CN105126158A - 多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液及其制备方法，其胶液以羧甲基纤维素钠、季鏻盐抗菌剂、氯化钠和注射用水为原料，通过将羧甲基纤维素钠按比例溶解于注射用水、与季鏻盐抗菌剂共价反应、以氯化钠调节等渗、除热原、调节pH、灌装灭菌等步骤最终制成。制得的胶液不仅能对创面进行迅速止血，对组织创面、粘膜、人体皮肤有润滑隔离的作用并促进其修复，预防人体组织、器官术后可能导致的粘连现象发生，并且具有优异的止血性能，止血速度较快，同时能够杀灭创面滋生的大多数细菌和真菌，具有广谱的抑菌、杀菌功能，具有长效抗菌作用，减少手术感染和术后并发症的产生，促进伤口愈合、改善创面组织的微循环。

Description

多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液及其制备方法

技术领域

本发明涉及外科手术中的医用敷料，特别是涉及在外科手术过程中抗菌、止血、防粘连的修复胶液及其制备方法。

背景技术

外科手术会给组织器官带来一定程度的创伤，如何有效的控制体腔内毛细血管及小静脉的渗血和组织创面的渗液、从而避免粘连现象的发生，以及如何控制创伤组织的感染，得到越来越广泛的关注。

粘连是结缔组织纤维带与相邻的组织或器官结合在一起而成的异常结构。粘连的形成具有普遍性，据报道65％-95％的腹腔和盆腔手术可导致不同程度的粘连。它增加了再次手术的困难以及进一步发生并发症的潜在性。预防粘连的目的是在保证正常伤口愈合和避免感染的前提下，消除或减少粘连的发生率和严重程度。感染是术后最常见的并发症，主要是由于组织创面暴露于非洁净环境中，细菌在组织创面及内部繁殖而引起的。目前临床常见的对抗感染的方式主要是预防性的使用抗感染药物，但是由此引起的后果是细菌对抗感染药物的耐药增加，严重情况下会引起患者治疗失败。

目前临床使用的冲洗液只能起到物理性的冲洗、清洁创面的作用而不能达到快速止血、减少粘连、辅助修复和抑菌的效果，易导致术后感染或并发症的产生，因此，临床上在提高操作技术的同时更需要一种可降解的生物止血、抑菌材料加以配合来降低手术的危险系数。

植物类提取的多糖类成份近几年被广泛应用于临床上，其止血和防粘连作用被逐步发现。如关于羧甲纤维素钠止血防粘连试验已有很多相关论文报道。羧甲基纤维素(CMC)是一种天然纤维素经化学改性得到的高分子线性多糖，具有无毒、良好的生物相容性、降解性、可再生性和吸湿性的特性，是目前最重要的水溶性纤维素衍生物之一。CMC分子在水溶液中能形成一个三维空间网状结构，在医用领域中主要作为一种新型抗粘连材料得以应用。

CMC是由纤维素葡萄糖环上羟基的氢原子被羧甲基取代后形成的，CMC的取代度(DS)是指分子中每个葡萄糖苷单元上的羟基(-OH)通过醚键被羧甲基钠(-CH2COONa)代替的平均数目。取代度是衡量CMC品质的最重要指标之一，不同取代度的CMC因具有不同的溶解性、吸附性、酸沉淀pH值、抗盐性、酶解性等而在应用方面有所差别。

通常用短棉绒(纤维素含量高达98％)或木浆为原料，通过碱化处理后再与添加醚化剂进行醚化反应而成，按反应条件的不同，可获得羧甲基团取代度很广的范围(即0.4-1.5，最高理论值为3.0)的CMC。在纤维素分子中的失水葡萄糖上，有三个羟基可以被羧甲基取代，由核磁共振法测得2位、3位、6位羟基相对的被羧甲基取代的比率为2:1:1.5。DS范围不同的CMC，其溶解特性有所不同。CMC在水中的分散度与取代度及其分子质量有关，DS值增加使得溶解速度加快。

