeno durante 1 hora a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 680 mg (86%) del compuesto 14D en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 14E: ferc-butil (3-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-butil)-3,6-diisopropil-10-(2-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-
3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-2,8-dimetil-4,7-dioxo-11-oxa-2,5,8-
triazadodecil)fenil)carbamato
imagen92
El compuesto 14E se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (100 mg, 0,15 mmoles, 1,00 equiv), el acido 14D (102,27 mg, 0,30 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,053 ml) y DIeA (0,046 ml) en DCM (3 ml). El producto bruto (80 mg) se purifico en una columna de sflice con una mezcla de
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Ejemplo 14: El compuesto 14 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 14E (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto (80 mg) se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 ^m, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuation de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 14 se obtuvo con un rendimiento del 10% (10 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 ^m, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,0 ml/min, de 40% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 18 minutos); ESI (C48H73N7O6S, masa exacta 875,5) m/z: 876,5 (MH+) y 438,9 (M,2H+/2, 100%), 11,35 min (95,6%, 210 nm).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,92-8,86 (m, 0,4H, NH intercambio incompleto); 8,70-8,54 (m, 0,6H, NH intercambio incompleto); 7,88-7,78 (m, 1H); 7,60-7,50 (m, 1H); 7,45-6,97 (m, 9H); 5,805,65 (m, 1H); 4,85-4,70 (m, 1H); 4,40-0,80 (m, 56H).
Ejemplo 15
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-ammobencN)(metM)ammo)-3-metMbutanamido)- W,3-dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoM)pirrolidm-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
imagen93
Ejemplo 15A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R, 4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((3-((terc-butoxicarbonil) amino)
bencil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetil-butan-amido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-
metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
imagen94
El compuesto 15A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (200 mg, 0,32 mmoles, 1,00 equiv), el acido 14D (212,6 mg, 0,63 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,1103 ml) y DIEA (0,157 ml, 3,00 equiv) en DCM (5 ml). El producto bruto se purifico sobre una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (1:1) para producir 200 mg (67%) del compuesto 15A en forma de un solido de color amarillo.
Ejemplo 15: El compuesto 15 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 15A (200 mg, 0,21 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18I ObD, 5 ^m, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 15 se obtuvo con un rendimiento del 19% (38,6 mg) en forma de un solido de color blanco.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,53 (m, 1H); 7,35-7,18 (m, 8H); 4,88-4,79 (m, 2H); 4,42-4,00 (m, 3H); 3,93-2,71 (m, 22H); 2,61-0,81 (m, 33H).
Ejemplos de referencia 16 al 18 y ejemplos 19 y 20
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Los compuestos 16 a 20 se prepararon de la misma manera que para el compuesto 1, a partir de las aminas 1Y y 1ZC y los aldehndos correspondientes.
El ferc-butilo (4-oxobutil)carbamato, que participa en la preparacion del compuesto 16, se preparo como para el compuesto 1ZE en 2 etapas a partir de la 4,4-dietoxibutan-1-amina.
El ferc-butil-W-metil-W-(2-oxoetil)carbamato involucrado en la preparacion del compuesto 17 era comercial.
El 2-(2-((ferc-butildimetilsilil) oxi)etoxi) acetaldehndo, involucrado en la preparacion del compuesto 18, se preparo en 2 etapas como se expone a continuacion:
Se disolvio 2-(2-hidroxietoxi)etan-1-ol (7 g, 66 mmoles, 9,9 equiv) en una atmosfera inerte en piridina (10 ml) en presencia de 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 80 mg, 0,65 mmoles, 0,1 equiv). La solucion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadio TBDMSCI (1 g, 6,6 mmoles, 1,0 equiv) en porciones. La mezcla de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente, se diluyo con 100 ml de EtOAc y se lavo sucesivamente dos veces con 100 ml de HCl 1N y dos veces con solucion acuosa saturada de NaCl. La fase organica se seco sobre sulfato de sodio anhidro, se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 1,3 g (88%) de 2-[2-[(ferc- butildimetilsilil)oxi]etoxi]etan-1-ol en forma de un aceite incoloro.
El cloruro de oxalilo (760 mg, 6 mmoles, 1,3 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en DCM (40 ml) y se enfrio a -78°C. Se anadio gota a gota dimetilsulfoxido (DMSO, 1,07 g, 13,7 mmoles, 3 equiv) diluido en DCM (5 ml). a continuacion de un tiempo de agitacion de 30 minutos a baja temperatura, se le anadio 2-[2-[(ferc- butildimetilsilil)oxi]etoxi]etan-1-ol (1 g, 4,5 mmoles, 1,0 equiv) disuelto en 5 ml de DCM. La agitacion continuo durante 1 hora a baja temperatura antes de anadir TEA (2,78 g, 27 mmoles, 6 equiv). La mezcla de reaccion se agito 15 minutos a -78°C y durante la noche a temperatura ambiente antes de ser neutralizada con 100 ml de agua. A continuacion, se extrajo 3 veces con 100 ml de DCM. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se purifico sobre gel de silice (EtOAc/PE 1:20) y produjo 0,8 g (80%) de 2-[2-[(ferc-butildimetilsilil)oxi]etoxi]acetaldehido en forma de un aceite incoloro.
El carbonato de ferc-butil 4-formilfenilo involucrado en la preparacion del compuesto 19 se preparo en una sola etapa de la siguiente manera: 4-hidroxibenzaldehndo (2,5 g, 20,5 mmoles, 1,0 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (20 ml) en la presencia de 18-corona-6 (0,25 g) y carbonato de potasio (5 g). La mezcla de reaccion se enfrio a 0°C y a continuacion se anadio el dicarbonato de di-ferc-butilo (5,8 g, 26,58 mmoles, 1,30 equiv). La agitacion continuo durante 1 hora a baja temperatura, a continuacion de lo cual la reaccion se neutralizo con 30 ml de agua. La solucion resultante se extrajo tres veces con 200 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El residuo se purifico sobre gel de silice (EtOAc/PE 1:10) y produjo 4,2 g (92%) de carbonato de ferc- butil 4-formilfenilo en forma de un solido de color amarillo palido.
El 4-nitrobenzaldehndo involucrado en la preparacion del compuesto 20 era comercial.
La smtesis del compuesto 18 fue completado por la desproteccion del alcohol sililado. Esto se realizo como sigue: (S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil- 3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)-11-isopropil- 2,2,3,3,10-pentametil-4,7-dioxa-10-aza-3-siladodecan-12-amida (40 mg, 0,04 mmoles, 1,0 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en THF (10 ml) en presencia de TBAF (2 mg, 0,09 mmoles, 2 equiv) y se agito 4 horas a
5
10
15
20
25
30
temperature ambiente. La reaccion se neutralizo con 50 ml de agua, a continuacion se extrajo tres veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir el compuesto 18 en el estado bruto.
La smtesis del compuesto 20 se completo mediante la reduccion del grupo nitro. Esto se realizo como sigue: (2S)-N-[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(lR,2R)-2-[[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il]carbamoil]-1 metoxi-2-
metiletil]pirrolidin-1-il]-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W,3-dimetil-2-[(2S)-3-metil-2-[metil[(4- nitrofenil)metil]amino]butanamido]butanamida (40 mg, 0,05 mmoles, 1,0 equiv) se disolvio en 15 ml de etanol. Se anadio cloruro de estano dihidratado (II) (317 mg, 1,4 mmoles, 30 equiv) y la solucion se dejo bajo agitacion durante 3 dfas a temperatura ambiente. La reaccion se neutralizo con 50 ml de agua, a continuacion se extrajo tres veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir el compuesto 20 en estado bruto.
No
Nombre x R Pureza* Cantidad
16
(S)-2-((S)-2-((4-aminobutil)(metil)amino)-3- metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2- ((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2 2-fenil-1- (tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida, bis acido trifluoroacetico 2 94,9% 11,5 mg
17
(S)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1- metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2- il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2- (metil(2- (metilamino)etil)amino)butanamido)butanamida, bis acido trifluoroacetico 2 H 99,6% 65,5 mg
18
(S)-2-((S)-2-((2-(2-hidroxietoxi)etil)(metil)amino)-3- metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2- ((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1- (tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin- 1-il)-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida,acido trifluoroacetico 1 0 1 O X 94,5% 46,4 mg
19
(S)-2-((S)-2-((4-hidroxibencil)(metil)amino)-3- metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2- ((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1- (tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida,acido trifluoroacetico 1 HOxr/ 93,2% 21,6 mg
20
(S)-2-((S)-2-((4-aminobencil)(metil)amino)-3- metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2- ((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1- (tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida,acido trifluoroacetico 1 96,7% 21,1 mg
* Los compuestos se purificaron por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; Fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm), para producir las sales de TFA correspondiente en forma de solidos de color blanco.
Caracterizacion de los productos finales: Compuesto 16 LC/MS/UV (Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 1 ml/min, 40°C, de 5 a 95% de metanol en agua (TFA al 0,05%) por 18 minutos); ESI: (C45H75N7O6S, masa exacta 841,55) m/z 842,5 (MH+), 421,9 (100%, (M,2H+)/2); UV: 14,02 min (94,9%, 210 nm). 1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,55-8,2 (m, 0,8H, NHCO intercambio incompleto); 8,0 (0,55h, NHCO intercambio incompleto); 7,70 (d, 1H); 7,44 (d, 1H); 7,21-7,15 (m, 5H); 5,65-5,45 (m, 1H); 4,8-4,5 (m, 2H); 4,153,9 (m, 2H); 3,8-0,6 (m, 59H). Compuesto 17 LC/MS/UV ESI: (C44H73N7O6S, masa exacta 827,53) m/z 828 (MH+), 415 [100%, (M,2H+)/2]; UV: RT = 6,72 min (99,6%, 254 nm) 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,82-7,80 (m, 1H); 7,56-7,54 (m, 1H); 7,35-7,20 (m, 5H); 5,8-5,55 (m, 1H); 4,85-4,6 (m, 1H); 4,25-4,05 (m, 1H); 3,95-0,8 (m, 60H). Compuesto 18 LC/MS/UV (Atlantis T3, 3 pm, 4,6 x 100 mm; 1,2 ml/min, 40°C, de 5 a 95% de metanol en agua (TFA al 0,05%) por 7 minutos) i; ESI: (C45H74N6O8S, masa exacta 858,53) m/z 859 (MH+), 881 (MNa+), 430 (100%, (M,2H+)/2); UV: 4,85 min (96,8%, 220 nm). 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,75-8,55 (m, 0,5H, NHCO intercambio incompleto); 7,85-7,80 (m, 1H); 7,6-7,5 (m, 1H); 7,40-7,15 (m, 5H); 5,8-5,6 (m, 1H); 4,8-4,55 (m, 2H); 4,15-4,0 (m, 1H); 4,0-0,8 (m, 60H).
5
10
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Compuesto 19 LC/MS/UV ESI: (C48H72N6O7S, masa exacta 876,52) m/z 877 (MH+), 439 [100%, (M,2H+)/2]; UV: RT = 1,76 min (93,2%, 220 nm). Compuesto 20 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,85-7,80 (m, 1H); 7,6-7,5 (m, 1H); 7,4-7,15 (m, 5H); 7,1-7,05 (m, 2H); 6,73-6,70 (m, 2H); 5,8-5,55 (m, 1H); 5,04,7 (m, 2H); 04,25-4,05 (m, 1H); 4,0-0,8 (m, 54H). LC/MS/UV ESI: (C48H73N7O7S, masa exacta 875,53) m/z 876 (MH+), 439 [75%, (M,2H+)/2]; UV: RT = 4,83 min (96,8%, 254 nm). 1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,85-7,80 (m, 1H); 7,6- 7,5 (m, 1H); 7,4-7,1 (m, 7H); 6,76-6,72 (m, 2H); 5,8-5,55 (m, 1H); 4,9-4,65 (m, 2H); 4,25-4,05 (m, 1H); 4,0-0,8 (m, 54H).
Ejemplos de referencia 21 y 23 y ejemplos 23 y 24
imagen96
Los compuestos 21 a 24 se prepararon de la misma manera que para los compuestos 17 a 20, reemplazando a la amina 1Y por la amina 2D.
No
Nombre x R Pureza* Cantidad
21
(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3-(((1S,2R)-1- hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil- 3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-l- oxoheptan-4-il)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2- (metil(2- (metilamino)etil)amino)butanamido)butanamida, bis acido trifluoroacetico 2 H v 97,5% 24,4 mg
22
(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3-(((1S,2R)-1- hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil- 3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3- metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-((2-(2- hidroxietoxi)etil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)- W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico 1 ho/N/°n/nj/ 95,5% 26,1 mg
23
(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3-(((1S,2R)-1- hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil- 3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-((4- hidroxibencil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)- W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico 1 98,5% 5,8 mg
24
(S)-2-((S)-2-((4-aminobencil)(metil)amino)-3- metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)- 3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1- metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi- 5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico 1 jCT 99,1% 6,9 mg
* Los compuestos se purificaron por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN por 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm), para producir las sales de TFA correspondiente en forma de solidos de color blanco.
Caracterizacion de los productos finales: Compuesto 21 LC/MS/UV (ESI) (C42H74N6O7, masa exacta 774,56) m/z 775 (MH+), 797 (MNa+), 388 (100%, (M,2H+)/2); UV: 3,14 min (97,6%, 215 nm). 1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,05-7,7 (m, 0,8H, NHCO intercambio incompleto); 7,45-7,15 (m, 5H); 4,9-4,45 (m, 2H); 4,35-4,00 (m, 2H); 3,95-0,8 (m, 61H). Compuesto 22 LC/MS/UV (ESI) (C43H75N5O9, masa exacta 805,56) m/z 806 (MH+), 828 (MNa+), 404 (100%, (M,2H+)/2); UV: 4,47 min (95,6%, 215 nm). 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,1-7,7 (m, 0,4H, NHCO intercambio incompleto); 7,45-7,15 (m, 5H); 4,9-4,5 (m, 3H); 4,4-4,05 (m, 2H); 4,05-0,8 (m, 61H). Compuesto 23 LC/MS/UV (ESI) (C46H73N5O8, masa exacta
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823,55) m/z 824 (MH+), 846 (MNa+), 413 (100%, (M,2H+)/2); UV: 4,76 min (98,5%, 215 nm). 1H NMR (400 MHz, CDCI3, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,5-7,2 (m, 5H); 7,9-7,75 (m, 2H); 5,5-5,3 (m, 1H); 4,9-4,6 (m, 2H); 4,55-4,15 (m, 4H); 4,0-0,8 (m, 55H). Compuesto 24 LC/MS/UV (ESI) (C46H74N6O7, masa exacta 822,56) m/z 823 (MH+), 845 (MNa+), 861 (MK+); UV: 3,68 min (99,15%, 254 nm). 1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,0-7,7 (m, 0,5H, NHCO intercambio incompleto); 7,5-7,0 (m, 7H); 6,75-6,65 (m, 2H); 4,85-4,5 (m, 2H); 4,4-4,05 (m, 2H); 4,0-0,8 (m, 56H).
Ejemplo 25
(S)-W-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((lR,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-femlpropan-2-il)ammo)-1-metoxi-2-metil-3- oxopropil)pirrolidm-1-M)-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-M)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metM-2-(metil(piridm-4- ilmetil)amino)butanamido)butanamida, acido trifluoroacetico
imagen97
Ejemplo 25: El compuesto 25 se preparo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 2D (50 mg, 0,08 mmoles, 0,67 equiv), el acido 3F (27,56 mg, 0,12 mmoles, 1,00 equiv), DEpC (0,0189 ml) y DIEA (0,041 ml) en DCM (3 ml). a continuacion de la evaporacion hasta sequedad, el producto bruto (80 mg) se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con 0,05% de TFA; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 25 se obtuvo con un rendimiento del 17% (20 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Waters XBridge Shield RP18, 3,5 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,0ml/min, 50% a 85% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 13 minutos y a continuacion a 85% de MeOH por 5 minutos) ESI (C45H72N6O7, masa exacta 808,6) m/z: 809,5 (MH+) y 405,4 (M,2H+/2, 100%), 10,60 min (87,0%, 210 nm).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,79 (s, 2H); 8,26-8,14 (m, 0,6H, NH intercambio incompleto); (8,12-8,00 (m, 2H); 7,50-7,20 (m, 5H); 4,85-4,52 (m, 3H); 4,37-4,02 (m, 3H); 4,00-3,40 (m, 10H); 3,25-2,95 (m, 3H); 2,63-0,80 (m, 41H).
Ejemplo de referencia 26
(S)-2-((S)-2-((2-ammoetM)(metil)ammo)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((lR,2R)-1- metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)- W,3-dimetilbutanamida, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 26A: bencil (S)-2-((2-((ferc-butoxicarbonil)amino)etil)(metil)amino)-3-metilbutanoato
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El compuesto 26A se preparo de la misma manera que para el compuesto 2H a partir de la amina 1ZC (1,3 g,
5,04 mmoles, 1,00 equiv), ferc-butil (2-oxoetil)carbamato (800 mg, 5,03 mmoles, 1,00 equiv), DIEA (3,52 g, 27,24 mmoles, 5,42 equiv) y NaBH(OAc)3 (2,25 g, 10,62 mmoles, 2,11 equiv) en THF (25 ml). La mezcla se dejo bajo agitacion durante la noche y se neutralizo con 50 ml de agua. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (10:1) para producir 0,6 g (33%) del compuesto 26A en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 26B: Acido (S)-2-((2-((ferc-butoxicarbonil)amino)etil)(metil)amino)-3-metilbutanoico
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El compuesto 26A (600 mg, 1,65 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 40 ml de THF en presencia de Pd/C (300 mg) y se hidrogeno durante 1 hora a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y MeOH para producir 0,4 g (89%) del compuesto 26B en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 26C: ferc-butil ((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3- oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-2-oxoetil)-5,11-dimetil-6,9-dioxo-2-oxa-5,8,11- triazatridecan-13-il)carbamato
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El compuesto 26C se preparo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (70 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv), el acido 26B (58,4 mg, 0,21 mmoles, 2,00 equiv), DEpC (0,032 ml) y DIEA (0,053 ml) en DCM (3 ml). A continuacion de la evaporacion hasta sequedad, se obtuvo el compuesto 26C en forma de un aceite de color amarillo (100 mg).
Ejemplo de referencia 26: El compuesto 26 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 26C (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv) en DCM (3 ml) y TFA (1,5 ml). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 oBd, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 45% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 26 se obtuvo con un rendimiento del 38% (38,1 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; l,0 ml/min, de 5% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 18 minutos); ESI (C43H71N7O6S, masa exacta 813,52) m/z: 814,5 (MH+) y 407,9 (M,2H+/2, 100%), 15,78 min (91,2%, 210 nm). 1
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,90-8,82 (m, 0,5H, NH intercambio incompleto); 8,71-8,65 (m, 0,3H, NH intercambio incompleto); (7,85-7,77 (m, 1H); 7,60-7,49 (m, 1H); 7,37-7,15 (m, 5H); 5,785,55 (m, 1H); 4,82-4,62 (m, 1,6H); 4,32-3,83 (m, 3,6H); 3,75-3,35 (m, 7,4H); 3,30-2,60 (m, 13H); 2,58-0,80 (m, 42H).
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metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-hidroxifenetM)(metN)ammo)-3-metNbutanamido)- N,3- dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoM)pirrolidm-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanamido)-3-
fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 27: El compuesto 27 se preparo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (70 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv), el acido 49C (55,5 mg, 0,22 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,034 ml, 2,00 equiv) y DIEA (0,055 ml, 3,00 equiv) en DCM (3 ml). El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC- 001 SHIMADZU, columna SunFire Prep c18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 45% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 27 se obtuvo con un rendimiento del 3% (2,9 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C48H75N5O9, masa exacta 866,56) m/z: 866,5 (MH+) y 433,9 (M,2H+/2, 100%), 6,61 min (89,1%, 210 nm).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,70-8,49 (m, 0,9H, NH/OH intercambio incompleto); 8,30-8,22 (m, 0,3H, Nh intercambio incompleto); 7,36-7,02 (m, 7H); 6,86-6,62 (m, 2H); 4,82-4,69 (m, 2H); 4,20-4,03 (m, 1H); 3,91-3,33 (m, 12H); 3,30-2,90 (m, 17H); 2,55-0,80 (m, 35H).
Ejemplo 28
(S)-2-((S)-2-((3-aminobencil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1- hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 28A: terc-butil (3-((3S,6S,9S,10R)-9-((S)-sec-butil)-10-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi -1- fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-oxopropil) pirrolidin-1 -il)-2-oxoetil)-3,6-diisopropil-2,8-dimetM-4,7-dioxo-11 - oxa-2,5,8-triazadodecil)fenil)carbamato
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El compuesto 28A se preparo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 2D (100 mg, 0,17 mmoles, 1,00 equiv), el acido 14D (111,25 mg, 0,33 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,058 ml) y DIEA (0,05 ml) en DCM (3 ml). El residuo se purifico en una columna de sflice con una mezcla de EtOAc y hexano (1:1) para producir 100 mg (66%) del compuesto 28A en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 28: El compuesto 28 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 28A (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto (80 mg) se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 ^m, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuation de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 28 se obtuvo con un rendimiento del 20% (20 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 ^m, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C46H74N6O7, masa exacta 822,56) m/z: 823,5 (MH+) y 412,4 (M,2H+/2, 100%), 12,45 min (87,2%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,47-7,20 (m, 5H); 7,10-7,01 (m, 1H); 6,80-6,56 (m, 3H); 4,82-4,52 (m, 3H); 4,33-4,03 (m, 2H); 3,91-3,82 (m, 0,5H); 3,75-3,35 (m, 9,5H); 3,28-3,10 (m, 2H); 2,792,90 (m, 1H); 2,60-2,40 (m, 2H); 2,30-0,80 (m, 40H).
Ejemplo 29
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-H(3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-J(3-ammobencN)(metN)ammo)-3-metNbutanamido)- W,3-dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoM)pirroMdm-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanamido)-3- fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 29: El compuesto 15 (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una mezcla de agua (5 ml), ACN (5 ml) y piperidina (2,5 ml). La mezcla de reaction se dejo bajo agitation durante la noche a temperatura ambiente y a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 ^m, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 20 mg (20%) del compuesto 29 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 ^m, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,0 ml/min, de 40% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 18 minutos); ESI (C46H72N6O8, masa exacta 836,54) m/z: 837,5 (MH+) y 419,4 (M,2H+/2, 100%), 10,61 min (92,5%, 210 nm). 1
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,38-7,15 (m, 6H); 7,00-6,99 (m, 3H); 4,85-4,68 (m, 2H); 4,37-3,38 (m, 11H); 3,31-2,70 (m, 8H); 2,60-0,82 (m, 35H).
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metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-ammobutil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W,3- dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido-3- fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 30: El compuesto 30 se preparo de la misma manera que para el compuesto 16, a partir de la amina 3D y el acido carboxflico correspondiente.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 1,5 ml/min, 40°C, de 10 a 95% de metanol en agua (TFAal 0,05%) por 15 minutos); ESI (C44H76N6O8, masa exacta 816,57) m/z. 817,6 (MH+), 409,4 (M,2H+/2); 12,0 min (90%, 210 nm).
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,7-8,2 (m, 1H, NHCOs, intercambio incompleto); 7,4-7,1 (m, 5H); 4,95-4,7 (m, 3H); 4,2-4,0 (m, 1H); 3,9-0,8 (m, 63H).
Ejemplo de referencia 31
Acido(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-ammobutil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)- W,3-dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoico, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 31: El compuesto 31 se preparo de la misma manera que para el compuesto 4, a partir del ester de metilo 30.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 1,5 ml/min, 40°C, de 10 a 95% de metanol en agua (TFA al 0,05%) por 18 minutos); ESI (C43H74N6O8, masa exacta 802,56) m/z: 803,6 (MH+), 402,4 (M,2H+/2); 13,68 min (98,9%, 210 nm). 1
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,4-7,1 (m, 5H); 4,95-4,7 (m, 3H); 4,2-4,0 (m, 1H); 3,9-0,8 (m, 61H).
(S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxM-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metN-3-oxo-3-(((S)-2-feniM-(tiazol-2- N)etN)ammo)propN)pirroNdm-1-M)-5-metiM-oxoheptan-4-N)-W,3-dimetN-2-((S)-3-metN-2-(metN(3- 5 (metilamino)propil)amino)butanamido)butanamida, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 32A: rerc-butil (3,3-dietoxipropil)(metil)carbamato
10
El compuesto 1ZD (247 mg, 1 mmol, 1,00 equiv) se disolvio en una atmosfera inerte en 30 ml de una mezcla 1:1 de THF y DMF. El medio de reaccion se enfrio sobre un bano de hielo tras lo cual el NaH (60% en aceite, 60 mg, 15 1,5 equiv) se anadio en porciones, seguido por el Mel (0,28 ml) gota a gota. La reaccion se dejo bajo agitacion
durante 2 dfas a temperature ambiente, a continuacion se neutralizo con 5 ml de solucion acuosa saturada de NH4Cl- y se extrajo dos veces con 15 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir 200 mg (77%) del compuesto 32A en forma de un solido de color amarillo.
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Ejemplo 32B: Acido (S)-2-((3-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)propil)(metil)amino)-3-metilbutanoico
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25 El compuesto 32B Se preparo siguiendo el mismo protocolo descrito para la preparacion del compuesto 1ZF, en sustitucion del compuesto 1ZD por el compuesto 32A.
Ejemplo de referencia 32: El compuesto 32 se preparo en dos etapas, siguiendo el mismo protocolo descrito para la preparacion del compuesto 1, a partir de la amina 1Y y el acido carboxflico 32B.
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LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm, 40°C, de 10 a 95% de metanol en agua (TFAal 0,05%) por 13 minutos); ESI (C45H75N7O6S, masa exacta 842,19) m/z: 843 (MH+), 421,9 (M,2H+/2); 11,91 min (88%, 210 nm). 1
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,5-9,0 (m, 0,5 H, NHCOs intercambio 35 incompleto), 7,85-7,80 (m, 1H); 7,60-7,50 (m, 1H), 7,35-7,15 (m, 5H), 5,80-5,63 (m, 1H), 4,80-4,65 (m, 2H), 4,30-
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4,00 (m, 1H), 3,95-0,80 (m, 61H). Ejemplos de referencia 33 y 34
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Los compuestos 33 y 34 se prepararon de la misma manera que para los compuestos 6 y 7, sustituyendo el acido carboxflico 1ZF por el compuesto 32B.
No
Nombre R Pureza* Cantidad
33
metil(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((7S,10S,13S,14R)-13-((S)-sec-butil)-7,10- diisopropil-14-metoxi-6,12-dimetil-8,11-dioxo-2,6,9,12-tetraazahexadecan- 16-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico Me 95% 32 mg
34
Acido(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((7S,10S,13S,14R)-13-((S)-sec-butil)-7,10- diisopropil-14-metoxi-6,12-dimetil-8,11-dioxo-2,6,9,12-tetraazahexadecan- 16-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico, acido bis trifluoroacetico H 98% 18 mg
*Los compuestos se purificaron por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm), para producir las sales de TFA correspondientes en forma de solidos de color blanco.
Caracterizacion de los productos finales: Compuesto 33 LC/MS/UV (ESI) (C44H76N6O8, masa exacta 816,57) m/z 817,6 (MH+), 409,4 (M,2H+/2); UV: 5,94 min (95%, 210 nm). 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 6 8,6-8,2 (m, 0,8H, NHCO intercambio incompleto) 7,30-7,22 (m, 5H), 4,80 (m, 2H), 4,23-0,86 (m, 66H). Compuesto 34 LC/MS/UV (ESI) (C43H74N6O8, masa exacta 802,56) m/z 803,6 (MH+), 402,4 (M,2H+/2); UV: 5,94 min (97,5%, 210 nm). 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 6 7,30-7,20 (m, 5H), 4,80 (m, 2H), 4,25-0,86 (m, 63H).
Ejemplo de referencia 35
(S)-2-((S)-2-((2-(2-aminoetoxi)etil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1- metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3- dimetilbutanamida, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 35A: ferc-butil (2-(2-hidroxietoxi)etil)carbamato
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2-(2-aminoetoxi)etanol (5 g, 47,56 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en THF (100 ml) a 0°C y a continuacion se anadio hidroxido de sodio (2 g, 50,00 mmoles, 1,05 equiv) (solucion en 25 ml de agua). Se anadio gota a gota una solucion de dicarbonato de di-ferc-butilo (10,38 g, 47,56 mmoles, 1,00 equiv) en THF (20 ml) y a continuacion la reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo mediante la adicion de 50 ml de agua y el producto se extrajo 3 veces con 75 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 100 ml de NaCl (sat.), a continuacion se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir 9 g (92%) del compuesto 35A en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 35B: ferc-butil (2-(2-oxoetoxi)etil)carbamato
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Se anadio gota a gota una solucion de DMSO (3,46 ml, 5,00 equiv) en DCM (20 ml) a una solucion de cloruro de oxalilo (1,9 ml, 2,30 equiv) en DCM (20 ml) a -78°C en atmosfera de nitrogeno. a continuacion de la adicion (30 min), la solucion se agito durante 30 minutos y a continuacion se anadio una solucion del compuesto 35A (2 g, 9,74 mmoles, 1,00 equiv) en 20 ml de DCM. A continuacion de la adicion de TEA (12,2 ml), la reaccion se agito a -78°C durante 30 minutos y a continuacion a temperatura ambiente durante la noche. La reaccion se diluyo mediante la adicion de 100 ml de agua y el producto se extrajo 3 veces con 50 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir 1,9 g del compuesto 35B en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 35C: bencil (S)-12-isopropil-2,2,11-trimetil-4-oxo-3,8-dioxa-5,11-diazatridecan-13-oato
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El compuesto 35C se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 14C a partir de la amina 1ZC (2,4 g, 9,31 mmoles, 1,00 equiv), el aldehfdo 35B (1,9 g, 9,35 mmoles, 1,00 equiv), NaBH(OAc)3 (3,96 g, 18,68 mmoles, 2,00 equiv) y DIEA (6,2 ml) en THF (40 ml). La mezcla de reaccion se neutralizo con 200 ml de agua y se extrajo 3 veces con 100 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron para producir 2,3 g del compuesto 35C en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 35D: Acido (S)-12-isopropil-2,2,11-trimetil-4-oxo-3,8-dioxa-5,11-diazatridecan-13-oico
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El compuesto 35C (200 mg, 0,49 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 10 ml de EtOH en presencia de Pd/C (200 mg) y se hidrogeno durante la noche. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 150 mg (96%) del compuesto 35D en forma de un solido de color blanco.
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Ejemplo 35E: terc-butil ((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3- oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-M)-2-oxoetil)-5,11 -dimetil-6,9-dioxo-2,14-dioxa-5,8,11- triazahexadecan-16-il)carbamato
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El compuesto 35E se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (70 mg, 0,11 mmoles, l,00 equiv), el acido 35D (40,6 mg, 0,13 mmoles, 1,20 equiv), DEPC (0,0324 ml) y DIEA (0,0527 ml) en DCM (3 ml). El producto bruto (100 mg, 98%) se aislo en forma de un aceite de color amarillo y posteriormente se utilizo como tal.
Ejemplo de referencia 35: El compuesto 35 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 35E (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HpLC preparativa (Pre-HPLC-010), columna SunFire Prep C18 OBD, 5 ^m, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuation de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 35 se obtuvo con un rendimiento del 23% (22,9 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 ^m, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C45H75N7O7S, masa exacta 857,54) m/z: 858,5 (MH+) y 429,9 (M,2H+/2, 100%), 5,89 min (89,7%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 5 8,9-8,5 (m, 0,5H, NHCO intercambio incompleto), 7,8-7,7 (m, 1H), 7,55-7,45 (m, 1H), 7,35-7,1 (m, 5H), 5,45-5,5 (m, 1H), 4,9-4,6 (m, 1H), 4,3-0,75 (m, 62H).
Ejemplo de referencia 36
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((7S,10S,13S,14R)-1 -amino-13-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropiM4-metoxi-6,12-
dimetil-8,ll-dioxo-3-oxa-6,9,12-triazahexadecan-16-oil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 36A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((12S,15S,18S,19R)-18-((S)-sec-butil)-12,15-diisopropil-19-metoxi-
2,2,11,17-tetrametil-4,l3,16-trioxo-3,8-dioxa-5,l1,14,17-tetraazahenicosan-21-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-
metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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El compuesto 36A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (50 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv), el acido 35D (25 mg, 0,11 mmoles, 1,48 equiv), DEPC (0,0337 ml) y DIEA (0,0548 ml) en DCM (3 ml). El producto bruto (100 mg) se aislo en forma de un aceite de color amarillo y posteriormente se utilizo como tal.
Ejemplo de referencia 36: El compuesto 36 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 36A (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 ^m, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% ACN durante 10 minutos y a continuation de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 36 se obtuvo con un rendimiento del 13% (12,7 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Agilent ZORBAX SB-Aq, 1,8 ^m, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, 2% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 1 minuto y a continuacion de 2% a 95% de MeOH en agua durante 13 minutos, a continuacion a 95% de MeOH en agua durante 2 minutos); ESI (C44H76N6O9, masa exacta 832,57) m/z: 833,5 (MH+) y 417,4 (M,2H+/2, 100%), 11,58 min (98,5%, 210 mn).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,1-8,5 (m, 0,8H, NHCO intercambio incompleto),
7,30-7,1 (m, 5H), 4,9-4,6 (m, 3H), 4,2-0,8 (m, 64H).
Ejemplo de referencia 37
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((7S,10S,13S,14R)-1-ammo-13-((S)-sec-butN)-7,10 diisopropiM4-metoxi-6,12- dimetil-8,M-dioxo-3-oxa-6,9,12-triazahexadecan-16-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoico, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 37: El compuesto 37 se preparo de la misma manera que para el compuesto 4, a partir del compuesto 36 (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC- 001 SHIMADZU, columna Atlantis Prep oBd T3, 5 ^m, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 18,4 mg (19%) del compuesto 37 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 ^m, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C43H74N6O9, masa exacta 818,6) m/z: 819,6 (MH+) y 410,4 (M,2H+/2, 100%), 5,48 min (96,7%, 210 nm). 1
1HNMR:(400 MHz, CD3OD, ppm): 5(Presencia de rotameros) 7,35-7,2 (m, 5H), 5,0-4,65 (m, 3H), 4,3-0,8(m, 61H).
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metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5SH-((S)-2-((S)-2-((2-ammoetM)(metN)ammo)-3-metNbutanamido)-W,3- dimetil butanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoM)pirrolidm-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanamido)-3-
fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 38A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((9S,12S,15S,16R)-15-((S)-sec-butil)-9,12-diisopropil-16-metoxi-
2,2,8,14-tetrametil-4,10,13-trioxo-3-oxa-5,8,1l,14-tetraazaoctadecan-18-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-
metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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El compuesto 38A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (70 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv), el acido 26B (60,7 mg, 0,22 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,0337 ml) y DIEA (0,0548 ml) en DCM (3 ml). El producto bruto (100 mg) se aislo en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo de referencia 38: El compuesto 38 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 38A (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 38 se obtuvo con un rendimiento del 10% (10,3 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Agilent ZORBAX SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, 2% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 1 minuto, a continuacion de 2% a 95% de MeOH en agua durante 13 minutos y a continuacion a 95% de MeOH en agua durante 2 minutos); ESI (C42H72N6O8, masa exacta 788,5) m/z: 789,5 (MH+) y 395,4 (M,2H+/2, 100%), 12,97 min (91,0%, 210 nm). 1
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,30-7,1 (m, 5H), 4,9-4,6 (m, 3H), 4,2-0,8 (m, 60H).
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((2-ammoetil)(metil)ammo)-3-metilbutanamido)-W,3- dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- 5 fenilpropanoico, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 39: El compuesto 39 se preparo de la misma manera que para el compuesto 4, a partir 10 del compuesto 38 (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC- 001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 8,2 mg (8%) del compuesto 39 en forma de un solido de color blanco.
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LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C18, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,5ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C41H70N6O8, masa exacta 774,5) m/z: 775,5 (MH+) y 388,4 (M,2H+/2, 100%), 6,47 min (93,6%, 210 nm).
20 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 7,35-7,15 (m, 5H), 4,9-4,6 (m, 3H), 4,2-0,8 (m,
57H).
Ejemplo de referencia 40
25 (S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxM-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-feml-1-(tiazol-2-
il)etil)ammo)propil)pirrolidm-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil(4- (metilamino)butil)amino)butanamido)butanamida, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 40A: ferc-butilo (4,4-dietoxibutil)(metil)carbamato
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35 El compuesto 40A se preparo de la misma manera que para el compuesto 11E, a partir de ferc-butil(4,4- dietoxibutil)(metil)carbamato (5,5 g, 19,97 mmoles, 1,00 equiv), NaH (60% en aceite, 3,2 g, 80,00 mmoles, 4,01 equiv) y yodometano (14 ml) en THF/DMF (40/20 ml). La reaccion se neutralizo con 50 ml de NH4Cl (ac). El compuesto 40A se aislo en forma de un aceite de color amarillo, 5,5 g (95%).
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Ejemplo 40B: ferc-butil metil(4-oxobutil)carbamato
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El compuesto 40A (3 g, 10,89 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en una mezcla de AcOH y agua (15/4 ml) y la solucion se dejo bajo agitacion durante la noche. El pH se llevo a 7-8 con solucion acuosa saturada de NaHCO3 y a continuacion se extrajo dos veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron dos veces con 50 ml de solucion acuosa saturada de NaCl, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El compuesto 40B se aislo en forma de aceite de color amarillo, 2,1 g (96%).
Ejemplo 40C: bencil (S)-2-((4-((ferc-butoxicarbonil)(metil)amino)butil)(metil)amino)-3-metilbutanoato
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El compuesto 40C se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 14C a partir de la amina 1ZC (2,45 g, 9,53 mmoles, 0,80 equiv), el aldehndo 40B (2,4 g, 11,92 mmoles, 1,00 equiv), NaBH(OAc)3 (5,06 g, 23,87 mmoles, 2,00 equiv) y DIEA (6,16 g, 47,66 mmoles, 4,00 equiv) en THF (15 ml). La mezcla de reaccion se neutralizo con 100 ml de agua y se extrajo dos veces con 100 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico sobre gel de silice (EtOAc/PE (1:100-1:20)) para producir 1,2 g (25%) del compuesto 40C en forma de un aceite de color amarillo.
Ejemplo 40D: Acido (S)-2-((4-((ferc-butoxicarbonil)(metil)amino)butil)(metil)amino)-3-metilbutanoico
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El compuesto 40C (500 mg, 1,23 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 20 ml de EtOH en presencia de Pd/C (550 mg) y se hidrogeno durante 1 hora a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 350 mg (90%) del compuesto 40D en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 40E: ferc-butil ((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-
oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-5,11-dimetii-1-6,9-dioxo-2-oxa-5,8,11-
triazapentadecan-15-il)(metil)carbamato
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El compuesto 40E se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (60 mg, 0,09 mmoles, 1,00 equiv), el acido 40D (57,8 mg, 0,18 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,0278 ml) y DIEA (0,0452 ml) en DCM (3 ml). El producto bruto (100 mg) se utilizo posteriormente como tal.
Ejemplo de referencia 40: El compuesto 40 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 40E (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El producto en bruto se purifico por HPLC
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preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 |jm, 19 x 100; fase de elucion mm: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 95% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 40 se obtuvo con un rendimiento del 24% (24,6 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 jm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C46H77N7O6S, masa exacta 855,6) m/z: 856,6 (MH+) y 428,8 (M,2H+/2, 100%), 5,89 min (97,0%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,9-8,5 (0,7H, NHCO intercambio incompleto), 7,8-7,7 (m, 1H), 7,55-4,45 (m, 1H), 7,35-7,1 (m, 5H), 5,5-5,75 (m, 1H), 4,9-4,6 (m, 2H), 4,2-0,8 (m, 64H).
Ejemplo de referencia 41
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((8S,11S,14S,15R)-14-((S)-sec-butil)-8,11-diisopropil-15-metoxi-7,13-dimetil-
9,12-dioxo-2,7,10,13-tetraazaheptadecan-17-oM)pirroNdm-2-M)-3-metoxi-2-metNpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 41A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((11S,14S,17S,18R)-17-((S)-sec-butil)-11,14-diisopropil-18-metoxi-
2,2,5,10,16-pentametil-4,12,15-trioxo-3-oxa-5,10,13,16-tetraazaicosan-20-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-
metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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El compuesto 41A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (170 mg, 0,27 mmoles, 1,00 equiv), el acido 40D (170 mg, 0,54 mmoles, 2,09 equiv), DEpC (0,0819 ml) y DIEA (0,133 ml) en DCM (5 ml). El producto bruto (200 mg) se utilizo posteriormente como tal.
Ejemplo de referencia 41: El compuesto 41 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 41A (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HpLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 jm, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 95% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 41 se obtuvo con un rendimiento del 25% (25 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Agilent Zorbax SB-Aq, 1,8 jm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, 2% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 1 minuto, a continuacion de 2% a 95% de MeOH en agua durante 13 minutos, y a continuacion a 95% de MeOH en agua durante 2 minutos); ESI (C45H78N6O8, masa exacta 830,6) m/z: 831,6 (MH+) y 416,4 (M,2H+/2, 100%), 11,58 min (97,2%, 210 nm). 1
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,55-8,15 (0,75H, NHCO intercambio incompleto),
7,30-7,1 (m, 5H), 4,9-4,6 (m, 3H), 4,2-0,8 (m, 67H).
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((8S,11S,14S,15R)-14-((S)-sec-butM)-8,N-diisopropiM5-metoxi-7,13-dimetN-
9,12-dioxo-2,7,l0,13-tetraazaheptadecan-17-oM)pirroNdm-2-M)-3-metoxi-2-metNpropanamido)-3- 5 fenilpropanoico, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 42: El compuesto 42 se preparo de la misma manera que para el compuesto 4, a partir 10 del compuesto 41 (100 mg, 0,11 mmoles, 1,00 equiv). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC- 001 ShImADZU, columna Atlantis Prep OBD T3, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 30,6 mg (31%) del compuesto 42 en forma de un solido de color blanco.
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LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 0% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C44H76N6O8, masa exacta 816,6) m/z: 817,6 (MH+) y 409,4 (M,2H+/2, 100%), 5,75 min (100%, 210 nm).
20 1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 6 (Presencia de rotameros) 8,5-8,1 (0,3H, NHCO intercambio incompleto),
7,30-7,1 (m, 5H), 4,9-4,6 (m, 3H), 4,2-0,8 (m, 64H).
Ejemplo de referencia 43
25 (S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxM-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metN-3-oxo-3-(((S)-2-femM-(tiazol-2-
N)etN)ammo)propN)pirroNdm-1-M)-5-metiM-oxoheptan-4-N)-W,3-dimetN-2-((R)-3-metN-2-(metN(2-(2- (metilamino)etoxi)etil)amino)butanamido)butanamida, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 43A: ferc-butil (2-(2-((ferc-butildimetilsilil)oxi)etoxi)etil)carbamato
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TBDMSCI, DCM
35 El compuesto 35A (ferc-butil ((2-(2-hidroxietoxi)etil)carbamato) (8,21 g, 40,00 mmoles, 1,00 equiv) e imidazol (6 g, 88,14 mmoles, 2,20 equiv) se disolvieron en una atmosfera inerte en DCM (200 ml). Se anadio gota a gota cloruro de fercbutildimetilsilano (TBDMSCl, 6,62 g, 43,92 mmoles, 1,10 equiv) y el medio de reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con 100 ml de DCM, a continuacion se lavo dos veces con 200 ml de HCl 0,5 M, dos veces con 200 ml de NaHCO3 (sat.), a 40 continuacion con 300 ml de NaCl (sat.). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se purifico sobre sflice gel (EtOAc/PE (1:3) para producir 10 g (78%) del
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compuesto 43A en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 43B: ferc-butil (2-(2-((ferc-butildimetilsilil)oxi)etoxi)etil)(metil)carbamato
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El compuesto 43B se preparo de la misma manera que para el compuesto 11E, a partir del compuesto 43A (10 g, 31,30 mmoles, 1,00 equiv.), NaH (60% en aceite, 5 g, 208,33 mmoles, 4,00 equiv.) y yodometano (22 g, 5,00 equiv.) en DMF (200 ml). El medio de reaccion se neutralizo con 200 ml de agua y se lavo 3 veces con 100 ml de AcOEt, a continuacion con 300 ml de NaCl (sat.). La fase organica se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 10 g (96%) del compuesto 43B en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 43C: ferc-butil (2-(2-hidroxietoxi)etil)(metil)carbamato
^N/^/0'^^'OTBDMS TBAF.3H2Q
Boc THF
El compuesto 43B (10 g, 29,89 mmoles, 1,00 equiv.) y TBAF,3H2O (20,8 g, 65,93 mmoles, 2,20 equiv) se disolvieron en THF (200 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuacion se extrajo 3 veces con 100 ml de AcOEt. Las fases organicas se recombinaron, se lavaron dos veces con 300 ml de agua, a continuacion dos veces con 300 ml de NaCl (sat.), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se purifico sobre gel de sflice (EtOAc/PE (1:3-1:1) para producir 6,6 g del compuesto 43C en forma de aceite incoloro.
Ejemplo 43D: ferc-butil metil(2-(2-oxoetoxi)etil)carbamato
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Boc
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El compuesto 43D se preparo de la misma manera que para el compuesto 35B, a partir del compuesto 43C (2 g, 9,12 mmoles, 1,00 equiv.), cloruro de oxalilo (1,9 ml), TEA (11,3 ml) y DMSO (3,3 ml). El compuesto 43D (2 g) se aislo en forma de aceite de color amarillo.
Ejemplo 43E: bencil (S)-12-isopropil-2,2,5,11-tetrametil-4-oxo-3,8- dioxa-5,11-diazatridecan-13-oato
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El compuesto 43E se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 14C a partir de la amina 1ZC (2,4 g, 9,31 mmoles, 1,00 equiv), el aldehndo 43D (2 g, 9,16 mmoles, 1,00 equiv), NaBH(OAc)3 (4 g, 18,87 mmoles, 2,06 equiv) y DIEA (6 ml) en THF (100 ml). La mezcla de reaccion se neutralizo con 100 ml de agua y se extrajo 3 veces con 100 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico sobre gel de sflice (EtOAc/PE (4:1) para producir 1 g (37%) del compuesto 43E en forma de un solido de color blanco.
