CN107674860A - Nk92细胞无血清培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医药领域。NK92细胞无血清培养基，以终浓度计，配方包括：L‑半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L‑苯丙氨酸1～1000mg/L、L‑谷氨酰胺1～1000mg/L、L‑甲硫氨酸1～1000mg/L、L‑赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L‑酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L‑亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D‑(+)‑葡萄糖100～10000mg/L、HEPES 100～10000mg/L。本发明优化了传统NK92细胞无血清培养基的配方，节约了成产成本，提高细胞培养的效率。

Description

NK92细胞无血清培养基
技术领域
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种无血清培养基。
背景技术
NK92细胞通常称为自然杀伤细胞。它们不像T细胞、B细胞一样，要经过免疫系统的抗原辨识反应才确定目标“出击”，感染首次发生时，NK92细胞能主动出击，杀死被感染的靶细胞。所以也被称为“天然杀手”。NK92细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞、病毒感染细胞、寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素。
ATCC推荐NK92细胞培养用MEM-α培养基+12.5％胎牛血清+12.5％马血清(参照ATCC网站上公布的培养条件)，此方法培养基中含高浓度的动物血清，生物安全性差，而且成本较高。
发明内容
本发明的目的在于提供NK92细胞无血清培养基，以解决上述技术问题。
本发明所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：
NK92细胞无血清培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：L-半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L-苯丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酰胺1～1000mg/L、L-甲硫氨酸1～1000mg/L、L-赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L-酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L-亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D-(+)-葡萄糖100～10000mg/L、HEPES 100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、氯化钠100～10000mg/L、重组人白蛋白100～10000mg/L、泊洛沙姆188 100～10000mg/L、大豆蛋白100～10000mg/L、酵母粉100～10000mg/L、重组人转铁蛋白0.1～100mg/L、胰岛素0.1～100mg/L。
HEPES即4-羟乙基哌嗪乙磺酸，本发明在配方中加入了所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸和所述碳酸氢钠充当缓冲剂能够维持培养基内pH值的恒定。所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氢钠为缓冲剂。本发明优化了传统NK92细胞无血清培养基的配方，节约了成产成本，提高细胞培养的效率。L-亮氨酸能促进细胞生长、提高免疫机能减少被病毒感染的几率。配方中余量为蒸馏水。
所述配方还包括2'-脱氧胞苷0.1～100mg/L、2'-脱氧鸟苷0.1～100mg/L、2'-脱氧腺苷0.1～100mg/L、5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物0.1～100mg/L、胞苷0.1～100mg/L、鸟苷0.1～100mg/L、尿苷0.1～100mg/L、腺苷0.1～100mg/L、胸苷0.1～100mg/L、次黄嘌呤钠0.1～100mg/L、甘氨酸0.1～100mg/L、L-丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酸1～1000mg/L。
次黄嘌呤钠能进行生物发酵。甘氨酸用作缓冲剂。L-丙氨酸促进细胞培养。L-谷氨酸促进氧化过程。
所述配方还包括L-抗坏血酸1～1000mg/L、L-脯氨酸1～1000mg/L、L-色氨酸1～1000mg/L、L-丝氨酸1～1000mg/L、L-苏氨酸1～1000mg/L、L-天冬氨酸1～1000mg/L、L-天冬酰胺一水合物1～1000mg/L、L-缬氨酸1～1000mg/L、L-盐酸精氨酸1～1000mg/L、L-异亮氨酸1～1000mg/L、L-组氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、还原型谷胱甘肽1～1000mg/L、丙酮酸钠1～1000mg/L、氯化胆碱1～1000mg/L、内消旋肌醇1～1000mg/L、对氨基苯甲酸0.00001～10mg/L、核黄素0.00001～10mg/L、生物素0.00001～10mg/L、硫辛酸0.1～100mg/L、泛酸钙0.1～100mg/L、维生素B12 0.1～100mg/L、烟酰胺0.1～100mg/L、盐酸吡哆醇0.1～100mg/L。
L-抗坏血酸能起到氧化还原作用，促进吧脂肪、蛋白质的合成。L-脯氨酸是合成蛋白质的重要原料，而且能促进生长，进行正常代谢。氯化胆碱能增加培养基内细胞的数量，核黄素能促进细胞的分裂和再生。
所述配方还包括盐酸吡哆醛0.1～100mg/L、盐酸硫胺0.1～100mg/L、叶酸0.1～100mg/L、牛磺酸0.1～100mg/L、亚油酸0.1～100mg/L、油酸0.1～100mg/L、棕榈酸0.1～100mg/L、胆固醇0.1～100mg/L、磷酸二氢钠1～1000mg/L、磷酸氢二钠1～1000mg/L、硫酸镁1～1000mg/L、氯化钙1～1000mg/L、氯化镁六水合物1～1000mg/L、亚硒酸钠0.00001～10mg/L、硫酸铜五水合物0.00001～10mg/L、硝酸钾0.00001～10mg/L、硝酸铁九水合物0.00001～10mg/L、氯化亚锰0.00001～10mg/L、硫酸亚铁七水合物0.1～100mg/L、硫酸锌七水合物0.1～100mg/L、腐胺二盐酸盐0.1～100mg/L、乙醇胺盐酸盐0.1～100mg/L、硫代甘油0.1～100mg/L、庆大霉素0.1～100mg/L、酚红0.1～100mg/L。叶酸能促进细胞的分裂和再生。硫代甘油用作抗氧剂。
所述配方还包括荷叶碱0.1～100mg/L。荷叶碱具有抗有丝分裂的作用，有较强的抑菌效果。庆大霉素作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成。氯化亚锰作为催化剂。
作为一种方案，NK92细胞无血清培养基的配方如下：
2'-脱氧胞苷 0.1～100mg/L
2'-脱氧鸟苷 0.1～100mg/L
2'-脱氧腺苷 0.1～100mg/L
5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物 0.1～100mg/L
胞苷 0.1～100mg/L
鸟苷 0.1～100mg/L
尿苷 0.1～100mg/L
腺苷 0.1～100mg/L
胸苷 0.1～100mg/L
次黄嘌呤钠 0.1～100mg/L
甘氨酸 1～1000mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐一水合物 1～1000mg/L
L-苯丙氨酸 1～1000mg/L
L-丙氨酸 1～1000mg/L
L-谷氨酸 1～1000mg/L
L-谷氨酰胺 1～1000mg/L
L-甲硫氨酸 1～1000mg/L
L-抗坏血酸 1～1000mg/L
L-赖氨酸盐酸盐 1～1000mg/L
L-酪氨酸二钠盐 1～1000mg/L
L-亮氨酸 1～1000mg/L
