CN108456239A

CN108456239A - 具有抗肿瘤作用的化合物ba-x及其制备方法和应用

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Publication number: CN108456239A
Application number: CN201710089202.1A
Authority: CN
Inventors: 徐冰; 王鹏龙; 雷鹏程
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-02-20
Filing date: 2017-02-20
Publication date: 2018-08-28

Abstract

本发明提供了一类具有结构通式1的化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明化合物具有明显抑制肿瘤细胞系(HepG‑2、HT‑29、Hela、BGC‑823、A549)生长的活性，但对犬肾上皮细胞(MDCK)系毒性较小。其中，化合物BH‑26的对人结肠癌细胞系HT‑29、人宫颈癌细胞系Hela以及人胃癌细胞系BGC823抗增殖活性优于阳性药顺铂；但对犬正常肾上皮细胞MDCK的细胞毒性明显低于阳性药顺铂。

Description

具有抗肿瘤作用的化合物BA-X及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种化合物及其制备方法和应用，具体一种具有抗肿瘤活性的化合物及其制备方法和应用，属于药物化学领域。

背景技术

肿瘤目前仍是威胁人类生命健康的重大疾病之一，目前尚没有有效的手段，化疗仍是目前临床治疗恶性肿瘤主要手段，但这类药物缺乏选择性，在杀伤癌细胞的同时也会杀死正常细胞，因此该类药物会引起严重的毒副作用，例如：肾毒性、肝毒性、神经毒性等等。因此寻找对于获得高效、低毒、选择性强的抗癌药物意义重大。

课题组前期借鉴中药配伍原则和药物化学拼合原理，辅以计算机辅助药物设计方法，以中药中三萜类抗肿瘤成分如齐墩果酸、白桦脂酸、甘草次酸、等为原料，设计并合成100多个全新三萜类抗肿瘤衍生物。通过综合初步药效学评价发现三萜类化合物及其衍生物对多种肿瘤细胞系(Bel-7402、HepG2、HT-29和Hela等)均具有较强的抗肿瘤作用，并通过综合初步药效学、毒理学、药代动力学评价，获得结构新颖、药效选择性高和低毒性先导化合物TBA，体外抗肿瘤效果与抗癌阳性药(顺铂、阿霉素)相当。同时研究表明在药物分子中引入氨基酸或者寡肽可增加药物的选择性和溶解性。

本发明以TBA为原料，运用药物化学的相关合成方法在TBA中引入氨基酸和寡肽片段合成了本发明化合物(27种TBA氨基酸、寡肽衍生物)；对该类化合物的活性评价主要围绕抗肿瘤(尤其肝癌)方面展开，分别测试了类似物对5种癌症细胞系(Hela、BGC-823、HepG2、A549、HT-29)和正常细胞系(MDCK)的细胞毒活性。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种具有结构通式1的化合物及其制备方法。

本发明的目的之二是提供通式化合物1在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的目的之三是提供一种具有抗肿瘤作用的药物组合物。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

具有通式1结构的化合物或其药学上可接受的盐，

进一步，本发明化合物编号及结构式如下：

进一步，所述化合物可加入制剂领域常规辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、注射剂等常规剂型。

本发明所述化合物的制备方法包括如下步骤：

本发明化合物按如下方法制备：

化合物BH-01的制备方法：将白桦脂酸溶于有机溶剂，与氯代川芎嗪在碱性条件下生成BH-01；

化合物BH-02的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Boc-L-甘氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-02；

化合物BH-03的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Cbz-L-苯丙氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-03；

化合物BH-04的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Boc-L-丙氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-04；

化合物BH-05的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Cbz-L-天门冬氨酸-苄酯在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-05；

化合物BH-06的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Boc-L-脯氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-06；

化合物BH-07的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Fmoc-L-亮氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-07；

化合物BH-08的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Fmoc-L-异亮氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-08；

化合物BH-09的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与L-焦谷氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-09；

化合物BH-10的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与N2，N6-双Cbz-赖氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-10；

化合物BH-11的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Cbz-色氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-11；

化合物BH-12的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Boc-L-肌氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-12；

化合物BH-13的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与Cbz-L-缬氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-13；

化合物BH-14的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与N-Cbz-TBS-羟脯氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-14；

化合物BH-15的制备方法：将将BH-01溶于有机溶剂，与N-Cbz-TBS-苏氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-15；

化合物BH-16的制备方法：将BH-01溶于有机溶剂，与N-Cbz-TBS-苏氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-16；

化合物BH-17的制备方法：将BH-02溶于有机溶剂，与Boc-甘氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-17；

化合物BH-18的制备方法：将将BH-12溶于有机溶剂，与Boc-肌氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-18；

化合物BH-19的制备方法：将BH-12溶于有机溶剂，与Boc-脯氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-19；

化合物BH-20的制备方法：将BH-02溶于有机溶剂，与Boc-丙氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-20；

化合物BH-21的制备方法：将BH-02溶于有机溶剂，与Boc-脯氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-21；

化合物BH-22的制备方法：将BH-02溶于有机溶剂，与Boc-肌氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-22；

化合物BH-23的制备方法：将BH-04溶于有机溶剂，与Boc-丙氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-23；

化合物BH-24的制备方法：将BH-04溶于有机溶剂，与Boc-甘氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-24；

化合物BH-25的制备方法：将BH-04溶于有机溶剂，与Boc-脯氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-25；

化合物BH-26的制备方法：将BH-04溶于有机溶剂，与Boc-肌氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-26；

化合物BH-27的制备方法：将将BH-12溶于有机溶剂，与Boc-甘氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-27；

化合物BH-28的制备方法：将BH-12溶于有机溶剂，与Boc-丙氨酸在缩合剂、催化剂和脱保护剂作用下生成BH-28；

其中，上述反应在-20℃至250℃下进行；所述有机溶剂是含有1-20个碳原子的醚、醇、烷烃、芳香烃、酮、卤代烷、酰胺、腈、酯或者它们各种比例的混合物；所述催化剂为4-二甲氨基吡啶(DMAP)；所述缩合剂为1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)；所用的脱保护剂为三氟乙酸(TFA)、钯碳(Pd/C)、氢氧化钯碳(Pd(OH)₂/C)、哌啶(Piperidine)和四丁基氟化铵(TBAF)；此外，所用碱中，无机碱为碳酸钾。

进一步，上述制备方法中，相应的原料与氯代川芎嗪的摩尔比为1∶0.1～1∶10；相应的原料与缩合剂的摩尔比为1∶0.1～1∶10；相应的原料与碱的摩尔比为1∶0.1～1∶10；相应的原料与催化剂的摩尔比为1∶0.1～1∶10。

本发明反应路线：

路线1中间体5的合成

反应条件和试剂：(a)AcOH，30％H₂O₂，reflux，90℃，6h；(b)Ac₂O，reflux，105℃，2h；(c)THF∶MeOH∶H₂O＝3∶1∶1，NaOH，1h；(d)，THF，Tscl，TEA，DMAP，12h.

路线2、BH-01的合成

反应条件和试剂：(a)DMF，dry K₂CO₃，25℃，12h.

路线3、BH-02-BH-13的合成

反应条件和试剂：(a)Boc-amino acids or Cbz-amino acids，DCM，DMAP，EDCI，25℃，12h；(b)HClg in EA，0℃，1h or Pd/C(10％)，MeOH，25℃，12h.

路线4、BH-14-BH-16的合成

反应条件和试剂：(a)Boc-amino acids or Cbz-amino acids，DCM，DMAP，EDCI，25℃，12h；(b)HClg in EA，0℃，1h or Pd/C(10％)，MeOH，25℃，12h；(c)TBAF，THF，1.5h.

路线5、BH-17-BH-28的合成

反应条件和试剂：(a)Boc-amino acids，HoBt，EDCl，DIPEA，25℃，12h；(b)HClg inEA，0℃，1h.

本发明还提供式1化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

进一步，所述肿瘤为肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌细胞系。

本发明还提供一种药物组合物，该组合物包含以治疗有效量存在的式1化合物或其药学可接受的盐与至少一种药学可接受的赋形剂的混合物。

进一步，所述组合物还包含至少一种常规抗癌药。

更进一步，所述抗癌药选自环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、阿霉素、依托泊苷、伊立替康、奥沙利铂、顺铂或健择。

本发明还提供治疗癌症的方法，包括给予患者给药有效量的式1化合物或其药学上可接受的盐。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的赋形剂，例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。

本发明所述“药学可接受的”表示化合物或组合物必须在化学上和/或毒理学上与制剂中包含的其他成分相容。

所述“治疗有效量”表示本发明化合物治疗或预防特定疾病或症状；减弱、改善或消除特定疾病的一种或多种症状；或预防或延迟特定疾病或症状的发作的量。

本发明化合物具有明显抑制肿瘤细胞系(HepG-2、HT-29、Hela、BGC-823、A549)生长的活性但对犬肾上皮细胞系(MDCK)系毒性较小。其中，化合物BH-26的对人结肠癌细胞系HT-29、人宫颈癌细胞系Hela以及人肺癌细胞系A549抗增殖活性优于阳性药顺铂；但对犬肾上皮细胞系(MDCK)毒性明显低于阳性药顺铂。

实验例1 MTT法观察本发明组合物TBA-Y对肿瘤细胞和正常细胞增殖影响

1.仪器与材料

Thermo 3111型CO2培养箱；HFsafe生物安全柜；Multiskan GO酶标仪；京立牌LD5-2B型台式低速离心机；Olympus IX71倒置荧光显微镜改良型RPMI-1640培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶溶液、噻唑蓝、磷酸盐缓冲液(赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司)；二甲基亚砜(DMSO)；

人肝癌细胞系HepG2；人结肠癌细胞系HT-29；人宫颈癌细胞系Hela；人肺癌细胞系A549；人胃癌细胞系BCG-823；犬肾上皮细胞系MDCK。

实验药物：本发明化合物BH-X_1-28(分别按实施例2-28制备)；反应原料白桦脂酸(BA)、川芎嗪(TMP)；阳性药物注射用顺铂(301001CF；齐鲁制药有限公司)；

2.方法

2.1不同细胞株的培养

HepG2、HT-29、A549和BCG-823细胞培养在含10％胎牛血清的1640培养液中，放置于37℃、5％的CO₂培养箱中温育。细胞均呈贴壁状态生长，在倒置显微镜下观察生长状况，待细胞数量适量时传代培养。

Hela，MDCK细胞培养在含10％胎牛血清的DMEM培养液中，放置于37℃、5％的CO₂培养箱中温育。细胞均呈贴壁状态生长，在倒置显微镜下观察生长状况，待细胞数量适量时传代培养。

2.2初筛细胞抑制率

取对数生长期的HepG2、HT-29、Hela、BCG-823、A549和MDCK细胞进行试验，胰蛋白酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬液，计数后调整细胞浓度为3×104cells·mL-1，以每孔100μL细胞液的数量接种于96孔培养板中，随后置于含5％CO2的37℃培养箱中培养24h使细胞贴壁。每孔分别加入100μL用新鲜培养基稀释好的待测化合物，使药物最终浓度分别为20μM和40μM。设置细胞对照组及空白对照组，药物组每浓度设置4个复孔，细胞对照组和空白对照组设置6个复孔。培养箱中继续培养72h后，每孔加20μL 5mg·mL-1MTT继续孵育4h，弃去上清，再加150μL DMSO，振荡10min，酶标仪490nm波长测得吸光度值并记录结果，抑制率％＝[1-(A给药-A空白)/(A正常-A空白)]×100％。将20μM浓度下，抑制率大于50％的化合物进行复筛，计算EC₅₀值。

2.3复筛细胞抑制率

操作方法如2.2项，取对数生长期的HepG2、HT-29、Hela、BCG-823、A549和MDCK细胞，以3×103/孔的数量接种于96孔培养板中，在含5％CO₂的湿化培养箱中37℃培养24h；每孔分别加入100μL待测化合物，使最终浓度分别为20，10，5，2.5，1.25μM。设置细胞对照组及空白对照组，药物组每浓度重复4孔，细胞对照组和空白对照组重复3孔。培养箱中继续培养72h后，每孔加20μL MTT孵育4h，弃去上清，再加100μL DMSO，振荡10min，酶标仪490nm波长测得吸光度值，记录结果，并计算化合物的IC₅₀值，细胞抑制率(％)＝[1-(A给药-A空白)/(A正常-A空白)]×100％。

3.结果

3.1BH-01-BH-28以及阳性药(顺铂)对5种肿瘤细胞系(HepG2、HT-29、Hela、BCG-823和A549)和正常犬上皮细胞(MDCK)的EC₅₀值如表1所示。

