CN105087461A - 一种pk细胞培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药领域。一种PK细胞培养基，以终浓度计，配方包括：4-羟乙基哌嗪乙磺酸3000mg/L～4000mg/L、氯化钠6000mg/L～7000mg/L、D-(+)-葡萄糖3000mg/L～4000mg/L、碳酸氢钠1000mg/L～2000mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～10mg/L、柠檬酸铁铵0.001mg/L～10mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-10mg/L。氯化钠的作用为维持培养基内的渗透压。本发明优化了传统一种PK细胞培养基的配方，节约了成产成本，更适宜动物细胞的生长，提高细胞培养的效率。本发明适用于VERO，PK15，MAC145细胞，适用性强。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种无血清培养基。
背景技术
PK(猪肾)细胞培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外长时间生长和繁殖的合成培养基，由多种氨基酸、维生素、微量元素以及无机化合物组成，为动物细胞提供最优化的生长环境。PK细胞培养基生产属于生物医药行业的基础产品。随着生物制药和生物医疗行业技术的更新换代，细胞培养技术也在不断进化，血清用量逐渐减少直至停止使用血清培养动物细胞。生产企业需要不断创新技术，开发高质量PK细胞培养基产品满足下游客户需求。如今市场上PK细胞培养基用料较复杂，成本较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种PK细胞培养基，以解决上述技术问题。
本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：
一种PK细胞培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：4-羟乙基哌嗪乙磺酸3000mg/L～4000mg/L、氯化钠6000mg/L～7000mg/L、D-(+)-葡萄糖3000mg/L～4000mg/L、碳酸氢钠1000mg/L～2000mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～10mg/L、柠檬酸铁铵0.001mg/L～10mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-10mg/L。
本发明在配方中加入了所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸和所述碳酸氢钠充当缓冲剂能够维持培养基内PH值的恒定。所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸为缓冲剂，所述D-(+)-葡萄糖在培养基中起到还原剂的作用。所述氯化钠的作用为维持培养基内的渗透压。本发明优化了传统一种PK细胞培养基的配方，节约了成产成本，更适宜动物细胞的生长，提高细胞培养的效率。本发明适用于VERO，PK15，MAC145细胞，适用性强。
所述配方包括所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸3500mg/L～3600mg/L、所述氯化钠6900mg/L～7000mg/L、所述D-(+)-葡萄糖3100mg/L～3200mg/L、所述碳酸氢钠1000mg/L～1300mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～1mg/L、柠檬酸铁铵0.01mg/L～1mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-1mg/L；所述配方中还包括：叶酸2mg/L～3mg/L、烟酰胺2mg/L～3mg/L、甘氨酸10mg/L～20mg/L、氯化镁20mg/L～30mg/L、氯化钙100mg/L～200mg/L和核黄素0.2mg/L～0.5mg/L。
本发明通过在配方中加入叶酸和核黄素能促进细胞的分裂和再生。烟酰胺可促进生物氧化过程和组织新陈代谢。
所述配方中还包括硫酸铜五水合物0.001mg/L～0.002mg/L、生物素0.003mg/L～0.004mg/L、亚油酸0.04mg/L～0.05mg/L、硝酸铁九水合物0.1mg/L～0.2mg/L和硫辛酸0.1mg/L～0.2mg/L。所述生物素促进脂肪和蛋白质正常代谢。
