CN105085612A - 采用粒子晶体形态优化技术制备的n-(2)-l-丙氨酰-l-谷氨酰胺化合物及制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的制备方法，所述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物采用粒子过程晶体产品分子组装与形态优化技术制备而成。该化合物具有纯度高、收率高、引湿性低、稳定性好的特点。同时，本发明还公开了一种由本发明中的丙氨酰谷氨酰胺制备的药物组合物，所述药物组合物是将丙氨酰谷氨酰胺配制成浓度为10％～30％的水溶液，采用配液量0.1％～0.5％(w/v)的药用活性炭吸附，然后大盘冻干，无菌分装而成。整个制备过程操作简单，不需任何赋形剂，较以往产品具有更好的稳定性。

Description

采用粒子晶体形态优化技术制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物及制剂
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种采用粒子过程晶体产品分子组装与形态优化技术制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物及其制剂。
背景技术
谷氨酰胺是人体内含量最为丰富的氨基酸之一，作为机体必需氨基酸，对多种器官及组织细胞具有重要而独特的代谢功能，但是由于其对酸碱、高温等不稳定，导致其临床应用受限。而谷氨酰胺与丙氨酸缩合形成的二肽产物－丙氨酰谷氨酰胺具有较好的水溶性，能耐受高温消毒，,常温下放置两年仍保持稳定,在人体内能迅速分解成L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，弥补了L-谷氨酰胺的不足,因此在临床上被广泛用作谷氨酰胺的替代品。
丙氨酰谷氨酰胺最早由德国森尤斯研制，1999年进口到中国。丙氨酰谷氨酰胺作为肠外营养药物，可用于提高患者细胞免疫功能，有效降低危重患者的感染风险，尤其对严重感染、恶性肿瘤等重伤病人的治疗和恢复有重要作用，可缩短患者总住院时间。丙氨酰谷氨酰胺的使用能较好地维持血循环中淋巴细胞总数，缓解手术及化疗导致的免疫抑制。丙氨酰谷氨酰胺作为肠外营养的使用是十分有效的，能减轻胃肠癌手术化疗患者机体的蛋白分解，有效地改善氮平衡，维持血循环中淋巴细胞的数目，从而改善患者营养状况，增强机体对手术及化疗的耐受性，被公认为是肠外营养一个十分重要的组成部分。
目前已知的制备丙氨酰谷氨酰胺的方法有如下3种：
(1)以高光学纯度的手性试剂氯丙酸为起始原料与氯化亚砜反应生成氯丙酰氯，然后与L－谷氨酰胺在碱性条件下反应得到。最后在浓氨水中氨解得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。国外申请的专利大多为此种方法，该方法的缺陷是所用原料为手性试剂，极为昂贵，不适于大规模工业生产。同时合成酰氯的步骤中所需温度较高会产生较多副反应在最后一步中可能产生内消旋体，对分离造成困难。且所合成的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺旋光低。
(2)以L-丙氨酸为原料与COCl2反应生成N-羧酸酐然后与L-谷氨酰胺在水中反应pH值保持在10左右得到N-2-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。该方法反应步骤少而简单，但该反应使用到的光气为剧毒物质，不利于管理，且对从业人员的操作规范要求极高，万一泄露会造成极大的危险和财产损失。
(3)以L-丙氨酸为原料，采用二碳酸二叔丁酯保护丙氨酸得到Boc-丙氨酸，Boc-丙氨酸的羧基用不同试剂活化生成不同的活性中间体，接着与L-谷氨酰胺在碱性条件下缩合生成Boc-丙氨酸-谷氨酰胺，然后用TFA水解脱去保护基得到N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。该线路步骤较多，合成繁琐，所以总产率很低。
上述3种丙氨酰谷氨酰胺的常规制备方法，除上述缺陷外，制备过程中均缺乏对晶体形态的优化过程，因而其化合物性能方面都存在单方面的局限性。
为了克服上述制备中的问题，本发明人提出了一种采用粒子过程晶体产品分子组装与形态优化技术制备N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的方法。此方法对晶体形成过程进行了优化控制，得到了纯度高、收率高、引湿性低、稳定性好的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。制备过程中使用的合成原料价格均较低，毒性低，过程易于控制，工业化价值高。
使用上述发明中所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物为原料，制备丙氨酰谷氨酰胺药物组合物。该制剂制备过程中不需任何赋形剂，较以往产品制备过程更加简单且具有更好的稳定性，从而完成了本发明。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物，该化合物通过采用粒子过程晶体产品分子组装与形态优化技术制备而来，具有纯度高、收率高、引湿性低、稳定性好的特点。
本发明所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物制备包括下列步骤：
1、Boc-L-丙氨酸的合成
将水和2-甲基四氢呋喃、L-丙氨酸混合降温，加入氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯反应，用稀盐酸调pH，用有机溶剂萃取3次，用饱和食盐水洗，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时，过滤，负压旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸。
2、N-羧基酸酐的合成
将Boc-L-丙氨酸、双(三氯甲基)碳酸酯、2-甲基四氢呋喃混合反应，悬蒸浓缩，加入正己烷，静置，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃溶解、过滤，取滤液悬蒸浓缩，加入正己烷、静置，抽滤，即得N-羧基酸酐。