由表3.1可以看出，大部分衍生物对肿瘤细胞HepG2、HT-29、Hela、BCG-823和A549均表现出较好的抑制增殖的作用，并且抗肿瘤活性优于前体TBA。TBA氨基酸衍生物中BH-02、BH-04、BH-06、BH-09、BH-10和BH-12表现出很强的抗肿瘤作用，其活性与阳性药顺铂相当，并且对犬上皮细胞MDCK表现出一定的细胞毒选择性。几乎所有的TBA二肽衍生物表现出优于阳性药顺铂的体外抗肿瘤活性，同时对犬肾上皮MDCK细胞也表现出一定的细胞毒选择性。在TBA这些衍生物中化合物BH-26活性最好，其对各种肿瘤细胞均表现出较好的细胞毒活性，其抗肿瘤活性优于阳性药顺铂，例如化合物BH-26对HT-29、Hela、BGC-823的IC₅₀(1.70±0.34μM、1.74±0.99μM、1.79±0.28μM)要显著低于阳性药顺铂(4.1±1.17μM、5.60±0.78μM、4.25±0.32μM)。

构效关系分析表明，不同性质的TBA氨基酸的衍生物表现出不同的生物活性，如TBA脂肪族氨基酸衍生物体外抗肿瘤活性优于芳香族、杂环族氨基酸衍生物，如BH-03(苯丙氨酸衍生物)，BH-11(色氨酸衍生物)活性弱于脂肪族氨基酸衍生物活性(如BH-02、BH-04、BH-10、BH-12)。小分子脂肪族氨基酸衍生物的活性优于分子量较大的脂肪族氨基酸衍生物，如BH-02(甘氨酸衍生物)，BH-04(丙氨酸衍生物)＞BH-07(亮氨酸衍生物)，BH-08(异亮氨酸衍生物)；二肽衍生物的活性优于单个氨基酸的衍生物。在极性带电荷的氨基酸中，极性带正电荷的氨基酸(碱性氨基酸)衍生物的活性要优于极性带负电荷的氨基酸(酸性氨基酸)衍生物，如BH-10(赖氨酸衍生物)活性优于BH-05(天冬氨酸衍生物)。

表1 TBA氨基酸、二肽衍生物BH-X对不同肿瘤细胞株、MDCK细胞的IC50值

注明：a：当IC₅₀＞20.0μM时，我们认为其活性较低；

4.结论

本发明化合物表现出抑制肿瘤细胞系(Bel-7402，HepG2，HT-29，Hela，MCF-7)增殖的活性。其中，化合物BH-26的抗肿瘤活性优于阳性药顺铂，其对肿瘤细胞的细胞毒活性是阳性药顺铂的两倍，同时对犬肾上皮MDCK细胞的细胞毒活性低于顺铂，表现出一定的细胞毒选择性。表明该类化合物可用于抗肿瘤药物的研究。

具体实施方式

实施例1 中间体化合物1(2-氯代甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)的制备

取川芎嗪2.176g(16mmol)溶于20ml冰乙酸，加入1.8ml(16mmol)30％过氧化氢于90℃反应4h，然后补充1.8ml(16mmol)30％过氧化氢继续反应2h，TLC监测反应完全，加入适量的亚硫酸钠中和掉过量的过氧化氢，反应液过滤，滤液冷却至室温，以50％氢氧化钠调pH至10，二氯甲烷萃取，收集有机层，饱和食盐水脱水，无水硫酸钠干燥，减压回收溶剂，得到白色川芎嗪单氮氧化合物粗品(2)。该粗品加入1.51ml(16mmol)乙酸酐，于105℃加热回流2.5h，TLC监测至反应完全后，减压蒸干，得到黑色浆状川芎嗪乙酰化物(3)。将次此黑色浆状物置于20ml(THF∶MeOH∶H2O＝3∶1∶1)的溶液，分批加入1.92g(48mmol)氢氧化钠，搅拌反应2h，二氯甲烷萃取，收集有机层，饱和食盐水脱水，无水硫酸钠干燥，过滤，减压回收溶剂得到羟基川芎嗪粗品，以正己烷重结晶，得1.85g黄色针状结晶(4)，将上步制备的TMP-OH黄色结晶溶于20ml无水四氢呋喃中，然后加入3.03g(15.9mmol)Tscl、2.464g(24.4mmol)TEA、0.15g(12.2mmol)DMAP，搅拌过夜，二氯甲烷萃取，饱和食盐水脱水，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂，得到淡黄色氯代川芎嗪粗品，适量硅胶拌样，硅胶柱分离[V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)＝10∶1]得无色透明的氯代川芎嗪1.86g，收率90.3％。

实施例3 BH-01的制备

称取2.28g(5mmol)白桦脂酸，0.69g(5mmol)无水碳酸钾于50ml反应瓶中，加入25mlDMF，拌半小时后加入1.02g(6mmol)氯代川芎嗪，氮气保护下，于室温下反应12h，TLC检测至反应完全，加入一定量的水终止反应，随后用二氯甲烷萃取，收集有机层，适量无水硫酸钠除水，减压蒸干，硅胶柱分离[V(石油醚)∶V(丙酮)＝10∶1]得白色固体2.66g，收率95％。mp：184.6-185.4℃，[α]_D＝+16(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(CDCl₃)(ppm)：0.78，0.80，0.82，0.96，0.98，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.51(s，3H，-CH₃)，2.53(s，3H，-CH₃)，2.57(s，3H，-CH₃)，3.02(m，1H)，3.19(m，1H)，4.61，4.74(each，brs，1H，＝CH₂)，5.20，5.23(each，d，J＝12.5Hz，1H，-CH₂)；¹³C-NMR(CDCl₃)(ppm)：14.7，15.4，15.9，16.1，18.3，19.4，20.4(-CH₃)，20.9，21.4(-CH₃)，21.6(-CH₃)，25.5，27.4，28.0，29.7，30.6，32.1，34.4，36.9，37.2，38.1，38.7，38.9，40.7，42.4，46.9，49.5，50.6，55.4，56.7，64.3(-CH₂)，79.0，109.6，145.4，148.7，148.9，150.5，150.9，175.5(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：591.45212[M+H]⁺，calcd.forC₃₈H₅₈N₂O₃590.44474.