所述配方中还包括氯化钾300mg/L～400mg/L、胸苷0.3mg/L～0.4mg/L、硫酸亚铁七水合物0.4mg/L～0.5mg/L、硫酸锌七水合物0.4mg/L～0.5mg/L、维生素B12为0.6mg/L～0.7mg/L和盐酸吡哆醇2mg/L～3mg/L。所述胸苷在培养基中充当药物中间体，所述维生素B12起到促进细胞再生的作用，所述盐酸吡哆醇刺激白细胞的生长，是形成血红蛋白所需要的物质。
所述配方中还包括盐酸硫胺2mg/L～3mg/L、泛酸钙2mg/L～3mg/L、L-丙氨酸4mg/L～5mg/L、L-天冬氨酸6mg/L～7mg/L、L-谷氨酸7mg/L～8mg/L和L-天冬酰胺一水合物7mg/L～8mg/L。泛酸钙和L-谷氨酸在培养基中参与蛋白质、脂肪和糖类的新城代谢，促进氧化过程；L-丙氨酸为培养基提供养分。
所述配方中还包括氯化胆碱8mg/L～9mg/L、L-色氨酸9mg/L～10mg/L、内消旋肌醇12mg/L～13mg/L、L-甲硫氨酸17mg/L～18mg/L、L-脯氨酸17mg/L～18mg/L和L-半胱氨酸盐酸盐一水合物17mg/L～18mg/L。L-脯氨酸促进蛋白质的合成。
所述配方中还包括L-丝氨酸26mg/L～27mg/L、L-胱氨酸二盐酸盐31mg/L～32mg/L、一水合组氨酸盐酸盐31mg/L～32mg/L、L-苯丙氨酸35mg/L～36mg/L、硫酸镁48mg/L～49mg/L和L-缬氨酸52mg/L～53mg/L。所述硫酸镁促进培养基中糖和蛋白质的代谢。
所述配方中还包括L-苏氨酸53mg/L～54mg/L、L-异亮氨酸54mg/L～55mg/L、丙酮酸钠55mg/L～56mg/L、L-酪氨酸二钠盐二水合物55mg/L～56mg/L、L-亮氨酸59mg/L～60mg/L、磷酸二氢钠一水合物62mg/L～63mg/L和磷酸氢二钠71mg/L～72mg/L。所述磷酸氢二钠在培养基中起到中和剂的作用。
所述配方中还包括L-赖氨酸盐酸盐91mg/L～92mg/L、L-盐酸精氨酸147mg/L～148mg/L、L-谷氨酰胺360mg/L～370mg/L、碘化钾0.000001mg/L～0.001mg/L、氯化亚锡0.000001mg/L～0.001mg/L和硝酸银0.000001mg/L～0.001mg/L。所述碘化钾在培养基中起到稳定剂的作用，稳定培养基中的化学平衡，所述氯化亚锡在培养基中起到还原剂的作用。
所述配方中还包括溴化钾0.000001mg/L～0.001mg/L、二氧化锗0.00001mg/L～0.01mg/L、硫酸镍0.00001mg/L～0.01mg/L、氯化铬0.00001mg/L～0.01mg/L、氯化锰0.00001mg/L～0.01mg/L和氯化铷0.00001mg/L～0.01mg/L。所述二氧化锗、所述硫酸镍和所述氯化铬在培养基中起到催化剂的作用。
所述配方中还包括偏钒酸钠0.00001mg/L～0.01mg/L、三氯化铝0.00001mg/L～0.01mg/L、氟化钠0.0001mg/L～0.1mg/L、氯化镉0.0001mg/L～0.1mg/L、氯化钴0.0001mg/L～0.1mg/L和氯氧化锆0.0001mg/L～0.1mg/L。所述偏钒酸钠、三氯化铝、氯化钴和氯氧化锆在培养基中起到催化剂的作用。
所述配方中余量为蒸馏水。
作为一种优选方案,一种PK细胞培养基的配方如下：
作为另一种优选方案，一种PK细胞培养基的配方如下：
作为另一种优选方案，一种PK细胞培养基的配方如下：
其中，D-(+)-葡萄糖别名为D-无水葡萄糖、D-葡糖、α-D-葡萄糖、D-(+)-葡萄糖(无水)、右旋糖。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面进一步阐述本发明。
一种PK细胞培养基，以终浓度计，配方包括：4-羟乙基哌嗪乙磺酸3000mg/L～4000mg/L、氯化钠6000mg/L～7000mg/L、D-(+)-葡萄糖3000mg/L～4000mg/L、碳酸氢钠1000mg/L～2000mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～10mg/L、柠檬酸铁铵0.001mg/L～10mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-10mg/L。本发明在配方中加入了4-羟乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氢钠充当缓冲剂能够维持培养基内PH值的恒定。4-羟乙基哌嗪乙磺酸为缓冲剂，D-(+)-葡萄糖在培养基中起到还原剂的作用。氯化钠的作用为维持培养基内的渗透压。本发明优化了传统一种PK细胞培养基的配方，节约了成产成本，更适宜动物细胞的生长，提高细胞培养的效率。