CN105111272A - 3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,结构式为,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和环中的一种。本发明以齐墩果酸或乌苏酸为先导化合物,通过对齐墩果酸或乌苏酸进行结构,合成了新型的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,合成方法简便,产物纯度高,且通过结构改造,显著增强了3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的抗心律失常的活性,具有较好的心肌保护作用。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学和治疗学领域,特别是涉及一种3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
心血管疾病严重威胁着人类的健康与生命,尽管在药物、外科手术等方面对心血管疾病的防治已取得了较大的进展,但该病的致残致死率仍在逐年上升。心肌缺血和心肌梗塞及其并发症的预防与治疗是当今医学界研究的热点,而临床上对急重型病患以溶栓为主的治疗中存在出血的限制和危险,因此目前被公认为安全有效的防治药物为具有心肌保护作用的药物。
辽东楤木[Araliaelata(Miq)Seem],别名龙牙楤木,俗称刺嫩芽、刺龙牙,系五加科楤木属植物,广泛分布于亚洲地区,在我国东北、河北东部等地区储量较为丰富。药用部位具有祛风除湿、活血止痛、利尿消肿和补气安神之功效,也常作为药食同源的民间药,用于滋补,治疗糖尿病、关节炎、心肌梗死、胃溃疡、神经衰弱等症。辽东楤木总皂苷(Aralosides,As)具有提高心肌收缩力,抗心肌缺血、抗心力衰竭、抗炎、增强免疫力等多种药理活性。其中,单体皂苷齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷具有比楤木总皂苷更强的生理活性,包括能够抑制心肌异常自律性、拮抗心脏传导异常,延长不应期,对Na+、K+离子通道具有抑制作用,具有抗心律失常等作用。但是,齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的生物活性仍需改善,且溶解度较差,生物利用度不高。因此在此基础上寻找具有优越抗心律失常的新衍生物具有重要的价值。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提出一种3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物及其制备方法和应用,以提高3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物抗心律失常的活性。
基于上述目的,本发明提供的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的结构式如下:
其中,当所述衍生物的母核为齐墩果烷型时,R1为糖醛酸基或糖基、R2为H原子,R3为甲基,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和杂环中的一种;
当所述衍生物的母核为乌苏烷型时,R1为糖醛酸基或糖基,R2为甲基,R3为H原子,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和杂环中的一种。
在本发明的一些实施例中,所述糖醛酸基选自D-葡萄糖醛酸、D-甘露糖醛酸、D-半乳糖醛酸中的一种,所述糖基选自D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖中的一种。
在本发明的一些实施例中,所述R4选自炔丙基、环己基、苄基、正丙基、苯乙基、N-甲基哌嗪基、吗啉基、哌啶基、对甲氧基苯基、正癸烷基、1-氨基乙基、1-氨基正丙基、1-氨基正丁基、1-氨基-3,6-二氧杂辛基、1-氨基-4,7,10-三氧十三烷基中的一种。
本发明还提供一种制备上述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的方法,包括以下步骤:
将齐墩果酸或乌苏酸的28-羧基经苄基保护,然后在路易斯酸TMSOTf的促进下,将单糖的三氯乙酰亚胺酯给体与苄基保护过的齐墩果酸或乌苏酸上的3-羟基偶联成为糖苷;
所述糖苷经Pd-C催化氢化脱去苄基保护,然后在EDC·HCl和HOBT的条件下与R4NH2合成酰胺;
随后经甲醇/甲醇钠作用脱去单糖上的苯甲酰基保护,最后在TEMPO/Ca(ClO)2/THF的温和氧化条件下,选择性的将单糖上的伯醇基氧化为羧基,得到所述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物。
在本发明的一些实施例中,所述单糖的三氯乙酰亚胺酯给体的制备方法包括:
对单糖的所有羟基进行全苯甲酰化保护,然后经溴化氢-醋酸处理,得到单糖C1位溴代为溴苷的单糖给体,该溴苷在氧化银作用下,C1位溴被水解为羟基,再在碱的作用下与三氯乙腈加成得到该单糖的三氯乙酰亚胺酯给体。
本发明还提供一种药物组合物,包括上述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物和药用载体。
本发明还提供一种上述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物在制备治疗心肌缺血药物中的应用。
在本发明的一些实施例中,所述心肌缺血为缺血性心肌病或者心肌梗塞造成的心肌损伤。
从上面所述可以看出,本发明以齐墩果酸或乌苏酸为先导化合物,通过对齐墩果酸或乌苏酸进行结构改造,合成了新型的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,合成方法简便,产物纯度高,且通过结构改造,显著增强了3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的抗心律失常的活性,具有较好的心肌保护作用,能用于临床的心肌保护药物。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,对本发明进一步详细说明。
本发明提供的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的结构式如下:
其中,当所述衍生物的母核为齐墩果烷型时,R1为糖醛酸基或糖基、R2为H原子,R3为甲基,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和环中的一种;
当所述衍生物的母核为乌苏烷型时,R1为糖醛酸基或糖基,R2为甲基,R3为H原子,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和环中的一种。
可选地,所述糖醛酸基选自D-葡萄糖醛酸、D-甘露糖醛酸、D-半乳糖醛酸中的一种,所述的糖基选自D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖中的一种。较佳地,所述R4选自炔丙基、环己基、苄基、正丙基、苯乙基、N-甲基哌嗪基、吗啉基、哌啶基、对甲氧基苯基、正癸烷基、1-氨基乙基、1-氨基正丙基、1-氨基正丁基、1-氨基-3,6-二氧杂辛基、1-氨基-4,7,10-三氧十三烷基中的一种。
在本发明的一些实施例中,所合成的部分具体化合物如表1所示。
表1部分3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物结构
本发明还提供了制备所述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的方法,以衍生物CHA-1和CHA-2为例,合成路线如下:
实施例1制备衍生物CHA-1和CHA-2
步骤a’-步骤d’:葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(5’)的制备
冰水浴下,将D-葡萄糖(5.0g,27.7mmol)溶于100mL干燥吡啶中,加入苯甲酰氯(19.3mL,166.5mmol),室温下搅拌反应18h,加水60mL破坏过量的苯甲酰氯,以乙酸乙酯提取,合并有机相,顺次用水、稀盐酸、饱和碳酸氢钠洗,无水硫酸镁干燥,过滤,滤液浓缩得全苯甲酰化葡萄糖(2’)18.7g。
将上步所得的全苯甲酰化葡萄糖(2’)4.0g溶于干燥的二氯甲烷40mL中,滴加12mLHBr-HOAc,室温搅拌反应,1h反应结束后,反应液顺次用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,有机层浓缩至干,得到葡萄糖端位溴代产物(3’)。
将葡萄糖端位溴代产物(3’)加入到丙酮25mL和1mL蒸馏水中溶解,于室温下加入氧化银2.0g,搅拌2h后过滤除去固体,滤液浓缩后得白色固体(4’)。
再将白色固体(4’)2.0g加入到二氯甲烷10mL中溶解,并加入三氯乙腈1.9mL和二氮杂二环(DBU)0.2mL,冰浴下反应4h,减压蒸除溶剂,残余物经加压柱层析(石油醚:乙酸乙酯=8:1)得到白色固体葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(5’)3.3g,总收率76%。
步骤a:齐墩果酸苄酯(O-1)的合成
将齐墩果酸(5.0g,10.9mmol)溶于175mL二氯甲烷中,加入四丁基溴化铵0.4g,和溶于28mL水中的3.7g碳酸钾水溶液,滴加溴苄1.6mL,过夜反应,得到白色无定形固体齐墩果酸苄酯(O-1)4.7g,收率91%。
步骤b:齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-2)的合成
将上一步所得齐墩果酸苄酯(O-1)(1.1g,2.0mmol)和葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(5’)(1.94g,2.6mmol)溶于干燥二氯甲烷20mL,加入分子筛,室温下搅拌30min。加入TMSOTf(19.4μL,0.1mmol),继续搅拌至薄层监测反应结束。加三乙胺0.4mL淬灭反应,过滤,滤液浓缩,硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯=10:1),得白色固体齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-2)1.6g,收率79%。
步骤c:齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)的合成
将上一步所得产物齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-2)1.2g溶于25mL乙酸乙酯中,加入10%Pd-C8.8mg,搅拌下通氢气并加热回流。待TLC检测显示反应已经完成,过滤,滤液浓缩干燥得白色固体齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)1.1g,收率92%。
步骤d/e:N-炔丙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CHA-2)的合成
将上一步所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加炔丙胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-炔丙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CHA-2)231mg,两步收率72%。
ESI-MSC39H61NNaO7m/z:678.4346[M+Na]+。
1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.26(s,1H),4.73(d,J=9.0Hz,1H),4.37(m,1H),4.18(m,1H),4.01(m,1H),4.14-4.09(m,2H),3.83-3.77(m,2H),3.21(dd,J=5.4Hz,14.4Hz,1H),2.90(brd,dd,J=4.8Hz,16.2Hz,1H),2.83(t,J=5.0Hz,1H),1.09(s,3H),1.06(s,3H),0.80(s,3H),0.78(s,3H),0.70(s,6H),0.65(s,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.9,144.7,122.9,106.9,88.8,82.3,78.2,77.6,75.6,71.9,71.6,62.8,55.8,47.9,46.7,46.4,42.1,41.7,39.8,39.5,38.9,36.9,34.3,33.5,33.1,33.0,30.8,29.2,28.2,27.8,26.5,26.1,24.5,23.8,23.7,18.5,17.6,17.0,15.5。
步骤f:N-炔丙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(CHA-1)的合成
将上一步所得产物N-炔丙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CHA-2)(131mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,抽滤,水洗,得白色粉末N-炔丙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(CHA-1)61.8mg,收率46%。
ESI-MSC39H59NO8m/z:669.4241[M+H]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.26(s,1H),4.64(d,J=7.8Hz),4.37(m,1H),4.18(m,1H),4.01(m,1H),4.14-4.09(m,2H),3.23(dd,J=4.8Hz,13.2Hz,1H),2.88(brd,dd,J=4.Hz,16.2Hz,1H),2.83(t,J=5.0Hz,1H),1.09(s,3H),1.04(s,3H),0.81(s,3H),0.78(s,3H),0.70(s,6H),0.66(s,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.1,171.4,144.5,122.4,106.4,88.6,81.8,78.5,78.0,75.6,71.7,71.6,55.6,47.7,46.2,46.2,41.9,41.7,39.6,39.3,38.9,36.7,34.3,33.5,33.0,33.0,30.9,29.0,28.0,27.8,26.5,25.9,24.5,23.6,23.5,18.2,17.4,16.8,15.3。
实施例2制备衍生物CHA-3
将实施例1中步骤c所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加环己胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到白色粉末N-环己基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CHA-3)209mg,两步收率42%。
ESI-MSC42H69NNaO7m/z:722.7500[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.26(s,1H),4.73(d,J=9.6Hz,1H),4.37(m,1H),4.20(m,1H),4.01(m,1H),3.82(m,1H),3.78(m,1H),3.19(m,1H),2.88(brd,J=10.2Hz,1H),1.14(s,3H),1.03(s,3H),0.81(s,3H),0.77(s,3H),0.71(d,J=2.4Hz,6H),0.61(s,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:176.4,145.0,122.6,106.9,88.7,78.7,78.3,75.8,71.9,63.1,55.8,48.5,47.9,46.8,46.3,42.3,42.0,39.8,39.6,38.7,37.0,34.4,33.9,33.5,33.2,32.9,30.8,28.2,27.8,26.5,26.0,25.9,25.5,25.4,23.8,23.7,23.6,18.5,17.8,17.0,15.5.