目前市场上销售的羧甲基纤维素醚取代度都在0.6-1.2左右。随着应用领域不断扩大，各种复杂和恶化的应用环境要求在高温、低pH值、高盐含量的使用环境下，要求取代度更高、取代更均匀的羧甲基纤维素醚已成为国内外的普遍趋势。超高取代度羧甲基纤维素具有更宽的取代度和粘度范围，更高的贮存稳定性和热稳定性，更好的耐酸碱性和耐盐性，以及良好的流变性和更小的触变性等，可以更好地应用在医药、石油开采、日用化工等许多领域。

病原微生物广泛存在于人类的生活环境中，如医疗器械、保健产品、水净化系统、食品包装与储存、家庭卫生用具等领域的微生物污染问题日益严重，已成为公众关注的焦点。使用含有抗菌剂的抗菌材料是应对这一问题简单有效的方法。

季铵盐作为抗菌基团的抗菌剂研究较多，但其存在抗菌持续时间较短，药用剂量大，长期使用易于使细菌对其产生抗药性等缺点。季鏻盐类抗菌剂相较季铵盐的优越性在于：季鏻盐更容易吸附细菌细胞；较季铵盐更稳定，与一般的氧化还原剂及酸、碱等都不发生反应；季鏻盐抗菌剂使用范围广，配合、pH＝2～12均可发挥较好的抗菌效力，而季铵盐抗菌剂只有在pH≥9时才表现出较高的抗菌活性。

季鏻盐的抗菌性已经得到广泛的认可，主要应用于塑料、纤维、橡胶、涂料、水净化等制品。但是季鏻盐与皮肤接触时有一定的刺激性，从而限制了其在医疗用品的应用。迄今为止，关于将季鏻盐抗菌材料应用于皮肤、粘膜等损伤表面的研究，还未见相关报道。

发明内容

发明目的：本发明的第一目的是提供一种具备快速止血、减少粘连、辅助修复和抑菌作用的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液；

本发明的第二目的是提供该修复胶液的制备方法。

技术方案：本发明所述的修复胶液，是以羧甲基纤维素钠和季鏻盐抗菌剂为主要原料，以注射用水为载体，经氯化钠调节渗透压后制成的等渗灭菌的高分子生物胶液，其中各组分的重量百分数如下：

羧甲基纤维素钠：0.3％-1.0％；

季鏻盐抗菌剂：0.8％-1.5％；

氯化钠：0.8％-1.0％；

注射用水：余量。

在上述多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液中，羧甲基纤维素钠的重量百分数优选为0.5％-0.8％，季鏻盐抗菌剂的重量百分数优选为1.0％-1.5％；氯化钠的重量百分数优选为0.85％-0.95％。

更优选的，羧甲基纤维素钠的重量百分数为0.5％，季鏻盐抗菌剂的重量百分数为1.2％；氯化钠的重量百分数为0.9％。

所述季鏻盐抗菌剂的通式为PR₃YX，通式中P为磷原子，R为苯基，Y为C1、C2、C6、C10、C12、C14的直链烷基中任意一种，X为溴原子；如季鏻盐抗菌剂可为甲基三苯基溴化鏻、乙基三苯基溴化鏻、己基三苯基溴化鏻、十二烷基三苯基溴化鏻等。

优选的，所述羧甲基纤维素钠为高取代度的羧甲基纤维素钠。

高取代度羧甲基纤维素钠的制备方法如下：

在室温条件下，以质量浓度为70-80％的异丙醇/乙醇(80/20)(“80/20”代表重量百分数为80％的异丙醇和重量百分数为20％的乙醇的混合溶液)溶液为溶剂，加入一定量的纤维素，待其溶解后，加入质量浓度为40-50％的NaOH水溶液，逐渐升温至40-50℃，搅拌碱化40～60min，其中，异丙醇/乙醇(80/20)溶液、纤维素及NaOH水溶液的百分比为8～10:1:1.5～3；

在上述反应所得溶液中缓缓加入质量浓度为70-80％的氯乙酸/乙醇溶液(60/40)(“60/40”代表重量百分数为60％的氯乙酸和重量百分数为40％的乙醇的混合溶液)，氯乙酸/乙醇溶液与纤维素的百分比为4～5:1，搅拌混合20-30min，将混合溶液升温至60～70℃进行醚化反应，反应时间2～2.5h；

