CN105116065B - 快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，包括以下步骤：取事先已确定是干茧缫制生丝作为标准品，取待测的缫制生丝作为待测样品，将标准品和待测样品在相同的分析条件下分别进行如下步骤：将样品剪碎或粉碎后加入溶剂进行提取，将提取液浓缩至干，将所得的提取物用溶剂进行溶解后，过滤，所得的滤液进行高效液相色谱分析；从而分别获得标准品的高效液相色谱分析结果、待测样品的高效液相色谱分析结果；当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，多出现至少一个特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝；反之，则判定待测样品为干茧缫制生丝。

Description

快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法

技术领域

本发明涉及丝绸生产和生丝商品流通领域中桑蚕鲜茧缫制生丝(鲜茧丝)和干茧缫制生丝(干茧丝)的鉴别方法。具体地，涉及利用生丝类产品中微量组分的高效提取、浓缩和高效液相色谱法快速鉴别鲜茧丝和干茧丝中微量组分的方法。

背景技术

干茧丝是指通过常规的制丝生产工序包括鲜茧—烘茧—储存—选茧—煮茧—缫丝—复摇—整理工序所缫制成的生丝产品。干茧丝生产流程长，能耗高。在缫丝成本日益高涨，及冷冻技术不断发展和冷库储存成本降低的背景下，越来越多的制丝企业选择鲜茧缫丝。鲜茧缫丝是指先将从蚕农手上收购的蚕茧送入冷库储藏，缫丝时将蚕茧运出直接通过一定温度的水真空渗透后缫丝(少部分为收购上来后直接运往工厂缫丝)，不再经过高温烘茧杀蛹和煮茧过程。这种缫丝方法得到的生丝即为鲜茧丝。由于鲜茧缫丝工序较少，节省能耗且可以充分利用制丝副产品—蚕蛹，具有一定的经济优势，因而鲜茧缫丝日益普遍。

但是，越来越多的丝绸企业使用鲜茧丝后反映：鲜茧丝在络丝、并丝、捻丝等工序的断头率、倒筒过程中的清糙次数及生丝表面的疵点明显高于干茧丝。鲜茧丝在织造过程中断头，绸面起毛，丝条纰裂，面料染色出现色花的概率高于干茧丝。鲜茧丝制织的面料外观质量也不如干茧丝制织的面料。相关研究也指出鲜茧丝的洁净性和抱合指标比干茧丝差，这是导致上述问题出现的主要原因。

鲜茧丝和干茧丝的准确鉴别关系到缫丝企业和丝绸生产企业的利益及二者之间的商业纠纷。开发两者的鉴别方法可为生丝的商检、生丝质量指标的完善以及丝绸产品的质量保证提供方法依据。但是，目前业界并没有提出方便且行之有效的方法。依靠测试生丝的洁净性和抱合力来区分鲜茧丝和干茧丝是不可行的，因为两者属于统计学指标，需要大量的测试数据，而且没有可以参考的标准值。各产地的蚕茧及不同缫丝企业生产的生丝质量差异较大，生丝洁净性和抱合力都有差别，不同庄口生丝差异大，该方法的误检率高，且操作繁杂，耗时较长，费用较高，不便于推广应用。鉴于鲜茧缫丝法的快速发展和商业纠纷日益增多，建立一种能快速识别和能鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法迫在眉睫。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用高效液相法对鲜茧丝和干茧丝进行快速鉴别的方法，从而实现能快速识别和能鉴别鲜茧丝和干茧丝。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，包括以下步骤：

取事先已确定是干茧缫制生丝(干茧丝)作为标准品，取待测的缫制生丝作为待测样品，将标准品和待测样品在相同的分析条件下分别进行如下步骤1)～步骤3)：

1)、将样品剪碎或粉碎后加入溶剂进行提取，所述样品为标准品、待测样品；

2)、步骤1)得到的提取液浓缩至干，得提取物；

3)、将步骤2)所得的提取物用溶剂进行溶解后，过滤，所得的滤液进行高效液相色谱分析；

从而分别获得标准品的高效液相色谱分析结果、待测样品的高效液相色谱分析结果；

4)、根据高效液相色谱分析结果，判断待测样品为鲜茧丝还是为干茧丝：

当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，多出现至少一个特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝；