3、N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的合成
将N-羧基酸酐溶于2-甲基四氢呋喃中，然后加入含L-谷氨酰胺、氢氧化钠的混合水溶液中反应，用2-甲基四氢呋喃洗3次，取水层，备用。使用pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液pH为4.2，将上述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用75％乙醇进行洗脱，负压旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
优选地，上述合成步骤1中，水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸的重量比为5:0.5:0.05。
优选地，上述合成步骤1中，向水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸混合溶液中加入氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯时的温度为0～2℃。
优选地，上述合成步骤1中，所述氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯加入的重量比为1:3～1:5。
优选地，上述合成步骤1中，所述反应条件为温度16～18℃、时间8～12小时。
优选地，上述合成步骤1中，所述稀盐酸调节的pH为1.5～3.0。
优选地，上述合成步骤1中，所述有机溶剂为醚类溶剂(如二乙醚，四氢呋喃)、酯类溶剂(如乙酸乙酯)、卤代烃类溶剂(如二氯甲烷，氯仿)、硝基烃类溶剂(硝基甲烷、硝基乙烷)烷烃类溶剂(如甲醇、异戊醇)。更优选地为乙酸乙酯。
优选地，上述合成步骤2中，所述Boc-L-丙氨酸、双(三氯甲基)碳酸酯和2-甲基四氢呋喃的重量比为1:4:8。
优选地，上述合成步骤2中，所述反应条件为温度0～2℃、时间1～2小时。
优选地，上述合成步骤3中，所述N-羧基酸酐与2-甲基四氢呋喃的重量比为1:5～1:10。
优选地，上述合成步骤3中，所述L-谷氨酰胺、氢氧化钠和纯化水的重量比为1:0.5～0.8:50。
优选地，上述合成步骤3中，所述反应条件为温度15～25℃，时间0.5～2小时。
优选地，上述所有合成步骤中，所述负压旋蒸条件均为温度30℃，压力-0.5MPa。
综上所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物采用粒子过程晶体产品分子组装与形态优化技术制备,具体步骤为将水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸混合，降温至0～2℃时，加入氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯16～18℃反应8～12小时，用稀盐酸调pH至1.5～3.0，用有机溶剂萃取3次，用饱和食盐水洗3次，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时，过滤，压力-0.5MPa，30℃旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸；将Boc-L-丙氨酸、双(三氯甲基)碳酸酯、2-甲基四氢呋喃混合0～2℃反应1～2小时，压力-0.5MPa，30℃旋蒸浓缩，加入正己烷，静置，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃溶解、过滤，取滤液压力-0.5MPa，30℃旋蒸浓缩，加入正己烷、静置，抽滤，即得N-羧基酸酐；将N-羧基酸酐溶于2-甲基四氢呋喃中，然后加入含L-谷氨酰胺、氢氧化钠的混合水溶液中15～25℃反应0.5～2小时，用2-甲基四氢呋喃洗3次，取水层，备用。使用pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液pH为4.2，将上述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用75％乙醇进行洗脱，压力-0.5MPa，30℃旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
本发明第二目的在于提供一种包含本发明所述丙氨酰谷氨酰胺化合物的丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备工艺，该制备工艺具有如下特点：制备过程操作简单，不需任何赋形剂，较以往产品具有更好的稳定性。
本发明所述的丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)在万级洁净区配料室内，将采用上述方法制备的丙氨酰谷氨酰胺化合物加注射用水溶解，加入药用活性炭，搅拌吸附，粗滤脱碳，再经0.45μm和0.22μm微孔滤膜串联精滤，然后分装于冻干托盘中，冷冻干燥，得丙氨酰谷氨酰胺无菌冻干粉末。
(2)在百级洁净区，控制相对湿度低于45％，用自动分装机进行无菌分装，加塞，轧盖。
优选地，上述制备方法中，所述丙氨酰谷氨酰胺水溶液浓度为10％～30％。
优选地，上述制备方法中，所述药用活性炭的加入量为配液量0.1％～0.5％(w/v)。
优选地，上述制备方法中，所述活性炭吸附时间为15～30min。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。
实施例1N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的制备
1、Boc-L-丙氨酸的合成
向反应器中加入水500.15g和2-甲基四氢呋喃50.03g、L-丙氨酸5.01g，0℃时加入氢氧化钠1.21g和二碳酸二叔丁酯6.03g，18℃反应10小时，用稀盐酸调pH至2.1，用乙酸乙酯萃取3次，用饱和食盐水洗3次，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时，过滤，在温度30℃，压力-0.5MPa下，旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸4.75g，收率94.81％。
2、N-羧基酸酐的合成
将Boc-L-丙氨酸4.50g、双(三氯甲基)碳酸酯18.02g、2-甲基四氢呋喃36.53g混合，0℃下反应2小时，在温度30℃，压力-0.5MPa下旋蒸浓缩至约30ml，加入正己烷80ml，静置20min，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃50ml溶解、过滤，将滤液在温度30℃，压力-0.5MPa下，旋蒸浓缩至约30ml，加入正己烷80ml、静置20min，用布氏漏斗抽滤，滤出固体即N-羧基酸酐4.07g，收率90.44％。
3、N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的合成
将N-羧基酸酐1.49g溶于2-甲基四氢呋喃14.91g中，然后加入含L-谷氨酰胺1.59g、氢氧化钠0.97g、纯化水79.65g的混合溶液中，15℃反应2小时，用2-甲基四氢呋喃约40ml洗3次，取水层，备用。
使用pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液pH为4.2，将上述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用75％乙醇进行洗脱，在温度30℃，压力-0.5MPa下旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物2.79g，收率90.58％。
实施例2N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的制备
1、Boc-L-丙氨酸的合成
向反应器中加入水500.05g和2-甲基四氢呋喃50.12g、L-丙氨酸5.00g，0℃时加入氢氧化钠1.50g和二碳酸二叔丁酯6.13g，17℃下反应10小时，用稀盐酸调pH至1.8，用乙酸乙酯萃取3次，用饱和食盐水洗3次，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时，过滤，在温度30℃，压力-0.5MPa下，旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸4.83g，收率96.60％。
2、N-羧基酸酐的合成
将Boc-L-丙氨酸4.50g、双(三氯甲基)碳酸酯18.13g、2-甲基四氢呋喃35.08g混合，0℃下反应1.5小时，在温度30℃，压力-0.5MPa下，旋蒸浓缩至约30ml，加入正己烷80ml，静置20min，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃50ml溶解、过滤，将滤液在温度30℃，压力-0.5MPa下旋蒸浓缩至约30ml，加入正己烷80ml、静置20min，用布氏漏斗抽滤，滤出固体即N-羧基酸酐4.16g，收率92.44％。
3、N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的合成
将N-羧基酸酐3.00g溶于2-甲基四氢呋喃18.12g中，然后加入含L-谷氨酰胺3.05g、氢氧化钠1.74g、纯化水150.45g的混合溶液中，20℃下反应1.5小时，用2-甲基四氢呋喃约80ml洗3次，取水层，备用。
使用pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液pH为4.2，将上述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用75％乙醇进行洗脱，在温度30℃，压力-0.5MPa下旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物5.57g，收率92.07％。
实施例3：N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的制备
1、Boc-L-丙氨酸的合成
向反应器中加入水500.51g和2-甲基四氢呋喃50.35g、L-丙氨酸5.00g，2℃时加入氢氧化钠2.03g和二碳酸二叔丁酯6.02g，16℃下反应12小时，用稀盐酸调pH至2.5，用乙酸乙酯萃取3次，用饱和食盐水洗3次，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时，过滤，在温度30℃，压力-0.5MPa下，旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸4.77g，收率95.40％。
2、N-羧基酸酐的合成
将Boc-L-丙氨酸4.53g、双(三氯甲基)碳酸酯18.04g、2-甲基四氢呋喃36.15g混合，1℃下反应2小时，在温度30℃，压力-0.5MPa下，旋蒸浓缩至约30ml，加入正己烷80ml，静置20min，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃50ml溶解、过滤，将滤液在温度30℃，压力-0.5MPa下旋蒸浓缩至约30ml，加入正己烷80ml、静置20min，抽滤，滤出固体即N-羧基酸酐4.12g，收率90.95％。
3、N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的合成
将N-羧基酸酐4.00g溶于2-甲基四氢呋喃36.06g中，然后加入含L-谷氨酰胺3.86g、氢氧化钠3.05g、纯化水195.38g的混合溶液中，25℃下反应1小时，用2-甲基四氢呋喃约100ml洗3次，取水层，备用。
使用pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液pH为4.2，将上述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用75％乙醇进行洗脱，在温度30℃，压力-0.5MPa下旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物7.49g，收率95.29％。
