CN1050845C - 一种Leustroducsin化合物及其在药物制备中的应用及含该化合物的药物组合物 - Google Patents

一种Leustroducsin化合物及其在药物制备中的应用及含该化合物的药物组合物 Download PDF

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Abstract

公开名为Leustroducsin H并具有通式(Ⅰ)的新化合物及其药用盐。该化合物可以通过水解天然存在的Leustroducsin而制备，并可用于治疗或预防血小板减少。

Description

一种Leustroducsin化合物及其在药物制备中的应用及含该化合物的药物组合物
本发明提供一种被本发明人称为Leustroducsin H的新化合物，它具有下文所示的通式(I)，本发明还提供制备该化合物的方法以及含该化合物的组合物和应用该化合物的治疗方法。
本发明的化合物是一种能刺激血小板产生并因此而可用于治疗血小板减少的新化合物。血小板减少可由多种原因所致，例如，癌症病人进行化疗或放疗后的免疫异常或不良反应可引起血小板减少。血小板减少是一种严重的疾病，如果病情继续加重，可引起全身出血，有时甚至导致死亡。目前，治疗血小板减少唯一可靠的办法是利用包括血小板输注的对症治疗。
已知有不同类型的具有造血活性的细胞激活素。它们包括某些白介素，例如白介素6(下文缩写为IL-6)、白介素11(下文缩写为IL-11)和白血病抑制因子(下文缩写为LIF)。已知这些化合物的其它活性中包括刺激血小板产生，因此被期望应用于临床[Ishibashi et al，Blood 74，1241-1244，(1989)；Asano et al，Blood 75，1602-1605，(1990)；Okada et al，Blood Tumor 22，23-31，(1991)]。
已经发现，将这些化合物本身以不同途径施用于人体会产生明显的药理作用，这就使得这些化合物可能被用于治疗中。然而，据认为这些化合物基本上是由某些种类的细胞(例如淋巴细胞、单核细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞和基质细胞)通过一种复杂的调节系统在体内产生的，并且它们在各种血细胞的产生过程中起稳定内环境的作用，因此，如果对这种调节机制的精细平衡不加考虑地施用这些化合物，则将观察到几种副作用，它们可由调节机制的失衡所致；这类副作用的例子包括肝组织损伤、体重减轻、发热和寒颤。
还已知，多种低分子量的免疫激活剂(如胞壁酰二肽，下文缩写为MDP)能够增加血小板总数[R.Nakajima等，Arzneimittel-Forsch./Drug Research 41，60-65(1989)]。据认为，这些化合物通过单核细胞和巨噬细胞的激活而间接刺激IL-6的产生。然后，所产生的IL-6引起血小板数量的增加。然而，也已知道，与此同时还存在基于巨噬细胞激活作用的其它生理作用(或许是不需要的)，例如单核细胞因子(如IL-1和肿瘤坏死因子(TNF))的形成。也观察到一些副作用，如发热[Jap.J.Radiotherapy 48(4)，514(1988)]。
因此，很显然目前依然需要一种能刺激血小板形成从而能用于治疗血小板减少的药剂，但它不会引起内调节机制的失衡或导致如上所述的副作用。
EP506,463公开了称为Leustroducsin A、B和C的一些新的吡喃酮衍生物，它们具有下列通式：其中R代表5-甲基己酰基、6-甲基辛酰基或7-甲基辛酰基。这些化合物由微生物普拉特链霉菌中分离出，并被公开在下列方面具有活性：减轻由癌症化疗或放疗所致的副反应、防止感染、激活巨噬细胞、改善大脑功能以及作为抗真菌剂的活性。
1993年8月24日公开的JP平5-213758描述了Leustroducsin A、B和C在治疗血栓形成中的应用。
EP329,361公开了一些与本发明化合物类似的新的2-吡喃酮衍生物，不同之处在于欧洲申请中的化合物以类似于上述EP506,463中化合物取代的方式被取代。而且，这些现有技术中的化合物仅被说明用作农用生物杀伤剂，并未表明这些化合物具有本发明化合物所具有的有价值的和出乎预料的治疗及预防活性。