反之，则判定待测样品为干茧缫制生丝。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的改进：

所述溶剂为水(去离子水)、甲醇、乙醇、已腈中的至少一种(即，为任意一种，或为两种或两种以上的混合液)。

备注说明：步骤1)和步骤3)中的溶剂可用同一物，也可不为同一物。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的进一步改进：

所述步骤3)的高效液相色谱分析：色谱柱为反相色谱柱，可以为含有C4、C8、C18及苯基等填料的色谱柱；使用的流动相的有机相为甲醇或已腈，水相为纯水或有机酸水溶液，所述有机酸水溶液中，有机酸的体积浓度为≤1％；检测波长为220-320nm(最优为280nm)；

所述有机酸为甲酸或乙酸。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的进一步改进：

所述步骤3)中高效液相色谱分析的检测波长及色谱条件为：

流动相：甲醇-水溶液为流动相；洗脱梯度为：0min:6％甲醇，94％水；17min:100％甲醇，0％水；20min:100％甲醇，0％水。流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；柱温：30℃，进样量20μL。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的进一步改进：

所述步骤1)提取所用溶剂为去离子水；

所述步骤4)为：当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，于12-15min出现特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的进一步改进：

所述步骤1)提取所用溶剂为甲醇；

所述步骤4)为：当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，于6-10min出现特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的进一步改进：

所述步骤3)中，每4～6g(较佳为5g)的样品制备而得的提取物用1ml溶剂溶解；用0.45μm滤膜过滤。

作为本发明的快速鉴别鲜茧丝和干茧丝的方法的进一步改进：

所述步骤1)中：

样品与溶剂的重量/体积比为：1g/10～100ml；

所述提取为于超声波频率为28-100kHz，功率为50-400W的超声波辅助提取1h。

备注说明：所述步骤1)中，一般利用剪刀剪碎或者粉碎机粉碎茧丝至1cm以下；

本发明的步骤1)～步骤3)较佳为：称取样品5g至于100ml烧杯中，加入50ml去离子水，超声提取1h，抽滤后将滤液浓缩至干，再加入1ml去离子水溶解提取物，将提取液用0.45μm滤膜过滤，备用。

在本发明图谱分析中：根据高效液相色谱图中色谱峰的保留时间和峰型定性，图谱中含有鲜茧丝特征组分的色谱峰的样品，即为鲜茧丝，否则为干茧丝。

本发明的高效液相色谱分析的仪器为：

安捷伦1260Infinity system高效液相色谱仪(1260四元梯度泵，1260ALS自动进样器，1260变波长二极管阵列检测器，安捷伦Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(150×4.6mm,3.5μm)，安捷伦ChemStation色谱工作站软件)；JK-2200DB超声波清洗器(合肥金尼克超声仪器有限公司)。

本发明的关键点在于：利用真正的鲜茧丝或干茧丝作为标准来区分待检茧丝样品是否为鲜茧丝。基于鲜茧丝含有某些特征成分，这些特征组分在特定的色谱条件下可以被检测到。不同庄口(蚕茧的产区)的鲜茧丝中的特征组分大致相同，在相同的检测条件下，其在色谱图中的保留时间大致一致。因此本发明可检测来自不同庄口的茧丝样品，具有较广的适用性。

本发明对收集自全国各地的3批共14个茧丝样品(包括了当年产、存储多年的鲜茧丝和干茧丝)进行了分析，各地当年产的鲜茧丝和干茧丝样品的色谱图大致相同。存储多年后的鲜茧丝与当年产的鲜茧丝特征成分峰有一定的差异(差异主要体现在特征组分峰变少，某些峰强度减弱)，但依然能十分容易地区分于干茧丝。这些特征组分的差异或可以用于区分当年产和存储多年的鲜茧丝。

本发明通过对生丝微量组分的高效提取及浓缩，利用高效液相色谱法对鲜茧丝和干茧丝进行快速鉴别。本发明操作简便，鉴别快速准确，可应用到鉴别鲜茧丝和干茧丝的实际应用中。当待测样品的色谱图中含有鲜茧丝的特征峰时，待测样品为鲜茧丝，否则为干茧丝。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1为原产于浙江湖州地区的鲜茧丝(当年产)的高效液相色谱图；