实施例3制备衍生物CHA-5
1)半乳糖三氯乙酰亚胺酯的制备与实施例1中葡萄糖三氯乙酰亚胺酯的制备方法相似冰水浴下,将D-半乳糖(5.0g,27.7mmol)溶于100mL干燥吡啶中,加入苯甲酰氯(19.3mL,166.5mmol),室温下搅拌反应18h,加水60mL破坏过量的苯甲酰氯,以乙酸乙酯提取,合并有机相,顺次用水、稀盐酸、饱和碳酸氢钠洗,无水硫酸镁干燥,过滤,滤液浓缩得全苯甲酰化半乳糖15.9g。将上步所得的全苯甲酰化半乳糖4.0g溶于干燥的二氯甲烷40mL中,滴加12mLHBr-HOAc,室温搅拌反应,1h反应结束后,反应液顺次用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,有机层浓缩至干,得到半乳糖端位溴代产物。将半乳糖端位溴代产物加入到丙酮25mL和1mL蒸馏水中溶解,于室温下加入氧化银2.0g,搅拌2h后过滤除去固体,滤液浓缩后得白色固体。再将白色固体2.0g加入到二氯甲烷10mL中溶解,并加入三氯乙腈1.9mL和二氮杂二环(DBU)0.2mL,冰浴下反应4h,减压蒸除溶剂,残余物经加压柱层析(石油醚:乙酸乙酯=8:1)得到白色固体半乳糖三氯乙酰亚胺酯3.3g,总收率65%。
2)乌苏酸苄酯的合成
将乌苏酸(5.0g,10.9mmol)溶于175mL二氯甲烷中,加入四丁基溴化铵0.4g,和溶于28mL水中的3.7g碳酸钾水溶液,滴加溴苄1.6mL,过夜反应,得到白色无定形固体乌苏酸苄酯4.7g,收率83%。
3)乌苏酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)的合成
将上一步所得乌苏酸苄酯(1.1g,2.0mmol)和半乳糖三氯乙酰亚胺酯(1.94g,2.6mmol)溶于干燥二氯甲烷20mL,加入分子筛,室温下搅拌30min。加入TMSOTf(19.4μL,0.1mmol),继续搅拌至薄层监测反应结束。加三乙胺0.4mL淬灭反应,过滤,滤液浓缩,硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯=10:1),得白色固体乌苏酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)1.8g,收率88%。
4)乌苏酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)的合成
将上一步所得产物乌苏酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)1.2g溶于25mL乙酸乙酯中,加入10%Pd-C8.8mg,搅拌下通氢气并加热回流。待TLC检测显示反应已经完成,过滤,滤液浓缩干燥得白色固体乌苏酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)1.1g,收率92%。
5)N-苄基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷的合成
将上一步所得产物乌苏酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加苄胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-苄基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷252mg,两步收率73%。
ESI-MSC43H65NNaO7m/z:730.4659[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:7.26(d,2H,J=9.0Hz),7.13(t,J=9.0Hz,9.0Hz,2H),7.05(t,J=9.0Hz,7.8Hz,1H),5.20(s,1H),4.66(d,1H,J=9.0Hz),4.51(m,1H),4.36(m,1H),4.25(m,1H),4.40(m,2H),3.95(dd,J=4.2Hz,11.4Hz,1H),3.89(t,J=7.2Hz,7.2Hz,1H),3.21(dd,J=4.2Hz,11.4Hz,1H),2.22(brd,J=10.8Hz,1H),1.10(s,3H),1.01(s,3H),0.77(s,3H),0.74(d,J=7.2Hz,3H),0.72(s,3H),0.68(s,3H),0.66(s,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.3,140.5,139.5,128.7,128.1,127.2,125.8,107.6,88.7,76.8,75.4,73.1,70.3,62.5,55.8,53.5,47.9,47.8,43.5,42.5,40.0,39.8,39.5,39.2,38.9,38.1,36.9,33.4,31.2,28.3,28.3,26.7,24.8,23.8,23.6,21.3,18.4,17.5,17.4,17.0,15.6.
6)N-苄基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖醛酸苷(CHA-5)的合成
将上一步所得产物N-苄基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(141mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,抽滤,水洗,得白色粉末N-苄基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖醛酸苷(CHA-5)56.1mg,收率39%。
ESI-MSC43H64NNaO8m/z:759.4788[M+Na]+。
1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:7.35(d,J=9.0Hz,2H),7.13(t,J=9.0Hz,2H),7.05(t,J=9.0Hz,7.8Hz,1H),5.21(s,1H),4.62(d,1H,J=8.4Hz),4.32(m,1H),4.11(m,1H),3.89(m,1H),3.62(m,1H),3.73(brs,1H),3.23(dd,J=4.2Hz,12.0Hz),2.21(brd,1H,J=13.2Hz),1.09(s,3H),1.00(s,3H),0.78(s,3H),0.73(s,3H),0.70(s,3H),0.69(s,3H),0.65(s,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:176.8,175.3,140.0,139.0,128.2,128.2,127.6,125.3,107.1,88.2,76.3,74.9,72.6,69.8,55.3,53.0,47.4,47.3,43.0,42.0,39.4,39.3,39.0,38.7,38.4,37.6,36.4,32.9,30.7,27.8,27.8,26.2,24.3,23.3,23.1,20.8,17.9,17.0,16.9,16.5,15.1。
实施例4制备衍生物CHA-4和CHA-7
N-炔丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(CHA-7)的合成
将实施例3中步骤4)所得产物乌苏酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加炔丙胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-炔丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷215mg,两步收率67%。
ESI-MSC39H61NO7m/z:655.5095[M+H]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.22(s,1H),4.66(d,J=7.8Hz,1H),4.37(m,2H),4.26(m,2H),4.11-4.07(m,2H),3.96-3.90(m,2H),3.20(dd,J=4.2Hz,12.0Hz,1H),2.88(t,J=2.4Hz,1H),2.25(d,J=11.4Hz,1H),1.10(s,3H),1.00(s,3H),0.79(s,6H),0.76(s,3H),0.73(d,J=6.6Hz,3H),0.71(s,3H),0.66(s,3H).13C-NMR(150Hz,Pyr)δ:177.1,139.3,125.9,107.6,88.8,82.0,76.8,75.4,73.1,71.9,70.3,62.5,55.8,53.2,47.9,47.8,42.4,40.0,39.7,39.5,39.3,38.9,37.8,36.8,33.3,31.0,29.1,28.3,28.2,26.5,24.7,23.7,23.5,21.3,18.3,17.3,17.4,17.1,15.5.
N-炔丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖醛酸苷(CHA-4)的合成
将上一步所得产物N-炔丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(131mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,抽滤,水洗,得白色粉末N-炔丙基-3-O-[β-D-吡喃半乳糖醛酸]-乌苏酸苷(CHA-5)54.9mg,收率41%。
ESI-MSC39H59NO8m/z:669.4468[M+H]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.12(s,1H),4.53(d,J=8.4Hz,1H),4.27(m,2H),4.10(m,2H),4.09-4.06(m,2H),3.20(dd,J=4.2Hz,12.0Hz,1H),2.78(t,J=2.4Hz,1H),2.25(d,J=11.4Hz,1H),1.09(s,3H),1.00(s,3H),0.79(s,6H),0.76(s,3H),0.73(d,J=6.6Hz,3H),0.69(s,3H),0.65(s,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:176.3,174.5,139.0,125.6,107.3,88.5,81.7,76.5,75.1,72.8,71.6,70.0,55.6,52.9,47.6,47.5,42.1,40.0,39.4,39.2,39.0,38.6,37.5,36.5,33.0,30.7,28.8,28.0,27.9,26.2,24.4,23.4,23.2,21.0,18.0,17.0,17.1,17.1,15.5.
实施例5制备衍生物CHA-6和CHA-8
N-正丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(CHA-8)的合成
将实施例3中步骤4)所得产物乌苏酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加正丙胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到白色粉末N-正丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷235mg,两步收率73%。
ESI-MSC39H65NNaO7m/z:682.5099[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:6.63(brs,1H),6.47(brs,1H),6.25(brs,1H),6.07(brs,1H),5.15(s,1H),4.66(d,J=7.8Hz,1H),4.37(m,2H),4.26(m,2H),3.95(d,J=9.0Hz,1H),3.91(brs,1H),3.46(d,J=2.4Hz,2H),3.19(brd,J=9.3Hz,1H),2.18(d,1H,J=11.4Hz),1.11(s,3H),1.00(s,3H),0.80(s,3H),0.74(d,J=7.8Hz,6H),0.71(s,3H),0.67(s,3H),0.63(t,J=7.2Hz,10.8Hz,3H).13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.6,138.7,125.9,106.6,88.8,76.8,75.9,73.1,70.3,62.4,55.8,53.3,47.8,47.7,42.2,41.6,39.9,39.8,39.5,39.2,38.8,38.2,36.8,33.3,30.7,28.3,28.2,26.7,24.5,23.7,23.5,23.2,21.2,18.4,17.3,17.1,17.0,15.6,11.8.
N-正丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖醛酸苷(CHA-6)的合成
将上一步所得产物N-正丙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(132mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,抽滤,水洗,得白色粉末N-正丙基-3-O-[β-D-吡喃半乳糖醛酸]-乌苏酸苷(CHA-5)53.8mg,收率40%。
ESI-MSC39H64NO8m/z:674.4919[M+H]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.21(s,1H),4.73(d,J=7.2Hz,1H),4.36(m,2H),4.12(m,1H),4.04(m,1H),3.20(m,2H),3.13(m,1H),2.20(d,1H,J=10.8Hz),1.11(s,3H),1.00(s,3H),0.82(s,3H),0.71-0.70(m,6H),0.69(s,3H),0.67(s,3H),0.63(t,J=7.2Hz,10.8Hz,3H)13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:178.2,172.1,139.6,123.1,106.7,89.1,77.9,75.2,73.5,73.2,55.7,53.4,47.8,47.8,42.5,41.6,39.9,39.8,39.3,39.2,38.8,38.1,36.7,33.3,31.1,28.2,28.2,26.5,24.8,23.8,23.6,23.2,21.5,18.4,17.5,17.4,17.0,15.5,11.7.
实施例6制备衍生物CHA-9
N-苯乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的合成
将实施例1中步骤c所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加苯乙胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到白色粉末N-苯乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷243mg,两步收率69%。
ESI-MSC44H67NNaO7m/z:744.7500[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:7.15(t,J=7.2Hz,7.8Hz,2H),7.08-7.04(m,3H),5.21(s,1H),4.66(d,J=7.8Hz,1H),4.38(m,1H),4.29(m,1H),3.91(m,1H),3.67(m,2H),3.17(dd,J=12.0Hz,4.2Hz,1H),2.74(m,2H),2.68(m,1H),1.09(s,3H),1.05(s,3H),0.78(s,3H),0.72(s,3H),0.71(s,3H),0.68(s,6H),0.65(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.8,144.7,142.1,126.1,123.2,126.6,122.8,107.5,88.6,76.8,75.4,73.1,70.1,62.9,55.5,47.9,46.8,46.1,42.1,41.8,39.8,39.1,38.7,36.9,36.6,34.4,33.6,33.1,32.9,30.8,28.2,27.8,26.6,26.1,23.9,23.9,23.8,18.4,17.4,17.1,15.6.
将上一步所得产物N-苯乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(144mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,抽滤,水洗,得白色粉末N-苯乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(CHA-9)69mg,收率47%。
ESI-MSC44H66NNaO8m/z:759.5662[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:7.20(t,J=7.2Hz,2H),7.05-7.00(m,3H),5.12(s,1H),4.85(d,J=7.8Hz,1H),4.12(m,1H),4.11(m,1H),3.97(m,1H),3.77(m,2H),3.15(dd,J=12.0Hz,4.2Hz,1H),2.85(m,2H),2.78(m,1H),1.09(s,3H),1.05(s,3H),0.78(s,3H),0.72(s,3H),0.71(s,3H),0.66(s,6H),0.65(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.5,172.0,145.1,140.6,129.6,129.2,127.0,123.2,107.9,89.0,77.2,75.8,73.5,70.6,56.1,48.3,47.2,46.8,42.3,42.2,40.1,39.9,39.1,37.3,36.6,34.8,34.0,33.5,33.3,31.2,28.6,28.2,27.0,26.5,24.2,24.1,24.0,18.8,17.7,17.4,15.9.
实施例7制备衍生物CHA-10
N-4’-甲氧基苯基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷的合成
将实施例3中步骤4)所得产物乌苏酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加对甲氧基苯胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-4’-甲氧基苯基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷215mg,两步收率61%。
ESI-MSC43H65NNaO8m/z:746.5834[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:7.68(d,J=7.2Hz,2H),6.78(d,J=10.8Hz,2H),5.37(s,1H),4.70(d,J=9.6Hz,1H),4.35(m,1H),4.20(m,1H),4.01(m,1H),3.80(m,1H),4.27(m,2H),3.41(s,3H),3.19(dd,J=6.3Hz,13.2Hz,1H),3.02(brd,J=13.2Hz,1H),1.10(s,3H),1.08(s,3H),0.79(s,3H),0.72(s,3H),0.70(s,6H),0.62(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:176.9,156.6,145.0,135.8,133.1,123.0,114.4,107.0,88.8,78.8,78.3,75.8,71.9,63.1,55.8,55.3,47.9,47.2,46.5,42.2,42.0,39.8,39.4,39.0,36.9,34.3,33.3,33.1,32.9,30.8,28.2,27.9,26.5,26.1,23.8,23.8,23.7,18.4,17.5,17.0,15.5.
实施例8制备衍生物CHA-11
N-哌啶基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成
将实施例1中步骤c所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加哌啶(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到白色粉末N-哌啶基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷117mg,两步收率35%。
ESI-MSC41H67NNaO7m/z:708.4937[M+Na]+.1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.13(s,1H),4.78(d,J=9.6Hz,1H),4.43(m,1H),4.35(m,1H),4.09(m,1H),3.89(m,1H),3.16(d,J=9.6Hz,1H),2.84(d,J=12.6Hz,1H),1.09(s,3H),1.02(s,3H),0.77(s,3H),0.70(s,3H),0.69(s,3H),0.61(s,3H),0.59(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.9,144.1,122.8,107.1,89.0,78.0,77.7,75.4,73.4,63.0,55.7,55.7,47.8,46.9,46.0,44.6,41.9,41.7,39.6,39.4,38.5,36.8,33.9,33.0,32.9,32.7,30.7,29.9,28.1,28.0,26.5,26.1,24.1,23.6,23.3,22.8,18.5,17.1,16.9,15.4.
实施例9制备衍生物CHA-12
N-N’-甲基哌嗪基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃甘露糖苷的合成
1)甘露糖三氯乙酰亚胺酯的制备与实施例1中葡萄糖三氯乙酰亚胺酯的制备方法相似冰水浴下,将D-甘露糖(5.0g,27.7mmol)溶于100mL干燥吡啶中,加入苯甲酰氯(19.3mL,166.5mmol),室温下搅拌反应18h,加水60mL破坏过量的苯甲酰氯,以乙酸乙酯提取,合并有机相,顺次用水、稀盐酸、饱和碳酸氢钠洗,无水硫酸镁干燥,过滤,滤液浓缩得全苯甲酰化甘露糖16.4g。将上步所得的全苯甲酰化甘露糖4.0g溶于干燥的二氯甲烷40mL中,滴加12mLHBr-HOAc,室温搅拌反应,1h反应结束后,反应液顺次用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,有机层浓缩至干,得到甘露糖端位溴代产物。将甘露糖端位溴代产物加入到丙酮25mL和1mL蒸馏水中溶解,于室温下加入氧化银2.0g,搅拌2h后过滤除去固体,滤液浓缩后得白色固体。再将白色固体2.0g加入到二氯甲烷10mL中溶解,并加入三氯乙腈1.9mL和二氮杂二环(DBU)0.2mL,冰浴下反应4h,减压蒸除溶剂,残余物经加压柱层析(石油醚:乙酸乙酯=8:1)得到白色固体甘露糖三氯乙酰亚胺酯2.9g,总收率57%。
2)将实施例1中步骤a所得齐墩果酸苄酯(O-1)(1.1g,2.0mmol)和甘露糖三氯乙酰亚胺酯(1.94g,2.6mmol)溶于干燥二氯甲烷20mL,加入分子筛,室温下搅拌30min。加入TMSOTf(19.4μL,0.1mmol),继续搅拌至薄层监测反应结束。加三乙胺0.4mL淬灭反应,过滤,滤液浓缩,硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯=10:1),得白色固体齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃甘露糖苷)1.4g,收率69%。
3)将上一步所得产物齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃甘露糖苷)1.2g溶于25mL乙酸乙酯中,加入10%Pd-C8.8mg,搅拌下通氢气并加热回流。待TLC检测显示反应已经完成,过滤,滤液浓缩干燥得白色固体齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃甘露糖苷)1.0g,收率84%。
4)将上一步所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃甘露糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加N-甲基哌嗪(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-N’-甲基哌嗪基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃甘露糖苷143mg,两步收率42%。
ESI-MSC41H68N2NaO7m/z:723.4925[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.21(s,1H),4.73(d,J=9.6Hz,1H),4.36(m,1H),4.19(m,1H),4.01(m,1H),3.80(m,1H),3.54(d,J=4.8Hz,4H),3.19(m,1H),3.17(s,1H),1.98(s,H),1.11(s,3H),1.07(s,3H),0.81(s,3H),0.77(s,3H),0.73(s,3H),0.72(s,3H),0.67(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:174.8,145.4,121.8,106.9,88.8,78.7,78.2,75.8,71.9,63.0,55.9,55.5,48.4,47.6,46.7,45.9,45.6,44.1,42.2,39.6,39.5,38.7,37.0,34.2,33.3,33.1,30.5,30.1,28.3,28.2,26.5,26.1,24.1,23.7,22.8,18.5,17.3,17.0,15.5.
实施例10制备衍生物CHA-13
N-吗啉基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷的合成
1)将实施例1中步骤a所得齐墩果酸苄酯(O-1)(1.1g,2.0mmol)和半乳糖三氯乙酰亚胺酯(1.94g,2.6mmol)溶于干燥二氯甲烷20mL,加入分子筛,室温下搅拌30min。加入TMSOTf(19.4μL,0.1mmol),继续搅拌至薄层监测反应结束。加三乙胺0.4mL淬灭反应,过滤,滤液浓缩,硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯=10:1),得白色固体齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)1.5g,收率74%。
2)将上一步所得产物齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)1.2g溶于25mL乙酸乙酯中,加入10%Pd-C8.8mg,搅拌下通氢气并加热回流。待TLC检测显示反应已经完成,过滤,滤液浓缩干燥得白色固体齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)1.1g,收率92%。
3)将上一步所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加吗啉(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-吗啉基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷163mg,两步收率49%。
ESI-MSC40H65NNaO8m/z:710.5381[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.21(s,1H),4.71(d,J=9.6Hz,1H),4.35(m,1H),4.19(m,1H),4.03(m,1H),3.82(m,1H),3.52-3.49(m,1H),3.48(m,1H),3.20(dd,J=13.8Hz,4.8Hz,1H),1.12(s,3H),1.06(s,3H),0.83(s,3H),0.74(s,3H),0.73(s,3H),0.70(s,3H),0.65(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:175.0,145.2,121.9,106.9,88.8,78.7,78.2,75.8,71.8,67.1,63.0,55.9,48.0,47.6,46.6,46.4,44.0,42.2,39.6,39.5,38.7,37.0,34.2,33.3,33.1,30.5,30.1,28.2,28.1,26.5,26.1,24.1,23.7,22.7,18.5,17.2,17.0,15.5.
实施例11制备衍生物CHA-14
N-正癸烷基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成
将实施例1中步骤c所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加正癸胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到白色粉末N-正癸烷基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷195mg,两步收率55%。
ESI-MSC46H79NNaO7m/z:780.5857[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.22(s,1H),4.60(d,J=9.0Hz,1H),4.33(m,1H),4.17(m,1H),3.99(m,1H),3.80(m,1H),3.30(m,1H),3.12(m,1H),3.10(dd,J=4.2Hz,13.2Hz,1H),2.88(dd,J=9.6Hz,4.8Hz,1H),1.08(s,3H),1.04(s,3H),0.96(m,14H),0.77(s,3H),0.74(s,6H),0.70(s,3H),0.68(s,6H),0.66(s,3H),0.58(t,J=7.8Hz,9.0Hz,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:176.3,145.1,122.7,106.9,89.3,79.1,78.7,75.8,71.9,63.1,55.8,47.9,46.8,46.4,42.2,42.0,39.9,39.8,39.5,38.7,37.0,34.4,33.8,33.2,33.0,31.9,30.9,30.1,30.1,29.6,29.5,29.5,29.4,28.2,27.9,26.5,26.1,23.8,23.7,23.7,22.8,18.5,17.5,17.0,15.5,14.2.
实施例12制备衍生物CHA-15
N-氨基乙基-乌苏酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的合成
1)将实施例3中步骤2)所得乌苏酸苄酯(1.1g,2.0mmol)和葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(1.94g,2.6mmol)溶于干燥二氯甲烷20mL,加入分子筛,室温下搅拌30min。加入TMSOTf(19.4μL,0.1mmol),继续搅拌至薄层监测反应结束。加三乙胺0.4mL淬灭反应,过滤,滤液浓缩,硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯=10:1),得白色固体齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)1.3g,收率64%。
2)将上一步所得产物齐墩果酸苄酯-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)1.2g溶于25mL乙酸乙酯中,加入10%Pd-C8.8mg,搅拌下通氢气并加热回流。待TLC检测显示反应已经完成,过滤,滤液浓缩干燥得白色固体齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)0.9g,收率75%。
3)将上一步所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加1,2-乙二胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-氨基乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷239mg,两步收率74%。
ESI-MSC38H64N2NaO7m/z:638.4613[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,MeOD)δ:5.37(m,1H),4.33(d,J=9.0Hz,1H),3.84(m,1H),3.68(m,1H),3.48(m,1H),3.36(m,2H),3.27(m,2H),3.18(m,2H),3.01(m,2H),2.82(m,1H),1.29(m,2H),1.17(s,3H),1.01(s,3H),0.96(s,3H),0.95(s,3H),0.92(s,3H),0.85(s,3H),0.78(s,3H).
13C-NMR(150Hz,MeOD)δ:177.3,144.1,124.7,103.9,88.3,77.1,78.6,75.5,71.4,63.2,55.7,47.8,46.9,46.4,41.2,38.9,39.8,30.9,30.1,30.1,29.6,29.5,29.5,29.4,28.2,27.8,26.5,26.2,23.8,23.6,23.7,22.7,18.4,17.4,17.1,16.5,16.2.
将上一步所得产物N-氨基乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(132mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,DCM萃取,浓缩,盐酸甲醇搅拌30min,抽滤得白色粉末N-氨基乙基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷盐酸盐(CHA-15)54mg,收率38%。
ESI-MSC38H62N2NaO8m/z:697.4409[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.26(m,1H),4.73(d,J=9.6Hz,1H),4.11(m,1H),4.10(m,1H),3.98(m,1H),3.73(m,2H),2.85(m,2H),2.78(m,1H),1.10(s,3H),1.09(s,3H),0.79(s,3H),0.73(s,3H),0.70(s,3H),0.67(s,6H),0.66(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:178.6,174.2,144.1,143.5,129.6,128.2,127.1,123.3,107.9,89.1,77.2,75.9,73.5,70.7,56.1,48.5,47.2,46.9,42.3,42.3,40.2,39.9,39.2,37.3,36.5,34.8,34.1,33.5,33.5,31.3,28.6,28.3,27.2,26.5,25.3,24.2,24.1,24.0,22.6,21.5,20.2,18.8,17.7,17.4,16.0.
实施例13制备衍生物CHA-16
N-氨基己基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃甘露糖醛酸苷的合成
将实施例9中步骤3)所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃甘露糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加1,6-二氨基己烷(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-氨基己基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃甘露糖苷241mg,两步收率69%。
ESI-MSC42H72N2NaO7m/z:739.5234[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,MeOD)δ:5.24(s,1H),4.63(d,J=9.0Hz,1H),4.32(m,1H),4.17(m,1H),3.99(m,1H),3.80(m,1H),3.30(m,1H),3.12(m,1H),3.10(m,1H),2.88(m,1H),1.08(s,3H),1.04(s,3H),0.96(m,14H),0.77(s,3H),0.74(s,6H),0.70(s,3H),0.69(s,6H),0.67(s,3H),0.59(s,3H).
13C-NMR(150Hz,MeOD)δ:178.3,145.1,123.7,106.9,89.3,79.1,76.7,75.8,71.9,63.1,55.8,48.9,46.8,46.4,42.2,42.0,39.9,39.8,39.5,38.7,37.0,34.4,33.8,33.2,33.0,31.9,30.9,30.1,30.1,29.6,29.4,27.9,26.5,23.8,23.7,22.8,18.5,17.5,17.0,16.5,16.4.
将上一步所得产物N-氨基己基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃甘露糖苷(143mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,DCM萃取,浓缩,盐酸甲醇搅拌30min,抽滤得白色粉末N-氨基己基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃甘露糖醛酸苷(CHA-5)61mg,收率39%。
ESI-MSC42H70N2NaO8m/z:753.5038[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.22(s,1H),4.86(d,J=7.8Hz,1H),4.12(m,1H),4.11(m,1H),3.97(m,1H),3.77(m,2H),3.17(dd,J=12.0Hz,4.2Hz,1H),2.86(m,2H),2.78(m,1H),1.19(s,3H),1.15(s,3H),0.88(s,3H),0.82(s,3H),0.81(s,3H),0.76(s,6H),0.75(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:177.5,172.0,145.1,140.6,129.6,129.2,127.0,123.2,107.9,89.0,77.2,75.8,73.5,70.6,56.1,48.3,47.2,46.8,42.3,42.2,40.1,39.9,39.1,37.8,36.6,34.8,34.0,33.4,33.3,31.2,28.9,28.2,27.0,26.7,24.2,24.1,24.5,18.8,17.8,17.4,16.9.
实施例14制备衍生物CHA-17
N-1’-氨基-3’,6’-二氧杂辛基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的合成
将实施例1中步骤c所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷)(O-3)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到白色粉末N-1’-氨基-3’,6’-二氧杂辛基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷237mg,两步收率65%。
ESI-MSC42H72N2NaO9m/z:771.5134[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,MeOD)δ:5.36(s,1H),4.33(m,1H),4.17(m,1H),3.84(m,1H),3.68(m,7H),3.54(m,2H),3.43(m,1H),3.36(m,1H),3.26(m,1H),3.16(m,4H),2.76(m,1H),1.18(s,3H),1.06(s,3H),0.95(s,3H),0.94(s,3H),0.91(s,3H),0.85(s,3H),0.79(s,3H).
13C-NMR(150Hz,MeOD)δ:177.3,145.1,122.7,106.9,89.3,79.1,78.7,75.8,71.9,63.1,55.8,47.9,46.8,46.4,42.2,42.0,39.9,39.8,39.5,38.7,37.0,34.4,33.8,33.2,33.0,31.9,30.9,30.1,30.1,29.6,29.5,29.5,29.4,28.2,27.9,26.5,26.1,23.8,23.7,23.7,22.8,18.5.
将上一步所得产物N-1’-氨基-3’,6’-二氧杂辛基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CHA-2)(150mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,DCM萃取,浓缩,盐酸甲醇搅拌30min,抽滤得白色粉末N-1’-氨基-3’,6’-二氧杂辛基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷61mg,收率38%。
ESI-MSC42H70N2NaO10m/z:785.4929[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.37(s,1H),4.35(m,1H),4.18(m,1H),3.84(m,1H),3.69(m,7H),3.43(m,1H),3.59(m,1H),3.28(m,1H),3.17(m,4H),2.76(m,1H),1.19(s,3H),1.16(s,3H),0.98(s,3H),0.96(s,3H),0.93(s,3H),0.86(s,3H),0.80(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:178.3,175.9,144.1,122.7,107.9,89.3,79.1,78.7,75.8,71.9,55.8,48.9,46.8,46.4,42.2,42.0,39.9,39.8,39.5,38.7,37.0,34.4,33.8,33.2,33.0,31.9,30.9,30.1,30.1,29.7,29.5,29.5,29.4,28.2,26.9,26.5,26.1,24.8,23.7,24.7,22.8,19.5.
实施例15制备衍生物CHA-18
N-1’-氨基-4’,7’,10’-三氧十三烷基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖醛酸苷的合成
将实施例10中步骤2)所得产物齐墩果酸-3-O-(2,3,4,6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖苷)(500mg,0.488mmol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中,加入EDCI(140mg,0.732mmol)和HOBT(98.8mg,0.732mmol)室温下搅拌2h后,于冰浴下滴加4,7,10-三氧-1,13-十三烷二胺(1.64mmol),室温下继续反应4h。TLC监测反应完全后,依次用0.1N稀盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥过夜。抽滤,减压蒸干,再溶于5mL干燥甲醇和二氯甲烷(v/v=3:1)中,加入0.8mL甲醇钠甲醇(1mol/L)溶液,室温反应6h。反应结束后使用732型阳离子交换树脂调PH至中性,抽滤蒸干。经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇=12:1)纯化,得到白色粉末N-1’-氨基-4’,7’,10’-三氧十三烷基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷268mg,两步收率67%。
ESI-MSC46H80N2NaO10m/z:843.5714[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,MeOD)δ:5.29(s,1H),5.03(m,1H),3.91(m,2H),3.80(m,1H),3.78(m,2H),3.62(m,2H),3.54(m,2H),3.41(m,2H),3.30(m,1H),3.28(m,2H),3.12(m,1H),3.10(m,1H),2.88(m,1H),1.10(s,3H),1.06(s,3H),1.01(s,3H),0.74(s,6H),0.71(s,3H),0.69(s,3H),0.68(s,3H).
13C-NMR(150Hz,MeOD)δ:177.3,145.1,122.7,106.9,88.3,79.1,78.7,75.8,71.9,62.1,55.8,47.9,46.8,46.4,42.2,42.0,39.9,39.8,39.5,38.7,37.0,34.4,33.8,33.2,33.0,31.9,30.9,30.1,30.1,29.6,29.5,29.5,29.4,28.2,27.9,26.5,26.1,23.8,23.7,23.7,22.8,18.5,17.5,17.1,15.6,15.2.
将上一步所得产物N-1’-氨基-4’,7’,10’-三氧十三烷基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(164mg,0.2mmol)溶于5mL的THF中,加入TEMPO(0.65mg,4μmol)搅拌溶解,依次加入饱和碳酸氢钠水溶液5mL,以及溴化钾(4mg,0.04mmol),四丁基溴化铵(4.7mg,0.04mmol),此时PH维持在9.5左右。在冰浴下,加入次氯酸钙(0.4mmol),冰浴下搅拌反应5h,加入乙醇淬灭反应,加入5mL水搅拌,DCM萃取,浓缩,盐酸甲醇搅拌30min,抽滤得白色粉末N-1’-氨基-4’,7’,10’-三氧十三烷基-齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃半乳糖醛酸苷(CHA-19)69mg,收率39%。
ESI-MSC46H78N2NaO11m/z:857.5505[M+Na]+。1H-NMR(600Hz,pyridine-d5)δ:5.28(s,1H),5.01(m,1H),3.90(m,2H),3.80(m,1H),3.79(m,2H),3.61(m,2H),3.42(m,2H),3.31(m,1H),3.29(m,2H),3.10(m,1H),3.09(m,1H),2.89(m,1H),1.11(s,3H),1.05(s,3H),1.02(s,3H),0.75(s,6H),0.72(s,3H),0.68(s,3H),0.67(s,3H).
13C-NMR(150Hz,pyridine-d5)δ:179.5,174.0,145.1,140.6,129.6,129.2,127.0,123.2,107.9,88.0,77.2,75.8,73.5,70.6,56.1,48.3,47.2,46.8,42.3,42.2,40.1,39.9,39.1,37.3,36.6,34.8,34.0,33.5,33.3,31.2,28.6,28.2,27.0,26.5,24.2,24.1,24.0,18.8,17.9,16.8,15.8.
本发明还涉及所述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物在制备治疗心肌缺血药物中的应用。作为本发明的一个优选实施例,所述心肌缺血为缺血性心肌病或者心肌梗塞造成的心肌损伤。
本发明还提供一种药物组合物,包括上述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物和药用载体。
药理活性方面实验数据:H2O2诱导的H9c2心肌细胞保护活性研究实验材料
1.衍生物THA-1~~8:衍生物THA-1~~8以二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide,DMSO)溶解,再以DMEM培养基稀释至需要浓度。
2.大鼠心肌细胞株:大鼠心肌细胞H9c2,购于中国科学院细胞库。
实验方法
1.H9c2心肌细胞培养
从中国科学院细胞库购得源于鼠胚胎期心脏的H9c2心肌细胞。细胞在添加胎牛血清的达尔贝克改良的Eagle’s(DMEM)培养基中,于37℃下5%CO2的条件下培养。当细胞生长至融合80%-90%,在相同培养条件下将细胞进行分组处理。
2.分组处理
2.1空白对照组:实验全过程中使用无血清培养液处理。
2.2H2O2模型组:无血清培养液培养6h后,加入终浓度为150μMH2O2作用6h。
2.3试验组(主要活性成分预处理组6h):分别将含有相应浓度的各种活性成分的无血清培养液作用6h后,弃去含药培养液。加入终浓度为150μMH2O2作用6h。
3.MTT法检测细胞活力
取对数生长期的细胞以1×104个/孔的密度接种于96孔板中,在5%CO2、37℃条件培养36h后,进行处理。处理结束后,每孔加入5mg/mlMTT溶液20μl,37℃孵育4h后小心移除培养液,每孔中加入100μlDMSO,微孔板震荡器震荡10min使甲臜结晶充分溶解后,在微孔板扫描酶标仪测560nm处吸光度值(OD值)。将各测试孔的OD值减去本底OD值(无血清培养基加MTT,无细胞),根据各孔OD值计算平均值±SD。细胞存活率%=(加药细胞OD值-本底OD值)/(对照细胞OD值-本底OD值)×100%。
实验结果
表23-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物对H2O2诱导的H9c2心肌细胞保护活性研究
每组中各个值以平均值±标准差表示,##P<0.01模型组与空白组相比;*P<0.05;**P<0.01***P<0.001测试组与模型组相比
从表2可以看出,相较于3-O-[β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齐墩果酸苷和3-O-[β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-乌苏酸苷,本发明提供的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物具有明显的抗心律失常作用。
溶解度范围测定实验数据:
实验材料
齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷和衍生物THA-1、5、12、16、17、18;
重蒸馏水。
色谱条件
色谱柱为C18液相色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.1mol/L醋酸盐缓冲液(70∶30);体积流量:流动相1.0mL/min;柱温30℃;进样量20μL;检测波长213nm。
标准曲线的制备精密称取各个样品6.0mg置于50mL量瓶,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得各个样品储备液(120μg/mL)。分别精密量取各储备液0.3、0.9、1.5、2.0、3.0mL置于20mL量瓶中用甲醇稀释至刻度,摇匀,得质量浓度为1.8、5.4、9.0、12、18μg/mL的各样品溶液。取20μL注入液相色谱仪,记录峰面积(A),以峰面积为纵坐标,质量浓度为横坐标绘制各各样品的标准曲线以及回归方程。
精密度实验取各样品适量,配制成高、中、低3种浓度溶液,分别在1d内测定6次,计算相对标准偏差(RSD)。结果RSD均小于2%,表明精密度良好。
样品在纯水中的平衡溶解度
取过量的各个样品于10mL重蒸馏水中,在37℃下振荡平衡72h,5000r/min离心5min后用水润湿的微孔滤膜滤过,取滤液500μL至10mL量瓶,甲醇稀释至刻度,取20μLHPLC测定,平行做3组。带入回归方程得各个样品在水中的平均平衡溶解度。
由此可见,本发明以齐墩果酸或乌苏酸为先导化合物,通过对齐墩果酸或乌苏酸进行结构,合成了新型的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,合成方法简便,产物纯度高,且通过结构改造,显著增强了3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的溶解度和抗心律失常的活性,具有较好的心肌保护作用,能用于临床的心肌保护药物。
所属领域的普通技术人员应当理解:以上所述仅为本发明的具体实施例而已,并不用于限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,其特征在于,结构式如下:
其中,当所述衍生物的母核为齐墩果烷型时,R1为糖醛酸基或糖基、R2为H原子,R3为甲基,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和环中的一种;
当所述衍生物的母核为乌苏烷型时,R1为糖醛酸基或糖基,R2为甲基,R3为H原子,R4选自H原子、含1~10个碳的烷基、含1~10个碳的烷胺基、含6~11个碳的芳基、含3~7个碳原子的饱和或不饱和环中的一种。
2.根据权利要求1所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,其特征在于,所述糖醛酸基选自D-葡萄糖醛酸、D-甘露糖醛酸、D-半乳糖醛酸中的一种,所述的糖基选自D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖中的一种。
3.根据权利要求1所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物,其特征在于,所述R4选自炔丙基、环己基、苄基、正丙基、苯乙基、N-甲基哌嗪基、吗啉基、哌啶基、对甲氧基苯基、正癸烷基、1-氨基乙基、1-氨基正丙基、1-氨基正丁基、1-氨基-3,6-二氧杂辛基、1-氨基-4,7,10-三氧十三烷基中的一种。
4.一种制备权利要求1所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
将齐墩果酸或乌苏酸的28-羧基经苄基保护,然后在路易斯酸TMSOTf的促进下,将单糖的三氯乙酰亚胺酯给体与苄基保护过的齐墩果酸或乌苏酸上的3-羟基偶联成为糖苷;
所述糖苷经Pd-C催化氢化脱去苄基保护,然后在EDC·HCl和HOBT的条件下与R4NH2合成酰胺;
随后经甲醇/甲醇钠作用脱去单糖上的苯甲酰基保护,最后在TEMPO/Ca(ClO)2/THF的温和氧化条件下,选择性的将单糖上的伯醇基氧化为羧基,得到所述3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物。
5.根据权利要求4所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物的的制备方法,其特征在于,所述单糖的三氯乙酰亚胺酯给体的制备方法包括:
对单糖的所有羟基进行全苯甲酰化保护,然后经溴化氢-醋酸处理,得到单糖C1位溴代为溴苷的单糖给体,该溴苷在氧化银作用下,C1位溴被水解为羟基,再在碱的作用下与三氯乙腈加成得到该单糖的三氯乙酰亚胺酯给体。
6.一种药物组合物,其特征在于,包括根据权利要求1~3中任意一项所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物和药用载体。
7.一种根据权利要求1~3中任意一项所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物在制备治疗心肌缺血药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的3-单糖醛酸氧苷齐墩果烷型和乌苏烷型三萜皂苷衍生物在制备治疗心肌缺血药物中的应用,其特征在于,所述心肌缺血为缺血性心肌病或者心肌梗塞造成的心肌损伤。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111434672A (zh) * | 2019-01-14 | 2020-07-21 | 天津科技大学 | 甘草次酸糖苷的制备方法和在甜味剂中的应用 |
CN111511921A (zh) * | 2017-12-21 | 2020-08-07 | 植物生物科学有限公司 | 代谢工程 |
CN113105520A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-07-13 | 张洪胜 | 一种治疗类风湿关节炎麻黄碱衍生物及其制备方法 |
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102250190A (zh) * | 2011-05-30 | 2011-11-23 | 江西本草天工科技有限责任公司 | 一种齐墩果酸皂苷类衍生物、其盐的制备方法及其用途 |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102250190A (zh) * | 2011-05-30 | 2011-11-23 | 江西本草天工科技有限责任公司 | 一种齐墩果酸皂苷类衍生物、其盐的制备方法及其用途 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
GAOPENG SONG ET AL.: ""Structure-activity relationships of 3-O-β-chacotriosyl ursolic acid derivatives as novel H5N1 entry inhibitors"", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
QING-CHAO LIU ET AL.: ""Synthesis and biological evaluation of oleanolic acid derivatives as PTP1B inhibitors"", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
YANG LIU ET AL.: ""Synthesis and tumor cytotoxicity of novel amide derivatives of β-hederin"", 《MOLECULES》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111511921A (zh) * | 2017-12-21 | 2020-08-07 | 植物生物科学有限公司 | 代谢工程 |
CN111434672A (zh) * | 2019-01-14 | 2020-07-21 | 天津科技大学 | 甘草次酸糖苷的制备方法和在甜味剂中的应用 |
CN113143934A (zh) * | 2021-04-19 | 2021-07-23 | 南通大学 | 熊果酸衍生物在制备预防或治疗心血管疾病药物中的应用 |
CN113143934B (zh) * | 2021-04-19 | 2021-11-30 | 南通大学 | 熊果酸衍生物在制备预防或治疗心血管疾病药物中的应用 |
CN113105520A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-07-13 | 张洪胜 | 一种治疗类风湿关节炎麻黄碱衍生物及其制备方法 |
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