再加入质量浓度为40-50％的NaOH水溶液，升温至75～80℃进行二次醚化，保持温度反应1.5～2h，前后两次加入的NaOH水溶液的摩尔比为1:1.5～2；

将所得产物用醋酸中和至pH＝7～8，用质量浓度为70-80％的乙醇水溶液分三次洗涤除去反应副产物，再在真空干燥箱中80～100℃下干燥4-5h，即得高取代度的羧甲基纤维素钠；此方法制得的羧甲基纤维素钠的取代度不低于1.3。

本发明所述多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液的制备方法，是将羧甲基纤维素钠、季鏻盐抗菌剂和氯化钠溶解于注射用水中制成等渗灭菌的液体。具体制备步骤如下：

A.称取重量百分数为0.3-1.0％的羧甲基纤维素钠溶于注射用水中，搅拌静置，使其溶解，称取重量百分数为0.8-1.5％季鏻盐抗菌剂加入到上述溶液中，控制温度为60-80℃，恒温反应2-3h后加入重量百分数为0.8-1.0％的氯化钠调节至等渗溶液；

B.在步骤A形成的等渗溶液中加入活性炭，控制温度为70-80℃，循环搅拌使活性炭吸附热原，20-30min后，脱碳，脱碳20-30min后结束；

C.调节步骤B所得溶液的pH值至5.0-7.0；

D.灌装密封，灭菌。

所得多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液的理化指标符合《中华人民共和国药典》对冲洗液的要求。

本产品理化性能测试结果如下：

1、外观为微黄色透明液体；

2、pH值5.0-7.0；

3、细菌内毒素(每ml)≦0.5EU；

4、渗透压为290-310mOsmol/kg；

5、粘度(25℃)≦1000cp；

6、密度为0.9-1.2g/ml。

本产品的如下生物性能指标符合产品标准：

1、细胞毒性：细胞毒性反应不大于1级；

2、皮肤致敏：无皮肤致敏反应；

3、皮内刺激：无皮内刺激反应；

4、无菌：经高温湿热灭菌后无菌。

本发明的作用机理如下：

羧甲基纤维素钠具有良好的成膜性、有一定粘度、具有良好组织相容性和生物可降解性，理化特性稳定，无毒副作用，对皮肤、粘膜无刺激性，在体内不产生免疫抗原反应，不溶血，在组织创伤愈合过程中，能促进吻合口的愈合；其作用机理如下：(1)在自身遇到血液或渗出液时，其亲水基团吸收水分后变成凝胶状附着在血管创面，膨胀后形成凝胶层，借助物理压力止血；(2)CMC分子在水溶液中能形成一个三维空间网状结构，致密的三维网状支架使大量的血小板和凝血因子聚集，局部形成血凝块，从而达到止血目的；(3)打破电离平衡，激活凝血因子。

羧甲基纤维素钠是由纤维素葡萄糖环上羟基被羧甲基取代后形成的阴离子型纤维素醚，在纤维素的葡萄糖环上，有三个位置的羟基可以被羧甲基取代，分别是2位、3位、6位羟基，反应时优先取代C₆位的羟基。当C₆位的羟基完全被氧化取代成羧基纤维素时，CMC分子在水溶液能够游离出阴离子羧基，与血液中的阳离子中和，从而引起凝血；取代度越高，CMC分子溶于水后能够游离出的阴离子量越多，与血液中阳离子中和的阴离子量越多，凝血速度越快，凝血性能越强，因此，以高取代度的羧甲基纤维素钠为原料制备多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液不仅保持了羧甲基纤维素钠本体的优异特性，而且能获得优异的止血性能、更快的止血速度以及更好的防粘连特性。

本发明制得胶液的抗菌性能主要利用了季鏻盐抗菌剂的抗菌机理及季鏻盐抗菌剂与羧甲基纤维素分子链上的羟基发生亲核反应的机理。季磷盐在水中电离后带正电荷，能吸附在带负电荷的微生物表面并渗透到微生物内部，改变原生膜的性质，使细菌不能正常活动，静电力相互作用使得细菌体表面的脂肪壁溶解，从而引起细菌死亡。通过与羧甲基纤维素上的羟基共价反应，在羧甲基纤维素分子链上引入季鏻盐基团，使得键接后的羧甲基纤维素分子获得了抗菌性能，而且，键接了大分子羧甲基纤维素的季鏻盐稳定性较好，能够保持持久的抗菌性，同时，由于羧甲基纤维素分子的柔顺性好，能够有效强化抗菌功能；此外，键接了羧甲基纤维素的季鏻盐获得了羧甲基纤维素的良好的组织相容性，极大地降低或消除了对皮肤或粘膜表面的刺激性，增强了亲肤性，提高对损伤表面的附着能力，加快止血和持久抗菌。

