CN104694608A - 一种灵芝发酵的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝发酵的方法，该方法包括如下步骤：将菌株先转接斜面在25-32℃培养箱中培养7-14天，然后进行摇瓶发酵7-10天，温度25-32℃，转速80-200rpm，最后在发酵罐中进行深层发酵100-160h；其中深层发酵的条件为：通气速率4-8L/min，温度25-32℃，发酵过程中在发酵0-40h搅拌转速控制在120-180rpm，40h后搅拌转速控制在80-120rpm。用此两阶段搅拌转速控制工艺，灵芝三萜产量得到显著提高。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌培养领域，具体的说涉及一种灵芝发酵的方法。
背景技术
灵芝(Ganoderma lucidum)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝菌属真菌，是我国最著名的高等药用真菌。灵芝的关键药效成分是灵芝多糖和灵芝三萜。其中灵芝三萜具有消炎止痛、镇静、解毒、保肝、抗艾滋病病毒、抗肿瘤、保肝作用，抑制组胺释放、血管紧张素转化酶等功能，是灵芝发挥药效的重要物质基础。
现阶段，灵芝菌体及其关键药效成分的产量成为阻碍灵芝产品应用的瓶颈。由于液体深层发酵技术生产灵芝具有生产周期短等特点，目前已成为获取灵芝及其活性物质的最有效方法。近年来，灵芝的液体发酵技术取得了很大进展，但目前灵芝的液体发酵过程中，在发酵工艺上大多是采用恒定转速的调控方法，采用此方法获得的灵芝菌丝体中灵芝三萜的含量并不高。
如何进一步提高灵芝菌丝体或关键药效成分的产量以降低生产成本、提高经济效益，己成为加快灵芝产品产业化进程函待解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种灵芝发酵的方法，该方法包括如下步骤：
将菌株先转接斜面在25-32℃培养箱中培养7-14天，然后进行摇瓶发酵7-10天，温度25-32℃，转速80-200rpm，最后在发酵罐中进行深层发酵100-160h；
其中深层发酵的条件为：通气速率4-8L/min，温度25-32℃，发酵过程中在发酵0-40h搅拌转速控制在120-180rpm，40h后搅拌转速控制在80-120rpm。
其中优选的方式是：在深层发酵0-40h搅拌转速控制在150rpm，40h后搅拌转速控制在100rpm。
本发明的一种灵芝发酵方法，采用两阶段搅拌转速控制工艺，该方法简单、有效，灵芝三萜产量得到显著提高，可应用于灵芝三萜的工业化生产中，在工业化生产中具有应用价值，且对其它的真菌菌丝体发酵过程优化具有一定的指导和启迪意义。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
菌种：灵芝菌株为沪农灵芝1号Ganoderma lucidum，上海市农业科学院。
斜面培养基为：39g马铃薯葡萄糖琼脂溶于1L去离子水中灭菌后即得。
种子培养基的组分为：豆饼粉20g/L，无水葡萄糖25g/L，七水硫酸镁1.5g/L，磷酸二氢钾3.0g/L，自然pH。
发酵培养基的组分为：豆饼粉30g/L，可溶性淀粉20g/L，七水硫酸镁2.25g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，油酸3vol％(相对于培养基，接种前用0.22μm无菌滤膜过滤后加入)，自然pH。
实施例1：
保藏菌株先转斜面培养基上，置于26℃培养箱中培养10天，然后进行摇瓶发酵7天，温度26℃，转速100rpm，最后在6L发酵罐中进行深层发酵140h，深层发酵条件为：通气速率6L/min，温度26℃，发酵过程中恒定搅拌转速为100rpm。
发酵140h结束后测定灵芝菌丝体含量7.66g/L，提取的灵芝三萜产量为0.052mg/100mg，灵芝三萜的生产强度为2.84×10-5g/(L·h)。
其中灵芝三萜的测定方法为：
将发酵得到的灵芝菌丝体研磨成粉末后，1g菌丝体加入50ml 95％的乙醇中浸提14小时后过滤，上清液即为待测样品溶液。
加待测样品溶液0.1ml于试管中(设三个重复)，再加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.5ml，充分混匀后，在60℃水浴中保温20分钟，取出后立即冷却至室温，然后再加入冰醋酸5ml摇匀后在550nm处测定样品的吸光度，样品的三萜含量根据标准曲线上计算可得。生产强度定义为单位时间单位体积灵芝三萜的生产量。
实施例2：
按照实施例1的方法进行灵芝发酵，只是将深层发酵过程中恒定搅拌转速改为150rpm，发酵140h结束后测定灵芝菌丝体含量8.77g/L，灵芝三萜产量为1.020mg/100mg，灵芝三萜生产强度6.39×10-4g/(L·h)(测定方法同实施例1)。
实施例3：
按照实施例1的方法进行灵芝发酵，只是将深层发酵过程中0-40h搅拌转速控制在150rpm，40h后搅拌转速控制在100rpm，发酵140h结束后测定灵芝菌丝体含量11.98g/L，灵芝三萜产量为5.520mg/100mg，灵芝三萜生产强度4.72×10-3g/(L·h)(测定方法同实施例1)。
Claims (2)
1.一种灵芝发酵的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
将菌株先转接斜面在25-32℃培养箱中培养7-14天，然后进行摇瓶发酵7-10天，温度25-32℃，转速80-200rpm，最后在发酵罐中进行深层发酵100-160h；
其中深层发酵的条件为：通气速率4-8L/min，温度25-32℃，发酵过程中在发酵0-40h搅拌转速控制在120-180rpm，40h后搅拌转速控制在80-120rpm。
2.根据权利要求1所述的灵芝发酵的方法，其特征在于在深层发酵0-40h搅拌转速控制在150rpm，40h后搅拌转速控制在100rpm。
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