L-脯氨酸 1～1000mg/L
L-色氨酸 1～1000mg/L
L-丝氨酸 1～1000mg/L
L-苏氨酸 1～1000mg/L
L-天冬氨酸 1～1000mg/L
L-天冬酰胺一水合物 1～1000mg/L
L-缬氨酸 1～1000mg/L
L-盐酸精氨酸 1～1000mg/L
L-异亮氨酸 1～1000mg/L
L-组氨酸盐酸盐一水合物 1～1000mg/L
丙氨酰谷氨酰胺 1～1000mg/L
还原型谷胱甘肽 1～1000mg/L
丙酮酸钠 1～1000mg/L
氯化胆碱 1～1000mg/L
内消旋肌醇 1～1000mg/L
对氨基苯甲酸 0.00001～10mg/L
核黄素 0.00001～10mg/L
生物素 0.00001～10mg/L
硫辛酸 0.1～100mg/L
泛酸钙 0.1～100mg/L
维生素B12 0.1～100mg/L
烟酰胺 0.1～100mg/L
盐酸吡哆醇 0.1～100mg/L
盐酸吡哆醛 0.1～100mg/L
盐酸硫胺 0.1～100mg/L
叶酸 0.1～100mg/L
牛磺酸 0.1～100mg/L
亚油酸 0.1～100mg/L
油酸 0.1～100mg/L
棕榈酸 0.1～100mg/L
胆固醇 0.1～100mg/L
磷酸二氢钠 1～1000mg/L
磷酸氢二钠 1～1000mg/L
硫酸镁 1～1000mg/L
氯化钙 1～1000mg/L
氯化钾 1～1000mg/L
氯化镁六水合物 1～1000mg/L
亚硒酸钠 0.00001～10mg/L
硫酸铜五水合物 0.00001～10mg/L
硝酸钾 0.00001～10mg/L
硝酸铁九水合物 0.00001～10mg/L
氯化亚锰 0.00001～10mg/L
硫酸锌七水合物 0.1～100mg/L
硫酸亚铁七水合物 0.1～100mg/L
腐胺二盐酸盐 0.1～100mg/L
乙醇胺盐酸盐 0.1～100mg/L
硫代甘油 0.1～100mg/L
庆大霉素 0.1～100mg/L
酚红 0.1～100mg/L
D-(+)-葡萄糖 100～10000mg/L
HEPES 100～10000mg/L
碳酸氢钠 100～10000mg/L
氯化钠 100～10000mg/L
重组人白蛋白 100～10000mg/L
泊洛沙姆188 100～10000mg/L
大豆蛋白 100～10000mg/L
酵母粉 100～10000mg/L
重组人转铁蛋白 0.1～100mg/L
胰岛素 0.1～100mg/L。
本发明优化了培养基的配方能够更好的培养出NK92细胞，通过L-亮氨酸能够促进细胞的分裂和生产，加快培养基内的反应。
作为一种优选方案，NK92细胞无血清培养基的配方如下：
2'-脱氧胞苷 10mg/L
2'-脱氧鸟苷 10mg/L
2'-脱氧腺苷 10mg/L
5′-三磷酸腺苷二钠盐 水合物 5mg/L
胞苷 10mg/L
鸟苷 10mg/L
尿苷 10mg/L
腺苷 10mg/L
胸苷 20mg/L
次黄嘌呤钠 22mg/L
甘氨酸 50mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐一水合物 150mg/L
L-苯丙氨酸 142mg/L
L-丙氨酸 10mg/L
L-谷氨酸 40mg/L
L-谷氨酰胺 438mg/L
L-甲硫氨酸 158mg/L
L-抗坏血酸 50mg/L
L-赖氨酸盐酸盐 200mg/L
L-酪氨酸二钠盐 250mg/L
L-亮氨酸 182mg/L
L-脯氨酸 127mg/L
L-色氨酸 112mg/L
L-丝氨酸 140mg/L
L-苏氨酸 165mg/L
L-天冬氨酸 650mg/L
L-天冬酰胺一水合物 220mg/L
L-缬氨酸 162mg/L
L-盐酸精氨酸 223mg/L
L-异亮氨酸 179mg/L
L-组氨酸盐酸盐一水合物 140mg/L
丙氨酰谷氨酰胺 271mg/L
还原型谷胱甘肽 15mg/L
丙酮酸钠 220mg/L
氯化胆碱 80mg/L
内消旋肌醇 45mg/L
对氨基苯甲酸 0.5mg/L
核黄素 0.2mg/L
生物素 0.1mg/L
硫辛酸 2mg/L
泛酸钙 3mg/L
维生素B12 1.3mg/L
烟酰胺 2mg/L
盐酸吡哆醇 4mg/L
盐酸吡哆醛 2mg/L
盐酸硫胺 4mg/L
叶酸 4mg/L
牛磺酸 35mg/L
亚油酸 12mg/L
油酸 1mg/L
棕榈酸 10mg/L