本发明适用于VERO，PK15，MAC145细胞，适用性强。配方包括4-羟乙基哌嗪乙磺酸3500mg/L～3600mg/L、氯化钠6900mg/L～7000mg/L、D-(+)-葡萄糖3100mg/L～3200mg/L、碳酸氢钠1000mg/L～1300mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～1mg/L、柠檬酸铁铵0.01mg/L～1mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-1mg/L；配方中还包括：叶酸2mg/L～3mg/L、烟酰胺2mg/L～3mg/L、甘氨酸10mg/L～20mg/L、氯化镁20mg/L～30mg/L、氯化钙100mg/L～200mg/L和核黄素0.2mg/L～0.5mg/L。
配方中还包括硫酸铜五水合物0.001mg/L～0.002mg/L、生物素0.003mg/L～0.004mg/L、亚油酸0.04mg/L～0.05mg/L、硝酸铁九水合物0.1mg/L～0.2mg/L和硫辛酸0.1mg/L～0.2mg/L。生物素促进脂肪和蛋白质正常代谢。配方中还包括氯化钾300mg/L～400mg/L、胸苷0.3mg/L～0.4mg/L、硫酸亚铁七水合物0.4mg/L～0.5mg/L、硫酸锌七水合物0.4mg/L～0.5mg/L、维生素B12为0.6mg/L～0.7mg/L和盐酸吡哆醇2mg/L～3mg/L。胸苷在培养基中充当药物中间体，维生素B12起到促进细胞再生的作用，盐酸吡哆醇刺激白细胞的生长，是形成血红蛋白所需要的物质。配方中还包括盐酸硫胺2mg/L～3mg/L、泛酸钙2mg/L～3mg/L、L-丙氨酸4mg/L～5mg/L、L-天冬氨酸6mg/L～7mg/L、L-谷氨酸7mg/L～8mg/L和L-天冬酰胺一水合物7mg/L～8mg/L。泛酸钙和L-谷氨酸在培养基中参与蛋白质、脂肪和糖类的新城代谢，促进氧化过程；L-丙氨酸为培养基提供养分。配方中还包括氯化胆碱8mg/L～9mg/L、L-色氨酸9mg/L～10mg/L、内消旋肌醇12mg/L～13mg/L、L-甲硫氨酸17mg/L～18mg/L、L-脯氨酸17mg/L～18mg/L和L-半胱氨酸盐酸盐一水合物17mg/L～18mg/L。L-脯氨酸促进蛋白质的合成。配方中还包括L-丝氨酸26mg/L～27mg/L、L-胱氨酸二盐酸盐31mg/L～32mg/L、一水合组氨酸盐酸盐31mg/L～32mg/L、L-苯丙氨酸35mg/L～36mg/L、硫酸镁48mg/L～49mg/L和L-缬氨酸52mg/L～53mg/L。硫酸镁促进培养基中糖和蛋白质的代谢。
配方中还包括L-苏氨酸53mg/L～54mg/L、L-异亮氨酸54mg/L～55mg/L、丙酮酸钠55mg/L～56mg/L、L-酪氨酸二钠盐二水合物55mg/L～56mg/L、L-亮氨酸59mg/L～60mg/L、磷酸二氢钠一水合物62mg/L～63mg/L和磷酸氢二钠71mg/L～72mg/L。磷酸氢二钠在培养基中起到中和剂的作用。配方中还包括L-赖氨酸盐酸盐91mg/L～92mg/L、L-盐酸精氨酸147mg/L～148mg/L、L-谷氨酰胺360mg/L～370mg/L、碘化钾0.000001mg/L～0.001mg/L、氯化亚锡0.000001mg/L～0.001mg/L和硝酸银0.000001mg/L～0.001mg/L。碘化钾在培养基中起到稳定剂的作用，稳定培养基中的化学平衡，氯化亚锡在培养基中起到还原剂的作用。配方中还包括溴化钾0.000001mg/L～0.001mg/L、二氧化锗0.00001mg/L～0.01mg/L、硫酸镍0.00001mg/L～0.01mg/L、氯化铬0.00001mg/L～0.01mg/L、氯化锰0.00001mg/L～0.01mg/L和氯化铷0.00001mg/L～0.01mg/L。二氧化锗、硫酸镍和氯化铬在培养基中起到催化剂的作用。配方中还包括偏钒酸钠0.00001mg/L～0.01mg/L、三氯化铝0.00001mg/L～0.01mg/L、氟化钠0.0001mg/L～0.1mg/L、氯化镉0.0001mg/L～0.1mg/L、氯化钴0.0001mg/L～0.1mg/L和氯氧化锆0.0001mg/L～0.1mg/L。偏钒酸钠、三氯化铝、氯化钴和氯氧化锆在培养基中起到催化剂的作用。配方中余量为蒸馏水。
作为一种优选方案,一种PK细胞培养基的配方如下：
。
作为一种优选方案，一种PK细胞培养基的配方如下：
。
作为另一种优选方案，一种PK细胞培养基的配方如下：
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (10)