实施例4丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备
制备工艺：
(1)配料、冻干：在万级洁净区配料室内，将采用上述方法制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物15g加注射用水85g溶解，配成约15％的溶液，加入配液量0.15g的药用活性炭，搅拌吸附20分钟，粗滤脱碳，再经0.45μm和0.22μm微孔滤膜串联精滤，然后分装于冻干托盘中，药液液面厚度不超过2cm，冷冻干燥，得丙氨酰谷氨酰胺无菌冻干粉末。
(2)检验：检测上述无菌粉末：含量、澄明度、酸度。
(3)分装：在百级洁净区，控制相对湿度为35～37％，用自动分装机进行无菌分装，加塞，轧盖。
(4)包装、全检、入库。
实施例5丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备
制备工艺：
(1)配料、冻干：在万级洁净区配料室内，将采用上述方法制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物20g加注射用水80g溶解，配成约20％的溶液，加入配液量0.3g的药用活性炭，搅拌吸附20分钟，粗滤脱碳，再经0.45μm和0.22μm微孔滤膜串联精滤，然后分装于冻干托盘中，药液液面厚度不超过2cm，冷冻干燥，得丙氨酰谷氨酰胺无菌冻干粉末。
(2)检验：检测上述无菌粉末：含量、澄明度、酸度。
(3)分装：在百级洁净区，控制相对湿度为35～37％，用自动分装机进行无菌分装，加塞，轧盖。
(4)包装、全检、入库。
实施例6丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备
制备工艺：
(1)配料、冻干：在万级洁净区配料室内，将采用上述方法制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物30g加注射用水70g溶解，配成约30％的溶液，加入配液量0.5g的药用活性炭，搅拌吸附20分钟，粗滤脱碳，再经0.45μm和0.22μm微孔滤膜串联精滤，然后分装于冻干托盘中，药液液面厚度不超过2cm，冷冻干燥，得丙氨酰谷氨酰胺无菌冻干粉末。
(2)检验：检测上述无菌粉末：含量、澄明度、酸度。
(3)分装：在百级洁净区，控制相对湿度为38～40％，用自动分装机进行无菌分装，加塞，轧盖。
(4)包装、全检、入库。
对比例1N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的制备
按照CN102863510A中所述的方法制备N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
制备工艺：
(1)取D-乳酸48.12g，降温至10℃下，将对甲苯磺酰氯80.11g溶于100ml二氯甲烷中，向乳酸中滴加，完毕后，升温至室温，再滴加55.12g三乙胺，保温反应3小时，加水50ml搅拌10min，将剩余有机相蒸出二氯甲烷，制得D-2-对甲苯磺酸酯基丙酸80.54g。
(2)取D-2-对甲苯磺酸酯基丙酸80.05g溶于二氯甲烷50ml中，降温至-5℃，在催化条件下，滴加氯化亚砜，然后升温回流，反应5小时，减压蒸馏出二氯甲烷，得D-2-对甲苯磺酸酯基丙酰氯68.71g；
(3)取L-谷丙酰胺35.13g、NaOH1.24g溶于70ml水中，将温度降至7℃，向其中滴加D-2-对甲苯磺酸酯基丙酰氯58.04g，反应1小时，分出水相，用盐酸调节pH至1，反应1小时后抽滤、干燥，得到N-2-对甲苯磺酸酯基丙酰基-L-谷氨酰胺65.14g；
(4)取N-2-对甲苯磺酸酯基丙酰基-L-谷氨酰胺60.00g与30％的氨水800ml中反应，减压除去氨气和大部分水，用甲醇进行结晶，得N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺粗品54.54g。
(5)将上述N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺粗品，加100.54g水50℃搅拌溶解，加入活性炭，搅拌半小时后热过滤，在10℃以下，缓慢滴加乙醇100.23g，缓慢搅拌1小时，再滴加乙醇400.55g，搅拌2小时，过滤，得N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺49.38g。
对比例2丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备
按照CN102228444A中所述的方法制备丙氨酰谷氨酰胺药物组合物。
制备工艺：
(1)取对比例1中制备的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺原料，加入注射用水，充分搅拌使其完全溶解为浓度为20％的溶液。
(2)加入配液总量0.3％的针用活性碳，搅拌溶解10min，过滤脱炭，再经0.2μm的过滤器进行除菌过滤。
(3)分装于西林瓶中，调整温度进行冷冻干燥，得丙氨酰谷氨酰胺无菌冻干粉末。
(4)通入流速为0.12-0.15L/s的干燥除菌高纯氮气，压塞，轧盖，即得注射用N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。
试验例1吸湿性研究
本发明人对本发明实施例1、实施例2、实施例3和对比例1所制备丙氨酰谷氨酰胺化合物吸湿性进行了研究。考察条件为相对湿度75％(RH)与相对湿度92.5％(RH)，温度为40℃，考察指标为N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物中的含水量。
含水量检测结果：
结果：本发明制备的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物吸湿性明显低于现有技术制备的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。说明本发明所述的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物稳定性良好，适合药物制剂的制造及长期储存。
试验例2纯度检测
本发明人对本发明实施例1、实施例2、实施例3和对比例1所制备N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物进行了纯度检测。
纯度检测结果：
结果：本发明制备的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物纯度明显高于现有技术制备的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
试验例3影响因素考察
本发明人对本发明实施例1和对比例1所制备N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物进行了影响因素考察。考察条件为高温(60℃±2℃)、光照(4500Lx±500Lx)，高湿(92.5％，RH)，考察指标为含量和有关物质。
影响因素考察结果：
结果：本发明制备的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物在高温(60℃±2℃)、光照(4500Lx±500Lx)，高湿(92.5％，RH)条件下含量和有关物质基本无变化，对比例中N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物含量和有关物质均出现一定程度的变化，说明本发明中的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物稳定性好。
试验例4加速试验考察
本发明人对本发明实施例4、实施例5、实施例6和对比例2所制备丙氨酰谷氨酰胺药物组合物进行了加速稳定性考察。考察条件为温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％。放置6个月，分别于0、1、2、3、6月末取样。考察指标为性状、澄清度、酸度、含量及有关物质。
加速试验考察结果：
结果：实施例与对比例产品在上述试验条件下放置6个月，本发明实施例4～6样品含量和有关物质及其他各项指标均未出现明显变化，质量稳定。对比例2样品含量明显下降，有关物质明显升高，质量差。
本发明的丙氨酰谷氨酰胺药物组合物处方简单，工艺合理，可满足大生产的需求。经各项指标检验和加速试验考察表明稳定性好，质量可靠。

Claims (9)

1.一种N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的制备方法，其特征在于化合物的结构式为：
所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物采用以下方法制备而成：
步骤1：将水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸混合，降温至0～2℃时，加入氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯反应，用稀盐酸调pH，用有机溶剂萃取3次，用饱和食盐水洗3次，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时，过滤，负压旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸；
步骤2：将Boc-L-丙氨酸、双(三氯甲基)碳酸酯、2-甲基四氢呋喃混合反应，负压旋蒸浓缩，加入正己烷，静置，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃溶解、过滤，取滤液负压旋蒸浓缩，加入正己烷、静置，抽滤，即得N-羧基酸酐；
步骤3：将N-羧基酸酐溶于2-甲基四氢呋喃中，然后加入含L-谷氨酰胺、氢氧化钠的混合水溶液中，反应，用2-甲基四氢呋喃洗3次，取水层，使用pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液pH为4.2，将上述N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用75％乙醇进行洗脱，负压旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
2.如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于合成步骤1中反应条件为温度16～18℃，时间8～12小时。
3.如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于合成步骤1中稀盐酸调节的pH为1.5～3.0。
4.如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于合成步骤1中有机溶剂为醚类溶剂(如二乙醚，四氢呋喃)、酯类溶剂(如乙酸乙酯)、卤代烃类溶剂(如二氯甲烷，氯仿)、硝基烃类溶剂(硝基甲烷、硝基乙烷)烷烃类溶剂(如甲醇、异戊醇)，更优选地为乙酸乙酯。
5.如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于合成步骤2中反应条件为温度0～2℃，时间1～2小时。
6.如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于合成步骤3中反应条件为温度15～25℃，时间0.5～2小时。
7.如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于合成步骤中负压旋蒸条件均为温度30℃，压力-0.5MPa。
8.一种丙氨酰谷氨酰胺药物组合物，其特征在于所述的药物组合物含有权利要求1所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物或权利要求2～7任一项所述的制备方法制得的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物为将权利要求1-7任一项制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物配制成浓度为10％～30％的水溶液，采用配液量0.1％～0.5％(w/v)的药用活性炭吸附，然后大盘冻干，无菌分装而成。
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