实施例4 化合物BH-02的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、77.04mg(0.44mmol)Boc-L-甘氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3MHCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的饱和NaHCO₃水溶液调节pH至8-9左右，二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体。收率：75.3％。mp：104.7-105.4℃，[α]_D＝+22(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.83，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(s，each，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methylof TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.44-3.47(m，2H，-CH₂NH₂)，4.50-4.53(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.6，18.3，19.5，20.6(-CH₃)，21.0，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，25.6，28.1，30.7，32.2，34.4，37.1，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5(-CH₂NH₂)，47.0，49.6，50.6，55.6，56.8，64.5(-CH₂)，81.9(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，173.9(-CONH₂)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：648.47040[M+H]⁺，calcd.for C₄₀H₆₁N₃O₄647.46621.

实施例5 化合物BH-03的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、83.2mg(0.44mmol)Cbz-L-苯丙氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；减压抽滤除去钯碳后，滤液浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：65.3％；mp：82.0-82.7℃；[α]_D＝+186(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.76，0.77，0.80，0.82，0.94(s，each，3H，5×-CH₃，methylof BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.82-2.86(m，1H，-CH₂CH-)，2.96-3.02(m，1H，-CCHCH₂-)，3.15-3.18(m，1H，-CH₂CH-)，3.72-3.76(m，1H，-CHNH₂)，4.49-4.52(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，7.19-7.33(m，5H，-C₆H₅)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.6，15.9，16.2，16.6，18.1，19.3，20.5(-CH₃)，20.9，21.4(-CH₃)，21.7(-CH3)，23.7，25.5，28.0，29.6，30.5，32.0，34.2，36.9，37.1，37.9，38.1，38.3，40.7，41.1，42.4，46.9，49.5，50.4，55.4，56.1，56.7，64.4(-CH₂)，81.9，109.7(-CH＝C-)，126.8，128.6，129.3，137.3，145.3，148.8，150.5，156.0(-CH＝C-)，174.4，175.5(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：738.51666[M+H]⁺，calcd.for C₄₇H₆₇N₃O₄737.51316.

实施例6 化合物BH-04的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、83.2mg(0.44mmol)Boc-L-丙氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3MHCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的饱和NaHCO₃水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：73.0％。mp：126.3-127.2℃，[α]_D＝+20(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.84，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methylof TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.45-3.55(m，1H，-CHNH₂)，4.48-4.51(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，20.6(-CH₃)，20.8，21.0，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.8，30.7，31.1，32.2，34.4，37.0，37.2，38.1，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，50.5(-CHNH₂)，50.6，55.5，56.8，64.5(-CH₂)，81.6(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-COCH-)，176.3(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：662.48627[M+H]⁺，calcd.for C₄₁H₆₃N₃O₄661.48186.

实施例7 化合物BH-05的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、157.24mg(0.44mmol)Cbz-L-天门冬氨酸-苄酯、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；减压抽滤除去钯碳后，滤液浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：45.6％。mp：＞210℃，[α]_D＝+36(c 0.50，MeOH)；HRMS(ESI)m/z：706.47534[M+H]⁺，calcd.for C₄₂H₆₃N₃O₆705.47169.

实施例8 化合物BH-06的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、83.2mg(0.44mmol)Boc-L-脯氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：72.7％。mp：147.4-148.3℃，[α]_D＝+13(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.83，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.22-3.25(m，1H，-CH₂CH₂-)，4.10-4.13(m，1H，-NHCHCH₂-)，4.47-4.56(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.2，19.5，20.6(-CH₃)，21.0，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，24.6，25.5，28.2，29.7，29.8，30.6，32.1，34.3，37.0，37.2，38.2，38.4，40.8，42.5，46.4，47.0，49.6，50.6，55.5，56.8，59.7(-NHCH-)，64.5(-CH₂)，83.5(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，171.5(-COCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：688.50122[M+H]⁺，calcd.for C₄₃H₆₅N₃O₄687.49751.

实施例9 化合物BH-07的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、155.50mg(0.44mmol)Fmoc-L-亮氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将其溶于5mLDMF中，然后加入约60ul的哌啶，冰盐浴约搅拌1h；反应液置于油泵上减压旋去大部分DMF后，加入20mlDCM稀释后用水洗涤3次，饱和NaCl溶液洗涤1次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：58.4％。mp：81.8-82.5℃，[α]_D＝+24(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.83(s，each，3H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.84(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.48(brs，1H，-CHNH₂)，4.48-4.51(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.8，18.3，19.5，20.6(-CH₃)，21.0，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，22.0，23.1，23.8，25.0，25.6，28.2，29.8，30.7，32.2，34.4，37.1，37.2，38.1，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.6，55.6，56.8(-CHNH₂)，64.5(-CH₂)，69.1，81.9(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：704.53546[M+H]⁺，calcd.for C₄₄H₆₉N₃O₄703.52881.

实施例10 化合物BH-08的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、155.50mg(0.44mmol)Fmoc-L-异亮氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将其溶于5mLDMF中，然后加入约60ul的哌啶，冰盐浴约搅拌1h；反应液置于油泵上减压旋去大部分DMF后，加入20mlDCM稀释后用水洗涤3次，饱和NaCl溶液洗涤1次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：60.5％。mp：88.6-89.4℃，[α]_D＝+27(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.82(s，each，3H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.85(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.48(brs，1H，-CHNH₂)，4.50-4.53(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)11.9，12.0，14.8，15.9，16.0，16.3，16.9，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，24.8，25.6，26.2，28.2，29.8，30.7，32.2，34.4，37.1，37.2，37.9，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，55.6，56.8(-CH-NH₂)，59.3，64.5(-CH₂)，82.5(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，136.9，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：704.52814[M+H]⁺，calcd.for C₄₄H₆₉N₃O₄703.52881.

实施例11 化合物BH-09的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、56.72mg(0.44mmol)L-焦谷氨酸、97.20mg(0.50mol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]检测反应进程，反应液中加入20ml二氯甲烷稀释后依次用10ml水，10ml饱和NaCl溶液洗涤反应液，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；收率：52.8％。mp：118.2-119.1℃，[α]_D＝+24(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.82，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.83(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，4.22-4.24(m，1H，-NHCH-)，4.52-4.55(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，18.5，20.5，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.7(-CH₃)，23.8，25.2，25.6，28.2，29.4，29.7，29.8，30.7，32.1，34.3，37.0，37.2，38.1，38.2，38.4，40.8，42.5，47.0(-CH-NH-)，49.6，50.6，55.5，55.8，56.8，64.4(-CH₂)，82.7(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.6，148.8，149.1，150.6，151.0(-CH＝C-)，171.7(-COCH-)，175.7(-COO-)，177.7(-CONH-)；HRMS(ESI)m/z：702.48419.[M+H]⁺，calcd.for C₄₃H₆₃N₃O₅701.47677.