胆固醇 10mg/L
磷酸二氢钠 100mg/L
磷酸氢二钠 185mg/L
硫酸镁 98mg/L
氯化钙 120mg/L
氯化钾 295mg/L
氯化镁六水合物 61mg/L
亚硒酸钠 0.001mg/L
硫酸铜五水合物 0.012mg/L
硝酸钾 0.02mg/L
硝酸铁九水合物 0.1mg/L
氯化亚锰 0.000025mg/L
硫酸锌七水合物 10mg/L
硫酸亚铁七水合物 24mg/L
腐胺二盐酸盐 0.4mg/L
乙醇胺盐酸盐 8mg/L
硫代甘油 5mg/L
庆大霉素 5mg/L
酚红 5mg/L
D-(+)-葡萄糖 4000mg/L
HEPES 4279mg/L
碳酸氢钠 2400mg/L
氯化钠 6000mg/L
重组人白蛋白 2000mg/L
泊洛沙姆188 1000mg/L
大豆蛋白 2500mg/L
酵母粉 500mg/L
重组人转铁蛋白 10mg/L
胰岛素 5mg/L。
本发明优化了培养基的配方能够更好的培养出NK92细胞，通过优化了L-亮氨酸的含量，通过该含量下的L-亮氨酸细胞的生长分裂效果最佳。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面进一步阐述本发明。
NK92细胞无血清培养基，以终浓度计，配方包括：L-半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L-苯丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酰胺1～1000mg/L、L-甲硫氨酸1～1000mg/L、L-赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L-酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L-亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D-(+)-葡萄糖100～10000mg/L、HEPES 100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、氯化钠100～10000mg/L、重组人白蛋白100～10000mg/L、泊洛沙姆188 100～10000mg/L、大豆蛋白100～10000mg/L、酵母粉100～10000mg/L、重组人转铁蛋白0.1～100mg/L、胰岛素0.1～100mg/L。HEPES即4-羟乙基哌嗪乙磺酸，本发明在配方中加入了4-羟乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氢钠充当缓冲剂能够维持培养基内pH值的恒定。4-羟乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氢钠为缓冲剂。本发明优化了传统NK92细胞无血清培养基的配方，节约了成产成本，提高细胞培养的效率。L-亮氨酸能促进细胞生长、提高免疫机能减少被病毒感染的几率。配方中余量为蒸馏水。终浓度就是指实验操作结束时的最终浓度。
配方还包括2'-脱氧胞苷0.1～100mg/L、2'-脱氧鸟苷0.1～100mg/L、2'-脱氧腺苷0.1～100mg/L、5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物0.1～100mg/L、胞苷0.1～100mg/L、鸟苷0.1～100mg/L、尿苷0.1～100mg/L、腺苷0.1～100mg/L、胸苷0.1～100mg/L、次黄嘌呤钠0.1～100mg/L、甘氨酸0.1～100mg/L、L-丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酸1～1000mg/L。次黄嘌呤钠能进行生物发酵。甘氨酸用作缓冲剂。L-丙氨酸促进细胞培养。L-谷氨酸促进氧化过程。配方还包括L-抗坏血酸1～1000mg/L、L-脯氨酸1～1000mg/L、L-色氨酸1～1000mg/L、L-丝氨酸1～1000mg/L、L-苏氨酸1～1000mg/L、L-天冬氨酸1～1000mg/L、L-天冬酰胺一水合物1～1000mg/L、L-缬氨酸1～1000mg/L、L-盐酸精氨酸1～1000mg/L、L-异亮氨酸1～1000mg/L、L-组氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、还原型谷胱甘肽1～1000mg/L、丙酮酸钠1～1000mg/L、氯化胆碱1～1000mg/L、内消旋肌醇1～1000mg/L、对氨基苯甲酸0.00001～10mg/L、核黄素0.00001～10mg/L、生物素0.00001～10mg/L、硫辛酸0.1～100mg/L、泛酸钙0.1～100mg/L、维生素B12 0.1～100mg/L、烟酰胺0.1～100mg/L、盐酸吡哆醇0.1～100mg/L。