1.一种PK细胞培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：4-羟乙基哌嗪乙磺酸3000mg/L～4000mg/L、氯化钠6000mg/L～7000mg/L、D-(+)-葡萄糖3000mg/L～4000mg/L、碳酸氢钠1000mg/L～2000mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～10mg/L、柠檬酸铁铵0.001mg/L～10mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-10mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方包括所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸3500mg/L～3600mg/L、所述氯化钠6900mg/L～7000mg/L、所述D-(+)-葡萄糖3100mg/L～3200mg/L、所述碳酸氢钠1000mg/L～1300mg/L、还原型谷胱甘肽0.01mg/L～1mg/L、柠檬酸铁铵0.01mg/L～1mg/L和尿嘧啶0.01mg/L-1mg/L；所述配方中还包括：叶酸2mg/L～3mg/L、烟酰胺2mg/L～3mg/L、甘氨酸10mg/L～20mg/L、氯化镁20mg/L～30mg/L、氯化钙100mg/L～200mg/L和核黄素0.2mg/L～0.5mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方中还包括硫酸铜五水合物0.001mg/L～0.002mg/L、生物素0.003mg/L～0.004mg/L、亚油酸0.04mg/L～0.05mg/L、硝酸铁九水合物0.1mg/L～0.2mg/L和硫辛酸0.1mg/L～0.2mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方中还包括氯化钾300mg/L～400mg/L、胸苷0.3mg/L～0.4mg/L、硫酸亚铁七水合物0.4mg/L～0.5mg/L、硫酸锌七水合物0.4mg/L～0.5mg/L、维生素B12为0.6mg/L～0.7mg/L和盐酸吡哆醇2mg/L～3mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方中还包括盐酸硫胺2mg/L～3mg/L、泛酸钙2mg/L～3mg/L、L-丙氨酸4mg/L～5mg/L、L-天冬氨酸6mg/L～7mg/L、L-谷氨酸7mg/L～8mg/L和L-天冬酰胺一水合物7mg/L～8mg/L。
6.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方中还包括氯化胆碱8mg/L～9mg/L、L-色氨酸9mg/L～10mg/L、内消旋肌醇12mg/L～13mg/L、L-甲硫氨酸17mg/L～18mg/L、L-脯氨酸17mg/L～18mg/L和L-半胱氨酸盐酸盐一水合物17mg/L～18mg/L。
7.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方中还包括L-丝氨酸26mg/L～27mg/L、L-胱氨酸二盐酸盐31mg/L～32mg/L、一水合组氨酸盐酸盐31mg/L～32mg/L、L-苯丙氨酸35mg/L～36mg/L、硫酸镁48mg/L～49mg/L和L-缬氨酸52mg/L～53mg/L。
8.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：所述配方中还包括L-苏氨酸53mg/L～54mg/L、L-异亮氨酸54mg/L～55mg/L、丙酮酸钠55mg/L～56mg/L、L-酪氨酸二钠盐二水合物55mg/L～56mg/L、L-亮氨酸59mg/L～60mg/L、磷酸二氢钠一水合物62mg/L～63mg/L和磷酸氢二钠71mg/L～72mg/L。
9.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：PK细胞培养基由下列物质按以下浓度mg/L组成的:
10.根据权利要求1所述的一种PK细胞培养基，其特征在于：PK细胞培养基由下列物质按以下浓度mg/L组成的:
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|---|---|---|---|
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151125 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |