CN105087402B - 一种液态深层发酵生产灵芝菌丝体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种液态深层发酵生产灵芝菌丝体的方法，该方法包括：(1)发酵前期(0‑61h)，控制温度为32‑33℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；(2)发酵中期(62‑127h)，降低发酵温度至30‑31℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；(3)发酵后期(128h以后)，温度维持在26‑29℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至140‑150h结束。应用本发明的液体深层发酵生产灵芝菌丝体的方法生产的灵芝菌丝体，灵芝三萜的含量明显升高。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌生产领域，具体的说涉及一种液态深层发酵生产灵芝菌丝体的方法。
背景技术
灵芝(Ganoderma lucidum)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝菌属真菌，是我国最著名的高等药用真菌。灵芝的关键药效成分是灵芝多糖和灵芝三萜。其中灵芝三萜具有消炎止痛、镇静、解毒、保肝、抗艾滋病病毒、抗肿瘤、保肝作用，抑制组胺释放、血管紧张素转化酶等功能，是灵芝发挥药效的重要物质基础。
现阶段，灵芝菌丝体及其关键药效成分的产量成为阻碍灵芝产品应用的瓶颈。由于液体深层发酵技术生产灵芝具有生产周期短等特点，目前已成为获取灵芝及其活性物质的最有效方法。近年来，灵芝的液体发酵技术取得了很大进展，但如何进一步提高灵芝菌丝体或关键药效成分的产量以降低生产成本、提高经济效益，己成为加快灵芝产品产业化进程函待解决的问题。
发明内容
本发明的目的首先是提供一种液态深层发酵生产灵芝菌丝体的方法，该方法包括如下步骤：
(1)发酵前期(0-61h)
控制温度为32-33℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；
(可缩短菌丝体生长延滞期，提高菌丝体生长速率和灵芝三萜积累速率。)
(2)发酵中期(62-127h)
降低发酵温度至30-31℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；
(可继续维持较高的菌丝体生长速率和灵芝三萜合成速率。)
(3)发酵后期(128h以后)
温度维持在26-29℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至140-150h结束。
(可以提高菌丝体催化合成灵芝三萜的能力。)
优选的液态深层发酵生产灵芝菌丝体的方法，该方法包括如下步骤：
(1)发酵前期(0-61h)
控制温度为32℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；
(2)发酵中期(62-127h)
降低发酵温度至30℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；
(3)发酵后期(128h以后)
将温度维持在29℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至140-150h结束。
通过该方法生产的灵芝菌丝体，其灵芝三萜的含量明显增高。
本发明还提供了一种温度三阶段控制发酵生产灵芝三萜的方法，该方法包括如下步骤：
(1)发酵前期(0-61h)
控制温度为32-33℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；
(2)发酵中期(62-127h)
降低发酵温度至30-31℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm；
(3)发酵后期(128h以后)
温度维持在26-29℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至140-150h结束，得到
灵芝菌丝体；
(4)灵芝三萜提取阶段
90-99％的乙醇水溶液提取灵芝菌丝体得到灵芝三萜。
本发明的优点在于发酵工艺简便易行，能有效地提高灵芝菌丝体中灵芝三萜的产量。
有益效果
本发明的有益效果：利用本发明的方法生产的灵芝菌丝体能有效地提高灵芝三萜的产量，达到5.512mg/100mg。本发明所提供的温度三阶段控制工艺简便、高效，有着重要的工业应用价值，同时对其它食药用菌的深层发酵生产具有一定的指导意义。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
灵芝菌株：沪农灵芝1号Ganoderma lucidum，已在[Biotechnology andBioprocess Engineering 2014年第19卷第4期727-732]公开。
斜面培养基(g/L)：39g马铃薯葡萄糖琼脂溶于1L去离子水中灭菌后即得。
种子培养基的组分为：豆饼粉20g/L，无水葡萄糖25g/L，七水硫酸镁1.5g/L，磷酸二氢钾3.0g/L，自然pH。
发酵培养基为：豆饼粉30g/L，可溶性淀粉20g/L，七水硫酸镁2.25g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，自然pH。
培养方法：将保藏好的菌种在斜面上活化7天，挑取2块菌丝体接入种子培养基，温度26℃，摇床转速150r/min，摇瓶培养10天。将培养好的种子液以10％的接种量接入到6L发酵罐中的4.0L发酵培养基中，进行后续发酵培养。
实施例一
温度三阶段控制策略发酵生产灵芝菌丝体：
发酵前期(0-61h)，控制温度为32℃，搅拌转速100r/min，通气比l vvm，发酵培养61h菌丝体生长基本达到稳定期；发酵中期(62-127h)即菌丝体生长阶段，控制温度为30℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵培养62-127h继续维持较高的菌丝体生长速率和灵芝三萜合成速率；发酵后期(128h以后)将发酵温度降到29℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至150h结束。
测定灵芝三萜的产量为5.512mg/100mg干菌丝体。
对照实施例1：发酵过程中恒定温度为29℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至150h结束，灵芝三萜的产量为3.835mg/100mg干菌丝体。
对照实施例2：发酵过程中恒定温度为30℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至150h结束，灵芝三萜的产量为3.520mg/100mg干菌丝体。
对照实施例3：发酵过程中恒定温度为32℃，搅拌转速100r/min，通气比lvvm，发酵至150h结束，灵芝三萜的产量为3.126mg/100mg干菌丝体。
其中灵芝三萜的测定方法为：
将发酵得到的灵芝菌丝体研磨成粉末后，1g菌丝体加入50ml 95％的乙醇水溶液中常温浸提14小时后过滤，上清液即为待测样品溶液。
加待测样品溶液0.1ml于试管中(设三个重复)，再加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.5ml，充分混匀后，在60℃水浴中保温20分钟，取出后立即冷却至室温，然后再加入冰醋酸5ml摇匀后在550nm处测定样品的吸光度，样品的三萜含量根据标准曲线上计算可得。
Claims (1)
1.一种温度三阶段控制发酵生产灵芝三萜的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
(1)发酵第0-61h
控制温度为32℃，搅拌转速100r/min，通气比l vvm；
(2)发酵第62-127h
降低发酵温度至30℃，搅拌转速100r/min，通气比l vvm；
(3)发酵第128h以后
温度维持在29℃，搅拌转速100r/min，通气比l vvm，发酵至140-150h结束，得到灵芝菌丝体；
(4)灵芝三萜提取阶段
90-99％的乙醇水溶液提取灵芝菌丝体得到灵芝三萜。
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