L-抗坏血酸能起到氧化还原作用，促进吧脂肪、蛋白质的合成。L-脯氨酸是合成蛋白质的重要原料，而且能促进生长，进行正常代谢。氯化胆碱能增加培养基内细胞的数量，核黄素能促进细胞的分裂和再生。配方还包括盐酸吡哆醛0.1～100mg/L、盐酸硫胺0.1～100mg/L、叶酸0.1～100mg/L、牛磺酸0.1～100mg/L、亚油酸0.1～100mg/L、油酸0.1～100mg/L、棕榈酸0.1～100mg/L、胆固醇0.1～100mg/L、磷酸二氢钠1～1000mg/L、磷酸氢二钠1～1000mg/L、硫酸镁1～1000mg/L、氯化钙1～1000mg/L、氯化镁六水合物1～1000mg/L、亚硒酸钠0.00001～10mg/L、硫酸铜五水合物0.00001～10mg/L、硝酸钾0.00001～10mg/L、硝酸铁九水合物0.00001～10mg/L、氯化亚锰0.00001～10mg/L、硫酸亚铁七水合物0.1～100mg/L、硫酸锌七水合物0.1～100mg/L、腐胺二盐酸盐0.1～100mg/L、乙醇胺盐酸盐0.1～100mg/L、硫代甘油0.1～100mg/L、庆大霉素0.1～100mg/L、酚红0.1～100mg/L。叶酸能促进细胞的分裂和再生。硫代甘油用作抗氧剂。配方还包括荷叶碱0.1～100mg/L。荷叶碱具有抗有丝分裂的作用，有较强的抑菌效果。庆大霉素作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成。氯化亚锰作为催化剂。
作为一种方案，NK92细胞无血清培养基的配方如下：
2'-脱氧胞苷 0.1～100mg/L
2'-脱氧鸟苷 0.1～100mg/L
2'-脱氧腺苷 0.1～100mg/L
5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物 0.1～100mg/L
胞苷 0.1～100mg/L
鸟苷 0.1～100mg/L
尿苷 0.1～100mg/L
腺苷 0.1～100mg/L
胸苷 0.1～100mg/L
次黄嘌呤钠 0.1～100mg/L
甘氨酸 1～1000mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐一水合物 1～1000mg/L
L-苯丙氨酸 1～1000mg/L
L-丙氨酸 1～1000mg/L
L-谷氨酸 1～1000mg/L
L-谷氨酰胺 1～1000mg/L
L-甲硫氨酸 1～1000mg/L
L-抗坏血酸 1～1000mg/L
L-赖氨酸盐酸盐 1～1000mg/L
L-酪氨酸二钠盐 1～1000mg/L
L-亮氨酸 1～1000mg/L
L-脯氨酸 1～1000mg/L
L-色氨酸 1～1000mg/L
L-丝氨酸 1～1000mg/L
L-苏氨酸 1～1000mg/L
L-天冬氨酸 1～1000mg/L
L-天冬酰胺一水合物 1～1000mg/L
L-缬氨酸 1～1000mg/L
L-盐酸精氨酸 1～1000mg/L
L-异亮氨酸 1～1000mg/L
L-组氨酸盐酸盐一水合物 1～1000mg/L
丙氨酰谷氨酰胺 1～1000mg/L
还原型谷胱甘肽 1～1000mg/L
丙酮酸钠 1～1000mg/L
氯化胆碱 1～1000mg/L
内消旋肌醇 1～1000mg/L
对氨基苯甲酸 0.00001～10mg/L
核黄素 0.00001～10mg/L
生物素 0.00001～10mg/L
硫辛酸 0.1～100mg/L
泛酸钙 0.1～100mg/L
维生素B12 0.1～100mg/L
烟酰胺 0.1～100mg/L
盐酸吡哆醇 0.1～100mg/L
盐酸吡哆醛 0.1～100mg/L
盐酸硫胺 0.1～100mg/L
叶酸 0.1～100mg/L
牛磺酸 0.1～100mg/L