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Ejemplo 43F: Acido (S)-12-isopropil-2,2,5,11-tetrametil-4-oxo-3,8-dioxa-5,11-diazatridecan-13-oico
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El compuesto 43E (1 g, 2,37 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 40 ml de MeOH en presencia de Pd/C (1 g) y se hidrogeno durante 1 hora a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaction se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 600 mg (76%) del compuesto 43F en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 43G: ferc-butil ((3R,4S,7S,10R)-4-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-
3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-5,11-dimetil-6,9-dioxo-2,14-dioxa-
5,8,11-triazahexadecan-16-il)(metil)carbamato
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El compuesto 43G se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (50 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv.), el acido 43F (50 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv), DEPC (24,79 mg, 0,15 mmoles, 2,00 equiv) y DIEA (29,46 mg, 0,23 mmoles, 3,00 equiv) en DCM (1 ml). El producto bruto (59 mg) se utilizo posteriormente como tal.
Ejemplo de referencia 43: El compuesto 43 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 43G (81 mg, 0,08 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 ^m, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% ACN durante 10 minutos y a continuation de 40% a 95% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 43 se obtuvo con un rendimiento del 64% (52,6 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 ^m, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeCN en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos y a continuacion a 95% de MeCN en agua durante 2 minutos); ESI (C48H77N7O7S, masa exacta 871,6) m/z: 872,5 (MH+) y 436,9 (M,2H+/2, 100%), 3,90 min (100%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,8-7,7 (m, 1H), 7,55-4,45 (m, 1H), 7,35-7,1 (m, 5H), 5,5-5,75 (m, 1H), 4,9-4,6 (m, 2H), 4,2-0,8 (m, 64H).
Ejemplo de referencia 44
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((9S,12S,15S,16R)-15-((S)-sec-butil)-9,12-diisopropil-16-metoxi-8,14-dimetil-
10,13-dioxo-5-oxa-2,8,11,14-tetraazaoctadecan-18-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido bis trifluoroacetico
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Ejemplo 44A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((12S,15S,18S,19R)-18-((S)-sec-butil)-12,15-diisopropil-19-metoxi-
2,2,5,11,17-pentametil-4,13,16-trioxo-3,8-dioxa-5,11,14,17-tetraazahenicosan-21-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-
metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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El compuesto 44A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (60 mg, 0,09 mmoles, 1,00 equiv), el acido 43F (47 mg, 0,14 mmoles, 1,50 equiv), DEPC (31 mg, 0,19 mmoles, 2,00 equiv) y DIEA (37 mg, 0,28 mmoles, 3,00 equiv) en DCM (1,5 ml). El producto bruto (58 mg) se utilizo posteriormente como tal.
Ejemplo de referencia 44: El compuesto 44 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 44A (58 mg, 0,06 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 |jm, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 95% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 44 se obtuvo con un rendimiento del 40% (23,7 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 jm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeCN en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos y a continuacion 95% de MeCN en agua durante 2 minutos); ESI (C45H78N6O9, masa exacta 846,6) m/z: 847,6 (MH) y 424,4 (M,2H+/2, 100%), 3,20 min (100%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,3-7,1 (m, 5H), 4,9-4,6 (m, 3H), 4,2-0,8 (m, 67H).
Ejemplo 45
(S)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxM-((S)-2-((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-femM-(tiazol-2- il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-W,3-dimetM-2-((S)-3-metM-2-(metM(2-(piperazm-l- il)etil)amino)butanamido)butanamida, acido tris trifluoroacetico
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Ejemplo 45A: ferc-butil 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-carboxilato
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Se disolvio 2-(piperazin-1-il)etan-1-ol (5 g, 38,41 mmoles, 1,00 equiv) en DCM (100 ml), y se anadio gota a gota una solucion de di-ferc-butil dicarbonato (8,38 g, 38,40 mmoles, 1,00 equiv) en DCM (20 ml). La reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se evaporo hasta sequedad y el residuo se disolvio en 200 ml de AcOEt, se lavo 5 veces con NaCl (sat.), se seco sobre sulfato de sodio, se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 8,5 g (96%) del compuesto 45A en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 45B: ferc-butil 4-(2-oxoetil)piperazina-1-carboxilato
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5 El compuesto 45B se prepare de la misma manera que para el compuesto 35B, a partir del compuesto 45A (1 g, 4,34 mmoles, 1,00 equiv), cloruro de oxalilo (610 mg, 4,80 mmoles, 1,12 equiv), TEA (2,13 g, 21,09 mmoles, 4,90 equiv) y DMSO (0,82 g, 2,40 equiv). El compuesto 45B (0,8 g, 81%) se aislo en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 45C: ferc-butil (S)-4-(2-((1-(benciloxi)-3-metil-1-oxobutan-2-il)(metil)amino)etil)piperazina-1-carboxilato
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El compuesto 45C se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 14C a partir de la amina 1ZC (720 mg, 2,79 mmoles, 0,80 equiv), el aldehfdo 45B (800 mg, 3,50 mmoles, 1,00 equiv), NaBH(OAc)3 (1,6 g, 7,55 15 mmoles, 2,15 equiv) y DIEA (2,5 ml) en THF (50 ml). La mezcla de reaccion se neutralizo con 5 ml de agua y se extrajo 3 veces con 5 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico sobre gel de sflice (EtOAc/PE (3:1) para producir 400 mg (33%) del compuesto 45C en forma de un aceite incoloro.
20 Ejemplo 45D: Acido (S)-2-((2-(4-(ferc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)etil)(metil)amino)-3-metilbutanoico
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El compuesto 45C (400 mg, 0,92 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 30 ml de MeOH en presencia de Pd/C (400 25 mg) y se hidrogeno durante 1 hora a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaccion se filtro y se concentro bajo presion reducida para producir 300 mg (95%) del compuesto 45D en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 45E: ferc-butil 4-((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-butilo)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2- 30 metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-5,11-dimetil-6,9-dioxo-2-oxa-
5,8,11-triazatridecan-13-il)piperazina-1-carboxilato
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35 El compuesto 45E se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (60 mg, 0,09 mmoles, 1,00 equiv), el acido 45D (62,7 mg, 0,18 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,0278 ml) y DIEA (0,0452 ml) en DCM (3 ml). El producto bruto (100 mg) se utilizo posteriormente como tal.
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Ejemplo 45: El compuesto 45 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 45E (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 ObD, 5 pm, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 95% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 45 se obtuvo con un rendimiento del 19% (19,4 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Agilent ZORBAX SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,0 ml/min, 2% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 1 minuto, a continuacion de 2% a 95% de MeOH en agua durante 13 minutos y a continuacion 95% de MeOH en agua durante 2 minutos); ESI (C47H78N8O6S, masa exacta 882,6) m/z: 883,5 (MH+) y 442,4 (M,2H+/2, 100%), 10,95 min (98,8%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros), 7,80-7,70 (m, 1H), 7,52-7,43 (m, 1H), 7,31-7,09 (m, 5H), 5,70-5,51 (m, 1H), 4,80-4,60 (m, 1H), 4,20-0,75 (m, 66H).
Ejemplo 46
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3R,4S,5S)-4-((S)-W,3-dimetN-2-((S)-3-metN-2-(metN(2-(piperazm-1-
M)etM)ammo)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoM)pirroMdm-2-M)-3-metoxi-2- metilpropanamido)-3-fenilpropanoato, acido tris trifluoroacetico
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Ejemplo 46A: ferc-butil 4-((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-3-(((S)- 1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-5,11-dimetil-6,9-dioxo-2-oxa-
5,8,11-triazatridecan-13-il)piperazina-1-carboxilato
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El compuesto 46A se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 3D (170 mg, 0,27 mmoles, 1,00 equiv) el acido 45D (184,6 mg, 0,54 mmoles, 2,00 equiv), DEPC (0,0819 ml) y DIEA (0,133 ml) en DCM (5 ml). El producto bruto (200 mg) se utilizo posteriormente como tal.
Ejemplo 46: El compuesto 46 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 2 a partir del producto intermedio 46A (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El producto bruto se purifico por HPLC preparativa (Pre- HPLC-001 SHIMADZU, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 100 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con 0,05% de TFA; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 95% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 46 se obtuvo con un rendimiento de 19% (19,1 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeCN en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos y a continuacion de 95% de MeCN en agua durante 2 minutos); ESI (C46H79N7O8, masa exacta 857,6) m/z: 858,6 (MH+) y 429,9 (M,2H+/2, 100%), 5,93 min (100%, 210 nm).
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Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-W,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metil(2-(piperazm-l-
il)etil)ammo)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2- metilpropanamido)-3-fenilpropanoico, acido tris trifluoroacetico
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El compuesto 47 se preparo de la misma manera que para el compuesto 4, a partir del compuesto 46 (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 sHiMADZU, columna Atlantis Prep OBD T3, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 32,6 mg (33%) del compuesto 47 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C46H77N7O8, masa exacta 843,6) m/z: 844,6 (MH+) y 422,9 (M,2H+/2, 100%), 5,73 min (100%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 8,66-8,57 (m, 0,3H, NHCO, intercambio incompleto), 8,41-8,32 (m, 0,3H, NHCO, intercambio incompleto), 8,13-8,06 (m, 0,2H, NHCO, intercambio incompleto), 7,30-7,10 (m, 5H), 4,80-4,61 (m, 3H), 4,19-0,78 (m, 65H).
Ejemplo 48
(S)-2-((S)-2-(((1H-imidazol-2-il)metil)(metil)ammo)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2- ((lR,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 - oxoheptan-4-il)-W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
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El compuesto 48 se preparo de la misma manera que para el compuesto 1, a partir de la aminas 1Y y 1ZC y el 1H-imidazol-2-carbaldetndo. El producto final se purifico por HPLC preparativa en las siguientes condiciones: columna SunFire Prep C18 oBd, 5 pm, 19x150 mm, fases moviles con pH regulados con TFA al 0,05%, gradiente de 15,0 a 30% de ACN en agua por 10 minutos y a continuacion hasta 95,0% de ACN durante 2 minutos, deteccion UV a 220 nm.
LC/MS/UV (Zorbax Eclipse Plus C8, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; 1 ml/min, 40°C, 2% de metanol en agua (eluyendo fases con pH regulado con TFAal 0,05%) durante 1 minuto, a continuacion de 2% a 95% de metanol durante 12 minutos; ESI (C45H70N8O6S, masa exacta 850,51) m/z: 851,2 (MH+), 873,5 (MNa+), 426,3 (M,2H+/2); 12,75 min (90,5%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 7,83-7,81 (m, 1H), 7,80-7,53 (m, 3H), 7,53-7,22
Ejemplo 49
5 (S)-2-((S)-2-((4-hidroxifenetil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-
metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -M)-5-metiM-oxoheptan-4-M)- W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 49A: 2-(4-hidroxifenil)acetaldel'ndo
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15 Se disolvio 4-(2-hidroxietil)fenol (4 g, 28,95 mmoles, 1,00 equiv) en DMSO (32 ml) y a continuacion se anadio TEA (8,8 ml, 2,20 equiv.) gota a gota. Se agrego una solucion de SO3.Py (10 g, 2,20 equiv) en DMSO (36 ml) y la mezcla se dejo bajo agitacion durante la noche a temperature ambiente. La mezcla de reaccion se neutralizo con 250 ml de agua y se extrajo 3 veces con 100 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se lavaron 5 veces con agua (100 ml), a continuacion dos veces con 150 ml de NaCl (sat.), se secaron sobre sulfato de sodio, 20 se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico sobre gel de silice (EtOAc/PE (1:10) para producir 1 g (25%) del compuesto 49A en forma de un aceite incoloro.
Ejemplo 49B: bencil (S)-2-((4-hidroxifenetil)(metil)amino)-3-metilbutanoato
25
El compuesto 49B se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 14C a partir de la amina 1ZC (1,5 g, 5,82 mmoles, 0,99 equiv), el aldetndo 49A (800 mg, 5,88 mmoles, 1,00 equiv), NaBH(OAc)3 (2,7 g, 12,74 mmoles, 2,17 equiv) y DIEA (4,23 ml) en THF (25 ml). La mezcla de reaccion se neutralizo con 50 ml de agua y 30 se extrajo 3 veces con 50 ml de AcOEt. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. El residuo se purifico sobre gel de silice (EtOAc/PE (1:10) para producir 600 mg (37%) del compuesto 49B en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 49C: Acido (S)-2-((4-hidroxifenetil)(metil)amino)-3-metilbutanoico 35
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El compuesto 49B (0,5 g, 1,46 mmoles, 1,00 equiv) se disolvio en 40 ml de MeOH en presencia de Pd/C (250 mg) y se hidrogeno durante 3 horas a temperatura ambiente y presion atmosferica. El medio de reaccion se filtro 40 y se concentro bajo presion reducida para producir 0,4 g del compuesto 49C en forma de un solido de color blanco.
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Ejemplo 49: El compuesto 49 se sintetizo de la misma manera que para el compuesto 3 a partir de la amina 1Y (53,4 mg, 0,08 mmoles, 2,00 equiv), el acido 49C (70 mg, 0,28 mmoles, 1,00 equiv), DEPC (0,032 ml, 2,00 equiv)
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y DIEA (0,053 ml, 3,00 equiv) en DCM (3 ml). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna Atlantis Prep OBD T3, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 45% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 45% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 3 mg (1%) del compuesto 49 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C49H74N6O7S, masa exacta 890,5) m/z: 891,5 (MH+) y 446,4 (M,2H+/2, 100%), 6,69 min (100%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 8,92-8,87 (m, 0,5H, NHCO, intercambio incompleto), 8,70-8,63 (m, 0,4H, NHCO, intercambio incompleto), 8,85-8,77 (m, 1H), 7,59-7,51 (m, 1H), 7,35-7,03 (m, 7H), 6,82-6,71 (m, 2H), 5,77-5,58 (m, 1H), 5,81-5,70 (m, 1H), 4,21-0,80 (m, 58H).
Ejemplo 50
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-hidroxifenetil)(metil)ammo)-3-metilbutanamido)- W,3-dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 50: El compuesto 50 se preparo de la misma manera que para el compuesto 4, a partir del compuesto 27 (100 mg, 0,10 mmoles, 1,00 equiv). El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-001 SHIMADZU, columna Atlantis Prep OBD T3, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de elucion: agua/ACN con pH regulado con TFA al 0,05%; gradiente de 20% a 40% de ACN durante 10 minutos y a continuacion de 40% a 100% de ACN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm), para producir 10,7 mg (11%) del compuesto 50 en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) por 8 minutos); ESI (C47H73N5O9, masa exacta 851,5) m/z: 852,5 (MH+) y 426,8 (M,2H+/2, 100%), 6,46 min (91,7%, 210 nm).
1H NMR: (400 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 7,34-7,15 (m, 5H); 7,15-7,04 (se, 2H), 6,82-6,83 (m, 2H), 4,83-4,70 (m, 1H), 4,21-4,00 (m, 1H), 3,90-3,80 (m, 1H), 3,74-3,62 (m, 1H), 3,57-2,86 (m, 20H), 2,560,80 (m, 36H).
Ejemplo 51
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-hidroxibencil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)- W,3-dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidm-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 51A: ferc-butil (4-formilfenil)carbonato
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B0C2O
---------------1
DMAP
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5 4-hidroxibenzaldetndo (3,0 g, 24 mmoles) se disolvio en 30 ml de DCM en presencia de 4-DMAP (300 mg,
2,46 mmoles, 0,1 equiv.) y di-ferc-butilo dicarbonato (5,35 g, 24 mmoles, 1,0 equiv.) y se agito 1 hora a temperature ambiente. Despues, la solucion se diluyo con 200 ml de agua y se extrajo 3 veces con 100 ml de DCM. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para producir 5 g (92%) del compuesto 51A en forma de un solido de color blanco.
10
Ejemplo 51B: bencil (S)-2-((4-((ferc-butoxicarbonil)oxi)bencil)(metil)amino-3-metilbutanoato
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15 El compuesto 51A (220 mg, 0,99 mmoles) se disolvio en 5 ml de THF en presencia del compuesto 1ZC (255 mg, 0,99 mmoles, 1,0 equiv.), NaBH(OAc)3 (420 mg, 2 mmoles, 2,0 equiv.) y DIEA (654 jl) y se agito durante la noche a temperatura ambiente. Despues, la solucion se diluyo con 100 ml de agua y se extrajo 3 veces con 50 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se purifico en una columna de silice con una mezcla de EtOAc y PE (1:100) para 20 producir 200 mg (47%) del compuesto 51B en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo 51C: Acido (S)-2-((4-((ferc-butoxicarbonil)oxi)bencil)(metil)amino)-3-metil butanoico
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25
El compuesto 51C se preparo por hidrogenacion del compuesto 51B (200 mg), siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 3F.
Ejemplo 51D: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-((ferc-
30 butoxicarbonil)oxi)bencil)(metil)amino)-3-metilbutanamido)-W,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-
metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato
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35 El compuesto 51D se preparo mediante el acoplamiento del compuesto 51C con la amina 3D, siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 3 para obtener el producto deseado en forma de aceite de color amarillo con un rendimiento del 60%.
Ejemplo 51: El compuesto 51D (80 mg, 0,08 mmoles) se disolvio en 1 ml de DCM en presencia de 0,5 ml de 40 TFA, se agito 2 horas a temperatura ambiente y a continuacion se concentro a presion reducida. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-010, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase de
elucion: agua/ACN con pH regulado con TFAal 0,05%; gradiente de 23% a 40% de ACN durante 10 minutes y a continuacion de 40% a 95% de ACN durante 2 minutes; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 51 se obtuvo con un rendimiento del 24% (20 mg) en forma de un solido de color blanco.
5 LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; MeOH al 2% en agua (TFA al 0,05%) durante 1 minuto y a continuacion de 2% a 95% de MeOH por 13 minutos); ESI (C47H73N5O9, masa exacta 851,54) m/z: 874,5 (MNa+), 426,9 (M,2H+/2); 12,48 min (96%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 8,1-8,6 (m, 0,9H, NHCO intercambio incompleto); 10 7,29-7,27 (m, 2H), 7,25-6,86 (m, 5H), 6,84-6,83 (m, 2H), 4,83-4,72 (m, 3H), 4,26-0,82 (m, 58H).
Ejemplo de referencia 52
(S)-W-((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((lR,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(tiazol-2- 15 il)etil)amino)propil)pirrolidin-l-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-3- metiM-oxobutan-2-M)-W,4-dimetM-2-(metMammo)pentanamida, acido trifluoroacetico
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20 Ejemplo 52A: Acido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-4-metil-pentanoico
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Boc-Leu-OH (4,7 g, 30 mmoles) se disolvio en 150 ml de THF en una atmosfera inerte. Se anadio hidruro sodico 25 (3,2 g, 133 mmoles, 4,0 equiv.) a 0°C en porciones. La mezcla de reaccion se agito 1 hora a baja temperatura
antes de anadir yodometano (14,2 g, 100 mmoles, 5,0 equiv.). La reaccion se dejo bajo agitacion durante la noche a temperatura ambiente y a continuacion se neutralizo con 100 ml de agua y se lavo 3 veces con 200 ml de EtOAc. La fase acuosa se llevo a pH 3 con HCl 1N y a continuacion se extrajo 3 veces con 100 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron una vez con 300 ml de solucion acuosa saturada de NaCl, se 30 secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida obteniendose 4,7 g (94%) del compuesto 52A en forma de un aceite de color rojo.
Ejemplo 52B: bencil ((S)-2-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-W,4-dimetilpentanamido)-3-metilbutanoato
35
Se preparo el compuesto 52B de manera similar como para el compuesto 1ZG a partir de la amina 1ZC (1,9 g,
7,4 mmoles, 0,9 equiv.), el acido 52A (2,0 g, 8,1 mmoles), HATU (4,7 g, 12 mmoles, 1,5 equiv.) y DIEA (9 ml) en DMF (150 ml). A continuacion de la purificacion en una columna de silice (EtOAc/EP = 1/10), el compuesto 52B 40 (0,8 g, 24%) se obtuvo en forma de un solido de color blanco.
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Ejemplo 52C: Acido (S)-2-((S)-2-((ferc-butoxicarbonil)(metil)amino)-A/,4-dimetil pentanamido)-3-metilbutanoico
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El compuesto 52C se prepare por hidrogenacion del compuesto 52B (300 mg), siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 3F, con un rendimiento del 83%.
Ejemplo 52D: ferc-butil ((3R,4S,7S,10S,13S)-4-((S)-sec-butil)-7,10-diisopropil-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2- metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-5,11,15-trimetil-6,9,12-trioxo-2- oxa-5,8,11-triaza hexadecan-13-il)(metil)carbamato
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El compuesto 52D se preparo mediante el acoplamiento del compuesto 52C con la amina 1Y, siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 1ZG. El producto deseado se obtuvo en forma de aceite de color amarillo con un rendimiento del 94%.
Ejemplo de referencia 52: El compuesto 52 se preparo mediante la desproteccion del compuesto 52D, siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 1. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-010, columna SunFire Prep C18 OBD 5, pm, 19 x 100 mm, se eluyeron las fases con pH regulado con TFA al 0,05%, de 20% a 45% de ACN en agua durante 10 minutos y a continuacion de 45% a 100% de ACN durante 2 minutos; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 52 se obtuvo con un rendimiento del 13% (14 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,0 ml/min, de 5% a 95% de ACN en agua (TFAal 0,05%) durante 18 minutos); ESI (C48H79N7O7S, masa exacta 897,58) m/z: 898,5 (MH+), 449,9 (M,2H+/2); 16,46 min (88%, 210 nm).
1H NMR (300 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,1-8,6 (m, 0,9H, NHCO intercambio incompleto); 7,81-7,78 (m, 1H), 7,56-7,52 (m, 1H), 7,32-7,27 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,80-0,86 (m, 68H).
Ejemplo de referencia 53
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,6S,9S,12S,13R)-12-((S)-sec-butil)-3-isobutil-6,9-diisopropil-13-metoxi-5,M- dimetM-4,7,10-trioxo-2,5,8,11-tetraazapentadecan-15-oN)pirroNdm-2-N)-3-metoxi-2-metNpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 53A: metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((6S,9S, 12S,15S,16R)-15-((S)-sec-butil)-6-isobutil-9,12-diisopropil-
l6-metoxi-2,2,5,8,14-pentametil-4,7,10,13-tetraoxo-3-oxa-5,8,11,14-tetraazaoctadecan-18-oil)pirrolidin-2-il)-3-
metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato.
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El compuesto 53A se prepare mediante el acoplamiento del compuesto 52C con la amina 3D, siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 3. El producto deseado se obtuvo en una mezcla con un diastereoisomero en forma de aceite de color amarillo. Se utilizo como tal en la siguiente etapa.