日本专利申请公开平2-186描述了与EP329,361所述化合物非常相似且基本具有相同用途的另一些化合物。
抗生素杂志(The Journal of Antibiotics，42，1989，1331-1343)公开了一种新的抗肿瘤化合物，它被作者称为“Phospholine”，是由微生物链霉菌属的放线菌产生，该化合物与本发明的化合物一样具有氨基和磷酸基，但两者的分子式不同。因此，该化合物显然有别于本发明的化合物。
因此，本发明的目的是提供一种具有有价值的药理活性的新的Leustroducsin。
更确切地说，本发明的化合物被认为在治疗血小板减少，尤其是由癌症化疗或放疗和免疫异常所致的血小板减少中具有极大的应用潜力。
因此，本发明提供具有下列通式(I)的化合物及其药用盐。该化合物被称为Leustroducsin H：
Figure C9410462100061
本发明也提供制备Leustroducsin H的方法，这将在下文作详细描述。
本发明还提供含Leustroducsin H或其药用盐的药用组合物，该组合物中含有药用稀释剂或载体。
本发明还进一步提供治疗或预防血小板减少的方法，特别是由癌症放疗或化疗所致的血小板减少。所述方法包括给患有或易患血小板减少的哺乳动物(可以是人)施用有效量的Leustroducsin H或其药用有效的盐。
由上文的通式请楚可见本发明的Leustroducsin含有许多不对称的碳原子和数个双键。因此，它能形成多种旋光和几何异构体。尽管这些化合物在本文都由单个分子式所代表，但本发明包括单独的、分离的异构体和混合物(包括其外消旋物)。应用立体有择合成技术或以旋光性化合物作为起始物，可直接制备单独的异构体；另一方面，如果制备的是异构体的混合物，则可用常规拆分技术得到单独的异构体。
本发明的Leustroducsin既含有酸性基团(磷酸基)又含有碱性基团(氢基)，因此能形成盐。只要这些盐在应用于治疗的场合是药学上可接受的，那么对这些盐的性质没有特别的限制。当这些盐将进行非治疗性应用，例如作为制备其它可能更具活性的化合物的中间体时，就连上述的唯一限制条件也不适用。本发明的化合物能与碱形成盐。这类盐的例子包括碱金属(如钠、钾或锂)盐、碱土金属(如钡或钙)盐、其它金属(如镁或铝)盐、有机碱盐(如与二环己基胺的盐)和碱性氨基酸(如赖氨酸或精氨酸)盐。本发明的化合物也能形成酸加成盐。这类酸加成盐的例子包括与无机酸，特别是氢卤酸(如氢溴酸、氢碘酸或盐酸)、硝酸、高氯酸、碳酸、硫酸或磷酸形成的盐；与低级烷基磺酸(如甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸或乙烷磺酸)形成的盐；与芳基磺酸(如苯磺酸或对甲苯磺酸)形成的盐；与有机羧酸(如乙酸、富马酸、酒石酸、乙二酸、马来酸、苹果酸、丁二酸或柠檬酸)形成的盐和与氨基酸(如谷氨酸或天冬氨酸)形成的盐。
本发明的Leustroducsin可以通过水解具有下列通式(II)的化合物或其盐来制得：
Figure C9410462100081
其中Z代表酰基，随后，还可任选将所得的化合物成盐。
水解反应可用任何通常用于该类反应的水解剂例如水解酶或碱进行。
在上述通式(II)中，Z代表酰基。酰基的确切性质对于本发明并非关键，只要它能经水解作用去除而产生通式(I)的化合物。我们已普遍发现，适于作为起始物的化合物中Z代表直链或支链脂族酰基或环脂族酰基，所含碳原子数为2-6。当Z代表这类酰基时，它可以是，例如丁酰基、异丁酰基、异戊酰基、2-甲基丁酰基、4-甲基戊酰基、环己烷羰基、4-甲基己酰基、5-甲基己酰基、6-甲基庚酰基、环己基乙基羰基、辛酰基、6-甲基辛酰基或7-甲基辛酰基。
人们已知并描述过(例如，Journal of Antibiotics 42，1019-1036，1989)在本发明方法中用作起始物的具有通式(II)的化合物，其中，Z代表异丁酰基、异戊酰基、4-甲基戊酰基、环己烷羰基或4-甲基己酰基。