亚油酸 0.1～100mg/L
油酸 0.1～100mg/L
棕榈酸 0.1～100mg/L
胆固醇 0.1～100mg/L
磷酸二氢钠 1～1000mg/L
磷酸氢二钠 1～1000mg/L
硫酸镁 1～1000mg/L
氯化钙 1～1000mg/L
氯化钾 1～1000mg/L
氯化镁六水合物 1～1000mg/L
亚硒酸钠 0.00001～10mg/L
硫酸铜五水合物 0.00001～10mg/L
硝酸钾 0.00001～10mg/L
硝酸铁九水合物 0.00001～10mg/L
氯化亚锰 0.00001～10mg/L
硫酸锌七水合物 0.1～100mg/L
硫酸亚铁七水合物 0.1～100mg/L
腐胺二盐酸盐 0.1～100mg/L
乙醇胺盐酸盐 0.1～100mg/L
硫代甘油 0.1～100mg/L
庆大霉素 0.1～100mg/L
酚红 0.1～100mg/L
D-(+)-葡萄糖 100～10000mg/L
HEPES 100～10000mg/L
碳酸氢钠 100～10000mg/L
氯化钠 100～10000mg/L
重组人白蛋白 100～10000mg/L
泊洛沙姆188 100～10000mg/L
大豆蛋白 100～10000mg/L
酵母粉 100～10000mg/L
重组人转铁蛋白 0.1～100mg/L
胰岛素 0.1～100mg/L。
作为一种优选方案，NK92细胞无血清培养基的配方如下：
2'-脱氧胞苷 10mg/L
2'-脱氧鸟苷 10mg/L
2'-脱氧腺苷 10mg/L
5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物 5mg/L
胞苷 10mg/L
鸟苷 10mg/L
尿苷 10mg/L
腺苷 10mg/L
胸苷 20mg/L
次黄嘌呤钠 22mg/L
甘氨酸 50mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐一水合物 150mg/L
L-苯丙氨酸 142mg/L
L-丙氨酸 10mg/L
L-谷氨酸 40mg/L
L-谷氨酰胺 438mg/L
L-甲硫氨酸 158mg/L
L-抗坏血酸 50mg/L
L-赖氨酸盐酸盐 200mg/L
L-酪氨酸二钠盐 250mg/L
L-亮氨酸 182mg/L
L-脯氨酸 127mg/L
L-色氨酸 112mg/L
L-丝氨酸 140mg/L
L-苏氨酸 165mg/L
L-天冬氨酸 650mg/L
L-天冬酰胺一水合物 220mg/L
L-缬氨酸 162mg/L
L-盐酸精氨酸 223mg/L
L-异亮氨酸 179mg/L
L-组氨酸盐酸盐一水合物 140mg/L
丙氨酰谷氨酰胺 271mg/L
还原型谷胱甘肽 15mg/L
丙酮酸钠 220mg/L
氯化胆碱 80mg/L
内消旋肌醇 45mg/L
对氨基苯甲酸 0.5mg/L
核黄素 0.2mg/L
生物素 0.1mg/L
硫辛酸 2mg/L
泛酸钙 3mg/L
维生素B12 1.3mg/L
烟酰胺 2mg/L
盐酸吡哆醇 4mg/L
盐酸吡哆醛 2mg/L
盐酸硫胺 4mg/L
叶酸 4mg/L
牛磺酸 35mg/L
亚油酸 12mg/L
油酸 1mg/L
棕榈酸 10mg/L
胆固醇 10mg/L
磷酸二氢钠 100mg/L
磷酸氢二钠 185mg/L
硫酸镁 98mg/L
氯化钙 120mg/L
氯化钾 295mg/L
氯化镁六水合物 61mg/L
亚硒酸钠 0.001mg/L
硫酸铜五水合物 0.012mg/L
硝酸钾 0.02mg/L
硝酸铁九水合物 0.1mg/L
氯化亚锰 0.000025mg/L
硫酸锌七水合物 10mg/L
硫酸亚铁七水合物 24mg/L
腐胺二盐酸盐 0.4mg/L
乙醇胺盐酸盐 8mg/L
硫代甘油 5mg/L
庆大霉素 5mg/L
酚红 5mg/L
D-(+)-葡萄糖 4000mg/L
HEPES 4279mg/L
碳酸氢钠 2400mg/L
氯化钠 6000mg/L
重组人白蛋白 2000mg/L
泊洛沙姆188 1000mg/L
大豆蛋白 2500mg/L
酵母粉 500mg/L
重组人转铁蛋白 10mg/L
胰岛素 5mg/L。
