CN108779146B - 肽衍生物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于，提供在C末端具有能够用于复合体的形成的官能团、且具有细胞毒性的化合物。本发明提供下式所代表的肽衍生物或其药理学上可允许的盐。

Description

肽衍生物及其用途
技术领域
本发明涉及肽衍生物及其用途。
背景技术
由海洋中存在的食藻海猪分离出具有细胞毒性的多种肽衍生物。作为这些肽衍生物中的一种的具有极强的细胞毒性的化合物，已知多拉司他汀10(专利文献1和非专利文献1)。
已表明多拉司他汀10的细胞毒性是通过微管蛋白聚合抑制作用而发挥的，迄今针对其结构活性相关性进行了报告(专利文献2和3以及非专利文献2)。此外，作为具有同样的微管蛋白聚合抑制作用的肽衍生物，除此之外还有一甲基澳瑞他汀(专利文献4和5)，已知该化合物以经由被称为连接子的特定结构而与抗体的特定氨基酸结合而得到的抗体药物复合体形式利用。
作为能够用于抗体药物复合体的药品，必须具有能够与连接子或抗体结合的特定取代基(例如氨基、巯基或羟基)。此外，其结合方法对复合体的药效有显著影响，因此迄今报告了多种取代基的利用(非专利文献3~5)。
迄今作为在微管蛋白抑制药中具有能够用于复合体的官能团的衍生物，报告了在N末端具有氨基的上述一甲基澳瑞他汀或PF-063801010(非专利文献6)、或者在C末端具有氨基、羟基、羧酸、羟胺或炔烃的澳瑞他汀F衍生物(专利文献6和非专利文献7~9)。
另一方面，作为以多拉司他汀10的C末端出发的展开，报告了具有乙基酯、乙基酰胺或噻唑酰胺的衍生物(非专利文献10)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开平2-167278号公报
专利文献2：国际公开第1993/003054号
专利文献3：国际公开第1995/009864号
专利文献4：国际公开第2002/088172号
专利文献5：国际公开第2004/010957号
专利文献6：国际公开第2012/171020号
非专利文献
非专利文献1：Pettit等人，Journal of the American Chemical Society，1987年，第109卷，第6883-6885页
非专利文献2：Miyazaki等人，Chemical and Pharmaceutical Bullentin，1995年，第43卷，第1706-1718页
非专利文献3：Jain等人，Pharmaceutical Research，2015年，第32卷，第3526-3540页
非专利文献4：Trais等人，Antibodies，2013年，第2卷，第113-129页
非专利文献5：Kern等人，Journal of the American Chemical Society，2016年，第138卷，第1430-1445页
非专利文献6：Maderna等人，Journal of Medicinal Chemistry，2014年，第57卷，第10527-43页
非专利文献7：Doronia等人，Bioconjugate Chemistry，2008年，第19卷，第1960-1963页
非专利文献8：Axup等人，Proceedings of the National Acedemy of Sciences，2012年，第109卷，第16101-16106页
非专利文献9：VanBrunt等人，Bioconjugate Chemistry，2015年，第26卷，第2249-2260页
非专利文献10：Miyazaki等人，Peptide Chemistry，1993年，第85-88页。
发明内容
发明所要解决的课题
然而，迄今未报告在C末端具有能够用于复合体的形成的官能团的多拉司他汀10衍生物。
此外，基于相同的骨架而具有不同种类的取代基的衍生物据信对于新型复合体的创造、复合体的构成对细胞毒性所造成的影响的检验而言是有用的，但迄今未报告这样的衍生物。
因此，本发明的目的在于，提供在C末端具有能够用于复合体的形成的官能团的多拉司他汀10衍生物。
用于解决问题的手段
本发明人等为了实现上述目的而深入研究，结果发现，在C末端具有特定官能团的新型肽衍生物或其药理学上可允许的盐对多种癌细胞显示出高的细胞毒性，从而完成了本发明。
即，本发明提供下述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐，
[化学式1]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE001
[式中，X表示氧原子或NR，Y表示NH2、N(Me)H、SH、OH或任意一个氢原子被NH2或OH替代的苯基，R表示氢原子或碳原子数为1~3的烷基；其中，X为NH且Y为NH2的衍生物、和X为NH且Y为N(Me)H的衍生物除外]。
上述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐中，X优选为氧原子。
此时，能够期待高细胞毒性。
上述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐中，更优选X为氧原子，Y为NH2、N(Me)H、SH或OH。
此时，能够期待更高的细胞毒性。
上述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐中，优选X为NR。
此时，能够期待高细胞毒性。
上述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐中，更优选X为NR，R为碳原子数为1~3的烷基。
此时，能够期待更高的细胞毒性。
上述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐中，进一步优选X为NR，R为甲基。
此时，能够期待进一步高的细胞毒性。
此外，本发明提供复合体或其药理学上可允许的盐，其包含上述通式(I)所示的肽衍生物、和靶向配体或聚合物。
此外，本发明提供细胞毒性剂，其含有上述通式(I)所示的肽衍生物或其药理学上可允许的盐、或者上述复合体或其药理学上可允许的盐作为有效成分。
发明效果
本发明的肽衍生物或其药理学上可允许的盐由于具有高细胞毒性，因此能够用作细胞毒性剂。
此外，本发明的肽衍生物在C末端具有各种官能团，因此能够将肽衍生物或其前药、和靶向配体或聚合物复合化，该复合体或其药理学上可允许的盐能够用作细胞毒性剂。
具体实施方式
本发明的肽衍生物的特征在于，其以下述通式(I)表示，
[化学式2]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE002
[式中，X表示氧原子或NR，Y表示NH2、N(Me)H、SH、OH或任意一个氢原子被NH2或OH替代的苯基，R表示氢原子或碳原子数为1~3的烷基；其中，X为NH且Y为NH2的衍生物、和X为NH且Y为N(Me)H的衍生物除外]。
本说明书中使用的下述术语在没有特别说明的情况下如下述定义。
“任意一个氢原子被NH2或OH替代的苯基”是指2-氨基苯基、3-氨基苯基、4-氨基苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基或4-羟基苯基。
“碳原子数为1~3的烷基”是指甲基、乙基、丙基或异丙基。
上述通式(I)所示的肽衍生物的优选的化合物的具体例示于表1，但本发明不限定于这些。
[表1]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE004
表1中记载的化合物还包括其药理学上可允许的盐。
上述通式(I)所示的肽衍生物(以下称为肽衍生物(I))在含有构象异构体、旋转异构体、互变异构体、光学异构体、非对映异构体或差向异构体等的情况中，任一异构体或混合物均包括在肽衍生物(I)中。进一步，肽衍生物(I)中存在光学异构体时，从外消旋体中拆分得到的光学异构体也包括在肽衍生物(I)中。
肽衍生物(I)的立体构型优选为下述式(II)。
[化学式3]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE005
此外，本发明包括肽衍生物(I)的前药或其药理学上可允许的盐。肽衍生物(I)的前药是指在生物体内利用酶或化学地转化为肽衍生物(I)的化合物。肽衍生物(I)的前药的活性主体是肽衍生物(I)，但肽衍生物(I)的前药本身也可以具有活性。
作为肽衍生物(I)的前药，可以举出例如肽衍生物(I)的羟基被酯化、碳酸酯化、氨基甲酸酯化、烷基化、磷酸化或硼酸化而得到的化合物。这些化合物可以按照公知的方法由肽衍生物(I)或其合成中间体合成。
作为肽衍生物(I)的前药，可以举出例如肽衍生物(I)的氨基被氨基甲酸酯化或酰胺化而得到的化合物。这些化合物可以按照公知的方法由肽衍生物(I)或其合成中间体合成。
作为肽衍生物(I)的前药，可以举出例如肽衍生物(I)的巯基形成了二硫键的化合物。这些化合物可以按照公知的方法由肽衍生物(I)或其合成中间体合成。
上述肽衍生物(I)的前药的具体例示于表2，但本发明不限定于这些。
[表2]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE007
表2中记载的化合物还包括其盐。
表2中，Q表示能够通过公知的方法(例如Ellen M. Sletten等人，AngewanteChimie International Edition，2009年，第48卷，第6974―6998页；Greg T.Hermanson.,“Bioconjugate Technique”，Elsevier公司；Xi Chem等人，Organic ＆ BiomolecularChemistry，2016年，第14卷，第5417―5439页)或以其为标准的方法而复合化的官能团(例如马来酰亚胺基、羧基、被活化的羧基、羰基、氨基氧基、酰肼基、重氮基、炔基或羟基)，J不存在或者表示间隔基，A1、A2和A3表示氨基酸，Z表示氢原子或甲基，除此之外的标记与上述定义相同。
“间隔基”表示连接肽衍生物(I)或肽衍生物(I)的前药与Q的结构，可以举出例如由直链或支链的碳原子数为1~12的烷基、-C(=O)N(Z)-或-N(Z)C(=O)-、PEG、二硫键或它们的组合构成的结构，优选由它们的组合构成的结构。
“直链或支链的碳原子数为1~12的烷基”可以举出例如-(CH2)n-、-CH(Me)-、-C(Me)2-、-(CH2)oCH(Me)-、-CH(Me)(CH2)o-、-(CH2)pC(Me)2-或-C(Me)2(CH2)p-。n表示1~12的整数，o表示1~10的整数，p表示1~9的整数。
“PEG”表示-(CH2CH2O)m-的重复结构所示的数均分子量为200~2,000的直链的聚乙二醇，m表示5~45的整数。
本说明书中，将氨基酸等用简称表示时，基于IUPAC-IUB Commision onBiochemical Nomenclature中的简称或者本领域中的惯用简称，其例子示于如下。此外，关于氨基酸，可以存在光学异构体时，在没有特别说明的情况下，如未明示则表示L体(例如“Lys”为L体的Lys)。此外，表示为“D-”时，表示D体(例如“D-Lys”为D体的Lys)，表示为“DL-”时，表示D体和L体的外消旋体(例如“DL-Lys”为D体的Lys和L体的Lys的外消旋体)。
“氨基酸”选自DL-Ala、DL-Arg、DL-Asn、DL-Asp、DL-Cit、DL-Cys、DL-Gln、DL-Glu、DL-Gly、DL-His、DL-Ile、DL-Leu、DL-Lys、DL-Met、DL-Phe、DL-Pro、DL-Ser、DL-Thr、DL-Trp、DL-Tyr或DL-Val中任一者，优选A1为Lys，A2和A3不存在；A1为Cit或Lys，A2为Val或Phe，A3不存在；或，A1为Asp，A2和A3为Ala。
表2中记载的A1与苯基的NH在羰基末端键合，A1、A2和A3各自经由酰胺键而在主链中键合。
表2中的编号6中记载的肽衍生物(I)的前药的优选结构示于表3，但本发明不限定于这些。
[表3]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE009
表3中记载的化合物还包括其盐。
表3中，Alk1和Alk2各自独立地表示直链或支链的碳原子数为1~12的烷基，E不存在或者表示-C(=O)N(Z)-或-N(Z)C(=O)-，除此之外的标记与上述定义相同。
表3所述的肽衍生物(I)的前药更优选Alk1为-(CH2)2-，进一步优选X为NR，Alk1为-(CH2)2-，E为-N(Z)C(=O)-，PEG为-(CH2CH2O)12-，Q为马来酰亚胺基，但本发明不限定于这些。
表2中的编号8号中记载的肽衍生物(I)的前药优选J为-Alk1-E-Alk2-或-Alk1-E-PEG-(CH2)2-E-Alk2-，进一步优选J为-(CH2)2-N(Z)C(=O)-Alk2-或-(CH2)2-N(Z)C(=O)-(CH2CH2O)12-(CH2)2-N(Z)C(=O)-Alk2-，Q为马来酰亚胺基，但本发明不限定于这些。
表2中的编号9~11中记载的肽衍生物(I)的前药优选J为-C(=O)-Alk1-、-C(=O)-PEG-(CH2)2-E-Alk1-或-C(=O)-Alk1-E-PEG-(CH2)2-E-Alk1-，更优选J为-C(=O)-(CH2)n-、-C(=O)-PEG-(CH2)2-E-(CH2)n-或-C(=O)-(CH2)n-E-PEG-(CH2)2-E-(CH2)n-，A1为Cit或Lys，A2为Val或Phe，A3不存在，Q为马来酰亚胺基或氨基氧基，但本发明不限定于这些。
此外，肽衍生物(I)的前药可以是在公知文献(“医药品的开发”，广川书店，1990年，第7卷，第163~198页和Progress in Medicine，第5卷，1985年，第2157~2161页)中记载的生理条件下变化为肽衍生物(I)的物质。
肽衍生物(I)可以被同位素标记，作为标记的同位素，可以举出例如2H、3H、13C、14C、15N、15O、17O、18O和/或125I。
