CN105085589A - 唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物 - Google Patents
唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物,该化合物呈褐色粉末状,其名称为(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside,其分子式为C27H34O12,其化学结构如下:
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,尤其涉及唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物。
背景技术
唐古特虎耳草(SaxifragatanguticaEngl.)为虎耳草科(Saxifragaceae)虎耳草属(Saxifraga)植物,藏药名:松吉蒂,中药中称之为迭达,主要分布在青海、甘肃、西藏、四川以及及不丹与克什米尔地区海拔2900~4900m的针叶林灌丛下。唐古特虎耳草为常用藏药,其味苦性凉,清热,治肝、胆热症和创伤,还可治疗急性中耳炎、风热咳嗽,现代药理学研究表明唐古特虎耳草具有抑菌、抗病毒、抗炎和抗肿瘤的药理作用。
迄今,有关唐古特虎耳草的研报道文献仅有《藏药甘青虎耳草化学成分研究》一文,文中描述了利用传统的柱层析、结晶等分离手段从中分离到四个以槲皮素为母核的黄酮类化合物,其中包括:(I)槲皮素、(II)槲皮素-3-O-β-D-半乳糖糖苷,(III)槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷,(IV)槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷;以谷甾醇为母核的两个甾醇类化合物,包括:β-谷甾醇以及胡萝卜苷;以及两个小极性的脂肪烃类化合物:正二十九烷和正三十一烷。而从唐古特虎耳草中获取的具有抗肿瘤活性化合物的化合物未见文献报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合。
为解决上述问题,本发明所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物,其特征在于:该化合物呈褐色粉末状,其名称为二芳基庚烷类化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside,其分子式为C27H34O12,其化学结构如下:
。
如上所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物的制备方法,包括以下步骤:
⑴提取:将唐古特虎耳草全草阴干、粉碎至50~120目,用其质量10~20倍体积浓度为50%的乙醇溶液浸泡10~15个小时,然后在80~90℃温度下加热回流提取2~4次,每次3小时,经减压浓缩,回收乙醇,即得比重为1.0~1.5的唐古特虎耳草浸膏;
⑵分离纯化:将所述唐古特虎耳草浸膏以其质量10~20倍且体积浓度为30%~50%的甲醇溶液溶解,然后先采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离,收集79~86min的馏分;该馏分再采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离,收集第二个主成分即得。
所述步骤⑵中采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离的条件是指XAquaC3制备柱的规格为100×250mm,10μm;流动相为甲醇A1和0.2%甲酸-水B1;梯度洗脱为0~100min,5%~95%A1;检测波长为273nm。
所述步骤⑵中采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离的条件是指XAquaC18制备柱的规格为20×250mm,10μm;流动相为甲醇A2和0.2%甲酸-水B2;梯度洗脱为0~30min,35%~43%A2;检测波长为273nm。
如上所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物在制备抗肿瘤药物中的应用,其特征在于:该抗肿瘤化合物配以药用辅料以及药学上或生理学上可接受的载体,以常规的制备工艺制备成药剂学上的任何一种剂型。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明是从生长在青藏高原上的藏药材唐古特虎耳草中提取分离一种新的二芳基庚烷类化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside,该化合物为褐色粉末,[α]25D-6.21(c0.22,MeOH),λmax MeOH(nm):202(4.59),220(4.07),283(3.72)。经1HNMR、13CNMR、HMBC、HSQC光谱分析后,确定了该化合物的化学结构,该化合物为乙酰化的葡萄糖基链接在线状二芳基庚烷5位碳上,其分子中含有多羟基结构,具有良好的水溶性。
分子式C27H34O12;化合物氢、碳谱数据如下(信号全归属):1HNMR(600MHz,DMSO-d 6 )δ8.66(2H,s,3'-OH,3''-OH),8.61(1H,s,4''-OH),8.57(1H,s,4'-OH),6.61(1H,d,J=8.0Hz,H-5''),6.59(1H,d,J=8.0Hz,H-5'),6.56(1H,d,J=2.0Hz,H-2''),6.54(1H,d,J=2.0Hz,H-2'),6.43(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6''),6.39(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6'),5.13(1H,d,J=5.5Hz,4'''-OH),5.11(1H,d,J=5.1Hz,2'''-OH),5.02(1H,d,J=4.8Hz,3'''-OH),4.23(1H,d,J=7.9Hz,H-1'''),4.19(1H,dd,J=11.8,1.7Hz,H-6'''a),4.02(1H,dd,J=11.8,6.6Hz,H-6'''b),3.93(1H,m,H-5),3.29(1H,m,H-5'''),3.16(1H,m,H-3'''),3.06(1H,m,H-4'''),2.95(1H,m,H-2'''),2.71(1H,dd,J=15.5,6.0Hz,H-4a),2.66(2H,mH-2),2.60(1H,J=15.7,6.3Hz,H-4b),2.55(3H,m,H-1,H-7a),2.45(1H,m,H-7b),1.90(3H,s,H-8'''),1.68(1H,m,H-6a),1.61(1H,m,H-6b);13CNMR(151MHz,DMSO-d 6 )δ:208.9(C-3),170.8(C-7'''),145.4(C-3'),145.4(C-3''),143.7(C-4'),143.5(C-4''),133.4(C-1''),132.4(C-1'),119.4(C-6''),119.1(C-6'),116.2(C-2''),116.1(C-2'),115.9(C-5''),115.8(C-5'),103.4(C-1'''),76.9(C-3'''),75.8(C-5),73.9(C-2'''),73.9(C-5'''),70.5(C-4'''),64.0(C-6'''),49.1(C-4),44.8(C-2),37.2(C-6),30.4(C-7),28.8(C-1),21.0(C-8''')。
2、对本发明(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside进行体外抗肿瘤实验,结果表明该化合物具有明显的抑制肿瘤的效果。试验所用的细胞株为国际通用的肿瘤细胞株——肝癌细胞HepG2、肺癌细胞(A549)及胃癌细胞(MGC-80)。
实验方法采用国际通用的MTT测定方法进行:首先,在96孔细胞板上接种2×104个对数生长期的肝癌细胞Hep2或肺癌细胞(A549)或胃癌细胞(MGC-80),3个复孔,细胞贴壁后;再加入不同浓度待测样品,共设置7个药物浓度梯度,分别为:1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL和50μg/mL的该化合物样品组;72小时后,于96孔板对应孔中加入5mg/mL的MTT溶液20μL,继续培养3h;弃去96孔板中上清液,加入100μLDMSO溶解,使用酶标仪检测570nm波长下的吸光值并计算待测样品对细胞生长的半数抑制浓度IC50。肝癌细胞的IC50为12.49(μg/mL)=22.7nm/mL;肺癌细胞的IC50为14.28(μg/mL)=25.9nm/mL;胃癌细胞的IC50为19.06(μg/mL)=34.6nm/mL。实验结果表明,该化合物对三种肿瘤细胞株均有明显的抑制作用,为研制新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物,对开发利用藏药民族药资源具有重要意义。
3.本发明采用制备液相色谱设备与材料,所用材料均可重复利用,避免了硅胶柱分离过程中氯仿、丙酮等有机溶剂的使用,大大降低了对环境的污染。
4、本发明制备方法简单,平均成本低廉。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明唐古特虎耳草浸膏在XAquaC3制备柱上制备色谱图(273nm)。
图2为本发明XAquaC3制备柱上收集的馏分在XAquaC18制备柱上的制备色谱图(273nm)。
具体实施方式
唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物,该化合物呈褐色粉末状,其名称为二芳基庚烷类化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside,其分子式为C27H34O12,其化学结构如下:。
实施例1唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物的制备方法,包括以下步骤:
⑴提取:将唐古特虎耳草全草3.0Kg阴干、粉碎至50目,用其质量10倍体积浓度为50%的乙醇溶液浸泡10个小时,然后在80℃温度下加热回流提取4次,每次3小时,经减压浓缩,回收乙醇,即得比重为1.0的唐古特虎耳草浸膏146.2g。
⑵分离纯化:将唐古特虎耳草浸膏以其质量10倍且体积浓度为50%的甲醇溶液溶解,然后先采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离,收集79~86min的馏分;该馏分再采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离,收集第二个主成分即得化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside(334.2mg)(见图1、图2)。
其中:采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离的条件是指XAquaC3制备柱的规格为100×250mm,10μm;流动相为甲醇A1和0.2%甲酸-水B1;梯度洗脱为0~100min,5%~95%A1;检测波长为273nm。
采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离的条件是指XAquaC18制备柱的规格为20×250mm,10μm;流动相为甲醇A2和0.2%甲酸-水B2;梯度洗脱为0~30min,35%~43%A2;检测波长为273nm。
实施例2唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物的制备方法,包括以下步骤:
⑴提取:将唐古特虎耳草全草1.0Kg阴干、粉碎至80目,用其质量20倍体积浓度为50%的乙醇溶液浸泡15个小时,然后在90℃温度下加热回流提取2次,每次3小时,经减压浓缩,回收乙醇,即得比重为1.5的唐古特虎耳草浸膏50.6g。
⑵分离纯化:将唐古特虎耳草浸膏以其质量20倍且体积浓度为30%的甲醇溶液溶解,然后先采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离,收集79~86min的馏分;该馏分再采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离,收集第二个主成分即得化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside(106.9mg)。
其中:采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离的条件、采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离的条件均同实施例1。
实施例3唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物的制备方法,包括以下步骤:
⑴提取:将唐古特虎耳草全草2.0Kg阴干、粉碎至120目,用其质量15倍体积浓度为50%的乙醇溶液浸泡12个小时,然后在85℃温度下加热回流提取3次,每次3小时,经减压浓缩,回收乙醇,即得比重为1.2的唐古特虎耳草浸膏100.6g。
⑵分离纯化:将唐古特虎耳草浸膏以其质量15倍且体积浓度为40%的甲醇溶液溶解,然后先采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离,收集79~86min的馏分;该馏分再采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离,收集第二个主成分即得化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside(221.4mg)。
其中:采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离的条件、采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离的条件均同实施例1。
上述实施例1~3所制得的抗肿瘤化合物在制备抗肿瘤药物中的应用是指:该抗肿瘤化合物配以药用辅料以及药学上或生理学上可接受的载体,以常规的制备工艺制备成药剂学上的任何一种剂型。
Claims (5)
1.唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物,其特征在于:该化合物呈褐色粉末状,其名称为二芳基庚烷类化合物(5S)-1,7-bis-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxyheptane-3-on-5-O-β-D-6-O-acetylglucoside,其分子式为C27H34O12,其化学结构如下:
。
2.如权利要求1所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物的制备方法,包括以下步骤:
⑴提取:将唐古特虎耳草全草阴干、粉碎至50~120目,用其质量10~20倍体积浓度为50%的乙醇溶液浸泡10~15个小时,然后在80~90℃温度下加热回流提取2~4次,每次3小时,经减压浓缩,回收乙醇,即得比重为1.0~1.5的唐古特虎耳草浸膏;
⑵分离纯化:将所述唐古特虎耳草浸膏以其质量10~20倍且体积浓度为30%~50%的甲醇溶液溶解,然后先采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离,收集79~86min的馏分;该馏分再采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离,收集第二个主成分即得。
3.如权利要求2所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物,其特征在于:所述步骤⑵中采用XAquaC3制备柱进行制备液相色谱分离的条件是指XAquaC3制备柱的规格为100×250mm,10μm;流动相为甲醇A1和0.2%甲酸-水B1;梯度洗脱为0~100min,5%~95%A1;检测波长为273nm。
4.如权利要求2所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物,其特征在于:所述步骤⑵中采用XAquaC18制备柱进行制备液相色谱分离的条件是指XAquaC18制备柱的规格为20×250mm,10μm;流动相为甲醇A2和0.2%甲酸-水B2;梯度洗脱为0~30min,35%~43%A2;检测波长为273nm。
5.如权利要求1所述的唐古特虎耳草中一种新的抗肿瘤化合物在制备抗肿瘤药物中的应用,其特征在于:该抗肿瘤化合物配以药用辅料以及药学上或生理学上可接受的载体,以常规的制备工艺制备成药剂学上的任何一种剂型。
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