人们已知并公开过(例如EP329,361)在本发明方法中用作起始物的具有通式(II)的化合物，其中Z代表丁酰基、异丁酰基、异戊酰基、2-甲基丁酰基、环己烷羰基、4-甲基己酰基、6-甲基庚酰基、环己基乙基羰基或辛酰基。通过培养微生物普拉特链霉菌SAM 0654并从培养液中分离所需化合物即可制得Z为上述基团之一的起始物。与EP329,361相关的普拉特链霉菌SAM0654已于1988年1月22日保藏于Fermentation ResearchInstitute，Agency of Industrial Science and Technology，保藏号为FERM BP-1668。培养微生物和分离所需化合物的适宜技术已在EP329,361中描述。
人们也已知并描述过(例如EP506,463)具有通式(II)的其中Z表示5-甲基己酰基、6-甲基辛酰基或7-甲基辛酰基的化合物。
已知通式(II)中Z代表4-甲基己酰基、5-甲基己酰基、6-甲基庚酰基、环己基乙基羰基、辛酰基、6-甲基辛酰基、或7-甲基辛酰基的化合物，它们在本发明的方法中用作起始物，并可通过例如先培养普拉特链霉菌SANK 60191菌株继而从培养液中分离的方法制备。培养这种微生物的适宜条件已在例如EP506,463中描述。与EP506,463有关的普拉特链霉菌SANK 60191已于1991年2月20日保藏于Fermen tation Research Institute，Agency of Industrial Science and Technology，保藏号为FERM BP-3288。方法1：应用水解酶
在该方法中，通式(I)的化合物由通式(II)的化合物与水解酶反应制备。
所用酶的确切性质并非本发明的关键，任何通常被用于该类反应的水解酶都能应用于此。一般我们喜欢选用例如猪肝酯酶(PLE)、脂酶、乙酰酯酶、高淀粉酶或胆固醇酯酶。
水解反应通常且最好是在溶剂中完成。只要溶剂对反应或对所用试剂无不利影响，并且溶剂至少在某种程度上能溶解反应试剂，那么对所用溶剂的性质无特别限制。适宜溶剂的例子包括醇(例如甲醇或乙醇)与缓冲液(优选pH 6-8的磷酸盐缓冲液)的混合物，或是酮(例如丙酮或甲基乙基酮)与缓冲液(优选pH 6-8的磷酸盐缓冲液)的混合物。
我们特别优选用PLE或脂酶作为水解酶，在含有磷酸盐缓冲液(pH 6-8)与丙酮或甲醇的混合溶剂中进行水解反应。
反应可在一个较宽的温度范围内进行，尽管优选的温度可根据所用起始物和酶以及溶剂的性质不同而变化，但精确的反应温度并非本发明的关键。通常，我们发现在10℃-40℃优选20℃-40℃的温度下很容易进行上述反应。
反应所需的时间也可随许多因素的不同而有很大的变化，特别是反应温度以及所用起始物、酶和溶剂的性质。然而，假如反应是在上述的优选条件下进行，那么通常足够的反应时间是12小时-30天，优选的反应时间为3-15天。
反应完成后，用常规技术从反应混合物中萃取并纯化通式(I)的化合物。适宜技术的一个例子包括用减压蒸馏除去易与水混溶的溶剂(如丙酮)，接着用有机溶剂(如乙酸乙酯)萃取所得的水层。然后进一步分馏和纯化水层，例如用一种Cosmosil(注册商标)空心柱。方法2：应用碱
在本方法中通式(I)的化合物由通式(II)的化合物与碱反应制备。
对于所用碱的性质没有特殊的限定，只要碱对分子的任何部分或对试剂无不利影响，任何普遍被用于这类水解反应的碱都能够应用于此。优选的碱的例子包括无机碱，例如碱金属碳酸盐(如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锌或碳酸锂)、碱金属碳酸氢盐(如碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸氢锂)、碱金属氢氧化物(如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂)或碱土金属氢氧化物(如氢氧化钡、氢氧化镁或氢氧化钙)。在这些碱中，优选碱金属碳酸盐或碱金属碳酸氢盐，最优选碳酸钠、碳酸钾或碳酸氢钠。
上述反应一般且优选在溶剂中进行。只要溶剂对反应或对所涉及的试剂无不利影响，并且它至少在某种程度上能溶解反应试剂，那么所用溶剂的性质无特别限定。适宜溶剂的例子包括醇(如甲醇或乙醇)与水的混合物或酮(如丙酮或甲基乙基酮)与水的混合物。
反应可在一个较宽的温度范围内进行，尽管优选温度可随起始物和碱的性质以及溶剂的性质不同而变化，但精确的反应温度并非本发明的关键。通常我们发现在0℃～40℃(优选5℃～30℃)的温度下很容易进行上述反应。
反应所需时间也可随许多因素的不同而有很大的变化，特别是反应温度以及所用起始化合物、碱和溶剂的性质。然而，假如反应是在上述优选条件下进行，那么足够的反应时间通常为3小时～5天，优选为3小时～2天。
反应完成后，可利用常规技术从反应混合物中萃取并纯化通式(I)的化合物。适宜技术的例子包括用减压蒸馏法除去易与水混溶的溶剂(如丙酮)，接着用有机溶剂(如乙酸乙酯)萃取所得的水层，然后进一步分馏和纯化水层，例如用一种Cosmosil(注册商标)空心柱。生物活性
下面的测定证明了本发明化合物作为血小板生成剂的活性。本发明所用的“血小板生成剂”意指给药后能在体内诱导血小板产生的药剂以及可用于治疗各种原因(如免疫异常和癌症化疗或放疗后的不良反应)引起的血小板减少的药剂。实验1经静脉注射Leustroducsin H后在小鼠体内增强血小板的生成。
可以利用Ishibashi等人的方法(Blood 74，1241-1244，1989)测定本发明化合物的血小板生成活性。
更具体地说，将待测的本发明的化合物溶解于1.25％(体积)含水乙醇的生理盐溶液中。该混合物的样品在5天的实验期中以24小时的间隔经静脉注射给C57BL小鼠(雌性，每只7周龄)。对照鼠只注射1.25％(体积)含水乙醇的生理盐溶液。最后一次注射后72小时，从动物眼眶采集血样，并计算样品中血小板的数目。测定是借助电阻法利用一个自动血细胞计数器(K-1000，Toa-Iyo Denshi Co.)进行，所得结果列于表1中。
                     表1化合物          剂量(mg/kg)   实验周期       血小板计数
                                         (×104/μl)对照               0             5           93.31±6.34*Leustroducsin H    0.05          5           130.08±1.67
               0.1           5           125.71±6.60
               0.5           5           121.18±9.22
               1             5           127.70±3.34*＝均数±标准差
上述的精确反应条件并不是确定血小板计数所必需的，还可包括各种变化，例如实验所用动物、给药方式和总的实验时间及给药的周期。因此，例如测试的动物可以是大鼠、小鼠、狗或猴，并且/或者待测的化合物可经肠道外、腹膜内、肌内或皮下注射给药。实验2：毒性研究
给BALB/C小鼠静脉注射Leustroducsin H(4mg/kg)。10天后未观察到死亡。
从上述两个实验结果可以清楚地看到，本发明的LeustroducsinH在体内显示优良的生血小板活性和低毒性，因此它可用作治疗各种原因，特别是免疫异常或癌症化疗或放疗后的不良反应所致的血小板减少症的治疗剂。
为此目的，通式(I)的化合物可以片剂、胶囊、颗粒、粉剂或糖浆的形式口服，或通过静脉、皮下或肌内注射、栓剂等经胃肠外途径给药。这些药用制剂可将本发明的化合物与一种或多种佐剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、矫正剂、稀释剂等一起混合制备。所说的佐剂例如赋形剂，其中又如有机赋形剂，包括糖的衍生物(如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇或山梨糖醇)、淀粉衍生物(如玉米淀粉、土豆泥、α-淀粉、糊精或羧甲基淀粉)、纤维素衍生物(如晶状纤维素、低级羟丙基取代的纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙或内桥式羧甲基纤维素钠)、阿拉伯胶、葡聚糖和支链淀粉；无机赋形剂，包括硅酸盐(如轻质硅酸酐、合成硅酸铝、或偏硅酸铝镁)、磷酸盐(如磷酸钙)、碳酸盐(如碳酸钙)和硫酸盐(如硫酸钙)。所说的润滑剂例如硬脂酸金属盐(如硬脂酸、硬脂酸钙或硬脂酸镁)、滑石、胶体二氧化硅、蜡(如蜂蜡或鲸蜡)、硼酸、己二酸、硫酸盐(如硫酸钠)、乙二醇、富马酸、苯甲酸钠、DL-亮氨酸、脂肪酸钠盐、十二烷基硫酸盐(如十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸镁)、硅酸盐(如硅酸酐或硅酸水合物)以及上述淀粉衍生物。所说的粘合剂例如聚乙烯吡啶酮、聚乙二醇及类似于上述赋形剂的化合物。所说的崩解剂例如类似于上述赋形剂的化合物以及经化学改性的淀粉纤维素(如焦连羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠或桥连聚乙烯吡咯烷酮)。所说的稳定剂例如对羟基苯甲酸酯(如羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯)、醇类(如氯代丁醇、苯甲醇或苯乙醇)、氧苄烷铵、酚类(如苯酚或甲酚)、乙基汞硫代水杨酸钠、脱氢乙酸和山梨酸。所说的矫正剂例如那些常规使用的增甜剂、醋或香料等。
所用剂量根据病人的状况和年龄的不同以及给药途径和类型的不同而变化，但是，例如本发明的化合物可以日剂量0.01-10mg/kg(优选为0.01-1mg/kg)给药，每日一次或分次给药。
本发明的某些化合物的制备将通过下面的实施例做进一步说明。随后的制备过程将说明如何制备用于本发明这些实施例中的某些起始物。实施例1
5.16g粗品油状物(由下述的制备方法1步骤B获得)溶于130ml丙酮中。然后加入1400ml 0.05M磷酸盐缓冲液(NaH2PO4/Na2HPO4，pH 6.7)，并搅拌所得的混合物。向混合物中加入807mg猪肝酯酶(PLE，Product of AmanoPharm，Co.，Ltd.)，然后在35℃下搅拌混合物。起始物在高效液相色谱上有8.8分钟的保留时间，因而可用色谱技术监测其反应过程。在两周内将PLE于35℃以0.82g、1.52g、1.02g和0.9g的量加至混合物中，并将所得的混合物搅拌两周。搅拌结束后，利用Celite(注册商标)助滤剂过滤反应液，以除去PLE。然后用乙酸乙酯萃取滤液，所得的水层通过400g Cosmosil 75C18-OPN(注册商标，Nakaraitesque Inc.)  柱色谱用含水甲醇作为洗脱剂分馏并纯化，得到1.73g Leustroducsin H。
在下列条件下进行高效液相色谱处理：
柱：Cosmosil 5C18-ARTM4.6×250mm；
    (Nakaraitesque Inc.产品)
洗脱溶剂：20％(体积)乙腈：0.5％(体积)三乙胺：
          79.5％(体积)磷酸盐缓冲液(pH 3.0)；
流速：1.0ml/分；
波长：230nm。
快原子轰击质谱：
    M/Z＝530(m+1)，528(m-1)
核磁共振谱
(270MHz，D2O)δppm：
    7.02(1H，dd，J＝5.4 & 9.8Hz)；
    6.21(1H，dd，J＝11.7 & 20.5Hz)；
    6.12(1H，dd，J＝12.2 & 20.5Hz)；
    5.93-5.84(2H，m)；
    5.71(1H，d，J＝16.6Hz)；
    5.32-5.25(2H，m)；
    3.94(1H，d1，J＝3.4 & 10.3Hz)；
    3.48(1H，m)；
    2.93(2H，1，J＝7.8Hz)；
    2.53-2.40(2H，m)；
    2.03(1H，m)；
    1.80-0.73(13H，m)；
    0.73(3H，1，J＝7.8Hz)。实施例2
将上述通式(II)中Z代表4-甲基己酰基的化合物[如下文制备方法1步骤B所述而制得]20mg溶解于少量甲醇中。所得的溶液用磷酸盐缓冲液(pH 6.7)稀释后再加入10mg PLE(Amano Pharm.Co.，Ltd)，将混合物于30℃搅拌6天。搅拌结束后，过滤反应液。通过减压蒸馏由滤液中除去残留甲醇，所得的水溶液通过C18-Cosmosil柱用含水甲醇作洗脱液分馏并纯化。用20％(体积)含水甲醇洗脱的馏分可得13mg化合物，它显示出与上述实施例1所得化合物相同的物理性质。实施例3
由50mg上述通式(II)中Z代表5-甲基己酰基的化合物[如下文制备方法1步骤B所述而制得]，用类似于上述实施例2中所述的方法得到30mg Leustroducsin H。
用类似于上述实施例2所述的方法还可以由通式(II)中Z代表下列基团的化合物制备具有实施例1所述特性的Leustroducsin H。起始物的量及本发明化合物的产量记录如下：
               表2实施例号        Z          起始物量    产量
4        异丁酰基        20mg      14mg
5        异戊酰基        20mg      14mg
6        2-甲基丁酰基    20mg      10mg
7        环己烷羰基      20mg      8mg实施例8
将通式(II)中Z代表6-甲基庚酰基的化合物[如下文制备方法1步骤B所述而制得]20mg溶解于少量含水甲醇。然后向混合物中加入碳酸氢钠饱和水溶液，并将所得溶液搅拌一天。搅拌结束后，加入适量盐酸液调节反应液的pH值至2，所得的混合物通过Cosmosil C18柱分馏并纯化，得到3mg Leustroducsin H。制备方法1起始化合物的培养和分离1(A)微生物培养
取-铂金环普拉特链霉菌SANK 60191(FERM BP-3288)孢子接种入用挡板固定并含有100ml预先灭菌的培养基(所含成分描述如下)的500ml Erlenmeyer烧瓶中，在28℃下用一旋转摇床于200rpm(旋转半径为7cm)培养微生物3天。
培养基：
    可溶性淀粉                     30g
    粗制酵母                       10g
    大豆粉                         7g
    鱼粉(Fish meal)                5g
    玉米浸液                       2g
    肉提取物                       1g
    碳酸钙                         1g
    加水至                         1000ml
                                   pH 7(灭菌前)
将15升培养基(与用于种子培养的培养基相同)分别装入四个30升的不锈钢瓶式发酵罐中，并加热至120℃维持30分钟进行灭菌。然后加入150ml如上所述制备的种子培养液。在搅拌的同时以空气流速15升/分的通气条件下28℃培养上述混合物3天。为保证培养液中氧浓度维持在5ppm，搅拌速度自动控制于100-300rpm范围内。1(B)分离
将2.4kg Celite 545(注册商标，Johns & ManvilleProject Corporation，USA)作为助滤剂加至上述1(A)所述获得的60升培养液中，过滤混合物，得到7.2kg细菌细胞。所得细胞用30升50％(体积)含水丙酮萃取一次，20升80％(体积)含水丙酮萃取两次。将这些萃取液合并，用旋转蒸发器除去有机溶剂。残余物中加入足量的盐酸水溶液，调节其pH值为2.0，然后分别用10升乙酸乙酯萃取混合物两次。合并萃取液，加入10升1％(重量/体积)碳酸氢钠水溶液。活性部分转移到水层，除去乙酸乙酯层。该乙酸乙酯层再用5升1％(重量/体积)碳酸氢钠水溶液萃取。合并碳酸氢钠溶液，加入盐酸水溶液调节pH值为2.0。该溶液用10升乙酸乙酯萃取两次。合并有机萃取液，先用水再用饱和氧化钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。在连续加入甲醇的过程中，利用旋转蒸发器在减压下将溶液浓缩，得到10ml油状物。将该油状物溶解于100ml 60％(体积)含水甲醇中，所得溶液在Sep-Pak Vac 20cc C18 Cartridges(商标名，WatersCo.USA)上被吸附，用30ml 60％(体积)含水甲醇洗脱杂质。然后用15ml 100％甲醇洗脱Leustroducsin，浓缩洗脱液得到800mg油状物。该油状物可不经进一步纯化而直接用于上述实施例1中。为了进行纯化，可将该油状物溶解于10ml甲醇中，经高效液相色谱处理，收集在13分钟、19分钟和24分钟附近显示出峰的馏分，并分别称为“粗馏分A”、“粗馏分B”和“粗馏分C”。色谱所用条件如下：
制备液相色谱：
          柱：Radial-Pak 25×10(Waters，USA)
洗脱溶剂：50％(体积)含水乙腈，含0.5％三乙胺
          -磷酸盐缓冲液，pH 3.0。
    流速：9ml/分
    波长：230nm。
上述峰的馏分被浓缩后，将所得馏分经制备高效液相色谱处理。粗馏分A在下列条件下进行制备色谱并收集53和56分钟附近峰的馏分，然后用Sep-Pak脱盐和浓缩，得到22.03mg通式(II)中Z代表4-甲基己酰基的化合物和11.66mg Leustroducsin A。
粗馏分A的制备条件：
         柱：Cosmosil 5C18-AR 20×250mm；
            (Nakaraitesque Inc.)
  洗脱溶剂：42％(体积)含水乙腈，含0.5％三乙胺
            -磷酸盐缓冲液，pH 3.0；
      流速：9ml/分
      波长：230nm。
粗馏分B在下列条件下进行制备色谱处理，收集74分钟、79分钟和82分钟附近出峰的馏分，用Sep-Pak脱盐和浓缩，得到26.16mg通式(II)中Z代表6-甲基庚酰基的化合物、23.24mg通式(II)中Z代表环己基乙基羰基的化合物和3.24mg通式(II)中Z代表辛酰基的化合物。
粗馏分B的制备条件：
         柱：Cosmosil 5C18-AR 20×250mm；
              (Nakaraitesque Inc.)
    洗脱溶剂：47％(体积)含水乙腈，含0.5％三乙胺
              -磷酸盐缓冲液，pH 3.0；
        流速：9ml/分；
        波长：230nm。
粗馏分C在下列条件下进行制备色谱处理，收集47分钟和51分钟附近出峰的馏分。用Sep-Pak脱盐和浓缩，得到9.83mgLeustroducsin B和5.22mg Leustroducsin C。
粗馏分C的制备条件：
         柱：Cosmosil 5C18-AR 20×250mm；
             (Nakaraitesque Inc.)
   洗脱溶剂：47％(体积)含水乙腈，含0.5％三乙胺
             -磷酸盐缓冲液，pH 3.0；
       流速：9ml/分；
       波长：230nm。制备方法2起始化合物的培养和分离
根据EP329,361中所述方法培养普拉特链霉菌SAM-0654(FERM BP-1668)，并从培养物肉汤中分离通式(II)中Z分别代表丁酰基、异丁酰基、异戊酰基、2-甲基丁酰基、环己烷羰基、4-甲基己酰基、6-甲基庚酰基、环己基乙基羰基和辛酰基的化合物。
             配方1
            胶囊制剂Leustroducsin H             100mg乳糖                        100mg玉米淀粉                    148.8mg硬脂酸镁                    1.2mg总计                        350mg
将上述成分混合，所得粉末过20目筛(Tyler standard)，然后填入胶囊中。

Claims (3)

1.通式(I)的化合物或其药用盐。
Figure C9410462100021
2.一种药物组合物，该组合物含有权利要求1的通式(I)化合物或其可作药用的盐以及与其相混合的药用稀释剂或载体。
3.权利要求1的通式(I)的化合物或其药用盐用于制备治疗或预防血小板减少的药物的用途。
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