作为肽衍生物(I)的“药理学上可允许的盐”，可以举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或磷酸盐等无机酸盐或草酸盐、丙二酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、葡糖酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、戊二酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐或桂皮酸盐等有机酸盐，优选为盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐或甲磺酸盐。
肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐可以为无水物，也可以形成水合物等溶剂合物。在此作为溶剂合物，优选为药理学上可允许的溶剂合物。药理学上可允许的溶剂合物可以为水合物或非水合物中任一者，优选为水合物。作为构成溶剂合物的溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇或正丙醇等醇系溶剂、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或水。
肽衍生物(I)可以通过基于源自其基本骨架、取代基的种类的特征的适当方法而制造。应予说明，这些化合物的制造中使用的起始物质和试剂可以是常规购买的，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法而制造。
肽衍生物(I)以及其制造中使用的中间体和起始物质可以通过公知的手段而分离纯化。作为用于分离纯化的公知的手段，可以举出例如溶剂萃取、重结晶或色谱。
肽衍生物(I)含有光学异构体或立体异构体时，可以通过公知的方法以单一化合物的形式得到各个异构体。作为公知的方法，可以举出例如结晶化、酶拆分或手性色谱。
以下记载的制造方法的各反应中，原料化合物具有羟基、氨基、巯基或羧基时，可以对这些基团导入保护基，可以在反应后根据需要对保护基进行脱保护，由此得到目标化合物。
作为羟基的保护基，可以举出例如三苯甲基、四氢吡喃基、碳原子数为7~10的芳烷基(例如苯甲基)或取代甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基)。
作为氨基的保护基，可以举出例如碳原子数为2~6的烷基羰基(例如乙酰基)、苯甲酰基、碳原子数为2~8的烷基氧基羰基(例如叔丁氧基羰基或苯甲基氧基羰基)、碳原子数为7~10的芳烷基(例如苯甲基)或邻苯二甲酰基。
作为巯基的保护基，可以举出例如三苯甲基、2-巯基吡啶基或2-巯基-5-硝基吡啶基。
作为羧基的保护基，可以举出例如碳原子数为1~6的烷基(例如甲基、乙基或叔丁基)或碳原子数为7~10芳烷基(例如苯甲基)。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
肽衍生物(I)可以例如如方案1所示那样，通过对被保护的肽衍生物(III)的脱保护反应而得到。
[化学式4]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE010
[式中，PG表示保护基，X为NR时，Y表示NH2或SH，Y'表示NH或S；X为氧原子时，Y表示NH2、SH、OH或任意一个氢原子被NH2或OH替代的苯基，Y'表示NH、S、O或任意一个氢原子被NH或O替代的苯基]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
被保护的肽衍生物(III)可以例如如方案2所示那样通过羧酸衍生物(IV)与亲核试剂(V)的缩合反应而得到。
[化学式5]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE011
[式中，各标记与上述定义相同]。
缩合反应中使用的亲核试剂(V)的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.5~10当量、更优选为1~3当量。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如氯甲酸乙酯、草酰氯、盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N'N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选氯甲酸乙酯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(IV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
亲核试剂(V)可以购买，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
此外，肽衍生物(I)也可以例如如方案3所示那样通过羧酸衍生物(IV)与亲核试剂(VI)的缩合反应而得到。
[化学式6]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE012
[式中，X表示NR，Y表示OH或任意一个氢原子被NH2或OH替代的苯基，其他标记与上述定义相同]。
缩合反应中使用的亲核试剂(VI)的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.5~10当量、更优选为1~3当量。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如氯甲酸乙酯、草酰氯、盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N'N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐或1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐，优选氯甲酸乙酯或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选为二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(IV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
亲核试剂(VI)可以购买，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
羧酸衍生物(IV)可以例如如方案4所示那样通过酯衍生物(VII)的脱保护反应而得到。
[化学式7]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE013
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
酯衍生物(VII)可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)可以例如如方案5所示那样通过酚衍生物(I-a)与亲电试剂(VIII-a)或(VIII-b)的缩合反应而得到。
[化学式8]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE014
[式中，各标记与上述定义相同]。
缩合反应中使用的亲电试剂(VIII-a)或(VIII-b)的量相对于酚衍生物(I-a)优选为0.5~10当量、更优选为1~3当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、吡啶或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、吡啶或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺或吡啶等有机碱。
缩合反应中使用的碱的量相对于酚衍生物(I-a)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的酚衍生物(I-a)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
亲电试剂(VIII-a)或(VIII-b)可以由公知的胺衍生物或羧酸衍生物通过公知的方法或以其为标准的方法合成、或在反应体系中产生。
被保护的聚乙二醇衍生物(XI)可以例如如方案6所示那样通过被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(X)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式9]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE015
[式中，G表示氢原子、琥珀酰亚胺基或对硝基苯基，除此之外的各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(X)的量相对于被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(X)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(X)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(X)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(X)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
羧酸衍生物(X)可以购买，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
肽衍生物(I)的前药(XIII)可以例如如方案7所示那样通过被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(XII)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式10]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE016
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(XII)的量相对于被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(XII)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(XII)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(XII)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(XII)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
羧酸衍生物(XII)可以购买，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
肽衍生物(I)的前药(XIII)可以例如如方案8所示那样通过被保护的聚乙二醇衍生物(XI)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(XIV)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式11]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE017
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的量相对于被保护的聚乙二醇衍生物(XI)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选为碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于被保护的聚乙二醇衍生物(XI)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
羧酸衍生物(XIV)可以购买，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
肽衍生物(I)的前药(XV)可以例如如方案9所示那样通过被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(XIV)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式12]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE018
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的量相对于被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选为碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于被保护的苯氧基氨基甲酸酯衍生物(IX)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
二硫醚衍生物(XVII)可以例如如方案10所示那样通过羧酸衍生物(IV)与亲核试剂(XVI)的缩合反应而得到。
[化学式13]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE019
[式中，W表示2-巯基吡啶基、2-巯基-5-硝基吡啶基或‐Alk1-N(Z)(PG)，其他标记与上述定义相同]。
缩合反应中使用的亲核试剂(XVI)的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.5~10当量、更优选为1~3当量。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如氯甲酸乙酯、草酰氯、盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N'N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选氯甲酸乙酯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(IV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(IV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
亲核试剂(XVI)可以购买，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法合成。
被保护的聚乙二醇衍生物(XVIII)可以例如如方案11所示那样，通过二硫醚衍生物(XVII-a)的脱保护反应和接续其后的与羧酸衍生物(X)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式14]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE020
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(X)的量相对于二硫醚衍生物(XVII-a)优选为0.5~10当量，更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于二硫醚衍生物(XVII-a)优选为0.001~10当量，更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(X)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(X)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(X)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(X)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
肽衍生物(I)的前药(XIX)可以例如如方案12所示那样通过二硫醚衍生物(XVII-a)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(XII)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式15]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE021
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(XII)的量相对于二硫醚衍生物(XVII-a)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于二硫醚衍生物(XVII-a)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(XII)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(XII)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(XII)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(XII)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
肽衍生物(I)的前药(XIX)可以例如如方案13所示那样通过被保护的聚乙二醇衍生物(XVIII)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(XIV)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式16]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE022
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的量相对于被保护的聚乙二醇衍生物(XVIII)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于被保护的聚乙二醇衍生物(XVIII)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
肽衍生物(I)的前药(XX)可以例如如方案14所示那样通过二硫醚衍生物(XVII-a)的脱保护反应、和接续其后的与羧酸衍生物(XIV)在碱性至中性条件下的偶联反应(G为琥珀酰亚胺基或对硝基苯基时)或缩合反应(G为氢原子时)而得到。
[化学式17]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE023
[式中，各标记与上述定义相同]。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
偶联反应或缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的量相对于二硫醚衍生物(XVII-a)优选为0.5~10当量、更优选为0.5~4当量。
偶联反应的pH可以通过碱调节。作为所使用的碱，可以举出例如三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、氢化钠、氢化钾或氢化钙等氢化金属化合物、甲基锂或丁基锂等烷基锂、六甲基二硅氮烷锂或二异丙基氨基锂等氨基锂、或者它们的混合物，优选碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱或三乙基胺或二异丙基乙基胺等有机碱。
偶联反应中使用的碱的量相对于二硫醚衍生物(XVII-a)优选为0.001~10当量、更优选为0.001~4当量。
偶联反应的pH也可以通过缓冲液调节。作为所使用的缓冲液，可以举出例如磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、柠檬酸磷酸缓冲液、硼酸缓冲液、酒石酸缓冲液或Tris缓冲液，优选为pH7.0~8.0的缓冲液。
偶联反应中使用的缓冲液的浓度为10mmol/L~1mol/L。
作为偶联反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、水、或者它们的混合溶剂。
偶联反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
偶联反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
偶联反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
作为缩合反应中使用的缩合剂，可以举出例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺、氯甲酸乙酯、草酰氯、六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐或2-甲基-6-硝基苯甲酸酐，优选为二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺等碳二亚胺或六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓。
缩合反应中使用的缩合剂的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.1~100当量、更优选为0.3~30当量。
作为缩合反应中使用的反应溶剂，根据所使用的试剂的种类而适当选择，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以举出例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂、二乙基醚、四氢呋喃、二甲氧基乙烷或1,4-二氧杂环己烷等醚系溶剂、乙酸乙酯或乙酸丙酯等酯系溶剂、二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂、乙腈或丙腈等腈系溶剂、或者它们的混合溶剂，优选二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷等氯系溶剂或N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基亚砜等非质子性极性溶剂。
缩合反应根据期望可以使用碱。作为所使用的碱，可以举出例如氢化钠、碳酸氢钠或碳酸钾等无机碱、三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物，优选三乙基胺、二异丙基乙基胺、4-二甲基氨基吡啶或吡啶等有机碱、或者它们的混合物。
缩合反应中使用的碱的量相对于羧酸衍生物(XIV)优选为0.5~20当量、更优选为1~5当量。
缩合反应的反应温度优选为-40℃~200℃、更优选为-20℃~150℃。
缩合反应的反应时间根据反应温度等条件适当选择，优选为30分钟~30小时。
缩合反应中使用的羧酸衍生物(XIV)的反应开始时的浓度优选为1mmol/L~1mol/L。
此外，本发明的复合体的特征在于，含有肽衍生物(I)和靶向配体或聚合物。
“靶向配体”是指用于将包含肽衍生物(I)的生理活性化合物输送至特定细胞的物质，可以举出例如抗原结合性蛋白质、细胞因子或低分子配体。
“抗原结合性蛋白质”是指具有与细胞表面存在的特定蛋白质结合的性质的蛋白质，可以举出例如免疫球蛋白分子、单链抗体、scFv、Fab片段、F(ab')片段、Diabody、Tribody、Affibody、Affilin、Anticalins、Atrimer、Avimer、Bicyclie peptide、Cys-knot、DARPin、FN3、Fynomer、Kunitz domain或OBody，但不限定于这些。
“细胞因子”是指白介素、趋化因子、干扰素、细胞增殖因子、细胞伤害因子(
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE024
)或它们的改性蛋白质等，可以举出例如白介素-2、白介素-2融合蛋白质、白介素-3、白介素-4、白介素-6、白介素-8、白介素-12、白介素-17、CCL1至28、CXCL1至17、XCL1、XCL2、CX3CL1干扰素α、干扰素β、干扰素γ、干扰素ω、干扰素τ、组合干扰素、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、CD-40配体、促黄体激素释放激素(LHRH)、胰岛素样生长因子(IGF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、神经生长因子(NGF)、血小板诱导生长因子、组织生长因子、转化生长因子-1、血管内皮细胞增殖因子、白血病抑制因子、角质细胞生长因子(KGF)、胶质细胞生长因子(GGF)、肿瘤坏死因子(TNF)、单核细胞趋化蛋白-1或内皮细胞增殖因子，但不限定于这些。
“低分子配体”是指具有与细胞表面存在的特定蛋白质结合的性质的分子量低于1000的有机化合物或肽衍生物，可以举出例如生物素、叶酸、整联蛋白抑制药、cRGD、RGD、PSMA抑制剂或VEGF抑制剂，但不限定于这些。
“聚合物”是指由一定的重复结构构成的数均分子量为1000~1000000的高分子有机化合物，可以举出例如聚乙二醇、聚谷氨酸、聚氨基酸或多糖类，优选聚乙二醇或聚谷氨酸，更优选数均分子量为20000~100000的聚乙二醇或数均分子量为20000~100000的聚谷氨酸。
上述抗原结合性蛋白质、细胞因子和肽衍生物还包括例如它们的化学合成体、它们的重组体、它们的天然物、它们的糖苷化或非糖苷化的形态、对它们导入了非天然氨基酸的形态、对它们通过氧化或还原等化学反应或酶反应而导入了官能团(例如醛基或巯基)的形态、和它们的生物活性片段。
“非天然氨基酸”是指不包括在天然存在且构成蛋白质的氨基酸(天然氨基酸)中的氨基酸，是指天然存在或通过化学合成制造的氨基酸，即天然存在且不构成蛋白质的氨基酸、对天然氨基酸进行化学修饰而得到的氨基酸、或不包括在天然氨基酸中的通过化学合成而制造的氨基酸等。作为具体例，可以举出D-氨基酸、瓜氨酸、鸟氨酸、(S)-2-氨基-3-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丙酸((S)-2-amino-3-(3-methyl-3H-diazirin-3-yl)propanoic acid，也称为植物-L-亮氨酸（フォト－Ｌ－ロイシン）)、(S)-2-氨基-4-(3-甲基-3H-双吖丙啶-3-基)丁酸((S)-2-amino-4-(3-methyl-3H-diazirin-3-yl)butanoicacid，也称为植物-L-甲硫氨酸（フォト－Ｌ－メチオニン）)、(S)-3-(4-乙酰基苯基)-2-氨基丙酸((S)-3-(4-acetylphenyl)-2-aminopropanoic acid，也称为4-乙酰基-L-苯丙氨酸)或(S)-2-氨基-3-(4-叠氮基苯基)丙酸((S)-2-amino-3-(4-azidophenyl)propanoicacid，也称为4-叠氮基-L-苯丙氨酸)，但不限定于这些。
上述低分子配体还适当包括其类似物、其衍生物、其激动剂、其拮抗剂、其抑制物质、其异构体等。
“复合体”是指包含肽衍生物(I)或其前药和上述靶向配体的物质、包含肽衍生物(I)或其前药和上述聚合物的物质、或包含肽衍生物(I)或其前药与上述靶向配体和上述聚合物的物质(以下总称为包含肽衍生物(I)的复合体)，各自直接结合或者经由其他物质(以下称为连接子)而间接结合。
作为包含肽衍生物(I)的复合体，可以举出例如肽衍生物(I)或其前药与免疫球蛋白分子直接结合或经由连接子而间接结合的抗体药物复合体。