Ejemplo de referencia 53: El compuesto 53 se prepare mediante la desproteccion del compuesto 53A, siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 1. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC-010, columna SunFire Prep Cl8 OBD, 5 |jm, 19 x 100 mm, se eluyeron las fases con pH regulado con TFA al 0,05%, de 20% a 45% de ACN en agua durante 10 minutos y a continuacion de 45% a 100% de ACN durante 2 minutos; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 53 se obtuvo con un rendimiento del 12% (13 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (Ascentis Express C18, 2,7 jm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de ACN en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C47H80N6O9, masa exacta 872,60) m/z: 873,6 (MH+), 437,4 (M,2H+/2); 6,97 min (91%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 8,1-8,6 (m, 0,7H, NHCO intercambio incompleto); 7,70-7,10 (m, 5H), 4,80-0,8 (m, 72H).
Ejemplo de referencia 54
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,6S,9S,12S,13R)-12-((S)-sec-butil)-3-isobutil-6,9-diisopropil-13-metoxi-5,M- dimetil-4,7,10-trioxo-2,5,8,11-tetraazapentadecan-15-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 54: El compuesto 54 se prepare mediante saponificacion del compuesto 53, siguiendo el protocolo utilizado para la preparacion del compuesto 4. El residuo se purifico por HPLC preparativa (Pre-HPLC- 010, columna SunFire Prep C18 OBD, 5 jm, 19 x 100 mm, se eluyeron las fases con pH regulado con TFA al 0,05%, de 20% a 45% de AcN en agua durante 10 minutos y a continuacion de 45% a 100% de ACN durante 2 minutos; detector UV Waters 2489 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 54 se obtuvo con un rendimiento del 23% (22 mg) en forma de un solido de color blanco.
LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1,8 jm, 4,6 x 100 mm; 2% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 1 minuto y a continuacion de 2% a 95% de MeOH por 13 minutos); ESI (C46H78N6O9, masa exacta 859,15) m/z: 860 (mH+),
430,4 (M,2H+/2); 12,19 min (86%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 5 (Presencia de rotameros) 7,70-7,10 (m, 5H), 4,80-0,8 (m, 69H).
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(2S,3S)-N-((S)-1 -(((S)-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((lR,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 - (tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxo heptan-4-il)(metil)ammo)-3-metiM-oxobutan-2-
il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)-N,3-dimetil-2-(metilamino) pentanamida, acido trifluoroacetico
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Ejemplo 55: El compuesto 55 se preparo siguiendo la misma secuencia de etapas que para la preparacion del compuesto 52, sustituyendo Boc-Leu-OH por Boc-Ile-OH.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,0 ml/min, de 5% a 95% de MeOH en agua (TFAal 0,05%) durante 18 minutos); ESI (C48H79N7O7S, masa exacta 898,25) m/z: 899,5 (MH+), 449,9 (M,2H+/2); 16,34 min (92%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 8,9-8,5 (0,65H, NHCO intercambio incompleto), 7,76 (m, 1H), 7,6-7,4 (m, 1H), 7,3-7,1 (m, 5H), 5,7-5,5 (m, 1H), 4,8-0,8 (m, 68H).
Ejemplo de referencia 56
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3S,6S,9S,12S,13R)-3,12-di((S)-sec-butM)-6,9-diisopropil-13-metoxi-5,N-dimetN- 4,7,10-trioxo-2,5,8,11-tetraazapentadecan-15-oM)pirroNdm-2-M)-3-metoxi-2-metNpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 56: El compuesto 56 se preparo siguiendo las mismas secuencias de etapas que para la preparacion del compuesto 53, sustituyendo Boc-Leu-OH por Boc-Ile-OH.
LC/MS/UV (columna Eclipse Plus C8, 3,5 pm, 4,6 x 150 mm; 40°C; 1,0 ml/min, de 5% a 95% de MeOH en agua (TFAal 0,05%) durante 18 minutos); ESI (C47H80N6O9, masa exacta 872,6) m/z: 873,6 (MH+), 437,4 (M,2H+/2); 16,18 min (90%, 210 nm).
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Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,6S,9S,12S,13R)-3,12-di((S)-sec-butM)-6,9-diisopropiM3-metoxi-5,N-
dimetil-4,7,10-trioxo-2,5,8,1l-tetraazapentadecan-15-oil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3- fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
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Ejemplo de referencia 57: El compuesto 57 se preparo siguiendo la misma secuencia de etapas que para la preparacion del compuesto 54, sustituyendo Boc-Leu-OH por Boc-Ile-OH.
LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; MeOH al 2% (TFA al 0,05%) durante 2 minutes, a continuacion, de 2% a 95% durante 12 minutes); ESI (C46H78N6O9, masa exacta 858,58) m/z: 859,6 (MH+), 430,4 (M,2H+/2); 12,81 min (91%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 8,6-7,4 (0,8H, NHCO intercambio incompleto), 7,4-7,2 (m, 5H), 4,8-0,8 (m, 69H).
Ejemplo de referencia 58
(S)-2-((S)-2-((S)-W,3-dimetN-2-(metilammo)butanamido)-3-metNbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)- 2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-l-il)-5-metil-1- oxoheptan-4-M)-W,3-dimetilbutanamida, acido trifluoroacetico
imagen176
Ejemplo de referencia 58: El compuesto 58 se preparo siguiendo la misma secuencia de etapas que para la preparacion del compuesto 52, sustituyendo Boc-Leu-OH por Boc-Val-OH.
LC/MS/UV (columna Ascentis Express C18, 2,7 pm, 4,6 x 100 mm; 40°C; 1,5 ml/min, de 10% a 95% de MeOH en agua (TFA al 0,05%) durante 8 minutos); ESI (C47H77N7O7S, masa exacta 883,56) m/z: 884,6 (MH+), 442,9 (M,2H+/2); 6,84 min (95%, 210 nm).
5
10
15
20
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30
35
metil (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,6S,9S,12S,13R)-12-((S)-sec-butil)-3,6,9-triisopropil-13-metoxi-5,M-dimetil-
4,7,10-trioxo-2,5,8,11-tetraazapentadecan-15-oM)pirrolidm-2-M)-3-metoxi-2-metNpropanamido)-3- fenilpropanoato, acido trifluoroacetico
imagen177
Ejemplo de referencia 59 El compuesto 59 se preparo siguiendo la misma secuencia de etapas que para la preparacion del compuesto 53, sustituyendo Boc-Leu-OH por Boc-Val-OH.
LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; MeOH al 30% (TFA al 0,05%) durante 1 minuto, a continuacion de 30% a 95% durante 13 minutos); ESI ^HyaNaOg, masa exacta 858,58) m/z: 859,6 (MH+), 430,4 (M,2H+/2); 12,18 min (91%, 210 nm).
1H NMR: (300 MHz, CD3OD, ppm): 8 (Presencia de rotameros) 8,5-8,0 (0,6H, NHCO intercambio incompleto), 7,3-7,1 (m, 5H), 4,8-0,8 (m, 70H).
Ejemplo de referencia 60
Acido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1 -((3S,6S,9S,12S,13R)-12-((S)-sec-butM)-3,6,9-triisopropiM3-metoxi-5,N-dimetil- 4,7, 10-trioxo-2,5,8,1l-tetraazapentadecan-15-oM)pirroNdin-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanamido)-3-
fenilpropanoico, acido trifluoroacetico
imagen178
Ejemplo de referencia 60: El compuesto 60 se preparo siguiendo la misma secuencia de etapas que para la preparacion del compuesto 54, sustituyendo Boc-Leu-OH por Boc-Val-OH.
LC/MS/UV (Zorbax SB-Aq, 1,8 pm, 4,6 x 100 mm; MeOH al 30% (TFA al 0,05%) durante 1 minuto, a continuacion de 30% a 95% por 13 minutos); ESI (C45H76N6O9, masa exacta 844,57) m/z: 845,6 (MH+), 423,4 (M,2H+/2); 11,64 min (86%, 210 nm).
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(S)-2-((S)-2-((4-ammofenetN)(metN)ammo)-3-metNbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxM-((S)-2-((lR,2R)-1- metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il) etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4- l)- W,3-dimetilbutanamida
imagen179
Ejemplo 61A: diclorhidrato de W-(4-aminofenetil)-W-metil-L-valina
imagen180
El compuesto 11D (962 mg, 2,75 mmoles) se disolvio en 10 ml de una solucion comercialmente disponible de HCl en propan-2-ol (5 - 6 M), y se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. El analisis por TLC indico el consumo completo del material de partida. El disolvente se evaporo a presion reducida, y el solido amarillo resultante se trituro con Et2O (2 x l0 ml). El producto se seco bajo vado para proporcionar el compuesto 61A como un solido amarillo (322 mg, 47%).
Ejemplo 61: El acido carboxflico 61A (73 mg, 0,23 mmoles, 1 eq) y amina 1Y (150 mg, 0,23 mmoles, 1 eq) se disolvieron en DMF seco (2 ml). Se anadieron DIEA (158 pl, 0,90 mmoles, 4 eq.) y DECP (51 pl, 0,34 mmoles, 1,5 eq.) y la reaccion se agito durante 4 horas a temperatura ambiente. El analisis por LC-MS mostro el consumo completo del material de partida. El disolvente se evaporo a presion reducida, y el residuo se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de silice (DCM/MeOH) para proporcionar el compuesto 61 como un solido de color amarillo claro (83 mg, 40%).
1H NMR: (500 MHz, DMSO-de, ppm): 6 (Presencia de rotameros), 8,86 (d, 0,5H, NHCO); 8,65 (d, 0,5H, NHCO), 8,11-8,05 (m, 1H, NHCO), 7,80 (d, 0,5H, tiazol), 7,78 (d, 0,5H, tiazol), 7,65 (d, 0,5H, tiazol), 7,63 (d, 0,5H, tiazol), 7,32-7,12 (m, 5H), 6,83 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 6,45 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 5,56-5,49 (m, 0,5H), 5,42-5,35 (m, 0,5H), 4,78 (s, 2H, NH2), 4,74-4,46 (m, 2H), 4,01-0,66 (m, 57H).
HPLC (XBridge Shield C18, 3,5 pm, 4,6 x 50 mm; 3,5 ml/min, 40°C, de 0 a 95% de MeCN en agua (TFA al 0,1%) durante 2,25 minutos y a continuacion 95% de MeCN por 0,5 minutos, Tr = 1,31 min (96,5%, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 890,5558 (2%, MH+, C49H76N7O6S requiere 890,5572), 445,7834 (100%, (MH2)2+, C49H77N7O6S requiere 445,7823).
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Metil ((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-ammofenetN)(metN)ammo)-3-metNbutanamido)-W,3-
dimetMbutanamido)-3-metoxi-5-metMheptanoM)pirroMdm-2-M)-3-metoxi-2-metMpropanoM)-L-femlalamnato
imagen181
Ejemplo 62: El compuesto 62 se preparo de la misma manera que para el compuesto 61, utilizando acido carboxflico 61A (69 mg, 0,21 mmoles, 1 eq), amina 3D (135 mg, 0,21 mmoles, 1 eq), DIEA (75 pl, 0,43 mmoles, 2 eq.) y DECP (49 pl, 0,32 mmoles, 1,5 eq.). El producto bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (DCM/MeOH) para proporcionar el compuesto 62 como un solido de color amarillento (82 mg, 45%).
1H NMR: (500 MHz, DMSO-de, ppm): 6 (Presencia de rotameros), 8,50 (d, J= 8,3, 0,5H, NHCO); 8,27 (d, J= 8,0, 0,5H, NHCO), 8,15-8,04 (m, 1H, NHCO), 7,27-7,13 (m, 5H), 6,86-6,79 (m, 2H), 6,48-6,42 (m, 2H), 4,78 (s, 2H, NH2), 4,74-4,44 (m, 3H), 4,01-3,72 (m, 1,5H), 3,66 (s, 1,5H, CO2Me), 3,63 (s, 1,5H, CO2Me), 3,57-0,65 (m, 55,5H).
HPLC (XBridge Shield C18, 3,5 pm, 4,6 x 50 mm; 3,5 ml/min, 40°C, de 0 a 95% de MeCN en agua (TFA al 0,1%) durante 2,25 minutos y a continuacion MeCN al 95% durante 0,5 minutos, Tr = 1,29 min (95,3%, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 865,5800 (2%, MH+, C48H77N6O8 requiere 865,5797), 433,2937 (100%, (MH2)2+, C48H78N6O8requires 433,2935).
Ejemplo 63
((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-((4-ammofenetN)(metM)ammo)-3-metNbutanamido)-W,3-
dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanina-
2,2,2-trifluoroacetato
imagen182
Ejemplo 63: El compuesto 62 (23 mg, 0,03 mmoles) se disolvio en una mezcla de agua (1 ml) y acetonitrilo (1 ml). Se anadio piperidina (0,75 ml) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 horas. El analisis por TLC indico el consumo completo del material de partida. El disolvente se evaporo a presion reducida, y el residuo se purifico por HPLC preparativa (columna SunFire Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; fase movil: agua/MeCN con pH regulado con TFA al 0,1%; gradiente de 20% a 40% de MeCN por 10 minutos, a continuacion, del 40% al 100% de MeCN durante 2 minutos; Detector UV Waters 2545 a 254 nm y 220 nm). El compuesto 63 se obtuvo como un solido blanco (14 mg, 66%).
1H NMR: (500 MHz, DMSO-de, ppm): 6 (Presencia de rotameros), 12,7 (s(br), 1H, CO2H), 9,58 (m(br), 1H); 9,04
8,89 (m, 1H), 8,41 (d, 0,6H, NHCO), 8,15 (d, 0,4H, NHCO), 7,27-7,13 (m, 5H), 7,13-6,99 (m(br), 2H), 6,90-6,64 (s(br), 2H), 4,77-3,40 (m, 10H), 3,34-2,75 (m, 20H), 2,34-1,94 (m, 4H), 1,90-0,7 (m, 25H). HPLC (XBridge Shield c18, 3,5 pm, 4,6 x 50 mm; 3,5 ml/min, 40°C, de 0 a 95% de MeCN en agua (TFAde 0,1%) durante 2,25 minutos y a continuacion 95% de MeCN durante 0,5 minutos, Tr = 1,24 min (100%, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 851,5641 (6%, MH+, C47H75N6O8 requiere 851,5641), 426,2854 (100%, (MH2)2+, requiere
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426,2857).
Ejemplo 64
(S)-2-((S)-2-((4-ammofenetil)(metN)ammo)-3-metNbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1- hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-l-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-
4-M)-W,3-dimetilbutanamida
imagen183
El compuesto 64 se prepare de la misma manera que para el compuesto 61, utilizando acido carbox^lico 61A (93 mg, 0,29 mmoles, 1 eq.), amina 2D (174 mg, 0,29 mmoles, 1 eq.), DIEA (100 pl, 0,58 mmoles, 2 eq.) y DECP (66 pl, 0,43 mmoles, 1,5 eq.). El producto bruto se purifico por cromatograffa ultrarrapida sobre gel de silice (DCM/MeOH) para proporcionar el compuesto 64 como un solido de color blanquecino (51 mg, 21%).
1H NMR: (500 MHz, DMSO-de, ppm): 6 (Presencia de rotameros), 9,61 (m(br), 1H); 9,05-8,89 (m, 1H), 7,93 (d, 0,6H, NHCO), 7,64 (d, 0,4H, NHCO), 7,36-6,98 (m, 7H), 6,92-6,70 (m(br), 2H), 5,45 (s(br), 1H), 4,80-4,41 (m, 3H), 4,06-3,44 (m, 4H), 3,37-2,79 (m, 18H), 2,45-2,21 (m, 3H), 2,17-0,70 (m, 35H).
HPLC (XBridge Shield C18, 3,5 pm, 4,6 x 50 mm; 3,5 ml/min, 40°C, de 0 a 95% de MeCN en agua (TFA al 0,1%) durante 2,25 minutos y a continuacion 95% de MeCN durante 0,5 minutos, Tr = 1,20 min (100%, 220 nm).
m/z (Q-TOF ESI+) 837,5826 (33%, MH+, C47H77N6O7 requiere 837,5848), 419,2956 (100%, (MH2)2+, C47H76N6O8 requiere 419,2961).
II - La actividad biologica de los compuestos de la invencion
Los derivados de la presente invencion son agentes citotoxicos potentes. Sus actividades antiproliferativas se determinaron en estirpes tumorales segun los siguientes procedimientos y tecnicas.
Metodo:
Cultivo de celulas. Las celulas A549 (celulas no pequenas de cancer de pulmon - ATCC CCL-185) y MDA-MB- 231 (adenocarcinoma de mama - ATCC HTB-26) se cultivaron en medio esencial mrnimo de Eagle (MEM) con 5% de suero de ternera fetal (FCS) y medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con 10% de FCS, respectivamente. Las celulas MCF7 (carcinoma ductal de mama - ATCc HTB-22) y SN-12C (carcinoma de rinon - ATCC) se mantuvieron en medio RPMI1640 (sin rojo fenol para las celulas MCF7) que conterna 10% de FCS. Todos los medios fueron suplementados con fungizona (1,25 pg/mL) y penicilina-estreptomicina (100 U/100 pg/mL). Las celulas se cultivaron bajo condiciones estandares en una incubadora a 37°C, 5% de CO2 y 95% de humedad atmosferica.
Actividad antiproliferativa en 4 estirpes celulares tumorales. Los compuestos segun la invencion se investigaron para su actividad antiproliferativa usando un ensayo de proliferacion ATPlite (Perkin Elmer, Villebon sur Yvette, Francia) en un amplio panel de 4 estirpes celulares. Las celulas se sembraron en placas de 96 pocillos (103 celulas/pocillo para A549, 2,103 para MCF7, MDA-MB-231 y SN12C) al dfa 0 a una concentracion para asegurar que las celulas permanecieran en fase de crecimiento celular logantmico a lo largo del penodo de tratamiento de farmacos de 72 h. A continuacion de un periodo de incubacion de 24 horas, todas las celulas se trataron con diluciones seriadas de los compuestos ensayados (11 pl de una solucion 10X en DMSO al 1% - 6 pocillos/condicion). Para evitar la adherencia de los compuestos sobre las puntas, las puntas se cambiaron entre dos diluciones consecutivas. Las celulas se colocaron entonces en una incubadora a 37°C y 5% de CO2. Al dfa 4, la viabilidad celular se evaluo mediante la dosificacion de la ATP liberada por las celulas viables. Se analizo el numero de celulas viables en comparacion con el numero de celulas tratadas con el disolvente. Se determinaron los valores de EC50 con el analisis de ajuste de curva (modelo de regresion no lineal con una respuesta de dosis sigmoidal, coeficiente de pendiente variable de Hill), realizado con el algoritmo proporcionado por el software
5
10
15
20
25
GraphPad (GraphPad Software Inc., CA, EUA). Resultados:
Diversos compuestos:
Los diversos compuestos segun la invencion se ensayaron para determinar su actividad antiproliferativa sobre la estirpe celular MDA-MB-231 siguiendo el procedimiento anteriormente descrito. Las actividades medidas proporcionaron valores de EC50 < 0,1 pM.
Los pocos ejemplos siguientes, seleccionados de entre los compuestos segun la invencion, ilustran sus propiedades antiproliferativas completamente excepcionales:
Ejemplo 3: CE50 = 4,10xl0-10 M; Ejemplo 12: CE50 = 5,80xl0-10 M; Ejemplo 13: CE50 = 7,95xl0'8 M; Ejemplo 15: CE50 = 1,70xl0-10 M; Ejemplo 27: CE50 = 1,20xl0-10 M.
Diversas estirpes celulares:
El compuesto 15 se ensayo en diferentes estirpes celulares (A549, MDA-MB-231, MCF-7, SN12C) siguiendo el procedimiento anteriormente descrito. Las actividades medidas proporcionaron valores de EC50 <0,1 pM.
EC50 (M)
A549 MDA-MB-231 MCF-7 SN12C
Compuesto 15
1,45x10'lu 1,70x10'1u 7,15x10'1u 2,18x10"'°
Ejemplos comparativos:
La sustitucion en el anillo fenilo (amino/hidroxilo v. carboxilo) se estudio en los ejemplos comparativos a continuacion que muestran la mejora de la actividad antiproliferativa de los farmacos segun la invencion que comprende un sustituyente amino o hidroxilo.
imagen184
imagen185
Estructura
EC50 (M)
A549
MDA-MB-
231
1,48x10'
5,80x10'
1,45x10'
1,70x10'
8,60x10'
1,20x10'
2,71x10
7,95x10'*
Ejemplo
comparativo
3,76x10'
-9
2,29x10
.'9
Ejemplo
comparativo
imagen186
4,03x10-7
9,75x10-7

Claims (7)

  1. 5
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    30
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    40
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    50
    1. Compuesto de la formula (I) siguiente:
    imagen1
    en la que:
    - R1 es H u OH,
    - R2 es un grupo alquilo (C-i-Ca), COOH, COO-(alquilo (C1-C6)) o tiazolilo,
    - R3 es H o un grupo alquilo (Ci-Ca), y
    - R4 es:
    ■ un grupo aril-alquilo (C1-C8) sustituido por uno o mas grupos seleccionados de entre los grupos OH y NR9R10 con Rg y R10 cada uno independientemente del otro representando H o un grupo alquilo (Ci- C6), o
    ■ un grupo heterociclo-alquilo (C1-C8) opcionalmente sustituido por uno o mas grupos seleccionados de entre los grupos alquilo (C1-Ca), OH y NR12R13 con R12 y R13 cada uno independientemente del otro representando H o un grupo alquilo (C1-Ca),
    en el que:
    un grupo aril-alquilo (C1-C8) es un grupo arilo unido al resto de la molecula mediante un grupo alquilo que comprende 1 a 8 atomos de carbono, siendo el grupo arilo un grupo hidrocarburo aromatico que presenta 6 a 10 atomos de carbono y que comprende uno o dos anillos fusionados, y
    un grupo heterociclo-alquilo (C1-C8) es un grupo heterociclo unido al resto de la molecula mediante un grupo alquilo que comprende 1 a 8 atomos de carbono, siendo el grupo heterociclo un grupo hidrocarburo saturado, insaturado o aromatico que presenta 1 o 2 anillos fusionados y en el que 1 a 4 de los atomos de carbono son reemplazados cada uno por un heteroatomo seleccionado de entre oxfgeno, nitrogeno y azufre,
    o sal, hidrato o solvato farmaceuticamente aceptables del mismo.
  2. 2. Compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado por que:
    - R1 = OH y R2 representa un grupo alquilo (C1-Ca), o
    - R1 = H y R2 representa un grupo COOh, COO-alquilo (C1-Ca) o tiazol.
  3. 3. Compuesto segun la reivindicacion 1 o 2, caracterizado por que R1 representa H y R2 representa COOH o COOMe.
  4. 4. Compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que R3 representa H o un grupo metilo.
  5. 5. Compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que R4 representa uno de los grupos siguientes:
    - aril-alquilo (C1-C2) sustituido por un grupo seleccionado de entre OH y NR9R10, o
    - heterociclo-alquilo (C1-C2) sustituido por un grupo seleccionado de entre NR12R13, OH y alquilo (C1-Ca).
  6. 6. Compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que el grupo arilo es un grupo fenilo y el heterociclo es un anillo saturado, insaturado o aromatico con 5 o 6 miembros que comprende 1 o 2 atomos de nitrogeno.
  7. 7. Compuesto segun la reivindicacion 6, caracterizado por que el heterociclo es seleccionado de entre una piridina, una piperidina y un imidazol.
    5 8. Compuesto segun la reivindicacion 1, seleccionado de entre:
    imagen2
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