图2为原产于浙江湖州地区的干茧丝(当年产)的高效液相色谱图；

图3为原产于广西地区的鲜茧丝(当年产)的高效液相色谱图；

图4为原产于广西地区的干茧丝(当年产)的高效液相色谱图；

图5为原产于浙江湖州地区的鲜茧丝(自然条件下存储2-3年)的高效液相色谱图；

图6为原产于浙江湖州地区的干茧丝(自然条件下存储2-3年)的高效液相色谱图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。

实施例1、浙江湖州地区当年产的鲜茧丝和干茧丝的区分：

1)、茧丝样品的准备

茧丝样品为当年产，由浙江省检验检疫局丝类检测中心提供。用剪刀将样品剪碎至1cm以下，备用。

取事先已确定是干茧缫制生丝(干茧丝)作为标准品，取事先已确定是鲜茧缫制生丝(鲜茧丝)作为待测样品，将标准品和待测样品在相同的分析条件下分别进行如下步骤2)～步骤3)：

2)、样品供试溶液的制备

称取样品5g至于100ml烧杯中，加入50ml去离子水，超声(超声波频率为28-100kHz，功率为50-400W)提取1h，抽滤后将滤液(即，提取液)浓缩至干，得提取物。在上述提取物中加入1ml去离子水溶解提取物，然后用0.45μm滤膜过滤，所得的滤液备用(用于进行下述的高效液相色谱分析)；

从而分别得标准品滤液(即标准品供试液)、待测样品滤液(即，待测样品供试液)；

3)、进样样品分析：取0.7ml待测样品供试液于1号进样瓶中；取0.7ml标准品供试液于2号进样瓶中。

按以下条件进行分析：色谱柱为安捷伦Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(150×4.6mm,3.5μm)；流动相为甲醇-水溶液；洗脱梯度为：0min:6％甲醇，94％水；17min:100％甲醇，0％水；20min:100％甲醇，0％水。流速1.0mL/min；检测波长280nm；柱温30℃，进样量20μL。

4)、分析结果

图1为浙江湖州地区当年产的鲜茧丝样品(待测样品)的液相色谱图，其中保留时间为12-15min的组分为鲜茧丝的特征组分，而干茧丝样品(标准品)的液相色谱图(图2)中没有这些组分的色谱峰。因此，依据12-15min的组分峰即可判断1号样品为鲜茧丝。

同时，本案例进行了至少3次的重复性的实验，均能得到相同的结果。

实施例2、将原产于广西地区的当年产的鲜茧丝作为待测样品，将原产于广西地区的当年产的干茧丝作为标准品；按照实施例1所述方法进行检测。

分析结果如下：

图3为广西地区当年产的鲜茧丝样品的液相色谱图，其中保留时间为12-15min的组分为鲜茧丝的特征组分，而干茧丝样品的液相色谱图(图4)中没有这些组分的色谱峰。因此，依据12-15min的组分峰即可判断3号样品为鲜茧丝。同时，本研究进行了重复性(至少3次)的实验，均能得到相同的结果。

实施例3、将原产于浙江湖州地区存储2-3年的鲜茧丝作为待测样品，将原产于浙江湖州地区存储2-3年的干茧丝作为标准品；按照实施例1所述方法进行检测。

分析结果如下：

图5为原产于浙江湖州地区、自然条件下存储2-3年后的鲜茧丝样品的高效液相色谱图，其中保留时间为12-15min的组分为鲜茧丝的特征组分，而干茧丝样品的液相色谱图(图6)中没有这些组分的色谱峰。因此，依据12-15min的组分峰即可判断5号样品为鲜茧丝。同时，本研究进行了重复性(至少3次)的实验，均能得到相同的结果。

根据图2、图4、图6，我们得知：无论哪个庄口的干茧丝，无论是当年生产还是已存储2-3年的干茧丝，在相同高效液相色谱条件下，所得的色谱图的出峰位置是一致的；

同理，根据图1、图3、图5，我们得知：无论哪个庄口的鲜茧丝，无论是当年生产还是已存储2-3年的鲜茧丝，在相同高效液相色谱条件下，相对于干茧丝色谱图而言，均出现了新组分峰(保留时间为12-15min)。

为了证明本发明方法的通用性，本发明还进行了如下的通用性验证实验：将产自以下几个地区的当年产茧丝、自然条件下存储2年以上的茧丝，如同实施例1所述方法进行检测，所得结果如下表1所述。

表1

	液相色谱图的结果
		四川庄口当年产鲜茧丝	12-15min出现特征组分峰
四川庄口当年产干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		四川庄口产存储2年以上的鲜茧丝	12-15min出现特征组分峰
四川庄口产存储2年以上的干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		云南庄口当年产鲜茧丝	12-15min出现特征组分峰
云南庄口当年产干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		云南庄口产存储2年以上的鲜茧丝	12-15min出现特征组分峰
云南庄口产存储2年以上的干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		江苏东台市庄口当年产鲜茧丝	12-15min出现特征组分峰
江苏东台市庄口当年产干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		江苏东台市庄口产存储2年以上的鲜茧丝	12-15min出现特征组分峰
江苏东台市庄口产存储2年以上的干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰

实施例4、将实施例1步骤2)中提取所用的“去离子水”改成“甲醇”，其余同实施例1。

按此方法，对实施例1、实施例2、实施例3中所用到的待测样品进行检测，所得结果如下表2：

表2

备注说明：采用甲醇作为提取溶剂，可提取到鲜茧丝中到某些干茧丝不含有的成分，对比鲜茧丝与干茧丝提取液的色谱图，可得知，这些组分虽然区别于纯水提取到的特征组分(该色谱条件下，保留时间为12-15min)，但亦可作为鉴别鲜茧丝和干茧丝的依据。

对比例1、将实施例1步骤3)的高效液相色谱分析中的色谱柱由“Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(150×4.6mm,3.5μm)”改成“正相色谱柱(YMC-Pack NH₂色谱柱(250×4.6mm,5μm))”。其余等同于实施例1。

按此方法，对实施例1、实施例2、实施例3中所用到的待测样品进行检测，所得结果如下表3：

表3

	液相色谱图的结果
		湖州当年产鲜茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
湖州当年产干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		广西当年产鲜茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
广西当年产干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
		湖州产存储3年的鲜茧丝	12-15min没有出现特征组分峰
湖州产存储3年的干茧丝	12-15min没有出现特征组分峰

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (5)

1.快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，其特征是包括以下步骤：

取事先已确定是干茧缫制生丝作为标准品，取待测的缫制生丝作为待测样品，将标准品和待测样品在相同的分析条件下分别进行如下步骤1)～步骤3)：

1)、将样品剪碎或粉碎后加入溶剂进行提取，所述样品为标准品、待测样品；

所述溶剂为水或甲醇；

2)、步骤1)得到的提取液浓缩至干，得提取物；

3)、将步骤2)所得的提取物用与步骤1)相同的溶剂进行溶解后，过滤，所得的滤液进行高效液相色谱分析；

从而分别获得标准品的高效液相色谱分析结果、待测样品的高效液相色谱分析结果；

所述步骤3)的高效液相色谱分析：色谱柱为反相色谱柱，为含有C4、C8、C18或苯基填料的色谱柱；流动相：甲醇-水溶液为流动相；洗脱梯度为：0min:6％甲醇，94％水；17min:100％甲醇，0％水；20min:100％甲醇，0％水；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；

4)、根据高效液相色谱分析结果，判断待测样品为鲜茧丝还是为干茧丝：

当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，多出现至少一个特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝；

反之，则判定待测样品为干茧缫制生丝。

2.根据权利要求1所述的快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，其特征是：

所述步骤1)提取所用溶剂为去离子水；

步骤3)中色谱柱的填料为C18；

所述步骤4)为：当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，于12-15min出现特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝。

3.根据权利要求1所述的快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，其特征是：

所述步骤1)提取所用溶剂为甲醇；

步骤3)中色谱柱的填料为C18；

所述步骤4)为：当待测样品的高效液相色谱分析结果与标准品的高效液相色谱分析结果相比，于6-10min出现特征组分峰时，判定待测样品为鲜茧缫制生丝。

4.根据权利要求1～3任一所述的快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，其特征是：

所述步骤3)中，每4～6g的样品制备而得的提取物用1ml溶剂溶解；用0.45μm滤膜过滤。

5.根据权利要求4所述的快速鉴别鲜茧缫制生丝和干茧缫制生丝的方法，其特征是：

所述步骤1)中：

样品与溶剂的重量/体积比为：1g/10～100ml；

所述提取为于超声波频率为28-100kHz，功率为50-400W的超声波辅助提取1h。