实施例12 化合物BH-10的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、210.13mg(0.44mmol)N₂，N₆-双Cbz-赖氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；减压抽滤除去钯碳后，滤液浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率56.8％。mp：＞220℃，[α]_D＝+30(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CD₃OD)：δ(ppm)0.67，0.88，0.89，0.91，1.00(s，each，3H，5×-CH₃，methylof BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.52，2.53，2.60(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.93-3.01(m，2H，-CH₂NH₂)，3.01-3.04(m，1H，-CCHCH₂-)，3.57-3.60(m，1H，-CHNH₂)，4.52-4.55(m，1H，-OCOCH-)，4.61，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.23，5.27(d，each，1H，J＝20Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CD₃Cl+CD₃OD)：δ(ppm)14.0，15.1，15.5，15.9，17.6，18.5，19.3(-CH₃)，20.3(-CH₃)，20.4(-CH₃)，21.7，23.1，25.0，26.4，27.4，29.1，30.0，31.5，31.6，33.7，36.3，36.6，37.4，37.7，37.9，38.7，40.2，41.9，46.6，48.9，50.0，52.9，55.0，56.3(-CH-NH₂)，63.5(-CH₂)，82.5(-OCOCH-)，111.5(-CH＝C-)，145.2，148.6，149.3，150.0，150.8(-CH＝C-)，168.7(-COCH-)，175.4(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：719.54608.[M+H]⁺，calcd.forC₄₄H₇₀N₄O₄718.53971.

实施例13 化合物BH-11的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、148.88mg(0.44mmol)Cbz-色氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；减压抽滤除去钯碳后，滤液浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率61.2％。mp：119.8-120.6℃，[α]_D＝+30(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.83(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.94(s，3H，-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.49，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.95-3.02(m，2H，-CH₂NH₂)，3.35-3.37(m，1H，-CCHCH₂-)，3.70-3.81(m，1H，-CHNH₂)，4.45-4.53(m，1H，-OCOCH-)，4.68，4.72(brs，each，1H，＝CH₂)，5.18，5.21(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，7.05-7.20，7.29-7.37，7.60-7.63(m，4H，-C₆H₅)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.8，30.1，30.7，32.2，34.4，37.1，37.2，38.1，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.6，54.9，55.5，56.8(-CH-NH₂)，64.5(-CH₂)，82.5(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，110.3，111.6，111.4，118.8，119.6，122.3，123.8(-NHCH-)，127.3，136.5，145.5，148.9，148.9，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-CO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺777.53125，calcd.for C₄₉H₆₈N₄O₄776.52406.

实施例14 化合物BH-12的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、83.25mg(0.44mmol)Boc-L-肌氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：76.9％.mp：172.6-173.4℃，[α]_D＝+42(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.84，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.40，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.52(brs，2H，-CH₂NH-)，4.48-4.51(m，1H，-OCOCH-)，4.56，4.59(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.6，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，25.6，28.2，29.8，30.7，32.2，34.4，34.6，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.6，50.7，55.6，56.8(-CH-NH₂)，64.5(-CH₂)，83.2(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，168.6(-COCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺662.48975，calcd.for C₄₁H₆₃N₃O₄661.48186.

实施例15 化合物BH-13的制备

依次称取200.00mg(0.338mmol)TBA、110.56mg(0.44mmol)Cbz-L-缬氨酸、97.20mg(0.50mmol)EDCI和4.12mg(0.038mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：52.3％。mp：＞220℃，[α]_D＝+20(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.82，0.94(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.85(brs，6H，2×-CH₃，methyl ofBA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.33-3.34(m，1H，-CHNH₂)，4.49-4.52(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.8，18.3，17.1，18.3，19.5，19.6，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，25.6，28.2，29.8，30.7，31.6，32.2，34.4，37.1，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.6，55.6，56.8(-CH-NH₂)，60.2，64.5(-CH₂)，82.2(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺690.52112，calcd.for C₄₃H₆₇N₃O₄689.51316.

实施例16 化合物BH-14的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)TBA、284.4mg(0.7563mmol)N-Cbz-TBS-羟脯氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCl、5.85mg(0.054mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；抽滤除去钯碳后，滤液减压浓缩，得到白色固体。将其溶于20ml THF中，然后加入500ul含有1M TBAF的THF溶液，室温下反应2h，减压蒸干，硅胶柱分离，[V(环己烷)∶V(乙酸乙酯)＝3∶1]得到白色固体，收率45.8％。HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺704.53668，理论计算：C₄₁H₆₃N₃O₄704.49242.

实施例17 化合物BH-15的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)TBA、276mg(0.7563mmol)N-Cbz-TBS-苏氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCI、5.85mg(0.054mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；抽滤除去钯碳后，滤液减压浓缩，得到白色固体。将其溶于20mlTHF中，然后加入500ul含有1M TBAF的THF溶液，室温下反应2h，减压蒸干，硅胶柱分离，[V(环己烷)∶V(乙酸乙酯)＝3∶1]得到白色固体，收率46.7％。mp：103.1-103.9℃，[α]_D＝-4(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.85，0.86(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.97-3.00(m，1H，-CCHCH₂-)，3.39-3.58(m，1H，-CHNH₂)，3.85-3.98(m，1H，-CHOH)，4.54-4.55(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.19(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.8，18.3，19.5(CH₃CH-)，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，25.5，27.7，28.2，29.0，29.7，30.6，32.1，34.3，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.5，55.6(-CH-NH₂)，56.8，64.5(-CH₂)，67.2(-CHOH)，82.6(-OCOCH-)，95.8，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.75(-CO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺692.49957，calcd.for C₄₂H₆₅N₃O₅691.49242.

实施例18 化合物BH-16的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)TBA、265.5mg(0.7563mmol)N-Cbz-TBS-苏氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCI、5.85mg(0.054mmol)DMAP置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测TBA原料基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；将该固体溶于一定量甲醇后，加入适量10％钯碳，多次抽真空并通入氢气置换空气后，在氢气保护下搅拌过夜；抽滤除去钯碳后，滤液减压浓缩得到白色固体。将其溶于20mlTHF中，然后加入500ul含有1M TBAF的THF溶液，室温下反应2h，减压蒸干，硅胶柱分离，[V(环己烷)∶V(乙酸乙酯)＝3∶1]得到白色固体，收率47.5％。mp：133.2-134.1℃，[α]_D＝+16(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.82，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.83(brs，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.66(s，3H，30-CH₃ofBA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.97-3.00(m，1H，-CCHCH₂-)，3.32-3.35(s，1H，-CHNH₂)，3.63(brs，1H，-OH)，3.72-3.75(m，1H，-CH₂OH)，3.86-3.94(m，1H，-CH₂OH)，4.52-4.56(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.19(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，24.3，25.5，28.1，29.7，30.6，32.1，34.3，37.0，37.2，38.1，38.2，38.4，40.8，42.5，47.0，49.6，50.5，55.5(-CH-NH₂)，56.8，62.5(-CH₂OH)，64.5(-CH₂)，82.4(-OCOCH-)，82.7，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺678.48480，calcd.forC₄₁H₆₃N₃O₅677.47677

实施例19 化合物BH-17的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)BH-02、132.41mg(0.7563mmol)Boc-甘氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCI、116.68mg(0.8643mmol)HOBT和209.06mg(1.6206mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-02基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3MHCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：52.8％。mp：130.8-131.7℃，[α]_D＝+15(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CD₃OD)：δ(ppm)0.67，0.98(s，each，3H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.88(brs，9H，3×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.52，2.53，2.60(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.98-3.04(m，1H，-CCHCH₂-)，3.35(s，2H，-CH₂NH₂)，3.98(s，2H，-CH₂NH-)，4.50-4.53(m，1H，-OCOCH-)，4.61，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.23，5.26(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，5.51(s，1H，-NH-).¹³C-NMR(125MHz，CD₃OD)：δ(ppm)15.1，16.4，16.7，16.9，19.2，19.5，20.4，21.2(-CH₃)，21.4(-CH₃)，22.0(-CH₃)，24.6，26.7，28.4，30.7，31.6，33.1，35.4，37.8，38.2，39.0，39.6，41.9(-CH₂-NH-)，42.1，43.5(-CH₂-NH₂)，45.6，50.6，51.7，54.8，56.8，57.9，65.0(-CH₂)，83.4(-OCOCH-)，110.4(-CH＝C-)，147.1，150.3，150.7，151.7，152.5(-CH＝C-)，160.0，171.3(-CONH-)，175.7(-COCH₂-)，177.0(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺705.49500，calcd.forC₄₂H₆₄N₄O₅704.48767.

实施例20 化合物BH-18的制备

依次称取350mg(0.5287mmol)BH-12、140.05mg(0.7402mmol)Boc-肌氨酸、162.2mg(0.846mmol)EDCI、114.2mg(0.8460mmol)HOBT和204.6mg(1.586mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-12原料基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后用饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：62.3％。mp：118.4-119.2℃，[α]_D＝+12(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.76，0.81，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，1.66(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，3.04-3.17(m，2H，-CH₂NH-)，2.98(s，3H，CH₃-N-)，2.98-3.04(m，1H，-CCHCH₂-)，3.96(s，3H，CH₃-NH-)，3.96-4.12(m，2H，-CH₂N-)，4.50-4.51(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.70(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.19(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.4，19.5，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.7，30.7，32.2，33.4，34.4，35.8(CH₃N-)，37.0，37.3，38.0，38.2，38.8，39.0，40.8，42.5，47.0，49.6，50.6，51.8，55.4(-CH-NH₂)，56.8，64.5(-CH₂)，79.1(CH₃NH-)，82.9(-OCOCH-)，109.7(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.7，151.1(-CH＝C-)，163.3，168.4(-CH₂COO-)，175.7(-CO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺733.52527，calcd.forC₄₄H₆₅N₃O₅732.51897.

实施例21 化合物BH-19的制备

依次称取350mg(0.5287mmol)BH-12、159.33mg(0.7402mmol)Boc-脯氨酸、162.2mg(0.846mmol)EDCI、114.2mg(0.8460mmol)HOBT和204.6mg(1.586mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-12基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：60.7％。mp：158.5-159.3℃，[α]_D＝+52(c0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.81，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methylof BA)，0.82(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.50，2.53，2.56(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.95-2.99(m，1H，-CCHCH₂-)，3.11(s，3H，CH₃N-)，3.42，3.46(brs，each，1H，-CH₂-NH-)，3.68-3.71(m，1H，-CHNH-)，4.51-4.53(m，1H，-OCOCH-)，4.59，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.18，5.21(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，20.4，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.9，25.6，28.2，29.4，29.8，30.7，32.1，34.3，36.4，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.4，50.6，55.5，56.8，58.3，62.4，64.4(-CH₂)，83.1(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.8，148.6，149.3，150.6，151.1(-CH＝C-)，163.3，168.0(-CH₂COO-)，169.3(-CON-)，175.6(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺759.54059，calcd.forC₄₆H₇₀N₄O₅758.53462.

实施例22 化合物BH-20的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)BH-02、143.02mg(0.7563mmol)Boc-丙氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCI、116.68mg(0.8643mmol)HOBT和209.06mg(1.6206mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-02基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3MHCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：58.9％。mp：117.8-118.7℃，[α]_D＝+17(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.83，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.87-2.95(s，each，2H，-NH₂-)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.61-3.63(m，1H，-CH-)，4.01(d，2H，-NHCH₂-)，4.50-4.53(m，1H，-CHCH₃)，4.58，4.70(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15HZ，-OCH₂-)，7.80(s，1H，-NH-CH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.6，18.3，19.5，21.0，20.6(-CH₃)，21.4，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.7，30.7，32.2，34.4，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，39.0，40.8，41.4(-NH-CH₂-)，42.5，47.0，49.6，50.6(-CHNH₂)，50.7，55.5，56.8，64.5(-CH₂)，82.6，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，169.9(-CH₂-COO-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺719.51080，calcd.forC₄₃H₆₆N₄O₅718.50332.