此外，作为包含肽衍生物(I)的复合体，可以举出例如肽衍生物(I)或其前药与低分子配体直接结合或经由连接子而间接结合的低分子药物复合体。
此外，作为包含肽衍生物(I)的复合体，可以举出例如肽衍生物(I)或其前药与上述聚合物直接结合或经由连接子而间接结合的聚合物药物复合体。
此外，作为包含肽衍生物(I)的复合体，可以举出例如肽衍生物(I)或其前药上各自独立地直接结合或经由连接子而间接结合上述聚合物和上述靶向配体的物质。
此外，作为包含肽衍生物(I)的复合体，可以举出例如上述聚合物上各自独立地直接结合或经由连接子而间接结合肽衍生物(I)或其前药和上述靶向配体的物质。
此外，作为包含肽衍生物(I)的复合体，可以举出例如上述靶向配体上各自独立地直接结合或经由连接子而间接结合肽衍生物(I)或其前药和上述聚合物的物质。
“包含肽衍生物(I)”是指肽衍生物(I)或其前药通过公知的方法(例如Ellen M.Sletten等人，Angewante Chimie International Edition，2009年，第48卷，第6974―6998页；Greg T.Hermanson.,“Bioconjugate Technique”，Elsevier公司；Xi Chem等人，Organic ＆ Biomolecular Chemistry，2016年，第14卷，第5417―5439页)或以其为标准的方法，与上述靶向配体和/或上述聚合物通过共价键直接键合或经由连接子而间接键合。作为该共价键的具体例，可以举出例如利用在马来酰亚胺基上加成巯基而得到的键合、二硫醚键、利用氨基或羟基与羧基的缩合而得到的键合、利用炔基与叠氮基的点击反应而得到的键合、利用氨基氧基与羰基的缩合而得到的键合、或利用重氮基与酚基的烯型反应而得到的键合，优选利用在马来酰亚胺基上加成巯基而得到的键合、二硫醚键、利用氨基或羟基与羧基的缩合而得到的键合、或利用氨基氧基与羰基的缩合而得到的键合，但不限于此。
“连接子”是指通过肽衍生物(I)或其前药、上述靶向配体和上述聚合物与具有官能团(例如马来酰亚胺基、羧基、被活化的羧基、羰基、氨基氧基、酰肼基、重氮基、炔基或羟基)的化合物的反应而得到的结构。作为具有这些官能团的化合物，可以举出例如N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷甲酸酯(SMCC)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-甲酸酯(Sulfo-SMCC)、N-琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-羧基-(6-酰胺己酸酯)(LC-SMCC)、κ-马来酰亚胺基十一烷酸N-琥珀酰亚胺基酯(KMUA)、γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺基酯(GMBS)、ε-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺基酯(EMCS)、间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺基酯(MBS)、N-(α-马来酰亚胺基乙酰氧基)-琥珀酰亚胺基酯(AMAS)、琥珀酰亚胺基-6-(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸酯(SMPH)、N-琥珀酰亚胺基4-(对马来酰亚胺基苯基)-丁酸酯(SMPB)、和N-(对马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯(PMPI)、N-琥珀酰亚胺基4(2-吡啶基硫基)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、6-马来酰亚胺基己酰基(MC)、马来酰亚胺基丙酰基(MP)、对氨基苯甲基氧基碳酰基(PAB)和N-琥珀酰亚胺基4(2-吡啶基硫基)丁酸酯(SPDB)，但不限定于这些。此外，上述举出的连接子可以分别适当组合使用。
“细胞表面存在的特定蛋白质”是指在癌症、自身免疫性疾病或感染症中在细胞表面的表达增加的蛋白质，可以举出例如CD19、CD22、CD30、CD33、CD37、CD56、CD66e、CD70、CD74、CD79b、DLL-3、PSMA、GPNMB、Her2、CA6、CA9、Mesothelin(间皮素)、Nectin-4(连接蛋白-4)、SLC44A4、Cripto(畸胎瘤衍化生长因子单克隆抗体)、叶酸受体、STEAP-1、MUC16、NaPi2b、GCC、EGFRviii、5T4、TROP-2、LIV-1、SLITRK6、Tissue Factor(组织因子)、GuanylylCyclase C(鸟苷酸环化酶C)、CEACAM5、整联蛋白受体、白介素受体、PSMA、趋化因子受体、干扰素受体、细胞增殖因子受体或细胞伤害因子受体，但不限定于这些。
作为包含肽衍生物(I)的复合体的药理学上可允许的盐，可以举出例如与上述肽衍生物(I)的药理学上可允许的盐相同的盐。
包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐可以为无水物，也可以形成水合物等溶剂合物。在此作为溶剂合物，优选为药理学上可允许的溶剂合物。药理学上可允许的溶剂合物可以为水合物或非水合物中任一者，优选为水合物。作为构成溶剂合物的溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇或正丙醇等醇系溶剂、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或水。
包含肽衍生物(I)的复合体的具体例示于表4，但本发明不限于这些。
[表4]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE026
表4中记载的化合物还包括其药理学上可允许的盐。
表4中，r表示1~50的整数，L表示靶向配体、聚合物、或聚合物和靶向配体，除此之外的标记与上述定义相同。
表4中的编号6记载的复合体的优选的例为下述通式(XXI)所示，但本发明不限于此。
[化学式18]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE027
[式中，A4表示氨基酸，除此之外的标记与上述定义相同]。
A4的左侧(与氨基键合的一侧)为羰基末端、且右侧(与羰基键合的一侧)为氨基末端。此外，A4为Lys、Glu和Asp时，可以由侧链的氨基、羧基键合。
上述通式(XXI)所示的复合体更优选X为NR，Alk1为-(CH2)2-，PEG为-(CH2CH2O)12-，A4为主链上键合的Glu，进一步优选X为NR，R和Z为甲基，Alk1和Alk2为-(CH2)2-，PEG为-(CH2CH2O)12-，A4为主链上键合的Glu。
表4中的编号8记载的复合体的优选的例为下述通式(XXII)所示，但本发明不限于此。
[化学式19]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE028
[式中，各标记与上述定义相同]。
上述通式(XXII)所示的复合体更优选X为N(Me)，Alk1为-(CH2)2-，PEG为-(CH2CH2O)12-，A4为主链上键合的Glu，进一步优选X为N(Me)，Z为甲基，Alk1和Alk2为-(CH2)2-，PEG为-(CH2CH2O)12-，A4为主链上键合的Glu。
包含肽衍生物(I)的复合体可以通过基于源自其基本骨架、取代基的种类的特征的适当方法而制造。应予说明，这些化合物的制造中使用的起始物质和试剂可以是常规购买的，或者可以通过公知的方法或以其为标准的方法而制造。
包含肽衍生物(I)的复合体以及其制造中使用的中间体和起始物质可以通过公知的手段而分离纯化。作为用于分离纯化的公知的手段，可以举出例如溶剂萃取、重结晶或色谱。
包含肽衍生物(I)的复合体含有光学异构体或立体异构体时，可以通过公知的方法以单一化合物的形式得到各个异构体。作为公知的方法，可以举出例如结晶化、酶拆分或手性色谱。
上述通式(XXI)所示的复合体的立体构型优选为下述式(XXIII)。
[化学式20]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE029
上述通式(XXII)所示的复合体的立体构型优选为下述式(XXIV)。
[化学式21]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE030
以下记载的制造方法中，原料化合物具有羟基、氨基、巯基或羧基时，可以对这些基团导入保护基，可以在反应后根据需要对保护基进行脱保护，由此得到目标化合物。
作为羟基的保护基，可以举出例如三苯甲基、四氢吡喃基、碳原子数为7~10的芳烷基(例如苯甲基)或取代甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基)。
作为氨基的保护基，可以举出例如碳原子数为2~6的烷基羰基(例如乙酰基)、苯甲酰基、碳原子数为2~8的烷基氧基羰基(例如叔丁氧基羰基或苯甲基氧基羰基)、碳原子数为7~10的芳烷基(例如苯甲基)或邻苯二甲酰基。
作为巯基的保护基，可以举出例如三苯甲基、2-巯基吡啶基或2-巯基-5-硝基吡啶基。
作为羧基的保护基，可以举出例如碳原子数为1~6的烷基(例如甲基、乙基或叔丁基)或碳原子数为7~10的芳烷基(例如苯甲基)。
保护基的脱保护根据保护基的种类而不同，可以按照公知的方法(例如Greene,T.W.，“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”，Wiley-Interscience公司)或以其为标准的方法来进行。
包含肽衍生物(I)的复合体可以通过将肽衍生物(I)或其前药或它们的盐与上述靶向配体和/或上述聚合物或它们的盐通过公知的方法(例如Ellen M. Sletten等人，Angewante Chimie International Edition，2009年，第48卷，第页6974―6998、GregT.Hermanson.,“Bioconjugate Technique”、Elsevier公司、Xi Chem等人，Organic ＆Biomolecular Chemistry，2016年，第14卷，第页5417―5439)或以其为标准的方法直接或经由连接子而间接复合化，从而得到。
包含肽衍生物(I)的复合体可以被同位素标记，作为标记的同位素，可以举出例如2H、3H、13C、14C、15N、15O、17O、18O和/或125I。
作为上述复合化中使用的肽衍生物(I)或其前药、上述靶向配体或上述聚合物的盐，可以举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或磷酸盐等无机酸盐、草酸盐、丙二酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、葡糖酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、戊二酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐或桂皮酸盐等有机酸盐、三乙基胺盐、二异丙基乙基胺盐、乙醇胺盐、吗啉盐、哌啶盐或二环己基胺盐等与有机碱的盐、与精氨酸或赖氨酸等碱性氨基酸的盐、或者锂盐、钙盐、钾盐、钠盐、铵盐、铝盐或锌盐等与无机碱的盐。
肽衍生物(I)或其前药、上述靶向配体或上述聚合物的盐可以为无水物，也可以形成水合物等溶剂合物。作为构成溶剂合物的溶剂，可以举出例如甲醇、乙醇或正丙醇等醇系溶剂、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或水等。
此外，本发明的细胞毒性剂的特征在于，含有肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐、或包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐作为有效成分。
“细胞毒性剂”是指含有通过阻碍细胞功能或抑制细胞增殖而引起细胞死亡的化合物或其药理学上可允许的盐作为有效成分的组合物。
此外，“细胞毒性剂”中，还包括组合物，所述组合物含有复合体或其药理学上可允许的盐作为有效成分，所述复合体包含通过阻碍细胞功能或抑制细胞增殖而引起细胞死亡的化合物或其前药、和上述靶向配体或上述聚合物。
肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐、或、包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐对哺乳动物(例如小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、狗、猴、牛、羊或人)、特别是人给药时，能够用作有用的细胞毒性剂。
肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐、或者包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐可以直接或者配混药理学上可允许的载体而以细胞毒性剂的形式向上述哺乳动物经口或非经口地给药。
作为“非经口给药”，可以举出例如注射给药、经鼻给药、经肺给药、经皮给药、舌下给药或直肠给药，优选注射给药。
“注射给药”是指通过注射或点滴而将细胞毒性剂全身或局部地给药，作为给药的部位，可以举出例如静脉内、肌肉内、腹腔内、皮下。
以肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐、或者包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐作为有效成分的细胞毒性剂可以通过制剂技术领域中常规使用的公知方法(例如Remington's Pharmaceutical Science, latest edition, Mark PublishingCompany, Easton, U.S.A)而制造。此外，本发明的细胞毒性剂根据需要，可以适当适量含有制剂领域中通常使用的赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、表面活性剂、混悬剂、乳化剂、着色剂、防腐剂、芳香剂、矫味剂、稳定剂、增稠剂、缓冲剂、等张剂、流动性促进剂等添加剂。作为药理学上可允许的载体，可以举出这些添加剂。
以肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐、或者包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐作为有效成分的细胞毒性剂能够用作针对基于其作用机理而能够期待病况改善或症状缓解的疾病、例如癌症、自身免疫性疾病或感染症的治疗药。
“癌症”是指由进行不受控的异常增殖的细胞集团引起的疾病，可以举出例如咽癌、喉癌、舌癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、子宮癌、子宮内膜癌、卵巣癌、肝癌、胰腺癌、胆囊癌、胆管癌、肾癌、肾盂输尿道癌、膀胱癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤、甲状腺癌、神经骨肉瘤、软骨肉瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、神经胶质瘤、白血病、恶性淋巴瘤、神经母细胞瘤、骨髄瘤或脑瘤。
“自身免疫性疾病”是指因对生物体内的物质或细胞的异常免疫应答而引起的疾病，可以举出例如慢性活动性肝炎、阿狄森氏病、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、关节炎、特异性过敏、贝赫切特病、心肌病、乳糜泻、科干综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、库兴氏综合征、皮肌炎、盘状红斑狼疮、红斑、纤维肌痛症、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、移植物抗宿主疾病、格雷夫斯病、吉兰巴雷综合征、桥本病、特发性肾上腺萎缩、特发性肺纤维病、IgA肾病、炎症性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、幼年型关节炎、Lambert-Eaton肌无力综合征、扁平苔藓、狼疮样肝炎、狼疮、淋巴球减少症、美尼尔病、混合性结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力症、恶性贫血、多腺体功能障碍综合征、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病性关节炎、雷诺氏现象、赖特尔综合征、风湿性关节炎、施密特综合征、硬皮病、斯耶格伦氏综合征、僵人综合征、交感性眼炎、全身性红斑狼疮、大动脈炎、颞动脉炎、甲状腺亢进、B型胰岛素抵抗、I型糖尿病、溃疡性大肠炎、葡萄膜炎、白斑或韦格纳肉芽肿。
“感染症”是指由细菌、真菌、病原性原虫、酵母或病毒等导致的感染所引起的疾病，作为其原因，可以举出例如葡萄球菌、链球菌、肠球菌、棒状杆菌、杆菌、李斯特菌、消化球菌、消化链球菌、梭菌、真杆菌、丙酸杆菌、乳酸杆菌、奈瑟氏菌、布兰汉菌、嗜血杆菌、鲍特菌、大肠杆菌、柠檬酸杆菌、沙门氏菌、志贺菌、克雷伯氏菌、肠杆菌、沙雷菌、哈夫尼菌、变形杆菌、摩根菌、普罗维登斯菌、耶尔辛氏菌、弯曲菌、弧菌、气单胞菌、假单胞菌、黄单胞菌、不动杆菌、黄杆菌、布鲁氏菌、军团菌、韦永氏球菌、拟杆菌、梭杆菌、支原体、立克次体、衣原体、曲霉菌、隐球菌、念珠菌、毛霉、孢子丝菌、皮肤癣菌、疟原虫、痢疾阿米巴、阴道滴虫、肺炎肺囊虫、棘球绦虫、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、结核菌、破伤风菌、腺病毒、疱疹病毒、乳头瘤病毒、艾滋病毒、丝状病毒、日本脑炎病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒。
肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐、或者包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐具有细胞毒性可以使用体外试验来评价。作为体外试验，可以举出例如测定化合物处理后的死细胞数或生存细胞数的台盼蓝染色排除法、乳酸脱氢酶(LDH)活性法、[3H]胸腺嘧啶摄取法、碘化丙啶细胞核染色法、使用MTT、MTS和WST等色素的方法(CurrentProtocol in Toxicology, 2000年,2.6.1-2.6.27)或使用CellTiter-Glow(Promega公司制品)等而测定ATP量的方法等，优选为使用MTS法测定化合物处理后的活细胞数、并通过50%效应浓度(EC50)求出此时的细胞毒性的值的方法。此外，包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐的细胞毒性的评价中，优选为下述方法：用包含化合物的培养基处理细胞一定时间后，变更为不含化合物的培养基，测定进一步培养一定时间后的活细胞数的方法(Bioconjugate Chemistry. 2014年, 第25卷,第560−568页)。体外试验中，使用人卵巢癌细胞SKOV-3细胞、人肺泡基底上皮腺癌细胞A549细胞、小鼠淋巴细胞性白血球L1210细胞等。
肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐的细胞膜的透过性可以使用体外细胞膜透过性评价方法测定。作为体外细胞膜透过性评价方法，可以举出例如使用Caco-2、Madin-Darby canine kidney(MDCK)等单层细胞膜系统的方法、使用过滤器上保持有脂质等的人工脂质膜的Parallel Artificial Membrane Permeation Assay(PAMPA)(日本特开2007-118003)等。更具体而言，作为评价肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐的细胞膜的透过性的方法，可以举出例如对由Pre-coated PAMPA PlateSystem(Corning)的供给(donor)侧向接受(acceptor)侧透过的化合物量进行定量、并通过计算求出的方法。透过的化合物量可以通过例如液相色谱质谱仪(以下称为LC/MS)、吸光度或荧光标记而定量。
实施例
以下，使用实施例和参考例对本发明进行详细说明，但本发明不限定于这些。
应予说明，针对实施例化合物的合成中使用的化合物中未记载合成方法的，使用市售或者通过公知的方法或以其为标准的方法合成的化合物。NMR数据中示出的溶剂名表示测定中使用的溶剂。此外，400MHz NMR谱使用JNM-AL400型核磁共振装置(日本电子公司)或JNM-ECS400型核磁共振装置(日本电子公司)测定。化学位移以四甲基硅烷作为基准，用δ(单位：ppm)表示，信号分别用s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)、ddd(三个二重峰)、dq(双四重峰)或tt(三个三重峰)表示。质子NMR谱中，针对OH、NH质子等为宽峰且无法确认的物质，不记载数据。分子量使用Agilent Technologies 1200 Series、6130A(アジレント・テクノロジー公司制)(以下称为LC/MS-1)或Agilent Technologies 1260 Infinity II Series、6130B(アジレント・テクノロジー公司制)(以下称为LC/MS-2)通过电喷雾离子化(以下称为ESI)法测定。精密质量分析(HRMS)使用NexeraX2、LCMS-IT-TOF质谱仪(岛津制作所制)通过ESI进行。保留时间(以下称为tR)通过高效液相色谱(以下称为HPLC)测定。溶剂全部使用市售溶剂。纯化使用YFLCW-prep2XY(山善公司制)，硅胶柱色谱使用Hi Flash柱 硅胶(ハイフラッシュカラム シリカゲル，山善公司制)，胺硅胶柱色谱使用Hi Flash柱 氨基(ハイフラッシュカラム アミノ，山善公司制)，ODS柱使用Hi Flash柱 十八烷基C18标准(ハイフラッシュカラム オクタデシルＣ１８スタンダード，山善公司制)。LC/MS-1、LC/MS-2和HPLC的分析条件以及利用ODS柱的纯化条件如后文所述。下述实施例和参考例的记载中，使用下述简称。
Trt：三苯基甲基； Boc：叔丁氧基羰基； THP：四氢吡喃基。
(参考例1)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸的合成：
[化学式22]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE031
向2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸乙酯(15mg,0.017mmol)的乙醇(1.0mL)溶液中，添加1.0N氢氧化钠(19μL，0.019mmol)，在室温下进行3小时搅拌。向所得反应液中，添加1.0N盐酸(19μL)后，用水稀释，用氯仿进行3次萃取。将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩，以白色固体(14mg,收率99%)形式得到标题化合物(以下称为参考例1的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE032
(参考例2)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-(三苯甲基硫基)乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式23]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE033
向参考例1的化合物(25mg,0.030mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(以下称为DMF)溶液(0.5mL)中添加六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(以下称为HATU)(17mg,0.045mmol)、以及2-(三苯甲基硫基)乙胺(15mg,0.045mmol)的DMF溶液(0.50mL)和二异丙基乙基胺(13μL,0.075mmol)，在室温下进行1小时搅拌。向所得反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/19)纯化，以白色固体(23mg,收率88%)形式得到标题化合物(以下称为参考例2的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE034
(实施例1)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-巯基乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式24]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE035
向参考例2的化合物(25mg,0.022mmol)添加0.02M含有三乙基硅烷的三氟乙酸(以下称为TFA)/二氯甲烷(体积比1:1)溶液(4.5mL)，在室温下进行1小时搅拌。将所得反应液的溶剂在减压下蒸馏除去，添加饱和碳酸钠水溶液，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/9)纯化，以白色固体(18mg,收率92%)形式得到标题化合物(以下称为实施例1的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE036
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE037
(参考例3)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸2-(三苯甲基硫基)乙酯的合成：
[化学式25]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE038
向参考例1的化合物(39mg,0.047mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液添加4-二甲基氨基吡啶(以下称为DMAP)(1.2mg,9.4μmol)、三乙基胺(14μL,0.10mmol)、以及2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(19mg,0.056mmol)，在室温下进行10分钟搅拌后，添加2-(三苯甲基硫基)乙醇(18mg,0.056mmol)，在室温下进行20小时搅拌。向所得反应液中添加水，用氯仿进行3次萃取。将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→2/25)纯化，以白色固体(49mg,收率92%)形式得到标题化合物(以下称为参考例3的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE039
(实施例2)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸2-巯基乙酯的合成：
[化学式26]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE040
使用参考例3的化合物替代参考例2的化合物，除此之外，通过与实施例1相同的方法进行合成，以白色固体(32mg,收率83%)形式得到标题化合物(以下称为实施例2的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE041
(参考例4)甲基(2-(三苯甲基硫基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
[化学式27]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE042
将(2-(三苯甲基硫基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(550mg,1.3mmol)的DMF溶液(10ml)用冰冷却，分多次添加氢化钠(55重量%矿物油分散物)(63mg,1.4mmol)。进行15分钟搅拌后，添加碘甲烷(0.087ml,1.4mmol)，在恢复室温的同时搅拌过夜。添加过量的乙酸乙酯后，用饱和氯化铵水溶液和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将所得残渣通过硅胶柱色谱(正己烷/乙酸乙酯=1/0→4/1)纯化，以白色固体(420mg,收率96%)形式得到标题化合物(以下称为参考例4的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE043
(参考例5)N-甲基-2-(三苯甲基硫基)乙-1-胺的合成：
[化学式28]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE044
向参考例4(150mg,0.35mmol)的二氯甲烷溶液(4.0ml)中添加4N的氯化氢-二氧杂环己烷(3.0ml)，在室温下进行4小时搅拌。向反应溶液中添加过量的含5体积%甲醇的二氯甲烷，添加饱和碳酸氢钠并洗涤，用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。以油状物质(15mg,收率40%)形式得到标题化合物(以下称为参考例5的化合物)。将所得油状物质不经纯化而用于下一反应。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE045
(参考例6)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-甲基-N-(2-(三苯甲基硫基)乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式29]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE046
使用参考例5的化合物替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色无定形(45mg,收率85%)形式得到标题化合物(以下称为参考例6的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE047
(实施例3)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-巯基乙基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式30]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE048
使用参考例6的化合物替代参考例2的化合物，除此之外，通过与实施例1相同的方法进行合成，以白色无定形(27mg,收率77%)形式得到标题化合物(以下称为实施例3的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE049
(参考例7)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酯的合成：
[化学式31]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE050
在室温下向参考例1的化合物(38mg,0.046mmol)的DMF溶液(0.50mL)中添加HATU(21mg,0.055mmol)、以及(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(8.9mg,0.055mmol)的DMF溶液(0.50mL)和二异丙基乙基胺(7.5μL,0.069mmol)，在相同温度下进行26小时搅拌。向所得反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→7/93)纯化，以白色固体(14mg,收率32%)形式得到标题化合物(以下称为参考例7的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE051
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE052
(实施例4)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸 2-氨基乙酯的合成：
[化学式32]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE053
向参考例7的化合物(14mg,0.014mmol)的甲醇(1.0mL)溶液中添加4N的氯化氢-二氧杂环己烷溶液(54μL,0.22mmol)，在室温下进行24小时搅拌。将所得反应液的溶剂在减压下蒸馏除去，添加乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过胺硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/19)纯化，以白色固体(6.8mg,收率50%)形式得到标题化合物(以下称为实施例4的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE054
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE055
(参考例8)(2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
[化学式33]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE056
使用(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(33mg,收率96%)形式得到标题化合物(以下称为参考例8的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE057
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE058
(实施例5)N-(2-氨基乙基)-2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺二盐酸盐的合成：
[化学式34]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE059
向参考例8的化合物(33mg,0.033mmol)的甲醇溶液(1.0mL)中添加4N的氯化氢-二氧杂环己烷溶液(126μL,0.50mmol)，在室温下进行15小时搅拌。将所得反应液的溶剂在减压下蒸馏除去，以白色固体(29mg,收率90%)形式得到标题化合物(以下称为实施例5的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE060
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE061
(参考例9)(2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
[化学式35]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE062
使用甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色无定形(38mg,收率90%)形式得到标题化合物(以下称为参考例9的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE063
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE064
(实施例6)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺二盐酸盐的合成：
[化学式36]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE065
使用参考例9的化合物替代参考例8的化合物，除此之外，通过与实施例5相同的方法进行合成，以白色固体(34mg,收率92%)形式得到标题化合物(以下称为实施例6的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE066
(实施例7)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-羟基乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式37]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE067
使用2-氨基乙醇替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(26mg,收率,定量的)形式得到标题化合物(以下称为实施例7的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE068
(参考例10)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸 2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙酯的合成：
[化学式38]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE069
使用2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙醇替代2-(三苯甲基硫基)乙醇，除此之外，通过与参考例3相同的方法进行合成，以白色固体(36mg,收率73%)形式得到标题化合物(以下称为参考例10的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE070
(实施例8)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酸 2-羟基乙酯的合成：
[化学式39]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE071
向参考例10的化合物(36mg,0.038mmol)的乙醇溶液(1.0mL)中添加对甲苯磺酸一水合物(7.2mg)，在室温下进行18小时搅拌。将所得反应液的溶剂在减压下蒸馏除去，用二氯甲烷稀释，添加饱和碳酸钾水溶液，用氯仿进行3次萃取。将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/9)纯化，以白色固体(31mg,收率95%)形式得到标题化合物(以下称为实施例8的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE072
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE073
(实施例9)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-羟基乙基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式40]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE074
使用2-(甲基氨基)乙-1-醇替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色无定形(31mg,收率85%)形式得到标题化合物(以下称为实施例9的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE075
(实施例10)N-(4-氨基苯乙基)-2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式41]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE076
使用4-(2-氨基乙基)苯胺替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(37mg,收率74%)形式得到标题化合物(以下称为实施例10的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE077
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE078
(实施例11)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(4-羟基苯乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式42]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE079
使用4-(2-氨基乙基)苯酚替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(33mg,收率,定量的)形式得到标题化合物(以下称为实施例11的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE080
(参考例11)(2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
[化学式43]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE081
使用(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(55mg,收率98%)形式得到标题化合物(以下称为参考例11的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE082
(参考例12)N-(2-氨基乙基)-2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺二盐酸盐的合成：
[化学式44]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE083
使用参考例11的化合物替代参考例8的化合物，除此之外，通过与实施例5相同的方法进行合成，以白色固体(41mg,收率96%)形式得到标题化合物(以下称为参考例12的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE084
(参考例13)(2-(2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
[化学式45]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE085
使用(2-氨基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(32mg,收率40%)形式得到标题化合物(以下称为参考例13的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE086
(参考例14)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-(甲基氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺二盐酸盐的合成：
[化学式46]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE087
使用参考例13的化合物替代参考例8的化合物，除此之外，通过与实施例5相同的方法进行合成，以白色固体(25mg,收率88%)形式得到标题化合物(以下称为参考例14的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE088
(参考例15)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-(3-(三苯甲基硫基)丙酰胺基)乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式47]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE089
向3-(三苯甲基硫基)丙酸(12mg,0.032mmol)的DMF溶液(0.50mL)中添加HATU(12mg,0.032mmol)、参考例12的化合物(20mg,0.021mmol)的DMF溶液(0.50mL)和二异丙基乙基胺(13μL,0.074mmol)，在室温下进行1小时搅拌。向所得反应液中添加水，用乙酸乙酯萃取。将有机层用水与饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/9)纯化，以白色固体(20mg,收率77%)形式得到标题化合物(以下称为参考例15的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE090
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE091
(参考例16)2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(2-(3-巯基丙酰胺基)乙基)噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式48]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE092
使用参考例15的化合物替代参考例2的化合物，除此之外，通过与实施例1相同的方法进行合成，以白色固体(7.3mg,收率89%)形式得到标题化合物(以下称为参考例16的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE093
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE094
(参考例17)N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N5-((S)-5-(叔丁氧基)-1,5-二氧代-1-((2-(三苯甲基硫基)乙基)氨基)戊-2-基)-L-谷氨酰胺叔丁基酯的合成：
[化学式49]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE095
将(S)-4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-5-氧代-5-((2-(三苯甲基硫基)乙基)氨基)戊酸叔丁酯(1.5g,2.1mmol)溶解于20体积%二乙基胺-四氢呋喃(以下称为THF)溶液(20ml)中，在室温下搅拌过夜后，将反应混合物在减压下浓缩。向所得残渣、HATU(942mg,2.5mmol)和N-α-(9-芴基甲氧基羰基)-L-谷氨酸α-叔丁酯(878mg,2.1mmol)的DMF溶液(30ml)中，添加二异丙基乙基胺(320mg,2.5mmol)，在室温下搅拌过夜。添加过量的乙酸乙酯后，用饱和氯化铵水溶液和饱和食盐水洗涤，将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将所得残渣通过硅胶柱色谱(正己烷/乙酸乙酯=10/1→2/1)纯化，以白色无定形(1.81g,收率96%)形式得到标题化合物(以下称为参考例17的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE096
(参考例18)N5-((S)-5-(叔丁氧基)-1,5-二氧代-1-((2-(三苯甲基硫基)乙基)氨基)戊-2-基)-L-谷氨酰胺叔丁酯的合成：
[化学式50]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE097
将参考例17(480mg,0.53mmol)溶解于20体积%二乙基胺-THF溶液(5.0ml)中，在室温下搅拌过夜后，将反应溶液在减压下浓缩。将所得残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/9)纯化，以白色无定形(284mg,收率78%)形式得到标题化合物(以下称为参考例18的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE098
(参考例19)N2-(4-(N-((2-氨基-4-氧代-4,8-二氢蝶啶-6-基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)苯甲酰基)-N5-((S)-5-(叔丁氧基)-1,5-二氧代-1-((2-(三苯甲基硫基)乙基)氨基)戊-2-基)-L-谷氨酰胺叔丁酯的合成：
[化学式51]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE099
向4-(N-((2-氨基-4-氧代-4,8-二氢蝶啶-6-基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺基)苯甲酸(177mg,0.43mmol)和HATU(188mg,0.50mmol)的DMF/二甲基亚砜(以下称为DMSO)溶液(10ml/1.0ml)中，添加二异丙基乙基胺(75mg,0.58mmol)，在室温下搅拌5分钟。向所得反应溶液中，添加参考例18(285mg,0.41mmol)的DMF溶液(5.0ml)，在室温下搅拌过夜。添加过量的1体积%甲醇-氯仿后，用饱和氯化铵水溶液与饱和食盐水进行2次洗涤，将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将所得残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/5)纯化，以黄色固体(270mg,收率61%)形式得到标题化合物(以下称为参考例19的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE100
(参考例20)N2-(4-(((2-氨基-4-氧代-4,8-二氢蝶啶-6-基)甲基)氨基)苯甲酰基)-N5-((S)-4-羧基-1-((2-巯基乙基)氨基)-1-氧代丁-2-基)-L-谷氨酰胺的合成：
[化学式52]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE101
向参考例19(120mg,0.11mmol)的二氯甲烷悬浮溶液(5.0ml)中，添加7N的氨-甲醇溶液(5.0ml)，制成均匀溶液，在室温下搅拌过夜。向在减压下将溶剂蒸馏去除而得到的固体添加过量的二乙基醚并洗涤，将沉淀的固体通过过滤回收(中间体1，105mg)。向中间体1(105mg)添加TFA/三异丙基硅烷/H2O/乙二硫醇(92.5/2.5/2.5/2.5体积%)(10ml)，在室温下搅拌过夜。向在减压下将溶剂蒸馏去除而得到的残渣添加过量的二乙基醚并搅拌，将生成的沉淀通过过滤回收，将所得固体用二氯甲烷洗涤，以黄绿色固体(65mg,收率92%,纯度80%)形式得到标题化合物(以下称为参考例20的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE102
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE103
(参考例21)(2-((2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)二硫基)乙基)(甲基)氨基甲酸 4-(2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺基)乙基)苯酯的合成：
[化学式53]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE104
将三光气(17mg,0.06mmol)的二氯甲烷溶液(1.0ml)用冰冷却，添加脱水吡啶(25mg,0.31mmol)后，进行20分钟搅拌。向该溶液中缓慢滴加甲基(2-((2-(甲基氨基)乙基)二硫基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(15mg,0.05mmol)的二氯甲烷溶液(2.0ml)，恢复至室温并搅拌1小时。添加过量的二氯甲烷，用水进行3次洗涤后，将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将所得残渣(7.5mg)溶解于脱水吡啶(1.0ml)中并用冰冷却后，添加实施例11的化合物(25mg,0.03mmol)的脱水吡啶溶液(3.0ml)，在恢复至室温的同时搅拌过夜。添加过量的乙酸乙酯后，用水进行3次洗涤，用饱和氯化铵水溶液与饱和食盐水进行一次洗涤，将有机层用无水硫酸钠脱水后，在减压下浓缩。将所得残渣通过胺硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/20)纯化，以白色非晶(25mg,收率76%)形式得到标题化合物(以下称为参考例21的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE105
(参考例22)(50-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-7-甲基-8,48-二氧代-11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44-十二氧杂-3,4-二硫杂-7,47-二氮杂五十烷基)(甲基)氨基甲酸 4-(2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺基)乙基)苯酯的合成：
[化学式54]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE106
向参考例21(20mg,0.02mmol)的二氯甲烷溶液(1.0ml)中，添加4N的氯化氢-二氧杂环己烷溶液(0.5ml)，在室温下搅拌1小时。将反应溶液在减压下浓缩后，进行减压干燥。向所得残渣中添加HATU(7.3mg,0.02mmol)和DMF(0.5ml)，向该反应溶液中添加1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-氧代-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-十二氧杂-4-氮杂四十三烷-43-酸(12mg,0.02mmol)的二氯甲烷溶液(1.0ml)和二异丙基乙基胺(10μl)，在室温下搅拌过夜。将反应溶液在减压下浓缩，将所得残渣通过硅胶柱色谱(甲醇/氯仿=0/1→1/5)纯化，以油状物质(15mg,收率40%)形式得到标题化合物(以下称为参考例22的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE107
(实施例12)N2-(4-(((2-氨基-4-氧代-4,8-二氢蝶啶-6-基)甲基)氨基)苯甲酰基)-N5-((2S)-4-羧基-1-((2-((1-(1-(4-(2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-甲酰胺基)乙基)苯氧基)-2,9-二甲基-1,10,50-三氧代-13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-十二氧杂-5,6-二硫杂-2,9,49-三氮杂五十二烷-52-基)-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)硫基)乙基)氨基)-1-氧代丁-2-基)-L-谷氨酰胺的合成：