NK92细胞无血清培养基放置在一培养皿内，培养皿的底部设有一凹陷，凹陷内从上至下依次设有透明电极层、场致发光片、导电层和绝缘层；导电层连接一根金属线，金属线呈环状粘贴在凹陷的边缘，金属线连接一电源的正极，透明电极层连接一电源的负极。本发明通过在培养皿的底部设有场致发光片能够使培养皿底部发光照亮培养皿的内部。本发明通过将金属线固定在凹陷的边缘能够防止金属线遮挡视线。凹陷内还设有一环状加热管，环状加热管固定在凹陷的内壁，环状加热管设有一电源接口。本发明通过环状加热管能够对培养皿进行加热，从而能够提高培养基的培养效果。将环状加热管固定在边缘能够防止直接对培养皿底部加热。环状加热管和金属线共用一个电源。本发明通过一个电源为环状加热管和金属线供电，能够便于使用。环状加热管的加热方向朝上，环状加热管的上方设有一导热层，以导电层作为导热层，导电层是由金属铝制成的导电层，导电层上电镀有银箔。本发明通过银箔不仅能够提高了导电层的导电性，还能提高了导热性，使培养基内的物质均匀受热。凹陷内还设有一隔热层，以绝缘层作为隔热层，绝缘层是由气凝胶毡制成的绝缘层。气凝胶毡既能绝缘也能隔热。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (7)

1.NK92细胞无血清培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：L-半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L-苯丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酰胺1～1000mg/L、L-甲硫氨酸1～1000mg/L、L-赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L-酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L-亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D-(+)-葡萄糖100～10000mg/L、HEPES 100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、氯化钠100～10000mg/L、重组人白蛋白100～10000mg/L、泊洛沙姆188 100～10000mg/L、大豆蛋白100～10000mg/L、酵母粉100～10000mg/L、重组人转铁蛋白0.1～100mg/L、胰岛素0.1～100mg/L。
2.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括2'-脱氧胞苷0.1～100mg/L、2'-脱氧鸟苷0.1～100mg/L、2'-脱氧腺苷0.1～100mg/L、5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物0.1～100mg/L、胞苷0.1～100mg/L、鸟苷0.1～100mg/L、尿苷0.1～100mg/L、腺苷0.1～100mg/L、胸苷0.1～100mg/L、次黄嘌呤钠0.1～100mg/L、甘氨酸0.1～100mg/L、L-丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酸1～1000mg/L。
3.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括L-抗坏血酸1～1000mg/L、L-脯氨酸1～1000mg/L、L-色氨酸1～1000mg/L、L-丝氨酸1～1000mg/L、L-苏氨酸1～1000mg/L、L-天冬氨酸1～1000mg/L、L-天冬酰胺一水合物1～1000mg/L、L-缬氨酸1～1000mg/L、L-盐酸精氨酸1～1000mg/L、L-异亮氨酸1～1000mg/L、L-组氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、还原型谷胱甘肽1～1000mg/L、丙酮酸钠1～1000mg/L、氯化胆碱1～1000mg/L、内消旋肌醇1～1000mg/L、对氨基苯甲酸0.00001～10mg/L、核黄素0.00001～10mg/L、生物素0.00001～10mg/L、硫辛酸0.1～100mg/L、泛酸钙0.1～100mg/L、维生素B120.1～100mg/L、烟酰胺0.1～100mg/L、盐酸吡哆醇0.1～100mg/L。