实施例23 化合物BH-21的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)BH-02、162.08mg(0.7563mmol)Boc-脯氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCI、116.68mg(0.8643mmol)HOBT和209.06mg(1.6206mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-02基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3MHCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：59.3％。colorlesspowder；mp：122.6-123.5℃，[α]_D＝+4(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.83，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.99-3.03(m，2H，-CH₂NH-)，3.07-3.12(m，1H，-CCHCH₂-)，3.94-3.97(m，1H，-NHCH-)，4.00-4.02(m，2H，-CH₂CH₂-)，4.49-4.52(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，8.19(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.6，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，26.1，28.2，29.8，30.7，30.8，32.2，34.4，37.1，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8(-NHCH-)，41.4，42.5，47.0，47.3，49.6，50.6，55.5，56.8，60.5，62.4(-CHNH-)，64.5(-CH₂)，82.6(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，150.6，151.1(-CH＝C-)，169.9(-CONH-)，175.7(-COOCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺745.52527，calcd.for C₄₅H₆₈N₄O₅744.51897.

实施例24 化合物BH-22的制备

依次称取350mg(0.5402mmol)BH-02、143.02mg(0.7563mmol)Boc-肌氨酸、165.69mg(0.8643mmol)EDCI、116.68mg(0.8643mmol)HOBT和209.06mg(1.6206mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-02基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3MHCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：57.6％。mp：117.8-118.6℃，[α]_D＝+16(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77(s，each，3H，-CH₃，methyl of BA)，0.82(brs，9H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.93(s，6H，2×-CH₃，methyl ofBA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.97-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.32(s，2H，-NHCH₂-)，3.78-4.03(m，2H，-CH₂CO-)，4.50-4.53(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.19(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.6，18.3，19.4，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，21.9，22.0，23.7，25.6，28.0，29.7，30.7，32.2，34.4，34.6，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，49.6，50.6，55.5(-NHCH₂-)，56.8，64.5(-CH₂)，82.6(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.1，151.1(-CH＝C-)，168.6(-CONH-)，170.8(-COOCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺719.51044，calcd.for C₄₃H₆₆N₄O₅718.50332.

实施例25 化合物BH-23的制备

依次称取300mg(0.453mmol)BH-04、120.0mg(0.6345mmol)Boc-丙氨酸、138.9mg(0.7248mmol)EDCI、97.85mg(0.7248mmol)HOBT和175.3mg(1.359mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-04基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：53.1％。colorless powder；mp：118.3-119.2℃，[α]_D＝-2(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.94(s，each，3H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.82-0.83(m，9H，3×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃ofBA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.96-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.56-3.60(m，1H，NH₂CH-)，4.49-4.52(m，1H，-OCOCH-)，4.52-4.57(m，1H，-NHCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，7.75-7.76(d，1H，-NH-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，18.7，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.8，30.7，32.2，34.4，37.1，37.2，38.1，38.2，38.4，40.8，41.6，42.5，47.0，48.449.6(NH₂CH-)，50.6，55.5，56.8(-NHCH-)，64.5(-CH₂)，82.4(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.1，151.1(-CH＝C-)，172.8(-COOCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺733.52606，calcd.forC₄₄H₆₈N₄O₅732.51897.

实施例26 化合物BH-24的制备

依次称取300mg(0.453mmol)BH-04、111.0mg(0.6345mmol)Boc-甘氨酸、138.9mg(0.7248mmol)EDCI、97.85mg(0.7248mmol)HOBT和175.3mg(1.359mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测BH-04基本消耗完时，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：55.3％。colorless powder；mp：172.4-173.3℃，[α]_D＝-2(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.83，0.94(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.82(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.54(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.97-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.56(brs，2H，-CH₂NH₂)，4.49-4.52(m，1H，-OCOCH-)，4.58(m，1H，-NHCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，7.87(s，1H，-NH-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，18.8，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.8，30.7，32.2，34.4，37.1，37.2，38.1，38.2，38.4，40.8，42.5(NH₂CH₂-)，47.0，48.2，49.6，50.6，50.7，55.5(-NHCH-)，56.8，64.5(-CH₂)，82.3(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，172.9(-COCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺719.51044，calcd.forC₄₃H₆₆N₄O₅718.50332.

实施例27 化合物BH-25的制备

依次称取300mg(0.453mmol)BH-04、136.52mg(0.6345mmol)Boc-脯氨酸、138.9mg(0.7248mmol)EDCI、97.85mg(0.7248mmol)HOBT和175.3mg(1.359mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测反应完成后，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：56.4％。colorless powder；mp：113.7-114.5℃，[α]_D＝-6(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.79，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of BA)，0.81-0.86(m，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.49，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.65-2.70(m，1H，-NHCH-)，2.91-3.03(m，2H，-CH₂NH-)，3.04-3.08(m，1H，-CCHCH₂-)，3.82-3.83(m，1H，-CHNH-)，4.47-4.56(m，1H，-OCOCH-)，4.70，4.73(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.19(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，8.07-8.09(d，1H，-NH-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.7，30.7，31.0，32.2，34.3，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5，47.0，47.3，49.6，50.0，50.6(-NHCH-)，55.5，56.8，60.5，62.8，64.5(-CH₂)，78.9，82.2(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，170.8(-CONH-)，174.7(-COOCH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺759.54053，calcd.for C₄₆H₇₀N₄O₅758.53462.

实施例28 化合物BH-26的制备

依次称取300mg(0.453mmol)BH-04、120mg(0.6345mmol)Boc-肌氨酸、138.9mg(0.7248mmol)EDCI、97.85mg(0.7248mmol)HOBT和175.3mg(1.359mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测反应完成后，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：58.7％。mp：136.5-137.3℃，[α]_D＝-2(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.83，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl ofBA)，0.82(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.63-2.73(m，1H，-NHCH-)2.94-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.35-3.44(m，2H，-NHCH₂-)，4.48-4.51(m，1H，-OCOCH-)，4.58，4.71(brs，each，1H，＝CH₂)，5.17，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)，7.80-7.82(d，1H，-NH-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，18.7，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.1，29.8，30.7，32.2，34.4，36.2，37.1，37.2，38.1，38.2，38.4，40.8，42.5，47.0，48.2，49.6，50.6，53.7，55.5，56.8，64.5(-CH₂)，82.4(-OCOCH-)，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，172.7(-CONH-)，175.7(-COO-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺733.52521，calcd.for C₄₄H₆₈N₄O₅732.51897.