[化学式55]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE108
向参考例22(6.8mg,0.003mmol)的乙腈/甲醇溶液(1.0ml/0.5ml)中，添加参考例20(3.0mg,0.005mmol)的DMSO溶液(1.0ml)和pH7.2的磷酸缓冲液(以下称为PBS)(50mM,1.0ml)，在室温下搅拌过夜。对所得反应混合物进行利用ODS柱的反相纯化，以油状物质(6.0mg,收率67%)形式得到标题化合物(以下称为实施例12的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE109
(参考例23)(2-((2-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺基)乙基)二硫基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成：
[化学式56]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE110
使用甲基(2-((2-(甲基氨基)乙基)二硫基)乙基)氨基甲酸叔丁酯替代2-(三苯甲基硫基)乙胺，除此之外，通过与参考例2相同的方法进行合成，以白色固体(26mg,收率92%)形式得到标题化合物(以下称为参考例23的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE111
(参考例24)2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-(50-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-7-甲基-8,48-二氧代-11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44-十二氧杂-3,4-二硫杂-7,47-二氮杂五十烷基)-N-甲基噻唑-4-甲酰胺的合成：
[化学式57]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE112
使用参考例23替代参考例21，除此之外，通过与参考例22相同的方法进行合成，以油状物质(17mg,收率31%)形式得到标题化合物(以下称为参考例24的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE113
(实施例13)N2-(4-(((2-氨基-4-氧代-4,8-二氢蝶啶-6-基)甲基)氨基)苯甲酰基)-N5-((2S)-4-羧基-1-((2-((1-(1-(2-((S)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4R,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)噻唑-4-基)-2,9-二甲基-1,10,50-三氧代-13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-十二氧杂-5,6-二硫杂-2,9,49-三氮杂五十二烷-52-基)-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)硫基)乙基)氨基)-1-氧代丁-2-基)-L-谷氨酰胺的合成：
[化学式58]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE114
使用参考例24替代参考例22，除此之外，通过与实施例12相同的方法进行合成，以油状物质(8.4mg,收率71%)形式得到标题化合物(以下称为实施例13的化合物)。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE115
LC/MS-1的分析条件如下所示。
(LC/MS-1)
液相色谱系统：LC1200(アジレント・テクノロジー公司制)
质谱仪：6130A(アジレント・テクノロジー公司制)
分析条件
柱：rapid resolution HT cartridge（ラピッドレゾリューションHTカートリッジ）
流动相A：0.1体积%甲酸-蒸馏水，HPLC用
流动相B：0.1体积%甲酸-乙腈，HPLC用
梯度条件：流动相B体积%
0-1.5 min：20%-95%
1.5-3.0 min：95%
流速：0.5 mL/min
注入量：2.0μL
柱温度：40℃
LC/MS-2的分析条件如下所示。
(LC/MS-2)
液相色谱系统：LC1260 Infinity II(アジレント・テクノロジー公司制)
质谱仪：6130B(アジレント・テクノロジー公司制)
分析条件
柱：rapid resolution HT cartridge（ラピッドレゾリューションHTカートリッジ）
流动相A：0.1体积%甲酸-蒸馏水，HPLC用
流动相B：0.1体积%甲酸-乙腈，HPLC用
梯度条件：流动相B体积%
0-1.5 min：20%-95%
1.5-3.0 min：95%
流速：0.5 mL/min
注入量：2.0μL
柱温度：40℃
HRMS的分析条件如下所示。
液相色谱系统：NexeraX2(岛津制作所制)
质谱仪：LCMS-IT-TOF质谱仪(岛津制作所制)
分析条件
流动相：甲醇
流速：0.1 mL/min
注入量：2.0μL
ODS柱中的纯化条件如下所示。
ODS柱纯化条件
柱：山善Hi Flash柱 ODS尺寸M
流速：10 ml/min
柱温度：室温
检测波长：254 nm
流动相A：含0.05体积%TFA的H2O
流动相B：含0.05体积%TFA的CH3CN
梯度：流动相B体积%
0-5 min：5.0%
5-20 min：从5%上升至95%
20-25 min：95%
HPLC中的分析条件如下所示。
(HPLC)
柱：COSMOSIL 5C18-AR-IIl, 4.6mmI.D. x 150mm
流速：1.0 ml/min
柱温度：40℃
检测波长：254 nm
流动相A：含0.05体积%TFA的H2O
流动相B：含0.05体积%TFA的CH3CN
梯度：流动相B体积%
0-5min：5.0%
5-20min：从5%上升至95%
20-25min：95%。
(实施例14) 肽衍生物(I)的体外细胞毒性评价：
使用MTS法，测定实施例1~11的化合物、参考例1的化合物、参考例12的化合物、参考例14的化合物、参考例16的化合物和2-((S)-1-(((2S,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N,3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-2-苯基乙基)-N-乙基噻唑-4-甲酰胺(以下称为比较例化合物)对SKOV-3细胞、A549细胞和L1210细胞的细胞毒性。
各受试物质的细胞毒性示于表5。表5中，EC50表示50%效应浓度，表示从药物示出药理作用的最低值起显示出最大反应的50%的浓度，SKOV-3表示SKOV-3细胞，A549表示A549细胞，L1210表示L1210细胞。
[表5]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE116
由表5的结果可知，肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐对多种癌细胞具有高的细胞毒性。
(实施例15)肽衍生物(I)的人工膜透过性试验(PAMPA)：
使用Pre-coated PAMPA PlateSystem(Corning)，评价实施例1~11的化合物、参考例1的化合物、参考例12的化合物、参考例14的化合物、参考例16的化合物和比较例化合物的人工膜透过性。
受试物质以达到10mmol/L的方式溶解于DMSO中后，用包含20%甲醇的PBS稀释成200μmol/L，制成标准溶液。将冷冻保存的Pre-coated PAMPA Plate System在室温放置30分钟以上。接着，向Pre-coated PAMPA Plate System的供给侧的板添加标准溶液320μL，向接受侧的板添加包含20%甲醇的PBS200μL，安装两板，在室温静置5小时。将供给侧和接受侧的板的各孔的反应液供于LC/MS分析(以下称为LC/MS-3)，算出各孔的化合物浓度。
LC/MS-3的分析条件如下所示。
液相色谱系统：Waters Acquity UPLC(Waters公司制)
质谱仪：Waters SQD Detector(Waters公司制)
柱：Ascentis Express C18,2.7 μm,2.1 mm ID×20mm(Sigma-Aldrich公司)
流动相A：0.1体积% 甲酸水溶液
流动相B：乙腈
流速：0.6 mL/min
梯度：流动相B体积%
0.0~2.0 min：3.0→100%
2.0~2.4 min：100%
2.4~2.5 min：100→3.0%
使用所得各孔的反应液的化合物浓度，通过下式算出膜透过系数(Pe)(cm/s)。
Cequilibrium=(CD×VD-CA×VA)/(VD-VA)
Pe=[-ln(1-CA/Cequilibrium)]/S×(1/VD＋1/VA)×t
Cequilibrium：供给侧和接受侧板孔的平衡浓度
CD：供给侧板孔的5小时后的浓度(mmol/L)
VD：添加到供给侧板孔中的标准溶液的容积(0.32 mL)
CA：接受侧板孔的5小时后的浓度(mmol/L)
VA：添加到接受侧板孔中的包含20%甲醇的PBS的容积(0.2 mL)
S：膜表面积(0.3 cm2)
t：静置时间18,000 s(=5 hr)。
各受试物质的人工膜透过性示于表6。
[表6]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE117
表6中，N.D.是指因接受侧的板孔的浓度低于定量下限从而无法算出膜透过系数。
(实施例16)包含肽衍生物(I)的复合体的体外细胞毒性评价：
使用MTS法，测定实施例12的化合物和实施例13的化合物对SKOV-3细胞、A549细胞和L1210细胞的细胞毒性。
实施例12的化合物是通过以叶酸作为靶向配体而与实施例11的化合物的前药利用适当的方法复合化而得到的复合体。
实施例12的化合物的评价方法如下所述。对在不含叶酸的培养基中培养的各细胞，将实施例12的化合物进行2小时处理后，变更为不含化合物的新的培养基，直接继续培养48小时。使用MTS法测定48小时后的活细胞数。
实施例13的化合物是通过以叶酸作为靶向配体而与实施例3的化合物的前药利用适当的方法复合化而得到的复合体。
实施例13的化合物的评价方法如下所述。对在不含叶酸的培养基中培养的各细胞，将实施例13的化合物进行6小时处理后，变更为不含化合物的新的培养基，直接继续培养48小时。使用MTS法测定48小时后的活细胞数。
SKOV-3细胞和L1210细胞据报告在细胞表面叶酸受体中~高度表达。A549细胞据报告在细胞表面叶酸受体低表达或者以无法检测的程度表达(Analytical Biochemistry，2005年，第338卷，第284–293页；Molecular Cancer Therapeutics，2015年，第14卷，第1605–13页)。
各受试物质的细胞毒性示于表7。表7中，EC50表示50%效应浓度，表示从药物示出药理作用的最低值起显示出最大反应的50%的浓度，SKOV-3表示SKOV-3细胞，A549表示A549细胞，L1210表示L1210细胞。
[表7]
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE118
由表7的结果可知，包含肽衍生物(I)的复合体或其药理学上可允许的盐对叶酸受体在细胞表面表达的癌细胞选择性地具有高的细胞毒性。
示出肽衍生物(I)在C末端具有各种各样的官能团，因此通过将肽衍生物(I)或其前药与靶向配体或聚合物利用适当的方法复合化，能够转化为复合体。
此外，示出通过将肽衍生物(I)或其前药与靶向配体利用适当的方法复合化而得到的复合体由于靶向配体所产生的作用而对特定的细胞选择性地具有高的细胞毒性。
工业实用性
本发明的肽衍生物(I)或其药理学上可允许的盐由于具有高细胞毒性，因此能够用作细胞毒性剂。此外，本发明的肽衍生物(I)在C末端具有各种各样的官能团，因此能够将肽衍生物(I)或其前药、和靶向配体或聚合物复合化，该复合体或其药理学上可允许的盐能够用作细胞毒性剂。

Claims (6)

1.选自以下的化合物中的肽衍生物或其药理学上可允许的盐，
[化24]
Figure DEST_PATH_IMAGE002
[化26]
Figure DEST_PATH_IMAGE004
[化30]
Figure DEST_PATH_IMAGE006
[化32]
Figure DEST_PATH_IMAGE008
[化34]
Figure DEST_PATH_IMAGE010
[化36]
Figure DEST_PATH_IMAGE012
[化37]
Figure DEST_PATH_IMAGE014
[化39]
Figure DEST_PATH_IMAGE016
[化40]
Figure DEST_PATH_IMAGE018
[化41]
Figure DEST_PATH_IMAGE020
[化42]
Figure DEST_PATH_IMAGE022
。
2.复合体或其药理学上可允许的盐，其包含权利要求1所述的肽衍生物、和靶向配体或聚合物。
3.细胞毒性剂，其含有权利要求1所述的肽衍生物或其药理学上可允许的盐作为有效成分。
4.细胞毒性剂，其含有权利要求2所述的复合体或其药理学上可允许的盐作为有效成分。
5.权利要求1所述的肽衍生物或其药理学上可允许的盐在制备细胞毒性剂中的用途。
6.权利要求2所述的复合体或其药理学上可允许的盐在制备细胞毒性剂中的用途。
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