有益效果：与现有技术相比，本发明制得的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液不仅可促进组织创面、粘膜、人体皮肤的修复，预防人体组织、器官术后可能导致的粘连现象发生，而且能够有效止血，促进凝血，同时具有促进伤口愈合、改善创面组织的微循环的作用，有效激活并促进组织细胞的生产，加速伤口愈合，减少疤痕生产；另外，制得的胶液能够杀灭创面滋生的大多数细菌和真菌，具有广谱的抑菌、杀菌功能，具有长效抗菌作用，减少手术感染和术后并发症的产生。

具体实施方式

为进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例一：

各组分含量如下：

羧甲基纤维素钠：3g；

甲基三苯基溴化鏻：8g

氯化钠：8g；

注射用水：1000ml。

制备方法：

A.称取3g羧甲基纤维素钠缓慢溶于1000ml的注射用水中，搅拌一段时间后静置，使其充分浸泡溶胀，直至完全溶解，将8g甲基三苯基溴化鏻加入到上述溶液中，开启升温程序缓慢升温至60℃，恒温反应2.5h，过程中不断进行搅拌，反应完成后加入8g氯化钠调节至等渗溶液，将溶液温度降至室温静置；

B.步骤A形成的等渗溶液中加入活性炭，开启升温程序使温度升至70℃，开启循环搅拌程序使活性炭吸附热原，25min后，开启脱碳程序，脱碳20min后结束；

C.在步骤B形成的溶液中加入盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至5.0-7.0；

D灌装密封，放入高压蒸汽灭菌柜中，调节温度121℃，灭菌30min后即得多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液。

实施例二：

各组分含量如下：

羧甲基纤维素钠：5g；

乙基三苯基溴化鏻：12g；

氯化钠：9g；

注射用水：1000ml。

A.称取5g羧甲基纤维素钠缓慢溶于1000ml的注射用水中，搅拌一段时间后静置，使其充分浸泡溶胀，直至完全溶解，将12g乙基三苯基溴化鏻加入到上述溶液中，开启升温程序缓慢升温至65℃，恒温反应3h，过程中不断进行搅拌，反应完成后加入9g氯化钠调节至等渗溶液，将溶液温度降至室温静置；

B.步骤A形成的等渗溶液中加入活性炭，开启升温程序使温度升至75℃，开启循环搅拌程序使活性炭吸附热原，20min后，开启脱碳程序，脱碳25min后结束；

C.在步骤B形成的溶液中加入盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至5.0-7.0；

D灌装密封，放入高压蒸汽灭菌柜中，调节温度121℃，灭菌30min后即得多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液。

实施例三：

各组分含量如下：

羧甲基纤维素钠：9g；

十二烷基三苯基溴化鏻：15g；

氯化钠：10g；

注射用水：1000ml。

A.称取9g羧甲基纤维素钠缓慢溶于1000ml的注射用水中，搅拌一段时间后静置，使其充分浸泡溶胀，直至完全溶解，将15g十二烷基三苯基溴化鏻加入到上述溶液中，开启升温程序缓慢升温至70℃，恒温反应2h，过程中不断进行搅拌，反应完成后加入10g氯化钠调节至等渗溶液，将溶液温度降至室温静置；

B.步骤A形成的等渗溶液中加入活性炭，开启升温程序使温度升至80℃，开启循环搅拌程序使活性炭吸附热原，30min后，开启脱碳程序，脱碳30min后结束；

C.在步骤B形成的溶液中加入盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至5.0-7.0；

D.灌装密封，放入高压蒸汽灭菌柜中，调节温度121℃，灭菌30min后即得多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液。

实施例四：以高取代度的羧甲基纤维素钠为原料制备多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液

各组分含量如下：

高取代度的羧甲基纤维素钠：3g；

甲基三苯基溴化鏻：8g

氯化钠：8g；

注射用水：1000ml。

首先制备高取代度的羧甲基纤维素钠，然后参照实施例一的制备方法制备多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，不同之处在于将步骤A中的羧甲基纤维素钠改为高取代度的羧甲基纤维素钠。

制备高取代度的羧甲基纤维素钠：

在室温条件下，以质量浓度为75％的异丙醇/乙醇(80/20)溶液为溶剂，加入一定量的纤维素，待其溶解后，加入质量浓度为45％的NaOH水溶液，逐渐升温至40℃，搅拌碱化45min，其中，异丙醇/乙醇(80/20)溶液、纤维素及NaOH水溶液的百分比为8.6:1:2；

在上述反应所得溶液中缓缓加入质量浓度为75％的氯乙酸/乙醇溶液(60/40)，氯乙酸/乙醇溶液与纤维素的百分比为4.2:1，搅拌混合30min，将混合溶液升温至65℃进行醚化反应，反应时间2h；

再加入质量浓度为45％的NaOH水溶液，升温至75℃进行二次醚化，保持温度反应100min，前后两次加入的NaOH水溶液的摩尔比为1:1.6；

将所得产物用醋酸中和至pH＝7～8，用70％的乙醇水溶液分三次洗涤除去反应副产物，再在真空干燥箱中80℃下干燥4h即得。

参照GB1904-2005《食品添加剂羧甲基纤维素钠》-5.5：取代度的测定中描述的实验方法，称取本实验制备的高取代度的羧甲基纤维素钠，进行两组(组1和组2)平行试验，记录实验过程中的相关数据，根据公式和所得数据计算两组试验中CMC的取代度，取两组平行测定结果的算术平均值为测定结果，最终确定根据高取代度的羧甲基纤维素钠的制备方法所得CMC的取代度。

测定结果：所得CMC的取代度测定值如表1。

表1：CMC取代度的测定值

从表1中两组平行测定结果可以看出，实施例四中制备的CMC的取代度为1.33，即通过本方法能够得到较高取代度的CMC。

实施例五：创面止血效果评价

目的：通过动物实验，考察多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液的止血效果，并与生理盐水进行比较。

实验组：实施例一、二、三制备的0.3％、0.5％、0.9％的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液以及实施例四制备的含0.3％高取代度的羧甲基纤维素钠的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，实验组组别分别为组1、组2、组3和组4；

对照组：生理盐水组，对照组组别为组5。

实验材料：

实验方法：

(1)取实验用健康成年小鼠共40只，体重20±2g，雌雄各半随机分成5组，每组8只小鼠，使用3.5％水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，麻醉3-5min后，将其置于固定器中进行剪尾实验。

(2)对比各组小鼠的止血时间，剪尾长度约为1cm，每组使用各自成分溶液的医用纱布缠绕，轻度压迫并记录出血起始和终止时刻(终止时刻为伤口停止出血时刻)，整个实验过程中，每隔10秒擦拭小鼠尾部渗出血液，至伤口无血液流出。

实验结果：止血性能比较结果如表2。

表2：实验组与对照组溶液的止血时间

实验结果表明，与生理盐水组比，0.3％、0.5％、0.9％的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液组及含0.3％高取代度的羧甲基纤维素钠的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液组的止血时间均有显著差别，表明含有羧甲基纤维素钠的溶液均有良好的止血效果；且与以羧甲基纤维素钠为原料制得的0.3％、0.5％、0.9％的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液组相比，含0.3％高取代度的羧甲基纤维素钠的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液的止血时间有较显著的差异，表明以高取代度的羧甲基纤维素钠为原料制备的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液有更好的止血效果；此外，实施例一、二、三制备的各浓度(0.3％、0.5％及0.9％)的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液中，0.5％的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液较0.3％及0.9％的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液止血时间略短，但无显著性差异。

实施例六：术后预防肠粘连效果评价

目的：通过动物实验，考察多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液术后预防肠粘连的效果，并与生理盐水进行比较。

实验组：实施例一、二、三、四制备的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，实验组别分别为组1、组2、组3和组4；

对照组：生理盐水组，对照组组别为组5。

实验材料：

实验材料：

实验方法:

(1)取实验用健康大鼠50只，体重180±20g，雌雄不限，随机分成5组，每组10只，使用3.5％水合氯醛溶液对实验大鼠进行腹腔内注射麻醉，麻醉成功后进行各项实验操作；

(2)将麻醉后的动物仰卧固定，腹部剪毛，用1.0％碘伏溶液消毒，在无菌条件下于下腹正中剪2-3cm切口，打开大鼠腹腔找出回盲部，距回盲部3～4cm处环形剥离回肠浆膜，形成5cm左右的环状渗血创面；向每组动物腹腔内分别注入5ml的各自成分溶液，将其放回腹腔，缝合关腹；

(3)术后禁食12h，分笼标准喂养；至术后第14天，处理动物，开腹取材检验，按粘连分级标准判断粘连等级。

注：粘连等级分类，0级为腹腔无粘连；Ⅰ级为肠管创面与大网膜、腹膜、肠系膜疏松粘连，易分离无渗血；Ⅱ级为肠管创面与大网膜、腹膜、肠系膜粘连较Ⅰ级致密，分离较Ⅰ级困难，创面渗血；Ⅲ级为粘连广泛致密，尚可分离，近段肠管轻度扩张，无肠梗阻；Ⅳ级为粘连广泛，致密，呈团块状，不易分离，近段肠管全程扩张，引起不全或完全肠梗阻。

实验结果：肠粘连比较结果如表3。

实验结果表明，根据本发明方法制得的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液能够达到较好的防粘连效果，而且，以高取代度的羧甲基纤维素钠为原料制备的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液的防粘连效果明显优于以普通的羧甲基纤维素钠为原料制备的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，肠粘连发生率仅为20％；当原料相同的情况下，根据原料组分含量的改变可不同程度低降低肠粘连情况，其中组2(高取代度的羧甲基纤维素钠重量百分数0.5％，氯化钠重量百分数0.9％)疗效最好，肠粘连发生率为30％；生理盐水几乎不能达到防粘连的效果，且有30％的重度粘连发生率。

表3：实验组与对照组术后预防肠粘连比较

实施例七：本发明抑菌性能试验

目的：通过抑菌实验，考察多本发明产品对细菌和真菌的抑制效果，并以0.5％的羧甲基纤维素钠为对照进行比较。

实验样液：0.5％多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液；

对照样液：0.5％羧甲基纤维素钠溶液。

1、本发明产品对细菌的抑菌效果

试验菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌

试验方法：

(1)取培养24h的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物，用5mL0.03mol/L磷酸盐缓冲液(以下简称PBS)洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用上述PBS稀释成菌悬液。

(2)取样液(5mL)和对照样液(5mL)各4管，取上述菌悬液，分别在每个样液和对照样液管内滴加0.1mL，均匀混合；开始计时，作用2、5、10、20min，用无菌镊分别将样液(0.5mL)投人含5mLPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取0.5mL，置于两个平皿，用凉至40～45℃的营养琼脂培养基15mL作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃士2℃培养48h，作活菌菌落计数，算出抑菌率。

试验重复3次，计算抑菌率:X＝(A-B)/A*100。

注：X为抑菌率，A为对照样品平均菌落数，B为被试样品平均菌落数；抑菌率≥50％-90％，产品有抑菌作用，抑菌率≥90％，产品有较强抑菌作用。

实验结果如下表4。从表4可以看出，本发明产品对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌三种细菌的生长均有比较强的抑制作用，且对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑制效果更明显。

表4：本发明产品对细菌的抑制效果

菌种	A	B	X
				金黄色葡萄球菌	93	7	92.4％
大肠杆菌	98	4	95.9％
				枯草芽孢杆菌	105	5	95.2％

2、本发明产品对真菌的抑菌效果

试验菌种：白色念球菌、黑曲霉菌、啤酒酵母菌

试验方法：

(1)取培养24h的白色念球菌、黑曲霉菌、啤酒酵母菌的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物，用5mL0.03mol/L磷酸盐缓冲液(以下简称PBS)洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用上述PBS稀释成菌悬液。

(2)取样液(5mL)和对照样液(5mL)各4管，取上述菌悬液，分别在每个样液和对照样液管内滴加0.1mL，均匀混合；开始计时，作用2、5、10、20min，用无菌镊分别将样液(0.5mL)投人含5mLPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取0.5mL，置于两个平皿，用凉至40～45℃的沙氏琼脂培养基15mL作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃士2℃培养72h，作活菌菌落计数，算出抑菌率。

试验重复3次，计算抑菌率:X＝(A-B)/A*100。

实验结果如下表5。从表5可以看出，本发明产品对白色念球菌、黑曲霉菌、啤酒酵母菌三种真菌的生长均有微弱的抑制作用。

表5：本发明产品对真菌的抑制效果

菌种	A	B	X
				白色念球菌	78	26	66.7％
黑曲霉菌	81	31	61.7％
				啤酒酵母菌	82	35	57.3％

由此可见，本发明制得的产品对细菌和真菌的生长度具有抑制作用，并且能够抑制多种菌种的生长，具有广谱的抑菌性。

Claims (8)

1.一种多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，按重量百分比包括：

2.根据权利要求1所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，所述羧甲基纤维素钠的重量百分数为0.5-0.8％，季鏻盐抗菌剂的重量百分数为1.0-1.5％，氯化钠的重量百分数为0.85-0.95％。

3.根据权利要求2所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，所述羧甲基纤维素钠的重量百分数为0.5％，季鏻盐抗菌剂的重量百分数为1.2％，氯化钠的重量百分数为0.9％。

4.根据权利要求1-3任一所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，所述季鏻盐抗菌剂的通式为PR₃YX，通式中P为磷原子，R为苯基，Y为C1、C2、C6、C10、C12、C14的直链烷基中的任意一种，X为溴原子。

5.根据权利要求4所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，所述季鏻盐抗菌剂为甲基三苯基溴化鏻、乙基三苯基溴化鏻、己基三苯基溴化鏻或十二烷基三苯基溴化鏻。

6.根据权利要求1所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，所述羧甲基纤维素钠为高取代度的羧甲基纤维素钠。

7.根据权利要求6所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液，其特征在于，所述高取代度的羧甲基纤维素钠由以下方法制备而得：

在室温条件下，以质量浓度为70-80％的异丙醇/乙醇(80/20)溶液为溶剂，加入纤维素，待其溶解后，加入质量浓度为40-50％的NaOH水溶液，温度控制在40-50℃，搅拌碱化40-60min，其中，异丙醇/乙醇(80/20)溶液、纤维素及NaOH水溶液的重量百分比为8～10:1:1.5～3；

在上述反应所得溶液中缓缓加入质量浓度为70％-80％的氯乙酸/乙醇溶液(60/40)，其中，氯乙酸/乙醇溶液(60/40)与纤维素的重量百分比为4～5:1，搅拌混合20-30min，将混合溶液升温至60～70℃进行醚化反应，反应时间2～2.5h；

再加入质量浓度为40-50％的NaOH水溶液，升温至75～80℃进行二次醚化反应，保持温度反应1.5～2h，前后两次加入的NaOH水溶液的摩尔比为1:1.5～2；

将所得产物用醋酸中和至pH＝7～8，用质量浓度为70-80％的乙醇水溶液分三次洗涤除去反应副产物，再在真空干燥箱中80～100℃下干燥4-5h，即得高取代度的羧甲基纤维素钠。

8.制备权利要求1所述的多糖纤维素止血隔离抗菌修复胶液的方法，其特征在于包括以下步骤：

A.称取重量百分数为0.3-1.0％的羧甲基纤维素钠溶于注射用水中，搅拌静置，使其溶解，称取重量百分数为0.8-1.5％季鏻盐抗菌剂加入到上述溶液中，控制温度为60-80℃，恒温反应2-3h后加入重量百分数为0.8-1.0％的氯化钠调节至等渗溶液；

B.在步骤A形成的等渗溶液中加入活性炭，控制温度为70-80℃，循环搅拌使活性炭吸附热原，20-30min后，脱碳，20-30min后结束；

C.调节步骤B得到溶液的pH值至5.0-7.0；

D.灌装密封、灭菌。