实施例29 化合物BH-27的制备

依次称取350mg(0.5287mmol)BH-12、129.60mg(0.7402mmol)Boc-甘氨酸、162.2mg(0.846mmol)EDCI、114.2mg(0.8460mmol)HOBT和204.6mg(1.586mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测反应完成后，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：78.5％。mp：117.2-118.1℃，[α]_D＝+14(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.77，0.79，0.93(s，each，3H，3×-CH₃，methyl ofBA)，0.81(s，6H，2×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.50，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.97-3.01(m，1H，-CCHCH₂-)，3.00-3.06(m，2H，-CH₂NH₂)，3.95-4.13(m，3H，CH₃NH-)，4.48-4.56(m，2H，-CH₂-)，4.58，4.70(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，15.5，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，25.6，28.1，28.2，29.8，30.7，31.1，32.2，34.4，37.1，37.2，37.3，38.0，38.2，38.5，40.8，42.5(-CH₂NH₂)，47.0，49.6，50.6，55.5，56.8(-NCH₂-)，64.5(-CH₂)，79.1，109.8(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，175.7(-COOCH₂-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺719.51044，calcd.for C₄₃H₆₆N₄O₅718.50332.

实施例30 化合物BH-28的制备

依次称取350mg(0.5287mmol)BH-12、140.0mg(0.7402mmol)Boc-丙氨酸、162.2mg(0.846mmol)EDCI、114.2mg(0.8460mmol)HOBT和204.6mg(1.586mmol)DIPEA置于装有5ml无水DCM的反应瓶中，常温搅拌过夜，TLC检测反应完成后，反应液加20ml二氯甲烷稀释后依次用适量水和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠脱水，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体；在冰浴下将该白色固体置于含3M HCl的乙酸乙酯溶液中搅拌1h，减压浓缩除去大部分HCl气体后加适量的NaHCO₃饱和水溶液调节pH至8-9左右，加入二氯甲烷萃取后饱和NaCl溶液脱水，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后上硅胶柱分离[V(二氯甲烷)∶V(甲醇)＝40∶1]得白色固体，收率：79.8％。mp：136.2-137.1℃，[α]_D＝+34(c 0.50，MeOH)；¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)0.78，0.93(s，each，3H，2×-CH₃，methyl of BA)，0.81(s，9H，3×-CH₃，methyl of BA)，1.67(s，3H，30-CH₃of BA)，2.48，2.49，2.53(s，each，3H，3×-CH₃，methyl of TMP)，2.87，2.95(s，each，2H，-CH₂-)，4.01(brs，2H，-CNH₂)，4.06(brs，3H，-NCH₃)，4.58，4.70(brs，each，1H，＝CH₂)，5.16，5.20(d，each，1H，J＝15Hz，-OCH₂-)；¹³C-NMR(125MHz，CDCl₃)：δ(ppm)14.8，16.0，16.3，16.7，18.3，19.5，19.6，20.6，21.0(-CH₃)，21.5(-CH₃)，21.8(-CH₃)，23.8，25.6，28.2，29.8，30.7，31.6，32.2，34.4，36.6(-NCH₃)，37.0，37.2，38.0，38.2，38.5，40.8，41.6，42.5，47.0，49.6，50.2，50.6，55.5，56.8(-NCH₂-)，64.5(-CH₂)，82.7，109.81(-CH＝C-)，145.5，148.9，149.0，150.6，151.1(-CH＝C-)，162.7(-CH₂-COO-)，175.6(-COOCH₂-)；HRMS(ESI)m/z：[M+H]⁺733.52545，calcd.forC₄₄H₆₈N₄O₅732.51897.

实施例31

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入注射剂(包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂)适当辅料，按注射剂(包括冻干粉针剂和无菌分装干粉针剂)工艺制备成抗肿瘤药注射剂。

实施例32

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入片剂(包括缓控释片、骨架片、包衣片、分散片等)适当辅料，按片剂(包括缓控释片、骨架片、包衣片、分散片等)工艺制备成抗肿瘤药片剂。

实施例33

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入胶囊剂适当辅料，按胶囊剂工艺制备成抗肿瘤药胶囊剂。

实施例34

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入乳剂(包括微乳、纳米乳等)适当辅料，按乳剂(包括微乳、纳米乳等)工艺制备成抗肿瘤药乳剂。

实施例35

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入颗粒剂适当辅料，按颗粒剂工艺制备成抗肿瘤药颗粒剂。

实施例36

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入缓释控释剂适当辅料，按缓释控释剂工艺制成抗肿瘤药缓释控释剂。

实施例37

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入口服液适当辅料，按口服液工艺制备成抗肿瘤药口服液。

实施例38

取实施例3～30任一制备的化合物10g，加入脂质体剂型适当辅料，按脂质体工艺制备成抗肿瘤药脂质体剂型。

Claims

1.具有抗肿瘤作用的通式1化合物，

其中，R选自以下结构的一种；

2.具有抗肿瘤作用的化合物BH-26

3.如权利要求2所述的所述化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，加入制剂领域常规辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、注射剂等常规剂型。

4.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于，该方法为：

包括如下步骤：

步骤1，将白桦脂酸溶解于有机溶剂中，与2-氯代甲基-3，5，6-三甲基吡嗪在碱性条件下生成中间体化合物TBA(BH-01)；

步骤2，中间体化合物TBA在缩合剂、催化剂以及脱保护剂的作用下与Boc-丙氨酸发生反应生成中间体化合物BH-04。

步骤3，中间体化合物BH-04在缩合剂、催化剂以及脱保护剂的作用下与Boc-肌氨酸发生反应生成化合物BH-26。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，反应在-20℃至250℃下进行；其中，所述有机溶剂为含有1-20个碳原子的醚、醇、烷烃、芳香烃、酮、卤代烷、酰胺、腈、酯或者其混合物；所述催化剂为4-二甲氨基吡啶(DMAP)；所述缩合剂为1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)；所用的脱保护剂为三氟乙酸(TFA)、钯碳(Pd/C)、氢氧化钯碳(Pd(OH)₂/C)、哌啶(Piperidine)和四丁基氟化铵(TBAF)；此外，所用碱中，无机碱为碳酸钾。

6.如权利要求1、2任一所述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述癌症为肝癌、肺癌、结肠癌、宫颈癌或胃癌。

8.药物组合物，其特征在于，所述组合物包含以治疗有效量存在的权利要求1和2化合物或其药学可接受的盐与至少一种药学可接受的赋形剂的混合物。

9.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含至少一种常规抗癌药。

10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述抗癌药选自环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、阿霉素、依托泊苷、伊立替康、奥沙利铂、顺铂或健择。