4.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括盐酸吡哆醛0.1～100mg/L、盐酸硫胺0.1～100mg/L、叶酸0.1～100mg/L、牛磺酸0.1～100mg/L、亚油酸0.1～100mg/L、油酸0.1～100mg/L、棕榈酸0.1～100mg/L、胆固醇0.1～100mg/L、磷酸二氢钠1～1000mg/L、磷酸氢二钠1～1000mg/L、硫酸镁1～1000mg/L、氯化钙1～1000mg/L、氯化镁六水合物1～1000mg/L、亚硒酸钠0.00001～10mg/L、硫酸铜五水合物0.00001～10mg/L、硝酸钾0.00001～10mg/L、硝酸铁九水合物0.00001～10mg/L、氯化亚锰0.00001～10mg/L、硫酸亚铁七水合物0.1～100mg/L、硫酸锌七水合物0.1～100mg/L、腐胺二盐酸盐0.1～100mg/L、乙醇胺盐酸盐0.1～100mg/L、硫代甘油0.1～100mg/L、庆大霉素0.1～100mg/L、酚红0.1～100mg/L。
5.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括荷叶碱0.1～100mg/L。
6.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：NK92细胞无血清培养基的配方如下：
7.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：NK92细胞无血清培养基的配方如下：
2'-脱氧胞苷 10mg/L
2'-脱氧鸟苷 10mg/L
2'-脱氧腺苷 10mg/L
5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物 5mg/L
胞苷 10mg/L
鸟苷 10mg/L
尿苷 10mg/L
腺苷 10mg/L
胸苷 20mg/L
次黄嘌呤钠 22mg/L
甘氨酸 50mg/L
L-半胱氨酸盐酸盐一水合物 150mg/L
L-苯丙氨酸 142mg/L
L-丙氨酸 10mg/L
L-谷氨酸 40mg/L
L-谷氨酰胺 438mg/L
L-甲硫氨酸 158mg/L
L-抗坏血酸 50mg/L
L-赖氨酸盐酸盐 200mg/L
L-酪氨酸二钠盐 250mg/L
L-亮氨酸 182mg/L
L-脯氨酸 127mg/L
L-色氨酸 112mg/L
L-丝氨酸 140mg/L
L-苏氨酸 165mg/L
L-天冬氨酸 650mg/L
L-天冬酰胺一水合物 220mg/L
L-缬氨酸 162mg/L
L-盐酸精氨酸 223mg/L
L-异亮氨酸 179mg/L
L-组氨酸盐酸盐一水合物 140mg/L
丙氨酰谷氨酰胺 271mg/L
还原型谷胱甘肽 15mg/L
丙酮酸钠 220mg/L
氯化胆碱 80mg/L
内消旋肌醇 45mg/L
对氨基苯甲酸 0.5mg/L
核黄素 0.2mg/L
生物素 0.1mg/L
硫辛酸 2mg/L
泛酸钙 3mg/L
维生素B12 1.3mg/L
烟酰胺 2mg/L
盐酸吡哆醇 4mg/L
盐酸吡哆醛 2mg/L
盐酸硫胺 4mg/L
叶酸 4mg/L
牛磺酸 35mg/L
亚油酸 12mg/L
油酸 1mg/L
棕榈酸 10mg/L
胆固醇 10mg/L
磷酸二氢钠 100mg/L
磷酸氢二钠 185mg/L
硫酸镁 98mg/L
氯化钙 120mg/L
氯化钾 295mg/L
氯化镁六水合物 61mg/L
亚硒酸钠 0.001mg/L
硫酸铜五水合物 0.012mg/L
硝酸钾 0.02mg/L
硝酸铁九水合物 0.1mg/L
氯化亚锰 0.000025mg/L
硫酸锌七水合物 10mg/L
硫酸亚铁七水合物 24mg/L
腐胺二盐酸盐 0.4mg/L
乙醇胺盐酸盐 8mg/L
硫代甘油 5mg/L
庆大霉素 5mg/L
酚红 5mg/L
D-(+)-葡萄糖 4000mg/L
HEPES 4279mg/L
碳酸氢钠 2400mg/L
氯化钠 6000mg/L
重组人白蛋白 2000mg/L
泊洛沙姆 1881000mg/L
大豆蛋白 2500mg/L
酵母粉 500mg/L
重组人转铁蛋白 10mg/L
胰岛素 5mg/L。
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