CN105132521A - 一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白。本发明所述的一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法，操作简单，准确性高，便于推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法。
背景技术
甘胆酸是肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、胆石症伴黄疸患者胆管、胆囊排泄功能障碍、梗阻性肝病、肠—肝循环障碍都会引起甘胆酸升高。但目前所使用的关于甘胆酸测定试剂盒其准确性低，且操作复杂，不易推广。
发明内容
本发明的目的在于提供一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。
为了达到上述目的，本发明的技术方案是：
一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=（990—1100）:（2—4）:（2—4）:（18—22）:（18—22）；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=（490—510）:（0.8—1.2）:（9—11）。
第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=1000:3:3:20:20；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=500:1:10。
一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤：首先准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，检测液15μL混合均匀并孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中甘胆酸浓度。
所述孵育时的温度均为37℃。
标准液中游离的甘胆酸与葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物竞争性结合抗甘胆酸特异性抗体位点。标准液中游离的甘胆酸越多，竞争结合的抗体位点越多，抗体释放出的酶标偶联物就越多。游离出来的甘胆酸酶标偶联物催化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD+）转化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH），标准液中甘胆酸浓度与NADH生成量成正比，通过NADH生成量从而判断甘胆酸的浓度。
本发明的有益效果是：一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。
具体实施方式
实施例1
一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=1000:3:3:20:20；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=500:1:10。
一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤：首先准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，检测液15μL混合均匀并孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中甘胆酸浓度。所述孵育时的温度均为37℃。
本实施例的一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。
实施例2
一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=990:2:2:18:18；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=490:0.8:9。
一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤：首先准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，检测液15μL混合均匀并孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中甘胆酸浓度。所述孵育时的温度均为37℃。
本实施例的一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。
实施例3
一种甘胆酸测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=1100:4:4:22:22；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=510:1.2:11。
一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤：首先准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，检测液15μL混合均匀并孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中甘胆酸浓度。所述孵育时的温度均为37℃。
本实施例的一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法，其均相酶免疫法法，操作简单，准确性高，便于推广。
Claims (4)
1.一种甘胆酸测定试剂盒，其特征在于：包括第一检测液、第二检测液，第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=（990—1100）:（2—4）:（2—4）:（18—22）:（18—22）；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=（490—510）:（0.8—1.2）:（9—11）。
2.根据权利要求1所述的一种甘胆酸测定试剂盒，其特征在于：第一检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型、兔抗人甘胆酸多克隆抗体、第一检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸:β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型:兔抗人甘胆酸多克隆抗体:第一检测液牛血清白蛋白=1000:3:3:20:20；第二检测液包括三羟甲基氨基甲烷、葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物、第二检测液牛血清白蛋白，原材料浓度比份为：三羟甲基氨基甲烷:葡萄糖六磷酸脱氢酶-甘胆酸偶联物:第二检测液牛血清白蛋白=500:1:10。
3.根据权利要求1所述的一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，其特征在于包括如下步骤：首先准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管内加入第一检测液240μL，蒸馏水15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240μL，标准液15μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240μL，检测液15μL混合均匀并孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60μL混合均匀并孵育5分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出检测液中甘胆酸浓度。
4.根据权利要求3所述的一种甘胆酸测定试剂盒的使用方法，其特征在于：所述孵育时的温度均为37℃。
Priority Applications (1)
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| CN201510578138.4A CN105132521A (zh) | 2015-09-14 | 2015-09-14 | 一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法 |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
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| CN105132521A true CN105132521A (zh) | 2015-12-09 |
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| CN201510578138.4A Pending CN105132521A (zh) | 2015-09-14 | 2015-09-14 | 一种甘胆酸测定试剂盒及其使用方法 |
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106226512A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-12-14 | 胡清 | 一种试剂盒、试剂盒的制备方法及利用该试剂盒实现的外周血甘氨胆酸的检测方法 |
| CN107247044A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-10-13 | 广东工业大学 | 一种定量测定血清中甘胆酸的检测方法 |
| CN107389637A (zh) * | 2017-07-17 | 2017-11-24 | 广东工业大学 | 一种定量测定尿液中甘胆酸的检测方法 |
| CN112114127A (zh) * | 2020-09-09 | 2020-12-22 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种甘胆酸均相酶免疫测定试剂盒及其制备方法和应用 |
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2015
- 2015-09-14 CN CN201510578138.4A patent/CN105132521A/zh active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151209 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |